RS64781B1 - Inhibitori arginaze i postupci za njihovo korišćenje - Google Patents

Inhibitori arginaze i postupci za njihovo korišćenje

Info

Publication number
RS64781B1
RS64781B1 RS20230898A RSP20230898A RS64781B1 RS 64781 B1 RS64781 B1 RS 64781B1 RS 20230898 A RS20230898 A RS 20230898A RS P20230898 A RSP20230898 A RS P20230898A RS 64781 B1 RS64781 B1 RS 64781B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
tert
butyl
mmol
piperidine
formula
Prior art date
Application number
RS20230898A
Other languages
English (en)
Inventor
Scott Nathan Mlynarski
Tyler Grebe
Sameer Kawatkar
Maurice Raymond Verschoyle Finlay
Iain Simpson
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of RS64781B1 publication Critical patent/RS64781B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F5/00—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic Table
    • C07F5/02—Boron compounds
    • C07F5/025—Boronic and borinic acid compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/69—Boron compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Opis
Pozadina pronalaska
[0001] Arginaza je manganski metaloenzim koji katalizuje konverziju L-arginina u ureu i L-ornitin. Postoje dva izooblika: Arginaza 1 je citosolni enzim koji se prevashodno može naći u hepatocitima gde igra ključnu ulogu u uklanjanju amonijaka putem sinteze uree, a arginaza 2, mitohondrijski enzim koji se na visokom nivou eksprimira u bubrezima uključen u proizvodnju ornitina, prekursor za poliamine i proline koji su važni za ćelijsku proliferaciju, odnosno proizvodnju kolagena.
[0002] Iako L-arginin nije esencijalna aminokiselina pošto može da se obezbedi putem obnavljanja proteina kod zdravih odraslih osoba, povećana ekspresija i sekrecija arginaza dovodi do smanjenih nivoa L-arginina kod različitih fizioloških i patoloških stanja (npr. trudnoća, autoimune bolesti, kancer). Imunološke ćelije su naročito osetljive na smanjene nivoe L-arginina. Kada su suočene sa mikrookruženjem sa malim nivoom L-arginina, T-ćelije smanjuju svoju stopu proliferacije i smanjuju ekspresiju CD3ζ lanca, IFNy i litičkih enzima, što dovodi do smanjene responsivnosti T-ćelija. Dendritske ćelije odgovaraju na uslove smanjenog nivoa L-arginina tako što smanjuju svoju sposobnost da prezentuju antigene, a ćelije prirodne ubice smanjuju proliferaciju i ekspresiju litičkih enzima.
[0003] Tumori koriste višestruke imunosupresivne mehanizme za izbegavanje imunološkog sistema. Jedan od njih je smanjenje L-arginina putem povećanog nivoa arginaze u cirkulaciji, povećane ekspresije i sekrecije arginaze od strane tumorskih ćelija, i regrutovanje mijeloidno dobijenih supresorskih ćelija koje eksprimiraju i izlučuju arginazu. Zajedno, to dovodi do smanjenja L-arginina u tumorskom mikrookruženju i imunosupresivnog fenotipa. Pokazalo se da farmakološka inhibicija aktivnosti arginaze poništava imunološku supresiju indukovanu L-argininom na životinjskim modelima. Usled toga, postoji potreba za snažnim i selektivnim inhibitorima arginaze za poništavanje imunološke supresije i ponovnu aktivaciju antikancerskog imuniteta kod pacijenata, u vidu pojedinačnog agensa, ili u kombinaciji sa terapijama koje poništavaju dodatne imunosupresivne mehanizme.
[0004] WO2011/133653A1 i WO2018/119440A1 opisuju određena jedinjenja kao inhibitore arginaze.
Sažetak
[0005] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (Ib) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
pri čemu
R<1>je -H ili -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; i
R<1a>je izabran od -H, -(C1-C6) alkila i CH2OR<1c>;
R<1b>je -H; ili, alternativno, R<1a>i R<1b>, zajedno sa atomom za koji su vezani, grade 5-člani heterociklični prsten; i
R<1c>je H ili -CH3.
[0006] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (II) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
pri čemu
R<2>je -H ili -C(O)CH(R<2a>)NH2; i
R<2a>je izabran od -H ili -(C1-C6) alkila.
[0007] U jednom otelotvorenju, otkrivena je farmaceutski prihvatljiva so prethodnog:
pri čemu
R<3>je izabran od -H ili -(C1-C4) alkila.
[0008] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (IVb) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
[0009] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (Vc) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
pri čemu
R<1>je -H ili -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; i
R<1a>je izabran od -H, -(C1-C4) alkila i CH2OR<1c>;
R<1b>je -H; ili, alternativno, R<1a>i R<1b>, zajedno sa atomom za koji su vezani, grade 5-člani heterociklični prsten; i
R<1c>je H ili -CH3.
[0010] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (VI) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
pri čemu
R<2>je -H ili -C(O)CH(R<2a>)NH2; i
R<2a>je izabran od -H ili -(C1-C6) alkila.
[0011] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (VII) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
pri čemu
R<3>je izabran od -H ili -(C1-C4) alkila.
[0012] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (VIIIb) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
[0013] U nekim otelotvorenjima, otkrivena su jedinjenja iz tabele 1, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
[0014] U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0015] U nekim otelotvorenjima, otkrivena su jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, za lečenje kancera.
[0016] U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u lečenju kancera.
[0017] U nekim otelotvorenjima, otkrivena su jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, za lečenje respiratorne inflamatorne bolesti.
[0018] U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u lečenju respiratorne inflamatorne bolesti.
[0019] U nekim otelotvorenjima, prethodno spomenuta respiratorna inflamatorna bolest je hronična opstruktivna bolest pluća (HOBP) ili astma.
Detaljan opis
Jedinjenja
[0020] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (Ib) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
pri čemu
R<1>je -H ili -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; i
R<1a>je izabran od -H, -(C1-C6) alkila i CH2OR<1c>;
R<1b>je -H; ili, alternativno, R<1a>i R<1b>, zajedno sa atomom za koji su vezani, grade 5-člani heterociklični prsten; i
R<1c>je H ili -CH3.
[0021] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (Ib). U drugom otelotvorenju, otkrivena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja formule (Ib).
[0022] U nekim otelotvorenjima formule (Ib), R<1>je -H.
[0023] U nekim otelotvorenjima formule (Ib), R<1>je -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; R<1a>je -H; i R<1b>je -H.
[0024] U nekim otelotvorenjima formule (Ib), R<1>je -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; R<1a>je -(C1-C6) alkil; i R<1b>je -H.
[0025] U nekim otelotvorenjima formule (Ib), R<1>je -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; R<1a>je CH2OR<1c>; i R<1b>je -H.
[0026] U nekim otelotvorenjima formule (Ib), R<1>je -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; i R<1a>i R<1b>zajedno sa atomom za koji su vezani grade 5-člani heterociklični prsten.
[0027] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (II) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
pri čemu
R<2>je -H ili -C(O)CH(R<2a>)NH2; i
R<2a>je izabran od -H ili -(C1-C6) alkila.
[0028] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (II). U drugom otelotvorenju, otkrivena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja formule (II).
[0029] U nekim otelotvorenjima formule (II), R<2>je -H.
[0030] U nekim otelotvorenjima formule (II), R<2>je -C(O)CH(R<2a>)NH2; i R<2a>je -H.
[0031] U nekim otelotvorenjima formule (II), R<2>je -C(O)CH(R<2a>)NH2; i R<2a>je -(C1-C6) alkil. U jednom otelotvorenju, otkrivena je farmaceutski prihvatljiva so prethodnog:
pri čemu, R<3>je izabran od -H ili -(C1-C4) alkila.
[0032] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (III). U drugom otelotvorenju, otkrivena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja formule (III).
[0033] U nekim otelotvorenjima formule (III), R<3>je -H.
[0034] U nekim otelotvorenjima formule (III), R<3>je -(C1-C4) alkil.
[0035] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (IVb) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
[0036] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (IVb). U drugom otelotvorenju, otkrivena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja formule (IVb).
[0037] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (Vc) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
pri čemu
R<1>je -H ili -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; i
R<1a>je izabran od -H, -(C1-C4) alkila i CH2OR<1c>;
R<1b>je -H; ili, alternativno, R<1a>i R<1b>, zajedno sa atomom za koji su vezani, grade 5-člani heterociklični prsten; i
R<1c>je H ili -CH3.
[0038] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (Vc). U drugom otelotvorenju, otkrivena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja formule (Vc).
[0039] U nekim otelotvorenjima formule (Vc), R<1>je -H.
[0040] U nekim otelotvorenjima formule (Vc), R<1>je -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; R<1a>je -H; i R<1b>je - H.
[0041] U nekim otelotvorenjima formule (Vc), R<1>je -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; R<1a>je -(C1-C6) alkil; i R<1b>je -H.
[0042] U nekim otelotvorenjima formule (Vc), R<1>je -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; R<1a>je CH2OR<1c>; i R<1b>je -H.
[0043] U nekim otelotvorenjima formule (Vc), R<1>je -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; i R<1a>i R<1b>zajedno sa atomom za koji su vezani grade 5-člani heterociklični prsten.
[0044] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (VI) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
pri čemu
R<2>je -H ili -C(O)CH(R<2a>)NH2; i
R<2a>je izabran od -H ili -(C1-C6) alkila.
[0045] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (VI). U drugom otelotvorenju, otkrivena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja formule (VI).
[0046] U nekim otelotvorenjima formule (VI), R<2>je -H.
[0047] U nekim otelotvorenjima formule (VI), R<2>je -C(O)CH(R<2a>)NH2; i R<2a>je -H.
[0048] U nekim otelotvorenjima formule (VI), R<2>je -C(O)CH(R<2a>)NH2; i R<2a>je -(C1-C6) alkil.
[0049] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (VII) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
pri čemu
R<3>je izabran od -H ili -(C1-C4) alkila.
[0050] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (VII). U drugom otelotvorenju, otkrivena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja formule (VII).
[0051] U nekim otelotvorenjima formule (III), R<3>je -H.
[0052] U nekim otelotvorenjima formule (III), R<3>je -(C1-C4) alkil.
[0053] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (VIIIb) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
[0054] U jednom otelotvorenju, otkriveno je jedinjenje formule (VIIIb). U drugom otelotvorenju, otkrivena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja formule (VIIIb).
[0055] U nekim otelotvorenjima, jedinjenja formule (Ib), (II), (III) i (IVb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, konvertovana su u jedinjenja formule (Vc), (VI), (VII) i (VIIIb), uključujući bilo koji njihovi podrod ili vrstu, putem intramolekulske ciklizacije, i obrnuto. To jest, radi se o procesu međusobne konverzije. Jedinjenja formule (Ib), (II), (III) i (IVb), uključujući njihove podrodove i vrste, i jedinjenja formule (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući njihove podrodove i vrste, konvertuju se jedna u druga delimično ili u potpunosti u zavisnosti od uslova, kao što je temperatura, pritisak, vlažnost, pH i/ili sastav medijuma (npr. rastvarači), itd. Ovo je prikazano u šemi ispod:
pri čemu je R<1>kao što je gore definisano u formuli (Ib) i (Vc).
[0056] U nekim otelotvorenjima, otkrivena su jedinjenja iz tabele 1, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli:
Tabela 1
[0057] Stereohemijske konfiguracije u ovde datim hemijskim strukturama su prikazane putem klinastih oznaka (uključujući pune klinove i izlomljene/isprekidane klinove), podebljanih linija i isprekidanih linija. Klinaste oznake se koriste za označavanje apsolutne stereohemije. Naročito, klinaste oznake se koriste da se naznači pozicija hemijskih veza u odnosu na ravan površine slike gde puni klin ukazuje na vezu usmerenu ka posmatraču; izlomljeni (isprekidani) klin ukazuje na vezu koja ide u smeru od posmatrača. Na primer, hemijske strukture primera 1 do 9 i 12 imaju klinaste oznake koje pokazuju apsolutnu stereohemiju. S druge strane, podebljane i isprekidane linije se koriste da se pokaže relativna stereohemija, recimo, npr. podebljane linije na prstenu ukazuju na veze sa iste strane, tj. sin odnos, dok isprekidana linija na prstenu ukazuje na vezu sa suprotne strane isprekidanih linija, tj. anti odnos. Na primer, hemijske strukture iz primera 10 i 11 imaju podebljane i isprekidane linije koje ukazuju na relativnu stereohemiju dva enantiomera.
[0058] Izraz alkil“ obuhvata aciklične alkil ostatke koji imaju od 1 do 4 atoma ugljenika, a „C1-C6alkil“ obuhvata aciklične alkil ostatke koji imaju od 1 do 6 atoma ugljenika. Primeri za C1-C4alkil ostatke uključuju metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, sekbutil, izobutil i terc-butil.
[0059] Izraz „farmaceutski prihvatljiva so“ obuhvata kisele adicione ili bazne adicione soli koje zadržavaju biološku delotvornost i osobine jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući sve njihove podrodove ili vrste, i tabelu 1, i koje tipično nisu biološki ili na drugi način nepoželjne. U mnogim slučajevima, jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koje njihove podrodove ili vrste, i tabelu 1, sposobna su da grade kisele i/ili bazne adicione soli zahvaljujući prisustvu baznih i/ili karboksilnih grupa ili grupa koje su im slične.
[0060] Farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli mogu se formirati sa neorganskim kiselinama ili organskim kiselinama, npr. soli acetata, aspartata, benzoata, besilata, bromida/hidrobromida, bikarbonata/karbonata, bisulfata/sulfata, kamforsulfonata, hlorida/hidrohlorida, hlorteofilonata, citrata, etandisulfonata, fumarata, gluceptata, glukonata, glukuronata, hipurata, hidrojodida/jodida, izetionata, laktata, laktobionata, laurilsulfata, malata, maleata, malonata, mandelata, mezilata, metilsulfata, naftoata, napsilata, nikotinata, nitrata, oktadekanoata, oleata, oksalata, palmitata, palmoata, fosfata/hidrogen fosfata/dihidrogen fosfata, poligalakturonata, propionata, stearata, sukcinata, subsalicilata, sulfata/hidrogensulfata, tartarata, tozilata i trifluoracetata. Neorganske kiseline iz kojih se mogu dobiti soli su, na primer, hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, fosforna kiselina i slično. Organske kiseline iz kojih se mogu dobiti soli uključuju, na primer, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, glikolnu kiselinu, oksalnu kiselinu, maleinsku kiselinu, malonsku kiselinu, sukcinsku kiselinu, fumarnu kiselinu, vinsku kiselinu, limunsku kiselinu, benzojevu kiselinu, mandelnu kiselinu, metansulfonsku kiselinu, etansulfonsku kiselinu, toluensulfonsku kiselinu, trifluorsirćetnu kiselinu, sulfosalicilnu kiselinu i slično.
