RS65078B1 - Jonizujući katjonski lipid za dostavu rnk - Google Patents

Jonizujući katjonski lipid za dostavu rnk

Info

Publication number
RS65078B1
RS65078B1 RS20240048A RSP20240048A RS65078B1 RS 65078 B1 RS65078 B1 RS 65078B1 RS 20240048 A RS20240048 A RS 20240048A RS P20240048 A RSP20240048 A RS P20240048A RS 65078 B1 RS65078 B1 RS 65078B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
etoac
atx
solution
added
reaction
Prior art date
Application number
RS20240048A
Other languages
English (en)
Inventor
Joseph E Payne
Padmanabh Chivikula
Steven P Tanis
Priya Karmali
Original Assignee
Arcturus Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Arcturus Therapeutics Inc filed Critical Arcturus Therapeutics Inc
Priority claimed from PCT/US2017/067756 external-priority patent/WO2018119163A1/en
Publication of RS65078B1 publication Critical patent/RS65078B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C333/00—Derivatives of thiocarbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C333/02—Monothiocarbamic acids; Derivatives thereof
    • C07C333/04—Monothiocarbamic acids; Derivatives thereof having nitrogen atoms of thiocarbamic groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

STANJE TEHNIKE
[0002] Trenutno se razvija niz različitih tipova nukleinskih kiselina kao terapeutika za lečenje brojnih bolesti. Dok se ovi molekuli razvijaju, javila se potreba za njihovom proizvodnjom u obliku koji je stabilan i ima dug rok trajanja, te koji se može lako ugraditi u anhidrovani organski ili anhidrovani polarni aprotički rastvarač kako bi se omogućila inkapsulacija nukleinskih kiselina bez sporednih reakcija koje mogu nastati u polarnom vodenom rastvoru ili nepolarnim rastvaračima.
[0003] Opis ovde se odnosi na nove lipidne kompozicije koje olakšavaju intracelularnu dostavu biološki aktivnih i terapeutskih molekula. Opis se takođe odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže takve lipidne kompozicije, i koje su korisne za dostavu terapeutski efikasnih količina biološki aktivnih molekula u ćelije pacijenata.
[0004] Dostava terapeutskog jedinjenja subjektu je važna za njegove terapeutske efekte i obično može biti ometena ograničenom sposobnošću jedinjenja da dosegne ciljane ćelije i tkiva. Različiti kationički lipidi su opisani u WO2016/081029, uključujući jedinjenja ATX-B-6, ATX-B-7 i ATX-B-8.
Poboljšanje takvih jedinjenja da uđu u ciljane ćelije tkiva različitim metodama dostave je ključno. Opis ovde se odnosi na nove lipide, u kompozicijama i metodama pripreme koje olakšavaju ciljanu intracelularnu dostavu biološki aktivnih molekula.
[0005] Primeri biološki aktivnih molekula za koje često nije postignuto efikasno ciljanje tkiva pacijenta uključuju: brojne proteine uključujući imunoglobulinske proteine, polinukleotide kao što su genomsko DNK, cDNK, ili mRNK antisens polinukleotide; i mnogjedinjenje niske molekulske težine, bilo sintetička ili prirodno prisutna, kao što su peptidni hormoni i antibiotici.
[0006] Jedan od osnovnih izazova s kojima se suočavaju medicinski praktičari je da se trenutno razvija niz različitih tipova nukleinskih kiselina kao terapeutika za lečenje brojnih bolesti. Ove nukleinske kiseline uključuju mRNK za izražavanje gena, DNK u genskoj terapiji, plazmide, male interferirajuće nukleinske kiseline (siNA), siRNK i mikroRNK (miRNK) za upotrebu u RNA interferenciji (RNAi), antisens molekule, ribozime, antagomire i aptamere. Kako se ove nukleinske kiseline razvijaju, postoji potreba za proizvodnjom lipidnih formulacija koje su lako za izradu i mogu se lako dostaviti ciljnom tkivu. WO2016/081029 opisuje jonizujuće kationičke lipide za dostavu RNK koji se razlikuju od jedinjenja iz ove prijave po prirodi grupa R1 i L2
SAŽETAK
[0007] Predmetni pronalazak je definisana zahtevima.
[0008] Obezbeđeno je jedinjenje formule I
u kojoj
R1je razgranat, neciklični alkil ili alkenil sa 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, ili 22 ugljenika;
L1je linearni alkan sa 1 do 15 ugljenika;
R2je razgranat, neciklični alkil ili alkenil sa 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, ili 22 ugljenika;
L2je linearni alkilen sa 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ili 15 ugljenika;
X je O ili S;
R3je linearni alkilen sa 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 ugljenika; i
R4i R5su isti ili različiti, svaki linearni ili razgranati, neciklični alkil sa 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 ugljenika;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat.
[0009] U jednom rešenju, R1ima 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 16, ili 17 ugljenika.
[0010] U još jednom rešenju, R1obuhvata dve identične alkil ili alkenil grupe.
[0011] U još jednom rešenju, R1obuhvata alkenil grupu.
[0012] U još jednom rešenju, R2je alkenil.
[0013] U još jednom rešenju, R2je razgranat, neciklični alkil.
[0014] U još jednom rešenju, L2ima 4, 5, 6, ili 7 ugljenika.
[0015] Poželjno, jedinjenje je odabrano iz grupe koja se sastoji od jedinjenja formule ATX-0082, ATX-0085, ATX-0121, ATX-0091, ATX-0102, ATX-0098, ATX-0092, ATX-0084, ATX-0095, ATX-0125, ATX-0094, ATX-0109, ATX-0110, ATX-0118, ATX-0108, ATX-0107, ATX-0093, ATX-0097, i ATX-0096
[0016] Drugi aspekt onoga što je opisano je jedinjenje formule I kako je definisano u zahtevu 1, u kojoj
1 mM rastvor sa jedinjenje ima pKa od 5.6 do 7.0 kako je izmereno uz pomoć fluorescencije 6-(p-toluidino)-2-naftalensulronata; i
jedinjenje ima c-LogD vrednost koja je između 10 i 14;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat.
[0017] U jednom rešenju, R1ima 12, 13, 14, 16, ili 17 ugljenika.
[0018] U još jednom rešenju, R1obuhvata dve identične alkil ili alkenil grupe.
[0019] U još jednom rešenju, R1obuhvata alkil grupu.
[0020] U još jednom rešenju, R2je alkenil.
[0021] U još jednom rešenju, R2je razgranat, neciklični alkil.
[0022] U još jednom rešenju, L1i L2nezavisno imaju 1, 2, ili 3 ugljenika.
[0023] U još jednom rešenju, L1i L2oba imaju 3 ugljenika.
[0024] U još jednom rešenju, R3je propilen ili butilen.
[0025] U još jednom rešenju, vrednost c-LogD za jedinjenje je najmanje 11 i njegova izmerena pKa je baznije nego 6.
[0026] U još jednom rešenju, jedinjenje je izabrano iz grupe koja se sastoji od jedinjenja formule ATX-0111, ATX-0132, ATX-0134, ATX-0100, ATX-0117, ATX-0114, ATX-0115, ATX-0101, ATX-0106, ATX-0116, ATX-0086, ATX-0123, ATX-0122, ATX-0087, ATX-0124, ATX-0126, i ATX-0129.
[0027] Drugi aspekt onoga što je opisano je jedinjenje formule I
u kojoj
R1je razgranat, neciklični alkil sa 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, ili 22 ugljenika;
L1je linearni alkan sa 1, 2, ili 3ugljenika;
R2je linearni alkenil sa 8, 9, 10, 11, ili 12 ugljenika ili a razgranati, neciklični alkil sa 12, 13, 14, 16, ili 17 ugljenika;
L2je linearni alkan sa 1, 2, ili 3 ugljenika
X je O ili S;
R3je linearni alkan sa 2 ili 3 ugljenika;
R4i R5su isti ili različiti, svaki linearni ili razgranati, neciklični alkil sa 1 ili 2 ugljenika;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat.
[0028] U još jednom rešenju, katjonski lipidi opisani ovde su u farmaceutskoj kompoziciji.
Farmaceutska kompozicija preferentno obuhvata lipidne nanočestice koje sadrže nukleinsku kiselinu, preferentno RNK polinukleotid. Lipidne nanočestice preferentno povećavaju vek trajanja RNK u cirkulaciji. U još jednom rešenju, nakon primene farmaceutske kompozicije, lipidne nanočestice u njoj dostavljaju nukleinsku kiselinu ćelijama u telu. Preferentno, nukleinska kiselina ima aktivnost suzbijanja ekspresije ciljanog gena. Alternativno, nukleinska kiselina ima aktivnost povećanja proizvodnje proteina koji kodira po ekspresiji u ćelijama tela.
[0029] Ono što je takođe ovde opisano je metod za unošenje nukleinske kiseline u ćeliju sisara korišćenjem bilo koje od gore navedenih kompozicija. ûelija može biti u jetri, plućima, bubregu, mozgu, krvi, slezini ili kostima. Kompozicija se preferentno daje intravenozno, subkutano, intraperitonealno ili intratekalno. Preferentno, kompozicije opisane ovde koriste se u metodi za lečenje raka ili inflamatorne bolesti. Bolest može biti jedna odabrana iz grupe koja se sastoji od imunološkog poremećaja, raka, bubrežne bolesti, fibrotične bolesti, genetske abnormalnosti, upale i kardiovaskularnog poremećaja.
KRATKI OPIS SLIKA
[0030] SL.1 prikazuje put sinteze za ATX-0043 (Uporedni primer) iz heksanoata (SM 1), 4-aminobutanske kiseline (SM 2), i 4-bromobuterne kiseline (SM 3). Intermedijera (Ints) 1-8 i reakcije koja je opisana u primeru 2.
[0031] SL.2 prikazuje put sinteze za ATX-0057 (Uporedni primer) iz oktanoata (SM 1), 4-aminobutanske kiseline (SM 2), i 4-bromobuterne kiseline (SM 3). Ints 1-8 i reakcije koja je opisana u primeru 3.
[0032] SL.3 prikazuje put sinteze za ATX-0058 (Uporedni primer) iz SM 1, SM 2 i SM3, koji su isti kao i u SL.2. Ints 1-7 i reakcije koja je opisana u primeru 4.
[0033] SL.4 prikazuje put sinteze za ATX-0081 (Uporedni primer) iz SM 1, SM 2 i SM3, koji su isti kao i u SL.2. Ints 1-8 i reakcije koja je opisana u primeru 5.
[0034] SL.5 prikazuje put sinteze za ATX-0082 iz SM 1, SM 2 i SM3, koji su isti kao i u SL. 2. Ints 1-7 i reakcije koja je opisana u primeru 6.
[0035] SL.6 prikazuje put sinteze za ATX-0086 iz SM 1, SM 2 i SM3, koji su isti kao i u SL. 2. Ints 1-8 i reakcije koja je opisana u primeru 7.
[0036] SL.7 prikazuje put sinteze za ATX-0087 iz SM 1, SM 2 i SM3, koji su isti kao i u SL. 2. Ints 1-8 i reakcije koja je opisana u primeru 8.
[0037] SL.8 prikazuje put sinteze za ATX-0088 (Uporedni primer) iz SM 1, SM 2 i SM3, koji su isti kao i u SL.2. Ints 1-8 i reakcije koja je opisana u primeru 9.
[0038] SL.9 prikazuje put sinteze za ATX-0083 (Uporedni primer) iz SM 1 i SM 2, SM3, koji su isti kao i u SL.2. Ints 1-8 i reakcije koja je opisana u primeru 10.
[0039] SL.10 prikazuje put sinteze za ATX-0084 iz SM 1, SM 2 i SM3, koji su isti kao i u SL. 2. Ints 1-8 i reakcije koja je opisana u primeru 11.
