RS64915B1 - Novi derivati triterpena kao inhibitori hiv-a - Google Patents

Novi derivati triterpena kao inhibitori hiv-a

Info

Publication number
RS64915B1
RS64915B1 RS20231163A RSP20231163A RS64915B1 RS 64915 B1 RS64915 B1 RS 64915B1 RS 20231163 A RS20231163 A RS 20231163A RS P20231163 A RSP20231163 A RS P20231163A RS 64915 B1 RS64915 B1 RS 64915B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mmol
icosahydro
cyclopenta
reaction mixture
amino
Prior art date
Application number
RS20231163A
Other languages
English (en)
Inventor
Parthasaradhi Reddy Bandi
Rathnakar Reddy Kura
Panduranga Reddy Adulla
Bhaskar Reddy Kasireddy
Original Assignee
Hetero Labs Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hetero Labs Ltd filed Critical Hetero Labs Ltd
Publication of RS64915B1 publication Critical patent/RS64915B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/12—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms
    • C07D295/125—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms with the ring nitrogen atoms and the substituent nitrogen atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings
    • C07D295/13—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms with the ring nitrogen atoms and the substituent nitrogen atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings to an acyclic saturated chain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
    • C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/22—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with hetero atoms directly attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/26—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
    • C07F7/02—Silicon compounds
    • C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
    • C07F7/18—Compounds having one or more C—Si linkages as well as one or more C—O—Si linkages
    • C07F7/1804—Compounds having Si-O-C linkages