[0061] Farmaceutski prihvatljive bazne adicione soli mogu da se formiraju sa neorganskim i organskim bazama. Neorganske baze od kojih mogu da se dobiju soli uključuju, na primer, amonijak i soli amonijaka i metala iz kolona I do XII periodnog sistema. U određenim otelotvorenjima, soli su dobijene od natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, gvožđa, srebra, cinka i bakra. Naročito pogodne soli uključuju soli amonijaka, kalijuma, natrijuma, kalcijuma i magnezijuma. Organske baze od kojih mogu da se dobiju soli uključuju, na primer, primarne, sekundarne i tercijarne amine, supstituisane amine, uključujući supstituisane amine koji se javljaju u prirodi, ciklične amine, bazne jonoizmenjivačke smole, i slično. Neki organski amini uključuju izopropilamin, benzatin, holinat, dietanolamin, dietilamin, lizin, meglumin, piperazin i trometamin.
[0062] Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, i tabelu 1, mogu da se sintetišu od baznog ili kiselog ostatka, uobičajenim hemijskim postupcima. U načelu, takve soli se mogu pripremiti reakcijom slobodnih kiselih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze (kao što su Na<+>, Ca<2+>, Mg<2+>, ili K<+>hidroksid, karbonat, bikarbonat ili slično), ili reakcijom slobodnih baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće kiseline. Takve reakcije se obično izvode u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u mešavini ova dva. Generalno, poželjna je upotreba ne-vodenih medija kao što su etar, etil acetat, etanol, izopropanol ili acetonitril, gde je to izvodljivo. Spiskovi dodatnih pogodnih soli mogu se naći, npr. u „Remington's Pharmaceutical Sciences“, 20. izd., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); Berge et al., „J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 i u „Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use“, Stahl i Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).
[0063] Svaka formula koje je data ovde takođe treba da predstavlja neobeležene oblike kao i izotopski obeležene oblike jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (VIIIb), uključujući sve njihove podrodove ili vrste, i tabelu 1. Izotopski obeležena jedinjenja imaju strukture koje su prikazane formulama koje su ovde date, osim što je jedan ili više atoma zamenjeno atomom istog elementa ali sa različitim masenim brojem. Primeri za izotope koji mogu biti uključeni u jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući sve njihove podrodove ili vrste, i tabelu 1, i njihove farmaceutski prihvatljive soli uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, sumpora, fluora, hlora i joda, kao što su<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<35>S,<36>Cl i<125>I. Izotopski obeležena jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući sve njihove podrodove ili vrste, i tabelu 1, generalno mogu da se pripreme uobičajenim tehnikama koje su poznate stručnjacima za oblast ili procesima koji su analogni onima opisanim u pratećim primerima koristeći odgovarajuće izotopski obeležene reagense umesto neobeleženih reagenasa koji su prethodno korišćeni.
[0064] Jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, mogu imati različite izomerne oblike. Izrazi „optički izomer“, „stereoizomer“, „enantiomer“ ili „dijastereomer“ odnose se na bilo koju od različitih stereoizomernih konfiguracija koje mogu da postoje za dato jedinjenje formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njegov podrod ili vrstu, i tabelu 1. Podrazumeva se da supstituent može biti vezan u hiralnom centru atoma ugljenika i, stoga, obelodanjena jedinjenja uključuju enantiomere, dijastereomere i racemate. Termin „enantiomer“ uključuje parove stereoizomera koji se odnose kao predmet i lik u ogledalu bez preklapanja. Smeša 1:1 para enantiomera je „racemska“ smeša. Termin se koristi za označavanje racemske smeše u situacijama gde je to prikladno. Izrazi „dijastereomeri“ ili „dijastereoizomeri“ uključuju stereoizomere koji imaju najmanje dva asimetrična atoma, ali se ne odnose kao predmet i lik u ogledalu. Apsolutna stereohemija je određena prema Kan-Ingold-Prelogovom R-S sistemu. Kada je jedinjenje čisti enantiomer, stereohemija u svakom hiralnom centru može biti određena bilo sa R ili S. Razdvojena jedinjenja čija je apsolutna konfiguracija nepoznata mogu biti označena sa (+) ili (-) u zavisnosti od smera (dekstro- ili levorotatorni) u kojem rotiraju ravan polarizovane svetlosti na talasnoj dužini D linije natrijuma. Određena jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, i tabelu 1, sadrže jedan ili više asimetričnih centara ili osa te tako može doći do nastanka enantiomera, dijastereomera ili drugih stereoizomernih oblika koji mogu da se definišu, u pogledu apsolutne stereohemije, kao (R)-ili (S)-. Predmetno otkriće treba da obuhvata sve takve moguće izomere, uključujući racemske smeše, optički čiste oblike i intermedijerne smeše. Optički aktivni (R)- i (S)-izomeri mogu da se pripreme koristeći hiralne sintone ili hiralne reagense, ili da se razdvoje koristeći uobičajene tehnike koje su dobro poznate u struci, kao što je hiralna HPLC.
[0065] Ovde su takođe otkriveni intermedijeri 1-48 u primerima, kao i njihove soli.
Farmaceutske kompozicije
[0066] U nekim otelotvorenjima, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njegov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0067] Termin „farmaceutski prihvatljiv nosač“ uključuje jedinjenja, supstance, kompozicije i/ili dozne oblike koji su, u okviru racionalne medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacija, alergijskih odgovora ili drugih problema ili komplikacija, na osnovu procene stručnjaka za oblast.
[0068] Otkrivene kompozicije mogu da budu u obliku koji je prikladan za oralnu upotrebu (na primer, kao tablete, lozenge, tvrde ili meke kapsule, vodene ili uljane suspenzije, emulzije, praškovi ili granule za disperziju, sirupi ili eliksiri), za topikalnu upotrebu (na primer, kao kremovi, masti, gelovi, ili vodeni ili uljani rastvori ili suspenzije), za primenu putem inhalacije (na primer, kao fino raspodeljeni prašak ili tečni aerosol), za primenu putem insuflacije (na primer, kao fino raspodeljeni prašak) ili za parenteralnu primenu (na primer, kao sterilni vodeni ili uljani rastvor za intravensko, supkutano ili intramuskularno doziranje ili kao supozitorija za rektalno doziranje).
[0069] Količina aktivnog sastojka koja se kombinuje sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača za proizvodnju jednog doznog oblika nužno će zavisiti od domaćina koji se leči i konkretnog puta primene. Za više informacija o načinu primene i doznim režimima, upućujemo čitaoca na poglavlje 25.3, sveske 5, publikacije „Comprehensive Medicinal Chemistry“ (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.
Terapeutske primene
[0070] Predmetna jedinjenja su korisna kao inhibitori arginaze u terapiji.
[0071] U jednom aspektu, otkriveno je jedinjenje formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (VIIIb), uključujući bilo koji njegov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju kancera.
[0072] U jednom aspektu, otkriveno je jedinjenje formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njegov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju respiratorne inflamatorne bolesti.
[0073] U jednom aspektu, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njegov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u lečenju kancera.
[0074] U jednom aspektu, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njegov podrod ili vrstu, iz tabele 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u lečenju respiratorne inflamatorne bolesti.
[0075] Termin „kancer“ obuhvata, na primer, karcinom renalnih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata, kancer pluća (npr. mikrocelularni kancer pluća (SCLC), nemikrocelularni kancer pluća (NSCLC), mezoteliom), kancer pankreasa, kolorektalni kancer, kancer dojke, akutnu mijeloidnu leukemiju (AML), kancer prostate, kancer želuca, kancer bešike, melanom, renalni kancer i kancer jajnika. U nekim otelotvorenjima, kancer je metastazirao. U nekim otelotvorenjima, kancer je povezan sa modulacijom arginaze 1 i/ili arginaze 2.
[0076] U nekim otelotvorenjima, kancer je povezan sa povišenim nivoom arginaze 1 u plazmi. U nekim otelotvorenjima, kancer je povezan sa smanjenim nivoom arginina u plazmi. U nekim otelotvorenjima, kancer je povezan sa povišenim nivoom arginaze 1 u plazmi kao i sa smanjenim nivoom arginina u plazmi. U nekim otelotvorenjima, kancer povezan sa povišenim nivoom arginaze 1 u plazmi i/ili sa smanjenim nivoom arginina u plazmi uključuje karcinom renalnih ćelija, karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata, kancer pluća (npr. mikrocelularni kancer pluća (SCLC), nemikrocelularni kancer pluća (NSCLC), mezoteliom), kancer pankreasa, kolorektalni kancer i kancer dojke.
[0077] U nekim otelotvorenjima, kancer izlučuje arginazu 2, na primer, akutna mijeloidna leukemija i kancer prostate.
[0078] U nekim otelotvorenjima, kancer je povezan sa tumorom pozitivnim na arginazu 1 koji infiltrira imunološke ćelije, na primer, kancer pluća (mikrocelularni kancer pluća (SCLC), nemikrocelularni kancer pluća (NSCLC), kancer želuca, kancer bešike, kolorektalni kancer, melanom, karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata, kancer dojke, kancer prostate, kancer jajnika, kancer pankreasa i renalni kancer.
[0079] Termin „respiratorna inflamatorna bolest“ odnosi se na inflamatorna stanja ili poremećaje koji utiču na disajne puteve, vaskulaturu pluća, intersticijum pluća ili njihovu kombinaciju. Oni mogu biti izolovani na plućima ili obuhvatati više organa. U jednom otelotvorenju, respiratorna inflamatorna bolest je inflamatorna bolest pluća. U drugom otelotvorenju, inflamatorna bolest pluća je neinfektivna.
[0080] U nekim otelotvorenjima, respiratorna inflamatorna bolest je astma, hronična opstruktivna bolest pluća (HOBP), hemijski indukovana fibroza pluća, idiopatska fibroza pluća, cistična fibroza ili njihova kombinacija. U nekim otelotvorenjima, respiratorna inflamatorna bolest je hronična opstruktivna bolest pluća (HOBP) ili astma.
[0081] U jednom aspektu, otkriveno je jedinjenje formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (VIIIb), uključujući bilo koji njegov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u inhibiciji arginaze.
[0082] U jednom aspektu, otkrivene su farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njegov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u inhibiciji arginaze.
[0083] Termin „arginaza“ obuhvata enzime koji sadrže mangan koji pripadaju porodici uerohidrolaza koji katalizuju peti i finalni korak u ciklusu uree i konvertuju L-arginin u L-ornitin i ureu. Termin „arginaza“ uključuje dva izozima enzima, npr. arginazu 1 koja deluje u ciklusu uree i locirana je primarno u citoplazmi jetre, i arginazu 2 koja je locirana u mitohondrijama nekoliko tkiva u telu i učestvuje u regulaciji koncentracija arginina/ornitina u ćeliji. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, i tabelu 1, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, selektivna su za arginazu 1. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, i tabelu 1, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, selektivna su za arginazu 2. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, i tabelu 1, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, inhibiraju arginazu 1 i arginazu 2.
[0084] Termin „delotvorna količina“ uključuje količinu jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, koja će prouzrokovati biološki ili medicinski odgovor kod ispitanika, na primer, smanjenje ili inhibiciju aktivnosti enzima ili proteina povezane sa arginazom ili kancerom, ublažavanje simptoma kancera ili usporavanje ili odlaganje progresije kancera. U nekim otelotvorenjima, termin „delotvorna količina“ uključuje količinu jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njegov podrod ili vrstu, ili tabelu 1, koja je, kada se primeni na ispitaniku, delotvorna da najmanje delimično ublaži, inhibira, i/ili poboljša kancer ili inhibira arginazu i/ili da smanji ili inhibira rast tumora ili proliferaciju ćelija kancera kod ispitanika.
[0085] Termin „ispitanik“ uključuje toplokrvne sisare, na primer, primate, pse, mačke, zečeve, pacove i miševe. U nekim otelotvorenjima, subjekt je primat, na primer, čovek. U nekim otelotvorenjima, ispitanik boluje od kancera. U nekim otelotvorenjima, ispitaniku je potrebno lečenje (npr. ispitanik bi imao biološku ili terapijsku korist od lečenja). U nekim otelotvorenjima, pacijent boluje od kancera. U nekim otelotvorenjima, ispitanik ima povišen nivo arginaze 1 u plazmi. U nekim otelotvorenjima, ispitanik ima smanjen nivo arginina. U nekim otelotvorenjima, pacijent ima povišen nivo arginaze 1 u plazmi kao i smanjen nivo arginina. U nekim otelotvorenjima, ispitanik ima kancer koji izlučuje arginazu 2 (npr. akutna mijeloidna leukemija ili kancer prostate). U nekim otelotvorenjima, ispitanik ima tumor pozitivan na arginazu 1 koji infiltrira imunološke ćelije.
[0086] Termini „inhibirati“, „inhibicija“ ili „inhibirajuće“ podrazumevaju redukciju osnovne aktivnosti biološke aktivnosti ili procesa. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja formule (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII) i (Vlllb), uključujući bilo koji njihov podrod ili vrstu, i tabelu 1, inhibiraju arginazu.
[0087] Termini „lečiti“, „lečenje“ i „tretman“ uključuju redukciju ili inhibiciju aktivnosti enzima ili proteina koja je povezana sa arginazom ili kod ispitanika, ublažavanje jednog ili više simptoma kancera, ili usporavanje ili odlaganje progresije kancera kod ispitanika.
Termini „lečiti“, „lečenje“ ili „tretman“ takođe obuhvataju smanjenje ili inhibiciju rasta tumora ili proliferacije ćelija kancera kod ispitanika.
Primeri
[0088] Aspekti predmetnog otkrića mogu biti dalje definisani putem upućivanja na sledeće neograničavajuće primere, koji detaljno opisuju pripremu određenih jedinjenja i intermedijera iz predmetnog otkrića, i postupaka za korišćenje jedinjenja iz predmetnog otkrića. Biće očigledno stručnjacima da mnoge modifikacije, i materijala i metoda, mogu biti izvedene bez odstupanja od opsega predmetnog pronalaska.
[0089] Osim ako nije drugačije navedeno:
(i) sve sinteze su izvođene na temperaturi okoline, tj. u rasponu od 17 do 25 °C, i u atmosferi inertnog gasa kao što je azot, ako nije drugačije navedeno;
(ii) uparavanja su obavljena pomoću rotacionog uparivača ili koristeći Genevac opremu ili Biotage v10 uparivač pod vakuumom, i postupci obrade su obavljeni nakon uklanjanja čvrstih ostataka pomoću filtracije;
(iii) prečišćavanja fleš hromatografijom su obavljena na automatizovanom Teledyne Isco CombiFlash<®>Rf ili Teledyne Isco CombiFlash<®>Companion<®>koristeći prethodno spakovane RediSep Rf Gold<™>kolone silika gela (20-40 µm, sferne čestice), GraceResolv<™>uloške (Davisil<®>silika gel) ili Silicycle uloške (40 - 63 µm).
(iv) preparativna hromatografija je obavljena na Gilson prep HPLC instrumentu sa UV prikupljanjem; alternativno, preparativna hromatografija je obavljena na Waters AutoPurification HPLC-MS instrumentu sa prikupljanjem aktiviranim putem MS i UV;
(v) hiralna preparativna hromatografija je izvedena na instrumentu Gilson sa UV prikupljanjem (233 injektor / frakcioni kolektor, 333 i 334 pumpe, 155 UV detektor) ili na instrumentu Varian Prep Star (2 x SD1 pumpe, 325 UV detektor, 701 frakcioni kolektor) pumpa radi sa Gilson 305 injektorom; alternativno, hiralna preparativna hromatografija je izvedena na instrumentu Waters Prep 100 SFC-MS sa prikupljanjem aktiviranim putem MS i UV, ili na instrumentu Thar MultiGram III SFC sa UV prikupljanjem.
