RS65022B1 - Derivati sulfopropanske kiseline za lečenje neurodegenerativnih poremećaja - Google Patents

Description

Opis pronalaska

SRODNE PRIJAVE

[0001] Ova prijava zahteva pravo prvenstva u odnosu na Privremenu SAD prijavu br. 62/713,056, podnetu 1. avgusta 2018. godine.

POZNATO STANJE TEHNIKE

[0002] Alchajmerova bolest (AB) je progresivna degenerativna bolest mozga, prvenstveno povezana sa starenjem. Rastuća veličina troškova zdravstvene zaštite za društvo u kontekstu AB naglašena je brojem pacijenata obolelih duž geografskih regiona, sa preko 5,7 miliona u SAD (Alzheimer’s Association 2018) i 35 miliona širom sveta (World Alzheimer Report 2016). Kliničku prezentaciju AB karakteriše gubitak pamćenja, kognicije, rezonovanja, rasuđivanja i orijentacije. Kako bolest napreduje, bivaju pogođene i motorne, senzorne i lingvističke sposobnosti, sve dok ne dođe do globalnog oštećenja višestrukih kognitivnih funkcija. Ovi kognitivni gubici se javljaju postepeno, ali obično dovode do ozbiljnog oštećenja i eventualne smrti u rasponu od četiri do dvanaest godina.

[0003] Trenutno, dve klase odobrenih lekova za AB su inhibitori holinesteraze i memantin. Obe klase su simptomatski agensi koji ciljano deluju na sekundarne deficijencije neurotransmitera uočene u AB. Nijedna klasa, međutim, ne pokazuje efikasnost nakon 6 meseci lečenja u kliničkim ispitivanjima i nema dokaza da ove klase ciljano deluju na osnovnu patologiju bolesti. Novija anti-amiloidna antitela (npr. adukanumab) obećavaju kao potencijalni tretmani za modifikaciju bolesti, kada se upotrebljavaju u ranim stadijumima bolesti. Pogledati, npr. Lasser i saradnici, Efficacy and Safety of Gantenerumab in Prodromal AD: Results from Scarlet Road-a Global, Multicenter Trial. Alzheimer’s Association International Conference (AAIC) 2015 Abstract ID: 5963. Ipak, pojedine amiloidne imunoterapije su bile povezane i sa rizikom zavisnim od doze u pogledu edema kao abnormalnosti uočenih prilikom medicinskih snimanja amiloidne patologije (ARIA-E), pri čemu je povećan rizik prevashodno prijavljen kod APOE4 nosilaca. Pogledati, npr. Salloway i saradnici, Two Phase 3 Trials of Bapineuzumab in Mildto-Moderate Alzheimer’s Disease. N Engl J Med 2014; 370:322-33; Sevigny i saradnici, The antibody aducanumab reduces Abeta plaques in Alzheimer’s disease. Nature 2016; 537:50-6; i Casclli i saradnici, Longitudinal modeling of age-related memory decline and the APOE epsilon4 effect. N Engl J Med 2009; 361:255- 263. Navedeno predstavlja izazov za razvoj, pošto su doze koje dovode do klirensa amiloida i kliničke koristi povezane sa incidencijom ARIA-E od približno 40% za dve najveće doze adukanumaba. Pogledati, Sevigny i saradnici, A dose titration regimen with aducanumab still shows approximately 35% incidence of ARIA-E in APOE carriers. Pogledati, npr. Viglietta i saradnici, Aducanumab titration dosing regimen: 12-month interim analysis from prime, a randomized double blind, placebo-controlled phase Ib study in patients with prodromal or mild Alzheimer’s disease. J Prev Alzheimers Dis 2016; 3, suppl 1:378. Iako ARIA-E može biti asimptomatska ili blago simptomatska kod većine pacijenata, pojedini pacijenti mogu razviti epileptične napade ili druge ozbiljne neželjene događaje. Rizik od ARIA-E kod AB pacijenata može zahtevati MRI praćenje, što je opterećujuće za stariju populaciju i može ograničiti upotrebu ovih lekova u kliničkoj praksi.

[0004] Solubilni Aβ42 oligomeri male molekulske težine su sada prepoznati kao ključni pokretači patogeneze AB, a povećana koncentracija Aβ42 oligomera ispoljava blisku korelaciju sa početkom i progresijom kliničkih simptoma. Pogledati, npr. Viglietta i saradnici. Pokazano je takođe da solubilni Aβ oligomeri prouzrokuju sinaptičko oštećenje, smrt neurona, kao i da pospešuju tau fosforilaciju i pokreću tau patologiju. Pogledati, npr. Esparza i saradnici, Amyolid beta oligomerization in Alzheimer’s dementia vs. high pathology controls. Ann Neurol 2013; 73(1):104-119; Hashimoto i saradnici, Apolipoprotein E, especially apolipoprotein E4, increases t peptide. J Neurosci.2012; 32:15181-15192; Ono i saradnici, Low-n oligomers as therapeutic targets of Alzheimer’s disease. J. Neurochem.

2011;117:19-28; Townsend i saradnici, Effects of secreted oligomers of amyloid betaprotein on hippocampal synaptic plasticity: a potent role for trimers. J. Physiol.; 2006; 572:477-92; i Lambert i saradnici, Diffusible, nonfibrillar ligands derived from A 1-42 are potent central nervous system neurotoxins. PNAS.1998; 95:6448-53. Važno je takođe napomenuti da je pokazano da AB pacijenti sa APOE 4/4 imaju veće opterećenje solubilnim amiloidnim oligomerima (Usui i saradnici, Site-specific modification of Alzheimer’s peptides by cholesterol oxidation products enhances aggregation energetics and neurotoxicity. PNAS.; 2009;106:18563-8), što je verovatno odgovorno za raniji početak bolesti u ovoj populaciji.

[0005] Do danas, kod AB pacijenata pozitivnih na amiloid, klinička korist je pokazana samo za agense koji ciljano deluju na Aβ oligomere, kao što su adukanumab i ALZ-801/tramiprozat. Tramiprozat, 3-amino-1-propansulfonska kiselina (3APS), oralni je agens koji sprečava agregaciju amiloida i time smanjuje neurotoksičnost oligomera amiloida beta. Faza 3 kliničkih ispitivanja tramiprozata kod blage do umerene AB ukazala je na odličan profil leka, uključujući sposobnost da se uspori smanjenje zapremine hipokampusa u mozgu i da se poboljša kognicija i funkcija mozga u podskupu analiza. Pogledati, npr. Gauthier S. i saradnici, Effect of tramiprosate in patients with mild-to-moderate Alzheimer’s disease: exploratory analyses of the MRI sub-group of the Alphase study. J Nutr Health Aging 13, 550-557 (2009); Saumier D., Duong A., Haine D., Garceau D. & Sampalis J. Domain-specific cognitive effects of tramiprosate in patients with mild to moderate Alzheimer’s disease: ADAS-cog subscale results from the Alphase Study. J Nutr Health Aging 13, 808-812 (2009); i Aisen P.S. i saradnici, Tramiprosate in mild-to-moderate Alzheimer’s disease - a randomized, double-blind, placebocontrolled, multi-centre study (the Alphase Study). Arch Med. Sci 7, 102-111 (2011).

[0006] ALZ-801 je u kliničkom razvoju kao oralni inhibitor tipa malog molekula za obrazovanje oligomera amiloida beta (Aβ) i lečenje Alchajmerove bolesti (AB). ALZ-801 je valinski konjugat tramiprozata, sa poboljšanim farmakokinetičkim osobinama i gastrointestinalnom podnošljivošću. Pogledati, npr. Hey i saradnici, Clinical Pharmacokinetics and Safety of ALZ-801, a Novel Prodrug of Tramiprosate in Development for the Treatment of Alzheimer’s Disease. Clin Pharmacokinetics 2018; 315-333. Tramiprozat, aktivni deo ALZ-801, inhibira obrazovanje Aβ oligomera in vitro. Pogledati, npr. Kocis i saradnici, Elucidating the Abeta42 Anti-Aggregation Mechanism of Action of Tramiprosate in Alzheimer’s Disease: Integrating Molecular Analytical Methods. Pharmacokinetic and Clinical Data. CNS Drugs 2017; 31:495-509. Oralno davan tramiprozat je prethodno procenjivan u dve studije Faze 3 koje su uključivale 2.015 pacijenata sa blagim do umerenim AB, a koji su lečeni sa 100 mg tramiprozata dva puta dnevno, 150 mg tramiprozata dva puta dnevno ili sa placebom. Podaci o bezbednosti iz ovih kliničkih ispitivanja Faze 3 i proširena studija bezbednosti, ukazali su na povoljan profil bezbednosti pri izlaganju tramiprozatu do 2,5 godine. Pogledati, npr. Abushakra i saradnici, Clinical effects of tramiprosate in APOE 4/4 homozygous patients with mild Alzheimer’s disease suggest disease modification potential. J Prev Alzheimers Dis 2017; 4:149-56. U analizi podgrupe subjekata sa ε4 alelom apolipoproteina E (APOE4), postojala je pozitivna i klinički značajna korist na kogniciju.

[0007] WO 2017/044840 opisuje upotrebu ALZ-801 u lečenju Alchajmerove bolesti.

KRATKO IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA

[0008] Biotransformacija ALZ-801 do tramiprozata je prikazana na SL.1. Kao što je ranije objašnjeno, tramiprozat inhibira obrazovanje Aβ oligomera i procenjuje se za lečenje blage do umerene AB.

[0009] Utvrdili smo takođe da je metabolit tramiprozata, 3-sulfopropanska kiselina (3-SPA), prisutna u humanoj cerebrospinalnoj tečnosti (CSF) i plazmi osoba koje nisu uzimale lekove (pogledati, npr. SL.

2 i SL. 3), a identifikovali smo i da ovaj metabolit inhibira agregaciju Aβ42 u male oligomere, sa efikasnošću koja je uporediva sa onom za sâm tramiprozat. Pogledati, npr. SL.4 i SL.5.

[0010] Dodatno, identifikovali smo obrnutu korelaciju između ozbiljnosti kognitivnog oštećenja i koncentracije 3-SPA kod subjekata koji imaju blagu do umerenu AB, što ukazuje da se nivo 3-SPA značajno smanjuje kako se ozbiljnost kognitivnog oštećenja povećava, kao i da održavanje viših nivoa 3-SPA može imati ulogu u prevenciji ili značajnijem smanjenju kognitivnog pada povezanog sa AB, na primer, utvrđenog na osnovu skorova Kratkog ispitivanja mentalnog statusa („MMSEˮ od engl. Mini Mental State Examination) kod subjekta, postupkom koji je dobro dokumentovan za određivanje ozbiljnosti Alchajmerove bolesti kod subjekta. Pogledati, npr. Pangman i saradnici, Applied Nursing Research. 13 (4): 209-213. Utvrdili smo zapravo da AB subjekti sa višim MMSE skorom (tj. manjim kognitivnim oštećenjem) imaju više nivoe 3-SPA u CSF, u poređenju sa subjektima sa nižim MMSE skorom. Pogledati, npr. SL.6. Ova korelacija nam je omogućila da za subjekte u ispitivanoj populaciji, koji su bolovali od blage do umerene AB, utvrdimo trend, ili najbolje uklapanje, između MMSE skora i koncentracije 3-SPA u CSF.

[0011] Na osnovu ovih nalaza, postavili smo hipotezu da bi povećanje nivoa 3-SPA u CSF-u, npr. iznad onih koji se mogu utvrditi kod osoba sa AB sa najmanjim kognitivnim oštećenjem (tj. MMSE = 30) („bazani nivo/pragˮ) i održavanje takvih povišenih nivoa, trebalo da zaštiti ove subjekte od daljeg kognitivnog pada, ili da smanji stopu kognitivnog pada, u poređenju sa tretmanom placebom. Povećanje nivoa 3-SPA u CSF-u iznad takvog bazalnog nivoa/praga može biti postignuto davanjem ALZ-801, tramiprozata ili njihovih prekursora (svi konačno proizvode 3-SPA), ili direktnim davanjem egzogenog oblika 3-SPA.

[0012] Prema tome, ovde su obezbeđena jednjenja koja su dizajnirana tako da se metabolišu do 3-SPA i da time povećavaju nivoe 3-SPA u CSF-u kod onih subjekata kojima je potrebna zaštita, npr. kod subjekata koji boluju od Alchajmerove bolesti, demencije ili kognitivnog pada. Jedinjenja koja su ovde opisana uključuju jedinjenja koja imaju Formulu Ia:

ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0013] Ovde su takođe obezbeđena jedinjenja Formule (I) za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti (AB) kod subjekata koji imaju koncentraciju 3-SPA ispod određenog bazalnog nivoa/praga, npr. ispod vrednosti koncentracije 3-SPA u CSF (± 10%) utvrđene kod subjekata za MMSE od 30, postupkom najboljeg uklapanja u nasumičnoj populaciji subjekata sa AB različitih kognitivnih oštećenja

[0014] Ovde je takođe obezbeđeno lečenje odabranih AB subjekata sa različitim stepenima kognitivnog oštećenja. Na premer, prema jednom aspektu, subjekti izabrani za lečenje mogu imati određene MMSE skorove koji ukazuju, na primer, na ozbiljnost AB koja je blaga ili blaga do umerena. Prema drugim aspektima, subjekti mogu imati određene MMSE skorove i imati jedan ili više od ε4 alela gena za apolipoprotein E (APOE) (npr. biti homozigoti za APOE4), biti sa skorovima Memorijskog testa slobodnog i selektivnog potpomognutog podsećanja (FCSR, od engl. Free and Cued Selective Reminding memory test) koji ukazuje na blago kognitivno oštećenje i biti sa određenim stepenom kliničke demencije (CDR).