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Description

Opis
Ova prijava ima korist od privremene indijske prijave br.201941005217 podnete 11. februara 2019.
Oblast pronalaska
Ovaj pronalazak se odnosi na nove derivate triterpena i srodna jedinjenja, sastave korisne za terapeutski tretman virusnih bolesti i posebno bolesti posredovanih HIV-om.
Osnovne informacije o pronalasku
Virus humane imunodeficijencije (HIV) je sada utvrđen kao uzročnik sindroma stečene imunodeficijencije (AIDS) više od 20 godina (Science 1983, 220, 868-871; N.Eng.J.Med.1984, 311, 1292-1297). SIDA se karakteriše uništavanjem imunog sistema, posebno CD4+T ćelija. HIV je retrovirus, a životni ciklus HIV-a obuhvata nekoliko ključnih koraka, počevši od vezivanja virusa za membranu ćelije domaćina i završavajući oslobađanjem virona potomaka iz ćelije.
Utvrđeno je da prirodno jedinjenje betulinska kiselina, izolovano iz Sizigium clavifolium i nekoliko drugih biljnih vrsta, poseduje anti-HIV sposobnost. Nekoliko istraživačkih grupa je preduzelo hemijske modifikacije u pokušaju da identifikuju moćne anti-HIV agense pravljenjem polusintetičkih analoga betulinske kiseline, što je dovelo do otkrića bevirimata kao jedinjenja sa novim mehanizmom delovanja (J. Nat. Prod.1994, 57(2): 243-7; J. Med. Chem.1996, 39(5), 1016).
Dalja istraživanja su pokazala da bevirimat deluje tako što ometa obradu Gag (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2003, 100(23):13555-60; Antimicrob. Agents. Chemother. 2001, 45(4), 1225-30; J. Virol.2004, 78(2): 922-9; J. Biol. Chem.2005, 280(51):42149-55; J. Virol.2006, 80(12): 5716-22) i da bude prvi u klasi inhibitora sazrevanja sa snažnom aktivnošću protiv HIV-1. Bevirimat je prošao do faze 2 kliničkih ispitivanja, u klinici uprkos optimalnim koncentracijama u plazmi, nemaju svi pacijenti kojima je davan bevirimat snažno smanjenje virusnog opterećenja.
Prijavljeno je da su pacijenti koji nisu reagovali imali češće bazne polimorfizme Gag u blizini mesta cepanja SP-1 kapsida od onih koji su reagovali. (HIV gag polimorfizam određuje odgovor na tretman na bevirimat. KSVII međunarodna radionica za otpornost na HIV lekove 10-14. jun 2008, Sidžes, Španija).
Ohrabreni ovim razvojem, medicinski tehničari su počeli intenzivno da istražuju derivate betulinske kiseline i srodna jedinjenja za njihove terapeutske aktivnosti. Na primer, WO2017/149518 je otkrio C-3 novi triterpen sa derivatima C-17 amina kao inhibitore HIV-a; WO2014/105926 je otkrio nove derivate prolina betulinske kiseline kao inhibitore HIV-a; WO2014/130810 opisuje pripremu C3 alkil i alkenil modifikovanih derivata betulinske kiseline korisnih u lečenju HIV-a;
WO2014/123889 opisuje pripremu derivata triterpenoida za upotrebu kao inhibitora sazrevanja HIV-a; WO2013/160810 je otkrio nove derivate betulinske kiseline kao inhibitore HIV-a; WO2013/169578 opisuje C-17 biciklične amine triterpenoida sa inhibitornom aktivnošću sazrevanja HIV-a i njihov preparat; WO 2013/123019 opisuje C-3 cikloalkenil triterpenoide sa inhibitornom aktivnošću sazrevanja HIV-a;
WO2013/043778 opisuje nove derivate betulinske kiseline sa antivirusnom aktivnošću; WO2013/035943 opisuje betulinsku kiselinu i njene derivate koji imaju aktivnost protiv starenja; WO2012/106190 opisuje pripremu C17 i C3 modifikovanih triterpenoida sa inhibitornom aktivnošću sazrevanja HIV-a; CN102399254 opisuje nove pentaciklične derivate triterpenoida, njihov postupak pripreme i primenu za prevenciju i lečenje dijabetesa, kardiovaskularnih bolesti, cerebrovaskularnih bolesti i tumora; WO2011/007230 opisuje pripremu derivata triterpena tipa lupeol kao antivirusnih agenasa; WO2010/032123 opisuje pripremu triterpenoidnih jedinjenja za farmaceutsku upotrebu; Journal of Medicinal Chemistri (2010), 53(1), 178-190 opisuje proučavanje odnosa strukture i aktivnosti betulinske kiseline, novog i selektivnog TGR5 agonista, i njegovih sintetičkih derivata: potencijalni uticaj na dijabetes;
WO 2009/100532 opisuje pripremu derivata 17β-lupana za lečenje HIV infekcije; CN 101367861 opisuje postupak pripreme i primenu 2-hidroksi-3-deoksi-pentacikličnih jedinjenja i derivata triterpena; WO2008/138200 opisuje pripremu derivata lupana kao antagonista NMDA i MC receptora koji pokazuju neuroprotektivne aktivnosti i aktivnosti koje poboljšavaju pamćenje; WO2008/127364 opisuje pripremu derivata betulinske kiseline za upotrebu u antivirusnim i farmaceutskim sastavima protiv raka.
Neke dodatne reference otkrivaju jedinjenja srodna betulinskoj kiselini. Na primer, WO2006/053255 opisuje pripremu derivata betulina za upotrebu u farmaceutskim sastavima koje inhibiraju prenošenje virusne infekcije;
WO2004/089357 opisuje formulaciju triterpena i eteričnog ulja protiv gljivica;
Bioorganic & Medicinal Chemistri Letters (2003), 13(20), 3549-3552 opisuje lupane triterpene i derivate sa antivirusnom aktivnošću; Russian Journal of Bioorganic Chemistri (2003), 29(6), 594-600 opisuje sintezu i antivirusnu aktivnost ureida i karbamata betulinske kiseline i njenih derivata; Journal of Medicinal Chemistri (1996), 39(5), 1056-68 opisuje derivate betulinske kiseline: novu klasu specifičnih inhibitora virusa humane imunodeficijencije tipa 1 sa novim načinom delovanja; Oxidation Communications (1987), 10(3-4), 305-12 opisuje oksidativne dekarboksilacije. II. oksidativna dekarboksilacija acetil betulinske kiseline.
Imajući u vidu činjenicu o nivou epidemije AIDS-a širom sveta, postoji jaka stalna potreba za novim efikasnim lekovima za lečenje pacijenata inficiranih HIV-om, bolesnih stanja i/ili poremećaja posredovanih HIV-om otkrivanjem novih jedinjenja sa novim strukturama i/ ili mehanizam(a) delovanja.
Sažetak pronalaska
Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I)
naznačeno time što je
R1 izabran između
Ili
R2 izabran između C1-C6 alkila, opciono supstituisanog C2-C6 alkenila ili opciono supstituisanog C3-C8 cikloalkila; naznačeno time što je opcioni supstituent C1-C6 alkil;
R3 vodonik;
R4 izabran između opciono supstituisanog C1-C6 alkila ili -C(O)ORa; naznačeno time što je C1-6 alkil etil i opcioni supstituent je izabran između halo, hidroksi, alkoksi ili -OC(O)CH2 alkoksi;
Prsten
Ra vodonik ili C1-C6 alkil;
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
Prema jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), naznačeno time što je R1
Prema jednom drugom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje formule (I), naznačeno time što je R1
U skladu sa još jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (I), naznačeno time što je R2 izopropilen.
U skladu sa još jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (I), naznačeno time što je R2 metilciklopropil.
U skladu sa još jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (I), naznačeno time što je R4 -C(O)OH, hidroksietil, fluoroetil,
U skladu sa još jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (I), naznačeno time što je prsten
U skladu sa još jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (I), naznačeno time što je prsten
Shodno tome, drugi aspekt predmetnog pronalaska obezbeđuje
jedinjenje formule (IA):
6
naznačeno time što su
R2, R3, R4 i prsten
isti kao što je definisano u formuli (I); ili
njihova farmaceutski prihvatljiva so.
U skladu sa jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (IA), naznačeno time što je R2 izopropilen.
U skladu sa jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (IA), naznačeno time što je R2 metilciklopropil.
U skladu sa još jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (IA), naznačeno time što je R4 -C(O)OH, hidroksietil, fluoroetil,
U skladu sa još jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (IA), naznačeno time što je prsten
U skladu sa još jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (IA), naznačeno time što je prsten
Shodno tome, još jedan drugi aspekt predmetnog pronalaska obezbeđuje jedinjenje formule (IB):
naznačeno time što su
R2, R3 i R4 isti kao što je definisano u formuli (I); ili
njegova farmaceutski prihvatljiva so.
U skladu sa jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (IB), naznačeno time što je R2 izopropilen.
U skladu sa jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (IB), naznačeno time što je R2 metilciklopropil.
U skladu sa još jednim otelotvorenjem obezbeđeno je jedinjenje formule (IB), naznačeno time što je R4 -C(O)OH, hidroksietil, fluoroetil,
Ispod su reprezentativna jedinjenja, koja su samo ilustrativna po prirodi i nisu namenjena da ograniče obim pronalaska (Nomenklatura je generisana iz ChemBioDrav Ultra 13.0 verzije):
(1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-))-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina,
(1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-fluorobutil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]krisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina,
(1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR) )-3a-(((2S,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina,
(1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR),9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-hidroksi-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina,
(1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1, 1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5b,11a,8,8,1H-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1R-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina,
(3S,1R)-3-(((3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR,3a)-5a-(((R))-2-karboksi-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5b,11a,8,8,1H-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1R-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina,
(3S,1R)-3-(((3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR,3a) -2R-(((3R,5a)-2-(1, 1-dioksidotiomorfolino)-3-(2-(2-metoksietoksi)acetoksi)butil)amino)5b,11a,8,8,1H-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1R-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina,
(3S,1R)-3-((((3aS),5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR,3a)-12R-(((13R,5a)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5b,11a,8,8,1H-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1R-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina,
(3S,1R)-3-(((3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR,3a)-2R-((3R, 5a)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-(2-(2-metoksietoksi)acetoksi)butil)amino)-5b,11a,8,8,1H-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1R-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina,
4-(((3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR,3a)-2R-(((3R,5a)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5b,11a,8,8,1H-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-1R-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)-2,2-dimetil-4-oksobutanska kiselina
(3S,1R)-3-((((3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR,3a)-15R-(((16R,5a)-16-(1,1-dioksidotiomorfolino)-15-metil-13-okso-2,5,8,11,14-pentaoksaheptadekan-17-il)amino)-5b,11a,8,8,1H-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1R-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina i
(3S,1R)-3-((((3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR),11bR,13aR,13bR,3a)-12R-(((13R,5a)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutski sastav koji uključuje najmanje jedno jedinjenje kako je ovde opisano i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijent (kao što je farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač). Konkretno, farmaceutski sastav sadrži terapeutski efikasnu količinu najmanje jednog jedinjenja opisanog ovde. Jedinjenje(a) prisutno u sastavu može biti povezano sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom (kao što je nosač ili razblaživač) ili može biti razblaženo nosačem, ili zatvoreno u nosač koji može biti u obliku kapsule, kesice, ili drugi kontejner.
Jedinjenja i farmaceutski sastavi opisani ovde su korisne u lečenju bolesti, stanja i/ili poremećaja posredovanih virusnim infekcijama.
Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenja pronalaska za upotrebu u postupku lečenja bolesti, stanja i/ili poremećaja posredovanih virusnim infekcijama kod subjekta kome je to potrebno davanjem jednog ili više jedinjenja opisanih ovde u terapeutski efikasnoj količini za lečenje te infekcije, posebno u obliku farmaceutskog sastava.
Ovde su takođe obezbeđeni procesi za dobijanje jedinjenja opisanih ovde.
Pronalazak obezbeđuje jedinjenja pronalaska za upotrebu u postupku za prevenciju; ublažavanje ili lečenje bolesti, poremećaja ili sindroma posredovanih HIV-om kod subjekta kome je to potrebno, uključujući davanje subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja pronalaska. Pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenja pronalaska za upotrebu u postupku, gde je bolest, poremećaj ili sindrom posredovan HIV-om kao SIDA, kompleks povezan sa AIDS-om, ili sindrom koji karakterišu simptomi kao što su uporna generalizovana limfadenopatija, groznica i gubitak težine, ili retrovirusna infekcija genetski povezana sa AIDS-om.
Anti-HIV inhibitorni potencijal jedinjenja iz ovog pronalaska može se demonstrirati bilo kojom jednom ili više metodologija poznatih u struci, kao što je korišćenjem testova opisanih u Mossman T, decembar 1983, Journal of imunological methods, 65 (1- 2), 55-63 i SPC Cole, cancer chemotherapy and Pharmacology, 1986, 17, 259-263.
Detaljan opis pronalaska
Predmetni pronalazak obezbeđuje nove derivate triterpena i srodna jedinjenja, koja se mogu koristiti kao antivirusna posebno kao anti-HIV jedinjenja i procese za sintezu ovih jedinjenja i njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačima, ekscipijensima ili razblaživačima, koji se mogu koristiti za lečenje bolesti, stanja i/ili poremećaja posredovanih virusnim infekcijama.
Sledeće definicije se primenjuju na termine koji se ovde koriste:
Termin „alkil“ se odnosi na ravni ili razgranati ugljovodonični lanac radikala koji se sastoji samo od atoma ugljenika i vodonika, koji ne sadrži nezasićenje, ima od jednog do osam atoma ugljenika, i koji je vezan za ostatak molekula jednom veza, npr. metil, etil, n-propil, 1-metiletil (izopropil), nbutil, n-pentil i 1,1-dimetiletil (t-butil).
Termin „alkenil“ se odnosi na ugljovodonični lanac koji može biti ravan ili razgranati lanac, koji sadrži naznačeni broj atoma ugljenika koji imaju najmanje jedan -C-, na primer, C2-C6 alkenil grupa može imaju od 2 do 6 (uključivo) -C-atoma u sebi. Primeri C2-C6 alkenil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na etilen, prop-l-en, but-l-en, but-2-en, pent-l-en, pent-2-en, heks-l-en, heks-2-en i slično.
Termin „alkoksi“ se odnosi na ravan ili razgranati ugljovodonični lanac sa kiseonikovim radikalom koji se sastoji od atoma ugljenika i vodonika, koji sadrži zasićenje ili nezasićenje, koji ima od jednog do osam atoma ugljenika, i koji je vezan preko atoma kiseonika za ostatak molekula jednostrukom vezom. Jedan od atoma vodonika u alkoksi grupi može biti dalje supstituisan sa jednom ili više alkoksi grupa da bi se dodatno povećala dužina alkoksi lanca, npr. metiloksi, etiloksi, izopropoksi, n-propiloksi, t-butiloksi, 1-metiletiloksi (izopropiloksi), nbutiloksi, n-pentiloksi, 1,1-dimetiletiloksi (t-butiloksi),
,
Termin „cikloalkil“ označava nearomatični mono ili multiciklični sistem prstena od 3 do oko 12 atoma ugljenika, kao što su, ali nisu ograničeni na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil. Primeri multicikličnih cikloalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, perhidronaftil, adamantil i norbornil grupe, premoštene ciklične grupe i spirobiciklične grupe, npr. spiro (4,4) ne-2-il.
Termini „halogen“ ili „halo“ obuhvataju fluor, hlor, brom ili jod.
Termin „hidroksi“ se odnosi na -OH.
Termin „opciono supstituisan“ se odnosi na zamenu jednog ili više vodoničnih radikala u datoj strukturi sa radikalom određenog supstituenta uključujući, ali bez ograničenja na: hidroksi, halo, karboksil, cijano (CN), nitro, okso (=O), tio (=S), alkil, metil sulfonil, haloalkil, alkoksi, alkenil, aril, aralkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, amino, -C(O)O-alkil, heterociklil, heteroaril, heterociklilalkil, heteroaril alkiltio, ariltio, ariloksi, amino karbonil, alkoksikarbonil, alkilamino, arilamino, acil, karboksilna kiselina, sulfonska kiselina, sulfonil, fosfonska kiselina i alifatična kiselina. Podrazumeva se da supstituent može biti dalje supstituisan.
Termin „lečiti“ ili „lečenje“ stanja, bolesti, poremećaja ili uslova uključuje:
(1) sprečavanje ili odlaganje pojave kliničkih simptoma stanja, bolesti, poremećaja ili uslova koji se razvijaju kod subjekta koji može biti zahvaćen ili predisponiran za to stanje, bolest, poremećaj ili uslov, ali još ne doživljava ili ne pokazuje kliničke ili subkliničke simptomi stanja, bolesti, poremećaja ili uslova;
(2) inhibiranje stanja, bolesti, poremećaja ili uslova, tj. zaustavljanje ili smanjenje razvoja stanja, bolesti, poremećaja ili uslova ili najmanje jednog njihovog kliničkog ili subkliničkog simptoma; ili
(3) ublažavanje stanja, bolesti, poremećaja ili uslova, tj. izazivanje regresije stanja, bolesti, poremećaja ili uslova ili bar jednog od njegovih kliničkih ili subkliničkih simptoma.
Korist za subjekta koji se leči je ili statistički značajna ili je barem primetna za subjekta ili lekara.
Termin „subjekat“ uključuje sisare (posebno ljude) i druge životinje, kao što su domaće životinje (npr. kućni ljubimci uključujući mačke i pse) i nedomaće životinje (kao što su divlje životinje).
„Terapeutski efikasna količina“ označava količinu jedinjenja koja je, kada se daje subjektu za lečenje stanja, bolesti, poremećaja ili uslova, dovoljna da izvrši takav tretman. „Terapeutski efikasna količina“ će varirati u zavisnosti od jedinjenja, stanja, bolesti, poremećaja ili uslova i njegove starosti, težine, fizičkog stanja i odziva subjekta koji prima tretman.
Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da formiraju soli. Neograničavajući primeri farmaceutski prihvatljivih soli koje čine deo ovog pronalaska obuhvataju soli izvedene iz neorganskih baza, soli organskih baza, soli hiralnih baza, soli prirodnih amino kiselina i soli neprirodnih amino kiselina.
Određena jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu da postoje u stereoizomernim oblicima (npr. dijastereomeri, enantiomeri, racemati i njihove kombinacije). U meri u kojoj predmetna oblast uči sintezu ili razdvajanje određenih stereoizomera, različiti stereoizomerni oblici predmetnog pronalaska mogu biti razdvojeni jedan od drugog postupcima poznatim u predmetnoj oblasti, ili se dati izomer može dobiti stereospecifičnom ili asimetričnom sintezom. Tautomerni oblici i smeše ovde opisanih jedinjenja su takođe razmatrane.
Farmaceutski sastavi
Farmaceutski sastavi obezbeđeni u predmetnom pronalasku uključuju najmanje jedno jedinjenje opisano ovde i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijent (kao što je farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač). Konkretno, razmatrani farmaceutski sastavi uključuju ovde opisana jedinjenja u količini dovoljnoj za lečenje virusne infekcije kod subjekta.
Subjekti koji se razmatraju uključuju, na primer, živu ćeliju i sisara, uključujući čoveka. Jedinjenje iz predmetnog pronalaska može biti povezano sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom (kao što je nosač ili razblaživač) ili biti razblaženo nosačem, ili zatvoreno u nosač koji može biti u obliku kapsule, kesice ili drugog kontejnera.
Primeri pogodnih nosača uključuju, ali nisu ograničeni na, vodu, rastvore soli, alkohole, polietilen glikole, ulje od kikirikija, maslinovo ulje, želatin, laktozu, terra alba, saharozu, dekstrin, magnezijum karbonat, šećer, amilozu, magnezijum stearat, talk, želatin, agar, pektin, bagrem, stearinska kiselina, niži alkil etri celuloze, silicijumska kiselina, masne kiseline, amini masnih kiselina, monogliceridi i digliceridi masnih kiselina, estri masnih kiselina i polioksietilen.
Nosač ili razblaživač može uključivati materijal sa produženim oslobađanjem, kao što je, na primer, gliceril monostearat ili gliceril distearat, sam ili pomešan sa voskom.
Farmaceutski sastav takođe može uključivati jedan ili više farmaceutski prihvatljivih pomoćnih agenasa, agenasa za vlaženje, emulgatora, agenasa za suspendovanje, konzervansa, soli za uticaj na osmotski pritisak, pufera, zaslađivača, aroma, boja ili bilo koje kombinacije prethodno navedenog.
Farmaceutski sastav pronalaska može biti formulisan tako da obezbedi brzo, produženo ili odloženo oslobađanje aktivnog sastojka nakon davanja subjektu primenom postupaka poznatih u predmetnoj oblasti.
Farmaceutski sastavi opisani ovde mogu se pripremiti, npr., kako je opisano u Remington: The Science and Practice of Pharmaci, 20. izdanje, 2003 (Lippincott Villiams & Vilkins). Na primer, aktivno jedinjenje može biti pomešano sa nosačem, ili razblaženo nosačem, ili zatvoreno unutar nosača, koji može biti u obliku ampule, kapsule ili kesice. Kada nosač služi kao razblaživač, on može biti čvrst, polučvrst ili tečni materijal koji deluje kao nosač, ekscipijent ili medijum za aktivno jedinjenje.
Farmaceutski sastavi mogu biti u konvencionalnim oblicima, na primer, kapsule, tablete, rastvori, suspenzije, injekcije ili proizvodi za lokalnu primenu. Dalje, farmaceutski sastav predmetnog pronalaska može biti formulisan tako da obezbedi željeni profil oslobađanja.
Način primene može biti bilo koji način koji efikasno transportuje aktivno jedinjenje do odgovarajućeg ili željenog mesta delovanja. Pogodni načini primene uključuju, ali nisu ograničeni na, oralni, nazalni, plućni, bukalni, subdermalni, intradermalni, transdermalni, parenteralni, rektalni, depo, subkutani, intravenski, intrauretralni, intramuskularni, intranazalni, oftalmološki (kao što je sa oftalmološkim rastvorom ) ili lokalni (kao što je mast za lokalnu upotrebu). Oralni način je posebno pogodan.
Čvrste oralne formulacije uključuju, ali nisu ograničene na, tablete, kapsule (meke ili tvrde želatine), dražeje (koje sadrže aktivni sastojak u obliku praha ili peleta) i pastile. Tablete, dražeje ili kapsule koje imaju talk i/ili nosač ugljenih hidrata ili vezivo ili slično su posebno pogodne za oralnu primenu. Primeri nosača za tablete, dražeje ili kapsule uključuju laktozu, kukuruzni skrob i/ili krompirov skrob. Sirup ili eliksir se mogu koristiti u slučajevima kada se može koristiti zaslađeni nosač.
Tipična tableta koja se može pripremiti konvencionalnim
tehnikama tabletiranja.
Tečne formulacije obuhvataju, ali nisu ograničene na, sirupe, emulzije, meki želatin i sterilne tečnosti za injekcije, kao što su vodene ili nevodene tečne suspenzije ili rastvori.
Za parenteralnu primenu, posebno su pogodni rastvori ili suspenzije za injekcije, posebno vodeni rastvori sa aktivnim jedinjenjem rastvorenim u polihidroksilovanom ricinusovom ulju.
Postupak skrininga
Antivirusna HIV aktivnost i citotoksičnost jedinjenja ovog pronalaska mogu se meriti paralelno praćenjem postupaka objavljenih u literaturi.
Citotoksični efekat jedinjenja se može analizirati merenjem proliferacije ćelija korišćenjem bojenja 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazlijum bromidom (MTT). Ćelije (5 × 10<3>ćelija po jažici) će biti inkubirane u pločama sa 96 jažica u prisustvu ili odsustvu jedinjenja. Na kraju tretmana, 20 Jl MTT (5 mg/ml u PBS) će biti dodato u svaku jažicu i inkubirano dodatna 4 sata na 37°C. Ljubičasto-plavi MTT formazan talog će biti rastvoren u tripleks reagensu koji sadrži 10% SDS, 5% izobutanola i 10 mmol/lit HCl. Aktivnost mitohondrija, koja odražava ćelijski rast i održivost, biće procenjena merenjem optičke gustine na 570 nm na mikro titarskoj ploči.
Dejstvo jedinjenja na replikaciju HIV-a u Sup-T1 ćelijama može se odrediti postupkom koji su objavili Roda Rani et al., 2006. (Archives of Biochemistry and Biophysics, tom 456, izdanje 1, 1. decembar 2006, strane 79-92).
Ukratko, 1×10<6>Sup-T1 ćelija sa 100% vijabilnošću ćelija biće zasejane u RPMI 1640, 0,1% FBS četiri ploče sa 12 jažica. Sve veće koncentracije Epap-1 peptida će biti dodavane ćelijama i biće inficirane sa HIV193 IN 101 svaki pri konačnoj koncentraciji virusa ekvivalentnoj 2 ng p24 po ml. Inficirane ćelije će biti inkubirane na 37°C i inkubatoru sa 5% CO2 tokom 2 sata. Posle 2 sata ćelije će biti peletirane na 350 g tokom 10 minuta, supernatant će biti odbačen i ćelija će se držati sa RPMI 1640 koji sadrži 10% FBS. Ćelije će biti resuspendovane u istom medijumu sa povećanjem koncentracija Epap-1 peptida i biće inkubirane 96 sati. Ćelije će biti dopunjene peptidima na svaka 24 sata. Supernatanti će biti sakupljeni nakon 96 sati i analizirani korišćenjem kompleta za ispitivanje hvatanja antigena P24 (SAIC Fredrick). Infekcija u odsustvu Epap-1 smatraće se kao 0% inhibicija. Azidotimidin (AZT) će se uzeti kao pozitivna kontrola.
Dejstvo jedinjenja na ulazak virusa i kvantifikaciju unetog virusa može se izvršiti u smislu ekspresije GFP sledećim postupcima objavljenim u J. Virol.72, 6988 (1998) od Cecilia et al., i Analitical Biochemistri, tom 360, izdanje 2, 15. januar 2007, strane 315-317 (Diavar S. Ravi i Debashis Mitra).
Ukratko, ćelije će biti zasejane u jažice ploča sa 24 jažice 1 dan pre eksperimenta. Ćelije će biti transficirane sa Tat-reporterom. Inokulum virusa će biti podešen na 1.000-4.000 TCID 50/ml u medijumu za ispitivanje (DMEM, 10% FCS, glutamin i antibiotici), alikvoti od 50 µl će biti inkubirani sa serijskim razblaženjima jedinjenja (50 µl) tokom 1 sata na 37°C. Ekspresija reportera će biti kvantifikovana u odgovarajuće vreme izračunate inhibitorne doze koje se odnose na koncentraciju ovih agenasa u ovoj preinkubacionoj smeši.
Druge relevantne reference korisne za skrining antivirusne HIV aktivnosti su: Averett, D.R.1989. Anti-HIV compound assessment by two novel high capacity assays. J. Virol. Methods 23: 263-276; Schwartz, O., et al.l998; A rapid and simple colorimeric test for the study of anti HIV agents. AIDS Res. and Human Retroviruses, 4(6):441-447; Daluge, S. M., et al.1994. 5-Chloro-2',3'-deoxy-3'fluorouridine (935U83), a selective anti human immunodeficiency virus agent with an improved metabolic and toxicological profile; Antimicro. Agents and Chemotherapy, 38(7): 1590-1603; H.Mitsuya and S.Border, Inhibition of the in vitro infectivity and cytopathic effect of human T -lymphotropic virus type lymphadenopathy-associated virus (HLTV-111/LAV) by 2,3'-dideoxynucleosides, Proc. Natl. Acad. Sci. USA,83,1911-15(1986); Pennington et al., Peptides 1990; Meek T.D et al., Inhibition of HIV-1 protease in infected T-limphocytes by synthetic peptide analogues, Nature, 343, p90 (1990); Weislow et al., J. Natl. Cancer Inst.
81, 577-586, 1989; T. Mimoto et al., J. Med. Chern., 42, 1789-1802, 1999; Uckun et al 1998, Antimicrobial Agents and Chemotherapy 42:383; for P24 antigen assay Erice et al., 1993, Antimicrob. Ag Chemotherapy 37: 385-383; Koyanagi et al., Int. J. Cancer, 36, 445-451, 1985; Balzarini et al. AIDS (1991), 5, 21-28; Connor et al., Journal ofvirology,1996, 70, 5306-5311; Popik et al., Journal of virology, 2002, 76, 4709-4722; Harrigton et al., Journal of Virology Methods, 2000, 88, 111-115; Roos et al.,Virology 2000, 273, 307-315; Fedyuk N.V. et al; Problems of Virology 1992, (3)P135; Mosmann T, December 1983, Journal of immunological methods, 65 (1-2), 55-63 ; SPC Cole, cancer chemotherapy and Pharmacology, 1986, 17, 259-263, Antiviral methods and protocols (Izd.: D Kinchington and R. F. Schinazi) Humana Press Inc., 2000, HIV protocols (Izd.: N. L. Michael and J. H. Kim) Humana Press Inc, 1999, DAIDS Virology manual from HIV laboratories, Publication NIH-97-3838, 1997, 4. HIV-1 p24 antigen capture assay, enzyme immunoassay for detection of Human immunodeficiency Virus Type 1 (HIV -1) p24 in tissue culture media - Advanced bio science laboratories, Inc kit procedure.
Indikacije
Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja i njihove farmaceutske formulacije koje su korisne u lečenju bolesti, stanja i/ili poremećaja posredovanih virusnim infekcijama. Ilustrovana je veza između terapeutskog efekta i antivirusnog. Na primer, PCT publikacije br. WO 01//07646, WO 01/65957 ili WO 03/037908; US publikacije br. US 4,598,095 ili US 2002/0068757; EP publikacije br. EP 0989862 ili EP 0724650; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 16, (6), 1712-1715, 2006; i reference koje su tamo citirane.
Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenja pronalaska za upotrebu u postupku lečenja bolesti, stanja i/ili poremećaja posredovanih virusnim infekcijama kod subjekta kome je to potrebno davanjem subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja ili farmaceutskog sastava predmetnog pronalaska.
Veruje se da bolesti, stanja i/ili poremećaji koji su posredovani virusnim infekcijama uključuju, ali nisu ograničeni na, HIV infekciju, HBV infekciju, HCV infekciju, retrovirusnu infekciju genetski povezanu sa HIV-om, AIDS, inflamatornu bolest, respiratorni poremećaji (uključujući sindrom respiratornog distresa kod odraslih (ARDS), bronhitis, hronični bronhitis, hroničnu opstruktivnu bolest pluća, cističnu fibrozu, astmu, emfizem, rinitis i hronični sinusitis), inflamatornu bolest creva (uključujući Kronovu bolest i ulcerozni kolitis), reumatoidni artritis, odbacivanje transplantata (posebno, ali ne ograničeno na alotransplantate bubrega i pluća), endometrioza, dijabetes tipa I, bolesti bubrega, hronični pankreatitis, inflamatorna stanja pluća, hronična srčana insuficijencija i bakterijske infekcije (posebno, ali ne ograničavajući se na tuberkulozu).
Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da dobiju povoljnije efekte od aditivnih efekata u prevenciji ili lečenju gore navedenih bolesti kada se koriste na odgovarajući način u kombinaciji sa dostupnim lekovima. Takođe, doza za davanje može da se smanji u poređenju sa primenom bilo kog leka samog, ili se mogu izbeći ili smanjiti neželjeni efekti istovremeno primenjenih lekova osim antivirusnih.
Postupci pripreme
Jedinjenja koja su ovde opisana mogu se dobiti tehnikama poznatim u predmetnoj oblasti. Pored toga, ovde opisana jedinjenja mogu da se pripreme prateći reakcionu sekvencu kao što je prikazano na šemama u nastavku. Dalje, u sledećim šemama, gde se pominju specifične baze, kiseline, reagensi, rastvarači, sredstva za kuplovanje, itd., podrazumeva se da druge baze, kiseline, reagensi, rastvarači, sredstva za kuplovanje itd., poznati u predmetnoj oblasti, takođe mogu da se koriste i stoga su uključeni u predmetni pronalazak. Varijacije u reakcionim uslovima, na primer, temperatura i/ili trajanje reakcije, koje se mogu koristiti kao što je poznato u predmetnoj oblasti, takođe su u okviru predmetnog pronalaska. Svi stereoizomeri jedinjenja u ovim šemama, osim ako nije drugačije naznačeno, takođe su obuhvaćeni obimom ovog pronalaska.
Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se sintetizovati iz prirodno prisutne betulinske kiseline. Ključni međuproizvodi potrebni za sintezu analoga su ili komercijalno dostupni ili se mogu pripremiti postupcima objavljenim u literaturi. Na primer, ključni međuproizvodi u predmetnom pronalasku su pripremljeni modifikacijom procedura objavljenih u Journal of Organic chemistri 2010, 75, 1285-1288; Journal of organic chemistry 2000, 65, 3934-3940; Tetrahedron: asymmetry 2008, 19, 302-308; ili Tetrahedron: asymmetry 2003, 14, 217-223.
Još jedno otelotvorenje predmetnog pronalaska obezbeđuje proces za pripremu jedinjenja opšte formule (I) koja su izložena u dole navedenim generalizovanim šemama. Stručnjak u predmetnoj oblasti će prepoznati da dole navedene generalizovane šeme mogu biti prilagođene za proizvodnju jedinjenja opšte formule (I) i farmaceutski prihvatljivih soli prema predmetnom pronalasku. Naznačeno time što su svi simboli/varijable kao što je ranije definisano osim ako nije drugačije navedeno.
Opšte sintetičke procedure:
Šema-1:
Jedinjenja formule (I) (naznačeno time što su R1, R3 i R4 isti kao što je gore definisano; P1 i P2 zaštitne grupe kao što su acetil, benzil ili slično) mogu se dobiti kao što je opisano u šemi 1. C-3 hidroksi jedinjenja formule (i) mogu da se zaštite korišćenjem reagensa kao što je anhidrid sirćetne kiseline sa sirćetnom kiselinom pod uslovima refluksa (ili) sa anhidridom sirćetne kiseline pod baznim uslovima korišćenjem reagensa kao što je trietilamin ili N,N-diizopropiletilamin i katalizator kao što je 4-dimetilaminopiridin pod uslovima refluksa u rastvaračima kao što je THF ili slično. C-28 kisela jedinjenja formule (ii) mogu se konvertovati u estarska jedinjenja formule (iii) korišćenjem reagensa kao što je benzil bromid i baza kao što su kalijum karbonat ili natrijum karbonat u rastvaračima kao što su acetonitril ili THF pod uslovima refluksa. C-3 acetil i C-28 estar jedinjenja formule (iii) mogu se konvertovati u C-20 ciklopropil jedinjenja formule (iv) u prisustvu ciklopropanirajućih agenasa kao što su dietilcink ili dimetilcink sa dijodometanom u rastvaračima kao što je dihlorometan ili toluen ili slično. C-28 estarska jedinjenja formule (iv) mogu da se skinu sa C-28 kiselih jedinjenja formule (v) korišćenjem (i) katalizatora kao što je Pd/C u rastvaračima kao što su etil acetat i metanol ili slično pod vodonikom pritisak (ili) (ii) katalizator poput Pd/C i reagens poput amonijum formata u rastvaračima kao što su etanol i THF. C-28 kisela jedinjenja formule (v) mogu se konvertovati u C-17 izocijanato jedinjenja formule (vi) u prisustvu reagensa kao što je difenilfosforil azid (DPPA) ili slično u prisustvu baza kao što je trietilamin (TEA) ili N,N-diizopropiletilamin ili slično u rastvaračima kao što su toluen ili 1,4-dioksan ili slično. C-17 izocijanato jedinjenja formule (vi) mogu se konvertovati u C-17 amin hidrohloridna jedinjenja formule (vii) u prisustvu reagenasa kao što je konc. HC1 ili slično u rastvaračima kao što je 1,4-dioksan ili slično. C-17 amin hidrohloridna jedinjenja formule (vii) mogu se konvertovati u C-17 amin zaštićena jedinjenja formule (viii) u prisustvu reagenasa kao što su diterc-butil dikarbonat [(Boc)2O] ili kao u prisustvu baza kao što je natrijum bikarbonat (NaHCO3) ili natrijum karbonat ili slično u rastvaračima kao što je 1,4-dioksan: H2O ili slično. C-3 hidroksi jedinjenja formule (viii) mogu se spojiti sa jedinjenjima formule (ix) da bi se dobila C-3 estarska jedinjenja formule (x) sa reagensom kao što je EDC.HCl ili slično i katalizatorom kao što je 4-dimetilaminopiridin (DMAP) ili slično, u rastvaračima kao što su dihlorometan (DCM) ili THF ili slično. C-17 amino zaštićena jedinjenja formule (x) mogu se konvertovati u jedinjenja C-17 amina formule (xi) u prisustvu reagenasa kao što je 4N HCl u 1,4-dioksanu ili slično u rastvaračima kao što je 1,4-dioksan ili slično. Jedinjenja C-17 amina formule (xi) mogu se spojiti sa hidroksi jedinjenjima formule (xii) in situ uslovima da bi se dobila odgovarajuća C-17 supstituisana amin jedinjenja formule (xiii) u prisustvu reagenasa kao što je triflic anhidrid, 2,6-lutidin i baze kao što je trietilamin ili N,N-diizopropiletilamin ili slično u rastvaračima kao što je dihlorometan ili slično. C-3 zaštićena jedinjenja formule (xiii) mogu da se uklone da bi se dobila odgovarajuća kisela jedinjenja predmetnog pronalaska formule (I) u prisustvu reagenasa kao što su KOH ili NaOH u kombinaciji rastvarača kao što su metanol, THF, H2O ili slično.