(vi) prinosi, kada postoje, ne moraju biti maksimalni mogući;
(vii) generalno, strukture krajnjih proizvoda formule I potvrđene su pomoću nuklearne magnetne rezonance (NMR); vrednosti hemijskog NMR pomeranja izmerene su na delta skali [protonski spektri magnetne rezonance su određeni pomoću instrumenta Bruker Avance III 600 (600 MHz), Bruker Avance 400 (400 MHz), Bruker Avance 300 (300 MHz) ili Bruker DRX 500 (500 MHz)]; merenja su obavljena na temperaturi okoline, ako nije drugačije naznačeno; korišćene su sledeće skraćenice: s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet; dd, dublet dubleta; ddd, dublet dubleta dubleta; dt, dublet tripleta; bs, široki signal.
(viii) generalno, krajnji proizvodi formule I takođe su okarakterisani masenom spektrometrijom nakon tečne hromatografije (LCMS ili UPLC); UPLC je izveden pomoću UPLC uređaja Waters opremljenog masenim spektrometrom Waters SQ (temp. kolone 40 °C, UV = 220–300 nm ili 190-400 nm, mas. spek. = ESI sa prebacivanjem pozitivno/negativno) pri protoku od 1 ml/min koristeći sistem rastvarača od 97% A 3% B do 3% A do 97% B tokom 1,50 min (ukupno vreme ciklusa sa ekvilibracijom na početne uslove itd.1,70 min), gde A = 0,1% mravlja kiselina ili 0,05% trifluorsirćetna kiselina u vodi (za rad sa kiselinom) ili 0,1% amonijum hidroksid u vodi (za rad sa bazom) i B = acetonitril. Za kiselu analizu korišćena kolona je bila Waters Acquity HSS T3 (1,8 µm, 2,1 x 50 mm), za baznu analizu korišćena kolona je bila Waters Acquity BEH C18 (1,7 µm 2,1 x 50 mm). Alternativno, UPLC je izveden pomoću UPLC uređaja Waters opremljenog masenim spektrometrom Waters SQ (temp. kolone 30 °C, UV = 210-400 nm, mas. spek. = ESI sa prebacivanjem pozitivno/negativno) pri protoku od 1 ml/min koristeći gradijent rastvarača od 2 do 98% B tokom 1,5 min (ukupno vreme ciklusa sa ekvilibracijom na početne uslove 2 min), gde A = 0,1% mravlja kiselina u vodi i B = 0,1% mravlja kiselina u acetonitrilu (za rad sa kiselinom) ili A = 0,1% amonijum hidroksid u vodi i B = acetonitril (za rad sa bazom). Za kiselu analizu, korišćena je kolona Waters Acquity HSS T3 (1,8 µm, 2,1 x 30 mm), za baznu analizu korišćena je kolona Waters Acquity BEH C18 (1,7 µm, 2,1 x 30 mm); LCMS je izveden pomoću Waters Alliance HT (2795) opremljenog masenim spektrometrom Waters ZQ ESCi i kolonom Phenomenex Gemini-NX C18 (5 µm, 110A, 2,1 x 50 mm kolona pri protoku od 1,1 ml/min 95% A do 95% B tokom 4 min sa zadržavanjem 0,5 min, gde A = 0,1% mravlja kiselina i B = 0,1% mravlja kiselina u acetonitrilu (za rad sa kiselinom) ili A = 0,1% amonijum hidroksid u vodi i B = acetonitril (za rad sa bazom). Pored toga, LCMS je izveden pomoću Shimadzu UFLC opremljenog masenim spektrometrom Shimadzu LCMS-2020 i kolonom Waters HSS C18 (1,8 µm, 2,1 x 50 mm) ili Shimpack XR-ODS (2,2 µm, 3,0 x 50 mm) ili Phenomenex Gemini-NX C18 (3 µm, 3,0 x 50 mm) pri protoku od 0,7 ml/min (za kolonu Waters HSS C18), 1,0 ml/min (za kolonu Shim-pack XR-ODS) ili 1,2 ml/min (za Phenomenex Gemini-NX C18), 95% A do 95% B tokom 2,2 min uz zadržavanje 0,6 min, gde A = 0,1% mravlja kiselina ili 0,05% trifluorsirćetna kiselina u vodi (za rad sa kiselinom) ili 0,1% amonijum hidroksid ili 6,5 mM amonijum karbonat u vodi (za rad sa bazom) i B = acetonitril. Prijavljeni molekulski jon odgovara [M+H]+ ako nije drugačije naznačeno; za molekule sa više izotopskih obrazaca (Br, Cl, itd.), prijavljena vrednost je ona koja je dobijena za najnižu masu izotopa osim ako nije drugačije naznačeno.
(ix) prečišćavanje jonskom izmenom je obično obavljano koristeći SCX-2 (Biotage) uložak.
(x) čistoća intermedijera je procenjena pomoću tankoslojne hromatografije, masene spektroskopije, LCMS, UPLC/MS, HPLC (tečna hromatografija visokih performansi) i/ili NMR analize;
(xv) korišćene su sledeće skraćenice:-
EtOH:
etanol
EtOAc:
etil acetat
LDA:
litijum diizopropilamid
MeOH:
metanol
TFA:
trifluorsirćetna kiselina
MeCN:
acetonitril
LCMS:
tečna hromatografija sa masenom spektrometrijom rt ili RT:
sobna temperatura
vod.:
vodeni
THF:
tetrahidrofuran
KHMDS:
kalijum bis(trimetilsilil)amid
DCM:
dihlormetan
DMF:
dimetilformamid
HATU:
(1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfat)
BOC:
terc-butoksikarbonil
DTNB:
5,5' -ditiobis(2-nitrobenzojeva kiselina
TNB:
2-nitro-5-tiobenzojeva kiselina
HEPES:
(4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetanesulfonska kiselina)
Primer 1: (2R,4S)-4-amino-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0090]
intermedijer 1 intermedijer 2
intermedijer 3 intermedijer 4 intermedijer 5
intermedijer 6 intermedijer 7 Primer
Intermedijer 1: 2-benzil 1-(terc-butil) (R)-4-oksopiperidin-1,2-dikarboksilat
[0091] N,N'-diizopropilkarbodiimid (3,49 ml, 22,4 mmol) i DMAP (0,249 g, 2,04 mmol) uz mešanje su dodati u rastvor (R)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-oksopiperidin-2-karboksilne kiseline (4,955 g, 20,37 mmol) i benzil alkohola (2,11 ml, 20,4 mmol) u DCM-u (150 ml) na 0 °C. Reakcija je mešana tokom 17 h uz sporo zagrevanje na sobnu temperaturu. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 50% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(tercbutil) (R)-4-oksopiperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 1, 6,50 g, prinos 96%) kao bezbojno ulje i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 1.40 (5H, br s), 1.49 (4H, br s), 2.43 - 2.65 (2H, m), 2.70 - 2.92 (2H, m), 3.53 - 3.74 (1H, m), 3.94 - 4.10 (1H, m), 4.89 (0.5H, br s), 5.10 - 5.23 (2.5H, m), 7.31 - 7.41 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 356.
Intermedijer 2: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4R)-4-hidroksipiperidin-1,2-dikarboksilat
[0092] Natrijum borhidrid (0,738 g, 19,5 mmol) u porcijama je uz mešanje dodat u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (R)-4-oksopiperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 1, 6,504 g, 19,51 mmol) u smeši MeOH/THF (1:20, 105 ml) na 0 °C. Smeša je mešana tokom 5 h, zatim pažljivo deaktivirana dodatkom 1 M HCl (vod.) (15 ml - razvijanje gasa) i zagrejana na sobnu temperaturu. Smeša je razblažena vodom (25 ml) i EtOAc (50 ml). Faze su razdvojene, i vodena faza je ekstrahovana pomoću EtOAc (4 x 20 ml). Kombinovane organske supstance su isprane zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 45% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4R)-4-hidroksipiperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 2, 3,84 g, prinos 59%) kao bezbojnu gumu smeše dijastereomera 5:1 (glavni dijastereomer je naslovno jedinjenje) i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 1.38 (5H, br s), 1.40 - 1.44 (2H, m), 1.46 (5.4H, br s), 1.60 - 1.69 (1.4H, m), 1.70 - 1.79 (0.2H, m), 1.83 - 1.97 (1.2H, m), 2.48 (1H, br dd), 2.92 - 3.08 (1H, m), 3.28 - 3.46 (0.2H, m), 3.54 - 3.70 (1H, m), 3.76 - 3.84 (0.1H, m), 3.87 - 3.96 (0.1H, m), 4.00 (0.5H, br d), 4.15 (0.5H, s), 4.65 - 4.74 (0.1H, m), 4.87 (0.6H, br d), 5.08 (0.5H, br d), 5.13 -5.26 (2.4H, m), 7.31 - 7.40 (6H, m); m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 358.
Intermedijer 3: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4R)-4-((metilsulfonil)oksi)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0093] Anhidrid metansulfonske kiseline (3,59 g, 20,6 mmol) u porcijama je uz mešanje dodat u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4R)-4-hidroksipiperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 2, 3,84 g, 11,5 mmol; smeša dijastereomera 5:1) i trietilamina (3,35 ml, 24,0 mmol) u DCM-u (50 ml) na 0 °C. Kupatilo za hlađenje je ostavljeno da se istroši i reakcija je zagrejana na sobnu temperaturu. Nakon 6 h, reakcija je razblažena DCM-om (50 ml) i redom isprana sa 1 M HCl (vod.) (50 ml) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (50 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan do suva, što je dalo sirovi 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4R)-4-((metilsulfonil)oksi)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 3, 4,73 g, prinos 100%) kao bledonarandžastu gumu i smešu dijastereomera. Sirova supstanca je neposredno korišćena bez daljeg prečišćavanja. m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 436.
Intermedijer 4: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-azidopiperidin-1,2-dikarboksilat
[0094] Natrijum azid (3,72 g, 57,2 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 2-benzil 1-(tercbutil) (2R,4R)-4-((metilsulfonil)oksi)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 3, 4,73 g, 11,4 mmol; smeša dijastereomera) u DMF-u (50 ml) i reakcija je zagrevana na 60 °C tokom 20 h. Smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu, filtrirana i filtrat je razblažen vodom (400 ml) i EtOAc (40 ml). Faze su razdvojene, i vodena faza je ekstrahovana pomoću EtOAc (4 x 40 ml). Kombinovane organske supstance su isprane zasićenim vodenim rastvorom NaCl (2 x 40 ml), osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane do suva.
Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 30% EtOAc u heksanu), što je dalo dijastereomerno čisti 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-azidopiperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 4, 2,58 g, prinos 63%) kao bezbojnu gumu i smešu rotamera.
<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 1.39 (4H, br s), 1.46 (5H, br s), 1.63 - 1.73 (1H, m), 1.74 - 1.87 (1H, m), 1.95 (1H, ddd), 2.50 - 2.61 (1H, m), 3.03 - 3.44 (1H, m), 3.73 - 3.89 (0.5H, m), 3.90 - 4.01 (1.5H, m), 4.58 - 4.74 (0.5H, m), 4.88 (0.5H, br s), 5.15 - 5.34 (2H, m), 7.30 - 7.43 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M-Boc]<+>= 261.
Intermedijer 5: 2-benzil 1-(terc-butil) (4S)-4-azido-2-(but-2-en-1-il)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0095] 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-azidopiperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 4, 1,94 g, 5,38 mmol) i krotil bromid (0,977 ml, 8,07 mmol) rastvoreni su u THF-u (30 ml) i rastvor je ohlađen na -78 °C. Rastvor KHMDS (1 M u 2-metil tetrahidrofuranu, 7,0 ml, 7,0 mmol) dodat je ukapavanjem tokom 10 min. Reakciona smeša je polako zagrejana na sobnu temperaturu i mešana ukupno 18 h. Sirova reakciona smeša je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl, zatim razblažena zasićenim vodenim rastvorom NaCl i EtOAc (50 ml). Faze su razdvojene, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (3 x 30 ml).
Kombinovane organske supstance su isprane zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (2 do 30% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(tercbutil) (4S)-4-azido-2-(but-2-en-1-il)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 5, 2,106 g, prinos 94%) kao sin/anti dijastereomernu smešu i kao smešu rotamera i E/Z olefina.<1>H NMR (500MHz, CD2Cl2) δ 1.40 - 1.42 (4H, m), 1.43 (5H, br s), 1.49 - 1.58 (1H, m), 1.59 - 1.66 (0.6H, m), 1.67 - 1.74 (3.4H, m), 1.86 (0.5H, dd), 1.89 - 2.05 (2H, m), 2.07 - 2.19 (1H, m), 2.42 (0.5H, dd), 2.58 - 2.69 (1H, m), 2.71 - 2.83 (0.5H, m), 3.01 - 3.16 (0.5H, m), 3.21 (0.5H, br dd), 3.31 - 3.44 (0.5H, m), 3.61 - 3.77 (1.5H, m), 3.97 - 4.07 (0.5H, m), 5.10 - 5.27 (2H, m), 5.36 - 5.45 (1H, m), 5.51 - 5.74 (2H, m), 7.32 - 7.47 (5H,m); m/z: (ES<+>) [M-Boc]<+>= 315.
Intermedijer 6: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0096] Bis(1,5-ciklooktadien)diiridijum(I) dihlorid (50 mg, 0,074 mmol) i bis(difenilfosfino)metan (57 mg, 0,15 mmol) dodati su u balon sa okruglim dnom osušen u pećnici. Balon je zaptiven i pročišćen sa N2. Čvrste supstance su rastvorene u DCM-u (9 ml) i u rastvor je polako dodat 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0,32 ml, 2,2 mmol).
Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min.2-benzil 1-(terc-butil) (4S)-4-azido-2-(but-2-en-1-il)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 5, 616 mg, 1,49 mmol) dodat je u reakciju kao rastvor u DCM-u (3 ml) i reakciona smeša je mešana tokom 66 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i pažljivo deaktivirana dodatkom MeOH (1 ml) i vode (5 ml). Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću DCM-a (3 x 15 ml). Kombinovane organske supstance su osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 15% EtOAc u heksanu), što je dalo dijastereomerno čisti 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 6, 261 mg, prinos 32%) kao providnu, bezbojnu gumu.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.79 (2H, t), 1.25 (12H, s), 1.29 - 1.35 (1H, m), 1.36 - 1.39 (1H, m), 1.41 (9H, s), 1.42 - 1.46 (2H, m), 1.57 - 1.68 (1H, m), 1.85 - 1.94 (3H, m), 1.95 - 2.01 (1H, m), 2.05 (1H, dd), 2.92 - 3.11 (1H, m), 3.49 - 3.72 (1H, m), 3.98 - 4.03 (1H, m), 5.09 (1H, d), 5.18 (1H, d), 7.29 - 7.42 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 565.