[0015] Prema jednom aspektu za koji se ne potražuje patentna zaštita, predmetni opis obezbeđuje postupke za prevenciju demencije, ili prevenciju daljeg kognitivnog pada, kod subjekata koji imaju koncentraciju 3-SPA ispod određenog bazalnog nivoa/praga, npr. vrednost ispod koncentracije 3-SPA u CSF (± 10%) koja je utvrđena za MMSE od 30, postupkom najboljeg uklapanja u okviru nasumične populacije pacijenata koji pate od kognitivnog pada.

KRATAK OPIS SLIKA

[0016]

SL.1 ilustruje metaboličku transformaciju ALZ-801 do 3-sulfopropanske kiseline (3-SPA).

SL. 2 je grafik koji prikazuje koncentraciju (ng/ml) 3-SPA prisutnog u humanoj cerebrospinalnoj tečnosti (CSF) subjekata koji nisu primali lekove i kojima nije postavljena dijagnoza AB.

SL. 3 prikazuje vreme pomeraja dobijeno spektrometrijom-masenom spektrometrijom pokretljivosti jona (IMS-MS), kao funkciju mase/naelektrisanja (m/z), nakon 4 sata inkubacije Aβ42 sa 3-SPA u odnosu 1:1000 i sa profilom Aβ42 oligomera. Detekcija Aβ42 dimera, trimera i pentamera pod ovim uslovima ukazuje da 4 sata in vitro inkubacije nije bilo dovoljno za potpunu inhibiciju obrazovanja oligomera.

SL. 4 prikazuje vreme pomeraja dobijeno spektrometrijom-masenom spektrometrijom pokretljivosti jona (IMS-MS), kao funkciju mase/naelektrisanja (m/z), nakon 24 sata inkubacije, a koje pokazuje profil Aβ42 oligomera sa 1000-strukim viškom 3-SPA. Detektovani su samo pentameri.

SL.5 je reprezentacija eksperimenta molekulske dinamike koja pokazuje polucikličnu konformaciju Aβ42 u prisustvu viška 3-SPA u odnosu 1,000:1. Funkcionalni rezultat za 3-SPA je sličan funkcionalnim krajnjim rezultatima, tj. inhibiciji obrazovanja Aβ42 oligomera utvrđenoj za tramiprozat (Kocis i saradnici, Pharmacokinetic and Clinical Data. CNS Drugs 2017; 31:495-509).

SL. 6 ilustruje obrnutu korelaciju između nivoa 3-SPA u humanom CSF, u okviru populacije subjekata koji boluju od AB, sa različitim MMSE skorovima (ozbiljnost AB).

SL.7 predstavlja LC-MS/MS spektre autentičnog 3-SPA referentnog standarda (derivatizovanog sa EDC i TFEA).

SL.8 Panel A predstavlja LC-MS/MS hromatograme za 3-SPA standard.

SL.8 Panel B predstavlja LC-MS/MS hromatograme za humanu CSF iz jednog subjekta obolelog od AB, sa MMSE 20.

SL. 9 prikazuje srednje farmakokinetičke krive za jednokratne oralne i iv doze 3-SPA kod mužjaka SD pacova (30 mg/kg i 10 mg/kg, tim redom; n=3). Prikazani podaci su srednja vrednost ± SD.

SL. 10 prikazuje srednji vremenski tok za koncentracije 3-SPA u mozgu, CSF i plazmi, nakon jednokratne oralne doze od 30 mg/kg, kod mužjaka SD pacova (n=3). Prikazani podaci su srednja vrednost ± SD.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0017] Potrebno je naglastiti da reference za postupke lečenja u ovom opisu treba tumačiti kao reference za jedinjenja, farmaceutske kompozicije i medikamente predmetnog pronalaksa, za upotrebu u postupku za lečenje ljudskog (ili životinjskog) tela terapijom.

1. Definicije

[0018] Kao što se ovde upotrebljava, crtica („-ˮ) na početku ili na kraju navedene grupe označava tačku u kojoj je navedena grupa vezana za definisanu grupu. Na primer, -O-(C1-C4alkil) označava da je grupa vezana preko atoma kiseonika.

[0019] Termin „alkilenˮ se odnosi na dvovalentnu alkil grupu pravog ili razgranatog lanca.

[0020] Termin „C0alkilenˮ, kako se ovde upotrebljava, označava vezu. Prema tome, ostatak koji je ovde definisan kao „-(C0-C20alkilen)-arilˮ uključuje obe od -aril (tj. C0alkilen-aril) i -(C1-C20alkilen)-aril grupa.

[0021] Termin „alkenilenˮ se odnosi na dvovalentnu alkenil grupu pravog ili razgranatog lanca.

[0022] Termin „alkinilenˮ se odnosi na dvovalentnu alkinil grupu pravog ili razgranatog lanca.

[0023] Termin „alkilˮ, upotrebljen samostalno ili kao deo većeg ostatka, kao što je npr. „haloalkilˮ, označava zasićenu monovalentnu ugljovodoničnu grupu pravog ili razgranatog lanca koja ima, ukoliko nije drugačije naznačeno, 1-10 atoma ugljenika i uključuje, na primer, metil, etil, n-propil, izopropil, nbutil, sek-butil, izobutil, terc-butil, n-pentil, n-heksil, n-heptil, n-oktil, n-nonil, n-decil i slično.

[0024] Termin „alkenilˮ, upotrebljen samostalno ili kao deo većeg ostatka, kao što je npr. „haloalkenilˮ, označava monovalentnu grupu izvedenu iz alifatičnog ostatka pravog ili razgranatog lanca, koja sadrži najmanje jednu dvostruku vezu tipa ugljenik-ugljenik sa, ukoliko nije drugačije naznačeno, 1-10 atoma ugljenika. Reprezentativne alkenil grupe uključuju, ali nisu ograničene na, etenil („vinilˮ), propenil („alilˮ), butenil, 1-metil-2-buten-1-il i slično.

[0025] Termin „alkinilˮ, upotrebljen samostalno ili kao deo većeg ostatka, kao što je npr. „haloalkinilˮ, označava monovalentnu grupu izvedenu iz alifatičnog ostatka pravog ili razgranatog lanca, koja sadrži najmanje jednu trostruku vezu tipa ugljenik-ugljenik sa, ukoliko nije drugačije naznačeno, 1-10 atoma ugljenika. Reprezentativne alkinil grupe uključuju, ali nisu ograničene na, etinil, 2-propinil („propargilˮ), 1-propinil i slično.

[0026] „Alkoksiˮ je alkil grupa koja je vezana za drugi ostatak preko kiseonika kao vezujuće strukture (-O(alkil)). Neograničavajući primeri uključuju metoksi, etoksi, propoksi i butoksi.

[0027] Termini „haloˮ i „halogenˮ, kako se ovde upotrebljavaju, odnose se na atom izabran od fluora (fluoro, -F), hlora (hloro, -Cl), broma (bromo, -Br) i joda (jodo, -I).

[0028] Termin „karbociklilˮ (ovde označen i kao „karbociklinˮ „cikloalifatičniˮ ili „cikloalkilniˮ), kako se ovde upotrebljava, označava monocikličan ugljovodonik ili bicikličan ugljovodonik, pri čemu je svaki prsten potpuno zasićen ili delimično zasićen, ali nije aromatičan.

[0029] Termin „arilˮ, upotrebljen samostalno ili kao deo većeg ostatka, kao što je u „aralkilˮ, „aralkoksiˮ ili „ariloksialkilˮ, odnosi se na monocikličan i bicikličan sistem prstenova od ugljenika, koji ima ukupno pet do 10 članova u prstenu, pri čemu je najmanje jedan prsten u sistemu aromatičan. Termin „arilˮ može biti upotrebljavan naimenično sa terminom „arilni prsten". U određenim primerima izvođenja, „arilˮ se odnosi na aromatičan sistem prstenova koji uključuje, ali nije ograničen na, fenil, bifenil, naftil, antracil i slično. U jednom primeru izvođenja, „arilˮ je fenil. Podrazumeva se da kada je specifično navedeno, opcioni supstituenti aril grupe mogu biti prisutni na bilo kojoj poziciji koja je pogodna za supstituciju.

[0030] Termin „heteroarilˮ, upotrebljen samostalno ili kao deo većeg ostatka, kao što je u „heteroarilalkilˮ, „heteroarilalkoksiˮ ili „heteroarilaminoalkilˮ, odnosi se na 5- do 12-člani, potpuno aromatičan sistem prstenova koji sadrži 1-4 heteroatoma izabrana od N, O i S. Termin „heteroarilˮ može biti upotrebljavan naizmenično sa terminima „heteroarilni prstenˮ, „heteroarilna grupaˮ ili „heteroaromatičan". Heteroarilna grupa može biti mono- ili biciklična. Monociklični heteroaril uključuje, na primer, tienil, furanil, pirolil, imidazolil, pirazolil, triazolil, tetrazolil, oksazolil, izoksazolil, oksadiazolil, tiazolil, izotiazolil, tiadiazolil, piridil, piridazinil, pirimidinil i pirazinil. Biciklični heteroarili uključuju grupe u kojima je monocikličan heteroarilni prsten kondenzovan sa jednim ili sa više arilnih ili heteroarilnih prstenova. Neograničavajući primeri uključuju indolil, benzooksazolil, benzooksodiazolil, indazolil, benzimidazolil, benztiazolil, hinolil, hinazolinil, hinoksalinil, pirolopiridinil, pirolopirimidinil, pirolopiridinil, tienopiridinil, tienopirimidinil, indolizinil, purinil, naftiridinil i pteridinil. Podrazumeva se da kada je specifično navedeno, opcioni supstituenti heteroarilne grupe mogu biti prisutni na bilo kojoj poziciji koja je pogodna za supstituciju i, uključuju, npr. poziciju na kojoj je vezan heteroaril.

[0031] Termin „heterociklilˮ označava 4- do 12-člani sistem prstenova, koji je zasićen ili delimično nezasićen (ali nije aromatičan), i koji sadrži 1 do 4 heteroatoma nezavisno izabrana od N, O i S. Termini „heterociklinˮ, „heterociklilˮ, „heterociklilni prstenˮ, „heterociklična grupaˮ i „heterociklični ostatakˮ ovde se upotrebljavaju naizmenično. Heterociklilni prsten može biti vezan za svoju pružajuću grupu na bilo kom heteroatomu ili atomu ugljenika, kada je rezultat stabilna struktura. Heterociklilna grupa može biti mono- ili biciklična. Primeri monocikličnih zasićenih ili delimično nezasićenih heterocikličnih grupa uključuju, bez ograničenja, tetrahidrofuranil, tetrahidrotienil, tetrahidropiranil, pirolidinil, pirolidonil, piperidinil, oksazolidinil, piperazinil, dioksanil, dioksolanil, morfolinil, dihidrofuranil, dihidropiranil, dihidropiridinil, tetrahidropiridinil, dihidropirimidinil i tetrahidropirimidinil. Biciklične heterociklilne grupe uključuju, npr. heterocikličan prsten kondenzovan sa drugim nezasićenim heterocikličnim, cikloalkilnim, aromatičnim ili heteroarilnim prstenom, kao što su na primer, benzodioksolil, dihidrobenzodioksinil, 6,7-dihidro-5H-pirolo[2,1-c][1,2,4]triazolil, 5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridinil, 1,2-dihidrohinolinil, dihidrobenzofuranil, tetrahidronaftiridin, indolinon, dihidropirolotriazol, hinolinon, dioksaspirodekan. Podrazumeva se da kada je specifično navedeno, opcioni supstituenti heterociklilne grupe mogu biti prisutni na bilo kojoj poziciji koja je pogodna za supstituciju i, uključuju, npr. poziciju na kojoj je vezan heterociklil.

[0032] Termin „cikličan ostatkˮ odnosi se na zasićeni, nezasićeni ili delimično zasićeni monocikličan ili policikličan sistem prstenova. Takvi sistemi prstenova uključuju, npr. karbociklil, aril, heteroaril ili heterociklil, koji su kao što je prethodno definisano.