Šema-2:
Jedinjenja formule (I) (naznačeno time što su R1, R3 i R4 isti kao što je gore definisano; P1 i P2 zaštitne grupe kao što su acetil, benzil ili slično) mogu se dobiti kao što je opisano u šemi 2. C-3 hidroksi jedinjenja formule (i) mogu da se zaštite korišćenjem reagensa kao što je anhidrid sirćetne kiseline sa sirćetnom kiselinom pod uslovima refluksa (ili) sa anhidridom sirćetne kiseline pod baznim uslovima korišćenjem reagensa kao što je trietilamin ili N,N-diizopropiletilamin i katalizator kao što je 4-dimetilaminopiridin pod uslovima refluksa u rastvaračima kao što je THF ili slično. C-28 kisela jedinjenja formule (ii) mogu se konvertovati u C-17 izocijanato jedinjenja formule (iii) u prisustvu reagensa kao što je difenilfosforil azid (DPPA) ili slično u prisustvu baza kao što je trietilamin (TEA) ili N,N-diizopropiletilamin ili slično u rastvaračima kao što su toluen ili 1,4-dioksan ili slično. C-17 izocijanato jedinjenja formule (vi) mogu se konvertovati u C-17 amin hidrohloridna jedinjenja formule (vii) u prisustvu reagenasa kao što je konc. HCl ili slično u rastvaračima kao što je 1,4-dioksan ili slično. C-17 amin hidrohloridna jedinjenja formule (iv) mogu se konvertovati u C-17 amin zaštićena jedinjenja formule (v) u prisustvu reagenasa kao što su di-terc-butil dikarbonat [(Boc)2O] ili kao u prisustvu baza kao što je natrijum bikarbonat (NaHCO3) ili natrijum karbonat ili slično u rastvaračima kao što je 1,4-dioksan: H2O ili slično. C-3 hidroksi jedinjenja formule (v) mogu se spojiti sa jedinjenjima formule (vi) da bi se dobila C-3 estarska jedinjenja formule (vii) sa reagensom kao što je EDC.HCl ili slično i katalizatorom kao što je 4-dimetilaminopiridin (DMAP) ili slično, u rastvaračima kao što su dihlorometan (DCM) ili THF ili slično. C-17 amino zaštićena jedinjenja formule (vii) mogu se konvertovati u jedinjenja C-17 amina formule (viii) u prisustvu reagenasa kao što je 4N HCl u 1,4-dioksanu ili slično u rastvaračima kao što je 1,4-dioksan ili slično. Jedinjenja C-17 amina formule (xiii) mogu se spojiti sa hidroksi jedinjenjima formule (ix) in situ uslovima da bi se dobila odgovarajuća C-17 supstituisana amin jedinjenja formule (x) u prisustvu reagenasa kao što je triflic anhidrid, 2,6-lutidin i baze kao što je trietilamin ili N,N-diizopropiletilamin ili slično u rastvaračima kao što je dihlorometan ili slično. C-3 zaštićena jedinjenja formule (x) mogu da se uklone da bi se dobila odgovarajuća kisela jedinjenja predmetnog pronalaska formule (I) u prisustvu reagenasa kao što su KOH ili NaOH u kombinaciji rastvarača kao što su metanol, THF, H2O ili slično.
Šema-3:
Jedinjenja C-17 amina formule (xiv) mogu se spojiti sa hidroksi jedinjenjima formule (xv) in situ uslovima da bi se dobila odgovarajuća C-17 supstituisana amin jedinjenja formule (xiii) u prisustvu reagenasa kao što je triflic anhidrid, 2,6-lutidin i baze kao što je trietilamin ili N,N-diizopropiletilamin ili slično u rastvaračima kao što je dihlorometan ili slično. C-3 zaštićena jedinjenja formule (kxi) mogu da se uklone da bi se dobila odgovarajuća kisela jedinjenja formule (xvii) u prisustvu reagenasa kao što su KOH ili NaOH u kombinaciji rastvarača kao što su metanol, THF, H2O ili slično. Silil etarska grupa u jedinjenjima formule (xvii) može biti uklonjena da bi se dobila odgovarajuća kisela jedinjenja iz predmetnog pronalaska formule (I) sa reagensom kao što je TBAF u THF ili slično i u rastvaračima kao što je THF ili slično.
U daljem aspektu, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu takođe da sadrže neprirodne proporcije atomskih izotopa na jednom ili više atoma koji čine takva jedinjenja. Na primer, predmetni pronalazak takođe obuhvata izotopski obeležene varijante predmetnog pronalaska koje su identične onima ovde navedenim, ali zbog činjenice da je jedan ili više atoma jedinjenja zamenjeno atomom koji ima atomsku masu ili maseni broj različit od preovlađujuća atomska masa ili maseni broj koji se obično nalazi u prirodi za atom. Svi izotopi bilo kog određenog atoma ili elementa kako su specificirani su obuhvaćeni obimom jedinjenja pronalaska i njihove upotrebe. Primeri izotopa koji se mogu ugraditi u jedinjenja pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, sumpora, fluora, hlora i joda, kao što su<2>H
(„D“),<3>H,<n>C,<13>C,<14>C,<13>N,<15>N,<15>0,<17>0,<18>0,<32>P,<33>P,<35>S,<18>F,<36>C1,<123>I i<125>I Posebni izotopi su -CD3 ili -C(D2)-. Izotopski obeležena jedinjenja iz predmetnog pronalaska se generalno mogu pripremiti sledećim postupcima analognim onima opisanim u šemama i/ili primerima u nastavku, zamenom izotopski obeleženog reagensa za neizotopski obeleženi reagens.
Skraćenice: Skraćenice koje se koriste u celoj specifikaciji mogu se sumirati u nastavku sa njihovim posebnim značenjem: 1H NMR (protonska nuklearna magnetna rezonanca); Hz (herc); MHz (megaherc); DMSO-d6 (deuterovani dimetilsulfoksid); δ (delta); ppm (delovi na milion); s (singlet); d (dublet); dd (dublet dubleta); t (triplet); m (multiplet); J (konstanta spoja); JAB (konstanta spoja); ABq (AB kvartet); brs (široki singlet); ml (mililitar); °C (stepeni Celzijusa); mol (mol(i)); mmol (milimol(i)); N (normalni rastvor); g (gram(i)) pH (Pouvoir vodonik); Pd/C (paladijum na aktivnom uglju); eq (ekvivalent(i)); psi (funte po kvadratnom inču); ESI-MS (elektrosprej jonizaciona masena spektrometrija); ES-MS (elektrosprej masena spektrometrija); m/z (odnos mase i punjenja); M-H(matični maksimum masenog spektra minus vodonik-); M+Na+ (matični vrh masenog spektra plus natrijum+); M+H+ (matični maksimum masenog spektra plus vodonik+); DCM (dihlorometan); DMF (N,N-dimetilformamid); THF (tetrahidrofuran); Na2SO4 (natrijum sulfat); HCl (hlorovodonična kiselina); TLC (hromatografija tankog sloja); % (procenat); TEMPO (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)oksil); KBr (kalijum bromid); DIBAL-H (diizobutilaluminijum hidrid); DAST (dietilaminosulfur trifluorid); TBAF (tetra-n-butilamonijum fluorid); NaOH (Natrijum hidroksid); KOH (kalijum hidroksid); EDC.HCl (1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid hydroklorid); MTBE (metil terc-butil etar); HBTU (N,N,N',N'-tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat); h (ili) hrs (sat(i)); H (vodonik); APCI-MS (hemijska jonizaciona masena spektroskopija atmosferskog pritiska); DMAP (4-dimetilaminopiridin); TBDMSCl (terc-butildimetilsilil hlorid).
Eksperimenti
Predmetni pronalazak je dalje ilustrovan sledećim primerima, koji ni na koji način ne treba tumačiti kao ograničavanje obima ovog obelodanjivanja, već su samo ilustrativni.
Međuproizvodi
Međuproizvod 1: Preparat 1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil) ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)3-benzil(1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
Korak 1: Sinteza (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-9-acetoksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-3aH-ciklopenta[a]hrizen-3a-karboksilna kiselina:
Betulinskoj kiselini (200 g, 0,438 mola, 1,0 eq) u RB tikvici dodata je sirćetna kiselina (1600 ml) i anhidrid sirćetne kiseline (173 g, 1,696 mola, 3,87 eq.). Reakciona smeša je mešana i zagrevana na 130-140°C oko 4 sata. Napredak reakcije praćen TLC, pokazao je da je početni materijal završen.
Sirćetna kiselina je destilisana oko 1100 ml pod vakuumom. Tikvica je ohlađena do sobne temperature, polako je dodat metanol (1400 ml) i mešan na sobnoj temperaturi 12-16 sati. Čvrsta supstanca je filtrirana, isprana metanolom (200 ml) i osušena pod vakuumom (50-55°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (182 g, 83,32% prinos).
Korak 2: Sinteza benzil (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR, 13bR)-9-acetoksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-3aH-ciklopenta[a]hrizen-3a-karboksilat:
U mešani rastvor (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-9-acetoksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-3aH-ciklopenta[a]hrizen-3a-karboksilna kiselina (korak 1, 180 g, 0,361 mol, 1,0 eq) u acetonitrilu (1800 ml) dodat je kalijum karbonat (99,75 g, 0,721 mol, 2,0 eq).
Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi, benzil bromid (42,5 ml, 0,361 mol, 1,0 eq) je dodat u kapima tokom 30 minuta. Reakciona smeša je mešana i zagrevana do refluksa oko 6 sati. Napredak reakcije praćen TLC, pokazao je da je početni materijal završen. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, dodata je voda (2700 ml) i mešana 2 sata. Etil acetat (2700 ml) je dodat i mešan 30 minuta. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ponovo ekstrahovan dva puta sa etil acetatom (2x900 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (1800 ml) i rastvorom soli (1800 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno tretiranjem metanolom (720 ml), mešano i zagrevano na 60-65°C tokom 30 minuta. Ohladiti reakcionu smešu do sobne temperature i mešati 2 sata. Smeša je filtrirana, isprana metanolom (180 ml) i osušena pod vakuumom (55-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (180 g, 84,7% prinos) kao čvrsta supstanca.
Korak 3: Sinteza benzil (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-9-acetoksi-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-3aH-ciklopenta[a]hrizen-3a-karboksilat:
U mešani rastvor benzil (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-9-acetoksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-3aH-ciklopenta[a]hrizen-3a-karboksilat (korak 2, 120 g, 0,204 mola, 1,0 eq) u DCM (1200 ml) na -25 do -35°C u atmosferi azota je dodat dietil cink (75,61 g, 408 ml, 0,612 mol, 3,0 eq, 1,5 M u toluenu). Reakciona smeša je mešana na -25 do -35°C tokom 1 sata. Dijodometan (81,5 ml, 1,02 mola, 5,0 eq) je polako dodavan kap po kap na -25 do -35°C tokom oko 45 minuta. Reakciona smeša je mešana na -25 do -35°C oko 3 sata. Reakciona smeša je polako zagrejana do sobne temperature i mešana oko 14 sati. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na 0-5°C, ugašena zasićenim rastvorom amonijum hlorida (600 ml), polako je dodat 1N HCl (240 ml) da bi se podesio pH (3 do 4) i mešana 30 minuta. Organski sloj je odvojen, a vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (600 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 10% rastvorom natrijum bikarbonata, vodom (1800 ml) i rastvorom soli (1800 ml).
Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. U ovu dobijenu čvrstu supstancu dodat je diizopropil etar (360 ml) i mešan na sobnoj temperaturi 3 sata. Čvrsta supstanca je filtrirana, isprana diizopropil etrom (120 ml) i osušena pod vakuumom (55-60°C) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (100 g, 81,4% prinos) kao bela čvrsta supstanca.
Korak 4: Sinteza (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-9-acetoksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-3aH-ciklopenta[a]hrizen-3a-karboksilna kiselina:
U suspenziju od 10% Pd/C (15 g, 50% vlažna) u etil acetatu (350 ml) dodat je benzil (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-9-acetoksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-3aH-ciklopenta[a]hrizen-3a-karboksilat (korak 3, 35 g, 58,13 mmol, 1,0 eq) rastvoren u metanolu (200 ml). Reakciona smeša je hidrogenizovana u Parr aparatu za mućkanje na pritisku od 344.737 Pa (50 psi) tokom 3 sata. TLC označava potrošnju početnog materijala. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit jastučić i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 g) kao čvrsta supstanca.<1H>NMR (300 MHz,CDCl3): δ ppm 4,51-4,46 (m, 1H), 2,25-2,21 (m, 1H), 2,13-0,78 (m, 24H), 2,04 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,91 (s, 6H), 0,86 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,38-0,34 (m, 2H), 0,27-0,24 (m, 2H); ESI-MS: m/z 511,45 (MH)-.
Korak 5: Sinteza (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-izocijanat-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il-acetat:
U mešani rastvor (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-9-acetoksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1)-metilciklopropil)ikosahidro-3aH-ciklopenta[a]hrizen-3a-karboksilna kiselina (korak 4, 20 g, 39,00 mmol, 1,0 eq) u toluenu (200 ml) dodat je difenilfosforil azid (22,36 ml, 97,50 ml, 2,5 eq) i trietilamin (13,70 ml, 97,50 mmol, 2,5 eq). Reakciona smeša je refluksovana 1 sat. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom (250 ml) i ekstrahovana sa DCM (2x200 ml). Kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženimpritiskom. Ostatak je triturisan sa metanolom (100 ml), filtriran i osušen pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (19 g, 95,5% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>HNMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,45 (m, 1H), 2,04 (s, 3H), 2,03-0,78 (m, 25H), 1,04 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,38-0,26 (m, 4H).
Korak 6: Sinteza (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-ol-hidrohlorid:
U mešani rastvor (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-izocijanat-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1)-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il-acetat (korak 5, 19 g, 37,27 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (190 ml) na 0°C je dodat koncentrovani HCl (57 ml). Reakciona smeša je mešana na 50-60°C preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša se upari pod sniženim pritiskom i kodestiluje sa acetonitrilom (100 ml) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 g) kao čvrsta supstanca, koje se kao takvo koristi za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. ES-MS: m/z 442,20 (M+H)<+>.
Korak 7: Sinteza terc-butil ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-9-hidroksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-3aH-ciklopenta[a]hrisen-3a-il)karbamat:
U mešani rastvor (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3aamino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-ol hidrohlorid (korak 6, 20 g, 41,823 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (200 ml) na 0°C dodat je zasićeni rastvor natrijum bikarbonata (100 ml) i diterc-butildikarbonat (14,41 ml, 62,734 mmol, 1,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom i ekstrahovana sa DCM (2x200 ml). Kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženimpritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 10% etil acetata u heksanu kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (9 g, 44,57% prinos u dva koraka) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,23-3,16 (m, 1H), 2,54-2,51 (m, 1H), 2,42-2,25 (m, 2H), 2,0-1,80 (m, 2H), 1,73 -0,67 (m, 20H), 1,42 (s, 9H), 1,01 (s, 3H), 0,97 (s, 6H), 0,91 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,77 (s, 3H), 0,40-0,25 (m, 4H); ES-MS: m/z 564,17 (M+Na)<+>.
Korak 8: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((terc-butoksikarbonil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor terc-butil ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-9-hidroksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-3aH-ciklopenta[a]hrisen-3a-il)karbamat (korak 7, 9 g, 16,609 mmol, 1,0 eq) u dihlorometanu (90 ml) je dodat (1S,3R)-3-((benziloksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina (pripremljena prema proceduri opisanoj u VO2011/007230A2, 8,71 g, 33,21 mmol, 2,0 eq), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (EDC.HCl) (9,55 g, 49,82 mmol, 3,0 eq) i 4-(dimetilamino)piridin (0,81 g, 6,643 mmol, 0,4 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana dihlorometanom (2x100 ml). Kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženimpritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 10% etil acetata:heksana kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (11 g, 84,29% prinos) u obliku sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,34 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,44 (dd, J = 11,1, 4,5 Hz, 1H), 4,17 (s, 1H), 2,84-2,73 (m, 2H), 2,69-2,58 (m, 1H), 2,57-2,51 (m, 1H), 2,42-2,23 (m, 2H), 2,07-1,81 (m, 3H), 1,72-0,76 (m, 20H), 1,42 (s, 9H), 1,34 (s, 3H), 1,0 (s, 3H), 0,96 (s, 6H), 0,91 (s, 3H), 0,89 (s, 3H ), 0,87 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,40-0,25 (m, 4H); ES-MS: m/z 786,47 (M+H)<+>.
Korak 9: Sinteza 1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)3-benzil(1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, BaR,13bR)-3a-((terc-butoksikarbonil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]krisen-9-il)(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 8, 11 g, 13,99 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (11 ml) na 0°C je dodat 4N HCl u 1,4-dioksanu (33 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ostatak je bazifikovan zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovan dihlorometanom (3x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom, osušen preko Na2SO4, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (9 g, 93,84% prinosa) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,34 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,45 (m, 1H), 2,81-2,73 (m, 2H), 2,65-2,62 (m, 1H), 2,08-1,88 (m, 3H), 1,74-0,78 (m, 23H), 1,34 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,96 (s, 6H), 0,91 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,37-0,22 (m, 4H); ES-MS: m/z 686,45 (M+H)<+>.
Međuproizvod 2: Preparat terc-butil (2-metil-1-oksopropan-2-il)karbamata:
Korak 1: Sinteza terc-butil (1-hidroksi-2-metilpropan-2-il)karbamata:
U mešani rastvor 2-amino-2-metilpropan-1-ola (10 g, 112,17 mmol, 1,0 eq) u dihlorometanu (120 ml) i metanolu (100 ml) dodat je trietilamin (1,57 ml, 11,217 mmol, 0,1 eq) i di-terc-butil dikarbonat (30,92 ml, 134,60 mmol, 1,2 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, dodata je voda (100 ml) i jedinjenje je ekstrahovano sa DCM (2x50 ml). Organski sloj je odvojen, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je triturisan sa nheksanom, čvrsta supstanca je filtrirana i osušena pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (14,0 g, 66% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz,CDCl3): δ ppm 4,66 (s, 1H), 4,04 (s, 1H), 3,58 (d, J = 6,3 Hz, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,25 (s, 6H); ES-MS: m/z 189,80 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza terc-butil (2-metil-1-oksopropan-2-il)karbamata:
U mešani rastvor terc-butil (1-hidroksi-2-metilpropan-2-il)karbamata (korak 1, 4 g, 21,134 mmol, 1,0 eq) u dihlorometanu (50 ml) je dodat TEMPO (0,098 g, 0,634 mmol, 0,03 eq), KBr (0,251 g, 2,1134 mmol, 0,1 eq), natrijum bikarbonat (10,82 g, 128,91 mmol, 6,1 eq), 10% NaOCl (26 ml) i zatim 1,05 ml vode. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 30 minuta. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena dihlorometanom (2x50 ml) i isprana vodom (50 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7,0 g) kao bezbojna tečnost. Dobijeno jedinjenje je korišćeno kao takvo za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja;<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 9,43 (s, 1H), 4,98 (s, 1H), 1,44 (s, 9H), 1,33 (s, 6H); ES-MS: m/z 187,78 (M+H)<+>.
Međuproizvod 3: Preparat (S)-4-(1-hloropropan-2-il)tiomorfolin 1,1-dioksida:
Korak 1: Sinteza (S)-4-(1-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin 1,1-dioksida:
U mešani rastvor (S)-2-aminopropan-1-ola (1,0 g, 13,31 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (5 ml) i etanolu (5 ml) dodat je divinil sulfon ( 2,67 ml, 26,62 mmol, 2,0 eq) i trietilamin (5,61 ml, 39,93 mmol, 3,0 eq). Reakciona smeša je zagrevana na 85°C oko 3 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom i sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 5% metanola u DCM kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,0 g, 80% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz,CDCl3): δ ppm 3,51-3,34 (m, 2H), 3,22-3,16 (m, 2H), 3,13-3,06 (m, 4H), 3,03-2,90 (m, 3H), 2,60 (s, 1H), 0,97 (d, J = 6,9 Hz, 3H); ES-MS: m/z 193,97 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (S)-4-(1-hloropropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor (S)-4-(1-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (korak 1, 1,3 g, 6,72 mmol, 1,0 eq) u 1,2-dihloroetanu (13 ml) je dodan tionil hlorid (1,47 ml, 20,18 mmol, 3,0 eq). Reakciona smeša je zagrevana do refluksa oko 3 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena dihlorometanom (20 ml), isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i vodom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni korišćenjem 3% metanola u dihlorometanu kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,925 g, 64,91% prinos) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,06-3,99 (m, 1H), 3,12-3,05 (m, 8H), 2,84-2,77 (m, 1H), 2,72-2,66 (m, 1H), 1,51 (d, J = 6,6 Hz, 3H); ES-MS: m/z 212,34 (M+H)<+>.
Međuproizvod 4: Preparat (R)-4-(1-hidroksi-3-metilbutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor (R)-2-amino-3-metilbutan-1-ola (3 g, 29,069 mmol, 1,0 eq) u etanolu (10 ml) i 1,4-dioksanu (10 ml) je dodat trietilamin (12,25 ml, 87,207 mmol, 3,0 eq), a zatim divinil sulfon (6,869 g, 58,139 mmol, 2,0 eq).
Reakciona smeša je refluksovana oko 3 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 2% metanola u dihlorometanu kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3,6 g, 55,9% prinos) u obliku sivo-bela čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,69 (m, 1H), 3,46-3,39 (m, 1H), 3,32-3,14 (m, 4H), 3,05-3,03 (m, 4H), 2,45-2,38 (m, 1H), 1,85-1,73 (m, 1H), 1,02 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,89 (d, J = 6,6 Hz, 3H).
Međuproizvod 5: Preparat metil (R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksi propanoata:
U mešani rastvor metil D-serinat hidrohlorida (4,0 g, 25,70 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (20 ml) i etanolu (20 ml) dodat je trietilamin (14,34 ml, 102,8 mmol, 4,0 eq), a zatim divinil sulfon (5,15 ml, 51,4 mmol, 2,0 eq). Reakciona smeša je zagrevana na 85°C tokom 3 sata. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 5-10% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5,8 g, 95% prinos) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,90-3,84 (m, 1H), 3,81-3,73 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,54 (dd, J = 8,1, 6,0 Hz, 1H), 3,40-3,30 (m, 2H), 3,17-3,13 (m, IH), 3,09-3,06 (m, 5H), 2,48 (s, 1H).
Međuproizvod 6: Preparat (R)-4-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
Korak 1: Sinteza metil (S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksipropanoata:
U mešani rastvor metil L-serinata hidrohlorida (4 g, 25,707 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (40 ml) i etanolu (40 ml) dodat je trietilamin (14,3 ml, 102,828 mmol, 4,0 eq)ek) i divinil sulfon (6 g, 51,414 mmol, 2,0 eq). Reakciona smeša je mešana na 85°C oko 3 sata. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 40-80% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5 g, 81,96% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR
(300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,91-3,83 (m, 1H), 3,81-3,73 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,54 (dd, J = 8,1, 6,0 Hz, 1H), 3,40-3,31 (m, 2H), 3,19-3,02 (m, 6H), 2,42 (s, 1H); ES-MS: m/z 238,04 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza metil (S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)propanoata:
U mešani rastvor metil (S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksi propanoata (korak 1, 2,5 g, 10,536 mmol, 1,0 eq) u DCM (37,5 ml) na 0°C dodat je trietilamin (4,4 ml, 31,609 mmol, 3,0 eq), 4-(dimetilamino)piridin (0,064 g, 0,525 mmol, 0,05 eq), a zatim terc-butildimetilsilil hlorid (2,5 g, 16,858 mmol, 1,6 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći.
Reakciona smeša je razblažena vodom i vodeni sloj je odvojen. Organski sloj je ispran zasićenim rastvorom amonijum hlorida, 5% rastvorom natrijum bikarbonata, vodom i rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 0-40% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3 g, 81% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,93-3,90 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,53-3,49 (m, 1H), 3,29-3,24 (m, 4H), 3,08-3,02 (m, 4H), 0,87 (s, 9H), 0,05 (s, 6H).
Korak 3: Sinteza (R)-4-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor metil (S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)propanoata (korak 2, 3,5 g, 9,956 mmol, 1,0 eq) u metanolu (70 ml) na 0°C dodat je natrijum borohidrid (7,53 g, 199,129 mmol, 20 eq) u porcijama. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 2 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je neutralizovana sa 1N HCl, organska faza je uparena pod sniženim pritiskom i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), rastvorom soli (100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-10% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3 g, 93,7% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,73-3,68 (m, 1H), 3,67-3,57 (m, 1H), 3,56-3,47 (m, 1H), 3,46-3,33 (m, 2H), 3,18-3,01 (m, 7H), 2,99-2,89 (m, 1H), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H); ES-MS: m/z 323,64 (M+H)<+>.
Međuproizvod 7: Preparat (S)-4-(1-hidroksi-3-metilbutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor (S)-2-amino-3-metilbutan-1-ola (2,0 g, 19,398 mmol, 1,0 eq) u etanolu (10 ml) i 1,4-dioksanu (10 ml) je dodat divinil sulfon (3,89 ml, 38,797 mmol, 2,0 eq) i trietilamin (8,178 ml, 58,19 mmol, 3,0 eq). Reakciona smeša je zagrevana do refluksa oko 5 sati. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni korišćenjem 2% metanola u DCM kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4,0 g, 95,2% prinos) u obliku sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,74-3,68 (m, 1H), 3,45-3,38 (m, 1H), 3,32-3,14 (m, 4H), 3,05-3,02 (m, 4H), 2,47-2,36 (m, 2H), 1,83-1,75 (m, 1H), 1,02 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,89 (d, J = 6,6 Hz, 3H); ES-MS: m/z 221,85 (M+H)<+>.
Međuproizvod 8: Preparat 4-((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
Korak 1: Sinteza metil L-treoninata:
U mešani rastvor L-treonina (10 g, 83,94 mmol, 1,0 eq) u metanolu (100 ml) na 0°C dodat je tionil hlorid (18,38 ml, 251,84 mmol, 3,0 eq). Reakciona smeša je zagrevana do refluksa oko 3 sata. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, etil acetat (100 ml) i trietilamin (35,39 ml, 251,84 mmol, 3,0 eq) su dodati u reakcionu smešu, formiran je talog. Formirani precipitati su sakupljeni filtracijom i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8 g) kao ulje. Dobijeno jedinjenje je korišćeno kao takvo za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ ppm 4,62 (s, 1H), 3,85-3,82 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,16 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 1,08 (d, J = 6,3 Hz, 3H); ES-MS: m/z 134,07 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza metil (2S,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutanoata:
U mešani rastvor metil L-treoninata (korak 1, 2,5 g, 18,77 mmol, 1,0 eq) u etanolu (25 ml) i 1,4-dioksanu (25 ml) dodat je trietilamin (7,91 ml, 56,31 mmol, 3,0 eq) i divinil sulfon (5,61 ml, 37,55 mmol, 2,0 eq). Reakciona smeša je zagrevana do refluksa oko 3 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni korišćenjem 2% metanola u DCM kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4 g, 85,1% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz,CDCl3): δ ppm 4,13-3,96 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,42-2,90 (m, 9H), 1,21 (d, J = 6,0 Hz, 3H); ES-MS: m/z 252,26 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza metil (2S,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksido tiomorfolino)butanoata:
U mešani rastvor metil (2S,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutanoata (korak 2, 1,5 g, 5,976 mmol, 1,0 eq) u DCM (15 ml) i DMF ( 10 ml) je dodat imidazol (0,813 g, 11,952 mmol, 2,0 eq) i terc-butildimetilsilil hlorid (1,35 g, 8,964 mmol, 1,5 q). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 ml) i ekstrahovana sa DCM (2x30 ml). Kombinovani organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni korišćenjem 1% metanola u DCM kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,6 g, 27,52% prinos) u obliku sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz,CDCl3): δ ppm 4,39 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,64-3,56 (m, 2H), 3,30-3,24 (m, 3H), 3,06-3,03 (m, 4H), 1,26 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,86 (s, 9H), 0,08 (s, 3H), 0,04 (s, 3H); ES-MS: m/z 388,10 (M+Na)<+>.
Korak 4: Sinteza 4-((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor metil (2S,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)butanoata (korak 3, 0,6 g, 1,641 mmol, 1,0 eq) u DCM (12 ml) na -78°C je dodat DIBAL-H (6,5 ml, 9,847 mmol, 6,0 eq, 1,5M u toluenu).
Reakciona smeša je mešana na istoj temperaturi oko 4 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom amonijum hlorida i ekstrahovana etil acetatom (2x30 ml). Organski sloj je ispran vodom, osušen iznad Na2S04, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni korišćenjem 2% metanola u DCM kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,442 g, 79,92% prinos) u obliku sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,11-4,03 (m, 1H), 3,71-3,64 (m, 2H), 3,55-3,39 (m, 4H), 3,19-3,08 (m, 4H), 2,81-2,74 (m, 1H), 2,49 (s, 1H), 1,30 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,0 (s, 9H), 0,20 (s, 6H); ESI-MS: m/z 360,05 (M+Na)<+>.
Međuproizvod 9: Preparat (S)-4-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
Korak 1: Sinteza metil (R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)propanoata:
U mešani rastvor metil (R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksi propanoata (Međuproizvod 5, 4,4 g, 18,54 mmol, 1,0 eq) u DCM (45 ml) na 0°C dodat je trietilamin (7,7 ml, 55,63 mmol, 3,0 eq), 4-(dimetilamino)piridin (0,113 g, 0,92 mmol, 0,05 eq) i terc-butildimetilsilil hlorid (4,4 g, 29,67 mmol, 1,6 eq).
Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (150 ml), isprana vodom (100 ml) i rastvorom soli (100 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 0-40% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5 g, 77% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,93-3,90 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,51 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 3,26-3,24 (m, 4H), 3,06-3,02 (m, 4H), 0,87 (s, 9H), 0,05 (s, 6H); ES-MS: m/z 352,55 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (S)-4-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor metil (R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksido tiomorfolino)propanoata (korak 1, 5 g, 14,223 mmol, 1,0 eq) u metanolu (100 ml) na 0°C dodat je natrijum borohidrid (10,76 g, 284,47 mmol, 20,0 eq) u porcijama. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 2 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C, neutralizovana sa 1N HCl i organska faza je uparena pod sniženim pritiskom. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2x150 ml).
Kombinovani organski sloj je ispran vodom (150 ml) i rastvorom soli (150 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-10% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4 g, 87% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,75-3,62 (m, 1H), 3,61-3,55 (m, 1H), 3,54-3,46 (m, 1H), 3,42-3,33 (m, 2H), 3,17-3,10 (m, 2H), 3,10-3,02 (m, 5H), 3,0-2,90 (m, 1H), 2,50 (s, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,06 (s, 6H); ES-MS: m/z 324,56 (M+H)<+>.
Međuproizvod 10: Preparat (S)-4-(1-fluoro-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
Korak 1: Sinteza (S)-4-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluoropropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor (R)-4-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 6, 7,5 g, 23,291 mmol, 1,0 eq) u DCM (150 ml) na 0°C je dodat DAST (3 ml, 23,291 mmol, 1,0 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 1 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom natrijum karbonata i ekstrahovana sa DCM. Organski sloj je ispran vodom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 0-20% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,8 g, 23,8% prinos) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,67-4,64 (m, 1H), 4,51-4,49 (m, 1H), 3,79-3,71 (m, 2H), 3,25-3,22 (m, 3H), 3,14 -2,87 (m, 6H), 0,90 (s, 9H), 0,07 (s, 6H); ES-MS: m/z 326,46 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (S)-4-(1-fluoro-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor (S)-4-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluoropropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (korak 1, 1,8 g, 5,538 mmol, 1,0 eq) u THF (36 ml) na 0°C je dodat 1,0 M TBAF u THF (6,64 ml, 6,646 mmol, 1,2 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 4 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa DCM, isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i vodom. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-4% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,950 g, 81,9% prinos) kao tečnost bez boje.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,65-4,63 (m, 1H), 4,49-4,47 (m, 1H), 3,66-3,64 (m, 2H), 3,39-3,30 (m, 2H), 3,21-3,12 (m, 3H), 3,11-3,05 (m, 4H), 2,20 (s, 1H); ES-MS: m/z 212,34 (M+H)<+>.