Intermedijer 7: (2R,4S)-4-amino-1-(terc-butoksikarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0097] Pd/C (10% mas., 50 mg, 0,047 mmol) dodat je u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 6, 268 mg 0,494 mmol) u EtOAc (3 ml). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika (balon; reakcioni balon vakuumiran i ponovo napunjen azotom x3) na sobnoj temperaturi tokom 17 h. Reakciona smeša je razblažena dodatkom MeOH (5 ml), filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 45% MeOH u DCM-u), što je dalo (2R,4S)-4-amino-1-(terc-butoksikarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (intermedijer 7, 156 mg, prinos 74%) kao beli suvi film.<1>H NMR (500MHz, CD2Cl2) δ 0.71 (2H, t), 1.07 - 1.16 (1H, m), 1.19 (14H, s), 1.31 -1.37 (2H, m), 1.40 (9H, s), 1.80 - 1.96 (1H, m), 2.02 (3H, br d), 2.33 (1H, br s), 3.00 (1H, br s), 3.53 (1H, br s), 3.92 (1H, br s), 8.60 (3H, br s); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 427.Primer 1:
(2R,4S)-4-amino-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0098] Trifluorsirćetna kiselina (0,53 ml, 6,9 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodata u rastvor (2R,4S)-4-amino-1-(terc-butoksikarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilne kiseline (intermedijer 7, 146 mg, 0,342 mmol) u DCM-u (2 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvoren u 1 M HCl (vod.) (3,0 ml, 3,0 mmol) i Et2O (3 ml). Dodata je fenilboronska kiselina (125 mg, 1,03 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je razblažena dodatkom Et2O (20 ml) i vode (5 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ispran sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (kolona PoraPak Rxn CX 20cc). Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 5% amonijak u MeOH (20 ml), što je dalo (2R,4S)-4-amino-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (62 mg, prinos 74%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 0.71 - 0.82 (2H, m), 1.10 - 1.30 (2H, m), 1.33 - 1.44 (2H, m), 1.45 - 1.55 (1H, m), 1.62 (1H, dd), 1.77 (1H, ddd), 1.84 - 1.93 (1H, m), 2.01 - 2.08 (1H, m), 2.18 (1H, ddd), 3.07 (1H, td), 3.22 (1H, dt), 3.28 - 3.39 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 245.
Primer 2: (2R,4S)-4-((S)-2-amino-3-meti)butanamido)-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0099]
nterme er intermedijer 8 intermedijer 9
Intermedijer 8: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0100] Cink (270 mg, 4,14 mmol) i AcOH (1,20 ml, 20,9 mmol) uz mešanje su dodati u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 6, 748 mg, 1,38 mmol) u THF-u (10 ml). Žustro mešana smeša je zagrevana na 30 °C tokom 18 h. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, razblažena DCM-om (30 ml) i filtrirana kroz dijatomejsku zemlju. Filter pogača je isprana DCM-om i filtrat je koncentrovan do suva. Dobijeni ostatak je razdeljen između EtOAc (40 ml) i zasićenog vodenog rastvora NaHCOs. Faze su razdvojene i organske supstance su isprane zasićenim vodenim rastvorom NaHCOs i zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Organske supstance su osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane do suva, što je dalo 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 8, 713 mg, prinos 100%) kao prozirnu bezbojnu gumu. Sirova supstanca je neposredno korišćena bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.79 (2H, t), 1.24 (12H, s), 1.32 - 1.38 (2H, m), 1.39 - 1.47 (13H, m), 1.68 (2H, brt), 1.83 - 1.99 (4H, m), 2.93 (1H, td), 2.97 - 3.07 (1H, m), 3.96 - 4.10 (1H, m), 5.06 - 5.23 (2H, m), 7.30 - 7.41 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 517.
Intermedijer 9: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0101] N,N-diizopropiletilamin (0,12 ml, 0,63 mmol) polako je uz mešanje dodavan u rastvor COMU (270 mg, 0,63 mmol) i Boc-Val-OH (137 mg, 0,631 mmol) u DMF-u (2 ml) na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min i zatim je ohlađen na 0 °C. Dodati su rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 8, 310 mg, 0,60 mmol) u DMF-u (2 ml) i N,N-diizopropiletilamin (0,10 ml, 0,60 mmol) i reakcija je mešana tokom 17 h uz sporo zagrevanje na sobnu temperaturu. Reakciona smeša je razblažena vodom (40 ml) i dobijeni talog je sakupljen filtracijom. Čvrsta supstanca je rastvorena u EtOAc, osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (10 do 100% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 9, 184 mg, prinos 43%) kao bezbojni film i smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.73 - 0.80 (2H, m), 0.85 (3H, d), 0.89 (3H, d), 1.22 (12H, br s), 1.23 -1.29 (2H, m), 1.37 - 1.45 (20H, m), 1.62 - 1.74 (1H, m), 1.86 - 1.99 (3H, m), 2.00 - 2.12 (3H, m), 2.97 (1H, t), 3.78 (1H, t), 3.94 - 4.06 (1H, m), 4.07 - 4.14 (1H, m), 5.00 (1H, br s), 5.05 -5.24 (2H, m), 6.05 (1H, br d), 7.28 - 7.36 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 716.
Intermedijer 10: (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0102] Pd/C (10% mas., 27 mg, 0,025 mmol) dodat je u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 9, 184 mg, 0,257 mmol) u EtOAc (2 ml). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika (balon, balon ispražnjen i ponovo napunjen azotom x3) na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (20 ml) i MeOH (20 ml), filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (20 do 100% EtOAc u heksanu, zatim 10% MeOH u DCM-u), što je dalo (2R,4S)-1-(tercbutoksikarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (intermedijer 10, 116 mg, prinos 72%) kao belu čvrstu supstancu i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.78 (3H, br d), 0.83 - 0.91 (2H, m), 0.94 (3H, br d), 1.20 - 1.25 (12H, m), 1.40 (9H, br s), 1.42 - 1.53 (11H, m), 1.51 - 1.66 (1H, m), 1.75 - 2.18 (4H, m), 2.19 - 2.34 (1H, m), 2.88 - 3.06 (1H, m), 3.85 - 4.06 (2H, m), 4.07 - 4.26 (1H, m), 5.14 (1H, br s), 5.93 (1H, br s), 6.73 (1H, br s), 7.30 - 7.48 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 627.
Primer 2: (2R,4S)-4-((S)-2-amino-3-metibutanamido)-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0103] Trifluorsirćetna kiselina (0,433 ml, 5,63 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodata u rastvor (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilne kiseline (intermedijer 10, 176 mg, 0,281 mmol) u DCM-u (2 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 3 h, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvoren u 1 M HCl (vod.) (3,0 ml, 3,0 mmol) i Et2O (3 ml). Dodata je fenilboronska kiselina (103 mg, 0,845 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je razblažena dodatkom Et2O (20 ml) i vode (5 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ispran sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (kolona PoraPak Rxn CX 20cc). Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 5% amonijak u MeOH (20 ml), što je dalo (2R,4S)-4-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (primer 2, 89 mg, prinos 92%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 0.73 - 0.83 (2H, m), 0.88 - 0.96 (6H, m), 1.14 - 1.24 (1H, m), 1.25 - 1.35 (1H, m), 1.37 - 1.50 (2H, m), 1.64 - 1.76 (1H, m), 1.79 - 1.99 (4H, m), 2.01 - 2.09 (1H, m), 2.17 (1H, dd), 3.11 (1H, d), 3.16 - 3.24 (1H, m), 3.31 (1H, dt), 4.10 - 4.22 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 344.
Primer 3: (2R,4S)-4-(2-aminoacetamido)-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0104]
intermedijer 8 intermedijer 11 intermedijer 12 Primer
Intermedijer 11: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-(2-((tercbutoksikarbonil)amino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0105] N,N-diizopropiletilamin (0,12 ml, 0,63 mmol) polako je uz mešanje dodat u rastvor COMU (270 mg, 0,63 mmol) i Boc-Gly-OH (110 mg, 0,63 mmol) u DMF-u (2 ml) na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min i zatim je ohlađen na 0 °C. Dodati su rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 8, 310 mg, 0,60 mmol) u DMF-u (2 ml) i N,N-diizopropiletilamin (0,11 ml, 0,60 mmol) i reakcija je mešana tokom 17 h uz sporo zagrevanje na sobnu temperaturu. Reakciona smeša je razblažena vodom (60 ml) i pH je podešen na ~5 sirćetnom kiselinom. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (4 x 15 ml). Kombinovane organske supstance su isprane zasićenim vodenim rastvorom NaCl (2 x 10 ml), osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (10 do 100% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 11, 204 mg, prinos 51%) kao bezbojni film i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.75 (2H, brt), 1.21 (14H, s), 1.24 (2H, brd), 1.38 (9H, s), 1.40 (10H, s), 1.71 (1H, dd), 1.81 - 1.91 (1H, m), 1.93 - 2.04 (3H, m), 2.86 - 3.04 (1H, m), 3.62 (2H, br s), 3.93 - 4.04 (1H, m), 4.06 - 4.15 (1H, m), 5.11 (2H, s), 5.14 (1H, br s), 6.27 (1H, br s), 7.28 - 7.40 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 674.
Intermedijer 12: (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-(2-((tercbutoksikarbonil)amino)acetamido)-2-(4-(4, 4, 5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0106] Pd/C (10% mas., 32 mg, 0,030 mmol) dodat je u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 11, 204 mg, 0,303 mmol) u EtOAc (2 ml). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika (balon; reakcioni balon vakuumiran i ponovo napunjen azotom x3) na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena dodatkom EtOAc (20 ml) i MeOH (20 ml), filtrirana kroz dijatomejsku zemlju, i filtrat je koncentrovan do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (25 do 100% EtOAc u heksanu), što je dalo (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (intermedijer 12, 117 mg, prinos 66%) kao belu čvrstu supstancu i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.78 (2H, t), 1.17 - 1.29 (13H, m), 1.40 (10H, br s), 1.45 (9H, s), 1.48 - 1.57 (2H, m), 1.76 - 2.01 (3H, m), 2.04 - 2.13 (1H, m), 2.98 (1H, br t), 3.47 - 3.66 (1H, m), 3.75 (1H, s), 3.90 - 4.06 (2H, m), 4.13 - 4.25 (1H, m), 5.41 (1H, br s), 5.92 (1H, br s), 6.73 (1H, br s), 7.65 (1H, br s); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 584.
Primer 3: (2R,4S)-4-(2-aminoacetamido)-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0107] Trifluorsirćetna kiselina (0,31 ml, 4,0 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodata u rastvor (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilne kiseline (intermedijer 12, 117 mg, 0,201 mmol) u DCM-u (2 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 3 h, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvoren u 1 M HCl (vod.) (3,0 ml, 3,0 mmol) i Et2O (3 ml). Dodata je fenilboronska kiselina (73 mg, 0,60 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je razblažena dodatkom Et2O (20 ml) i vode (5 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ispran sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (kolona PoraPak Rxn CX 20cc). Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 5% amonijak u MeOH (20 ml), što je dalo (2R,4S)-4-(2-aminoacetamido)-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (primer 3, 61 mg, prinos 100%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 0.72 - 0.84 (2H, m), 1.14 - 1.25 (1H, m), 1.26 - 1.34 (1H, m), 1.41 (2H, quin), 1.72 (1H, dtd), 1.79 - 1.94 (2H, m), 1.96 - 2.08 (2H, m), 2.10 (1H, dd), 3.14 - 3.25 (1H, m), 3.30 - 3.36 (1H, m), 3.37 (2H, s), 4.08 - 4.19 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 302.
Primer 4: (2R,4S)-4-[[(2S)-2-aminopropanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0108]
intermedijer 8 intermedijer 13 intermedijer 14 Primer
Intermedijer 13: 2-benzil 1-terc-butil(2R,4S)-4-[[(2S)-2-(tercbutoksikarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilat
[0109] N,N-diizopropiletilamin (0,17 ml, 1,0 mmol) polako je uz mešanje dodat u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 8, 245 mg, 0,474 mmol), Boc-Ala-OH (108 mg, 0,571 mmol) i COMU (244 mg, 0,571 mmol) u DMF-u (1,5 ml) na 0 °C. Reakcija je mešana tokom 1,5 h uz sporo zagrevanje na sobnu temperaturu. Reakciona smeša je razblažena dodatkom vode (20 ml) i EtOAc (20 ml) i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 20 ml) i kombinovane organske supstance su isprane zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (15 do 80% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-terc-butil (2R,4S)-4-[[(2S)-2-(tercbutoksikarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 13, 191 mg, prinos 59%) kao bledožutu gumu i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.69 - 0.83 (2H, m), 1.22 (12H, d), 1.26 (5H, td), 1.38 (9H, br s), 1.40 (9H, br d), 1.42 - 1.49 (3H, m), 1.57 - 1.73 (1H, m), 1.83 - 1.98 (3H, m), 2.01 - 2.05 (2H, m), 2.91 - 3.03 (1H, m), 4.02 (2H, br s), 4.96 (1H, br s), 5.05 - 5.22 (2H, m), 6.21 (1H, br s), 7.27 - 7.36 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 688.
Intermedijer 14: (2R,4S)-1-terc-butoksikarbonil-4[[(2S)-2-(tercbutoksikarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-2-karboksilna kiselina
[0110] Pd/C (10% mas., 15 mg, 0,014 mmol) dodat je u rastvor 2-benzil 1-terc-butil (2R,4S)-4-[[(2S)-2-(terc-butoksikarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 13, 190 mg, 0,28 mmol) u EtOAc (2 ml). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika (balon; reakcioni balon vakuumiran i ponovo napunjen azotom x3) na sobnoj temperaturi tokom 17 h. Reakciona smeša je razblažena dodatkom EtOAc (15 ml) i MeOH (2 ml), filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (20 do 100% EtOAc u heksanu), što je dalo (2R,4S)-1-terc-butoksikarbonil-4-[[(2S)-2-(terc-butoksikarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-2-karboksilnu kiselinu (intermedijer 14, 134 mg, prinos 81%) kao suvi film i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.78 (2H, br t), 1.20 - 1.25 (12H, m), 1.29 - 1.36 (5H, m), 1.41 (9H, s), 1.44 (11H, s), 1.48 - 1.62 (2H, m), 1.77 - 2.01 (3H, m), 2.09 (2H, br s), 2.97 (1H, br s), 3.92 - 4.05 (1H, m), 5.07 (1H, br s), 5.48 (1H, br s), 6.71 (1H, br s), 7.61 (1H, br s); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 598.
Primer 4: (2R,4S)-4-[[(2S)-2-aminopropanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0111] Trifluorsirćetna kiselina (0,34 ml, 4,4 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodata u rastvor (2R,4S)-1-terc-butoksikarbonil-4-[[(2S)-2-(tercbutoksikarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-2-karboksilne kiseline (intermedijer 14, 130 mg, 0,22 mmol) u DCM-u (1 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 3 h, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvoren u 1 M HCl (vod.) (2,0 ml, 2,0 mmol) i Et2O (2 ml). Dodata je fenilboronska kiselina (80 mg, 0,65 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Smeša je razblažena dodatkom Et2O (20 ml) i vode (5 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ispran sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (kolona PoraPak Rxn CX 20cc). Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 5% amonijak u MeOH (20 ml). Dobijena supstanca je dalje prečišćena reversno faznom hromatografijom (RediSep Rf Gold<®>C18, 0 do 15% acetonitrila u vodi), što je dalo (2R,4S)-4-[[(2S)-2-aminopropanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (primer 4, 25 mg, prinos 37%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 0.72 - 0.80 (2H, m), 1.12 - 1.23 (1H, m), 1.24 - 1.26 (1H, m), 1.27 (3H, d), 1.40 (2H, quin), 1.66 - 1.76 (1H, m), 1.78 - 1.92 (2H, m), 1.93 - 1.99 (1H, m), 2.00 - 2.06 (1H, m), 2.10 (1H, dd), 3.18 (1H, ddd), 3.27 - 3.36 (1H, m), 3.53 (1H, q), 4.10 (1H, tt); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 316.