[0033] Kada je stereohemija opisanog jedinjenja imenovana ili prikazana strukturom, imenovani ili prikazani stereoizomer je težinski najmanje 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ili 99,9% čist u odnosu na sve druge stereoizomere. Težinski procenat čistoće u odnosu na sve druge stereoizomere je odnos težine jednog stereoizomera prema težini ostalih stereoizomera. Kada je pojedinačan enantiomer imenovan ili prikazan strukturom, prikazani ili imenovani enantiomer je optički čist sa najmanje 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ili 99,9% po težini. Procenat optičke čistoće po težini je odnos težine enantiomera u odnosu na zbir težine enantiomera i težine njegovog optičkog izomera.

[0034] Kada je stereohemija opisanog jedinjenja imenovana ili prikazana strukturom, a imenovana ili prikazana struktura obuhvata više od jednog stereoizomera (npr. kao u dijastereomernom paru), podrazumeva se da je uključen jedan od obuhvaćenih stereoizomera ili bilo koja mešavina obuhvaćenih stereoizomera. Podrazumeva se dalje da je stereoizomerna čistoća imenovanog ili prikazanog stereoizomera čistoće najmanje 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ili 99,9% po težini u odnosu na sve druge stereoizomere. Stereoizomerna čistoća u ovom slučaju se određuje deljenjem ukupne težine u smeši stereoizomera obuhvaćenih imenom ili strukturom, sa ukupnom težinom u smeši svih stereoizomera.

[0035] Kada je opisano jedinjenje imenovano ili prikazano strukturom bez navođenja stereohemije, a jedinjenje ima jedan hiralni centar, podrazumeva se da naziv ili struktura obuhvata jedan enantiomer jedinjenja bez odgovarajućeg optičkog izomera, racemsku smešu jedinjenja ili smeše obogaćene jednim enantiomerom u odnosu na njegov odgovarajući optički izomer.

[0036] Kada je opisano jedinjenje imenovano ili prikazano strukturom bez navođenja stereohemije i npr. jedinjenje ima više od jednog hiralnog centra (npr. najmanje dva hiralna centra), podrazumeva se da naziv ili struktura obuhvata jedan stereoizomer bez drugih stereoizomera, smeše stereoizomera ili smeše stereoizomera u kojima je jedan ili više stereoizomera obogaćeno u odnosu na drugi(e) stereoizomer(e). Na primer, naziv ili struktura mogu obuhvatati jedan stereoizomer bez drugih dijastereomera, smeše stereoizomera ili smeše stereoizomera u kojima je jedan ili više dijastereomera obogaćeno u odnosu na drugi(e) stereoizomer(e).

[0037] Izraz „farmaceutski prihvatljiva soˮ je so bazne grupe (npr. amino grupe) ili kisele grupe (npr. sulfonske kiseline) jedinjenja koja su ovde opisana. Ilustrativne soli bazne grupe uključuju, ali nisu ograničene na, sulfatne, citratne, acetatne, oksalatne, hloridne, bromidne, jodidne, nitratne, bisulfatne, fosfatne, kisele fosfatne, izonikotinatne, laktatne, salicilatne, kisele citratne, tartratne, oleatne, tanatne, pantotenatne, bitartratne, askorbatne, sukcinatne, maleatne, gentizinatne, fumaratne, glukonatne, glukoronatne, saharatne, formatne, benzoatne, glutamatne, metansulfonatne, etansulfonatne, benzensulfonatne, p-toluensulfonatne, kamforsulfonatne i pamoatne (tj. 1,1 '-metilen-bis-(2-hidroksi-3-naftoat)) soli. Ilustrativne soli kisele grupe uključuju, ali nisu ograničene na, soli litijuma, natrijuma, kalijuma, kalcijuma, magnezijuma, aluminijuma, hroma, gvožđa, bakra, cinka, kadmijuma, amonijuma, guanidinijuma, piridinijuma i organske amonijumske soli.

[0038] „Farmaceutski prihvatljivˮ se odnosi na lekove, medikamente, inertne sastojke itd. koje ovaj termin opisuje, pogodne za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i nižih životinja bez nepotrebne toksičnosti, nekompatibilnosti, nestabilnosti, iritacije, alergijskog odgovora i sličnog, srazmerno razumnom odnosu koristi i rizika. Prema jednom aspektu, farmaceutski prihvatljiv se odnosi na jedinjenje ili kompoziciju koje je odobrila ili može odobriti regulatorna agencija savezne ili državne vlade ili koje je navedeno u Farmakopeji SAD ili drugoj opštepriznatoj farmakopeji za upotrebu kod životinja, a posebno kod ljudi.

[0039] Termin „farmaceutski prihvatljiv nosačˮ odnosi se na netoksičan nosač, adjuvans ili rastvarač koji ne uništava farmakološku aktivnost jedinjenja sa kojim je formulisan. Farmaceutski prihvatljivi nosači koji mogu biti upotrebljeni u kompozicijama koje su ovde opisane uključuju, ali nisu ograničeni na, jonoizmenjivače, aluminu, aluminijum stearat, lecitin, serumske proteine, kao što je humani serumski albumin, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum sorbat, delimične gliceridne mešavine zasićenih biljnih masnih kiselina, vodu, soli ili elektrolite, kao što su protamin sulfat, dinatrijum hidrogen fosfat, kalijum hidrogen fosfat, natrijum hlorid, soli cinka, koloidna silika, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilen glikol, natrijum karboksimetilceluloza, poliakrilati, voskovi, polietilen-polioksipropilenski blok polimeri, polietilen glikol i mast vune.

[0040] Termini „subjekatˮ i „pacijentˮ se upotrebljavaju naizmenično. Prema jednom aspektu, subjekat je čovek. Prema pojedinim aspektima, subjekat je čovek starosti od 85 godina ili manje. Prema drugim aspektima, subjekat je čovek starosti 65-85 godina. Prema još drugim aspektima, subjekat je čovek starosti od 58 godina ili više.

[0041] Naizmenično se upotrebljavaju i termini 3-sulfopropanska kiselina i 3-SPA, a odnose se na jedinjenje koje ima strukturu

kao i na mono- (

ili dijonske

oblike soli, gde je X<+>jon suprotnog naelektrisanja, kao što je natrijum.

[0042] Kao što se ovde upotrebljava, termin „lečitiˮ, „lečenjeˮ ili „tretmanˮ označavaju preokretanje, ublažavanje ili inhibiranje progresije neurodegenerativne bolesti kao što je AB, ili jednog ili više od udruženih simptoma.

[0043] Faktori za određivanje da li subjekat boluje od AB uključuju, npr. jedan ili više MMSE skorova subjekta, prisustvo amiloida u mozgu (npr. utvrđeno PET snimanjem), CDR skor subjekta, rezultate FCSR testa pamćenja koji su u skladu sa blagim kognitivnim oštećenjem, ili identifikaciju moždanih biomarkera za amiloid u cerebrospinalnoj tečnosti (CSF) kao što su Abeta-40, Abeta-42, tau protein ili Abeta oligomeri, ili njihove kombinacije. Na primer, subjekat boluje od AB ukoliko 1) subjekat je homozigot za APOE4 i ima kognitivne simptome; 2) subjekat je homozigot za APOE4 i ima subjektivna oštećenja pamćenja, MCI ili je sa MMSE od 30, a postoji i odsutpanje u FCSR testu; 3) subjekat subjekat je homozigot za APOE4 i ima rane simptome AB kao što su MCI ili MMSE od 26-30, kao i globalni CDR skor od 0,5; 4) subjekat je heterozigot za APOE4 i ima MMSE manji od 20; 5) subjekat je heterozigot za APOE4 i ima MMSE od 20 ili više, pri čemu subjekat ima i amiloid u mozgu, što se utvrđuje sa jednim ili sa više postupaka koji su ovde opisani (npr. PET snimanjem ili biomarkerima u CSF izabranim od Abeta-40, Abeta- 42 i tau proteina, ili za Abeta oligomere); ili 6) subjekat je APOE4 negativan i subjekat ima MMSE skor od 20 ili više, ili MMSE skor manji od 20 i subjekat ima amiloid u mozgu, što se utvrđuje sa jednim ili sa više postupaka koji su ovde opisani (npr. PET snimanjem ili biomarkerima u CSF izabranim od Abeta-40, Abeta- 42 i tau proteina, ili za Abeta oligomere). Za klasifikaciju odstupanja u FCSR testu pogledati npr. E. Grober, R.B Lipton, C. Hall i saradnici; Neurology 2000; 54: 827-832.

[0044] „Efektivna količinaˮ ili „efektivna dozaˮ je količina jedinjenja koja je dovoljna za lečenje neurodegenerativne bolesti kao što je AB. Efektivne količine mogu varirati, kao što prepoznaje stručnjak iz oblasti tehnike, u zavisnosti od npr. ozbiljnosti neurodegenerativne bolesti, načina davanja, pola, starosti i opšteg zdravstvenog stanja pacijenta, upotrebe ekscipijenasa, mogućnosti istovremene upotrebe sa drugim terapijskim tretmanima, kao što je upotreba drugih agenasa, a shodno proceni ordinirajućeg lekara ili drugog medicinskog osoblja. Primeri efektivnih količina jedinjenja korisnih u postupcima koji su ovde opisani, obezbeđeni su u nastavku teksta. Prema pojedinim aspektima, efektivna količina je količina koja povećava koncentraciju 3-SPA u CSF iznad unapred određenog bazalnog praga. Prema specifičnijim aspektima, efektivna količina je količina koja povećava koncentraciju 3-SPA u CSF do 1,1X, 1,2X, 1,3X, 1,4X, 1,5X, 2X, 2,5X, 3X, 4X, 5X ili više od prethodno utvrđenog bazalnog praga.

[0045] Podrazumeva se takođe da će specifična doza i režim lečenja za svakog određenog pacijenta, zavisiti od raznovrsnih faktora, uključujući starost, telesnu težinu, opšte zdravstveno stanje, pol, ishranu, vreme davanja, stopu izlučivanja, kombinaciju lekova, procenu ordinirajućeg lekara i ozbiljnost određene bolesti koja se leči. Količina obezbeđenog jedinjenja u kompoziciji će takođe zavisiti od određenog jedinjenja u kompoziciji. Režimi za primer su obezbeđeni u nastavku teksta.

[0046] U predmetnim postupcima (npr. kao u prvom do desetom, dvanaestom i petnaestom primeru izvođenja), „unapred određen bazalni pragˮ, „unapred određeni bazalni nivoˮ ili „određeni bazalni nivoˮ se upotrebljavaju naizmenično i odnose se na jedno ili više od sledećeg: (1) vrednost koncentracije 3-SPA u CSF (±10%) utvrđenu za MMSE od 30, postupkom najboljeg uklapanja između koncentracije 3-SPA i MMSE skorova u nasumično izabranoj populaciji subjekata sa Alchajmerom bolešću različitih stepena ozbiljnosti („Nasumična AB populacija“; (2) najveću koncentraciju 3-SPA u CSF (± 10%) utvrđenu u Nasumičnoj AB populaciji za MMSE ≤ 29; (3) sopstvenu koncentraciju 3-SPA u CSF subjekata (± 5%) utvrđenu pre ispoljavanja bilo kakvih simptoma AB; (4) prosečnu koncentraciju 3-SPA u CSF (± 5%) utvrđenu u normalnoj (ne-AB) populaciji odgovarajuće starosne dobi; (5) za primere izvođenja u kojima se subjekti dalje selektuju po vrednostima unutar određenih opsega MMSE skorova, na veće od: (a) vrednosti koncentracije 3-SPA u CSF (± 10%), utvrđene za MMSE od 30, postupkom najboljeg uklapanja između koncentracije 3-SPA i MMSE skorova u Nasumičnoj AB populaciji; ili (b) najviše koncentracije 3-SPA u CSF (± 10%) utvrđene u Nasumičnoj AB populaciji za MMSE skorove jednake ili iznad najnižeg MMSE skora u opsegu selekcije (npr. ukoliko selekcija zahteva MMSE skor između 22- 28, onda je (b) najviša koncentracija 3-SPA u CSF (± 10%) utvrđena u Nasumičnoj AB populaciji za MMSE skorove jednake ili iznad 22); (6) vrednost koncentracije 3-SPA u CSF (±10%) za MMSE skor subjekta koji je kao što je utvrđeno postupkom najboljeg uklapanja između koncentracije 3-SPA i MMSE skorova u nasumičnoj populaciji subjekata. Ukoliko nije drugačije naznačeno, vrednost unapred određenog bazalnog praga dobijenog upotrebom bilo kod od prethodno navedenih parametara, može se smanjiti ili povećati za 10%, da bi se u manjem ili većem stepenu mogli uključiti subjekti koji će biti lečeni, odnosno da bi se smanjio broj lažno pozitivnih ili lažno negativnih. Nasumična populacija subjekata sa Alchajmerovom bolešću je nasumično izabrani uzorak pacijenata sa AB prema stepenu ozbiljnosti njihove Alchajmerove bolesti (npr. po stepenu kognitivnog pada ili prema njihovom MMSE skoru), starosti, težini, opštem zdravstvenom stanju, polu, ishrani i sličnom, a može obuhvatati npr. najmanje 10, najmanje 15, najmanje 20, najmanje 25, najmanje 50, najmanje 75, najmanje 100, najmanje 500, najmanje 1000 subjekata. Prema jednom aspektu, međutim, populacija subjekata je prosečne starosti od 85 godina ili manje. Prema drugim aspektima, populacija subjekata je prosečne starosti od 65-85 godina. Prema još drugim aspektima, populacija subjekata je prosečne starosti od 58 godina ili više. Prema pojedinim aspektima, kada kriterijumi selekcije dodatno uključuju ApoE4 status, nasumična populacija subjekata sa Alchajmerovom bolešću različitog stepena ozbiljnosti iz koje se može izvoditi najbolje uklapanje, ili utvrditi najviši nivo koncentracije 3-SPA u CSF-u, ograničena je na one AB subjekte koji imaju isti ApoE4 status kao kriterijum za selekciju po ApoE4 statusu.