Međuproizvod 11: Preparat (R)-4-(1-fluoro-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
Korak 1: Sinteza (R)-4-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluoropropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor (S)-4-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 9, 6 g, 18,633 mmol, 1,0 eq) u DCM (120 ml) na 0°C je dodat DAST (1,83 ml, 18,633 mmol, 1,0 eq). Reakciona smeša je mešana na 0°C oko 1 sat, promenjena na sobnu temperaturu i mešana oko 1 sat. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod.
Reakciona smeša je ohlađena do 0°C, ugašena zasićenim rastvorom natrijum karbonata i ekstrahovana sa DCM (100 ml). Organski sloj je ispran vodom, rastvorom soli (100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 0-20% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,3 g, 21,5% prinos) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,67-4,64 (m, 1H), 4,51-4,49 (m, 1H), 3,75 (dd, J = 6,0, 1,2 Hz, 2H), 3,25-3,22 (m, 4H), 3,04-2,90 (m, 5H), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H); ES-MS: m/z 326,53 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (R)-4-(1-fluoro-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor (R)-4-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluoropropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (korak 1, 1,3 g, 4,0 mmol, 1,0 eq) u THF (26 ml) na 0°C je dodat TBAF (4,8 ml, 4,80 mmol, 1,2 eq, 1,0 M u THF). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 4 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (100 ml), isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i vodom. Organski sloj je odvojen, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-3% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,650 g, 77% prinos) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,65-4,63 (m, 1H), 4,49-4,47 (m, 1H), 3,66-3,64 (m, 2H), 3,39-3,30 (m, 2H), 3,22 -3,12 (m, 3H), 3,11-3,03 (m, 4H), 2,19 (s, 1H); ES-MS: m/z 212,34 (M+H)<+>.
Međuproizvod 12: Preparat (S)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)propan-1-ola:
Korak 1: Sinteza terc-butil 4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-karboksilata:
Mešavina terc-butil piperazin-1-karboksilata (5 g, 26,84 mmol, 1,0 eq) i DCM (100 ml) je ohlađena na -25°C, a zatim je usledio trietilamin (3,25 g, 32,21 mmol, 1,2 eq) sa izopropilsulfonil hloridom (4,4 g, 30,87 mmol, 1,15 eq) su polako dodavani u kapima. Reakciona smeša je polako zagrejana do sobne temperature i mešana preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C, neutralizovana sa 1N rastvorom HCl i ekstrahovana sa DCM (3x400 ml).
Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6,9 g, 87,92% prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,48-3,46 (m, 4H), 3,33-3,30 (m, 4H), 3,23-3,14 (m, 1H), 1,46 (s, 9H), 1,34 (d, J = 6,9 Hz, 6H); ES-MS: m/z 315,45 (M+Na)<+>.
Korak 2: Sinteza 1-(izopropilsulfonil)piperazina:
U mešani rastvor terc-butil 4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-karboksilata (korak 1, 6,9 g, 23,60 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (30 ml) dodat je na 0°C 4N HCl/1,4-dioksan (30 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 3 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ohlađena na 0°C, dodat je zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i ekstrahovan sa DCM (3x400 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (150 ml), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-10% metanola u gradijentu dihlorometana. Frakcije koje sadrže očekivani proizvod su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,8 g, 62,2% prinos) kao žuta polučvrsta materija.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,35-3,32 (m, 4H), 3,23-3,14 (m, 1H), 2,92-2,89 (m, 4H), 1,34 (d, J = 6,9 Hz, 6H); ES-MS: m/z 193,42 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza metil (S)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)propanoata:
U mešani rastvor metil (R)-2-hidroksipropanoata (1,461 g,
14,042 mmol, 1,5 eq) u DCM (40 ml) na -78°C dodat je trifluorometansulfonski anhidrid (2,67 ml, 15,915 mmol, 1,7 eq). Reakciona smeša je mešana na -78°C oko 45 minuta, nakon čega je dodat 2,6-lutidin (1,85 ml, 15,915 mmol, 1,7 eq) i mešan na istoj temperaturi oko 45 minuta. Rastvor 1-(izopropilsulfonil)piperazina (korak 2, 1,8 g, 9,361 mmol, 1,0 eq) u DCM (10 ml), a zatim trietilamin (3,9 ml, 28,085 mmol, 3,0 eq) dodat je u reakcionu smešu na -78°C. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na 0°C oko 1 sat i mešana na sobnoj temperaturi oko 3 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C, ugašena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana sa DCM (3x250 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,8 g, 69,2% prinos) kao bledo žuto ulje.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,71 (s, 3H), 3,43-3,31 (m, 5H), 3,23-3,14 (m, 1H), 2,71-2,59 (m, 4H), 1,34 (d, J = 6,9 Hz, 6H), 1,30 (d, J = 7,2 Hz, 3H); ES-MS: m/z 279,40 (M+H)<+>.
Korak 4: Sinteza (S)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)propan-1-ola:
U mešani rastvor metil (S)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)propanoata (korak 3, 1,8 g, 6,466 mmol, 1,0 eq) u metanolu (100 ml) na 0°C je dodat natrijum borohidrid (6,11 g, 161,65 mmol, 25,0 eq) u porcijama. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C, pH je podešen na 6,0 sa 1N HCl i uparen pod sniženim pritiskom. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C, dodat je zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i ekstrahovana sa DCM (3x250 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (100 ml), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,0 g, 61,8% prinos) kao tečnost.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,55-3,39 (m, 6H), 3,24-3,13 (m, 1H), 3,01-2,90 (m, 1H), 2,87-2,78 (m, 2H), 2,65-2,57 (m, 2H), 1,35 (d, J = 6,6 Hz, 6H), 0,99 (d, J = 6,9 Hz, 3H); ES-MS: m/z 251,58 (M+H)<+>.
Međuproizvod 13: Preparat 4-((2R,3S)-3-fluoro-1-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
Korak 1: Sinteza metil (2R,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-fluorbutanoata:
U mešani rastvor metil (2S,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksi butanoata (Međuproizvod 8-korak 2, 15 g, 59,76 mmol, 1,0 eq) u DCM (150 ml) na 0°C dodat je DAST (8,68 ml, 65,73 mmol, 1,1 eq). Reakciona smeša je mešana na istoj temperaturi oko 30 minuta i mešana na sobnoj temperaturi oko 1 sat. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C, dodat je zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i ekstrahovana sa DCM (2x200 ml). Organski sloj je ispran vodom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 1% metanola u dihlorometanu kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8 g, 52,94% prinos) kao tečnost.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5,22-5,13 (m, 0,5H), 5,06-4,98 (m, 0,5H), 3,77 (s, 3H), 3,44-3,22 (m, 5H), 3,10-2,96 (m, 4H), 1,45 (d, J = 6,3 Hz, 1,5 H), 1,37 (d, J = 6,3 Hz, 1,5 H); ES-MS: m/z 254,46 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza 4-((2R,3S)-3-fluoro-1-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešanu suspenziju litijum aluminijum hidrida (3,59 g, 94,86 mmol, 3,0 eq) u THF (160 ml) na 0°C dodat je metil (2R,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-fluorbutanoat (korak 1, 8 g, 31,62 mmol, 1,0 eq). Reakciona smeša je mešana na 0°C oko 1 sat i zatim mešana na sobnoj temperaturi oko 2 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C, polako ugašena vodom (3,59 ml), 10% rastvorom NaOH (3,59 ml), a zatim vodom (10,59 ml) i mešana oko 2 sata. Formirani precipitati su filtrirani i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-2% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1 g, 14,06% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,57-4,51 (m, 0,5H), 4,40-4,33 (m, 0,5H), 3,94-3,83 (m, 2H), 3,30-3,22 (m, 3H), 3,18-3,0 (m, 6H), 1,17 (d, J = 6,9 Hz, 3H); ES-MS: m/z 226,48 (M+H)<+>.
Međuproizvod 14: Preparat 4-((2S,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
Korak 1: Sinteza metil (2R,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutanoata:
U mešani rastvor D-treonin metil estra hidrohlorida (13 g, 76,65 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (78 ml) i etanolu (78 ml) dodat je divinil sulfon (19,18 ml, 191,62 mmol, 2,5 eq), a zatim trietilamin (53,4 ml, 383,25 mmol, 5,0 eq). Reakciona smeša je zagrevana do refluksa oko 6 sata. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-6% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (10 g, 51,9% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,0-3,96 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,40-3,33 (m, 2H), 3,18-2,99 (m, 7H), 1,20 (d, J = 6,0 Hz, 3H); ES-MS: m/z 252,45 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza metil (2R,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksido tiomorfolino)butanoata:
U mešani rastvor metil (2R,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutanoata (korak 1, 5,0 g, 19,89 mmol, 1,0 eq) u DCM (40 ml) i DMF (20 ml) na 0°C dodat je imidazol (2,7 g, 39,78 mmol, 2,0 eq) i terc-butildimetilsilil hlorid (3,29 g, 21,88 mmol, 1,1 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 72 sata. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom (200 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (2x200 ml), osušen iznad Na2S04, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-5% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4,5 g, 61,89% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,41-4,37 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,62-3,52 (m, 2H), 3,29-3,20 (m, 3H), 3,11-2,99 (m, 4H), 1,22 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,82 (s, 9H), 0,04 (s, 3H), 0,01 (s, 3H); ES-MS: m/z 366,50 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza 4-((2S,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor metil (2R,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)butanoata (korak 2, 2,8 g, 7,65 mmol, 1,0 eq) u DCM (56 ml) na -78°C polako je dodat DIBAL-H (15,3 ml, 22,97 mmol, 3,0 eq, 1,5 M u toluenu). Reakciona smeša je mešana na -78°C oko 30 minuta i ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi oko 1 sat. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ugašena vodenim rastvorom amonijum hlorida i ekstrahovana sa DCM (3x80 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (80 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-3% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,8 g, 69,7% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR
(300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,02-3,92 (m, 1H), 3,57-3,48 (m, 2H), 3,44-3,32 (m, 3H), 3,14-3,0 (m, 6H), 2,43 (s, 1H), 1,19 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,88 (s, 9H), 0,1 (s, 6H); ES-MS: m/z 338,57 (M+H)<+>.
Međuproizvod 15: Preparat (2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(4-(izopropil sulfonil)piperazin-1-il)butan-1-ol:
Korak 1: Sinteza metil O-(terc-butildimetilsilil)-L-treoninata:
U mešani rastvor metil L-treoninat hidrohlorida (21,5 g, 126,76 mmol, 1,0 q) u DCM (400 ml) na 0°C dodat je trietilamin (124,7 ml, 887,32 mmol, 7,0 eq), 4-(dimetilamino)piridin (1,54 g, 12,676 mmol, 0,1 eq) i terc-butildimetilsilil hlorid (38,21 g, 253,53 mmol, 2,0 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (200 ml) i ekstrahovana sa DCM (2x200 ml). Organski sloj je odvojen, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-1% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 g, 63,77% prinos) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,34-4,27 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,29 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 1,62 (brs, 2H), 1,26 ( d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,86 (s, 9H), 0,04 (s, 6H); ES-MS: m/z 248,37 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza metil (2S,3R)-2-(4-benzilpiperazin-1-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)butanoata:
U mešani rastvor metil O-(terc-butildimetilsilil)-L-treoninata (korak 1, 20 g, 80,83 mmol, 1,0 eq) i N-benzil-2-hloro-N-(2-hloroetil)etana -1-amin hidrohlorid (pripremljen kako je opisano u EJM C, 2014, 75, str:11-20) (32,56 g, 121,24 mmol, 1,5 eq) u metanolu (20 ml) dodat je N,N-diizopropiletilamin (100 ml). Reakciona smeša je zagrevana na 90-100°C preko noći. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom (200 ml) i ekstrahovana sa DCM (2x200 ml). Organski sloj je odvojen, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 2% metanola u dihlorometanu eluentom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (18 g, 54,86% prinos) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,32-7,30 (m, 5H), 4,23-4,14 (m, 1H), 3,67 (s, 3H), 3,49 (s, 2H), 3,07 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 2,83-2,76 (m, 2H), 2,64-2,58 (m, 2H), 2,45 (m, 4H), 1,19 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,85 (s, 9H), 0,04 (s, 6H); APCI-MS: m/z 407,3 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza metil (2S,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(piperazin-1-il)butanoata:
U mešanu suspenziju od 10% Pd/C (9 g, 50% vlažan) u metanolu (360 ml) dodat je metil (2S,3R)-2-(4-benzilpiperazin-1-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)butanoat (korak 2, 18 g, 44,33 mmol, 1,0 eq) i amonijumformat (55,90 g, 886,6 mmol, 20 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit jastučić i isprana metanolom. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom, razblažen sa DCM, ispran vodom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (12 g, 85,7% prinos), koje je korišćeno kao takvo za sledeći korak bez dalje prečišćavanje.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,36-4,30 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,37-3,29 (m, 2H), 3,23-3,11 (m, 5H), 3,05-2,97 (m, 2H), 1,21 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,83 (s, 9H), 0,04 (s, 6H); APCI-MS: m/z 317,3 (M+H)<+>.
Korak 4: Sinteza metil (2S,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)butanoata:
U mešani rastvor metil (2S,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(piperazin-1-il)butanoata (korak 3, 12,0 g, 37,97 mmol, 1,0 eq) u DCM (180 ml) na 0°C je dodat trietilamin (21,18 ml, 151,88 mmol, 4,0 eq), a zatim izopropilsulfonil hlorid (8,12 g, 56,96 mmol, 1,5 eq). Reakciona smeša je promenjena na sobnu temperaturu i mešana preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana sa DCM (3x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-3% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8,0 g, 50% prinos) kao tečnost.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,30-4,26 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,34-3,31 (m, 4H), 3,20-3,12 (m, 2H), 3,03-2,96 (m, 2H), 2,77-2,70 (m, 2H), 1,34 (d, J = 6,9 Hz, 6H), 1,22 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,85 (s, 9H), 0,05 (s, 3H), 0,02 (s, 3H); ES-MS: m/z 423,1 (M+H)<+>.
Korak 5: Sinteza (2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(4-(izopropilsulfonil) piperazin-1-il)butan-1-ol:
U mešani rastvor metil (2S,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)butanoata (korak 4, 5,0 g, 11,82 mmol, 1,0 eq) u DCM (75 ml) na -78°C je dodat DIBAL-H (19,7 ml, 29,57 mmol, 2,5 eq, 1,5 M u toluenu). Reakciona smeša je mešana na -78°C oko 4 sata. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom amonijum hlorida i mešana oko 10 minuta. Smeša je filtrirana i filtrat je ekstrahovan sa DCM (3x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-3% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3,7 g, 80% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,99-3,95 (m, 1H), 3,54-3,26 (m, 6H), 3,22-3,13 (m, 1H), 3,04-2,96 (m, 2H), 2,82-2,75 (m, 2H), 2,63-2,56 (m, 1H), 1,34 (d, J = 6,9 Hz, 6H), 1,15 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,89 (s, 9H), 0,086 (s, 3H), 0,081 (s, 3H); ES-MS: m/z 395,46 (M+H)<+>.
Međuproizvod 16: Preparat 1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
Korak 1: Sinteza (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-izocijanato-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il-acetat:
U mešani rastvor (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-9-acetoksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-3aH-ciklopenta[a]hrizen-3a-karboksilna kiselina (Međuproizvod 1-korak 1, 26 g, 52,13 mmol, 1,0 eq) u toluenu na 0°C dodat je difenilfosforilazid (28,684 g, 104,26 mmol, 2,0 eq) i trietilamin (15,82 g, 156,39 mmol, 3,0 eq). Reakciona smeša je zagrevana na 80°C tokom 1,5 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom (500 ml) i ekstrahovana sa DCM (3x500 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (200 ml) i rastvorom soli (200 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je tretirano metanolom (78 ml), mešano na sobnoj temperaturi 15 minuta, filtrirano i osušeno pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (23 g, 89,1% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,74 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,63 (t, J = 1,5 Hz, 1H), 4,45 (m, 1H), 2,57-2,50 (m, 1H), 2,15-2,02 (m, 1H), 2,04 (s, 3H), 1,88-0,77 (m, 23H), 1,68 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,84 (s, 3H).
Korak 2: Sinteza (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2)-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-ol-hidrohlorid:
U mešani rastvor (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-izocijanato-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il-acetat (korak 1, 23 g, 46,394 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (230 ml) na 0°C dodata je koncentrovana hlorovodonična kiselina (69 ml).
Reakciona smeša je zagrevana na 60°C preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeno jedinjenje je tretirano heptanom (69 ml), mešano 15 minuta, čvrsta supstanca je filtrirana i osušena pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 g, 93% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,67 (s, 3H), 4,72 (s, 1H), 4,62 (s, 1H), 3,09-2,94 (m, 1H), 2,60 (m, 1H), 2,11-1,99 (m, 1H), 1,91-1,79 (m, 2H), 1,76-0,62 (m, 21H), 1,66 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,87 (s, 3H) s, 3H), 0,78 (s, 3H), 0,65 (s, 3H).
Korak 3: Sinteza terc-butil ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-9-hidroksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-3aH-ciklopenta[a]hrisen-3a-il)karbamat:
U mešani rastvor (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-ol hidrohlorid (korak 2, 20 g, 43,087 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (200 ml) na 0°C dodat je zasićeni rastvor natrijum bikarbonata (200 ml) i di-terc-butil dikarbonat (14,1 g, 64,631 mmol, 1,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 6 sati. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (400 ml) i ekstrahovana sa DCM (3x500 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (400 ml) i rastvorom soli (200 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-3% etil acetata u gradijentu heksana. Frakcije koje sadrže očekivani proizvod su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (16 g, 70,48% prinosa) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,732 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,628 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,33 (s, 1H), 3,22-3,17 (m, 1H), 2,58-2,54 (m, 1H), 2,50-2,35 (m, 2H), 2,06-1,92 (m, 1H), 1,70 (s, 3H), 1,66-0,69 (m, 21H), 1,46 (s, 9H), 1,03 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,78 (s, 3H); ESI-MS: m/z 550,45 (M+Na)<+>.
Korak 4: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((terc-butoksikarbonil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor terc-butil ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-9-hidroksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-3aH-ciklopenta[a]hrisen-3a-il)karbamat (korak 3, 16 g, 30,312 mmol, 1,0 eq) u DCM (240 ml) na 0°C je dodato (1S,3R)-3-((benziloksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina (pripremljena kako je opisano u WO 2011/007230 A2, 11,92 g, 45,469 mmol, 1,5 eq), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (EDC.HCl) (14,52 g, 75,781 mmol, 2,5 eq) i 4-(dimetilamino)piridin (1,11 g, 9,093 mmol, 0,3 q). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (500 ml) i ekstrahovana sa DCM (3x500 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (200 ml) i rastvorom soli (100 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-3% etil acetata u gradijentu heksana. Frakcije koje sadrže očekivani proizvod su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (16 g, 68,37% prinosa) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,36-7,32 (m, 5H), 5,14, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,70 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,43 (dd, J = 11,4, 4,5 Hz, 1H), 4,30 (s, 1H), 2,84-2,51 (m, 4H), 2,48-2,31 (m, 2H), 2,07-0,76 (m, 23H), 1,68 (s, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,34 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,85 (s, 6H), 0,84 (s, 3H); ESI-MS: m/z 794,55 (M+Na)<+>.
Korak 5: Sinteza 1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-)en-2-il)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((tercbutoksikarbonil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 4, 11,0 g, 14,24 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (55 ml) na 0°C je dodat 4N HCl u 1,4-dioksanu (55 ml). Reakciona smeša je promenjena na sobnu temperaturu i mešana oko 3 sata. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom (50 ml), zalužena vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana sa DCM (3x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je tretirano heksanom (50 ml), mešano, filtrirano i osušeno pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7,0 g, 73,1% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,36-7,32 (m, 5H), 5,14, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,72 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,43 (dd, J = 11,4, 4,5 Hz, 1H), 2,84-2,48 (m, 4H), 2,07-1,98 (m, 2H), 1,68 (s, 3H), 1,63-0,76 (m, 23H), 1,34 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,85 (s, 6H), 0,83 (s, 3H); ES-MS: m/z 672,49 (M+H)<+>.
Međuproizvod 17: Preparat 2-(2-metoksietoksi) sirćetne kiseline:
Korak 1: Sinteza etil 2-(2-metoksietoksi)acetata:
U mešani rastvor natrijum hidrida (6,6 g, 275,98 mmol, 3,0 eq) u THF (140 ml) na 0°C dodat je 2-metoksietan-1-ol (7,0 g, 91,996 mmol, 1,0 eq).
Reakciona smeša je mešana na 0°C oko 30 minuta. Etil bromoacetat (19,97 g, 119,59 mmol, 1,3 eq) i kalijum jodid (3,054 g, 18,399 mmol, 0,2 eq) su dodati u reakcionu smešu i mešani na sobnoj temperaturi oko 2 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C, ugašena zasićenim rastvorom natrijum hlorida i ekstrahovana sa DCM (3x350 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (150 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (10 g, 67% prinos) kao ulje, koje se kao takvo koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
Korak 2: Sinteza 2-(2-metoksietoksi)sirćetne kiseline:
U mešani rastvor etil 2-(2-metoksietoksi)acetata (korak 1, 10 g, 61,656 mmol, 1,0 eq) u metanolu (100 ml) i THF (100 ml) na 0°C dodat je vodeni rastvor 2,5 N KOH rastvor (184,96 ml, 462,42 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ohlađena na 0°C, pH je podešen na 2,0 sa 1N HCl i uparen pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca je mešana sa DCM (4x150 ml), filtrirana i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5,0 g, 60,97% prinos) kao ulje.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,19 (s, 2H), 3,77-3,74 (m, 2H), 3,64-3,59 (m, 2H), 3,42 (s, 3H); ES-MS: m/z 135,17 (M+H)<+>.
Međuproizvod 18: Preparat 4-((12R,13R)-14-hidroksi-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-13-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
Korak 1: Sinteza 2-(2-(2-metoksietoksi)etoksi)etil-metansulfonata:
U mešani rastvor 2-(2-(2-metoksietoksi)etoksi)etan-1-ola (3,29 g, 20,03 mmol, 1,0 eq) u DCM (40 ml) na 0°C dodat je trietilamin (8,4 ml,
60,09 mmol, 3,0 eq), a zatim metansulfonil hlorid (2,01 ml, 26,04 mmol, 1,3 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Voda je dodata u reakcionu smešu i ekstrahovana sa DCM (2x30 ml). Kombinovani organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4,3 g) kao tečnost, korišćeno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,40-4,36 (m, 2H), 3,78-3,75 (m, 2H), 3,70-3,61 (m, 6H), 3,56-3,52 (m, 2H), 3,37 (s, 3H), 3,07 (s, 3H); ES-MS: m/z 243,37 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza 4-((2R,3R)-1,3-dihidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor metil (2S,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutanoata (Međuproizvod 8-korak 2, 15 g, 59,713 mmol, 1,0 eq) u metanolu (300 ml) na 0°C dodat je natrijum borohidrid (22,5 g, 597,13 mmol, 10,0 eq) u porcijama. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je neutralizovana sa 4N HCl/1,4-dioksanom (120 ml) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je mešan sa DCM, filtriran i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-5% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6,5 g, 48,8% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ ppm 4,38 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 4,26 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,09-4,04 (m, 1H), 3,61-3,44 (m, 2H), 3,25-3,16 (m, 2H), 3,08-3,02 (m, 6H), 2,40-2,33 (m, 1H), 1,04 (d, J = 6,0 Hz, 3H); ES-MS: m/z 224,16 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza 4-((2R,3R)-1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor 4-((2R,3R)-1,3-dihidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (korak 2, 4,5 g, 20,153 mmol, 1,0 eq) u DCM (90 ml) na 0°C dodat je trietilamin (14 ml, 100,76 mmol, 5,0 eq), DMAP (0,492 g, 4,030 mmol, 0,2 eq) i TBDMSCl (7,59 g, 50,383 mmol, 2,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (200 ml), isprana vodom (200 ml) i rastvorom soli (250 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 0-60% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4 g, 58,8% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,80 (dd, J = 11,1, 3,0 Hz, 1H), 3,72-3,61 (m, 2H), 3,52-3,39 (m, 3H), 3,12-3,02 (m, 6H), 2,50-2,43 (m, 1H), 1,20 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 0,89 (s, 9H), 0,07 (s, 6H); ES-MS: m/z 338,32 (M+H)<+>.
Korak 4: Sinteza 4-((12R,13R)-12,16,16,17,17-pentametil-2,5,8,11,15-pentaoksa-16-silaoktadekan-13-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U suspenziju natrijum hidrida (1,77 g, 74,05 mmol, 5,0 eq) u THF (50 ml) na 0°C dodat je 4-((2R,3R)-1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksid (korak 3, 5 g, 14,81 mmol, 1,0 eq). Reakciona smeša je mešana na 40-50°C oko 30 minuta.2-(2-(2-metoksietoksi)etoksi)etil metansulfonat (korak 1, 4,3 g, 17,77 mmol, 1,2 eq) i kalijum jodid (0,245 g, 1,48 mmol, 0,1 eq) su dodati u reakcionu smešu i mešani na 50-60°C tokom noći. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C, ugašena ledeno hladnom vodom i ekstrahovana sa DCM
(2x50 ml). Kombinovani organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 0-40% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,0 g, 27,93% prinos) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,0-3,93 (m, 1H), 3,84-3,70 (m, 2H), 3,68-3,63 (m, 10H), 3,62-3,50 (m, 4H), 3,38 (s, 3H), 3,14-2,95 (m, 6H), 2,66-2,61 (m, 1H), 1,20 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,89 (s, 9H), 0,07 (s, 3H), 0,05 (s, 3H); ES-MS: m/z 484,65 (M+H)<+>.
Korak 5: Sinteza 4-((12R,13R)-14-hidroksi-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-13-il)tiomorfolin-1,1-dioksida:
U mešani rastvor 4-((12R,13R)-12,16,16,17,17-pentametil-2,5,8,11,15-pentaoksa-16-silaoktadekan-13-il)tiomorfolina1,1-dioksid (korak 4, 2,0 g, 4,134 mmol, 1,0 eq) u THF (20 ml) je dodat TBAF (8,26 ml, 8,269 mmol, 2,0 eq, 1,0 M u THF). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod.
Reakciona smeša je razblažena sa DCM (100 ml) i isprana vodom (100 ml).
Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-9% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,8 g, 52,6% prinos) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 3,67-3,59 (m, 9H), 3,58-3,53 (m, 4H), 3,47-3,41 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 3,35-3,20 (m, 2H), 3,13-3,0 (m, 6H), 2,63-2,56 (m, 1H), 1,20 (d, J = 6,0 Hz, 3H); ES-MS: m/z 370,20 (M+H)<+>.
Međuproizvod 19: Preparat 2,5,8,11-tetraoksatridekan-13-oične kiseline:
Korak 1: Sinteza etil 2,5,8,11-tetraoksatridekan-13-oata:
U mešanu suspenziju natrijum hidrida (3,65 g, 152,25 mmol, 5,0 eq) u THF (125 ml) na 0°C dodat je 2-(2-(2-metoksietoksi)etoksi)etan-1-ol ( 5,0 g, 30,45 mmol, 1,0 eq) i tetrabutilamonijumjodid (2,24 g, 6,09 mmol, 0,2 eq).
Reakciona smeša je mešana na 0°C oko 30 minuta, dodat je etil 2-bromoacetat (6,611 g, 39,58 mmol, 1,3 eq), mešana na 0°C oko 1 sat i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C, ugašena ledom i ekstrahovana sa DCM (3x250 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (150 ml) i rastvorom soli (150 ml). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6 g, 78,74% prinos) kao čvrsta supstanca, koja je kao takva korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
Korak 2: Sinteza 2,5,8,11-tetraoksatridekan-13-oične kiseline:
U mešani rastvor etil 2,5,8,11-tetraoksatridekan-13-oata (korak 1, 6,0 g, 23,97 mmol, 1,0 eq) u metanolu (60 ml) i THF (60 ml) na 0°C je dodat vodeni 2,5N rastvor KOH (71,85 ml, 179,79 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, dodata je voda (50 ml), ohlađena na 0°C, zakiseljena do pH 2,0 sa 1N HCl i ekstrahovana sa DCM (3x250 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak (5,3 g) je korišćen kao takav za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,17 (s, 2H), 3,75-3,57 (m, 12H), 3,39 (s, 3H); ES-MS: m/z 223,63 (M+H)<+>.
Primeri
Od sledećih primera, primeri 7 i 12-21 su primeri prema predmetnom pronalasku, dok su primeri 1-6 i 8-11 samo u svrhu poređenja.
Primer 1: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2)-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetil ciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metil-ciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 4 g, 5,83 mmol, 1,0 eq) u 1,2-dihloroetanu (40 ml) je dodat terc-butil (2-metil-1-oksopropan-2-il)karbamat (Međuprodukt 2, 3,27 g, 17,49 mmol, 3,0 eq) i titanijum tetraizopropoksid (3,4 ml, 11,66 mmol, 2,0 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 1 sat, a zatim je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (3,7 g, 17,49 mmol, 3,0 eq) i mešan na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Zasićeni rastvor natrijum bikarbonata je dodat u reakcionu smešu, organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan dihlorometanom (2x40 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom, osušen iznad Na2S04, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 1% metanola u dihlorometanu kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4 g, 80% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,34 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,45 (m, 1H), 2,90-2,46 (m, 3H), 2,40-2,30 (m, 2H), 2,10-2,0 (m, 2H), 1,97-1,13 (m, 32H), 1,42 (s, 9H), 1,03-0,76 (m, 22H), 0,40-0,20 (m, 4H); ESI-MS: m/z 857,75 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza 1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-amino-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklo butan-1,3-dikarboksilat (korak 1,4 g, 4,66 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (10 ml) na 0°C je dodat 4N HCl/1,4-dioksan (30 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, bazifikovana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana dihlorometanom (2x40 ml). Organski sloj je ispran vodom, osušen iznad Na2S04, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3 g, 85,2% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,34 (m, 5H), 5,14, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,45 (m, 1H), 2,84-2,61 (m, 3H), 2,27-2,13 (m, 2H), 2,07-1,17 (m, 34H), 1,13-0,78 (m, 22H), 0,36-0,22 (m, 4H); ESI-MS: m/z 757,50 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-amino-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 2, 0,4 g, 0,52 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (4 ml) i etanolu (4 ml) je dodat trietilamin (0,21 ml, 1,56 mmol, 3,0 eq) a zatim divinil sulfon (0,12 g, 1,056 mmol, 2,0 eq). Reakciona smeša je zagrevana na 85°C oko 3 sata. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3x30 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 20-40% etil acetata u heksanu gradijentu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,4 g, 88,8% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,35 (m, 5H), 5,14, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,49-4,40 (m, 1H), 3,05 (m, 8H), 2,86-2,73 (m, 2H), 2,71-2,60 (m, 1H), 2,50-2,28 (m, 2H), 2,10-1,13 (m, 34H), 1,08-0,78 (m, 22H), 0,42-0,22 m, 4H).
Korak 4: Sinteza (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2)-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metil ciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklo butan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklo butan-1,3-dikarboksilat (korak 3, 0,4 g, 0,456 mmol, 1,0 eq) u THF (4 ml) i metanolu (4 ml) je dodat vodeni 2,5N rastvor KOH (1,35 ml, 3,427 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom i razblažena vodom (5 ml). Reakciona smeša je ohlađena na 0°C, pH je podešen na 5 sa 1N HCl i ekstrahovan sa dihlorometanom (3x30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (20 ml) i rastvorom soli (10 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 30 do 45% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,15 g, 41,8% prinos) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,46 (dd, J = 10,8, 4,8 Hz, 1H), 3,10-2,92 (m, 8H), 2,86-2,74 (m, 2H), 2,65-2,53 (m, 1H), 2,39-2,28 (m, 2H), 2,10-2,0 (m, 2H), 1,98-1,05 (m, 32H), 1,03-0,78 (m, 22H), 0,40-0,20 (m, 4H). ESI-MS: m/z 785,65 (M+H)<+>.