Primer 5: (2R,4S)-4-[[(2S)-2-aminobutanoil]amino]-2-(4-borombutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0112]
intermedijer 8 intermedijer 15 intermedijer 16 Primer
Intermedijer 15: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0113] N,N-diizopropiletilamin (0,165 ml, 0,94 mmol) polako je uz mešanje dodat u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 8, 244 mg, 0,47 mmol), Boc-Abu-OH (96 mg, 0,47 mmol) i COMU (206 mg, 0,48 mmol) u DMF-u (3 ml) na 0 °C. Reakcija je mešana tokom 16 h uz sporo zagrevanje na sobnu temperaturu. Sirova reakciona smeša je razblažena vodom (30 ml) i ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 10 ml). Kombinovane organske supstance su redom isprane zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (15 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (15 do 60% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 15, 215 mg, prinos 65%) kao providnu gumu i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.71 - 0.79 (2H, m), 0.87 (3H, br t), 1.19 (4H, br s), 1.21 (9H, s), 1.36 (5H, br s), 1.38 (8H, s), 1.39 - 1.41 (8H, m), 1.48 - 1.58 (2H, m), 1.68 (1H, br dd), 1.72 - 1.81 (1H, m), 1.84 - 1.98 (3H, m), 1.99 - 2.02 (1H, m), 2.88 - 3.04 (1H, m), 3.89 (1H, br d), 3.95 - 4.07 (2H, m), 5.00 (1H, br d), 5.05 - 5.22 (2H, m), 6.20 (1H, br s), 7.27 - 7.36 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 703.
Intermedijer 16: (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((S)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0114] Pd/C (10% mas., 16 mg, 0,015 mmol) dodat je u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 15, 215 mg, 0,31 mmol) u EtOAc (3 ml). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika (balon, balon ispražnjen i ponovo napunjen azotom x3) na sobnoj temperaturi tokom 24 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (10 ml) i MeOH (1 ml), filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 100% EtOAc u heksanu), što je dalo (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((S)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (intermedijer 16, 147 mg, prinos 78%) kao suvi film i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.75 (2H, br s), 0.89 (3H, br s), 1.20 (12H, s), 1.24 - 1.33 (2H, m), 1.37 (10H, br s), 1.40 (10H, s), 1.42 - 1.61 (4H, m), 1.85 (3H, br s), 1.98 (2H, br s), 2.01 - 2.06 (1H, m), 2.95 (1H, br s), 3.98 (2H, br s), 5.27 (0.5H, br s), 5.68 (0.5H, br s), 6.74 (0.5H, br s), 7.52 (0.5H, br s); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 612.
Primer 5: (2R,4S)-4-[[(2S)-2-aminobutanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0115] Trifluorsirćetna kiselina (0,37 ml, 4,8 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodata u rastvor (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilne kiseline (intermedijer 16, 147 mg, 0,24 mmol) u DCM-u (1 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvoren u 1 M HCl (vod.) (2,0 ml, 2,0 mmol) i Et2O (2 ml). Dodatna je fenilboronska kiselina (88 mg, 0,72 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je razblažena sa Et2O (5 ml) i vodom (2 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ispran sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (kolona PoraPak Rxn CX 20cc). Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 5% amonijak u MeOH (20 ml). Dobijena supstanca je dalje prečišćena reversno faznom hromatografijom (RediSep Rf Gold<®>C18, 0 do 15% acetonitrila u vodi), što je dalo (2R,4S)-4-[[(2S)-2-aminobutanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (primer 5, 37 mg, prinos 47%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 0.76 (2H, br t), 0.87 (3H, t), 1.13 - 1.23 (1H, m), 1.24 - 1.34 (1H, m), 1.40 (2H, quin), 1.63 (2H, dq), 1.67 - 1.74 (1H, m), 1.78 - 1.85 (1H, m), 1.86 - 1.96 (2H, m), 1.99 - 2.07 (1H, m), 2.13 (1H, brdd), 3.10 - 3.24 (1H, m), 3.25 - 3.41 (2H, m), 4.07 - 4.21 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 330.
Primer 6: (2R,4S)-4-[[(2S)-2-amino-4-metil-pentanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0116]
intermedijer 8
intermedijer 17 intermedijer 18 Primer
Intermedijer 17: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0117] N,N-diizopropiletilamin (0,17 ml, 0,94 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 8, 244 mg, 0,47 mmol), Boc-Leu-OH (96 mg, 0,47 mmol) i COMU (206 mg, 0,48 mmol) u DMF-u (3 ml) at 0 °C. Reakcija je mešana tokom 16 h uz sporo zagrevanje na sobnu temperaturu. Sirova reakciona smeša je razblažena vodom (30 ml) i ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 10 ml). Kombinovane organske supstance su redom isprane zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (15 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (15 do 60% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 17, 224 mg, prinos 65%) kao belu penu i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.73 - 0.80 (2H, m), 0.89 (3H, d), 0.90 (3H, d), 1.22 (12H, s), 1.27 (1H, br s), 1.39 (9H, s), 1.40 (9H, s), 1.41 - 1.48 (4H, m), 1.55 - 1.64 (2H, m), 1.68 (1H, br dd), 1.85 - 1.98 (3H, m), 2.01 (1H, br d), 2.02 - 2.05 (1H, m), 2.93 - 3.02 (1H, m), 3.94 - 4.08 (3H, m), 4.83 (1H, br d), 5.05 - 5.22 (2H, m), 6.20 (1H, br s), 7.28 - 7.31 (1H, m), 7.33 (4H, d); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 731.
Intermedijer 18: (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0118] Pd/C (10% mas., 13 mg, 0,012 mmol) dodat je u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 17, 174 mg, 0,24 mmol) u EtOAc (2,5 ml). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika (balon, balon ispražnjen i ponovo napunjen azotom x3) na sobnoj temperaturi tokom 23 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (10 ml) i MeOH (1 ml), filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (15 do 100% EtOAc u heksanu), što je dalo (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((S)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (intermedijer 18, 149 mg, prinos 98%) kao suvi film i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.78 (2H, br t), 0.91 (6H, br d), 1.23 (11H, s), 1.27 - 1.36 (2H, m), 1.40 (10H, s), 1.43 (11H, s), 1.46 - 1.55 (2H, m), 1.60 - 1.73 (2H, m), 1.78 - 1.96 (3H, m), 1.97 - 2.02 (1H, m), 2.05 - 2.14 (1H, m), 2.82 - 3.08 (1H, m), 3.92 - 4.08 (2H, m), 5.00 (0.4H, br s), 5.49 (0.6H, br d), 6.76 (0.4H, br d), 7.60 (0.6H, br s); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 640.
Primer 6: (2R,4S)-4-[[(2S)-2-amino-4-metil-pentanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0119] Trifluorsirćetna kiselina (0,36 ml, 4,7 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodata u rastvor (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilne kiseline (intermedijer 18, 149 mg, 0,23 mmol) u DCM-u (1 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvoren u 1 M HCl (vod.) (2,0 ml, 2,0 mmol) i Et2O (2 ml). Dodatna je fenilboronska kiselina (85 mg, 0,70 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je razblažena sa Et2O (10 ml) i vodom (2 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ispran sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (kolona PoraPak Rxn CX 20cc). Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 5% amonijak u MeOH (20 ml), što je dalo (2R,4S)-4-[[(2S)-2-amino-4-metil-pentanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu.
[0120] primer 6, 81 mg, prinos 97%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 0.74 - 0.82 (2H, m), 0.89 (3H, d), 0.91 (3H, d), 1.15 - 1.25 (1H, m), 1.24 - 1.34 (1H, m), 1.38 - 1.47 (3H, m), 1.47 - 1.54 (1H, m), 1.60 (1H, dt), 1.65 - 1.76 (1H, m), 1.79 - 1.98 (3H, m), 2.01 - 2.09 (1H, m), 2.14 (1H, dd), 3.15 - 3.23 (1H, m), 3.31 (1H, dt), 3.39 (1H, t), 4.10 - 4.17 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M-H2O+H]<+>= 340.
Primer 7: (2R,4S)-4-[[(2S,3S)-2-amino-3-metil-pentanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0121]
intermedijer 8 intermedijer 19 intermedijer 20 Primer
Intermedijer 19: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((2S,3S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0122] N,N-diizopropiletilamin (0,24 ml, 1,4 mmol) polako je uz mešanje dodat u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 8, 355 mg, 0,687 mmol), Boc-Ile-OH (159 mg, 0,687 mmol) i COMU (300 mg, 0,70 mmol) u DMF-u (4 ml) na 0 °C. Reakcija je mešana tokom 16 h uz sporo zagrevanje na sobnu temperaturu. Sirova reakciona smeša je razblažena vodom (30 ml) i smeša je mešana tokom 10 min. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom. Čvrsta supstanca je rastvorena u EtOAc (20 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom NaCl (5 ml), osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 60% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((2S,3S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 19, 424 mg, prinos 85%) kao belu penu i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.73 - 0.80 (2H, m), 0.82 - 0.90 (6H, m), 0.97 - 1.11 (1H, m), 1.21 (12H, s), 1.26 - 1.31 (1H, m), 1.32 - 1.36 (1H, m), 1.38 (9H, br s), 1.39 (9H, s), 1.41 - 1.43 (2H, m), 1.67 (1H, br dd), 1.75 - 1.84 (2H, m), 1.86 - 1.98 (3H, m), 2.00 (1H, br d), 2.03 (1H, br d), 2.92 - 3.02 (1H, m), 3.81 (1H, t), 3.95 - 4.09 (2H, m), 4.98 (1H, br s), 5.04 - 5.21 (2H, m), 6.07 (1H, br d), 7.28 - 7.36 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 730.
Intermedijer 20: (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((2S,3S)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0123] Pd/C (10% mas., 22 mg, 0,021 mmol) dodat je u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((2S,3S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 19, 302 mg, 0,41 mmol) u EtOAc (4 ml). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika (balon, balon ispražnjen i ponovo napunjen azotom x3) na sobnoj temperaturi tokom 20 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (10 ml) i MeOH (1 ml), filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (15 do 100% EtOAc u heksanu, zatim 0 do 50% MeOH u EtOAc), što je dalo (2R,4S)-1-(tercbutoksikarbonil)-4-((2S,3S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (intermedijer 20, 223 mg, prinos 84%) kao suvi film i kao smešu rotamera, i nusproizvod boronske kiseline (2R,4S)-2-(4-borobutil)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((2S,3S)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)-3-metilpentanamido)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (30 mg, prinos 13%) kao belu čvrstu supstancu i kao smešu rotamera. Intermedijer 20:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.72 - 0.81 (2H, m), 0.82 - 0.88 (3H, m), 0.89 - 0.94 (3H, m), 0.98 - 1.11 (1H, m), 1.21 - 1.24 (12H, m), 1.26 - 1.31 (1H, m), 1.32 - 1.38 (2H, m), 1.40 (10H, br s), 1.42 (10H, br s), 1.45 - 1.55 (1H, m), 1.53 - 1.64 (1H, m), 1.76 - 1.97 (4H, m), 1.98 - 2.08 (3H, m), 2.83 -3.10 (1H, m), 3.90 - 4.08 (2H, m), 5.15 (0.5H, br d), 5.81 (0.5H, br s), 6.74 (0.5H, br s), 7.48 (0.5H, br s); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 640. Nusproizvod boronske kiseline:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.76 - 0.86 (2H, m), 0.86 - 0.96 (6H, m), 1.03 - 1.13 (1H, m), 1.43 (9H, br s), 1.44 (12H, s), 1.53 - 1.68 (1H, m), 1.78 - 1.90 (2H, m), 1.90 - 1.99 (2H, m), 1.99 - 2.04 (1H, m), 2.07 - 2.21 (1H, m), 2.98 - 3.11 (1H, m), 3.43 - 3.61 (1H, m), 3.90 (1H, br s), 3.96 - 4.12 (2H, m), 5.19 (1H, br s), 5.53 - 5.76 (1H, m), 6.72 (1H, br s); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 558.
Primer 7: (2R,4S)-4-[[(2S,3S)-2-amino-3-metil-pentanoilaminol-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0124] Trifluorsirćetna kiselina (0,62 ml, 8,1 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodata u rastvor (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((2S,3S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilne kiseline (intermedijer 20, 223 mg, 0,35 mmol) i nusproizvoda boronske kiseline (2R,4S)-2-(4-borobutil)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((2S,3S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilpentanamido)piperidin-2-karboksilne kiseline (30 mg, 0,05 mmol) u DCM-u (2 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvoren u 1 M HCl (vod.) (3,0 ml, 3,0 mmol) i Et2O (3 ml). Dodatna je fenilboronska kiselina (147 mg, 1,21 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Smeša je razblažena sa Et2O (5 ml) i vodom (1 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ispran sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (kolona PoraPak Rxn CX 20cc). Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 5% amonijak u MeOH (20 ml), što je dalo (2R,4S)-4-[[(2S,3S)-2-amino-3-metil-pentanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu.
[0125] primer 7, 126 mg, prinos 88%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 0.78 (2H, td), 0.85 - 0.91 (6H, m), 1.11 - 1.25 (2H, m), 1.26 - 1.34 (1H, m), 1.37 - 1.49 (3H, m), 1.64 - 1.76 (2H, m), 1.80 - 1.91 (2H, m), 1.92 - 1.99 (1H, m), 2.01 - 2.09 (1H, m), 2.17 (1H, dd), 3.15 - 3.24 (2H, m), 3.31 (1H, dt), 4.10 - 4.21 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 358.
Primer 8: (2R,4S)-4-[[(2S)-2-amino-3,3-dimetil-butanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0126]
intermedijer 8 intermedijer 21 intermedijer 22 Primer
Intermedijer 21: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0127] N,N-diizopropiletilamin (0,24 ml, 1,4 mmol) polako je uz mešanje dodat u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 8, 355 mg, 0,687 mmol), Boc-terc-Leu-OH (159 mg, 0,687 mmol) i COMU (300 mg, 0,70 mmol) u DMF-u (4 ml) na 0 °C. Reakcija je mešana tokom 16 h uz sporo zagrevanje na sobnu temperaturu. Sirova reakciona smeša je razblažena vodom (30 ml) i smeša je mešana tokom 10 min. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom. Čvrsta supstanca je rastvorena u EtOAc (20 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom NaCl (5 ml), osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 55% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 21, 372 mg, prinos 74%) kao belu penu.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.73 - 0.81 (2H, m), 0.95 (9H, s), 1.24 (12H, s), 1.41 (10H, s), 1.42 - 1.46 (12H, m), 1.68 (1H, dd), 1.87 - 1.95 (1H, m), 1.96 - 2.01 (2H, m), 2.02 - 2.05 (2H, m), 2.92 - 3.04 (1H, m), 3.69 (1H, br d), 3.98 - 4.12 (2H, m), 5.05 - 5.25 (3H, m), 5.50 - 5.62 (1H, m), 7.30 - 7.39 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 730.