[0040] SL.11 prikazuje put sinteze za ATX-0061 (Uporedni primer) iz SM 1 i SM 2, koji su isti kao i u SL. 1. Ints 1-5 i reakcije koja je opisana u primeru 12.
[0041] SL.12 prikazuje put sinteze za ATX-0063 (Uporedni primer) iz SM 1 i SM 2, koji su isti kao i u SL. 1. Ints 1-5 i reakcije koja je opisana u primeru 13.
[0042] SL.13 prikazuje put sinteze za ATX-0064 (Uporedni primer) iz SM 1 i SM 2, koji su isti kao i u SL. 1. Ints 1-5 i reakcije koja je opisana u primeru 14.
[0043] SL.14 prikazuje put sinteze za ATX-0081 (Uporedni primer). Ints 1-6 i reakcije koja je opisana u primeru 15.
[0044] SL.15 prikazuje put sinteze za ATX-0085 iz SM 1, SM 2 i SM3, koji su isti kao i u SL. 2. Ints 1-11 i reakcije koja je opisana u primeru 16.
[0045] SL.16 prikazuje put sinteze za ATX-0134. Ints 1-6 i reakcije koja je opisana u primeru 17.
[0046] SL.17 prikazuje nivoe EPO iRNK (ng/ml) nakon injektiranja 0,03 mg/kg i 0,1 mg/kg iRNK u nanočesticama koje sadrže ATX-002, ATX-0057 (Uporedni primer), ATX-0081 (Uporedni primer), ATX-0082, ATX-0083 (Uporedni primer), ATX-0084, ATX-0085, ATX-0086, ili ATX-0087 katjonski lipid u miševe.
[0047] SL. 18 prikazuje aktivnost smanjenja izražaja anti-Faktora VII lipozoma sa ATX-0057 (Uporedni primer) i ATX-0058 (Uporedni primer) u poređenju sa aktivnošću ATX-002 i kontrolom (samo PBS).
[0048] SL. 19 prikazuje aktivnost smanjenja izražaja anti-EPO lipozoma sa ATX-0057 (Uporedni primer) u poređenju sa aktivnošću ATX-002.
DETALJAN OPIS ILUSTRATIVNIH PRIMERA
Definicije
[0049] "Najmanje jedan" označava jedan ili više (e.g., 1-3, 1-2, ili 1).
[0050] "Kompozicija" označava proizvod koji sadrži navedene sastojke u navedenim količinama, kao i bilo koji proizvod koji nastaje, direktno ili indirektno, iz kombinacije navedenih sastojaka u navedenim količinama
[0051] "U kombinaciji sa" znači primenu jedinjenja sa formulom I sa drugim lekovima u metodama lečenja iz ove invencije, što znači da se jedinjenja sa formulom I i drugi lekovi primenjuju sekvencijalno ili istovremeno u odvojenim oblicima doziranja, ili se primenjuju istovremeno u istom obliku doziranja.
[0052] "Sisar" označava čoveka ili drugog sisara, ili znači ljudsko biće.
[0053] "Pacijent" označava i ljude i druge sisare, preferentno čoveka.
[0054] "Alkil" znači zasićeni pravolinijski ili razgranati ugljovodonični lanac. U različitim rešenjima, alkil grupa ima 1-18 ugljenika, tj. ili je C1-C18grupa, ili je C1-C12grupa, C1-C6grupa, ili C1-C4grupa. Nezavisno, u različitim rešenjima, alkil grupa nema granjanja (tj. ona je pravolinijski lanac), ima jedno granjanje, dva granjanja, ili više od dva granjanja. "Alkenil" je nezasićeni alkil koji može imati jednu dvostruku vezu, dve dvostruke veze, ili više od dve dvostruke veze. "Alkinil" je nezasićeni alkil koji može imati jednu trostruku vezu, dve trostruke veze, ili više od dve trostruke veze. Alkil lanci mogu biti opciono zamenjeni sa 1 supstituentom (tj. alkil grupa je mono-supstituisana), ili 1-2 supstituenta, ili 1-3 supstituenta, ili 1-4 supstituenta, itd. Supstituenti mogu biti izabrani iz grupe koja se sastoji od hidroksi, amino, alkilamino, boronil, karboksi, nitro, cijano i slično. Kada alkil grupa uključuje jedan ili više heteroatoma, alkil grupa se ovde naziva heteroalkil grupa. Kada su supstituenti na nekoj alkil grupi ugljovodonici, tada se rezultirajuća grupa jednostavno naziva supstituisani alkil. U različitim aspektima, alkil grupa uključujući supstituente ima manje od 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, ili 7 ugljenika.
[0055] "Niži alkil" označava grupu koja ima od jednog do šest ugljenika u lancu, koji lanac može biti pravolinijski ili razgranat. Neograničeni primeri odgovarajućih alkil grupa uključuju metil, etil, npropil, izopropil, n-butil, t-butil, n-pentil i heksil.
[0056] "Alkoksi" označava alkil-O-grupu u kojoj je alkil definisan kao gore. Neograničeni primeri alkoksi grupa uključuju: metoksi, etoksi, n-propoksi, izopropoksi, n-butoksi i heptoksi. Vezivanje za matični ostatak je preko etarskog kiseonika.
[0057] "Alkoksialkil" označava alkoksi-alkil grupu u kojoj su alkoksi i alkil kao što je prethodno opisano. Preferirane alkoksialkil grupe sadrže nižu alkil grupu. Vezivanje za matični ostatak je preko alkila.
[0058] "Alkilaril" označava alkil-aril grupu u kojoj su alkil i aril kao što je prethodno opisano.
Preferirani alkilarili sadrže nižu alkil grupu. Vezivanje za matični ostatak je preko arila.
[0059] "Aminoalkil" označava NH2-alkil grupu, u kojoj je alkil definisan kao gore, vezan za matični ostatak preko alkil grupe.
[0060] "Karboksi-alkil" označava HOOC-alkil grupu, u kojoj je alkil definisan kao gore, vezan za matični ostatak preko alkil grupe.
[0061] "Komercijalno dostupne hemikalije" i hemikalije koje se koriste u Primerima navedenim ovde mogu se nabaviti iz standardnih komercijalnih izvora, gde takvi izvori uključuju, na primer, Acros Organics (Pittsburgh, Pa.), Sigma-Adrich Chemical (Milwaukee, Wis.), Avocado Research (Lancashire, U.K.), Bionet (Cornwall, U.K.), Boron Molecular (Research Triangle Park, N.C.), Combi-Blocks (San Diego, Calif.), Eastman Organic Chemicals, Eastman Kodak Company (Rochester, N.Y.), Fisher Scientific Co. (Pittsburgh, Pa.), Frontier Scientific (Logan, Utah), ICN Biomedicals, Inc. (Costa Mesa, Calif.), Lancaster Synthesis (Windham, N.H.), Maybridge Chemical Co. (Cornwall, U.K.), Pierce Chemical Co. (Rockford, Ill.), Riedel de Haen (Hannover, Germany), Spectrum Quality Product, Inc. (New Brunswick, N.J.), TCI America (Portland, Oreg.), i Wako Chemicals USA, Inc. (Richmond, Va.).
[0062] "Jedinjenja opisana u hemijskoj literaturi" mogu se identifikovati putem referentnih knjiga i baza podataka usmerenih na hemijskjedinjenje i hemijske reakcije, kako je poznato osobama sa uobičajenim znanjem u stanju tehnike. Pogodne referentne knjige i studije koji detaljno opisuju sintezu reaktanata korisnih u pripremi jedinjenja objavljenih ovde, ili pružaju reference na članke koji opisuju pripremu jedinjenja objavljenih ovde, uključuju na primer, "Synthetic Organic Chemistry", John Wiley i Sons, Inc. New York; S. R. Sandler et al, "Organic Functional Grupu Preparations," 2nd Ed., Academic Press, New York, 1983; H. O. House, "Modem Synthetic Reactions," 2nd Ed., W. A. Benjamin, Inc. Menlo Park, Calif., 1972; T. L. Glichrist, "Heterocyclic Chemistry," 2nd Ed. John Wiley i Sons, New York, 1992; J. March, "Advanced Organic Chemistry: reactions, Mechanisms i Structure," 5th Ed., Wiley Interscience, New York, 2001; Specifični i slični reaktanti mogu se takođe identifikovati putem indeksa poznatih hemikalija pripremljenih od strane Chemical Abstract Service Američkog hemijskog društva, koji su dostupni u većini javnih i univerzitetskih biblioteka, kao i putem online baza podataka (American Chemical Society, Washington, D.C. može se kontaktirati za više detalja). Hemikalije koje su poznate ali nisu komercijalno dostupne u katalozima mogu se pripremiti po narudžbini u kućama za hemijsku sintezu, gde mnoge standardne kuće za snabdevanje hemikalijama (kao što su one gore navedene) pružaju usluge prilagođene sinteze.
[0063] "Halo" označava fluoro, hloro, bromo ili jodo grupe. Preferirani su fluoro, hloro ili bromo, i još preferiraniji su fluoro i hloro.
[0064] "Halogen" označava fluor, hlor, brom ili jod. Preferirani su fluor, hlor i brom.
[0065] "Heteroalkil" označava zasićeni ili nezasićeni, pravolinijski ili razgranati lanac koji sadrži ugljenik i najmanje jedan heteroatom. Heteroalkil grupa može, u različitim rešenjima, imati jedan heteroatom, ili 1-2 heteroatoma, ili 1-3 heteroatoma, ili 1-4 heteroatoma. U jednom aspektu, heteroalkil lanac sadrži od 1 do 18 (tj.1-18) atoma članova (ugljenik i heteroatomi), i u različitim rešenjima sadrži 1-12, ili 1-6, ili 1-4 atoma članova. Nezavisno, u različitim rešenjima, heteroalkil grupa ima nula grananja (tj. je pravolinijski je lanac), ima jedno grananje, dva grananja, ili više od dva grananja. Nezavisno, u jednom rešenju, heteroalkil grupa je zasićena. U još jednom rešenju, heteroalkil grupa je nezasićena. U različitim rešenjima, nezasićeni heteroalkil može imati jednu dvostruku vezu, dve dvostruke veze, više od dve dvostruke veze, i/ili jednu trostruku vezu, dve trostruke veze, ili više od dve trostruke veze. Heteroalkil lanci mogu biti supstituisani ili nesupstituisani. U jednom rešenju, heteroalkil lanac je nesupstituisan. U još jednom rešenju, heteroalkil lanac je supstituisan. Zamenjeni heteroalkil lanac može imati 1 supstituent (tj. biti monosupstituisan), ili može imati, na primer, 1-2 supstituenta, ili 1-3 supstituenta, ili 1-4 supstituenta. Primeri heteroalkil supstituenata uključuju estre (-C(O)-O-R) i karbonile (-C(O)-).
[0066] "Hidroksialkil" označava HO-alkil grupu, u kojoj je alkil prethodno definisan. Preferirani hidroksi-alkili sadrže niži alkil. Neograničeni primeri pogodnih hidroksi-alkil grupa uključuju hidroksimetil i 2-hidroksietil.
[0067] "Hidrat" označava solvat u kojem je molekul rastvarača H2O.
[0068] "Lipid" označava organsko jedinjenje koje obuhvata estar masne kiseline i karakteriše se time što je nerastvorljivo u vodi, ali je rastvorljivo u mnogim organskim rastvaračima. Lipidi se obično dele na najmanje tri klase: (1) "jednostavni lipidi", koji uključuju masti i ulja kao i voskove; (2) "složeni lipidi", koji uključuju fosfolipide, glikolipide, katjonske lipide, nekatjonske lipide, neutralne lipide i anjonske lipide, svi detaljnije opisani ovde; i (3) "izvedeni lipidi" kao što su steroidi.