Primer 2: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)propil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetil ciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)propil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 1 g, 1,457 mmol, 1,0 eq) u acetonitrilu (20 ml) je dodat (S)-4-(1-hloropropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksid (Međuprodukt 3, 0,925 g, 4,372 mmol, 3,0 eq), kalijum fosfat trobazni (1,36 g, 6,4108 mmol, 4,4 eq) i kalijum jodida (0,653 g, 3,934 mmol, 2,7 eq). Reakciona smeša je zagrevana do refluksa preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit jastučić i isprana acetonitrilom (25 ml). Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 2% metanola u dihlorometanu kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,35 g, 27,88% prinos) u obliku sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,35 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,44 (dd, J = 10,5, 4,8 Hz, 1H), 3,32 (m, 1H), 3,12-3,06 (m, 8H), 2,88-2,72 (m, 2H), 2,70-2,52 (m, 2H), 2,50-2,48 (m, 1H), 2,18-2,0 (m, 3H), 1,92-1,17 (m, 25H), 1,17-0,78 (m, 25H), 0,68 (m, IH), 0,50-0,36 (m, 2H), 0,28 (m, 1H); ES-MS: m/z 861,79 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-((((1R,3aS,SaR,SbR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)propil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR, 13bR)-3a-((S)-2-(1,1)-dioksidotiomorfolino)propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklo butan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 0,35 g, 0,406 mmol, 1,0 eq) u THF (3,5 ml) i metanolu (3,5 ml) na 0°C je dodat vodeni 2,5N rastvor KOH (1,22 ml, 3,047 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom (10 ml), ohlađena na 0°C i pH je podešen na 5,0 sa 1N HCl. Vodeni sloj je ekstrahovan dihlorometanom (2x20 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-5% metanola u DCM gradijentu. Dobijeno jedinjenje je dalje prečišćeno rekristalizacijom preko MTBE (10 ml) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,1 g, 32% prinos) u obliku sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,46 (m, 1H), 3,30-2,90 (m, 9H), 2,88-2,72 (m, 2H), 2,68-2,50 (m, 2H), 2,28-2,0 (m, 3H), 2,0-1,17 (m, 26H), 1,14-0,78 (m, 25H), 0,62-0,52 (m, 1H), 0,50-0,36 (m, 2H), 0,32-0,25 (m, 1H); ES-MS: m/z 771,87 (M+H)<+>.
Primer 3: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetil ciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metil ciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor (R)-4-(1-hidroksi-3-metilbutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 4, 0,241 g, 1,093 mmol, 1,25 eq) u dihlorometanu (12 ml) na 0°C dodat je anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (0.20 ml, 1.224 mmol, 1.4 eq). Reakciona smeša je mešana na istoj temperaturi oko 10 minuta.2,6-lutidin (0,145 ml, 1,25 mmol, 1,43 eq) je dodat i mešan na 0°C tokom 10 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S, 11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 0,6 g,
0,874 mmol, 1,0) a zatim trietilamin (0,175 ml 1,25 mmol, 1,43 eq) je dodato u reakcionu smešu i mešano na 0°C oko 1 sat. Kupatilo za hlađenje je uklonjeno i mešano na sobnoj temperaturi oko 4 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena dihlorometanom (2x20 ml), organski sloj je ispran vodom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 30% etil acetata u heksanu kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,3 g, 38,96% prinos) u obliku sivobele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,35 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,45 (dd, J = 11,1, 4,5 Hz, 1H), 3,22-3,06 (m, 6H), 3,02-2,94 (m, 2H), 2,88-2,58 (m, 3H), 2,52-2,18 (m, 3H), 2,10-1,90 (m, 2H), 1,88-1,10 (m, 27H), 1,06-0,78 (m, 28H), 0,40-0,20 (m, 4H); ES-MS: m/z 889,81 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metil-ciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklo butan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((R)-2-(1,1)-dioksidotiomorfolino)-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetil ciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 0,3 g, 0,337 mmol, 1,0 eq) u metanolu (3 ml) i THF (3 ml) je dodat vodeni 2,5N rastvor KOH (1,01 ml, 2,527 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ohlađena na 0°C, zakiseljena sa 1N HCl do pH 5,0 i ekstrahovana sa dihlorometanom (2x30 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 5% metanola u dihlorometanu kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,100 g, 37,3% prinos) u obliku sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,45 (m, 1H), 3,25-2,95 (m, 8H), 2,80-2,70 (m, 3H), 2,62-2,42 (m, 2H), 2,38-2,20 (m, 1H), 2,20-1,20 (m, 29H), 1,18-0,78 (m, 28H), 0,42-0,20 (m, 4H); ES-MS: m/z 799,89 (M+H)<+>.
Primer 4: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((R)-3-((tert-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR, 13bR)-3a-(((R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor (R)-4-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 6, 0,742 g, 2,186 mmol, 1,5 eq) u DCM (20 ml) na 0°C je dodat trifluorometansulfonski anhidrid (0,39 ml, 2,332 mmol, 1,6 eq). Reakciona smeša je mešana na 0°C oko 10 minuta, zatim je dodat 2,6-lutidin (0,21 ml, 2,332 mmol, 1,6 eq), mešan na 0°C oko 10 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 1 g, 1,457 mmol, 1,0 eq) i trietilamin (0,32 ml 2,332 mmol, 1,6 eq) dodato je uzastopno na 0°C i mešano na istoj temperaturi oko 1 sat. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (100 ml), isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, vodom i rastvorom soli. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 0-15% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1 g, 69,4% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,34 (m, 5H), 5,14, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,44 (dd, J = 11,1, 4,8 Hz, 1H), 3,71-3,65 (m, 2H), 3,40-3,20 (m, 3H), 3,19-2,98 (m, 8H), 2,85-2,57 (m, 3H), 2,46-2,40 (m, 2H), 2,08-2,0 (m, 1H), 1,95-0,70 (m, 26H), 1,34 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,898 (s, 6H), 0,891 (s, 6H), 0,84 (s, 9H), 0,36-0,21 (m, 4H), 0,07 (s, 3H), 0,05 (s, 3H); ESI-MS: m/z 992,16 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((R)-3-((tert-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi) karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((R)-3-((tert-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 1 g, 1,008 mmol, 1,0 eq) u metanolu (10 ml) i THF (10 ml) je dodat vodeni 2,5N KOH rastvor (3 ml, 7,56 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ohlađena na 0°C, pH je podešen na 5,0 sa 1N HCl i ekstrahovan sa DCM (2x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml) i rastvorom soli (100 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0 do 6% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,350 g, 38,5% prinos) u obliku sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,53-4,45 (m, 1H), 3,76-3,62 (m, 2H), 3,40-3,23 (m, 3H), 3,20-2,93 (m, 8H), 2,80-2,52 (m, 5H), 2,02-0,78 (m, 24H), 1,35 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 1,0 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,89 (s, 3H ), 0,88 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,83 (s, 9H), 0,40-0,24 (m, 4H), 0,05 (s, 3H), 0,04 (s, 3H); ESI-MS: m/z 901,91 (M+H)<+>.
Primer 5: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((R)-3)-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina (Primer 4, 0,500 g, 0,554 mmol, 1,0 eq) u THF (15 ml) na 0°C je dodat TBAF (0,66 ml, 0,6659 mmol, 1,2 eq, 1,0 M u THF). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 4 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u etil acetatu (100 ml), ispran vodom (2x100 ml) i rastvorom soli. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-10% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,110 g, 25,2% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ ppm 4,35 (m, 1H), 3,55-3,45 (m, 1H), 3,44-3,38 (m, 1H), 3,20-3,10 (m, 2H), 3,09-2,92 (m, 6H), 2,82-2,70 (m, 3H), 2,35-2,22 (m, 4H), 1,98-0,78 (m, 25H), 1,33 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,95 ( s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,83 (s, 6H), 0,82 (s, 3H), 0,35-0,20 (m, 4H); ESI-MS: m/z 787,55 (M+H)<+>.
Primer 6: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metil ciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor (S)-4-(1-hidroksi-3-metilbutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 7, 0,290 g, 1,311 mmol, 1,5 eq) u DCM (10 ml) na 0°C dodat je anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (0,234 ml, 1,399 mmol, 1,6 eq). Reakciona smeša je mešana na 0°C oko 10 minuta.2,6-lutidin (0,161 ml, 1,399 mmol, 1,6 eq) je dodat i mešan na 0°C tokom 10 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 0,6 g, 0,8745 mmol, 1,0 eq) i trietilamin (0,36 ml, 2,623 mmol, 3,0 eq) dodato je uzastopno na 0°C i ostavljeno da se meša na sobnoj temperaturi oko 4 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod.
Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana sa DCM (2x20 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 2% metanola u DCM kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,4 g, 51,48% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,36-7,31 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,44 (dd, J = 11,1, 4,8 Hz, 1H), 3,15-3,13 (m, 4H), 3,03-2,98 (m, 4H), 2,84-2,73 (m, 2H), 2,70-2,59 (m, 1H), 2,50-2,37 (m, 2H), 2,32-2,24 (m, 1H), 2,14-0,77 (m, 33H), 1,34 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,96 (s, 6H), 0,91 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,39-0,20 (m, 4H); ESI-MS: m/z 889,65 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metil-ciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklo butan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR, 11bR,13aR,13bR)-3a-(((S)-2-(1,1)-dioksidotiomorfolino)-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetil ciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 0,4 g, 0,449 mmol, 1,0 eq) u metanolu (4 ml) i THF (4 ml) je dodat vodeni 2,5N rastvor KOH (1,35 ml, 3,373 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ohlađena na 0°C, pH je podešen na 5,0 sa 1N HCl i ekstrahovan sa DCM (2x25 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 5% metanola u DCM kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,120 g, 33,5% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ ppm 4,44 (m, 1H), 3,06-2,95 (m, 8H), 2,84-2,71 (m, 3H), 2,45-2,24 (m, 5H), 1,95-0,78 (m, 31 H), 1,26 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,86 (s, 6H), 0,83 (s, 3H), 0,38-0,18 (m, 4H); ESI-MS: m/z 799,60 (M+H)<+>.
Primer 7: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR, 11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil) amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 4-((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 8, 0,442 g, 1,311 mmol, 1,5 eq) u DCM (10 ml) na 0°C dodat je anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (0,234 ml, 1,399 mmol, 1,6 eq). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom
10 minuta.2,6-lutidin (0,166 ml, 1,399 mmol, 1,6 eq) je dodat, mešan na 0°C oko 10 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 0.6 g, 0,8745 mmol, 1,0 eq) i trietilamin (0,36 ml 2,623 mmol, 3,0 eq) dodato je uzastopno na 0°C i mešano na istoj temperaturi oko 1 sat. Reakciona smeša je promenjena na sobnu temperaturu i mešana oko 4 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana sa DCM (2x30 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 20% etil acetata u heksanu kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,4 g, 45,5% prinos) u obliku sivobele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,36-7,33 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,44 (dd, J = 11,1, 4,5 Hz, 1H), 4,0-3,97 (m, 1H), 3,46-3,35 (m, 2H), 3,28-3,20 (m, 2H), 2,98 (m, 4H), 2,84-2,72 (m, 2H), 2,70-2,60 (m, 1H), 2,60-2,50 (m, 2H), 2,42 (m, 2H), 2,15-0,78 (m, 28H), 1,34 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,96 (s, 6H), 0,91 (s, 3H), 0,87 (brs, 12H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,38-0,20 (m, 4H), 0,06 (s, 3H), 0,05 (s, 3H); ESI-MS: m/z 1005,85 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-((tert-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-((tert-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 0,4 g, 0,3977 mmol, 1,0 eq) u metanolu (5 ml) i THF (5 ml) je dodat vodeni 2,5N KOH rastvor (1,19 ml, 2,983 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ohlađena na 0°C, pH je podešen na 5,0 sa 1N HCl i ekstrahovan sa DCM (2x20 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 3% metanola u DCM kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,3 g, 82,41% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,56-4,50 (m, 1H), 3,99-3,96 (m, 1H), 3,43-3,29 (m, 4H), 3,17-3,03 (m, 2H), 3,0-2,82 (m, 3H), 2,78-2,63 (m, 2H), 2,60-2,47 (m, 3H), 2,02-0,78 (m, 29H), 1,33 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 0,87 (s, 9H), 0,85 (s, 3H), 0,40-0,22 (m, 4H), 0,06 (s, 3H), 0,04 (s, 3H); ES-MS: m/z 915,60 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R))-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina (korak 2, 0,3 g, 0,327 mmol, 1,0 eq) u THF (6 ml) na 0°C je dodat tetra-nbutilamonijum fluorid (10 ml, 10,0 mmol, 31,0 eq, 1,0 M u THF). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (20 ml) i ekstrahovana sa DCM (2x20 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i ispran pod sniženim pritiskom.
Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 5% metanola u DCM kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (65 g, 24,8% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,48-4,45 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,33 (m, 2H), 3,20-3,05 (m, 6H), 2,82-2,74 (m, 2H), 2,63-2,53 (m, 5H), 2,10-2,0 (m, 2H), 1,97-0,78 (m, 26H), 1,33 (s, 3H), 1,07 (s, 6H), 0,98 (s, 3H ), 0,91 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,86 (s, 6H), 0,42-0,20 (m, 4H); ES-MS: m/z 802,2 (M+H)<+>.
Primer 8: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR, 13bR)-3a-(((S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor (S)-4-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 9, 0,844 g, 2,623 mmol, 1,5 eq) u DCM (24 ml) na 0°C je dodat trifluorometansulfonski anhidrid (0,47 ml, 2,798 mmol, 1,6 eq). Reakciona smeša je mešana na 0°C oko 10 minuta.2,6-lutidin (0,32 ml, 2,798 mmol, 1,6 eq) je dodat i mešan na 0°C oko 10 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 1,2 g,
1,749 mmol, 1,0 eq) i trietilamin (0,39 ml 2,798 mmol, 1,6 eq) dodato je uzastopno na 0°C i mešano na istoj temperaturi oko 1 sat. Reakciona smeša je promenjena na sobnu temperaturu i mešana preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (150 ml), isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, vodom i rastvorom soli. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 0-15% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1 g, 57,8% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,36-7,33 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,44 (dd, J = 11,1, 4,8 Hz, 1H), 3,71-3,67 (m, 2H), 3,30-3,22 (m, 2H), 3,18-3,06 (m, 2H), 3,05-2,90 (m, 5H), 2,83-2,72 (m, 3H), 2,70-2,59 (m, 2H), 2,46-2,32 (m, 2H), 2,10-1,20 (m, 26H), 1,0-0,78 (m, 31H), 0,39-0,23 (m, 4H), 0,05 (s, 6H); ES-MS: m/z 992,09 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((S)-3-((tert-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi) karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((S)-3-((tert-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 1,0 g, 1,008 mmol, 1,0 eq) u metanolu (12 ml) i THF (12 ml) je dodat vodeni 2,5N KOH rastvor (3,0 ml, 7,564 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ohlađena na 0°C, pH je podešen na 5,0 sa 1N HCl i ekstrahovan sa DCM (2x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml) i rastvorom soli (100 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-6% metanola u DCM kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,4 g, 44,4% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR
(300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,45 (m, 1H), 3,69-3,65 (m, 2H), 3,30 (m, 2H), 3,10-2,96 (m, 7H), 2,80-2,72 (m, 3H), 2,60-2,50 (m, 2H), 2,10-0,78 (m, 38H), 1,36 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,88 (s, 9H), 0,86 (s, 6H), 0,35-0,27 (m, 4H), 0,05 (s, 6H); ES-MS: m/z 902,18 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((S)-3)-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina (Korak 2, 0,4 g, 0,444 mmol, 1,0 eq) u THF (10 ml) na 0°C je dodat TBAF (0,532 ml, 0,532 mmol, 1,2 eq, 1,0 M u THF). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 4 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom i ekstrahovana sa DCM. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-10% metanola u DCM gradijentu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (90 mg, 25,7% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ ppm 4,40-4,32 (m, 1H), 3,62-3,58 (m, 1H), 3,50-3,45 (m, 1H), 3,10-2,92 (m, 8H), 2,82-2,70 (m, 3H), 2,38-2,23 (m, 5H), 1,92-0,78 (m, 24H), 1,26 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,83 (s, 6H), 0,81 (s, 3H), 0,33-0,22 (m, 4H); ESI-MS: m/z 788,27 (M+H)<+>.
Primer 9: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-florpropil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetil ciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-florpropil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metil ciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor (S)-4-(1-fluor-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 10, 0,922 g, 4,372 mmol, 3,0 eq) u DCM (10 ml) na 0°C dodat je anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (0,78 ml, 4,664 mmol, 3,2 eq). Reakciona smeša je mešana na 0°C oko 10 minuta.2,6-lutidin (0,54 ml, 4,664 mmol, 3,2 eq) je dodat, mešan na 0°C oko 10 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 1,0 g,
1,457 mmol, 1,0 eq) i trietilamin (0,65 ml 4,664 mmol, 3,2 eq) dodato je uzastopno na 0°C i mešano na istoj temperaturi oko 1 sat. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (100 ml), isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (100 ml) i rastvorom soli (100 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 0-20% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.300 g, 23.4% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,36-7,33 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,67 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,51 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,44 (dd, J = 11,1, 4,5 Hz, 1H), 3,28-3,14 (m, 4H), 3,11-3,07 (m, 1H), 3,05-2,98 (m, 4H), 2,85-2,73 (m, 3H), 2,69-2,62 (m, 1H), 2,53-2,47 (m, 3H), 2,08-0,78 (m, 24H), 1,34 (s, 3H), 1,0 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,40-0,20 (m, 4H); ES-MS: m/z 880,01 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-florpropil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetil ciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((S)-2-(1,1)-dioksidotiomorfolino)-3-fluoropropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetil ciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 0,300 g, 0,341 mmol, 1,0 eq) u metanolu (3 ml) i THF (3 ml) je dodat vodeni 2,5N rastvor KOH (1 ml, 2,559 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ohlađena na 0°C, pH je podešen na 4,0 sa 1N HCl i ekstrahovan sa DCM (2x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-5% metanola u gradijentu dihlorometana. Dobijeno jedinjenje je dalje prečišćeno tretiranjem sa DCM:heksanom (odnos 1:9), čvrsta supstanca je filtrirana i osušena pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,090 g, 33,4% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,67 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,51 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,46 (dd, J = 11,1, 4,2 Hz, 1H), 3,23-3,0 (m, 9H), 2,84-2,75 (m, 3H), 2,64-2,56 (m, 4H), 2,09-0,78 (m, 24H), 1,37 (s, 3H), 1,07 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,87 (s, 6H), 0,85 (s, 3H), 0,38-0,29 (m, 4H); ES-MS: m/z 790,02 (M+H)<+>.
Primer 10: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-florpropil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetil ciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-florpropil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metil ciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor (R)-4-(1-fluor-3-hidroksipropan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 11, 0,645 g, 3,061 mmol, 3,0 eq) u DCM (14 ml) na 0°C dodat je anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (0,548 ml, 3,265 mmol, 3,2 eq). Posle 10 minuta mešanja na 0°C, dodat je 2,6-lutidin (0,38 ml, 3,265 mmol, 3,2 eq) i mešan na istoj temperaturi oko 10 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 0,700 g, 1,020 mmol, 1,0 eq) i trietilamin (0,45 ml 3,265 mmol, 3,2 eq) je dodato u reakcionu smešu i mešano na 0°C oko 1 sat. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (100 ml), isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (100 ml), vodom i rastvorom soli (100 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 0-20% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,200 g, 22,2% prinos) u vidu sivobele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,36-7,35 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,64-4,62 (m, 1H), 4,48-4.36 (m, 2H), 3,27-3,22 (m, 2H), 3,18-3,02 (m, 7H), 2,85-2,72 (m, 3H), 2,59-2,50 (m, 1H), 2,42-2,32 (m, 1H), 2,10-0,78 (m, 26H), 1,34 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,97 (s, 6H), 0,91 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,40-0,20 (m, 4H); ES-MS: m/z 880,01 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-florpropil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetil ciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((R)-2-(1,1)-dioksidotiomorfolino)-3-fluoropropil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetil ciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 0,200 g, 0,227 mmol, 1,0 eq) u metanolu (2 ml) i THF (2 ml) je dodat vodeni 2,5N rastvor KOH (0.68 ml, 1,706 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ohlađena na 0°C, pH je podešen na 4,0 sa 1N HCl i ekstrahovan sa DCM (2x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom
(100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-5% metanola u gradijentu dihlorometana. Dobijeno jedinjenje je dalje prečišćeno tretiranjem sa DCM:heksanom (odnos 1:9), formirani precipitati su filtrirani i osušeni pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,080 g, 44,6% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,64-4,40 (m, 3H), 3,30-2,98 (m, 9H), 2,80-2,50 (m, 5H), 2,20-0,78 (m, 26H), 1,35 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,92 (s, 9H), 0,88 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,40-0,20 (m, 4H); ES-MS: m/z 790,02 (M+H)<+>.
Primer 11: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((S)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetil ciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR, 13bR)-3a-((S)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)propil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor (S)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)propan-1-ola (Međuproizvod 12, 0,547 g, 2,186 mmol, 1,5 eq) u DCM (30 ml) na 0°C dodat je anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (0,41 ml, 2,478 mmol, 1,7 eq). Posle 10 minuta mešanja na 0°C, dodat je 2,6-lutidin (0,28 ml, 2,478 mmol, 1,7 eq) i mešan na 0°C oko 10 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR, 13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 1,0 g, 1,457 mmol, 1,0 eq) rastvoren u DCM (10 ml), a zatim trietilamin (0,6 ml, 4,372 mmol, 3,0 eq) su dodani u reakcionu smešu i mešani na 0°C oko 1 sat. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi oko 4 sata. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (150 ml) i ekstrahovana sa DCM (3x200 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml) i rastvorom soli (100 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 2% metanola u eluentu dihlorometana. Frakcije koje sadrže očekivani proizvod su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,350 g, 26,3% prinos) kao žuta polučvrsta materija.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,35 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,44 (dd, J = 11,1, 4,8 Hz, 1H), 3,48-3,31 (m, 4H), 3,23-3,18 (m, 1H), 2,92-2,43 (m, 10H), 2,10-0,78 (m, 35H), 1,34 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,0 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,40-0,20 (m, 4H); ES-MS: m/z 919,03 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR, 13bR)-3a-((S)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)propil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetil ciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((S)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetil ciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 0,350 g, 0,381 mmol, 1,0 eq) u metanolu (3,5 ml) i THF (3,5 ml) na 0°C dodat je vodeni 2,5N rastvor KOH (1,14 ml, 2,858 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ohlađena na 0°C, pH je podešen na 4,0 sa 1N HCl i ekstrahovan sa DCM (3x150 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (150 ml), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i upareni pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 6% metanola u eluentu dihlorometana. Frakcije koje sadrže očekivani proizvod su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeno jedinjenje je rastvoreno u DCM (2 ml), tretirano heksanom (10 ml), mešano na sobnoj temperaturi oko 15 minuta. Formirani precipitati su sakupljeni filtracijom i osušeni pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (70 mg, 22,2% prinosa) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,47 (m, 1H), 3,50-3,30 (m, 4H), 3,25-3,15 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 2,83-2,73 (m, 2H), 2,68-2,50 (m, 7H), 2,10-0,78 (m, 35H), 1,34 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), 1,07 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,86 (s, 6H), 0,52-0,22 (m, 4H); ES-MS: m/z 829,01 (M+H)<+>.
Primer 12: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-fluorobutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-di metilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-fluorobutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetil ciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 4-((2R,3S)-3-fluor-1-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin 1,1-dioksida (Međuproizvod 13, 0,590 g, 2,623 mmol, 2,0 eq) u DCM (20 ml) na 0°C dodat je 2,6-lutidin (0,45 ml, 3,933 mmol, 3,0 eq). Reakciona smeša je mešana na 0°C oko 10 minuta, zatim je dodat trifluorometansulfonski anhidrid (0,567 ml, 3,277 mmol, 2,5 eq) i mešana na istoj temperaturi oko 15 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 0,9 g,
1,311 mmol, 1,0 eq) i trietilamin (0,55 ml 3,933 mmol, 3,0 eq) je dodato u reakcionu smešu i mešano na 0°C oko 4 sat. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Zasićeni rastvor natrijum bikarbonata je dodat u reakcionu smešu i ekstrahovan sa DCM (2x30 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 20% etil acetata u heksanu kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,3 g, 25,64% prinos) u obliku sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,36-7,34 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,44 (dd, J = 11,1, 4,5 Hz, 1H), 4,50-4,48 (m, 0,5H), 4,33-4,31 (m, 0,5H), 3,22-3,13 (m, 2H), 3,10-3,0 (m, 7H), 2,85-2,58 (m, 4H), 2,55- 2,43 (m, 1H), 2,08-0,78 (m, 29H), 1,34 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,96 (s, 6H), 0,90 (s, 3H), 0,85 (s, 6H), 0,84 (s, 3H), 0,40-0,20 (m, 4H); ES-MS: m/z 893,91 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-fluorobutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetil ciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-fluorobutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 0,3 g, 0,335 mmol, 1,0 eq) u metanolu (3 ml) i THF (3 ml) je dodat vodeni 2,5N rastvor KOH (1,0 ml, 2,518 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena, ohlađena na 0°C, pH je podešen na 5,0 sa 1N HCl i ekstrahovan sa DCM (2x25 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 2% metanola u dihlorometanu kao eluenta da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,13 g, 48,32% prinos) u obliku sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,49-4,32 (m, 2H), 3,21-3,04 (m, 9H), 2,85-2,70 (m, 3H), 2,64-2,48 (m, 2H), 2,10-0,78 (m, 29H), 1,33 (s, 3H), 1,0 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,86 (s, 9H), 0,85 (s, 3H), 0,40-0,22 (m, 4H); ES-MS: m/z 803,82 (M+H)<+>.
Primer 13: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2S,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2S,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 4-((2S,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 14, 0,787 g, 2,33 mmol, 2,0 eq) u DCM (16 ml) na 0°C dodat je anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (0,31 ml, 1,86 mmol, 1,6 eq). Reakciona smeša je mešana na 0°C oko 10 minuta. Zatim je u reakcionu smešu dodat 2,6-lutidin (0,21 ml, 1,86 mmol, 1,6 eq), mešan oko 10 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 0,800 g, 1,166 mmol, 1,0 eq) a zatim trietilamin (0,48 ml, 3,498 mmol, 3,0 eq) je dodato u reakcionu smešu i mešano na 0°C oko 1 sat. Reakciona smeša je promenjena na sobnu temperaturu i mešana preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je ugašena vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana sa DCM (3x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 20-30% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,400 g, 34% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): 5 ppm 7,36-7,30 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,45 (dd, J = 11,1, 4,5 Hz, 1H), 3,95-3,92 (m, 1H), 3,44-3,39 (m, 2H), 3,21-3,11 (m, 2H), 3,03-2,93 (m, 5H), 2,84-2,73 (m, 2H), 2,69-2,62 m, 1H), 2,59-2,53 (m, 2H), 2,47-2,35 (m, 2H), 2,08-0,78 (m, 30H), 1,34 (s, 3H), 1,0 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,87 (s, 9H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,36-0,23 (m, 4H), 0,05 (s, 3H), 0,04 (s, 3H); ES-MS: m/z 1005,97 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2S,3S)-3-((tert-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi) karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2S,3S)-3-((tert-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-5b-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 0,400 g, 0,397 mmol, 1,0 eq) u metanolu (4 ml) i THF (4 ml) je dodat vodeni 1,1N KOH rastvor (1,9 ml, 2,98 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 5 sata. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ohlađena na 0°C, zakiseljena sa 1N HCl do pH 4,0 i ekstrahovana sa DCM (3x50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (50 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-6% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,200 g, 55% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,49-4,44 (m, 1H), 4,0-3,92 (m, 1H), 3,40-3,22 (m, 4H), 3,04-2,90 (m, 5H), 2,80 -2,70 (m, 3H), 2,60-2,50 (m, 3H), 2,32 (m, 1H), 2,10-0,78 (m, 36H), 1,33 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,89 (s, 6H), 0,40-0,20 (m, 4H), 0,04 (s, 3H), 0,03 (s, 3H); ES-MS: m/z 915,74 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2S,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR, 13bR)-3a-(((2S,3S))-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina (korak 2, 0,200 g, 0,218 mmol, 1,0 eq) u THF (2 ml) na 0°C je dodat TBAF (0,654 ml, 0,654 mmol, 3,0 eq, 1,0 M u THF). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazala da početni materijal nije završen, ponovo je dodat TBAF (1,526 ml, 1,526 mmol, 7,0 eq) na 0°C, promenjen na sobnu temperaturu i mešan na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom
(50 ml) i ekstrahovana sa DCM (3x30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (50 ml), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i upareni pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-5% metanola u gradijentu dihlorometana. Dobijeno jedinjenje je dalje prečišćeno tretmanom sa etil acetatom (1 ml) i heksanom (10 ml), mešano na sobnoj temperaturi oko 10 minuta, filtrirano i osušeno pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,080 g, 45,7% prinos) kao čvrst.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,46 (dd, J = 11,7, 4,8 Hz, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,42-3,32 (m, 2H), 3,18-3,0 (m, 7H), 2,80-2,50 (m, 7H), 2,08-0,78 (m, 27H), 1,36 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 0,85 (s, 6H), 0,35-0,20 (m, 4H); ES-MS: m/z 801,73 (M+H)<+>.
Primer 14: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-hidroksi-2)-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor (2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)butan-1-ola (Međuproizvod 15, 3,21 g, 8,16 mmol, 1,6 eq) u DCM (50 ml) na 0°C je dodat trifluorometansulfonski anhidrid (1,45 ml, 8,67 mmol, 1,7 eq). Reakciona smeša je mešana na 0°C oko 10 minuta.2,6-lutidin (0,65 ml, 8,67 mmol, 1,7 eq) je dodat i mešan na 0°C tokom 15 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 3,5 g, 5,10 mmol, 1,0 eq) i trietilamin (2,13 ml 15,3 mmol, 3,0 eq) je dodato u reakcionu smešu i mešano na 0°C oko 1 sat. Reakciona smeša je promenjena na sobnu temperaturu i mešana preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (100 ml), bazifikovana vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana sa DCM (3x100 ml).
Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-2% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,0 g, 36.9% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3):δ ppm 7,35 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,6 Hz, 2H), 4,44 (dd, J = 11,1, 4,5 Hz, 1H), 4,01-3,98 (m, 1H), 3,30-3,15 (m, 5H), 2,90-2,32 (m, 10H), 2,08-1,48 (m, 13H), 1,47-1,13 (m, 24H), 1,07-0,78 (m, 31H), 0,38-0,18 (m, 4H), 0,04 (s, 3H), 0,03 (s, 3H); ES-MS: m/z 1063,68 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-hidroksi-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(4-(izopropilsulfonil) piperazin-1-il)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil) ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 2,0 g, 1,88 mmol, 1,0 eq) u THF (20 ml) na 0°C je dodat TBAF (7,52 ml, 7,52 mmol, 4,0 eq, 1,0 M u THF). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana sa DCM (3x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-4% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,500 g, 28% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,36-7,31 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,44 (dd, J = 10,8, 4,5 Hz, 1H), 3,67-3,56 (m, 1H), 3,42-3,33 (m, 4H), 3,25-3,13 (m, 1H), 2,95-2,57 (m, 9H), 2,43-1,90 (m, 6H), 1,88-1,18 (m, 32H), 1,03-0,78 (m, 22H), 0,25-0,24 (m, 4H); ES-MS: m/z 948,93 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-hidroksi-2)-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR, 13bR)-3a-(((2R,3R)-3-hidroksi-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 2, 0,500 g, 0,527 mmol, 1,0 eq) u THF (5 ml) i dodat je metanol (5 ml) na 0°C vodeni 1,5N rastvor KOH (2,63 ml, 3,954 mmol, 7.5 eq). Reakciona smeša je promenjena na sobnu temperaturu i mešana preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (20 ml), ohlađen na 0°C, zakiseljen sa 1N HCl do pH 4,0 i ekstrahovan sa DCM (3x50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (50 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-10% metanola u gradijentu dihlorometana. Dobijeno jedinjenje je tretirano sa DCM (5 ml) i heksanom (40 ml), mešano na sobnoj temperaturi oko 15 minuta i rastvarač je dekantovan. Ponovo su dodati DCM (5 ml) i heksan (20 ml), mešani na sobnoj temperaturi oko 15 minuta, formirani talog je filtriran i sušen pod vakuumom 2 sata da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,180 g, 40% prinos) kao čvrst.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,46 (dd, J = 11,7, 4,8 Hz, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,35 (m, 4H), 3,23-3,14 (m, 1H), 2,92-2,88 (m, 2H), 2,79-2,74 (m, 4H), 2,61-2,51 (m, 4H), 2,10-1,2 (m, 35H), 1,10-0,78 (m, 24H), 0,34-0,25 (m, 4H); ES-MS: m/z 858,82 (M+H)<+>.
Primer 15: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 4-((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 8, 4,14 g, 12,27 mmol, 1,5 eq) u DCM (80 ml) na 0°C dodat je trifluorometansulfonski anhidrid (2,33 ml, 13,9 mmol, 1,7 eq) i mešan je oko 10 minuta.2,6-lutidin (1,6 ml, 13,9 mmol, 1,7 eq) je dodat u reakcionu smešu i mešan na 0°C oko 15 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 16, 5,5 g,
8,18 mmol, 1,0 eq ) i trietilamin (3,42 ml, 24,54 mmol, 3,0 eq) su dodati u reakcionu smešu, mešani na 0°C oko 1 sat i ostavljeni da se mešaju na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Vodeni rastvor natrijum bikarbonata je dodat u reakcionu smešu i ekstrahovan sa DCM (3x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-5% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4,0 g, 49,3% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR
(300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,36-7,30 (m, 5H), 5,14, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,69 (s, 1H), 4,58 (s, 1H), 4,43 (dd, J = 11,7, 4,5 Hz, 1H), 4,03-3,98 (m, 1H), 3,47-3,37 (m, 2H), 3,30-3,18 (m, 2H), 3,10-2,94 (m, 5H), 2,85-2,40 (m, 7H), 2,07-1,98 (m, 2H), 1,93-0,75 (m, 25H), 1,68 (s, 3H), 1,33 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,88 (s, 9H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,83 (s, 3H), 0,07 (s, 6H); ES-MS: m/z 991,93 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 4,0 g, 4,034 mmol, 1,0 eq) u THF (60 ml) na 0°C je dodat TBAF (20,17 ml, 20,17 mmol, 5,0 eq, 1,0 M u THF). Reakciona smeša je promenjena na sobnu temperaturu i mešana preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (50 ml) i ekstrahovana sa DCM (3x50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (2x50 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni korišćenjem 0-5% metanola u DCM gradijentu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,0 g, 56,6% prinos) u obliku čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,35 (m, 5H), 5,14, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,69 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,45-4,40 (m, 1H), 3,72 (m, 1H), 3,45-3,35 (m, 2H), 3,13-3,03 (m, 7H), 2,85-2,73 (m, 2H), 2,70-2,58 (m, 2H), 2,57-2,42 (m, 3H), 2,07-1,98 (m, 2H), 1,90-0,75 (m, 25H), 1,68 (s, 3H), 1,34 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 6H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,83 (s, 3H); ES-MS: m/z 877,84 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 2, 2,0 g, 2,279 mmol, 1,0 eq) u THF (12 ml) i metanolu (12 ml) na 0°C dodat je vodeni 1,5N rastvor KOH (12 ml, 17,09 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je promenjena na sobnu temperaturu i mešana oko 4 sata. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom (20 ml), zakiseljena sa 1N HCl do pH 4,0 i ekstrahovana sa DCM (3x50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (20 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 4-8% metanola u DCM gradijentu. Dobijeno jedinjenje je dalje prečišćeno tretiranjem sa hloroformom (5 ml) i heksanom (20 ml), mešano oko 10 minuta i dekantirano. Ova procedura je ponovljena dva puta, konačno filtrirana i osušena pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,800 g, 44,6% prinosa) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,69 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,50-4,45 (m, 1H), 3,83-3,74 (m, 1H), 3,40-3,07 (m, 9H), 2,80-2,49 (m, 7H), 2,07-0,77 (m, 27H), 1,68 (s, 3H), 1,36 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,85 (s, 6H); ES-MS: m/z 787,60 (M+H)<+>.
Primer 16: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((R)-2-karboksi-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-metoksi-3-oksopropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklo butan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor metil (R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksipropanoata (Međuproizvod 5, 0,34 g, 1,457 mmol, 1,25 eq) u dihlorometanu (16 ml) na 0°C je dodat anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (0,27 ml,
1,632 mmol, 1,4 eq). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 10 minuta, zatim je dodat 2,6-lutidin (0,19 ml, 1,667 mmol, 1,43 eq) i mešana na istoj temperaturi 10 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 0,8 g, 1,166 mmol, 1,0 eq) a zatim trietilamin (0,23 ml, 1,667 mmol, 1,43 eq) je dodato u reakcionu smešu i mešano na 0°C oko 1 sat. Reakciona smeša je promenjena na sobnu temperaturu i mešana oko 4 sata. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je bazifikovana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana dihlorometanom (3x50 ml).
Kombinovani organski sloj je ispran vodom (20 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-3% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,680 g, 64,7% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,35 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,44 (dd, J = 11,1, 4,5 Hz 1H), 3,70 (s, 3H), 3,42-3,35 (m, 1H), 3,35-3,25 (m, 1H), 3,15-2,94 (m, 7H), 2,85-2,57 (m, 5H), 2,08-1,0 (m, 28H), 1,0-0,78 (m, 22H), 0,38-0,20 (m, 4H).
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-metoksi-3-oksopropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U suspenziju od 10% Pd/C (500 mg) u etil acetatu (7 ml) i metanolu (7 ml) dodat je 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-metoksi-3-oksopropil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 0,35 g, 0,386 mmol, 1,0 eq) i amonijum format (0,121 g, 1,933 mmol, 5,0 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 1 sata. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit jastučić i isprana sa 5% metanola u DCM (100 ml). Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 5 do 10% metanola u DCM sa jednim kapljičnim gradijentom sirćetne kiseline. Dobijena čvrsta supstanca je tretirana etil acetatom (2 ml) i heksanom (8 ml) i mešana na sobnoj temperaturi 20 minuta. Formirani precipitati su sakupljeni filtracijom i osušeni pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (40 mg, 12,69% prinosa) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,47-4,45 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,42-3,35 (m, 1H), 3,28 (m, 1H), 3,15-3,02 (m, 4H), 2,98 (m, 3H), 2,85-2,75 (m, 2H), 2,65-2,52 (m, 3H), 2,10-1,18 (m, 25H), 1,10-0,78 (m, 25H), 0,40-0,20 (m, 4H); ES-MS: m/z 815,88 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR, 11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2-karboksi-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-metoksi-3-oksopropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (0,3 g, 0,33 mmol, 1,0 eq) u metanolu (3 ml) i THF (3 ml) je dodat vodeni 2,5N rastvor KOH (1,0 ml, 2,48 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom (10 ml), ohlađena na 0°C, zakiseljena sa 1N HCl do pH 2,0 i ekstrahovana sa DCM (3x25 ml).
Kombinovani organski sloj je ispran vodom (20 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni korišćenjem jedne kapi sirćetne kiseline u 10% metanolu u DCM kao eluenta. Dobijeno jedinjenje je dalje prečišćeno tretiranjem sa etil acetatom (20 ml), zagrevano do refluksa oko 30 minuta. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, čvrsta supstanca je filtrirana, isprana etil acetatom (5 ml) i osušena pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, 18,8% prinos) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ ppm 4,38-4,32 (m, 1H), 3,08-2,93 (m, 8H), 2,82-2,68 (m, 4H), 2,37-2,23 (m, 2H), 2,0-0,78 (m, 26H), 1,27 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,91 (s, 6H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H) ), 0,83 (s, 3H), 0,4-0,18 (m, 4H); ESI-MS: m/z 823,55 (M+Na)<+>.
Primer 17: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-(2-(2-metoksietoksi)acetoksi)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R))-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina (Primer 8, 0,400 g, 0,499 mmol, 1,0 eq) u DCM (10 ml) dodat je DMAP (0,030 g, 0,24 mmol, 0,5 eq), EDC HCI (0,430 g, 2,24 mmol, 4,5 eq) i 2-(2-metoksietoksi) sirćetne kiseline (Međuproizvod 17, 0,167 g, 1,24 mmol, 2,5 eq, korak 2). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (10 ml) i ekstrahovana sa DCM (3x20 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (20 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-4% metanola u gradijentu dihlorometana. Dobijeno jedinjenje je dalje prečišćeno tretiranjem sa hloroformom (2 ml) i heksanom (8 ml), mešano na sobnoj temperaturi oko 30 minuta, filtrirano i osušeno pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,100 g, 21,8% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5,15-5,09 (m, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,16 (s, 2H), 3,73-3,71 (m, 2H), 3,62-3,58 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 3,27-3,19 (m, 4H), 3,0-2,95 (m, 5H), 2,85-2,73 (m, 2H), 2,65-2,55 (m, 1H), 2,50-2,35 (m, 2H), 2,08-2,0 (m, 2H), 1,90-0,78 (m, 27H), 1,36 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,38-0,25 (m, 4H); ES-MS: m/z 917,95 (M+H)<+>.
Primer 18: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((12R,13R)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((12R,13R)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 4-((12R,13R)-14-hidroksi-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-13-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 18, 0,775 g, 2,099 mmol, 1,6 eq) u DCM (20 ml) na 0°C dodat je anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (0,39 ml, 2,361 mmol, 1,8 eq). Posle mešanja tokom 10 minuta na 0°C, dodat je 2,6-lutidin (0,3 ml, 2,623 mmol, 2,0 eq) i mešan na istoj temperaturi oko 10 minuta.1-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-3-benzil (1S,3R)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (Međuproizvod 1, 0,900 g, 1,311 mmol, 1,0 eq) i trietilamin (0,5 ml 3,935 mmol, 3,0 eq) je dodato u reakcionu smešu i mešano na 0°C oko 1 sat. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (100 ml), isprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (100 ml), vodom i rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-5% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,0 g, 73,5% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,35 (m, 5H), 5,15, 5,09 (ABk, JAB= 12,6 Hz, 2H), 4,44 (dd, J = 10,5, 4,2 Hz, 1H), 3,67-3,65 (m, 4H), 3,64-3,61 (m, 6H), 3,60-3,58 (m, 1H), 3,57-3,52 (m, 3H), 3,45-3,40 (m, 1H), 3,38 (s, 3H), 3,36-3,27 (m, 1H), 3,23-3,10 (m, 1H), 3,09-3,06 (m, 1H), 3,05-2,92 (m, 6H), 2,83-2,64 (m, 3H), 2,60-2,54 (m, 3H), 2,10-0,78 (m, 27H), 1,34 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,40-0,19 (m, 4H); ES-MS: m/z 1038,95 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((12R,13R)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((12R,13R)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 1, 1,0 g, 0,963 mmol, 1,0 eq) u THF (10 ml) i metanolu (10 ml) na 0°C dodat je vodeni 2,5N rastvor KOH (2,89 ml, 7,229 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, ohlađena na 0°C, zakiseljena sa 1N HCl do pH 4,0 i ekstrahovana sa DCM (2x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (100 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-7% metanola u DCM gradijentu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,050 g, 5,47% prinos) u obliku sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,46 (dd, J = 11,4, 4,8 Hz, 1H), 3,65-3,50 (m, 14H), 3,42-3,32 (m, 5H), 3,18-3,10 (m, 2H), 3,05-2,95 (m, 6H), 2,82-2,72 (m, 3H), 2,70-2,50 (m, 3H), 2,08-0,76 (m, 27H), 1,36 (s, 3H), 1,07 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,40-0,20 (m, 4H); ES-MS: m/z 947,99 (M+H)<+>.
Primer 19: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR, 11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-(2-(2-metoksietoksi)acetoksi)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-1H -ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina (Primer-15, 0,650 g, 0,825 mmol, 1,0 eq) u DCM (13 ml) je dodat 2-(2-metoksietoksi)sirćetna kiselina (Međuproizvod 17, 0,276 g, 2,06 mmol, 2,5 eq), DMAP (0,050 g, 0,41 mmol, 0,5 eq) i EDC.HCl (0,711 g, 3,71 mmol, 4,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (50 ml) i ekstrahovana sa DCM (3x50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (50 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-6% metanola u gradijentu dihlorometana. Dobijeno jedinjenje je dalje prečišćeno tretiranjem sa etil acetatom (5 ml) i heksanom (50 ml), mešano na sobnoj temperaturi oko 30 minuta, filtrirano i osušeno pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,480 g, 64% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5,14-5,09 (m, 1H), 4,68 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,53-4,48 (m, 1H), 4,17 (s, 2H), 3,75-3,68 (m, 2H), 3,62-3,57 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 3,33-2,85 (m, 9H), 2,81-2,40 (m, 5H), 2,05-0,77 (m, 26H), 1,68 (s, 3H), 1,38 (s, 3H), 1,24 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,12 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,85 (s, 3H); ES-MS: m/z 904,04 (M+H)<+>.
Primer 20: Preparat 4-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)-2,2-dimetil-4-oksobutanska kiselina:
Korak 1: Sinteza (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((terc-butoksikarbonil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il-acetat:
U mešani rastvor terc-butil ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-9-hidroksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-3aHciklopenta[a]hrisen-3a-il)karbamat (pripremljen kako je opisano u WO 2017/149518 A2, 12 g, 22,734 mmol, 1,0 eq) u THF (120 ml) na 0°C dodat je trietilamin (9,5 ml, 68,203 mmol, 3,0 eq), DMAP (0,333 g, 2,728 mmol, 0,12 eq) i anhidrid sirćetne kiseline (3 ml, 31,828 mmol, 1,4 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (200 ml) i isprana vodom (2x200 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je tretirano sa n-heksanom (100 ml), mešano na sobnoj temperaturi oko 1 sat, filtrirano i osušeno pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (12 g, 93% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,71 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,47 (dd, J = 9,9, 4,5 Hz, 1H), 4,34 (s, 1H), 2,58-2,30 (m, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,02-0,77 (m, 22H), 1,68 (s, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,01 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,83 (s, 3H); ES-MS: m/z 570,39 (M+H)<+>.
Korak 2: Sinteza (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2)-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il acetat:
U mešani rastvor (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((terc-butoksikarbonil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il-acetat (korak 1, 12 g, 21,057 mmol, 1,0 eq) u 1,4-dioksanu (24 ml) je dodat 4N HCl u 1,4-dioksanu (24 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i bazifikovana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata. Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana i isprana vodom.
Čvrsta supstanca je rastvorena u DCM, osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Čvrsta supstanca je dalje prečišćena trituracijom sa n-heksanom (100 ml), filtrirana, isprana heksanom i osušena pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7 g, 70,7% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,71 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,47 (dd, J = 9,0, 5,4 Hz, 1H), 2,57-2,48 (m, 1H), 2,04 (s, 3H), 1,68 (s, 3H), 1,66-0,77 (m, 24H), 1,04 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,83 (s, 3H); ES-MS: m/z 470,44 (M+H)<+>.
Korak 3: Sinteza (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il-acetat:
U mešani rastvor 4-((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-hidroksibutan-2-il)tiomorfolin 1,1-dioksida (Međuproizvod-8, 8,5 g, 25,326 mmol, 1,7 eq) u DCM (70 ml) na 0°C je dodat 2,6-lutidin (3,8 ml, 32,775 mmol, 2,2 eq). Posle 10 minuta mešanja na 0°C, dodat je trifluorometan sulfonski anhidrid (5 ml, 29,795 mmol, 2,0 eq) i mešan na 0°C oko 20 minuta. (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S, 11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il) ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il-acetat (korak 2, 7 g, 14,897 mmol, 1,0 eq) i trietilamin (7,27 ml, 52,142 mmol, 3,5 ew) su dodati u reakcionu smešu i mešani na 0°C oko 1 sat. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (200 ml), isprana zasićenim rastvorom natrijum karbonata (100 ml) i vodom (100 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-10% etil acetata u gradijentu heksana. Dobijeno jedinjenje je dalje prečišćeno tretiranjem sa nheksanom, filtrirano i osušeno pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7,0 g, 59% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,68 (s, 1H), 4,58 (s, 1H), 4,49-4,44 (m, 1H), 4,08-4,0 (m, 1H), 3,44-3,39 (m, 2H), 3,28-3,22 (m, 2H), 3,06-3,01 (m, 4H), 2,60-2,40 (m, 4H), 2,04 (s, 3H), 1,93-0,76 (m, 27H), 1,68 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,87 (s, 9H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,83 (s, 3H), 0,07 (s, 6H); ES-MS: m/z 789,67 (M+H)<+>.
Korak 4: Sinteza 4-((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-9-hidroksi-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-3aH-ciklopenta[a]hrisen-3a-il)amino)butan-2-il)tiomorfolin-1,1-dioksid:
U mešani rastvor (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il acetat (korak 3, 7,0 g, 8,868 mmol, 1,0 eq) u metanolu (70 ml) i THF (70 ml) je dodat vodeni rastvor 1N KOH (53,2 ml, 53,212 mmol, 6,0 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dodat je DCM (400 ml) i ispran vodom (200 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 0-30% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6,0 g, 91% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,69 (s, 1H), 4,58 (s, 1H), 4,04-3,99 (m, 1H), 3,44-3,39 (m, 2H), 3,28-3,16 (m, 3H), 3,07-2,96 (m, 4H), 2,61-2,40 (m, 4H), 1,97-0,66 (m, 27H), 1,68 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,87 (s, 9H), 0,82 (s, 3H), 0,75 (s, 3H), 0,07 (s, 6H); ES-MS: m/z 747,74 (M+H)<+>.
Korak 5: Sinteza 1-(tert-butil) 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-((tert-butildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-2,2-dimetilsukcinat:
U mešani rastvor 4-((2R,3R)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-9-hidroksi-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-3aH-ciklopenta[a]hrisen-3a-il)amino)butan-2-il)tiomorfolin 1,1-dioksid (korak 4, 1 g, 1,338 mmol, 1,0 eq) u DCM (20 ml) je dodat EDC.HCl (0,897 g, 4,683 mmol, 3,5 eq), DMAP (0,081 g, 0,669 mmol, 0,5 eq) i 4-(terc-butoksi)-3,3-dimetil-4-oksobutanska kiselina (pripremljena kao što je opisano u QO 2013/020245, 0,676 g, 3,345 mmol, 2,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (100 ml) i isprana vodom (100 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 0-30% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1 g, 80,2% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,68 (s, 1H), 4,58 (s, 1H), 4,48 (dd, J = 10,5, 6,0 Hz, 1H), 4,02-3,99 (m, 1H), 3,47-3,39 (m, 2H), 3,27-3,22 (m, 2H), 3,0 (m, 4H), 2,62-2,40 (m, 4H), 2,53 (s, 2H), 1,97-0,75 (m, 33H), 1,68 (s, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,04 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,87 (s, 9H), 0,84 (s, 6H), 0,82 (s, 3H), 0,07 (s, 6H); ES-MS: m/z 932,06 (M+H)<+>.
Korak 6: Sinteza 1-(terc-butil) 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1)-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-2,2-dimetilsukcinat:
U mešani rastvor 1-(terc-butil) 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2R,3R)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino) butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-2,2-dimetilsukcinat (korak 1, 1 g, 1,073 mmol, 1,0 eq) u THF (10 ml) je dodat TBAF (4,29 ml, 4,294 mmol, 4,0 eq, 1,0M). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (100 ml) i isprana vodom (100 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-4% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,800 g, 91,2% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,68 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,48 (dd, J = 10,2, 6,0 Hz, 1H), 3,73-3,68 (m, 1H), 3,42-3,37 (m, 2H), 3,18-3,05 (m, 6H), 2,65-2,45 (m, 6H), 1,96-0,76 (m, 24H), 1,68 (s, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,26 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,23 (s, 3H), 1,22 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,84 (s, 6H), 0,82 (s, 3H); ES-MS: m/z 818,12 (M+H)<+>.
Korak 7: Sinteza 4-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)-2,2-dimetil-4-oksobutanska kiselina:
U mešani rastvor 1-(terc-butil) 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-2,2-dimetilsukcinat (korak 2, 0,800 g, 0,978 mmol, 1,0 eq) u 1,4-doksanu (2 ml) je dodat 4N HCl u 1,4-dioksanu (2 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je rastvoreno u DCM (100 ml) i isprano vodom (100 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-5% metanola u gradijentu dihlorometana. Dobijeno jedinjenje je dalje prečišćeno rekristalizacijom sa DCM:heksanom (1:5, 10 ml). Smeša je ohlađena, filtrirana, isprana heksanom i osušena pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,500 g, 67% prinos) u vidu sivo-bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,69 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,49-4,44 (m, 1H), 3,73 (m, 1H), 3,42-3,37 (m, 2H ), 3,20-3,05 (m, 6H), 2,70-2,48 (m, 6H), 1,95-0,75 (m, 33H), 1,67 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,83 (s, 3H), 0,80 (s, 3H); ES-MS: m/z 762,0 (M+H)<+>.
Primer 21: Priprema (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((15R,16R)-16-(1, 1-dioksidotiomorfolino)-15-metil-13-okso-2,5,8,11,14-pentaoksaheptadekan-17-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((2R,3R))-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina (Primer 15, 0,350 g, 0,444 mmol, 1,0 eq) u DCM (5 ml) je dodat EDC.HCl (0,383 g, 2,000 mmol, 4,5 eq), DMAP (0,027 g, 0,222 mmol, 0,5 eq) i 2,5,8,11-tetraoksatridekan-13-oksobutanska kiselina (0,247 g, 1,111 mmol, 2,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (100 ml), isprana sa 1N HCl (50 ml) i vodom (100 ml). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-5% metanola u gradijentu dihlorometana. Dobijeno jedinjenje je dalje prečišćeno tretiranjem sa 1:8 (MTBE: heksan; 18 ml), filtrirano, isprano sa n-heksanom i osušeno pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (60 mg, 13,6% prinos) kao sivobela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5,13-5,08 (m, 1H), 4,68 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,53-4,48 (m, 1H), 4,23-4,17 (m, 2H), 3,78-3,63 (m, 10H), 3,57-3,54 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 3,30-2,86 (m, 8H), 2,82-2,73 (m, 2H), 2,63-2,32 (m, 6H), 2,10-0,78 (m, 27H), 1,68 (s, 3H), 1,38 (s, 3H), 1,11 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,85 (s, 3H).
Primer 22: Preparat (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((12R,13R)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
Korak 1: Sinteza (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((12R,13R)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il-acetat:
U mešani rastvor 4-((12R,13R)-14-hidroksi-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-13-il)tiomorfolin-1,1-dioksida (Međuproizvod 18, 0,849 g, 2,298 mmol, 1,8 eq) u DCM (20 ml) na 0°C dodat je 2,6-lutidin (0,32 ml, 2,79 mmol, 2,2 eq). Reakciona smeša je mešana na istoj temperaturi oko
10 minuta, dodat je triflični anhidrid (0,43 ml, 2,54 mmol, 2,0 eq) i mešana na 0°C oko 15 minuta. (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-ilacetat (Primer 20-korak 2, 0,600 g, 1,277 mmol, 1,0 eq) i trietilamin (0,56 ml, 4,06 mmol, 3,5 eq) su dodati u reakcionu smešu, mešana je na 0°C 1 sat i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal potrošen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je zalužena sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana sa DCM (3x50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (30 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Druga serija od 500 mg sa istom eksperimentalnom procedurom je kombinovana i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem gradijenta 40-50% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,0 g, 95,33% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,69 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,49-4,44 (m, 1H), 3,66-3,53 (m, 13H), 3,45-3,35 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 3,07-2,97 (m, 6H), 2,04 (s, 3H), 1,90-0,77 (m, 31H), 1,68 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,83 (s, 3H).
Korak 2: Sinteza 4-((12R,13R)-14-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR, 11bR,13aR,13bR)-9-hidroksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-3aH-ciklopenta[a]hrisen-3a-il)amino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-13-il)tiomorfolin-1,1-dioksid:
U mešani rastvor (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((12R,13R)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il-acetat (korak 1, 1,0 g, 1,217 mmol, 1,0 eq) u metanolu (10 ml) i THF (10 ml) je dodat vodeni 2,5N rastvor KOH (3,57 ml, 9,13 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom (40 ml) i neutralizovana sa 1N rastvorom HCl i ekstrahovana sa DCM (3x50 ml).
Kombinovani organski sloj je ispran vodom (30 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-3% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,500 g, 52,74% prinos) kao sivo-bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,69 (s, 1H), 4,58 (s, 1H), 3,66-3,53 (m, 14H), 3,38 (s, 3H), 3,30-3,0 (m, 8H), 2,58-2,56 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 2,0-0,75 (m, 44 H), 1,67 (s, 3H).
Korak 3: Sinteza 1-benzil 3-((1R,3aS,SaR,SbR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((12R,13R)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat:
U mešani rastvor 4-((12R,13R)-14-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR, 11bR,13aR,13bR)-9-hidroksi-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-3aH-ciklopenta[a]hrisen-3a-il)amino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-13-il)tiomorfolin-1,1-dioksid (korak 2, 0,500 g, 0,641 mmol, 1,0 eq) u DCM (20 ml) je dodat (1S,3R)-3-((benziloksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina (pripremljena prema proceduri opisanoj u WO2011/007230A2, 0,505 g, 1,925 mmol, 3,0 eq) praćena EDC.HCl (0,733 g, 3,846 mmol, 6,0 eq) i DMAP (0,070 g, 0,577 mmol, 0,9 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je razblažena vodom (30 ml) i ekstrahovana sa DCM (3x30 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (30 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-3% metanola u gradijentu dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,060 g, 22,8% prinos) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7,34 (m, 5H), 5,14, 5,09 (ABk, JAB= 12,3 Hz, 2H), 4,69 (s, 1H), 4,58 (s, 1H), 4,46-4,40 (m, 1H), 4,06-4,0 (m, 1H), 3,78-3,52 (m, 13H), 3,37 (s, 5H), 3,07-2,97 (m, 6H), 2,84-2,52 (m, 5H), 2,42-2,38 (m, 1H), 2,08-0,77 (m, 31H), 1,68 (s, 3H), 1,33 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,83 (s, 3H).
Korak 4: Sinteza (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((12R,13R)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina:
U mešani rastvor 1-benzil 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aR,13bR)-3a-(((12R,13R)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-(1R,3S)-2,2-dimetilciklobutan-1,3-dikarboksilat (korak 3, 0,200 g, 0,195 mmol, 1,0 eq) u THF (2 ml) i metanolu (2 ml) dodat je vodeni 1,5N rastvor KOH (0,97 ml, 1,46 mmol, 7,5 eq). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 dana. TLC je pokazao da je početni materijal završen i da je uočen željeni proizvod. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, razblažena vodom (10 ml), zakiseljena sa 1N HCl do pH 4 do 5 i ekstrahovana sa DCM (3x50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (30 ml), osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela korišćenjem 0-5% metanola u gradijentu dihlorometana. Dobijeno jedinjenje je tretirano etil acetatom (2 ml) i heksanom (8 ml), mešano na sobnoj temperaturi 20 minuta, rastvarač je dekantovan i ovaj postupak je ponovljen dva puta, na kraju filtriran, ispran heksanom (2 ml) i osušen pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0,060 g, 32,96% prinos) u obliku čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4,68 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,54 (m, 1H), 3,80-3,52 (m, 12H), 3,37 (s, 3H), 3,27-2,32 (m, 16H), 2,03-0,77 (m, 25H), 1,68 (s, 3H), 1,38 (s, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,87 (s, 6H), 0,83 (s, 3H); ES-MS: m/z 933,94 (M+H)<+>.
Biološka aktivnost
Jedinjenja koja su ovde opisana su testirana na njihovu antivirusnu aktivnost prema postupcima poznatim osobi sa uobičajenim znanjem u predmetnoj oblasti. Na primer, sledeći protokoli se mogu koristiti za testiranje jedinjenja. Ovi protokoli su ilustrativni i ne ograničavaju se na obim pronalaska.
Primer 23: Procena antivirusne aktivnosti jedinjenja protiv HIV-1 soja 92HT599 u MT2 ćelijama:
MT2 ćelije su inficirane HIV-1 sojem 92HT599 (10 TCID 50/30000 ćelija). Inficirane ćelije su postavljene u koncentraciju od -30.000 ćelija po jažici u ploču sa 96 jažica. Test jedinjenje je dodato na mikro ploču u definisanom formatu sa krajnjom koncentracijom DMSO (nosač) ne većom od 1%. Inkubacija je sprovedena u CO2 inkubatoru ∼ 96 sati za virusnu infekciju. Na kraju perioda inkubacije, alikvot iz svake jažice je uzet za procenu p24. Kvantifikacija p24 je indeks za antivirusnu aktivnost jedinjenja. Procenat inhibicije je izračunat u odnosu na kontrolne vrednosti (kontrole vehikla). Procena p24 je izvršena korišćenjem Advance biosciences kompleta prema proceduri koju je detaljno naveo dobavljač.
Za test vezivanja seruma, gde se „A“ odnosi na vrednost IC50 manju od 10 nM, „B“ se odnosi na vrednost IC50 u opsegu od 10,01-20 nM, a „C“ se odnosi na veće vrednosti IC50 od 20 nM. Vrednosti IC50 (nM) su navedene u Tabeli-1 ispod.
Tabela-1:
Primer 24: Procena antivirusne aktivnosti jedinjenja protiv pNL4-3/VT i V7A sojeva u MT4 ćelijama:
MT4 ćelije su transfektovane HIV-1 plazmidom (pNL4-3-VT i V7A) (Ćelije su inkubirane sa potrebnim brojem TCID50 HIV-1 tokom 1,5 h na 37°C). Nakon infekcije, inficirane ćelije su postavljene u koncentraciju od 3 × 10<4>ćelija po jažici u ploču sa 96 jažica. Test jedinjenje je dodato na test ploču u definisanom formatu sa krajnjom koncentracijom DMSO ne više od 1%. Inkubacija je sprovedena u CO2 inkubatoru 4 dana za virusnu infekciju. Na kraju perioda inkubacije, alikvot iz svake jažice je uzet za procenu p24. Procena p24 je izvršena korišćenjem Advance biosciences kompleta prema proceduri koju je detaljno naveo dobavljač.
Za pNL4-3 VT test, odabrana jedinjenja pokazuju IC50 naznačeno time što se „A“ odnosi na IC50 vrednost manju od 10 nM, „B“ se odnosi na IC50 vrednost u opsegu od 10,01-50 nM, a „C“ se odnosi na IC50 vrednosti veće od 50 nM;
Za pNL4-3 V7A test, odabrana jedinjenja pokazuju IC50 naznačeno time što se „A“ odnosi na IC50 vrednost manju od 1-50 nM, „B“ se odnosi na IC50 vrednost u opsegu od 50,01-100 nM, a „C“ se odnosi na IC50 vrednosti veće od 100 nM; Vrednosti IC50 (nM) su date u Tabeli-2.
Tabela-2
Reference
1. Antiviral methods and protocols (Izd.: D Kinchington i R. F. Schinazi) Humana Press Inc., 2000.
2. HIV protocols (Izd.: N. L. Michael i J. H. Kim) Humana Press Inc, 1999.
3. DAIDS Virology manual from HIV laboratories, Publikacija NIH-97-3838, 1997.
4. HIV-1 p24 antigen capture assay, enzyme immunoassay for detection of Human immunodeficiency Virus Type 1 (HIV-1) p24 in tissue culture media -Advanced bio science laboratories, Inc kit procedure.
_____________________