2. Upotrebe / Postupci

[0047] U prvom primeru izvođenja, ovde je obezbeđen postupak lečenja bolesti koju karakterišu amiloidni agregati, odnosno Alchajmerove bolesti, kod subjekta kome je to potrebno, koji obuhvata korak davanja subjektu efektivne količine jedinjenja Formule I:

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde:

R<1>je izabran od -O-R<3>, -O-R<4>-CH(NHR<6>)-C(O)-R<5>i -[N(R<6>)-CH(R<7>)-C(O)]1-2-R<5>;

R<2>je izabran od vodonika, R<3>i R<4>-CH(NHR<6>)-C(O)-O-R<5>;

svaki R<3>je nezavisno izabran od C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, -C2-C20alkinil, -(C0-C20alkilen)-aril, -(C0-C20alkilen)-karbociklil, -(C0-C20alkilen)-heterociklil, -(C0-C20alkilen)-heteroaril, -(C2-C20alkenilen)-aril, -(C2-C20alkenilen)-karbociklil, -(C2-C20alkenilen)-heterociklil, -(C2-C20alkenilen)-heteroaril, -(C2-C20alkinilen)-aril, -(C2-C20alkinilen)-karbociklil, -(C2-C20alkinilen)-heterociklil i -(C2-C20alkinilen)-heteroaril;

svaki R<4>je nezavisno izabran derivatizovani bočni lanac prirodne ili neprirodne α-aminokiseline, pri čemu je bočni lanac derivatizovan preko slobodne-OH grupe prisutne na bočnom lancu pre derivatizacije;

svaki R<5>je nezavisno izabran od -OH, -O-C1-C4alkil i -NH2;

svaki R<6>je nezavisno izabran od vodonika i -C(O)R<8>;

R<7>je bočni lanac α-aminokiseline; i

svaki R<8>je nezavisno izabran od vodonika, C1-C4alkil, -O-C1-C4alkil, -(C1-C4alkilen)-aril i (C1-C4alkoksi)-aril;

pri čemu:

svaki alkilni, alkilenski, alkenilni, alkenilenski, alkinilni ili alkinilenski deo R<3>opciono je supstituisan sa do 6 supstituenata nezavisno izabranih od halo, -OH, -O-(C1-C4alkil), -O-(C1-C4haloalkil), karbociklil, aril, heterociklil i heteroaril;

svaki karbociklilni, arilni, heterociklilni ili heteroarilni deo R<3>opciono je supstituisan sa do četiri supstituenta nezavisno izabrana od halo, -OH, -O-(C1-C4alkil), -O-(C1-C4haloalkil), C1-C18alkil, C2-C18alkenil i C2-C18alkinil, pri čemu su alkil, alkenil ili alkinil delovi C1-C18alkil, C2-C18alkenil, ili C2-C18alkinil, tim redom, opciono supstituisani sa do šest supstituenata nezavisno izabranih od halo, -OH, -O-(C1-C4alkil) i -O-(C1-C4haloalkil);

R<1>ne sadrži više od 2 ciklična ostatka; i

R<2>ne sadrži više od 2 ciklična ostatka.

[0048] Bolesti koje karakterišu amiloidni agregati uključuju, ali nisu ograničeni na, Alchajmerovu bolest uključujući njene familijarne (nasledne) oblike, demenciju Daunovog sindroma, Parkinsonovu bolest, akutnu makularnu degeneraciju (AMD), glaukom, miozitis sa inkluzionim telima (IBM), traumatsku povredu mozga, demenciju sa Levijevim telima, Hantingtonovu bolest, Njuman-Pikovu bolest tipa C, cerebralnu amiloidnu angiopatiju (CAA), Krojcfeld-Jakobovu bolest, AA amiloidozu, AL amiloidozu, ATTR amiloidozu, familijarnu amiloidnu polineuropatiju (FAP), familijarnu amiloidnu kardiomiopatiju (FAC), senilnu sistemsku amiloidozu i prionsku bolest. Prema predmetnom pronalasku, bolest koju karakterišu amiloidni agregati je Alchajmerova bolest.

[0049] U drugom primeru izvođenja, obezbeđen je postupak selektovanja i lečenja subjekta koji boluje od Alchajmerove bolesti, koji obuhvata korake:

a) selektovanja subjekta, ukoliko je koncentracija 3-SPA prisutnog u subjektu manja od unapred određenog bazalnog praga; i

b) davanja izabranom subjektu efektivne količine jedinjenja koje ima Formulu I:

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu su varijable za Formulu I kao što je prethodno opisano, u prvom primeru izvođenja.

[0050] U trećem primeru izvođenja, ovde je obezbeđen postupak lečenja subjekta koji boluje od Alchajmerove bolesti, koji obuhvata korake:

a) određivanja da li je 3-SPA prisutan u subjektu u koncentraciji manjoj od unapred određenog bazalnog praga; i

b) davanja izabranom subjektu efektivne količine jedinjenja koje ima Formulu I:

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu su varijable za Formulu I kao što je prethodno opisano, u prvom primeru izvođenja.

[0051] Subjekti u predmetnim postupcima mogu biti dodatno grupisani (tj. dalje selektovani) prema njihovim MMSE skorovima pre tretmana. U četvrtom primeru izvođenja, na primer, subjekat koji se leči u primerima izvođenja koji su ovde opisani (npr. kao u prvom, drugom ili trećem primeru izvođenja) ima MMSE skor veći od 19 (npr. veći od 20, veći od 21, veći od 22, veći od 23, veći od 24, veći od 25 ili veći od 26) pre tretmana. Prema drugom aspektu, subjekat koji se leči u primerima izvođenja koji su ovde opisani (npr. kao u prvom, drugom ili trećem primeru izvođenja) ima MMSE skor od 16 do 30 (npr. MMSE skor od 22 do 30, MMSE skor od 22 do 28, MMSE skor od 16 do 19, MMSE skor od 18 do 26, MMSE skor od 20 do 26 ili MMSE skor od 22 do 26) pre tretmana.

[0052] Pored MMSE skora, subjektu mogu biti svojstveni određeni genetički faktori, kao što je prisustvo APOE4 alela (npr. homo- ili heterozigot je za APOE4), ili drugi amiloidni markeri kao što je prisustvo amiloida u mozgu, ili oba. Subjekti koji su ovde opisani mogu takođe imati najmanje jedan ε4 alel za APOE. Na primer, u petom primeru izvođenja, subjekat koji se leči u primerima izvođenja koji su ovde opisani (npr. kao u prvom, drugom, trećem ili četvrtom primeru izvođenja) heterozigot je za APOE4, pre tretmana. Alternativno, u šestom primeru izvođenja, subjekat koji se leči u primerima izvođenja koji su ovde opisani (npr. kao u prvom, drugom, trećem ili četvrtom primeru izvođenja) homozigot je za APOE4, pre tretmana. Termini „heterozigot za APOE4ˮ i „APOE4 heterozigotˮ upotrebljavaju se naizmenično i odnose se na subjekte koji imaju jedan APOE4 alel. Termini „homozigot za APOE4ˮ, „APOE4 homozigotˮ, „homozigot za APOE4/4ˮ i „APOE4/4 homozigotˮ upotrebljavaju se naizmenično i odnose se na subjekte koji imaju dva APOE4 alela. Prema specifičnijem aspektu šestog primera izvođenja, subjekat je izabran za lečenje ukoliko je on ili ona APOE4 homozigot i ima MMSE skor od 22-28.

[0053] U sedmom primeru izvođenja, ovde je obezbeđen postupak prevencije Alchajmerove bolesti ili kognitivnog pada kod subjekta (subjekta koji ima AB), koji obuhvata korak davanja subjektu kome je to potrebno, jedinjenja koje ima Formulu I:

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu su varijable za Formulu I kao što je prethodno opisano, u prvom primeru izvođenja.

[0054] U osmom primeru izvođenja, subjektu iz sedmog primera izvođenja je potrebna prevencija, ukoliko je prisutno jedno ili više od sledećeg: a) nivo 3-SPA kod subjekta je ispod unapred određenog bazalnog praga; b) subjekat ima najmanje jedan ApoE4 alel; ili c) subjekat ima porodičnu istoriju Alchajmerove bolesti. Alternativno, subjektu iz sedmog primera izvođenja je potrebna prevencija, ukoliko je prisutno jedno ili više od sledećeg: a) nivo 3-SPA kod subjekta je ispod unapred određenog bazalnog praga; b) subjekat ima najmanje dva ApoE4 alela; ili c) subjekat ima porodičnu istoriju Alchajmerove bolesti.

[0055] U devetom primeru izvođenja, ovde je obezbeđen postupak prevencije demencije kod subjekta (subjekta koji ima AB), a koji obuhvata korak davanja subjektu kome je to potrebno, jedinjenja formule

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu su varijable za Formulu I kao što je prethodno opisano, u prvom primeru izvođenja.

[0056] U primeru izvođenja za koji se ne potražuje patentna zaštita, demencija iz devetog primera izvođenja povezana je sa povredom glave (npr. traumom glave). Povreda glave nastaje kada spoljna sila udari u glavu dovoljno snažno da izazove nasilno kretanje mozga unutar lobanje. Ova sila može prouzrokovati treskanje, uvrtanje, modrice (kontuziju) ili iznenadnu promenu u kretanju mozga (potres mozga). Podrazumeva se da čak i relativno blage povrede glave mogu dovesti do produženog ili trajnog pada u kogniciji.

[0057] U primeru izvođenja za koji se ne potražuje patentna zaštita, demencija iz devetog primera izvođenja je povezana sa povredom glave i subjektu iz trinaestog primera izvođenja je potrebna prevencija ukoliko je nivo 3-SPA kod subjekta ispod unapred određenog bazalnog praga.

[0058] Prema jednom aspektu, koncentracija 3-SPA prisutna kod subjekta opisanih postupaka (npr. kao u drugom do petom, osmom i jedanaestom primeru izvođenja) utvrđuje se iz uzorka cerebrospinalne tečnosti. Prema tome, prema jednom aspektu, unapred određen bazalni prag 3-SPA kod subjekta je bazalna koncentracija 3-SPA u cerebrospinalnoj tečnosti (CSF) subjekta, dobijena pre ispoljavanja simptoma AB i/ili u vreme kada je MMSE subjekta bio 30.

[0059] Prema jednom aspektu, unapred određen bazalni prag 3-SPA u predmetnim postupcima (npr. kao u prvom do desetom, dvanaestom i petnaestom primeru izvođenja) definisan je kao koncentracija 3-SPA kod subjekta koja je manja od 25 ng /ml (npr. manja od 20 ng/ml, manja od 15 ng/ml, manja od 12 ng/ml, manja od 10 ng/ml, manja od 8 ng/ml, manja od 6 ng/ml, manja od 5 ng/ml, manja od 4 ng/ml, manja od 3 ng/ml, manja od 2,9 ng/ml, manja od 2,8 ng/ml, manja od 2,7 ng/ml, manja od 2,6 ng/ml, manja od 2,5 ng /ml, manja od 2,4 ng/ml, manja od 2,3 ng/ml, manja od 2,2 ng/ml, manja od 2,1 ng/ml, manja od 2,0 ng/ml). Prema drugim aspektima, unapred određen bazalni prag 3-SPA je definisan kao koncentracija 3-SPA kod subjekta između 2,0 ng/ml i 25 ng/mL (npr. između 7 ng/ml i 25 ng/mL, između 8 ng/ml i 25 ng/mL, između 9 ng/ml i 25 ng/mL, između 6 ng/ml i 24 ng/mL ili između 6 ng/ml i 23 ng/mL.