Intermedijer 22: (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0128] Pd/C (10% mas., 27 mg, 0,025 mmol) dodat je u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 21, 372 mg, 0,511 mmol) u EtOAc (4 ml). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika (balon, balon ispražnjen i ponovo napunjen azotom x3) na sobnoj temperaturi tokom 20 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (10 ml) i MeOH (1 ml), filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (40 do 100% EtOAc u heksanu, zatim 0 do 40% MeOH u EtOAc), što je dalo (2R,4S)-1-(tercbutoksikarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (intermedijer 22, 265 mg, prinos 81%) kao suvi film i kao smešu rotamera, i nusproizvod boronske kiseline (2R,4S)-2-(4-borobutil)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((S)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (32 mg, prinos 11%) kao providni suvi film i kao smešu rotamera. Intermedijer 22:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.75 (2H, br t), 0.93 (9H, s), 1.20 (12H, s), 1.24 - 1.33 (2H, m), 1.36 (9H, s), 1.38 (9H, br s), 1.40 (3H, br s), 1.51 - 1.64 (1H, m), 1.72 - 1.82 (1H, m), 1.83 - 1.98 (3H, m), 2.03 (1H, br s), 2.79 - 3.06 (1H, m), 3.76 (0.4H, br d), 3.85 - 4.07 (2.6H, m), 5.42 (0.6H, br d), 6.39 - 6.71 (1H, m), 6.74 - 6.99 (0.4H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 640.
Nusproizvod boronske kiseline:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.77 - 0.86 (2H, m), 0.97 (9H, s), 1.42 (9H, br s), 1.43 (14H, br s), 1.52 - 1.67 (1H, m), 1.75 - 1.90 (2H, m), 1.91 - 2.04 (3H, m), 2.08 - 2.19 (1H, m), 2.97 - 3.14 (1H, m), 3.44 - 3.63 (1H, m), 3.87 (1H, br d), 3.97 - 4.11 (2H, m), 5.50 (1H, br s), 6.53 - 6.79 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 558.
Primer 8: (2R,4S)-4-[[(2S)-2-amino-3,3-dimetil-butanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0129] Trifluorsirćetna kiselina (0,73 ml, 9,4 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodata u rastvor (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilne kiseline (intermedijer 22, 265 mg, 0,414 mmol) i nusproizvoda boronske kiseline (2R,4S)-2-(4-borobutil)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((S)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)piperidin-2-karboksilne kiseline (32 mg, 0,057 mmol) u DCM-u (2 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvoren u 1 M HCl (vod.) (3,0 ml, 3,0 mmol) i Et2O (3 ml). Dodatna je fenilboronska kiselina (172 mg, 1,41 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je razblažena sa Et2O (5 ml) i vodom (1 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ispran sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (kolona PoraPak Rxn CX 20cc). Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 5% amonijak u MeOH (20 ml), što je dalo (2R,4S)-4-[[(2S)-2-amino-3,3-dimetil-butanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (primer 8, 158 mg, prinos 94%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 0.74 - 0.81 (2H, m), 0.95 (9H, s), 1.15 - 1.25 (1H, m), 1.26 - 1.34 (1H, m), 1.38 - 1.48 (2H, m), 1.65 -1.75 (1H, m), 1.80 - 1.91 (2H, m), 1.96 (1H, ddd), 2.01 - 2.10 (1H, m), 2.19 (1H, dd), 3.05 (1H, s), 3.15 - 3.24 (1H, m), 3.30 (1H, dt), 4.10 - 4.23 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 358.
Primer 9: (2R,4S)-4-[[(2R)-2-amino-3-metil-butanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0130]
intermedijer 8 intermedijer 23 intermedijer 24 Primer
Intermedijer 23: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0131] N,N-diizopropiletilamin (0,063 ml, 0,36 mmol) polako je uz mešanje dodat u rastvor HATU (61 mg, 0,16 mmol) i Boc-D-Val-OH (33 mg, 0,15 mmol) u DMF-u (1 ml) na 0 °C. Rastvor je mešan tokom 10 min, zatim je dodat rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 8, 75 mg, 0,15 mmol) u DMF-u (1 ml). Reakcija je mešana tokom 16 h uz sporo zagrevanje na sobnu temperaturu. Sirova reakcija je razblažena dodatkom 0,1 M HCl (vod.) (30 ml) i EtOAc. Faze su razdvojene, i vodena faza je ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 15 ml). Kombinovane organske supstance su isprane zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 40% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(tercbutil) (2R,4S)-4-((R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 23, 74 mg, prinos 71%) kao bezbojni film i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.75 (2H, t), 0.84 (3H, d), 0.89 (3H, d), 1.21 (12H, s), 1.30 - 1.35 (1H, m), 1.37 (9H, s), 1.39 (9H, s), 1.42 (4H, br s), 1.69 (1H, dd), 1.81 - 1.91 (1H, m), 1.92 - 2.01 (3H, m), 2.02 (2H, s), 2.94 -3.02 (1H, m), 3.75 (1H, dd), 3.91 - 4.03 (1H, m), 5.03 - 5.19 (3H, m), 6.10 (1H, d), 7.28 -7.39 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 715.
Intermedijer 24: (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0132] Pd/C (10% mas., 5 mg, 0,005 mmol) dodat je u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-((R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 23, 69 mg, 0,10 mmol) u EtOAc (1 ml). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika (balon, balon ispražnjen i ponovo napunjen azotom x3) na sobnoj temperaturi tokom 19 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (10 ml) i MeOH (1 ml), filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (40 do 100% EtOAc u heksanu, zatim 0 do 40% MeOH u EtOAc), što je dalo (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (intermedijer 24, 40 mg, prinos 66%) kao suvi film i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.77 (2H, t), 0.91 (6H, br d), 1.20 - 1.24 (13H, m), 1.29 (1H, br d), 1.33- 1.42 (11H, m), 1.43 (10H, s), 1.70 -1.82 (1H, m), 1.83 - 1.90 (1H, m), 1.91 - 2.02 (4H, m), 3.00 (1H, t), 3.83 - 3.94 (1H, m), 3.96 - 4.07 (1H, m), 4.13 (1H, br s), 5.40 (1H, d), 6.03 - 6.33 (1H, m), 6.90 - 7.22 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 625.
Primer 9: (2R,4S)-4-[[(2R)-2-amino-3-metil-butanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0133] Trifluorsirćetna kiselina (0,10 ml, 1,3 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodata u rastvor (2R,4S)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-((R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilne kiseline (intermedijer 24, 40 mg, 0,06 mmol) u DCM-u (1 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvore u 1 M HCl (vod.) (1,0 ml, 1,0 mmol) i Et2O (1 ml). Dodatna je fenilboronska kiselina (24 mg, 0,20 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 20 h. Smeša je razblažena sa Et2O (5 ml) i vodom (1 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ispran sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (kolona PoraPak Rxn CX 20cc). Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 5% amonijak u MeOH (20 ml), što je dalo (2R,4S)-4-[[(2R)-2-amino-3-metil-butanoil]amino]-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (primer 9, 20 mg, prinos 91%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 0.73 - 0.83 (2H, m), 0.87 - 0.95 (6H, m), 1.14 - 1.23 (1H, m), 1.24 - 1.33 (1H, m), 1.41 (2H, quin), 1.65 - 1.77 (1H, m), 1.79 - 1.87 (1H, m), 1.88 -1.98 (3H, m), 2.01 - 2.09 (1H, m), 2.15 (1H, dd), 3.14 (1H, d), 3.15 - 3.24 (1H, m), 3.31 (1H, dt), 4.11 - 4.20 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M-H2O+H]<+>= 326.
Primer 10: Anti-4-amino-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina enantiomer 1
[0134]
intermedijer 25 intermedijer 26
nterme er intermedijer 28 intermedijer 29
intermedijer 30 intermedijer 31 intermedijer intermedijer
Intermedijer 25: 2-benzil 1-(terc-butil) 4-oksopiperidin-1,2-dikarboksilat
[0135] N,N'-diizopropil karbodiimid (3,48 ml, 22,3 mmol) i DMAP (0,248 g, 2,03 mmol) uz mešanje su dodati u rastvor 1-(terc-butoksikarbonil)-4-oksopiperidin-2-karboksilne kiseline (4,94 g, 20,3 mmol) i benzil alkohola (2,21 ml, 21,4 mmol) u DCM-u (130 ml) na 0 °C.
Reakcija je mešana tokom 17 h uz sporo zagrevanje na sobnu temperaturu. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 50% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(tercbutil) 4-oksopiperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 25, 6,68 g, prinos 99%) kao bezbojno ulje i kao smešu rotamera.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1.40 (5H, br s), 1.45 - 1.58 (4H, m), 2.50 (2H, br d), 2.71 - 2.94 (2H, m), 3.51 - 3.75 (1H, m), 4.05 (1H, br s), 4.89 (0.5H, br s), 5.09 - 5.27 (2.5H, m), 7.30 - 7.42 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 356.
Intermedijer 26: 2-benzil 1-(terc-butil) 4-hidroksipiperidin-1,2-dikarbosilat
[0136] Natrijum borhidrid (0,749 g, 19,8 mmol) u porcijama je uz mešanje dodat u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) 4-oksopiperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 25, 6,60 g, 19,8 mmol) u smeši MeOH/THF (1:1, 100 ml) na 0 °C. Smeša je mešana tokom 3 h, zatim pažljivo deaktivirana dodatkom 1 M HCl (vod.) (20 ml - razvijanje gasa) i zagrejana na sobnu temperaturu. Smeša je razblažena vodom (120 ml) i EtOAc (40 ml). Faze su razdvojene, i vodena faza je ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 30 ml). Kombinovane organske supstance su isprane zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane do suva, što je dalo 2-benzil 1-(terc-butil) 4-hidroksipiperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 26, 6,87 g, 103%) kao providnu gumu. Sirova supstanca je neposredno preneta dalje bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1.34 - 1.42 (5H, m), 1.47 (4H, s), 1.56 - 1.78 (3H, m), 1.84 - 1.97 (1H, m), 2.48 (1H, brdd), 2.88 - 3.10 (1H, m), 3.63 (1H, brdd), 4.00 (0.5H, br d), 4.71 (0.5H, s), 4.87 (0.5H, br s), 5.08 (0.5H, br s), 5.13 - 5.26 (2H, m), 7.32 - 7.39 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 358.
Intermedijer 27: 2-benzil 1-(terc-butil) 4-((metilsulfonil)oksi)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0137] Anhidrid metansulfonske kiseline (6,26 g, 36,0 mmol) u porcijama je uz mešanje dodat u rastvor 2-benzil 1-(terc-butil) 4-hidroksipiperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 26, 6,71 g, 19,9 mmol) i trietilamina (5,60 ml, 40,2 mmol) u DCM-u (100 ml) na 0 °C.
Kupatilo za hlađenje je ostavljeno da se istroši i reakcija je zagrejana na sobnu temperaturu. Nakon 15 h, reakcija je razblažena DCM-om (100 ml) i redom isprana 1 M (vod.) HCl (50 ml), vodom (50 ml), zasićenim vodenim rastvorom NaHCOs (50 ml) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (50 ml). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan do suva, što je dalo 2-benzil 1-(terc-butil) 4-((metilsulfonil)oksi)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 27, 7,74 g, prinos 94%) kao bledonarandžastu gumu i kao smešu rotamera i izomera. Sirova supstanca je neposredno preneta dalje bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1.39 (4H, br s), 1.43 - 1.48 (5H, m), 1.57 (0.5H, br s), 1.66 - 1.78 (1H, m), 1.84 - 1.95 (1H, m), 1.97 - 2.07 (0.5H, m), 2.08 - 2.20 (1H, m), 2.68 - 2.87 (1H, m), 2.93 - 3.00 (3H, m), 3.98 - 4.07 (0.6H, m), 4.14 - 4.24 (0.4H, m), 4.52 - 4.72 (1H, m), 4.86 - 5.05 (1H, m), 5.08 - 5.22 (2H, m), 7.34 - 7.41 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 436.
Intermedijer 28: 2-benzil 1-(terc-butil) 4-azidopiperidin-1,2-dikarboksilat
[0138] Natrijum azid (6,05 g, 93,1 mmol) uz mešanje je dodat u rastvor 2-benzil 1-(tercbutil) 4-((metilsulfonil)oksi)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 27, 7,73 g, 18,6 mmol) u DMF-u (50 ml). Reakcija je zagrejana na 60 °C i mešana tokom 21 h. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, filtrirana i filtrat je razblažen dodatkom vode (500 ml) i EtOAc (50 ml). Faze su razdvojene, i vodena faza je ekstrahovana pomoću EtOAc (4 x 40 ml). Kombinovane organske supstance su isprane zasićenim vodenim rastvorom NaCl (2 x 40 ml), osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 35% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(terc-butil) 4-azidopiperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 28, 5,26 g, prinos 78%) kao bledožutu gumu i kao smešu rotamera i izomera.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1.38 (4H, br s), 1.46 (5H, br s), 1.64 - 1.74 (1H, m), 1.74 - 1.86 (1H, m), 1.95 (1H, ddd), 2.43 -2.59 (1H, m), 3.13 - 3.38 (1H, m), 3.83 (0.5H, br d), 3.90 - 4.09 (1.5H, m), 4.68 (0.5H, br s), 4.88 (0.5H, br s), 5.10 - 5.36 (2H, m), 7.30 - 7.43 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M-Boc]<+>= 261.
Intermedijer 29: 2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-(but-2-enil)piperidin-1,2-dikarboksilat
[0139] 2-benzil 1-(terc-butil) 4-azidopiperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 28, 5,26 g, 14,6 mmol) i krotil bromid (2,65 ml, 21,9 mmol) rastvoreni su u THF-u (100 ml) i rastvor je ohlađen na -78 °C. Rastvor KHMDS (1 M u 2-metiltetrahidrofuranu, 22,0 ml, 22,0 mmol) dodat je ukapavanjem tokom 10 min. Reakciona smeša je polako zagrejana na sobnu temperaturu i mešana ukupno 5 h. Sirova reakciona smeša je deaktivirana zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl, zatim razblažena zasićenim vodenim rastvorom NaCl i EtOAc (50 ml). Faze su razdvojene, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc (3 x 40 ml). Kombinovane organske supstance su isprane zasićenim vodenim rastvorom NaCl, osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (2 do 40% EtOAc u heksanu), što je dalo 2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-(but-2-enil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 29, 5,13 g, prinos 85%) kao prozirno bledožuto ulje i kao smešu dijastereomera, rotamera i E/Z olefina.<1>H NMR (500MHz, CD2Cl2) δ 1.37 (4H, br s), 1.39 (5H, s), 1.40 - 1.43 (1H, m), 1.45 - 1.54 (1H, m), 1.54 - 1.62 (1H, m), 1.67 (3H, dd), 1.79 - 1.89 (1H, m), 1.91 - 2.01 (2H, m), 2.03 - 2.08 (1H, m), 2.08 -2.15 (1H, m), 2.38 (1H, dd), 2.50 - 2.66 (1H, m), 2.67 - 2.83 (1H, m), 2.94 - 3.11 (1H, m), 3.17 (1H, br dd), 3.32 (1H, ddd), 3.56 - 3.75 (2H, m), 3.99 (1H, dt), 5.05 - 5.25 (1H, m), 5.35 - 5.43 (1H, m), 5.49 - 5.64 (2H, m), 7.29 - 7.39 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 415.