[0069] "Lipidna čestica" označava lipidnu formulaciju koja se može koristiti za dostavu terapeutskih nukleinskih kiselina (npr. iRNK) na ciljano mesto od interesa (npr. ćelija, tkivo, organ i slično). U preferiranim rešenjima, lipidna čestica je nukleinska kiselina-lipidna čestica, koja se obično formira od katjonskog lipida, nekatjonskog lipida (npr. fosfolipida), konjugovanog lipida koji sprečava agregaciju čestice (npr. PEG-lipid) i po izboru holesterola. Tipično, terapeutska nukleinska kiselina (npr. iRNK) može biti inkapsulirana u lipidnom delu čestice, čime se štiti od enzimatske degradacije.
[0070] Lipidne čestice obično imaju srednji prečnik od 30 nm do 150 nm, od 40 nm do 150 nm, od 50 nm do 150 nm, od 60 nm do 130 nm, od 70 nm do 110 nm, od 70 nm do 100 nm, od 80 nm do 100 nm, od 90 nm do 100 nm, od 70 do 90 nm, od 80 nm to 90 nm, od 70 nm to 80 nm, ili 30 nm, 35 nm, 40 nm, 45 nm, 50 nm, 55 nm, 60 nm, 65 nm, 70 nm, 75 nm, 80 nm, 85 nm, 90 nm, 95 nm, 100 nm, 105 nm, 110 nm, 115 nm, 120 nm, 125 nm, 130 nm, 135 nm, 140 nm, 145 nm, ili 150 nm, i same su suštinski netoksične. Pored toga, nukleinske kiseline, kada su prisutne u lipidnim česticama iz ove invencije, otporne su u vodenom rastvoru na razgradnju sa nukleazom.
[0071] "Inkapsulirani lipid " označava lipidnu česticu koja pruža terapeutsku nukleinsku kiselinu, kao što je iRNK, sa potpunom inkapsulacijom, delimičnom inkapsulacijom ili oboje. U preferiranom rešenju, nukleinska kiselina (npr. iRNK) je potpuno inkapsulirana u lipidnoj čestici.
[0072] "Lipidni konjugat" označava konjugovani lipid koji inhibira agregaciju lipidnih čestica. Takvi lipidni konjugati uključuju, ali nisu ograničeni na, PEG-lipidne konjugate, kao što su na primer PEG spojen na dialkiloksipropil (npr. PEG-DAA konjugati), PEG spojen na diacilglicerole (npr. PEG-DAG konjugati), PEG spojen na holesterol, PEG spojen na fosfatidiletanolamin i PEG konjugovan sa ceramidima, katjonski PEG lipidi, polioksazolin (POZ)-lipidni konjugati, poliamidni oligomeri i njihove mešavine. PEG ili POZ mogu biti direktno konjugovani sa lipidom ili mogu biti spojeni sa lipidom preko povezujućeg ostatka. Svaki povezujući ostatak pogodan za spajanje PEG ili POZ sa lipidom može se koristiti, uključujući, na primer, ostatak koji ne sadrži estar i ostatak koji sadrži estar. U određenim preferiranim rešenjima, ostatak koji ne sadrži estar, kao što su amid ili karbamat, se koriste.
[0073] "Amfipatski lipid" označava materijal u kojem se hidrofobni deo lipidnog materijala orijentiše u hidrofobnu fazu, dok se hidrofilni deo orijentiše prema vodenoj fazi. Hidrofilne karakteristike proizilaze iz prisustva polarnih ili naelektrisanih grupa kao što su ugljenihidrati, fosfat, karboksilna, sulfatna, amino, sulfhidrilna, nitro, hidroksilna i druge slične grupe. Hidrofobnost se može postići uključivanjem nepolarnih grupa koje uključuju, ali nisu ograničene na, dugolančane zasićene i nezasićene alifatske ugljenohidratne grupe i takve grupe supstituisane sa jednom ili više aromatskih, cikloalifatskih ili heterocikličnih grupa. Primeri amfipatskih jedinjenja uključuju, ali nisu ograničeni na, fosfolipide, aminolipide i sfingolipide.
[0074] Reprezentativni primeri fosfolipida uključuju, ali nisu ograničeni na, fosfatidilholin, fosfatidiletanolamin, fosfatidilserin, fosfatidilinozitol, fosfatidnu kiselinu, palmitoioleoil fosfatidilholin, lizofosfatidilholin, lizofosfatidiletanolamin, dipalmitoilfosfatidilholin, dioleoilfosfatidilholin, distearoilfosfatidilholin i dilinoleoilfosfatidilholin. Drugjedinjenje koja ne sadrže fosfor, kao što su sfingolipidi, glikosfingolipidne porodice, diacilgliceroli i ȕ-aciloksikiseline, takođe spadaju u grupu označenu kao amfipatski lipidi. Dodatno, amfipatski lipidi opisani gore mogu se mešati sa drugim lipidima uključujući trigliceride i sterole.
[0075] "Neutralni lipid" označava lipidnu vrstu koja postoji ili u nenaelektrisanom ili u neutralnom cviterjonskom obliku na odabranom pH. Na fiziološkom pH, takvi lipidi uključuju, na primer, diacilfosfatidilholin, diacilfosfatidiletanolamin, ceramid, sfingomijelin, cefalin, holesterol, cerebrozide i diacilglicerole.
[0076] "Nekatjonski lipid" označava amfipatski lipid ili neutralni lipid ili anjonski lipid, i opisan je detaljnije u nastavku.
[0077] "Anjonski lipid" označava lipid koji je negativno naelektrisan na fiziološkom pH. Ovi lipidi uključuju, ali nisu ograničeni na, fosfatidilglicerole, kardiolipine, diacilfosfatidilserine, diacilfosfatidne kiseline, N-dodekanoil fosfatidiletanolamine, N-sukcinil fosfatidiletanolamine, N-glutarilfosfatidiletanolamine, lizilfosfatidilglicerole, palmitoiloleilfosfatidilglicerol (POPG) i druge anjonske modifikacione grupe spojene sa neutralnim lipidima.
[0078] "Hidrofobni lipidi" označavaju jedinjenja koja imaju apolarne grupe koje uključuju, ali nisu ograničene na, dugolančane zasićene i nezasićene alifatske ugljovodonične grupe i takve grupe opciono supstituisane sa jednom ili više aromatskih, cikloalifatskih ili heterocikličnih grupa. Prikladni primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, diacilglicerol, dialkilglicerol, N-N-dialkilamino, 1,2-dioksilo-3-aminopropan i 1,2-dialkil-3-aminopropan.
[0079] "Katjonski lipid" i "amino lipid" se izmenično koriste i označavaju one lipide i njihove soli koji imaju jedan, dva, tri ili više masnih kiselina ili masnih alkil lanaca i pH-titrabilnu amino grupu glave (npr., alkilamino ili dialkilamino grupu glave). Katjonski lipid je tipično protonovan (tj., pozitivno naelektrisan) na pH ispod pKa katjonskog lipida i značajno neutralan na pH iznad pKa. Katjonski lipidi iz invencije mogu se takođe nazivati titrabilni katjonski lipidi. U nekim rešenjima, katjonski lipidi obuhvataju: protonabilnu tercijarnu aminsku (npr., pH-titrabilnu) grupu glave; C18 alkil lance, u kojima svaki alkil lanac nezavisno ima od 0 do 3 (npr.0, 1, 2 ili 3) dvostruke veze; i etar, estar ili ketal veze između grupe glave i alkil lanaca. Takvi katjonski lipidi uključuju, ali nisu ograničeni na, DSDMA, DODMA, DLinDMA, DLenDMA, Ȗ-DLenDMA, DLin-K-DMA, DLin-K-C2-DMA (takođe poznat kao DLin-C2K-DMA, XTC2 i C2K), DLin-K-C3 -DM A, DLin-K-C4-DMA, DLen-C2K-DMA, y-DLen-C2K-DMA, DLin-M-C2-DMA (takođe poznat kao MC2), DLin-M-C3 -DMA (takođe poznat kao MC3) i (DLin-MP-DMA)(takođe poznat kao 1-Bl 1).
[0080] "Supstituisan" znači zamenu sa određenim grupama osim vodonika, ili sa jednom ili više grupa, ostatka ili radikala koji mogu biti isti ili različiti, pri čemu je svaki, na primer, nezavisno biran.
[0081] "Antisens nukleinska kiselina" označava neenzimsku nukleinsku kiselinu koja se vezuje za ciljnu RNK putem RNK-RNK ili RNK-DNK ili RNK-PNA (proteinska nukleinska kiselina; Egholm et al., 1993 Nature 365, 566) interakcije i menja aktivnost ciljne RNK (za pregled, vidi Stein i Cheng, 1993 Science 261, 1004 i Woolf et al., U.S. Pat. No.5,849,902 ). Tipično, antisens molekuli su komplementarni ciljnoj sekvenci duž jedne kontinuirane sekvence antisens molekula. Međutim, u određenim rešenjima, antisens molekul može se vezati za supstrat tako da se supstratni molekul formira u petlju, i/ili antisens molekul može se vezati tako da se antisens molekul formira u petlju. Tako, antisens molekul može biti komplementaran za dve (ili čak više) nesusedne supstratne sekvence ili dva (ili čak više) nesusedna sekvencijalna dela antisens molekula mogu biti komplementarna ciljnoj sekvenci ili oboje. Pored toga, antisens DNK se može koristiti za ciljanje RNK putem DNK-RNK interakcija, čime se aktivira RNaza H, koja digestuje ciljnu RNK u duplexu. Antisens oligonukleotidi mogu sadržati jednu ili više RNaza H aktivirajućih regija, koje su sposobne za aktiviranje RNaza H sečenja ciljne RNK. Antisens DNK se može hemijski sintetizovati ili eksprimirati putem upotrebe jednolančanog DNK ekspresionog vektora ili ekvivalenta istog. "Antisens RNK" je neki RNK lanac koji ima sekvencu komplementarnu ciljnom genu iRNK, koji može indukovati RNK interferenciju vezivanjem za ciljni gen iRNK. "Antisens RNK" je RNK lanac koji ima sekvencu komplementarnu ciljnom genu iRNK i smatra se da indukuje RNK interferenciju vezivanjem za ciljni gen iRNK. "Sens RNK" ima sekvencu komplementarnu antisens RNK i hibridizovan je sa svojom komplementarnom antisens RNK da formira iNA. Ove antisens i sens RNK su tradicionalno sintetizovane sa RNK sintetizatorom.
[0082] "Nukleinska kiselina" označava deoksiribonukleotide ili ribonukleotide i polimere njihove u jednostruko ili dvostruko lančanom obliku. Pojam obuhvata nukleinske kiseline koje sadrže poznate analoge nukleotida ili modifikovane ostatke kičme ili veze, koje su sintetičke, prirodno postojeće i neprirodno postojeće, koje imaju slična vezujuća svojstva kao referentna nukleinska kiselina i koje se metabolišu na sličan način kao referentni nukleotidi. Primeri takvih analoga uključuju, bez ograničenja, fosforotioate, fosforamidate, metil fosfonate, hiralne metil fosfonate, 2'-O-metil ribonukleotide, peptid-nukleinske kiseline (PNA).