[0060] Prema jednom aspektu, unapred određen bazalni prag 3-SPA u predmetnim postupcima (npr. kao u prvom do desetom, dvanaestom i petnaestom primeru izvođenja) definisan je kao nivo kod subjekta koji ima MMSE skor od 22-28 ili MMSE skor od 22-26; a koncentracija 3-SPA (npr. u CSF) je manja od 5 ng/mL, manja od 4 ng/ml, manja od 3 ng/ml, manja od 2,9 ng/ml, manja od 2,8 ng/ml, manja od 2,7 ng/ml, manja od 2,6 ng/ml, manja od 2,5 ng/ml, manja od 2,4 ng/ml, manja od 2,3 ng/ml, manja od 2,2 ng/ml, manja od 2,1 ng/ml ili manja od 2,0 ng/ml. Prema drugim aspektima, unapred određen bazalni prag 3-SPA u predmetnim postupcima (npr. kao u prvom do desetom, dvanaestom i petnaestom primeru izvođenja) definisan je kao nivo kod subjekta koji ima MMSE skor od 22-28 ili MMSE skor od 22-26 i koncentraciju 3-SPA (npr. u CSF) od 2-4 ng/mL.

[0061] U dvanaestom primeru izvođenja, ovde je obezbeđen postupak za lečenje subjekta koji boluje od AB, koji obuhvata davanje subjektu efektivne količine jedinjenja koje ima Formulu I, koja je kao što je ovde definisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu subjekat ima MMSE skor od 30, homozigot je za APOE4 i ima abnormalni FCSR test memorije koji ukazuje na MCI. Za klasifikaciju odstupanja u FCSR testu pogledati, npr. E. Grober, R.B Lipton, C. Hall i saradnici; Neurology 2000; 54: 827-832.

[0062] U trinaestom primeru izvođenja, ovde je obezbeđen postupak za selekciju i lečenje subjekta koji boluje od AB, koji obuhvata: a) selektovanje subjekta koji ima MMSE skor od 22-28; i b) davanje izabranom subjektu efektivne količine jedinjenja koje ima Formulu I, koja je kao što je ovde definisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0063] U četrnaestom primeru izvođenja, ovde je obezbeđen postupak za selektovanje i lečenje subjekta koji boluje od AB, koji obuhvata: a) selektovanje subjekta koji je APOE4 homozigot ili APOE4 heterozigot; i b) davanje izabranom subjektu efektivne količine jedinjenja koje ima Formulu I, koja je kao što je ovde definisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0064] U petnaestom primeru izvođenja, ovde je obezbeđen postupak za selektovanje i lečenje subjekta koji boluje od AB, koji obuhvata: a) selektovanje subjekta koji ima MMSE skor od 22-28 i koji je APOE4 homozigot ili APOE4 heterozigot; i b) davanje izabranom subjektu efektivne količine jedinjenja koje ima Formulu I, koja je kao što je ovde definisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0065] Prema pojedinim aspektima od trinaestog do petnaestog primera izvođenja, subjekat je izabran ukoliko subjekat ima MMSE skor od 22-26. Prema pojedinim aspektima od trinaestog do petnaestog primera izvođenja, subjekat je izabran ukoliko je subjekat APOE4 homozigot. Prema pojedinim aspektima od trinaestog do petnaestog primera izvođenja, subjekat je izabran ukoliko je subjekat APOE4 homozigot i ima MMSE skor od 22-28. Prema pojedinim aspektima od trinaestog do petnaestog primera izvođenja, subjekat je izabran ukoliko je subjekat APOE4 homozigot i ima MMSE skor od 22-26.

[0066] U šesnaestom primeru izvođenja, ovde je obezbeđen postupak za selektovanje i lečenje subjekta koji boluje od AB, koji obuhvata: a) selektovanje subjekta koji ima MMSE skor veći od 19 (npr. veći od 20, veći od 21, veći od 22, veći od 23, veći od 24, veći od 25 ili veći od 26) pre tretmana; i davanje izabranom subjektu efektivne količine jedinjenja koje ima Formulu I, koja je kao što je ovde definisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Prema drugom aspektu, ovde je obezbeđen postupak za selektovanje i lečenje subjekta koji boluje od AB, koji obuhvata: a) selektovanje subjekta koji ima MMSE skor od 16 do 30 (npr. MMSE skor od 22 do 30, MMSE skor od 22 do 28, MMSE skor od 16 do 19, MMSE skor od 18 do 26, MMSE skor od 20 do 26 ili MMSE skor od 22 do 26) pre tretmana; i davanje izabranom subjektu efektivne količine jedinjenja koje ima Formulu I, koja je kao što je ovde definisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0067] U sedamnaestom primeru izvođenja, ovde je obezbeđen postupak za prevenciju AB koji obuhvata davanje subjektu kome je to potrebno, efektivne količine jedinjenja koje ima Formulu I, koja je kao što je ovde definisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0068] U osamnaestom primeru izvođenja, ovde je obezbeđen postupak za prevenciju pada u kogniciji kod subjekta koji je asimptomatičan, ali koji je u riziku od AB ili kognitivnog pada, koji obuhvata davanje subjektu kome je to potrebno, efektivne količine jedinjenja koje ima Formulu I, koja je kao što je ovde definisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Subjekti koji su u riziku bi uključivali, na primer, prisustvo APOE4/4 (ili i APOE4 i APOE4/4), poodmaklo starosno doba ili obrazac familijarnog kognitivnog pada, ili kombinaciju dva ili više od prethodno navedenih.

[0069] U pogledu prevencije AB ili prevencije pada u kogniciji kod subjekta koji je asimptomatičan, ali koji je u riziku od AB ili kognitivnog pada, postavili smo hipotezu na osnovu podataka prikazanih u nastavku teksta, da je 3-SPA uvek aktivan u mozgu i da sprečava ili inhibira obrazovanje toksičnih oligomera. Prema tome, što je niža količina 3-SPA, veća je podložnost subjekta da razvije kognitivni pad, ili da ga razvije ranije. Davanje jedinjenja kao što su ona koja su ovde opisana, trebalo bi da proizvede više 3-SPA u mozgu. Navedeno bi zauzvrat trebalo da uspostavi konzistentnu i/ili pojačanu inhibiciju Aβ oligomera i na taj način dovede do prevencije AB ili pada u kogniciji.

3. Jedinjenja predmetnih upotreba / Postupci

[0070] Jedinjenja koja se koriste u predmetnim postupcima uključuju ona koja imaju Formulu I, koja je kao što je prethodno definisano, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

[0071] Alternativno, u šesnaestom primeru izvođenja, jedinjenja koja se koriste u predmetnim postupcima uključuju ona koja imaju Formulu I, koja je kao što je prethodno definisano, pri čemu je R<2>izabran od vodonika i C1-C6alkila, i pri čemu su preostale varijable za jedinjenje kao što je prethodno opisano za Formulu I. Alternativno, jedinjenja koja se koriste u predmetnim postupcima uključuju ona koja imaju Formulu I, koja je kao što je prethodno definisano, pri čemu je R<2>-CH3i pri čemu su preostale varijable kao što je prethodno opisano za Formulu I.

[0072] Alternativno, u sedamnaestom primeru izvođenja, jedinjenja koja se koriste u predmetnim postupcima uključuju ona koja imaju Formulu I, koja je kao što je prethodno definisano, pri čemu je R<1>izabran od -O-R<3>, -O-R<4>-CH(NHR<6>)-C(O)-R<5>i -O-R<4>-CH(NHR<6>)-CH(OH)-R<5>; R<3>je C1-C4alkil; i R<4>je izabran od -CH(CH3)-, -CH2-,

i pri čemu su preostale varijable za jedinjenje kao što je prethodno opisano za Formulu I, ili kao što je opisano u drugom primeru izvođenja.

[0073] Alternativno, u osamnaestom primeru izvođenja, jedinjenja koja se koriste u predmetnim postupcima uključuju ona koja imaju Formulu I, koja je kao što je prethodno definisano, pri čemu je R<6>izabran od vodonika, -C(O)H, -C(O)CH3, -C(O)O-C(CH3)3i -C(O)O-benzila, i pri čemu su preostale varijable za jedinjenje kao što je prethodno opisano za Formulu I, ili kao što je opisano u drugom ili trećem primeru izvođenja.

[0074] Alternativno, u devetnaestom primeru izvođenja, jedinjenja koja se koriste u predmetnim postupcima uključuju ona koja imaju Formulu I, koja je kao što je prethodno definisano, pri čemu je R<5>izabran od -OH, -OCH3, i -OCH2CH3i pri čemu su preostale varijable za jedinjenje kao što je prethodno opisano za Formulu I, ili kao što je opisano u drugom, trećem ili četvrtom primeru izvođenja.

[0075] Alternativno, u dvadesetom primeru izvođenja, jedinjenje Formule I je izabrano od bilo kog jedinjenja u Tabeli 1 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli:

Tabela 1

4. Formulacija i davanje

[0076] Jedinjenja postupaka koji su ovde opisani mogu biti formulisana kao farmaceutske kompozicije i biti davana subjektu kao što je čovek. Kompozicije koje su ovde opisane mogu biti davane oralno, parenteralno, putem spreja za inhalaciju, topikalno, rektalno, nazalno, bukalno, vaginalno ili preko implantiranog rezervoara. Termin „parenteralnoˮ, kako se ovde upotrebljava, uključuje subkutane, intravenske, intramuskularne, intra-artikularne, intrasinovijalne, intrasternalne, intratekalne, intrahepatične, intralezijske i intrakranijalne tehnike injeciranja ili infuzije. Ovde su uključeni tečni dozni oblici, preparati za injeciranje, oblici u vidu čvrstih disperzija i dozni oblici za topikalno ili transdermalno davanje jedinjenja. Prema jednom aspektu, davanje je oralno.

[0077] Farmaceutski prihvatljivi nosači koji mogu biti upotrebljeni u kompozicijama ovog opisa uključuju, ali nisu ograničeni na, jonoizmenjivače, aluminu, aluminijum stearat, magnezijum stearat, lecitin, serumske proteine, kao što je humani serumski albumin, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum sorbat, delimične gliceridne mešavine zasićenih biljnih masnih kiselina, vodu, soli ili elektrolite, kao što su protamin sulfat, dinatrijum hidrogen fosfat, kalijum hidrogen fosfat, natrijum hlorid, soli cinka, koloidna silika, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze (npr. mikrokristalna celuloza, hidroksipropil metilceluloza, monohidrat laktoze, natrijum lauril sulfat i natrijum kroskarmeloza), polietilen glikol, natrijum karboksimetilcelulozu, poliakrilate, voskove, polietilen-polioksipropilenski-blok polimere, polietilen glikol i mast vune.

[0078] Postupci davanja mogu upotrebljavati količinu i put davanja koji je efektivan za lečenje ili smanjenje ozbiljnosti bolesti koja je ovde opisana. Tačna potrebna količina će varirati od subjekta do subjekta, u zavisnosti od vrste, starosti i opšteg stanja subjekta, kao i od težine infekcije, određenog agensa, načina njegovog davanja i sličnog. Obezbeđena jedinjenja su poželjno formulisana u jediničnom doznom obliku radi lakog davanja i uniformnosti doziranja. Na primer, obezbeđena jedinjenja mogu biti formuisana tako da se pacijentu koji prima ove kompozicije može dati doza jedinjenja između 0,01 - 100 mg/kg telesne težine/dan. Izraz „jedinični dozni oblikˮ, kako se ovde upotrebljava, odnosi se na fizički diskretnu jedinicu agensa koja je prikladna za pacijenta koji će biti lečen. Podrazumeva se, međutim, da će o ukupnoj dnevnoj upotrebi jedinjenja i kompozicija predmetnog opisa odlučivati ordinirajući lekar u skladu sa Dobrom medicinskom praksom. Specifičan efektivni dozni nivo za bilo određenog pacijenta ili organizam zavisiće od niza faktora, uključujući poremećaj koji se leči i ozbiljnost poremećaja; aktivnost specifičnog jedinjenja koje se koristi; specifičnu kompoziciju koja se koristi; starost, telesnu težinu, opšte zdravstveno stanje, pol i ishranu pacijenta; vreme davanja, put davanja i stopu izlučivanja specifičnog jedinjenja koje se koristi; trajanje lečenja; lekove koji se upotrebljavaju u kombinaciji ili istovremeno sa specifičnim jedinjenjem koje se koristi, i sličnih faktora koji su dobro poznati u medicinskoj oblasti tehnike.