Intermedjer 30: anti-2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilat i
Intermedijer 31: sin-2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilat
[0140] Bis(1,5-ciklooktadien)diiridijum(I) dihlorid (415 mg, 0,618 mmol) i bis(difenilfosfino)metan (475 mg, 1,24 mmol) dodati su u balon sa okruglim dnom osušen u pećnici. Balon je zaptiven i pročišćen sa N2. Čvrste supstance su rastvorene u DCM-u (90 ml) i u rastvor je polako dodat 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (2,70 ml, 18,6 mmol).
Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min.2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-(but-2-enil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 29, 5,12 g, 12,4 mmol) dodat je kao rastvor u DCM-u (30 ml) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 46 h. Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C i pažljivo deaktivirana dodatkom MeOH (2 ml) i vode (50 ml). Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću DCM-a (3 x 30 ml). Kombinovane organske supstance su osušene iznad MgSO4, filtrirane i koncentrovane do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 20% EtOAc u heksanu), što je dalo anti-2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 30, 2,01 g, prinos 30%) kao prvi eluirajući dijastereomer kao bezbojnu gumu i sin-2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 31, 2,07 g, prinos 31%) kao drugi eluirajući dijastereomer kao bezbojnu gumu.
Intermedijer 30:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.80 (2H, t), 1.25 (12H, s), 1.28 -1.36 (2H, m), 1.38 (8H, s), 1.40 - 1.44 (2H, m), 1.44 - 1.48 (1H, m), 1.49 - 1.54 (1H, m), 1.67 - 1.78 (1H, m), 1.87 - 2.03 (2H, m), 2.07 - 2.19 (1H, m), 2.50 (1H, td), 3.42 (1H, ddd), 3.46 - 3.58 (1H, m), 3.66 - 3.77 (1H, m), 5.09 - 5.21 (2H, m), 7.29 - 7.43 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 565.
Intermedijer 31:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.79 (2H, br t), 1.25 (12H, s), 1.30 -1.39 (2H, m), 1.39 - 1.44 (11H, m), 1.58 - 1.69 (1H, m), 1.86 - 1.94 (3H, m), 1.94 -2.00 (1H, m), 2.01 - 2.09 (1H, m), 2.94 - 3.09 (1H, m), 3.52 - 3.66 (1H, m), 4.05 (1H, br d), 5.03 - 5.25 (2H, m), 7.29 - 7.39 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 565.
Intermedijer 32: anti-2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat enantiomer 1 i
Intermedijer 33: anti-2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat enantiomer 2
[0141] Anti-2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 30, 2 g, 3,69 mmol) podvrgnut je hiralnoj SFC [(S,S)Whelk-O1 kolona, 21,2 mm x 250 mm, 5 µm, temperatura = 20 °C, mobilna faza = 20% izopropanol:CO2, UV detekcija na 220 nm, nanošenje = 25 mg/inj, konc. = 100 mg/ml u MeCN, protok = 70 ml/min, izlazni pritisak = 100 bar], što je dalo enantiomer 1 anti-2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 32, 980 mg, prinos 49%, 96% ee) kao prvi eluirajući enantiomer kao bezbojnu gumu i enantiomer 2 anti-2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 33, 957 mg, prinos 48%, 98% ee) kao drugi eluirajući enantiomer kao bezbojnu gumu.
Intermedijer 32:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.80 (2H, t), 1.25 (12H, s), 1.27 -1.35 (2H, m), 1.38 (9H, s), 1.41 - 1.47 (2H, m), 1.49 - 1.53 (1H, m), 1.68 - 1.78 (1H, m), 1.89 - 2.03 (2H, m), 2.08 - 2.18 (1H, m), 2.42 - 2.56 (1H, m), 3.42 (1H, ddd), 3.47 - 3.56 (1H, m), 3.68 - 3.77 (1H, m), 5.09 - 5.22 (2H, m), 7.31 - 7.42 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 565.
Intermedijer 33:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.80 (2H, t), 1.25 (12H, s), 1.27 -1.35 (2H, m), 1.38 (9H, s), 1.41 - 1.48 (2H, m), 1.49 - 1.52 (1H, m), 1.67 - 1.77 (1H, m), 1.88 - 1.96 (1H, m), 1.96 - 2.03 (1H, m), 2.09 - 2.18 (1H, m), 2.50 (1H, td), 3.42 (1H, ddd), 3.51 (1H, dq), 3.67 - 3.76 (1H, m), 5.10 - 5.22 (2H, m), 7.32 - 7.41 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 565.
Intermedijer 34: anti-4-amino-1-terc-butoksikarbonil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-2-karboksilna kiselina enantiomer 1
[0142] Pd/C (10% mas., 50 mg, 0,047 mmol) dodat je u rastvor anti-2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilata enantiomer 1 (intermedijer 32, 250 mg, 0,46 mmol) u EtOAc (3 ml). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika (balon; reakcioni balon vakuumiran i ponovo napunjen azotom x3) na sobnoj temperaturi tokom 20 h. Reakciona smeša je razblažena dodatkom MeOH (5 ml), filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 55% MeOH u DCM-u), što je dalo anti-4-amino-1-terc-butoksikarbonil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-2-karboksilnu kiselinu enantiomer 1 (intermedijer 34, 159 mg, prinos 82%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 0.64 (2H, td), 1.16 (12H, s), 1.18 -1.25 (2H, m), 1.25 - 1.30 (2H, m), 1.32 (9H, s), 1.34 - 1.46 (2H, m), 1.49 - 1.61 (1H, m), 1.84 - 1.99 (2H, m), 2.91 - 3.04 (1H, m), 3.27 (1H, br s), 3.37 - 3.49 (2H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 427.
Primer 10: Anti-4-amino-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina enantiomer 1
[0143] Trifluorsirćetna kiselina (0,58 ml, 7,5 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodata u rastvor anti-4-amino-1-terc-butoksikarbonil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-2-karboksilne kiseline enantiomera 1 (intermedijer 34,159 mg, 0,37 mmol) u DCM-u (2 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvoren u 1 M HCl (vod.) (3,0 ml, 3,0 mmol) i Et2O (3 ml). Dodata je fenilboronska kiselina (136 mg, 1,12 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je razblažena dodatkom Et2O (20 ml) i vode (5 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ispran sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (kolona PoraPak Rxn CX 20cc). Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 5% amonijak u MeOH (20 ml), što je dalo anti-4-amino-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu enantiomer 1 (primer 10, 84 mg, prinos 92%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 0.75 (2H, t), 1.18 - 1.29 (2H, m), 1.30 -1.42 (3H, m), 1.43 - 1.52 (1H, m), 1.55 - 1.65 (1H, m), 1.65 - 1.73 (1H, m), 1.96 - 2.03 (1H, m), 2.44 - 2.53 (1H, m), 2.95 (1H, td), 3.04 (1H, tt), 3.11 - 3.19 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 245.
Primer 11: anti-4-amino-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina enantiomer 2
[0144]
intermedijer intermedijer Prim r
Intermedijer 35: anti-4-amino-1-terc-butoksikarbonil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-2-karboksilna kiselina enantiomer 2
[0145] Pd/C (10% mas., 25 mg, 0,023 mmol) dodat je u rastvor anti-2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilata enantiomer 2 (intermedijer 33, 138 mg, 0,25 mmol) u smeši EtOAc/izopropanola (2:1, 3 ml). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika (balon; reakcioni balon vakuumiran i ponovo napunjen azotom x3) na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena dodatkom MeOH (5 ml), filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana do suva, što je dalo anti-4-amino-1-terc-butoksikarbonil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-2-karboksilnu kiselinu enantiomer 2 (intermedijer 35, 118 mg, prinos 109%) kao belu čvrstu supstancu i kao smešu rotamera. Sirova supstanca je neposredno preneta dalje bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (500 MHz, CD2Cl2) δ 0.61 - 0.80 (2H, m), 0.93 - 1.15 (2H, m), 1.18 - 1.24 (12H, m), 1.24 - 1.38 (3H, m), 1.42 (9H, br s), 1.47 - 1.67 (2H, m), 1.70 - 1.91 (1H, m), 1.97 - 2.15 (1H, m), 2.16 - 2.34 (1H, m), 2.44 (1H, br s), 3.20 -3.40 (1H, m), 3.55 (2H, br s), 8.35 (2H, br s); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 427.
Primer 11: anti-4-amino-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina enantiomer 2
[0146] Trifluorsirćetna kiselina (0,43 ml, 5,5 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodata u rastvor anti-4-amino-1-terc-butoksikarbonil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-2-karboksilne kiseline enantiomer 2 (intermedijer 35, 118 mg, 0,277 mmol) u DCM-u (2 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvoren u 1 M HCl (vod.) (2,0 ml, 2,0 mmol) i Et2O (2 ml). Dodata je fenilboronska kiselina (101 mg, 0,83 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Smeša je razblažena dodatkom Et2O (20 ml) i vode (5 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ispran sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (kolona PoraPak Rxn CX 20cc). Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 5% amonijak u MeOH (20 ml). Dobijena supstanca je dalje prečišćena reversno faznom hromatografijom (RediSep Rf Gold<®>C18, 0 do 95% acetonitrila u vodi), što je dalo anti-4-amino-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu enantiomer 2 (primer 11, 41 mg, prinos 61%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 0.70 (2H, t), 1.14 - 1.24 (2H, m), 1.24 - 1.37 (3H, m), 1.37 - 1.45 (1H, m), 1.51 - 1.59 (1H, m), 1.59 - 1.67 (1H, m), 1.91 - 1.98 (1H, m), 2.43 (1H, dt), 2.89 (1H, td), 2.98 (1H, tt), 3.07 - 3.13 (1H, m); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 245.
Primer 12: sin-4-amino-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina enantiomer 1
[0147]
intermedijer intermedijer intermedijer
Primer
Intermedijer 36: 2-benzil 1-(terc-butil) (2S,4R)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (enantiomer 1) i
Intermedijer 6: 2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (enantiomer 2)
[0148] Sin-2-benzil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 31, 2.0 g, 3,7 mmol) podvrgnut je hiralnoj SFC [(S,S)Whelk-O1 kolona, 4,6 mm x 100 mm, 5 µm, temperatura = 20 °C, mobilna faza = 20% izopropanol:CO2, UV detekcija na 220 nm, nanošenje = 25 mg/inj, konc. = 100 mg/ml u MeCN, protok = 70 ml/min, izlazni pritisak = 100 bar], što je dalo enantiomer 1 sin-2-benzil 1-(terc-butil) (2S,4R)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 36, 994 mg, prinos 49%, 98% ee) kao prvi eluirajući enantiomer kao bezbojnu gumu i enantiomer 2 sin-2-benzil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilat (intermedijer 6, 1,04 g, prinos 51%, 98% ee) kao drugi eluirajući enantiomer kao bezbojnu gumu. Apsolutna stereohemija enantiomera 2 je utvrđena pomoću SFC uz poređenje sa prethodno sintetisanim intermedijerom 6. Apsolutna stereohemija intermedijera 36 je analogno utvrđena.
Intermedijer 36:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.79 (2H, br t), 1.25 (12H, s), 1.29 -1.36 (1H, m), 1.38 (1H, br d), 1.41 (11H, s), 1.56 - 1.68 (1H, m), 1.85 - 1.94 (3H, m), 1.97 (1H, br d), 2.05 (1H, br dd), 2.94 - 3.07 (1H, m), 3.54 - 3.65 (1H, m), 4.03 (1H, t), 5.06 - 5.25 (2H, m), 7.30 - 7.39 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 565.
Intermedijer 6:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 0.79 (2H, br t), 1.25 (12H, s), 1.30 -1.36 (1H, m), 1.36 - 1.39 (1H, m), 1.41 (11H, s), 1.56 - 1.67 (1H, m), 1.85 - 1.94 (3H, m), 1.94 - 2.01 (1H, m), 2.05 (1H, br dd), 2.96 - 3.05 (1H, m), 3.54 - 3.64 (1H, m), 4.01 - 4.05 (1H, m), 5.06 - 5.23 (2H, m), 7.29 - 7.38 (5H, m); m/z: (ES<+>) [M+Na]<+>= 565.
Intermedijer 37: (2S,4R)-4-amino-1-(terc-butoksikarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0149] Pd/C (10% mas., 50 mg, 0,047 mmol) dodat je u rastvor sin-2-benzil 1-(terc-butil) (2S,4R)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dikarboksilata (intermedijer 36, 250 mg, 0,46 mmol) u EtOAc (3 ml). Suspenzija je mešana u atmosferi vodonika (balon; reakcioni balon vakuumiran i ponovo napunjen azotom x3) na sobnoj temperaturi tokom 17 h. Reakciona smeša je razblažena dodatkom MeOH (5 ml), filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (5 do 40% MeOH u DCM-u), što je dalo (2S,4R)-4-amino-1-(terc-butoksikarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (intermedijer 37, 149 mg, prinos 76%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (500MHz, CD2Cl2) δ 0.71 (2H, brt), 1.05 - 1.15 (1H, m), 1.19 (14H, s), 1.29 - 1.37 (2H, m), 1.40 (9H, s), 1.75 - 1.94 (1H, m), 1.95 - 2.20 (3H, m), 2.23 -2.48 (1H, m), 3.02 (1H, br s), 3.54 (1H, br s), 3.92 (1H, br s), 8.64 (3H, br s); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 427.
Primer 12: (2S,4R)-4-amino-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilna kiselina
[0150] Trifluorsirćetna kiselina (0,43 ml, 5,5 mmol) ukapavanjem je uz mešanje dodata u rastvor (2S,4R)-4-amino-1-(terc-butoksikarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)butil)piperidin-2-karboksilne kiseline (intermedijer 37, 146 mg, 0,342 mmol) u DCM-u (2 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon 2 h, rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je rastvoren u 1 M HCl (vod.) (3,0 ml, 3,0 mmol) i Et2O (3 ml). Dodata je fenilboronska kiselina (125 mg, 1,03 mmol) i bistri dvofazni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je razblažena dodatkom Et2O (20 ml) i vode (5 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ispran sa Et2O. Vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom (kolona PoraPak Rxn CX 20cc). Željeni proizvod je eluiran sa kolone koristeći 5% amonijak u MeOH (20 ml), što je dalo (2S,4R)-4-amino-2-(4-borobutil)piperidin-2-karboksilnu kiselinu (
[0151] primer 12, 63 mg, prinos 75%).<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 0.70 - 0.82 (2H, m), 1.10 - 1.31 (2H, m), 1.35 - 1.44 (2H, m), 1.45 - 1.54 (1H, m), 1.62 (1H, dd), 1.76 (1H, ddd), 1.84 -1.94 (1H, m), 2.00 - 2.08 (1H, m), 2.18 (1H, ddd), 3.07 (1H, td), 3.22 (1H, dt), 3.33 (1H, tt); m/z: (ES<+>) [M+H]<+>= 245.