[0083] "RNK" označava molekul koji sadrži najmanje jedan ribonukleotidni ostatak. Pod "ribonukleotidom" se podrazumeva nukleotid sa hidroksilnom grupom na 2' poziciji ȕ-D-ribofuranoznog ostatka. Termin uključuje dvostruko lančane RNK, jednostruko lančane RNK, izolovanu RNK kao što je delimično prečišćena RNK, suštinski čista RNK, sintetička RNK, rekombinantno proizvedena RNK, kao i modifikovana RNK koja se razlikuje od prirodno postojeće RNK dodavanjem, brisanjem, supstitucijom i/ili izmenom jednog ili više nukleotida. Takve izmene mogu uključivati dodavanje ne-nukleotidnog materijala, kao što su na krajevima interferirajuće RNK ili u unutrašnjosti, na primer na jednom ili više nukleotida RNK. Nukleotidi u RNK molekulima iz ove invencije takođe mogu obuhvatati nestandardne nukleotide, kao što su prirodno nepostojeće nukleinske kiseline ili hemijski sintetizovani nukleotidi ili deoksinukleotidi. Ove modifikovane RNK mogu se nazvati analogima ili analogima prirodno postojeće RNK. Kako se ovde koristi, termini "ribonukleinska kiselina" i "RNK" odnose se na molekul koji sadrži najmanje jedan ribonukleotidni ostatak, uključujući siRNK, antisens RNK, jednostruko lančanu RNK, mikroRNK, iRNK, nekodirajuću RNK i multivalentnu RNK. Ribonukleotid je nukleotid sa hidroksilnom grupom na 2' poziciji ȕ-D-ribo-furanoznog ostatka. Ovi termini uključuju dvostruko lančane RNK, jednostruko lančane RNK, izolovanu RNK kao što je delimično prečišćena RNK, suštinski čista RNK, sintetička RNK, rekombinantno proizvedena RNK, kao i modifikovana i izmenjena RNK koja se razlikuje od prirodno postojeće RNK dodavanjem, brisanjem, supstitucijom, modifikacijom i/ili izmenom jednog ili više nukleotida. Izmena RNK može uključivati dodavanje nenukleotidnog materijala, kao što je na krajevima interferirajuće RNK ili u unutrašnjosti, na primer na jednom ili više nukleotida neke RNK. Nukleotidi u RNK molekulu uključuju nestandardne nukleotide, kao što su prirodno nepostojeće nukleinske kiseline ili hemijski sintetizovani nukleotidi ili deoksinukleotidi. Ove modifikovane RNK mogu se nazvati analogima.
[0084] "Nukleotidi" označavaju prirodne baze (standardne) i modifikovane baze poznate u oblasti. Takve baze su generalno locirane na 1' poziciji nukleotidnog šećernog ostatka. Nukleotidi generalno obuhvataju bazu, šećer i fosfatnu grupu. Nukleotidi mogu biti nepromenjeni ili modifikovani na šećeru, fosfatu i/ili bazi ostatka (takođe se izmenično nazivaju nukleotidni analogi, modifikovani nukleotidi, nenaturalni nukleotidi, nestandardni nukleotidi i drugo; vidi, na primer, Usman i McSwiggen, supra; Eckstein, et al., Međunarodna PCT Publikacija Br. WO 92/07065; Usman, et al., Međunarodna PCT Publikacija Br. WO 93/15187; Uhlman & Peyman, supra). Postoji nekoliko primera modifikovanih nukleinskih kiselina poznatih u stanju tehnike kako je sažeto u Limbach, et al, Nucleic Acids Res.22:2183, 1994. Neki od neograničenih primera modifikacija baze koje mogu biti uvedene u molekule nukleinske kiseline uključuju: inozin, purin, piridin-4-on, piridin-2-on, fenil, pseudouracil, 2,4,6-trimetoksi benzen, 3-metil uracil, dihidrouridin, naftil, aminofenil, 5-alkilcitidini (npr. 5-metilcitidin), 5-alkiluridini (npr. ribotimidin), 5-halouridin (npr.5-bromouridin) ili 6-azapirimidini ili 6-alkilpirimidini (npr. 6-metiluridin), propin i drugi (Burgin, et al., Biochemistry 35:14090, 1996; Uhlman & Peyman, supra). Pod "modifikovanim bazama" u ovom aspektu se podrazumevaju druge nukleotidne baze pored adenina, guanina, citozina i uracila na 1' poziciji ili njihovih ekvivalenata.
[0085] "Komplementarne nukleotidne baze" označavaju par nukleotidnih baza koje formiraju vodonične veze jedna sa drugom. Adenin (A) se uparuje sa timinom (T) ili sa uracilom (U) u RNK, i guanin (G) se uparuje sa citozinom (C). Komplementarni segmenti ili lanci nukleinske kiseline koje hibridizuju (tj. spajaju se vodoničnim vezivanjem) jedan sa drugom. Pod "komplementarnim" se podrazumeva da nukleinska kiselina može formirati vodonične veze sa drugom nukleinskom kiselinom bilo putem tradicionalnog Watson-Crick ili drugih netradicionalnih načina vezivanja.
[0086] "MikroRNK" (miRNK) označava jednostruko lančane RNK molekule dužine 21-23 nukleotida, koje regulišu ekspresiju gena. miRNK se kodiraju genima koji se transkribuju iz DNK, ali se ne prevode u protein (nekodirajuća RNK); umesto toga, one se obrađuju iz primarnih transkripata poznatih kao pri-miRNK do kratkih struktura sa petljom zvanih pre-miRNK i konačno do funkcionalne miRNK. Zreli molekuli miRNK su delimično komplementarne jednoj ili više molekula informacione RNK (iRNK), i njihova glavna funkcija je smanjenje ekspresije gena.
[0087] "Mala interferirajuća RNK (siRNK)" i "kratka interferirajuća RNK" i "RNK za utišavanje" označavaju klasu dvostruko lančanih RNK molekula, dužine 16-40 nukleotida, koji igraju različite uloge u biologiji. Najznačajnije, siRNK je uključena u putanju interferencije RNK (RNKi), gde ometa ekspresiju specifičnog gena. Pored svoje uloge u putanji RNKi, siRNK takođe deluje u srodnim putanjama RNKi, npr. kao antiviralni mehanizam ili u oblikovanju hromatinske strukture genoma; složenost ovih putanja se tek sada razjašnjava.
[0088] "RNKi" označava proces stišavanja gena koji je zavistan od RNK i koji je kontrolisan kompleksom za stišavanje koji je indukovan sa RNK (RISK) i inicira se kratkim dvostruko lančanim RNK molekulima u ćeliji, gde oni stupaju u interakciju sa katalitičkom RISK komponentom argonautom. Kada je dvostruko lančana RNK ili RNK slična iNA ili siRNK egzogena (dolazi od infekcije virusom sa RNK genomom ili od transficirane iNA ili siRNK), RNK ili iNA se direktno uvozi u citoplazmu i seče na kratke fragmente enzimskim dizerom. Inicijalna dsRNK može takođe biti endogena (potiče iz ćelije), kao u premikroRNK eksprimiranim iz gena kodiranih sa RNK u genomu. Primarni transkripti iz takvih gena se prvo obrađuju da formiraju karakterističnu strukturu sa petljom pre-miRNK u jezgru, a zatim se izvoze u citoplazmu da budu isečeni dizerom. Tako, dve dsRNK putanje, egzogena i endogena, konvergiraju u RISK kompleks. Aktivne komponente kompleksa za stišavanje indukovanog RNK (RISK) su endonukleaze zvane argonaut proteini, koji seku ciljani iRNK lanac komplementaran njegovoj vezanoj siRNK ili iNA. Kako su fragmenti proizvedeni od strane dizera dvostruko lančani, svaki od njih bi teoretski mogao proizvesti funkcionalnu siRNK ili iNA. Međutim, samo jedan od dva lanca, kojia se naziva vođa lanac, vezuje argonaut protein i usmerava stišavanje gena. Drugi lanac anti-vođa ili putnički lanac se razgrađuje tokom aktivacije RISK-a.
[0089] Jedinjenja formule I
[0090] Pozivanje na jedinjenje sa formulom I ovde se podrazumeva da uključuje i soli tog jedinjenja, osim ako nije drugačije naznačeno. Termin "soli", kako se ovde koristi, označava kiselinske soli formirane sa neorganskim i/ili organskim kiselinama, kao i bazne soli formirane sa neorganskim i/ili organskim bazama. Pored toga, kada jedinjenje sa formulom I sadrži i bazni ostatak, kao što su, ali ne ograničavajući se na, piridin ili imidazol, i kiselinski ostatak, kao što su, ali ne ograničavajući se na, karboksilnu kiselinu, mogu se formirati cviterjoni ("unutrašnje soli") i oni su uključeni u termin "soli" kako se ovde koristi. Soli mogu biti farmaceutski prihvatljive (tj. netoksične, fiziološki prihvatljive) soli, iako su i druge soli takođe korisne. Soli jedinjenja sa formulom I mogu se formirati, na primer, reagovanjem jedinjenja sa formulom I sa određenom količinom kiseline ili baze, kao što je ekvivalentna količina, u medijumu kao što je onaj u kojem sol precipitira ili u vodenom medijumu što je praćeno liofilizacijom.
[0091] Primeri soli dodavanjem kiseline uključuju acetate, adipate, alginate, askorbate, aspartate, benzoate, benzen-sulfonate, bisulfate, borate, butirate, citrate, kamforate, kamforsulfonate, ciklopentanpropionate, diglukonate, dodecil-sulfate, etan-sulfonate, fumarate, glukoheptanoate, glicerofosfate, hemisulfate, heptanoate, heksanoate, hidrohloride, hidrobromid, hidrojodide, 2-hidroksietan-sulfonate, laktate, maleate, metan-sulfonate, 2-naftalen-sulfonate, nikotinate, nitrate, oksalate, pektinate, persulfate, 3-fenilpropionate, fosfate, pikrate, pivalate, propionate, salicilate, sukcinate, sulfate, sulfonate (kao što je spomenuto ovde), tartarate, tiocianate, toluen-sulfonate (poznati kao tosilati) undekanoate i slično. Pored toga, kiseline koje se generalno smatraju pogodnim za formiranje farmaceutski korisnih soli sa baznim farmaceutskim jedinjenjima su diskutovane, na primer, od strane S. Berge et al., J. Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1)1-19; P. Gould, International J. Pharmaceutics (1986) 33201-217; Anderson et al., The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; i u The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. na njihovom veb sajtu).
[0092] Primeri baznih soli uključuju amonijumove soli, alkalne metalne soli kao što su natrijum, litijum i kalijumove soli, alkalnozemaljske metalne soli kao što su kalcijum i magnezijumove soli, soli sa organskim bazama (na primer, organske amine) kao što su benzatini, dicikloheksilamini, hidrabamin (formiran sa N,N-bis(dehidroabiutil)etilendiaminom), N-metil-D-glukamini, N-metil-D-glukamidi, t-butil amini, i soli sa amino kiselinama kao što su arginin ili lizin. Bazne azotne grupe mogu biti kvartarizovane agensima kao što su niži alkil halidi (npr. metil, etil, propil i butil hloridi, bromidi i jodidi), dialkil-sulfati (npr. dimetil, dietil, dibutil i diamil-sulfati), dugolančani halidi (npr. decil, lauril, miristil i stearil hloridi, bromidi i jodidi), arilalkil halidi (npr. benzil i fenetil-bromidi), i drugi.
[0093] Sve takve kiselinske i bazne soli su namenjene da budu farmaceutski prihvatljive soli u okviru opsega ovog otkrića i sve kiselinske i bazne soli se smatraju ekvivalentnim slobodnim oblicima odgovarajućih jedinjenja sa formulom I u svrhu ovog otkrića.
[0094] Jedinjenja formule I mogu postojati u nerastvornoj i rastvornoj formi, uključujući hidratne forme. Generalno, rastvorne forme, sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračima kao što su voda, etanol i slično, su ekvivalentne nerastvornoj formi u svrhu ovog otkrića.
[0095] Jedinjenja formule I i njegove soli, solvati, mogu postojati u tnjihovom tautomernom obliku (na primer, kao amid ili imino etar). Svi takvi tautomerni oblici su ovde razmatrani kao deo predmetnog pronalaska.
[0096] Jedinjenja formule I i soli, njihovi solvati, mogu postojati u svojim tautomernim formama (na primer, kao amid ili imino eter). Sve takve tautomerne forme su ovde shvaćene kao deo ovog otkrića.