PRIMERI PRONALASKA

1. Postupci

Prikupljanje i obrada uzoraka humane CSF

[0079] Individualni uzorci likvora su dobijeni iz 64 subjekta muškog i ženskog pola sa kognitivnim oštećenjem (MMSE opsega od 15-30) usled raznovrsnih neurogenerativnih bolesti (opisne karakteristike su sumirane u Tabeli 1). Ovi pacijenti su bili upućeni u Centar za kogniciju na Odeljenju za neurologiju Karlovog univerziteta, 2. Medicinskog fakulteta i Univerzitetske bolnice Motol, Prag, Češka Republika. Navedena 64 uzorka su zapravo dobijena iz pacijenata kod kojih su klinički dijagnostifikovana sledeća stanja: Alchajmerova demencija (AB demencija; n=14), blago kognitivno oštećenje usled AB (MCI usled AB, n=20), mešana demencija (n=3), bolest Levijevih tela (LBD; n=1), frontotemporalna lobarna degeneracija (FTLD; n=18), blago kognitivno oštećenje druge etiologije (ostali MCI; n=7) i progresivna supranuklearna paraliza (n=3). Vaskularna bolest je razmatrana kada su na MRI bile prisutne konfluentne vaskularne promene (Fazekasova skala 2 i 3). Izvlačeno je po 12 ml likvora, lumbalnom punkcijom u ležećem položaju, a između tela L3-L5 pršljenova, upotrebom atraumatske igle. Lumbalna punkcija je rađena između 8 i 11 sati ujutro, odmah nakon uzimanja uzorka seruma. CSF je prebacivana u laboratoriju za CSF, koja se nalazila na istom spratu, gde je vršeno centrifugiranje od 5 minuta na 2000 o/min, na sobnoj temperaturi. Nakon centrifugiranja, CSF je alikvotan upotrebom epruveta od 0,5 ml i odmah je uskladišten na -80 °C. Za uzorkovanje i skladištenje likvora su upotrebljavane samo polipropilenske epruvete. Vreme obrade između vađenja CSF, centrifugiranja i zamrzavanja je standardizovano i ukupno nije prelazilo 45 minuta.

[0080] Uzorci su uzimani iz zamrzivača i otpremani na suvom ledu u kompaniju Nextcea Inc (Woburn, MA), a nakon prijema, čuvani su u zamrzivaču koji je bio podešen tako da se održava -80 °C. Prikupljanje i skladištenje likvora su obavljani nakon što su subjekti potpisali informisani pristanak koji je bio u skladu sa etičkim smernicama u Češkoj Republici i sa dobrom kliničkom praksom, kao i u skladu sa široko priznatim konsenzusnim protokolom za standardizaciju prikupljanja i biobankinga likvora (Viola i saradnici, Amyloid β oligomers in Alzheimer’s disease pathogenesis, treatment, and diagnosis. Acta Neuropathol 2015; 129:183-206; i Vanderstichele i saradnici, Standardization of preanalytical aspects of cerebrospinal fluid biomarker testing for Alzheimer’s disease diagnosis: A consensus paper from the Alzheimer’s Biomarkers Standardization Initiative. Alzheimers Dement 2012; 8(1):65-73). Komercijalni ELISA kompleti (Innogenetics NV, Gent, Belgija) upotrebljeni su za analize biomarkera demencije (Aβ1-42, tau proteina i fosfo-tau), a kao granične vrednosti za isključivanje su upotrebljavane vrednosti izvedene iz validacione studije. Koncentracije 3-SPA u CSF-u su kvantifikovane i kod 12 pacijenata koji su primali dozu tramiprozata od 150 mg dva puta dnevno, u 78. nedelji Faze 3 Severnoameričkog ispitivanja AB.

Identifikacija i kvantifikacija 3-SPA u humanoj CSF upotrebom LC-MS/MS postupka

[0081] Analizu CSF uzoraka je uradila kompanija Nextcea, upotrebom LC-MS i LC-MS/MS postupaka. Nextcea je na analizu primio ukupno 64 humana uzorka CSF.

Derivatizacija i LC-MS/MS postupak

[0082] Referentni 3-SPA materijal i uzorci humane CSF su mešani sa N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil) karbodiimidom (EDC) i 2,2,2-trifluoro etilaminom (TFEA). Uzorci su zatim vorteksovani i ostavljeno je da se reakcija odvija na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Reakcione smeše su dalje centrifugirane na 4500 o/min tokom 5 minuta. Supernatant je prebačen u novu ploču za analizu. 3-SPA je identifikovan i okarakterisan upotrebom LC-MS i LC-MS/MS. Uzorci su injeciranjem nanošeni na AQUASIL kolonu od 5 µm, 50 x 2,1 mm kompanije Thermo Scientific, upotrebom autoinjektora i UPLC pumpe kompanije Shimadzu. Mobilna faza A je bila 0,1% trifluorosirćetna kiselina u vodi (v/v). Mobilna faza B je bila 0,1% mravlja kiselina u 90/10 acetonitrila/vode (v/v). Brzina protoka je iznosila 0,35 mL/min. Ukupno vreme rada po uzorku je iznosilo 4 min. Za detekciju je korišćen API 6500 trostruki kvadrupolni maseni spektrometar. Podaci su dobijani u negativnim LC-MS i LC-MS/MS režimima rada. Reprezentativni hromatogrami za 3-SPA u sirovom nativnom materijalu i humanoj CSF derivatizovanoj sa EDC i TFEA prikazani su na SL.7, SL.8 Panel A i SL.8 Panel B. LC-MS i LC-MS/MS podaci su dobijani upotrebom softvera Analyst (AB Sciex, Foster City, CA). LOQ za LC-MS/MS postupak je iznosio 0,1 ng/ml, a dinamički opseg je bio od 0,1 do 1000 ng/ml (r=0,99688 i % CV od 5,8% ± 2,0; podaci u fajlu).

3-SPA je identifikovan u humanoj CSF usklađivanjem hromatografskog retencionog vremena i koelucije tranzicionih jona u LC-MS/MS sa autentičnim 3-SPA referentnim standardom (sintetisanim od strane kompanije Paraza Pharma, Montreal, Kanada).

Molekulsko modelovanje i simulacije molekulske dinamike za 3-SPA

[0083] Celokupno molekulsko modelovanje je urađeno upotrebom Šredingerovog paketa (Schrödinger Suite, 2015-3; Schrödinger, LLC, New York, NY). Simulacije molekulske dinamike su vršene upotrebom Desmond programa. Pogledati Vanderstichele i saradnici, Standardization of preanalytical aspects of cerebrospinal fluid biomarker testing for Alzheimer’s disease diagnosis: A consensus paper from the Alzheimer’s Biomarkers Standardization Initiative. Alzheimers Dement 2012; 8(1):65-73. Simulacije su rađene na GeForce GTX Titan Black GPU (grafička procesorska jedinica) karticama. Za modelovanje svih interakcija je upotrebljeno OPLS 3.0 (Optimizovani potencijal za simulacije tečnosti) polje sile (Hort i saradnici, The liquor tau protein and beta amyloid in Alzheimer’s disease. Cesk Slov Neurol N 2007; 70(1):30-36), a SPC model je upotrebljavan za vode. Kao polazna tačka za simulacije molekulske dinamike upotrebljena je 1IYT Aβ42 NMR struktura iz Proteinske banke podataka (PDB). Ova struktura je prvenstveno tipa alfa zavojnice i reprezentativna je za peptid u apolarnom okruženju. Polje od 20 Angstrema za vodu ili mešavinu rastvarača, za 1% 3-SPA u vodi, opcrtano je oko peptida upotrebom alata za podešavanje Šredingerovog sistema. Radi neutralizacije naelektrisanja celokupnog sistema, dodati su i joni. Simulacije su uravnotežene i propuštene pod NPT uslovima (konstantan broj (N), pritisak (P) i temperatura (T) sa periodičnim graničnim uslovima. Za kontrolu temperature i pritiska su upotrebljavani Nos-Hoover-ov termostat i Martina-Tobias-Klein-ov barostat, tim redom. Simulacije su rađene u 3 ponavljanja, pri čemu je trajanje svakog iznosilo 100 nanosekundi, nakon čega su rezultati prikupljeni za analizu. Analiza glavnih komponenti je vršena upotrebom ProDy programa (Shivakumar i saradnici, Improving the Prediction of Absolute Solvation Free Energies Using the Next Generation OPLS Force Field. J. Chem. Theory Comput 2012; 8:2553-8), pa su podaci unošeni u grafike upotrebom prilagođenih Pajton skripti.

Masena spektrometrija pokretljivosti jona (IMS MS)

[0084] Uslovi korišćeni za masenu spektrometriju, upotrebom Synapt G2-S uređaja kompanije Waters, bili su sledeći: pozitivan polaritet režima osetljivosti, kapilara = 2,5 kV, nebulizator = 2 mbar, temperatura izvora = 80 °C, temperatura desolvatacije = 60 °C, podešavanje konusa za uzorak = 35 V, podešavanje pomeraja izvora = 60 V i opseg mase = 500 do 4000 mlz. Ovi uslovi su održavani tokom čitave studije, da bi se osigurala konzistentnost podataka i da se izbegao uticaj na detekciju oligomera usled preferencijalnih uslova jonizacije.

[0085] Uzorci su nanošeni u maseni spektrometar direktnom infuzijom, pri brzini protoka od 10 µL/min, upotrebom Protea PM-1000 špric pumpe i Hamilton šprica od 1 mL. Snimanje podataka za amiloidni peptid je vršeno upotrebom Synapt G2-S kvadrupolnog masenog spektrometra kompanije Waters sa analizatorom na bazi vremena preleta jona (Q-TOF MS) i sa pokretljivošću jona tipa putujućih talasa (Waters Corp., Milford, MA). Podaci su snimani upotrebom režima osetljivosti sistema koji omogućava detekciju manje zastupljenih oligomera. Uzorci su nanošeni infuzijom na sobnoj temperaturi. IMS MS studije su urađene u kompaniji Protea, Inc. (Morgantown, WV).

Priprema uzoraka

[0086] U 200 µL Optima vode LC/MS stepena čistoće kompanije Fisher (kat br. W6-1), rekonstituisan je 1 mg rekombinantnog humanog Aβ42 peptida kompanije BioLegend (čistoće 99%, kat. br.843801) i smeša je snažno vorteksovana tokom 2 minuta, da se peptid solubilizovao dajući rastvor koncentracije od 5 mg/mL. Uzorci su pre inkubacije razblaženi do finalne koncentracije od 22 pmol/µL. Smeše uzoraka su zatim inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 0, 4 i 24 sata. Nakon što je snimanje inkubiranih uzoraka završeno, sirovi podaci su analizirani upotrebom MassLynx paketa v2.4 kompanije Waters sa DriftScover v2.7 programom, da bi se vizuelizovala vremena pomeraja za peptid.

Karakterizacija Aβ42 vrsta

[0087] Karakterizacija Aβ42 vrsta, upotrebom IMS MS, rađena je direktnom infuzijom rastvora od 22 pmol/µL u vodi. Peptid je pripreman u vodi, da bi se održala konformacija nativnog stanja peptida, a snimanje podataka za pokretljivost jona je vršeno da bi se detektovale i okarakterisale konformacione promene monomera u nativnom stanju, kao i bilo kojih oligomera koji su se mogli obrazovati tokom inkubacije.

IMS MS studija vezivanja za 3-SPA

[0088] Snimanje podataka za Aβ42 peptid je vršeno upotrebom Synapt G2-S kvadrupolnog masenog spektrometra kompanije Waters sa analizatorom na bazi vremena preleta jona (Q-TOF MS) i sa pokretljivošću jona tipa putujućih talasa (Waters Corp., Milford, MA). Podaci su snimani upotrebom režima osetljivosti sistema koji omogućava detekciju manje zastupljenih oligomera. Uzorci su nanošeni infuzijom na sobnoj temperature, kao što je prethodno navedeno.

[0089] U 1 mL Optima vode LC/MS stepena čistoće kompanije Fisher (kat br. W6-1) rekonstituisan je 1 mg 3-SPA i smeša je snažno vorteksovana tokom 2 minuta, do njegovog potpunog rastvaranja. Uzorak je zatim razblažen, da bi se napravio rastvor od 220 pmol/µL i 22,000 pmol/µL, a da bi se dobio 100-struki i 1000-struki molarni višak za eksperimente vezivanja sa Aβ42 peptidom.

[0090] U 200 µL Optima vode LC/MS stepena čistoće kompanije Fisher rekonstituisan je i 1 mg rekombinantnog humanog Aβ42 peptida i smeša je snažno vorteksovana da bi se peptid solubilizovao do rastvora od 5 mg/mL. Uzorci su pre inkubacije razblaživani do njihove finalne koncentracije. Smeše uzoraka su zatim inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 0, 4 i 24 sata, nakon čega je sledila analiza, kao što je prethodno opisano.

Farmakokinetika, oralna apsorpcija i izloženost mozga 3-SPA kod Sprague-Dawley (SD) pacova

[0091] Farmakokinetike nakon oralnog i iv davanja 3-SPA procenjivane su kod mužjaka Sprague-Dawley pacova nakon gladovanja, u dozi od 30 mg/kg i 10 mg/kg, tim redom (n=3 po grupama). Životinje su do eksperimenta gajene u standarnim uslovima vivarijuma, sa vodom i hranom obezbeđenim ad libitum. 3-SPA je rastvaran u fiziološkom rastvoru i davan je oralno gavažom, a intravenski u vidu bolusne injekcije. Serijski uzorci krvi (svaki od približno 1,0 mL) prikupljeni su iz svake životinje nakon 0,25; 0,5, 1, 2, 4, 8 i 24 sata od davanja doze, u epruvete koje su sadržavale K2EDTA, nakon čega je plazma izdvojena centrifugiranjem. Uzorci plazme su čuvani na -80 °C do bioloških analiza.