Primer 13: Biološka aktivnost primera 1 do 12
[0152] Inhibitorno dejstvo primera 1 do 12 na aktivnost humane arginaze 1 i arginaze 2 kvantifikovano je merenjem nastanka tiolne grupe od tioarginina koristeći rekombinantnu arginazu 1 ili arginazu 2 dobijenu od E. coli. Tiolna grupa je detektovana pomoću Elmanovog reagensa, 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzojeve kiseline) (DTNB). DTNB reaguje sa tiolnom grupom dajući mešoviti disulfid i 2-nitro-5-tiobenzojevu kiselinu (TNB) koja se kvantifikuje preko apsorbance anjona (TNB<2->) na 412 nm.
[0153] Testovi su vršeni u prozirnim pločama sa 384 bunarčića (Greiner kat. br.: 781101). Različite koncentracije primera 1 do 12 u 300 nl DMSO dozirane su u test ploče koristeći Echo akustični dozator, nakon čega je smesta usledilo zaptivanje i centrifugiranje ploča.
Dve prethodne smeše su pripremljene od reagenasa koji su odmrznuti neposredno pre dodavanja na test ploče. Prethodna smeša jedan je sadržala humanu arginazu 1 ili humanu arginazu 2, sa finalnom koncentracijom od 5 nM i 0,5 mM DTNB u test puferu, 45 mM HEPES pH 7,5, brij 35, 0,045% (m/V) i 100 µM) MnCl2. Prethodna smeša dva je sadržala sveže odmrznuti 0,5 mM tioarginin u test puferu. Petnaest mikrolitara prethodne smeše jedan je dozirano na test ploče koje sadrže primere 1 do 12, centrifugirano i inkubirano tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi pre dodavanja petnaest mikrolitara prethodne smeše dva.
[0154] Test ploče su centrifugirane pre očitavanja apsorbance na 412 nm na multimodalnom čitaču ploča Pherastar kako bi se sakupili podaci u terminu 0 (T0). Ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 60 min pre ponovnog očitavanja za prikupljanje podataka u terminu 1 (T1). Podaci su dobijeni oduzimanjem A412 signala koji je izmeren u T0 (termin 0) od signala izmerenog u T1 (termin 1). Podaci su transformisani u % dejstva koristeći jednačinu:
Jedinjenje % efekta
gde X predstavlja normalizovanu vrednost za jedinjenje na osnovu min (vehikulum) i maks (referentno jedinjenje) kontrole inhibicije.
[0155] Koncentracija primera 1 do 12 koja je inhibirala aktivnost za 50% (tj. IC50) izračunata je postavljanjem % dejstva u odnosu na koncentraciju testiranog jedinjenja i uklapanjem podataka koristeći algoritam Genedata Screener Smart fit. Rezultati ovih testova mogu se naći u tabeli 2:
Tabela 2
Primer IC50 enzima humane arginaze 1 IC50 enzima humane arginaze 2
Primer 14: Studije bioraspoloživosti
[0156] Primeri 2, 3 i 4 su oblici proleka primera 1. Sledeća farmakokinetička studija je obavljena da se pokaže bioraspoloživost primera 1 iz primera 2. Primer 2 je formulisan u 0,9% m/V slanom rastvoru pH 4 (podešen sa 1 M HCl) za i.v. doziranje. Formulacija je dozirana sa 2 mg/kg putem femoralnog katetera na dva mužjaka pacova (170 - 250 g).
Serijski uzorci krvi su uzimani putem katetera u jugularnoj veni 0,033, 0,083, 0,167, 0,5, 1, 2, 4, 8 i 24 h nakon doze. Za p.o. doziranje, primer 2 je formulisan u dejonizovanoj vodi pH 4 (podešen sa 1 M HCl) i doziran sa 5 mg/kg putem oralne gavaže na dva mužjaka pacova (170-250 g). Serijski uzorci krvi su uzimani putem katetera u jugularnoj veni 0,25, 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 8 i 24 h nakon doze. Uzorci plazme su dobijeni od krvi koristeći sporo centrifugiranje. Jedan set standarda za kalibraciju koji sadrže primer 1 i primer 2 pripremljen je dopunjavanjem prazne plazme. Uzorci i standardi su ekstrahovani putem taloženja sa dve zapremine acetonitrila, nakon čega je usledilo centrifugiranje. Dobijeni rezultati su korišćeni da se odredi Cl (ml/min/kg), Vdss (l/kg), Cmax (µM), AUC (µM h), tmax (h) i %F za primer 1 i primer 2. Apsolutna bioraspoloživost je određena poređenjem AUC primera 1 normalizovane na p.o. dozu kada se dozira kao primer 2, u odnosu nas AUC primera 1 normalizovane na i.v. kada se dozira kao primer 1. Gde je to bilo prikladno, izmerene doze, a ne nominalne, korišćene su za izračunavanje bioraspoloživosti. Na analogan način, ista procedura je ponovljena za primere 3 i 4. Rezultati su prikazani u tabelama 3 do 5. Ovi rezultati pokazuju da bioraspoloživost može da se poveća inkorporacijom određenih aminokiselinskih ostataka kao prolekova.
Tabela 3
# uočena vrednost kada se dozira kao prolek * uočena vrednost kada se dozira kao aktivni deo. NV vrednost koja ne može da se prijavi
Tabela 4
Primer 3 Primer 1 # uočena vrednost kada se dozira kao prolek * uočena vrednost kada se dozira kao aktivni deo. NV vrednost koja ne može da se prijavi
Tabela 5
# uočena vrednost kada se dozira kao prolek * uočena vrednost kada se dozira kao aktivni deo. NV vrednost koja ne može da se prijavi

Claims (14)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (Ib) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
    pri čemu R<1>je -H ili -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; i R<1a>je izabran od -H, -(C1-C6) alkila i CH2OR<1c>; R<1b>je -H; ili, alternativno, R<1a>i R<1b>, zajedno sa atomom za koji su vezani, grade 5-člani heterociklični prsten; i R<1c>je H ili -CH3.
  2. 2. Jedinjenje formule (Ib) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u skladu sa zahtevom 1, koje je jedinjenje formule (II) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
    pri čemu R<2>je -H ili -C(O)CH(R<2a>)NH2; i R<2a>je izabran od -H ili -(C1-C6) alkila.
  3. 3. Jedinjenje formule (Ib) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u skladu sa zahtevom 1, koje je jedinjenje formule (III) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
    pri čemu R<3>je izabran od -H ili -(C1-C4) alkila.
  4. 4. Jedinjenje formule (Ib) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u skladu sa zahtevom 1, koje je jedinjenje formule (IVb) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so: e (Vc) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so: pri čemu R<1>je -H ili -C(O)CH(R<1a>)NHR<1b>; i R<1a>je izabran od -H, -(C1-C4) alkila i CH2OR<1c>; R<1b>je -H; ili, alternativno, R<1a>i R<1b>, zajedno sa atomom za koji su vezani, grade 5-člani heterociklični prsten; i R<1c>je H ili -CH3; ili jedinjenje formule (VI) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
  5. pri čemu R<2>je -H ili -C(O)CH(R<2a>)NH2; i R<2a>je izabran od -H ili -(C1-C6) alkila.
  6. 6. Jedinjenje formule (Vc) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u skladu sa zahtevom 5.
  7. 7. Jedinjenje formule (VI) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u skladu sa zahtevom 5.
  8. 8. Jedinjenje formule (Vc) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u skladu sa zahtevom 5, koje je jedinjenje formule (VII) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
    pri čemu R<3>je izabran od -H ili -(C1-C4) alkila.
  9. 9. Jedinjenje formule (Vc) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u skladu sa zahtevom 5, koje je jedinjenje formule (VIIIb) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
  10. 10. Jedinjenje formule (Ib) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u skladu sa zahtevom 1, koje je izabrano od
    ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli.
  11. 11. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1 do 10, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
  12. 12. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1 do 10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u vidu leka.
  13. 13. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1 do 10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera.
  14. 14. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1 do 10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju respiratorne inflamatorne bolesti. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Kneginje Ljubice 5, 11000 Beograd 70
RS20230898A 2019-02-08 2020-02-07 Inhibitori arginaze i postupci za njihovo korišćenje RS64781B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962802765P 2019-02-08 2019-02-08
EP20709706.4A EP3921033B1 (en) 2019-02-08 2020-02-07 Arginase inhibitors and methods of use thereof
PCT/IB2020/050982 WO2020161675A1 (en) 2019-02-08 2020-02-07 Arginase inhibitors and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64781B1 true RS64781B1 (sr) 2023-11-30

Family

ID=69770954

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230898A RS64781B1 (sr) 2019-02-08 2020-02-07 Inhibitori arginaze i postupci za njihovo korišćenje

Country Status (33)

Country Link
US (2) US12435097B2 (sr)
EP (1) EP3921033B1 (sr)
JP (1) JP7526734B2 (sr)
KR (1) KR102759971B1 (sr)
CN (1) CN113395996B (sr)
AU (1) AU2020218651B2 (sr)
BR (1) BR112021015581A2 (sr)
CA (1) CA3127755A1 (sr)
CL (1) CL2021002056A1 (sr)
CO (1) CO2021011039A2 (sr)
CR (1) CR20210463A (sr)
DK (1) DK3921033T3 (sr)
DO (2) DOP2021000166A (sr)
EA (1) EA202192114A1 (sr)
ES (1) ES2960034T3 (sr)
FI (1) FI3921033T3 (sr)
HR (1) HRP20231092T1 (sr)
HU (1) HUE062968T2 (sr)
IL (1) IL285108B2 (sr)
LT (1) LT3921033T (sr)
MA (1) MA56324B1 (sr)
MX (1) MX2021009499A (sr)
MY (1) MY206577A (sr)
PE (1) PE20220280A1 (sr)
PH (1) PH12021551902A1 (sr)
PL (1) PL3921033T3 (sr)
PT (1) PT3921033T (sr)
RS (1) RS64781B1 (sr)
SG (1) SG11202108503PA (sr)
SI (1) SI3921033T1 (sr)
SM (1) SMT202300337T1 (sr)
WO (1) WO2020161675A1 (sr)
ZA (1) ZA202105833B (sr)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7317841B2 (ja) * 2018-02-17 2023-07-31 アストラゼネカ・アクチエボラーグ アルギナーゼインヒビタ及びその使用方法
TW202228720A (zh) 2020-12-22 2022-08-01 波蘭商昂科艾倫迪治療法股份公司 精胺酸酶抑制劑及其使用方法

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE9901572D0 (sv) * 1999-05-03 1999-05-03 Astra Ab New compounds
SE0300907D0 (sv) * 2003-03-31 2003-03-31 Astrazeneca Ab Novel compounds
RS58965B1 (sr) 2009-01-26 2019-08-30 Univ Pennsylvania Inhibitori arginaze i postupci upotrebe
BR112012027034B1 (pt) 2010-04-22 2020-10-13 Mars, Incorporated compostos inibidores de arginase, composição farmacêutica compreendendo o referido composto, método in vitro para inibição de arginase i e ii e uso do referido composto
HRP20160305T1 (hr) * 2010-10-26 2016-07-01 Mars, Incorporated Borati kao inhibitori arginaze
CN104244932B (zh) 2011-10-19 2017-02-22 马尔斯公司 精氨酸酶抑制剂和其治疗应用
BR112015014178A2 (pt) 2012-12-17 2017-07-11 Parion Sciences Inc compostos de 3,5-diamino-6-cloro-n-(n-(4-fenilbutil)carbamimidoil) pirazina-2- carboxamida
PL410665A1 (pl) * 2014-12-29 2016-07-04 Oncoarendi Therapeutics Spółka Z Ograniczoną Odpowiedzialnością Inhibitory arginazy oraz ich zastosowania terapeutyczne
SG10202110144TA (en) * 2015-06-23 2021-10-28 Calithera Biosciences Inc Compositions and methods for inhibiting arginase activity
WO2017175185A1 (en) * 2016-04-08 2017-10-12 Novartis Ag Heteroaryl butanoic acid derivatives as lta4h inhibitors
HRP20210848T1 (hr) * 2016-12-22 2021-07-09 Calithera Biosciences, Inc. Sastavi i postupci za sprječavanje aktivnosti arginaze
CN108794517B (zh) * 2017-04-27 2021-03-30 南京谷睿生物科技有限公司 一种精氨酸酶抑制剂及其制备方法与用途
JP7317841B2 (ja) * 2018-02-17 2023-07-31 アストラゼネカ・アクチエボラーグ アルギナーゼインヒビタ及びその使用方法
EP3765006A4 (en) 2018-03-13 2022-02-23 Merck Sharp & Dohme Corp. ARGINASE INHIBITORS AND METHODS OF USE
CN111770756B (zh) 2018-04-27 2023-03-31 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 非天然氨基酸类衍生物、包含其的药物组合物及其制备方法和用途
MX2021002042A (es) 2018-08-22 2021-04-28 Astrazeneca Ab Inhibidores de arginasa y sus metodos de uso.

Also Published As

Publication number Publication date
EP3921033B1 (en) 2023-07-26
CN113395996A (zh) 2021-09-14
IL285108B2 (en) 2024-10-01
AU2020218651B2 (en) 2023-01-12
SI3921033T1 (sl) 2023-11-30
PE20220280A1 (es) 2022-02-25
CL2021002056A1 (es) 2022-03-04
SG11202108503PA (en) 2021-09-29
DK3921033T3 (da) 2023-10-16
DOP2024000181A (es) 2024-10-15
IL285108B1 (en) 2024-06-01
JP7526734B2 (ja) 2024-08-01
CN113395996B (zh) 2024-05-28
HUE062968T2 (hu) 2023-12-28
CA3127755A1 (en) 2020-08-13
HRP20231092T1 (hr) 2023-12-22
FI3921033T3 (fi) 2023-09-15
ZA202105833B (en) 2025-03-26
CR20210463A (es) 2021-10-15
SMT202300337T1 (it) 2023-11-13
US20220106335A1 (en) 2022-04-07
PH12021551902A1 (en) 2022-08-01
MY206577A (en) 2024-12-24
ES2960034T3 (es) 2024-02-29
AU2020218651A1 (en) 2021-09-30
US12435097B2 (en) 2025-10-07
KR20210126044A (ko) 2021-10-19
EA202192114A1 (ru) 2021-12-01
WO2020161675A1 (en) 2020-08-13
MX2021009499A (es) 2021-09-08
PT3921033T (pt) 2023-10-11
BR112021015581A2 (pt) 2021-10-05
JP2022521474A (ja) 2022-04-08
MA56324B1 (fr) 2023-10-31
LT3921033T (lt) 2023-09-25
US20250282800A1 (en) 2025-09-11
KR102759971B1 (ko) 2025-01-23
PL3921033T3 (pl) 2024-01-15
IL285108A (en) 2021-09-30
CO2021011039A2 (es) 2021-09-09
DOP2021000166A (es) 2021-09-30
EP3921033A1 (en) 2021-12-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7699171B2 (ja) アルギナーゼインヒビタ及びその使用方法
US20250282800A1 (en) Arginase inhibitors and methods of use thereof
EA044999B1 (ru) Ингибиторы аргиназы и способы их применения
HK40065571B (en) Arginase inhibitors and methods of use thereof
HK40065571A (en) Arginase inhibitors and methods of use thereof
AU2020319132B2 (en) Arginase inhibitors and methods of use thereof
HK40062935A (en) Arginase inhibitors and methods of use thereof
EA042598B1 (ru) Ингибиторы аргиназы и способы их применения