[0097] Klase jedinjenja koja se mogu koristiti kao hemoterapeutski agens (antineoplastični agens) uključuju: alkilirajuće agense, antimetabolite, prirodne proizvode i njihove derivate, hormone i steroide (uključujući sintetičke analoge), i sintetike. Primeri jedinjenja unutar ovih klasa su dati u nastavku.
Lipidne čestice
[0098] Jedinjenja formule I obuhvataju farmaceutski prihvatljivu so tih jedinjenja, u lipidnoj kompoziciji, koja sadrži nanočestice ili dvostruki sloj lipidnih molekula. Dvostruki sloj lipida preferentno dalje obuhvata neutralni lipid ili polimer. Lipidna kompozicija preferentno obuhvata tečni medijum. Kompozicija preferentno dalje inkapsulira nukleinsku kiselinu. Nukleinska kiselina preferentno ima aktivnost smanjenja ekspresije ciljnog gena koristeći interferenciju RNK (RNKi). Lipidna kompozicija preferentno dalje obuhvata nukleinsku kiselinu i neutralni lipid ili polimer. Lipidna kompozicija preferentno inkapsulira nukleinsku kiselinu.
[0099] Opis pruža lipidne čestice koje sadrže jednu ili više terapeutskih iRNK molekula inkapsuliranih unutar lipidnih čestica.
[0100] U nekim rešenjima, iRNK je potpuno inkapsulirana unutar lipidnog dela lipidne čestice tako da je iRNK u lipidnoj čestici otporna na nukleaznu degradaciju u vodenom rastvoru. U drugim rešenjima, opisane lipidne čestice su suštinski netoksične za sisare kao što su ljudi. Lipidne čestice tipično imaju srednji prečnik od 30 nm do 150 nm, od 40 nm do 150 nm, od 50 nm do 150 nm, od 60 nm do 130 nm, od 70 nm do 110 nm, ili od 70 do 90 nm. Lipidne čestice iz invencije takođe tipično imaju lipid:RNK odnos (masa/masa odnos) od 1:1 do 100:1, od 1:1 do 50:1, od 2:1 do 25:1, od 3:1 do 20:1, od 5:1 do 15:1, ili od 5:1 do 10:1, ili od 10:1 do 14:1, ili od 9:1 do 20:1. U jednom rešenju, lipidne čestice imaju lipid:RNK odnos (masa/masa odnos) od 12:1. U još jednom rešenju, lipidne čestice imaju lipid:iRNK odnos (masa/masa odnos) od 13:1.
[0101] U preferiranim rešenjima, lipidne čestice sadrže iRNK, katjonski lipid (npr. jedan ili više katjonskih lipida ili njihove soli opisane ovde), fosfolipid, i konjugovani lipid koji inhibira agregaciju čestica (npr. jedan ili više PEG-lipidnih konjugata). Lipidne čestice mogu takođe uključivati i holesterol. Lipidne čestice mogu sadržati najmanje 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, ili više iRNK koje eksprimiraju jedan ili više polipeptida.
[0102] U kompleksu nukleinska kiselina-lipidne čestice, iRNK može biti potpuno inkapsulirana unutar lipidnog dela čestice, time štiteći nukleinsku kiselinu od nukleazne degradacije. U preferiranim rešenjima, lipidna čestica se sastoji od iRNK koja je potpuno inkapsulirana unutar lipidnog dela čestice, time štiteći nukleinsku kiselinu od nukleazne degradacije. U određenim slučajevima, iRNK u lipidnoj čestici nije značajno degradirana nakon izlaganja čestice nukleazi na 37°C najmanje 20, 30, 45, ili 60 minuta. U određenim drugim slučajevima, iRNK u lipidnoj čestici nije značajno degradirana nakon inkubacije čestice u serumu na 37°C najmanje 30, 45, ili 60 minuta ili najmanje 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, ili 36 sati. U drugim rešenjima, iRNK je kompleksirana sa lipidnim delom čestice. Jedna od prednosti formulacija ove invencije je da su kompozicije nukleinska kiselina-lipidna čestica suštinski netoksične za sisare kao što su ljudi.
[0103] "Potpuno inkapsulirano" znači da nukleinska kiselina (npr., iRNK) u kompleksu nukleinska kiselina-lipidna čestica nije značajno degradirana nakon izlaganja serumu ili nukleaznom testu koji bi značajno degradirao slobodnu RNK. Kada je potpuno inkapsulirana, preferentno manje od 25% nukleinske kiseline u čestici je degradirano u tretmanu koji bi normalno degradirao 100% slobodne nukleinske kiseline, još preferentnije manje od 10% , i najpreferentnije manje od 5% nukleinske kiseline u čestici je degradirano. "Potpuno inkapsulirano" takođe znači da kompleks nukleinska kiselina-lipidne čestice ne propadaju brzo na svoje komponente nakon u vivo administracije.
[0104] U kontekstu nukleinskih kiselina, potpuna inkapsulacija može biti određena izvođenjem testa isključivanja fluorescentne boje koja ne može proći kroz membranu, koji koristi boju koja ima pojačanu fluorescenciju kada je povezana sa nukleinskom kiselinom. Inkapsulacija je određena dodavanjem boje lipozomalnoj formulaciji, merenjem rezultirajuće fluorescencije i poređenjem sa fluorescencijom zabeleženom nakon dodavanja male količine nejonskog deterdženta. Deterdžentom posredovano razbijanje lipozomalnog dvosloja oslobađa inkapsuliranu nukleinsku kiselinu, omogućavajući joj da stupi u interakciju sa za membranu nepropusnom bojom. Inkapsulacija nukleinske kiseline može se izračunati kao E = (I0- I)/I0, gde I i I0se odnose na intenzitete fluorescencije pre i posle dodavanja deterdženta.
[0105] U drugim rešenjima, predmetni pronalazak pruža kompoziciju nukleinske kiseline-lipidne čestice koja obuhvata mnoštvo nukleinske kiseline-lipidnih čestica.
[0106] Lipidna čestica obuhvata iRNK koja je potpuno inkapsulirana unutar lipidnog dela čestica, tako da je od 30% do 100% , od 40% do 100% , od 50% do 100% , od 60% do 100% , od 70% do 100% , od 80% do 100% , od 90% do 100% , od 30% do 95% , od 40% do 95% , od 50% do 95% , od 60% do 95% , od 70% do 95% , od 80% do 95% , od 85% do 95% , od 90% do 95% , od 30% do 90% , od 40% do 90% , od 50% do 90% , od 60% do 90% , od 70% do 90% , od 80% do 90% , ili najmanje 30% , 35% , 40% , 45% , 50% , 55% , 60% , 65% , 70% , 75% , 80% , 85% , 90% , 91% , 92% , 93% , 94% , 95% , 96% , 97% , 98% , ili 99% (ili bilo koji deo ili raspon unutar toga) čestica ima inkapsuliranu iRNK u sebi.
[0107] U zavisnosti od namene korišćenja lipidnih čestica, proporcije komponenti se mogu varirati i efikasnost isporuke određene formulacije može se meriti koristeći testove poznate u stanju tehnike.
Katjonski lipidi
[0108] Opis uključuje sintezu određenih katjonskih lipida. Ovjedinjenje su posebno pogodna za isporuku polinukleotida ćelijama i tkivima, kako je prikazano u narednim delovima.
Lipomakrociklično jedinjenje opisano ovde može se koristiti i za druge svrhe, na primer, kao nosači i aditivi.
[0109] Sintetičke metode za katjonska lipidnjedinjenje mogu se sintetizovati sa veštinama u oblasti. Oni vešti u stanju tehnike će prepoznati i druge metode za proizvodnju ovih jedinjenja, kao i za proizvodnju drugih jedinjenja opisanih u tekstu.
[0110] Katjonska lipidnjedinjenje mogu se kombinovati sa agensom za formiranje mikročestica, nanočestica, lipozoma ili micela. Agens koji se isporučuje pomoću čestica, lipozoma ili micela može biti u obliku gasa, tečnosti ili čvrste materije, i agens može biti polinukleotid, protein, peptid ili jedinjenje malih molekula. Lipomakrocikličnjedinjenje mogu se kombinovati sa drugim katjonskim lipidnim jedinjenjima, polimerima (sintetičkim ili prirodnim), surfaktantima, holesterolom, ugljenim hidratima, proteinima ili lipidima, za formiranje čestica. Ove čestice se zatim mogu opciono kombinovati sa farmaceutskim pomoćnim sredstvom za formiranje farmaceutske kompozicije.
[0111] Ovaj opis pruža nove katjonska lipidnjedinjenje i sisteme za isporuku lekova zasnovane na upotrebi takvih katjonskih lipidnih jedinjenja. Sistem se može koristiti u farmaceutskoj/lekarskoj oblasti za isporuku polinukleotida, proteina, malih molekula, peptida, antigena ili lekova pacijentu, tkivu, organu ili ćeliji. Ova novjedinjenje se takođe mogu koristiti kao materijali za premaze, aditive, pomoćna sredstva, materijale ili bioinženjering.
[0112] Katjonska lipidnjedinjenje iz ovog opisa pružaju nekoliko različitih upotreba u oblasti isporuke lekova. Aminski deo katjonskih lipidnih jedinjenja može se koristiti za kompleksiranje polinukleotida, čime se poboljšava isporuka polinukleotida i sprečava njihova degradacija. Katjonska lipidnjedinjenje se takođe mogu koristiti u formiranju pikočestica, nanočestica, mikročestica, lipozoma i micela koji sadrže agens za isporuku. Preferentno, katjonska lipidnjedinjenje su biokompatibilna i biodegradabilna, i formirane čestice su takođe biodegradabilne i biokompatibilne i mogu se koristiti za kontrolisano, održivo oslobađanje agensa za isporuku. Ovjedinjenje i njihove odgovarajuće čestice mogu takođe biti osetljivi na promene pH, s obzirom da su protonovani na nižem pH. Oni mogu takođe delovati kao protonski sunđeri pri isporuci agensa u ćeliju za uzrokovanje lize endozoma.
[0113] U određenim rešenjima, katjonska lipidjedinjenje su relativno necitotoksična. Katjonska lipidnjedinjenje mogu biti biokompatibilna i biodegradabilna. Katjonski lipid može imati izmereni pKa (u formulacionom mediju) u opsegu od približno 5,5 do približno 7,5, preferentnije između približno 6,0 i približno 7,0. Može biti dizajniran da ima željeni pKa između približno 3,0 i približno 9,0, ili između približno 5,0 i približno 8,0. Katjonska lipidjedinjenje opisana ovde su posebno atraktivna za isporuku lekova iz nekoliko razloga: sadrže amino grupe za interakciju sa DNK, RNK, drugim polinukleotidima i drugim negativno naelektrisanim agensima, za puferisanje pH, za uzrokovanje endo-osmolize, za zaštitu agensa koji se isporučuje, mogu se sintetizovati od komercijalno dostupnih početnih materijala; i/ili su pH osetljivi i mogu mogu biti konstruisani sa željenim pKa.