Claims (9)

  1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje formule (I):
    naznačeno time što je R1 izabran između
    R2 izabran između C1-C6 alkila, opciono supstituisanog C2-C6 alkenila ili opciono supstituisanog C3-C8 cikloalkila; naznačeno time što je opcioni supstituent C1-C6 alkil; R3 vodonik; R4 izabran između opciono supstituisanog C1-C6 alkila ili -C(O)ORa; naznačeno time što je C1-C6 alkil etil i opcioni supstituent je izabran između halo, hidroksi, alkoksi ili -OC(O)CH2 alkoksi; naznačeno time što se „alkoksi“ odnosi na ravan ili razgranati ugljovodonični lanac sa kiseonikovim radikalom koji se sastoji od atoma ugljenika i vodonika, koji sadrži zasićenje ili nezasićenje, koji ima od jednog do osam atoma ugljenika, i koji je vezan preko atoma kiseonika za ostatak molekula pomoću jedne veze; i jedan od atoma vodonika u alkoksi grupi može biti dalje supstituisan sa jednom ili više alkoksi grupa da bi se dalje povećala dužina alkoksi lanca sa grupom koja se bira između metiloksi, etiloksi, izopropoksi, n-propiloksi, t-butiloksi, 1-metiletiloksi (izopropiloksi), nbutiloksi, n-pentiloksi, 1,1-dimetiletiloksi (t-butiloksi),
    prsten
    i Ra vodonik, ili C1-C6 alkil ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje je jedinjenje formule (IA):
    naznačeno time što je R2 ili
    R3 vodonik; R4 izabran između opciono supstituisanog C1-C6 alkila ili -C(O)ORa; naznačeno time što je C1-C6 alkil etil i opcioni supstituent je izabran između halo, hidroksi, alkoksi ili -OC(O)CH2 alkoksi; naznačeno time što se „alkoksi“ odnosi na ravan ili razgranati ugljovodonični lanac sa kiseonikovim radikalom koji se sastoji od atoma ugljenika i vodonika, koji sadrži zasićenje ili nezasićenje, koji ima od jednog do osam atoma ugljenika, i koji je vezan preko atoma kiseonika za ostatak molekula pomoću jedne veze; i jedan od atoma vodonika u alkoksi grupi može biti dalje supstituisan sa jednom ili više alkoksi grupa da bi se dalje povećala dužina alkoksi lanca sa grupom koja se bira između metiloksi, etiloksi, izopropoksi, n-propiloksi, t-butiloksi, 1-metiletiloksi (izopropiloksi), nbutiloksi, n-pentiloksi, 1,1-dimetiletiloksi (t-butiloksi),
    prsten
    i Ra vodonik ili C1-C6 alkil ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje je jedinjenje formule (IB):
    naznačeno time što je R3 vodonik; R4 izabran između opciono supstituisanog C1-C6 alkila ili -C(O)ORa; naznačeno time što je C1-C6 alkil etil i opcioni supstituent je izabran između halo, hidroksi, alkoksi ili -OC(O)CH2 alkoksi; naznačeno time što se „alkoksi“ odnosi na ravan ili razgranati ugljovodonični lanac sa kiseonikovim radikalom koji se sastoji od atoma ugljenika i vodonika, koji sadrži zasićenje ili nezasićenje, koji ima od jednog do osam atoma ugljenika, i koji je vezan preko atoma kiseonika za ostatak molekula pomoću jedne veze; i jedan od atoma vodonika u alkoksi grupi može biti dalje supstituisan sa jednom ili više alkoksi grupa da bi se dalje povećala dužina alkoksi lanca sa grupom koja se bira između metiloksi, etiloksi, izopropoksi, n-propiloksi, t-butiloksi, 1-metiletiloksi (izopropiloksi), nbutiloksi, n-pentiloksi, 1,1-dimetiletiloksi (t-butiloksi),
    , Ra vodonik ili C1-C6 alkil ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
  4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, izabrano iz grupe koja se sastoji od: (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-))-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina, (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-fluorobutil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]krisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina, (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR) )-3a-(((2S,3S)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(1-metilciklopropil)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina, (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR),9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-3-hidroksi-2-(4-(izopropilsulfonil)piperazin-1-il)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina, (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina, (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R))-2-karboksi-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina, (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR) -3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-(2-(2-metoksietoksi)acetoksi)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina, (1R,3S)-3-((((1R),3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((12R,13R)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(1-metilciklopropil)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina, (1R,3S)-3-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2R, 3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-(2-(2-metoksietoksi)acetoksi)butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina, 4-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2R,3R)-2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-3-hidroksibutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikosahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)-2,2-dimetil-4-oksobutanska kiselina (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((15R,16R)-16-(1,1-dioksidotiomorfolino)-15-metil-13-okso-2,5,8,11,14-pentaoksaheptadekan-17-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina i (1R,3S)-3-((((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S),11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-(((12R,13R)-13-(1,1-dioksidotiomorfolino)-12-metil-2,5,8,11-tetraoksatetradekan-14-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)ikozahidro-1H-ciklopenta[a]hrisen-9-il)oksi)karbonil)-2,2-dimetilciklobutan-1-karboksilna kiselina, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
  5. 5. Farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4 i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.
  6. 6. Farmaceutski sastav prema patentnom zahtevu 5, naznačeno time što je farmaceutski prihvatljiv ekscipijent nosač ili razblaživač.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, ili sastav prema bilo kom od patentnih zahteva 5-6, za upotrebu u postupku za prevenciju, poboljšanje ili lečenje bolesti, poremećaja ili sindroma posredovanih virusom.
  8. 8. Jedinjenje ili sastav za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, naznačena time što je virusom posredovana bolest, poremećaj ili sindrom HIV infekcija, HBV infekcija, HCV infekcija, retrovirusna infekcija genetski povezana sa AIDS-om, respiratorni poremećaji (uključujući sindrom respiratornog distresa kod odraslih (ARDS)), inflamatorna bolest ili njihova kombinacija.
  9. 9. Jedinjenje ili sastav za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, naznačeno time što je pomenuti postupak postupak za lečenje HIV infekcije. ______________________ Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Kneginje Ljubice 5, 11000 Beograd 126
RS20231163A 2019-02-11 2020-02-11 Novi derivati triterpena kao inhibitori hiv-a RS64915B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN201941005217 2019-02-11
EP20720927.1A EP3924361B1 (en) 2019-02-11 2020-02-11 Novel triterpene derivatives as hiv inhibitors
PCT/IB2020/051048 WO2020165741A1 (en) 2019-02-11 2020-02-11 Novel triterpene derivatives as hiv inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64915B1 true RS64915B1 (sr) 2023-12-29