[0092] Posebnoj grupi životinja je oralno data doza od 30 mg/kg, nakon čega su uzorci mozga, likvora i plazme prikupljeni žrtvovanjem nakon 1, 2, 6 i 24 sata (3 životinje za svaku vremensku tačku) radi biološke analize koncentracije 3-SPA u mozgu i CSF, kao i za procenu penetracije u mozak u odnosu na koncentracije u plazmi. Studija na živim životinjama je urađena u Agilux Laboratories (Worcester, MA), praćenjem standarda kvaliteta u skladu sa Dobrom laboratorijskom praksom. Biološke analize plazme, likvora i mozga pacova su vršene LC-MS/MS postupkom u Nextcea. Pre obrade mozga pacova za bioanalizu, mozgovi su perfundovani, da bi se uklonila zaostala krv. Analize farmakokinetičkih podataka su urađene upotrebom Winnonlin Professional programa v5.0.1 (Pharsight, Mountain View, CA).

2. Rezultati

Identifikacija i kvantifikacija 3-SPA u CSF subjekata koji nisu dobijali lekove i kod pacijenata sa AB lečenih tramiprozatom

[0093] 3-SPA je identifikovan i kvantifikovan u humanoj CSF upotrebom LC-MS/MS postupka. Uzorci su pre analize derivatizovani sa EDC i TFEA. Tranzicioni joni u LC-MS/MS su selektovani za praćenje na osnovu jonskog spektra proizvoda dobijenog derivatizacijom 3-SPA referentnog standard, 2-[(2,2,2-trifluoroetil)karbamoil]etan-1-sulfonske kiseline. [M-H]- za 3-SPA je detektovan u humanoj CSF na m/z 234,1 i u retencionom vremenu od 1,55 min. Strukturno podudaranje 3-SPA u humanoj CSF sa autentičnim uzorkom kao standardom, urađeno je preklapanjem molekulskog pika kiseline, kao i molekulskih pikova derivata 2-[(2,2,2-trifluoroetil)-karbamoil]etana-1-sulfonske kiseline, uključujući MS-MS obrazac fragmentacije, praćenjem dva LC-MS/MS tranziciona jona. Tranzicioni joni i retenciona vreme 3-sulfopropanske kiseline u humanoj CSF su se poklopili sa autentičnim referentnim standardom 3-sulfopropanske kiseline. Za kvantifikaciju su izabrani tranzicioni joni molekulskog pika dikiseline (234,1/80,9). LLOQ iz LC-MS/MS testa je iznosio 0,1 ng/mL za 3-SPA. Koncentracije 3-SPA u humanoj CSF su date u Tabeli 1. U posebnoj analizi, prisustvo 3-SPA je takođe potvrđeno LC-MS/MS postupkom u uzorcima CSF ljudi koji nisu dobijalni nikakve lekove, a koji su dobijeni od Bioreclamation, Westbury, NY (n=27 i n=88, tim redom). Pogledati SL.2

Tabela 1 – Koncentracije 3-SPA u humanoj CSF pacijenata sa memorijskim deficitima koji nisu uzimali lekove

[0094] Nivoi 3-SPA kod pacijenata sa različitim oboljenjima koja narušavaju kogniciju, uključujući AB, bili su opsega od 4,15 do 27,7 nM (0,64 - 4,27 ng/ml) (Tabela 1). Kada se odnosi na koncentracije Aβ42 monomera u CSF kod pacijenata sa AB (0,04 nM do 0,1 nM) (Bakan i saradnici, ProDy: protein dynamics inferred from theory and experiments. Bioinformatics 2011; 27:1575-7; Shaw i saradnici, Cerebrospinal fluid biomarker signature in Alzheimer’s disease neuroimaging initiative subjects. Ann Neurol 2009; 65:403-13; Pannee i saradnici, Reference measurement procedure for CSF Abeta1-42 and the CSF Abeta1-42 /Abeta1-40 ratio - a crossvalidation study against Amyloid PET. J. Neurochem 2016; i Lambert i saradnici, Diffusible, nonfibrillar ligands derived from A 1-42 are potent central nervous system neurotoxins. PNAS. 1998; 95:6448-53), prisutan je višak 3-SPA od približno 40-700 puta u odnosu na solubilne Aβ42 monomere, što pripada opsegu gde se kod pojedinih pacijenata može javiti delimična aktivnost tipa inhibicije agregacije Aβ u oligomere (Tabela 3). Štaviše, retrospektivne analize CSF u okviru podgrupe pacijenata iz Faze 3 ispitivanja za tramiprozat takođe su procenjene na prisustvo 3-SPA, primarnog metabolita tramiprozata. Tabela 2 predstavlja deskriptivne sažetke koncentracija 3-SPA u CSF. Koncentracije metabolita su kvantifikovane kod 6 pacijenata za koje su bili dostupni CSF uzorci u 78. nedelji. Srednja koncentracija 3-SPA u CSF-u je iznosila 147 nM (opseg = 114,3 - 235,8 nM), što predstavlja povećanje od 12,6 puta u odnosu na nivoe uočene kod pacijenata koji nisu uzimali lekove.

Tabela 2. Koncentracije 3-SPA u CSF-u (ng/mL) nakon 78 nedelja, Faza 3 Severnoameričkog kliničkog ispitivanja za tramiprozat

Anti-Aβ42 oligomerna aktivnost 3-SPA

[0095] Da bi se ispitala visoka konformaciona fleksibilnost Aβ42 i okarakterisala njegova interakcija sa 3-SPA, upotrebljavali smo masenu spektrometriju pokretljivosti jona (IMS), sa kvadrupolnim masenim spektrometrom spregnutim sa analizatorom na bazi vremena preleta jona (Q-TOF MS) i pokretljivošću jona tipa putujućih talasa. Dobijeni efekat modulacije konformacionog prostora Aβ je sprečavanje obrazovanja oligomera. Utvrdili smo ne samo zavisnost od koncentracije, već i vremensku zavisnost ovog anti-Aβ42 oligomernog efekta za 3-SPA, kao što je navedeno na SL. 3 i SL.4. Sažetak zavisnosti viška koncentracije 3-SPA u odnosu na Aβ42 je predstavljen u Tabeli 3. Molarni višak 3-SPA od 100 u odnosu na višak od 1000 puta za Aβ42 doveo je do različitih podvrsta inhibicije obrazovanja oligomera Aβ42. Aktivnost je takođe upoređena sa zavisnošću za iste viškove tramiprozata. Za 3-SPA je pokazana skoro potpuna prevencija obrazovanja Aβ42 oligomera osim pentamera.

Tabela 3 – Poređenje anti-Aβ42 oligomerne aktivnosti za 3-SPA u odnosu na tramiprozat u višku od 100:1 i 1.000:1 odnosa jedinjenje: protein

[0096] Dok su funkcionalni krajnji rezultati, tj. inhibicija obrazovanja oligomera Aβ42, isti za tramiprozat i njegov metabolit, 3-SPA, konformacioni pejzaž procesa nije. 3-SPA kao dianjon u fiziološkim uslovima reaguje sa katjonima, na aminokiselinskim bočnim lancima Aβ42 (SL. 5). Navedeno su protonovane amino grupe Asp1, Lys16, Lys28, His13,14. U isto vreme, deluju odbojne sile 3-SPA dianjonskih i karboksilatnih grupa Aβ42. Ova interakcija jonskih interakcija doprinosi značajnim konformacionim promenama monomernih vrsta Aβ42.

[0097] I MS podaci o pokretljivosti jona i molekulske dinamike (SL. 3, 4, 7, 8 Panel A i 8 Panel B) prikazuju interakciju tipa višestrukog vezivanja liganda za 3-SPA sa Aβ42 monomerima.3-SPA stupa u interakciju sa Aβ42 preko različitih jonskih interakcija u odnosu na tramiprozat. Zanimljivo je i da iako koriste različite obrasce jonskog vezivanja pod istim uslovima, podaci iz IMS MS i molekulskih dinamika pokazuju kvalitativno isti inhibitorni rezultat oligomerizacije za oba jedinjenja. Tramiprozat je pokazao potpunu inhibiciju obrazovanja Aβ42 oligomera nakon 24 sata in vitro, dok je 3-SPA pokazao iste rezultate sa izuzetkom inhibicije obrazovanja pentamera u istoj vremenskoj skali. Ipak, detaljno ispitivanje vremenskog toka takođe pokazuje vremenski zavisan tok inhibicije obrazovanja oligomera. Nakon 4 sata, 3-SPA inhibira obrazovanje oligomera sa izuzetkom dimera, trimera i pentamera. Nakon kontinuiranog 24-časovnog izlaganja, jedine oligomerne vrste koje nisu inhibirane su pentameri Aβ42. Ovi podaci ukazuju da je prvi anti-oligomerni efekat tramiprozata praćen drugim anti-oligomernim efektom metabolita tramiprozata, 3-SPA.

Farmakokinetike i penetracija u mozak za oralno dat 3-SPA kod pacova

[0098] Koncentracija u plazmi nakon jednokratne doze 3-SPA, rastvorene u fiziološkom rastvoru u vidu bistrog rastvora, date oralno i intravenski pacovima u doznom nivou od 30 mg/kg i 10 mg/kg, tim redom, prikazana je na SL.9. Mozak, CSF i odgovarajući nivoi u plazmi nakon jednokratne oralne doze za dozu od 30 mg/kg 3-SPA u 1., 2., 6. i 24. satu su prikazani na SL. 10. Za izračunavanje farmakokinetičkih parametara su upotrebljene srednje vrednosti PK kriva. Dobijeni farmakokinetički parametri, oralna bioraspoloživost i penetracija 3-SPA u mozak kod pacova, dati su u Tabelama 4-6.

Tabela 4 – Farmakokinetički parametri za oralno dat 3-SPA kod mužjaka SD pacova (n=3)

Tabela 5 – Farmakokinetički parametri za iv dat 3-SPA kod mužjaka SD pacova (n=3)

Tabela 6 – Penetracija u mozak za oralno dat 3-SPA (30 mg/kg) kod mužjaka SD pacova

3. Priprema jedinjenja Formule I

Opšti put sinteze alkil estara 3-sulfopropanskih-1-alkil estara

[0099] Reagensi koji slede, dodavani su u epruvetu sa magnetom za mešanje po sledećem redosledu: olefin (0,20 mmol), MeOH (2,0 mL), trietilamin (5,5 µL; 0,04 mmol) i 0,5 M vodeni rastvor natrijum bisulfita (0,6 mL; 0,3 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na 22°C tokom 14 sati.

[0100] Alternativno, ovi alkil estri mogu biti pripremljeni od beta-bromopropionske kiseline, reakcijom sa Na2SO3i odgovarajućim alkoholom.

Alternativni postupak za pripremu 3-sulfopropanskih-1-alkil estara.

[0101] Reakcija 3-hloro-3-oksopropan-1-sulfonske kiseline sa odgovarajućim C1-C20alkoholom u acetonitrilu, na sobnoj temperature, obezbeđuje odgovarajući C1-C20estar 3-sulfopropanske kiseline

Priprema halida alfa-sulfokarboksilne kiseline

[0102] Hlorid sulfokarboksilne kiseline može biti pripremljen tretiranjem sulfokarboksilne kiseline sa sredstvom za halogenovanje, npr. SOCl2u dietiletru, kao i sa neophodnom količinom dimetilformamida za rastvaranje na 30° tokom 45 sati.

Opšti put sinteze 3-sulfopropanskih estara dobijenih od aminokiselina povezanih preko hidroksilne funkcionalne grupe u njihovom bočnom lancu

[0103] Reakciona smeša 1 ekv. N-zaštićene aminokiseline, ili N-zaštićene i karboksil-derivatizovane aminokiseline, sa 1 ekv. 3-hloro-3-oksopropan-1-sulfonske kiseline u organskom rastvaraču, npr. acetonitrilu (po potrebi sa DMF, radi solubilizacije, ili za reaktante) mešana je na sobnoj temperaturi. U zavisnosti od amino-zaštitne grupe, dodavani su zatim trietilamin ili N-metilpiperidin. Reakcija je praćena do nestanka početne aminokiseline. Reakciona smeša je konačno uparena, nakon čega je sledila uobičajena obrada.

Sinteza (2S)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-[(3-sulfopropanoil)oksi]-propanske kiseline

[0104] Reakciona smeša 1 ekv. Boc-L-serina sa 1 ekv. 3-hloro-3-oksopropan-1-sulfonske kiseline u organskom rastvaraču, npr. acetonitrilu (po potrebi sa DMF, radi solubilizacije, ili za reaktante) i N-metilpiperidinom, mešana je na sobnoj temperaturi. Reakcija je praćena do nestanka početnog Boc-L-serina. Reakciona smeša je zatim uparena, nakon čega je sledila uobičajena obrada, da bi se obezbedila (2S)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-[(3-sulfopropanoil)oksi]propanska kiselina.