Neutralni Pomoćni Lipidi
[0114] Primeri nekatjonskih lipida, koji nisu ograničavajući, uključuju fosfolipide kao što su lecitin, fosfatidiletanolamin, lizolecitin, lizofosfatidiletanolamin, fosfatidilserin, fosfatidilinozitol, sfingomijelin, sfingomijelin iz jaja (ESM), cefalin, kardiolipin, fosfatidna kiselina, cerebrozidi, dicetilfosfat, distearoilfosfatidilholin (DSPC), dioleoilfosfatidilholin (DOPC), dipalmitoilfosfatidilholin (DPPC), dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), dioleoilfosfatidiletanolamin (DOPE), palmitoioleoil-fosfatidilholin (POPC), palmitoioleoilfosfatidiletanolamin (POPE), palmitoioleil-fosfatidilglicerol (POPG), dioleoilfosfatidiletanolamin 4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karboksilat (DOPE-mal), dipalmitoil-fosfatidiletanolamin (DPPE), dimiristoil-fosfatidiletanolamin (DMPE), distearoil-fosfatidiletanolamin (DSPE), monometilfosfatidiletanolamin, dimetil-fosfatidiletanolamin, dielaidoil-fosfatidiletanolamin (DEPE), stearoioleoil-fosfatidiletanolamin (SOPE), lizofosfatidilholin, dilinoleoilfosfatidilholin, i mešavine istih. Drugi diacilfosfatidilholin i diacilfosfatidiletanolamin fosfolipidi takođe se mogu koristiti. Acil grupe u ovim lipidima su preferentno acil grupe dobijene iz masnih kiselina sa C10-C24ugljeničnim lancima, npr. lauroil, miristoil, palmitoil, stearoil, ili oleoil.
[0115] Dodatni primeri nekatjonskih lipida uključuju sterole kao što su holesterol i njihovi derivati. Primeri derivata holesterola koji nisu ograničavajući uključuju polarne analoge kao što su 5Į-holestanol, 5Į-koprostanol, holestertil-(2'-hidroksi)-etil etar, holestertil-(4'-hidroksi)-butil etar, i 6-ketoholestanol; nepolarni analogi kao što su 5Į-holestan, holestenon, 5Į-holestanon, 5Į-holestanon, i holestertil dekanoat; i mešavine istih. U preferiranim rešenjima, derivat holesterola je polarni analog kao što je holestertil-(4'-hidroksi)-butil etar.
[0116] U nekim rešenjima, nekatjonski lipid prisutan u lipidnim česticama obuhvata ili se sastoji od mešavine jednog ili više fosfolipida i holesterola ili njegovog derivata. U drugim rešenjima, nekatjonski lipid prisutan u lipidnim česticama obuhvata ili se sastoji od jednog ili više fosfolipida, npr. formulacija lipidnih čestica bez holesterola. U još drugim rešenjima, nekatjonski lipid prisutan u lipidnim česticama obuhvata ili se sastoji od holesterola ili njegovog derivata, npr. formulacija lipidnih čestica bez fosfolipida.
[0117] Ostali primeri nekatjonskih lipida uključuju lipide koji ne sadrže fosfor kao što su, npr., stearamin, dodecilamin, heksadecilamin, acetil palmitat, glicerol ricinoleat, heksadecil stearat, izopropil miristat, amfoterični akrilni polimeri, trietanolamin-lauril sulfat, alkil-aryl sulfat amidi polietoksilirane masne kiseline, dioktadecildimetil amonijum bromid, ceramid, i sfingomijelin.
[0118] U nekim rešenjima, nekatjonski lipid obuhvata od 10 mol % do 60 mol % , od 20 mol % do 55 mol % , od 20 mol % do 45 mol % , 20 mol % do 40 mol % , od 25 mol % do 50 mol % , od 25 mol % do 45 mol % , od 30 mol % do 50 mol % , od 30 mol % do 45 mol % , od 30 mol % do 40 mol % , od 35 mol % do 45 mol % , od 37 mol % do 42 mol % , ili 35 mol % , 36 mol % , 37 mol % , 38 mol % , 39 mol % , 40 mol % , 41 mol % , 42 mol % , 43 mol % , 44 mol % , ili 45 mol % (ili bilo koji deo ili raspon unutar toga) od ukupnih lipida prisutnih u čestici.
[0119] U rešenjima gde lipidne čestice sadrže mešavinu fosfolipida i holesterola ili njegovog derivata, mešavina može sadržati do 40 mol % , 45 mol % , 50 mol % , 55 mol % , ili 60 mol % od ukupnih lipida prisutnih u čestici.
[0120] U nekim rešenjima, fosfolipidna komponenta u mešavini može sadržati od 2 mol % do 20 mol % , od 2 mol % do 15 mol % , od 2 mol % do 12 mol % , od 4 mol % do 15 mol % , ili od 4 mol % do 10 mol % (ili bilo koji deo ili raspon unutar toga) od ukupnih lipida prisutnih u čestici. U određenim preferiranim rešenjima, fosfolipidna komponenta u mešavini obuhvata od 5 mol % do 10 mol % , od 5 mol % do 9 mol % , od 5 mol % do 8 mol % , od 6 mol % do 9 mol % , od 6 mol % do 8 mol % , ili 5 mol % , 6 mol % , 7 mol % , 8 mol % , 9 mol % , ili 10 mol % (ili bilo koji deo ili raspon unutar toga) od ukupnih lipida prisutnih u čestici.
[0121] U drugim rešenjima, holesterolna komponenta u mešavini može sadržati od 25 mol % do 45 mol % , od 25 mol % do 40 mol % , od 30 mol % do 45 mol % , od 30 mol % do 40 mol % , od 27 mol % do 37 mol % , od 25 mol % do 30 mol % , ili od 35 mol % do 40 mol % (ili bilo koji deo ili raspon unutar toga) od ukupnih lipida prisutnih u čestici. U određenim preferiranim rešenjima, holesterolna komponenta u mešavini obuhvata od 25 mol % do 35 mol % , od 27 mol % do 35 mol % , od 29 mol % do 35 mol % , od 30 mol % do 35 mol % , od 30 mol % do 34 mol % , od 31 mol % do 33 mol % , ili 30 mol % , 31 mol % , 32 mol % , 33 mol % , 34 mol % , ili 35 mol % (ili bilo koji deo ili raspon unutar toga) od ukupnih lipida prisutnih u čestici.
[0122] U rešenjima gde su lipidne čestice bez fosfolipida, holesterol ili njegov derivat može obuhvatati do 25 mol % , 30 mol % , 35 mol % , 40 mol % , 45 mol % , 50 mol % , 55 mol % , ili 60 mol % od ukupnih lipida prisutnih u čestici
[0123] U nekim rešenjima, holesterol ili njegov derivat u formulaciji lipidnih čestica bez fosfolipida može činiti od 25 mol % do 45 mol % , od 25 mol % do 40 mol % , od 30 mol % do 45 mol % , od 30 mol % do 40 mol % , od 31 mol % do 39 mol % , od 32 mol % do 38 mol % , od 33 mol % do 37 mol % , od 35 mol % do 45 mol % , od 30 mol % do 35 mol % , od 35 mol % do 40 mol % , ili 30 mol % , 31 mol % , 32 mol % , 33 mol % , 34 mol % , 35 mol % , 36 mol % , 37 mol % , 38 mol % , 39 mol % , ili 40 mol % (ili bilo koji deo ili raspon unutar toga) od ukupnih lipida prisutnih u čestici.
[0124] U drugim rešenjima, nekatjonski lipid obuhvata od 5 mol % do 90 mol % , od 10 mol % do 85 mol % , od 20 mol % do 80 mol % , 10 mol % (npr., samo fosfolipid), ili 60 mol % (npr., fosfolipid i holesterol ili njegov derivat) (ili bilo koji deo ili raspon unutar toga) od ukupnih lipida prisutnih u čestici.
[0125] Procenat nekatjonskog lipida prisutnog u lipidnim česticama je ciljana količina, i stvarna količina nekatjonskog lipida prisutna u formulaciji može varirati, na primer, za ± 5 mol % .
[0126] Kompozicija koja sadrži katjonsko lipidno jedinjenje može biti 30-70% katjonskog lipidnog jedinjenja, 0-60% holesterola, 0-30% fosfolipida i 1-10% polietilen glikola (PEG). Preferentno, kompozicija je 30-40% katjonskog lipidnog jedinjenja, 40-50% holesterola i 10-20% PEG. U drugim preferiranim rešenjima, kompozicija je 50-75% katjonskog lipidnog jedinjenja, 20-40% holesterola i 5-10% fosfolipida, i 1-10% PEG. Kompozicija može sadržati 60-70% katjonskog lipidnog jedinjenja, 25-35% holesterola i 5-10% PEG. Kompozicija može sadržati do 90% katjonskog lipidnog jedinjenja i 2-15% pomoćnog lipida.
[0127] Formulacija može biti lipidna čestica, na primer sadrži 8-30% jedinjenja, 5-30% pomoćnog lipida i 0-20% holesterola; 4-25% katjonskog lipida, 4-25% pomoćnog lipida, 2-25% holesterola, 10-35% holesterola-PEG i 5% holesterola-amina; ili 2-30% katjonskog lipida, 2-30% pomoćnog lipida, 1-15% holesterola, 2-35% holesterola-PEG i 1-20% holesterola-amina; ili do 90% katjonskog lipida i 2-10% pomoćnog lipida, ili čak 100% katjonskog lipida.
Lipidni konjugati
[0128] Pored katjonskih, ovde opisane lipidne čestice mogu dalje obuhvatati lipidni konjugat.
Konjugovani lipid je koristan jer sprečava agregaciju čestica. Pogodni konjugovani lipidi uključuju, ali nisu ograničeni na, PEG-lipidne konjugate, katjonsko-polimer-lipidne konjugate i njihove mešavine.
[0129] U preferiranom rešenju, lipidni konjugat je PEG-lipid. Primeri PEG-lipida uključuju, ali nisu ograničeni na, PEG spojen sa dialkiloksi-propilima (PEG-DAA), PEG spojen sa diacilglicerolom (PEG-DAG), PEG spojen sa fosfolipidima kao što je fosfatidiletanolamin (PEG-PE), PEG konjugovan sa ceramidima, PEG konjugovan sa holesterolom ili njegovim derivatom, i njihove mešavine.
[0130] PEG je linearni, u vodi rastvorljivi polimer sa etilen PEG ponavljajućim jedinicama sa dve terminalne hidroksil grupe. PEG-ovi se klasifikuju po njihovim molekulskim težinama; i uključuju sledeće: monometoksipolietilen glikol (MePEG-OH), monometoksipolietilen glikol sukcinat (MePEG-S), monometoksipolietilen glikol sukcinil sukcinat (MePEG-S-NHS), monometoksipolietilen glikol amin (MePEG-NH2), monometoksipolietilen glikol tresilat (MePEG-TRES), monometoksipolietilen glikol imidazolil karbonil (MePEG-IM), kao i takvjedinjenje koja sadrže terminalnu hidroksil grupu umesto terminalne metoksi grupe (npr., HO-PEG-S, HO-PEG-S-NHS, HO-PEG-NH2).
[0131] PEG ostatak PEG-lipidnih konjugata opisanih ovde može obuhvatati neku prosečnu molekulsku težinu koja se kreće od 550 daltona do 10,000 daltona. U određenim slučajevima, PEG ostatak ima prosečnu molekulsku težinu od 750 daltona do 5,000 daltona (npr., od 1,000 daltona do 5,000 daltona, od 1,500 daltona do 3,000 daltona, od 750 daltona do 3,000 daltona, od 750 daltona do 2,000 daltona). U preferiranim rešenjima, PEG ostatak ima prosečnu molekulsku težinu od 2,000 daltona ili 750 daltona.
[0132] U određenim slučajevima, PEG može biti opcionalno supstituisan sa nekom alkil, alkoksil, acil ili aril grupom. PEG može biti direktno konjugovan sa lipidom ili može biti povezan sa lipidom preko veznog ostatka. Svaki vezni ostatak pogodan za spajanje PEG-a sa lipidom može se koristiti, uključujući npr., vezne ostatke bez estra i vezne ostatke sa estrima. U preferiranom rešenju, vezni ostatak je vezni ostatak bez estra. Pogodni vezni ostaci bez estra uključuju, ali nisu ograničeni na, amidne (-C(O)NH-), amino (-NR-), karbonilne (-C(O)-), karbamatne (-NHC(O)O-), urea (-NHC(O)NH-), disulfidne (-S-S-), etarske (-O-), sukcinilne (- (O)CCH2CH2C(O)-), sukcinamidilne (NHC(O)CH2CH2C(O)NH-), etarske, disulfidne, kao i kombinacije istih (kao što je veznik koji sadrži i karbamatni vezni ostatak i neki amidni vezni ostatak). U preferiranom rešenju, koristi se karbamatni veznik za spajanje PEG-a sa lipidom.