Family

ID=70416451

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20231163A RS64915B1 (sr) 2019-02-11 2020-02-11 Novi derivati triterpena kao inhibitori hiv-a

Country Status (25)

Country Link
US (2) US12275712B2 (sr)
EP (2) EP3924361B1 (sr)
JP (1) JP7648531B2 (sr)
KR (1) KR102877899B1 (sr)
CN (1) CN113727989B (sr)
AU (1) AU2020222299C1 (sr)
BR (1) BR112021015762A2 (sr)
CA (1) CA3129743A1 (sr)
DK (1) DK3924361T3 (sr)
EA (1) EA202192111A1 (sr)
ES (1) ES2965305T3 (sr)
FI (1) FI3924361T3 (sr)
HR (1) HRP20231582T1 (sr)
HU (1) HUE064262T2 (sr)
IL (1) IL285487B2 (sr)
LT (1) LT3924361T (sr)
MX (1) MX2021009584A (sr)
MY (1) MY201070A (sr)
PL (1) PL3924361T3 (sr)
PT (1) PT3924361T (sr)
RS (1) RS64915B1 (sr)
SI (1) SI3924361T1 (sr)
SM (1) SMT202300444T1 (sr)
WO (1) WO2020165741A1 (sr)
ZA (1) ZA202106037B (sr)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4103579A4 (en) * 2020-02-11 2024-05-01 Hetero Labs Limited NOVEL TRITEPENDENT DERIVATIVES AS HIV INHIBITORS
WO2026074526A1 (en) 2024-10-04 2026-04-09 Hetero Labs Limited 1,2-dicarboxamide compounds as kinase inhibitors

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58152815A (ja) 1982-03-05 1983-09-10 Tamio Nishimura 医療用抗ウイルス剤
AU699168B2 (en) 1993-07-09 1998-11-26 University Of Pittsburgh Selection and use of antiviral peptides
WO1998046238A1 (en) 1997-04-15 1998-10-22 Medichem Research, Inc. Biflavinoids and derivatives thereof as antiviral agents, alone or in combination with at least one known antiviral agent
HUP9701080A3 (en) 1997-06-23 1999-05-28 Gene Res Lab Inc New York N Pharmaceutical composition containing a compound of antiviral activity and a hydroximic acid ester derivative
US6427248B1 (en) 1997-10-09 2002-08-06 David M. Albert Grip-enhancing glove
AU7268000A (en) 1999-07-21 2001-02-13 Martin Heinkelein Method for quantization of the antiviral effect of antiviral active principles
WO2003037908A1 (en) 2001-10-31 2003-05-08 Ribapharm Inc. Antiviral combination therapy and compositions
EP1594885B8 (de) 2003-02-11 2009-03-25 Novelix Pharmaceuticals, Inc. Medikament zur wachstumsinhibierung von tumoren
WO2004089357A2 (en) 2003-04-02 2004-10-21 Regents Of The University Of Minnesota Anti-fungal formulation of triterpene and essential oil
TW200628161A (en) 2004-11-12 2006-08-16 Panacos Pharmaceuticals Inc Novel betulin derivatives, preparation thereof and use thereof
WO2008127364A2 (en) 2006-10-13 2008-10-23 Myriad Genetics, Inc. Antiviral compounds and use thereof
TW200837074A (en) 2006-11-03 2008-09-16 Panacos Pharmaceuticals Inc Extended triterpene derivatives
CN104844678B (zh) 2007-05-11 2018-02-09 香港科技大学 具有神经保护和增强记忆活性的受体调节剂
CN101367861A (zh) 2007-08-15 2009-02-18 中国药科大学 2-羟基-3-脱氧五环三萜类化合物及其衍生物、其制备方法及用途
AU2009214779A1 (en) 2008-02-14 2009-08-20 Virochem Pharma Inc. Novel 17beta lupane derivatives
GB2474813B (en) 2008-09-19 2014-05-28 Biotechnology Res Corp Ltd Triterpenoid compounds and methods of use thereof
US9067966B2 (en) 2009-07-14 2015-06-30 Hetero Research Foundation, Hetero Drugs Ltd. Lupeol-type triterpene derivatives as antivirals
CN102399254A (zh) 2010-09-07 2012-04-04 中国药科大学 新型五环三萜衍生物、其制备方法及用途
JP6001560B2 (ja) 2011-01-31 2016-10-05 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｈｉｖ成熟阻害活性を有するｃ−１７およびｃ−３修飾トリテルペノイド
WO2013020245A1 (en) 2011-08-08 2013-02-14 Glaxosmithkline Llc Carbonyl derivatives of betulin
KR20130028442A (ko) 2011-09-09 2013-03-19 학교법인 한동대학교 항노화 활성을 갖는 베툴린산과 그 유도체 및 이를 함유하는 조성물
CA2849475A1 (en) * 2011-09-21 2013-03-28 Bristol-Myers Squibb Company Novel betulinic acid derivatives with antiviral activity
US8906889B2 (en) 2012-02-15 2014-12-09 Bristol-Myers Squibb Company C-3 cycloalkenyl triterpenoids with HIV maturation inhibitory activity
WO2013160810A2 (en) 2012-04-24 2013-10-31 Hetero Research Foundation Novel betulinic acid derivatives as hiv inhibitors
US8889854B2 (en) 2012-05-07 2014-11-18 Bristol-Myers Squibb Company C-17 bicyclic amines of triterpenoids with HIV maturation inhibitory activity
US9637516B2 (en) 2012-12-31 2017-05-02 Hetero Research Foundation Betulinic acid proline derivatives as HIV inhibitors
EA027371B1 (ru) 2013-02-06 2017-07-31 Бристол-Майерс Сквибб Компани C-19 модифицированные тритерпеноиды с ингибиторной активностью созревания вич
JP6186012B2 (ja) 2013-02-25 2017-08-23 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃ−３アルキルおよびアルケニル修飾ベツリン酸誘導体
WO2017017630A1 (en) 2015-07-28 2017-02-02 Hetero Research Foundation Novel betulinic substituted amide derivatives as hiv inhibitors
WO2017149518A1 (en) * 2016-03-04 2017-09-08 Hetero Labs Limited C-3 novel triterpene with c-17 amine derivatives as hiv inhibitors
EP4103579A4 (en) * 2020-02-11 2024-05-01 Hetero Labs Limited NOVEL TRITEPENDENT DERIVATIVES AS HIV INHIBITORS

Also Published As

Publication number Publication date
IL285487B2 (en) 2025-09-01
PT3924361T (pt) 2023-12-12
EP3924361B1 (en) 2023-09-06
AU2020222299B2 (en) 2024-02-08
EP4248960A2 (en) 2023-09-27
ES2965305T3 (es) 2024-04-12
MY201070A (en) 2024-02-01
JP2022520384A (ja) 2022-03-30
IL285487A (en) 2021-09-30
KR20210127955A (ko) 2021-10-25
US20250214954A1 (en) 2025-07-03
HRP20231582T1 (hr) 2024-03-15
SI3924361T1 (sl) 2024-02-29
KR102877899B1 (ko) 2025-10-30
EP4248960A3 (en) 2024-01-03
BR112021015762A2 (pt) 2021-10-05
AU2020222299C1 (en) 2024-05-16
CN113727989A (zh) 2021-11-30
LT3924361T (lt) 2023-12-27
IL285487B1 (en) 2025-05-01
DK3924361T3 (da) 2023-11-13
MX2021009584A (es) 2021-09-23
PL3924361T3 (pl) 2024-03-18
EA202192111A1 (ru) 2022-01-26
HUE064262T2 (hu) 2024-02-28
FI3924361T3 (fi) 2023-12-11
SMT202300444T1 (it) 2024-01-10
CA3129743A1 (en) 2020-08-20
JP7648531B2 (ja) 2025-03-18
ZA202106037B (en) 2022-05-25
WO2020165741A1 (en) 2020-08-20
EP3924361A1 (en) 2021-12-22
US12275712B2 (en) 2025-04-15
US20220177439A1 (en) 2022-06-09
AU2020222299A1 (en) 2021-10-07
CN113727989B (zh) 2024-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2767642C (en) Lupeol-type triterpene derivatives as antivirals
US11034718B2 (en) C-3 novel triterpenone with C-17 reverse amide derivatives as HIV inhibitors
US20150119373A1 (en) Novel betulinic acid derivatives as hiv inhibitors
EP3129392B1 (en) Triterpenoids with hiv maturation inhibitory activity, substituted in position 3 by a non-aromatic ring carrying a haloalkyl substituent
US20250214954A1 (en) Methods of treating hiv using triterpene derivatives
EA045041B1 (ru) Новые тритерпеновые производные в качестве ингибиторов вич
CN115380040A (zh) 作为hiv抑制剂的新型三萜衍生物
WO2016147099A2 (en) C-3 novel triterpenone with c-28 amide derivatives as hiv inhibitors