Priprema (2S)-2-amino-3-[(3-sulfopropanoil)oksi]propanske kiseline

[0105] Uklonjena je zaštitna grupa sa (2S)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-[(3-sulfopropanoil)oksi]propanske kiseline u trifluorosirćetnoj kiselini ili u smeši, ukoliko je dihlorometan sa trifluorosirćetnom kiselinom (1:1) u prisustvu tioanizola tokom 30 min.

Opšti postupak za sintezu jedinjenja sa strukturom jezgra tipa 2-(karbamoilmetilkarbamoil)etansulfonske kiseline, (3-sulfopropanamido)sirćetne kiseline, [2-(3-sulfopropanamido)acetamido]sirćetne kiseline i 2-[(karbamoilmetilkarbamoil)metilkarbamoil] etansulfonske kiseline

[0106] U 1 ekv. 3-hloro-3-oksopropan-1-sulfonske kiseline u acetonitrilu sa DMF (u zavisnosti od rastvorljivosti reaktanata) dodat je 1 ekv. odgovarajuće N-zaštićene i na bočnom lancu O-zaštićene aminokiseline ili derivata aminokiseline, ili N-zaštićenog i na bočnom lancu O-zaštićenog dipeptida ili derivata dipeptida, nakon čega je dodat 1 ekv. tercijarne baze npr. trimetilamina ili N-metilpiperidina. Reakcija je vršena na sobnoj temperaturi i praćena je do nestanka početne aminokiselinske ili dipeptidne komponente. Uobičajena obrada daje odgovarajući proizvod.

[0107] Aktivnost i/ili farmaceutske osobine prethodno navedenih jedinjenja koja su ovde opisana, može biti dobijena upotrebom bioloških i/ili ADME testova poznatih stručnjacima iz oblasti tehnike.

4. Diskusija

[0108] U okviru naših studija, utvrdili smo prisustvo 3-SPA u humanoj cerebrospinalnoj tečnosti (CSF) osoba koje nisu uzimale lekove. Pogledati, npr. SL. 2. Takođe, kao što je prethodno navedeno (pogledati, npr. Tabelu 1), identifikovali smo prisustvo 3-SPA u CSF kod 64 pacijenta sa kognitivnim oštećenjima koji nisu primali lekove. Srednja koncentracija 3-SPA u stuidije je iznosila 11,7 ± 4,3 nM. Pokazali smo takođe da 3-SPA izaziva anti-Aβ42 oligomerni efekat na način koji zavisi kako od vremena, tako i od koncentracije. Pogledati prethodno prikazan pasus „Anti-Aβ42 oligomerna aktivnost 3-SPA“. Dalje smo pokazali da ovaj 3-SPA ispoljava 100% oralnu bioraspoloživost i da je penetracija u mozak 25%, što ukazuje da se 3-SPA dobro apsorbuje i da prelazi krvno-moždanu barijeru. Pogledati Tabele 4-6. Uzeti zajedno, ovi podaci ukazuju da su veće koncentracije CSF u ljudskom mozgu nakon oralnog davanja ALZ-801 ili tramiprozata rezultat prolaska metabolita 3-SPA u CNS.

[0109] Identifikovali smo takođe obrnutu korelaciju između koncentracije 3-SPA u CSF i težine kognitivnog oštećenja. Na primer, kako se ozbiljnost AB smanjivala, u CSF-u su utvrđene veće koncentracije 3-SPA. Pogledati SL. 6. Nasuprot tome, kako se ozbiljnost AB povećavala, u CSF-u su utvrđene niže koncentracije 3-SPA. Pogledati SL.6. Ovi podaci ukazuju da nivoi 3-SPA u mozgu imaju važnu ulogu u smanjenju verovatnoće ili odlaganju početka progresije bolesti.

[0110] Na osnovu ovih nalaza, pretpostavljamo da povećanje nivoa 3-SPA u CSF-u može obezbediti terapijsku korist subjektu koji boluje od AB. Pretpostavljamo takođe da će takvo povećanje obezbediti dodatnu korist osobama sa AB sa najmanjim kognitivnim oštećenjem (tj. MMSE = 30) („bazalni nivo/pragˮ), kao i da bi održavanje takvih povišenih nivoa trebalo da zaštiti te subjekte od daljeg kognitivnog pada ili da smanji stepen kognitivnog pada u poređenju sa tretmanom placebom. Povećanje nivoa 3-SPA u CSF iznad takvog bazalnog praga može biti postignuto davanjem jedinjenja Formule I, koja su kao što je ovde opisano. Ovakav nov terapijski pristup obezbeđuje načine za smanjenje neurotoksičnosti oligomera amiloida beta, kao i kliničke puteve za lečenje kognitivnih poremećaja poput AB.

[0111] Iako smo opisali brojne primere izvođenja ovog pronalaska, očigledno je da naši osnovni primeri mogu biti izmenjeni, da bi se obezbedili drugi primeri izvođenja koji koriste jedinjenja i postupake ovog pronalaska. Prema tome, potrebno je napomenuti da bi obim ovog pronalaska trebao da bude definisan priloženim patentnim zahtevima, a ne specifičnim primerima izvođenja koje su navedeni samo kao ilustrativni primeri.

Claims (15)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje Formule I:
2. ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti, gde: R<1>je izabran od -O-R<3>, -O-R<4>-CH(NHR<6>)-C(O)-R<5>i -[N(R<6>)-CH(R<7>)-C(O)]1-2-R<5>; R<2>je izabran od vodonika, R<3>i R<4>-CH(NHR<6>)-C(O)-O-R<5>; svaki R<3>je nezavisno izabran od C1-C20alkil, -C2-C20alkenil, -C2-C20alkinil, -(C0-C20alkilen)-aril, ‑(C0-C20alkilen)-karbociklil, -(C0-C20alkilen)-heterociklil, -(C0-C20alkilen)-heteroaril, -(C2-C20alkenilen)-aril, -(C2-C20alkenilen)-karbociklil, -(C2-C20alkenilen)-heterociklil, -(C2-C20alkenilen)-heteroaril, -(C2-C20alkinilen)-aril,-(C2-C20alkinilen)-karbociklil, -(C2-C20alkinilen)-heterociklil i -(C2-C20alkinilen)-heteroaril; svaki R<4>je nezavisno izabran derivatizovani bočni lanac prirodne ili neprirodne α‑aminokiseline, pri čemu je bočni lanac derivatizovan preko slobodne -OH grupe prisutne na bočnom lancu pre derivatizacije; svaki R<5>je nezavisno izabran od -OH, -O-C1-C4alkil i -NH2; svaki R<6>je nezavisno izabran od vodonika i -C(O)R<8>; R<7>je bočni lanac α-aminokiseline; i svaki R<8>je nezavisno izabran od vodonika, C1-C4alkil, -O-C1-C4alkil, -(C1-C4alkilen)-aril i (C1‑C4alkoksi)-aril; pri čemu: svaki alkilni, alkilenski, alkenilni, alkenilenski, alkinilni ili alkinilenski deo R<3>opciono je supstituisan sa do 6 supstituenata nezavisno izabranih od halo, -OH, -O-(C1-C4alkil), -0-(C1-C4haloalkil), karbociklil, aril, heterociklil i heteroaril; svaki karbociklilni, arilni, heterociklilni ili heteroarilni deo R<3>opciono je supstituisan sa do četiri supstituenta nezavisno izabrana od halo, -OH, -0-(C1-C4alkil), -0-(C1-C4haloalkil), C1‑C18alkil, C2-C18alkenil i C2-C18alkinil, pri čemu su alkil, alkenil ili alkinil delovi C1-C18alkil, C2-C18alkenil ili C2-C18alkinil, tim redom, opciono supstituisani sa do šest supstituenata nezavisno izabranih od halo, -OH, -0-(C1-C4alkil) i -0-(C1-C4haloalkil); R<1>ne sadrži više od 2 ciklična ostatka; i R<2>ne sadrži više od 2 ciklična ostatka; pri čemu: subjekat ima endogeni nivo jedinjenja formule:
3. ispod unapred utvrđenog bazalnog praga pre tretmana, pri čemu se unapred određeni bazalni prag odnosi na jedno ili više od sledećeg: (1) vrednost koncentracije 3-SPA u CSF (±10%) utvrđenu za MMSE od 30, postupkom najboljeg uklapanja između koncentracije 3-SPA i MMSE skorova u nasumičnoj populaciji subjekata sa Alchajmerovom bolešću različitog stepena ozbiljnosti („Nasumična AB populacija“); (2) najvišu koncentraciju 3-SPA u CSF (± 10%) utvrđenu u Nasumičnoj AB populaciji za MMSE ≤ 29; (3) sopstvenu koncentraciju 3-SPA u CSF subjekta (± 5%) utvrđenu pre ispoljavanja bilo kakvih simptoma AB; (4) prosečnu koncentraciju 3-SPA u CSF (± 5%) utvrđenu u normalnoj (ne-AB) populaciji odgovarajuće starosne dobi; (5) za primere izvođenja u kojima se subjekti dalje selektuju po vrednostima unutar određenih opsega MMSE skorova, veće od: (a) vrednosti koncentracije 3-SPA u CSF (± 10%) utvrđene za MMSE od 30, postupkom najboljeg uklapanja između koncentracije 3-SPA i MMSE skorova u Nasumičnoj AB populaciji; ili (b) najviše koncentracije 3-SPA u CSF (± 10%) utvrđene u Nasumičnoj AB populaciji za MMSE skorove jednake ili iznad najnižeg MMSE skora u opsegu selekcije (npr. ukoliko selekcija zahteva MMSE skor između 22- 28, onda je (b) najviša koncentracija 3-SPA u CSF (± 10%) utvrđena u Nasumičnoj AB populaciji za MMSE skorove jednake ili iznad 22); i (6) vrednost koncentracije 3-SPA u CSF (±10%) za MMSE skor subjekta utvrđen postupkom najboljeg uklapanja između koncentracije 3-SPA i MMSE skorova u nasumičnoj populaciji subjekata. 2. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, gde je R<2>izabran od vodonika i C1-C6alkila, kao što su vodonik i -CH3. 3. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 1 ili 2, gde: R<1>je izabran od -O-R<3>, -O-R<4>-CH(NHR<6>)-C(O)-R<5>i -O-R<4>-CH(NHR<6>)-CH(OH)-R<5>; R<3>je C1-C4alkil; i R<4>je izabran od -CH(CH3)-, -CH2-,
4. 4. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, gde je R<6>izabran od vodonika, -C(O)H, -C(O)CH3, -C(O)O-C(CH3)3i -C(O)O-benzil.
5. 5. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, gde je R<5>izabran od -OH, -OCH3i -OCH2CH3.
6. 6. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, gde je koncentracija 3-SPA kod subjekta koncentracija 3-SPA u cerebrospinalnoj tečnosti.
7. 7. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, pri čemu se subjektu daje jedinjenje Formule I samo ukoliko je subjekat ApoE4 heterozigot ili samo ukoliko je subjekat ApoE4/4 homozigot.
8. 8. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7, pri čemu se subjektu daje jedinjenje Formule I samo ukoliko subjekat ima MMSE skor od 22 do 28 pre tretmana, kao što je MMSE skor od 22 do 26 pre tretmana.
9. 9. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, pri čemu unapred određeni bazalni prag obuhvata koncentraciju 3-SPA manju od 25 ng/mL, koncentraciju 3-SPA između 6 ng/ml i 25 ng/ml, koncentraciju 3-SPA manju od 5 ng/mL ili koncentraciju 3-SPA od 2 ng/ml do 4 ng/mL.
10. 10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti kod subjekta koji ima i) koncentraciju 3-SPA manju od 10 ng/ml u uzorku cerebrospinalne tečnosti uzetom iz subjekat ii) bazalni MMSE skor od 22 do 28; i iii) najmanje jedan ApoE4 alel.
11. 11. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 10, pri čemu je koncentracija 3-SPA prisutnog u cerebrospinalnoj tečnosti subjekta 2-4 ng/ml.
12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti kod subjekta koji ima i) koncentraciju 3-SPA manju od 10 ng/ml u cerebrospinalnoj tečnosti; i ii) bazalni MMSE skor od 22 do 30.
13. 13. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 12, pri čemu i) koncentracija endogenog jedinjenja u CSF subjekta manja je od 10 ng/ml; ii) subjekat ima bazalni MMSE skor od 22 do 28; i iii) subjekat ima dva ApoE4 alela.
14. 14. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 12 ili 13, pri čemu je koncentracija 3-SPA prisutnog u cerebrospinalnoj tečnosti subjekta 2-4 ng/ml.
15. 15. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, 10, 12 i 13, pri čemu je koncentracija 3-SPA prisutnog u cerebrospinalnoj tečnosti subjekta manja od 2,0 ng/ml.