[0133] U drugim rešenjima, vezni ostatak koji sadrži estar koristi se za spajanje PEG-a sa lipidom. Pogodni vezni ostatak koji sadrži estar uključuje, na primer, karbonat (-OC(O)O-), sukcinil, fosfatne estre (-O-(O)POH-O-), sulfonatne estre i njihove kombinacije.
[0134] Fosfatidiletanolamini sa različitim acil lancima različitih dužina i stepena zasićenosti mogu biti konjugovani sa PEG-om da formiraju lipidni konjugat. Takvi fosfatidiletanolamini su komercijalno dostupni, ili mogu biti izolovani ili sintetizovani koristeći konvencionalne tehnike poznate stručnjacima u oblasti. Fosfatidiletanolamini koji sadrže zasićene ili nezasićene masne kiseline sa ugljeničnim lancima u rasponu od C10do C20su preferirani. Fosfatidiletanolamini sa mono- ili dinezasićenim masnim kiselinama i mešavine zasićenih i nezasićenih masnih kiselina takođe mogu biti korišćeni. Pogodni fosfatidiletanolamini uključuju, ali nisu ograničeni na, dimiristoilfosfatidiletanolamin (DMPE), dipalmitoil-fosfatidiletanolamin (DPPE), dioleoilfosfatidiletanolamin (DOPE) i distearoil-fosfatidiletanolamin (DSPE).
[0135] Termin "diacilglicerol" ili "DAG" uključuje jedinjenje sa 2 masna acil lanca, R<1>i R<2>, koja oba nezavisno imaju između 2 i 30 ugljenika vezana za 1- i 2-poziciju glicerola putem estarskih veza. Acil grupe mogu biti zasićene ili imati različite stepene nezasićenosti. Pogodne acil grupe uključuju, ali nisu ograničene na, lauroil (C12), miristoil (C14), palmitoil (C16), stearoil (C18) i ikozoil (C20). U preferiranim rešenjima, R<1>i R<2>su isti, tj., R<1>i R<2>su oba miristoil (npr., dimiristoil), R<1>i R<2>su oba stearoil (npr., distearoil).
[0136] Termin "dialkiloksipropil" ili "DAA" uključuje jedinjenje koje ima 2 alkil lanca, R1i R2, gde oba nezavisno imaju između 2 i 30 ugljenika. Alkil grupe mogu biti zasićene ili imati različite stepene nezasićenosti.
[0137] Preferentno, PEG-DAA konjugat je PEG-dideciloksi-propil (C10) konjugat, PEG-dilauriloksipropil (C12) konjugat, PEG-dimiristiloksipropil (C14) konjugat, PEG-dipalmitiloksipropil (C16) konjugat ili PEG-disteariloksipropil (C18) konjugat. U ovim rešenjima, PEG preferentno ima prosečnu molekulsku težinu od 750 ili 2,000 daltona. U posebnim rešenjima, terminalna hidroksil grupa PEG-a je supstituisana sa metil grupom.
[0138] Kao dodatak na gore navedeno, drugi hidrofilni polimeri mogu se koristiti umesto PEG-a. Primeri pogodnih polimera koji se mogu koristiti umesto PEG-a uključuju, ali nisu ograničeni na, polivinilpirolidon, polimetiloksazolin, polietiloksazolin, polihidroksipropil metakrilamid, polimetakrilamid i polidimetilakrilamid, polilaktičnu kiselinu, poliglikolnu kiselinu i derivatizovane celuloze kao što su hidroksimetilceluloza ili hidroksietilceluloza.
[0139] U nekim rešenjima, lipidni konjugat (npr., PEG-lipid) obuhvata od 0,1 mol % do 2 mol % , od 0,5 mol % do 2 mol % , od 1 mol % do 2 mol % , od 0,6 mol % do 1,9 mol % , od 0,7 mol % do 1,8 mol % , od 0,8 mol % do 1,7 mol % , od 0,9 mol % do 1,6 mol % , od 0,9 mol % do 1,8 mol % , od 1 mol % do 1,8 mol % , od 1 mol % do 1,7 mol % , od 1,2 mol % do 1,8 mol % , od 1,2 mol % do 1,7 mol % , od 1,3 mol % do 1,6 mol % , ili od 1,4 mol % do 1,5 mol % (ili bilo koji deo ili raspon unutar toga) od ukupnih lipida prisutnih u čestici. U drugim rešenjima, lipidni konjugat (npr., PEG-lipid) obuhvata od 0 mol % do 20 mol % , od 0,5 mol % do 20 mol % , od 2 mol % do 20 mol % , od 1,5 mol % do 18 mol % , od 2 mol % do 15 mol % , od 4 mol % do 15 mol % , od 2 mol % do 12 mol % , od 5 mol % do 12 mol % , ili 2 mol % (ili bilo koji deo ili raspon unutar toga) od ukupnih lipida prisutnih u čestici.
[0140] U daljim rešenjima, lipidni konjugat (npr., PEG-lipid) obuhvata od 4 mol % do 10 mol % , od 5 mol % do 10 mol % , od 5 mol % do 9 mol % , od 5 mol % do 8 mol % , od 6 mol % do 9 mol % , od 6 mol % do 8 mol % , ili 5 mol % , 6 mol % , 7 mol % , 8 mol % , 9 mol % , ili 10 mol % (ili bilo koji deo ili raspon unutar toga) od ukupnih lipida prisutnih u čestici.
[0141] Procenat lipidnog konjugata (npr., PEG-lipida) prisutnog u lipidnim česticama iz invencije je ciljana količina, i stvarna količina lipidnog konjugata prisutna u formulaciji može varirati, na primer, za ± 2 mol % . Stručnjak u oblasti će shvatiti da se koncentracija lipidnog konjugata može varirati zavisno od korišćenog lipidnog konjugata i brzine po kojoj lipidna čestica postaje fuzogena.
[0142] Kontrolišući sastav i koncentraciju lipidnog konjugata, neko može da kontroliše brzinu pri kojoj se lipidni konjugat razmenjuje iz lipidne čestice, i za uzvrat, brzinu pri kojoj lipidna čestica postaje fuzogena. Pored toga, druge promenljive, uključujući, na primer, pH, temperaturu, ili jonsku jačinu, mogu se koristiti za variranje i/ili kontrolu brzine pri kojoj lipidna čestica postaje fuzogena. Druge metode koje se mogu koristiti za kontrolu brzine pri kojoj lipidna čestica postaje fuzogena će postati očigledne stručnjacima u oblasti nakon čitanja ovog otkrića. Takođe, kontrolisanjem kompozicije i koncentracije lipidnog konjugata, može se kontrolisati veličina čestica lipida.
[0143] Kompozicije i formulacije za administraciju
[0144] Kompozicije nukleinske kiselinski-lipid iz ovog otkrića mogu se administrirati uz pomoć različitih puteva, na primer, za sistemsku isporuku preko intravenskih, parenteralnih, intraperitonealnih ili topikalnih puteva. U nekim rešenjima, siRNK može biti isporučena intracelularno, na primer, u ćelije ciljnog tkiva kao što su pluća ili jetra, ili u upaljenim tkivima. U nekim rešenjima, ovo otkriće pruža metodu za isporuku siRNK u vivo. Kompozicija nukleinska kiselinska-lipid može se administrirati intravenski, subkutano ili intraperitonealno subjektu. U nekim rešenjima, ovo otkriće pruža metode za u vivo isporuku interferirajuće RNK u pluća subjekta sisara.
[0145] U nekim rešenjima, ovo otkriće pruža metod lečenja bolesti ili poremećaja kod subjekta sisara. Terapeutski delotvorna količina kompozicije iz ovog otkrića koja sadrži nukleinsku kiselinu, katjonski lipid, neki amfifil, fosfolipid, holesterol i PEG-povezan holesterol može biti administrirana subjektu koji ima bolest ili poremećaj povezan sa ekspresijom ili prekomernom ekspresijom gena koji se može smanjiti, umanjiti, regulisati ili utišati uz pomoć kompozicije.
[0146] Kompozicije i metode iz otkrića mogu se administrirati subjektima uz pomoć različitih mucosalnim administrativnih načina, uključujući oralno, rektalno, vaginalno, intranazalno, intrapulmonalno ili transdermalno ili dermalno isporučivanje, ili topikalno isporučivanje u oči, uši, koži ili drugim mukozalnim površinama. U nekim aspektima iz ovog otkrića, mukozalni sloj tkiva uključuje sloj epitelnih ćelija. Epitelna ćelija može biti plućna, trahealna, bronhijalna, alveolarna, nazalna, bukalna, epidermalna ili gastrointestinalna. Kompozicije iz ovog otkrića mogu se administrirati koristeći konvencionalne aktuatore kao što su mehanički sprej uređaji, kao i pod pritiskom, električno aktivirani ili drugi tipovi aktuatora.
[0147] Kompozicije iz ovog otkrića mogu se administrirati u vodenom rastvoru kao nazalni ili plućni sprej i mogu se dozirati u obliku spreja različitim metodama poznatim stručnjacima u oblasti. Plućna isporuka kompozicije iz ovog otkrića se postiže administracijom kompozicije u obliku kapljica, čestica ili spreja, koji može biti, na primer, aerosoliziran, atomiziran ili nebuliziran. ýestice iz kompozicije, sprej ili aerosol mogu biti u tečnom ili čvrstom obliku. Preferirani sistemi za doziranje tečnosti kao nazalni sprej su otkriveni u U.S. Pat. No.4,511,069. Takve formulacije mogu se pogodno pripremiti rastvaranjem kompozicija prema ovom otkriću u vodi za proizvodnju vodenog rastvora i učiniti taj rastvor sterilnim. Formulacije mogu biti predstavljene u višedozenim kontejnerima, na primer u zatvorenom disperzivnom sistemu koji je otkriven u U.S. Pat. No. 4,511,069. Drugi pogodni sistemi za isporuku nazalnog spreja su opisani u TRANSDERMAL SYSTEMIC MEDICATION, Y. W. Chien ed., Elsevier Publishers, New York, 1985; i u U.S. Pat. No. 4,778,810. Dodatni oblici isporuke aerosola mogu uključivati, na primer, nebulizatore sa kompresovanim vazduhom, mlaznim, ultrazvučnim i piezoelektričnim pogonom, koji isporučuju biološki aktivni agens rastvoren ili suspendovan u farmaceutskom rastvaraču, na primer, vodi, etanolu ili njihovim mešavinama.
[0148] Nazalni i plućni sprej rastvori iz ovog otkrić obično sadrže lek ili lek koji treba isporučiti, po želji formulisan sa površinski aktivnim agensom, kao što je nejonski surfaktant (npr., polisorbat-80), i jednim ili više puferskih rastvora. U nekim rešenjima iz ovog otkrića, nazalni sprej rastvor dalje obuhvata propelant. pH nazalnog sprej rastvora može biti od pH 6.8 do 7.2. Farmaceutski rastvarači koji se koriste mogu biti i blago kiseli vodeni puferski rastvori pH 4-6. Mogu se dodati i druge komponente za poboljšanje ili održavanje hemijske stabilnosti, uključujući konzervanse, surfaktante, disperzante ili gasove.
[0149] U nekim rešenjima, ovo otkriće je farmaceutski proizvod koji uključuje rastvor koji sadrži kompoziciju iz ovog otkrića i aktuator za plućni, mukozalni ili intranazalni sprej ili aerosol.
[0150] Oblik doze kompozicije iz ovog otkrića može biti tečan, u obliku kapljica ili emulzije, ili u obliku aerosola.
[0151] Oblik doze kompozicije iz ovog otkrića može biti čvrst, koji se može rekonstituisati u tečnom obliku pre administracije. ývrsti oblik se može administrirati kao prah. ývrsti oblik može biti u obliku kapsule, tabelate ili gela.
[0152] Za formulisanje kompozicija za plućnu isporuku u okviru ovog otkrića, biološki aktivni agens može se kombinovati sa različitim farmaceutski prihvatljivim dodacima, kao i sa bazom ili nosačem za disperziju aktivnog agensa. Primeri dodataka uključuju agense za kontrolu pH kao što su arginin, natrijum hidroksid, glicin, hlorovodična kiselina, limunska kiselina i njihove mešavine. Drugi dodaci uključuju lokalne anestetike (npr. benzil alkohol), izotonizujuće agense (npr. natrijum hlorid, manitol, sorbitol), inhibitore adsorpcije (npr. Tween 80), agense za poboljšanje rastvorljivosti (npr. ciklodekstrini i njihovi derivati), stabilizatore (npr. serumski albumin) i redukciona sredstva (npr. glutation). Kada je kompozicija za mukozalnu isporuku tečna, toničnost formulacije, meren u odnosu na toničnost 0,9% (w/v) fiziološkog rastvora soli uzet kao jedinica, tipično se prilagođava vrednosti na kojoj neće biti indukovana značajna, nepovratna oštećenja tkiva u mukoznom tkivu na mestu administracije. Generalno, toničnost rastvora se prilagođava vrednosti sa 1/3 do 3, tipičnije 1/2 do 2, i najčešće 3/4 do 1.7.
[0153] Biološki aktivni agens može biti dispergovan u bazi ili nosaču, koje može obuhvatati hidrofilno jedinjenje sposobno za disperziju aktivnog agensa i bilo kojih željenih dodataka. Baza može biti izabrana iz širokog spektra pogodnih nosača, uključujući, ali ne ograničavajući se na, kopolimere polikarboksilnih kiselina ili njihovih soli, karboksilne anhidride (npr. maleinski anhidrid) sa drugim monomerima (npr. metil(met)akrilat, akrilna kiselina, itd.), hidrofilne vinilne polimere kao što su polivinil acetat, polivinil alkohol, polivinilpirolidon, celulozne derivate kao što su hidroksimetilceluloza, hidroksipropilceluloza, itd., i prirodne polimere kao što su hitozan, kolagen, natrijum alginat, želatin, hijaluronska kiselina i netoksične metalne soli istih. ýesto se kao baza ili nosač bira biorazgradivi polimer, na primer, polilaktična kiselina, poli(laktična kiselina-glikolna kiselina) kopolimer, polihidroksibuterna kiselina, poli(hidroksibuterna kiselina-glikolna kiselina) kopolimer i njihove mešavine. Alternativno ili dodatno, sintetički masni kiseli esteri kao što su poliglicerinski masni kiseli esteri, saharoza masni kiseli esteri, itd., mogu se koristiti kao nosači. Hidrofilni polimeri i drugi nosači mogu se koristiti sami ili u kombinaciji, i pojačana strukturna integritet može se dati nosaču parcijalnom kristalizacijom, jonskim vezivanjem, umrežavanjem i slično. Nosač može biti dostupan u različitim oblicima, uključujući tečne ili viskozne rastvore, gelove, paste, prahove, mikrosfere i filmove za direktnu primenu na nazalnu mukozu. Upotreba odabranog nosača u ovom kontekstu može dovesti do promovisanja apsorpcije biološki aktivnog agensa.
[0154] Formulacije za mukozalnu, nazalnu ili plućnu isporuku mogu sadržati hidrofilno jedinjenje niske molekulske mase kao bazu ili pomoćno sredstvo. Takva hidrofilnjedinjenje niske molekulske mase pružaju sredstvo kroz koje se u vodi rastvorni aktivni agens, kao što je fiziološki aktivni peptid ili protein, može difundovati kroz bazu do površine tela gde se aktivni agens apsorbuje. Hidrofilno jedinjenje niske molekulske mase po želji apsorbuje vlagu iz mukoze ili atmosfere administracije i rastvara u vodi rastvorni aktivni peptid. Molekulska težina hidrofilnog jedinjenja niske molekulske mase je generalno ne više od 10,000 i preferentno ne više od 3,000. Primeri hidrofilnih jedinjenja niske molekulske mase uključuju poliol jedinjenja, kao što su oligo-, di- i monosaharidi uključujući saharozu, manitol, laktozu, L-arabinozu, D-eritrozu, D-ribozu, D-ksilozu, D-manozu, D-galaktozu, laktulozu, celobiozu, gentibiozu, glicerin, polietilen glikol i njihove mešavine. Dalji primeri hidrofilnih jedinjenja niske molekulske mase uključuju N-metilpirolidon, alkohole (npr. oligovinil alkohol, etanol, etilen glikol, propilen glikol, itd.) i njihove mešavine.
[0155] Kompozicije iz ovog otkrića mogu alternativno sadržati kao farmaceutski prihvatljive nosače supstance potrebne za aproksimaciju fizioloških uslova, kao što su agensi za prilagođavanje i puferovanje pH, agensi za prilagođavanje toničnosti i vlažne agense, na primer, natrijum acetat, natrijum laktat, natrijum hlorid, kalijum hlorid, kalcijum hlorid, sorbitan monolaurat, trietanolamin oleat i njihove mešavine. Za čvrste kompozicije, konvencionalni netoksični farmaceutski prihvatljivi nosači mogu se koristiti koji uključuju, na primer, farmaceutske čistoće manitol, laktoza, skrob, magnezijum stearat, natrijum saharin, talk, celuloza, glukoza, saharoza, magnezijum karbonat i slično.
[0156] U određenim rešenjima iz ovog otkrića, biološki aktivni agens može biti administriran u formulaciji sa produženim oslobađanjem, na primer u kompoziciji koja uključuje polimer sa sporim oslobađanjem. Aktivni agens može biti pripremljen sa nosačima koji će zaštititi od brzog oslobađanja, na primer kontrolisanim nosačem za oslobađanje kao što je polimer, mikroinkapsulirani sistem isporuke ili bioadhezivni gel. Produženo oslobađanje aktivnog agensa, u različitim kompozicijama iz ovog otkrića, može se postići uključivanjem u kompoziciju agenasa koji odlažu apsorpciju, na primer, aluminijum monostearat hidrogelovi i želatin.
Primeri
Primer 1: Primeri lipida
[0157] Primeri jedinjenja formule I su dati u Tabeli 1. Struktura jedinjenja je prikazana u prvoj koloni. Oznaka jedinjenja je data prema formuli I.
Prvi par brojeva označava broj ugljenika u estru, uključujući karbonil, za L1 i L2; par brojeva u zagradama označava broj ugljenika u svakoj grani razgranatog alkila, R1 ili ako je R2 takođe razgranat, R1/R2 (zvezdica označava dvostruku vezu); dat je broj ugljenika u R3; i poslednja linija označava supstituciju za R4 i R5. ATX broj je dat za referencu ovde. Date su izračunate LogD vrednosti (c-LogD) i izračunate pKa (c-pKa) vrednosti, kao i merena pKa u zagradama (mereno u formulacionom okruženju). Vrednosti c-LogD i c-pKa su generisane pomoću ACD.
Labs Structure Designer v12.0. Bioaktivnost je procenat u vivo smanjenja Faktora VII na dozi od 0.03 mg/kg, osim ako nije drugačije označeno.
Tabela 1
[0158] Primer 2: Sinteza ATX-0043 (Uporedni primer)
[0159] SL.1 prikazuje put sinteze za ATX-0043 koji je dalje opisan na sledeći način.
[0160] ATX-0043: korak 1
[0161] U tikvici sa okruglim dnom od 500 mL sa jednim grlom, 25 g heksanska kiselina (SM 1;1 ekv.) rastvoren u dihlormetanu (DCM; 200 mL) je uzeto i zatim je dodato 27.6 mL oksalil hlorida (1.5 ekv.) polako na 0°C, mešano pod atmosferom azota i zatim je dodato 0.5 mL dimetilformamid (DMF; katalitički). Rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata.
[0162] U posebnoj tikvici sa okruglim dnom od 1 litra sa dva grla, u 31.4 g N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorid (1.5 ekv.) u DCM (200 ml), je dodato 89.8 mL trietilamina (Et3N, 3 ekv.) koristeći dodatni levak, mešano na 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, gore pomenuti hlorid kiseline, posle koncentrisanja pod sniženim pritiskom, je dodato pod atmosferom azota rastvaranjem u DCM (100 ml), u kapima koristeći levak za dodavanje u toku 20 minuta. Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0163] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć tankoslojne hromatografije (TLC) (20% etilacetat (EtOAc)/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je razblažena sa vodom (300 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa DCM (3 x 100ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0164] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60-120 silika gel; 10% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 20.0 g; prinos, 58% .
[0165] ATX-0043: korak 2
[0166] U rastvor sa 33 g pentil magnezijum bromidom (1.5 ekv.) u tetrahidrofuranu (THF; 100 ml), uzeto u balon sa okruglim dnom od 500 mL sa dva grla, mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 20 g N-metoksi-N-metil heksanamid (1 ekv.) rastvora (rastvoren u 200 mL THF) i rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0167] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (150 ml) i zatim EtOAc (300 ml) je dodat.
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom.
[0168] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 2% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 15.0 g; prinos, 66% .
[0169] ATX-0043: korak 3
[0170] U rastvor sa 15 g undekan-6-on (1 ekv.) rastvoren u 25 mL metanola (MeOH) u 150 mL THF, 4.9 g natrijum borhidrida (1.5 ekv.) je dodato na 0°C i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 2 sata.
[0171] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (100 ml). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i rezultujuće sirovo jedinjenje je podeljeno između EtOAc (150 ml) i vode (150 ml).
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom kako bi se dobila bela čvrsta supstanca. Proizvedena količina, 14.0 g; prinos, 93% .
[0172] ATX-0043: korak 4
[0173] U rastvor sa 15 g 4-aminobutanske kiseline (1 ekv.) rastvorene u 150 mL THF, 145 mL vodeni 1 N NaOH rastvor (1 ekv.) je dodat na 0°C, a nakon toga 43.4 mL Boc anhidrida (1.3 ekv.), sekvencijalno koristeći dodatni levak, tokom perioda od 15 minuta za svaki. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0174] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u hloroformu (CHCl3); Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (150 ml) i zatim EtOAc (100 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobila gumasta tačnost. Proizvedena količina, 20.0 g; prinos, 68% .
[0175] ATX-0043: korak 5
[0176] U rastvor sa 12 g 4-((terc-butoksikarbonil) amino) butanoičnom kiselinom (1 ekv.) rastvorenom u DCM (200 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 14.7 g 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimida (EDC).HCl (1.3 ekv.), 10.6 mL Et3N (1.3 ekv.), i 0.72 g 4-dimetilaminopiridina (DMAP; 0.1 ekv.) sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalima od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor alkohol je dodat na istoj temperaturi, rastvaranjem u DCM (50 ml), koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0177] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (100 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 50 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3 rastvorom (100 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (2 x 50 ml). Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom i pređeno je na sledeći korak sa sirovom supstancom. Proizvedena količina, 8.5 g; prinos, 48% .
[0178] ATX-0043: korak 6
[0179] U rastvor sa 8.5 g undekan-6-il 4-((terc-butoksikarbonil) amino) butanoatom (1 ekv.) rastvorenim u 70 mL DCM, je dodata trifluorosirćetna kiselina (TFA; 10 ekv.) na 0°C i mešano je na sobnoj temperaturi u toku 4 sata pod atmosferom azota.
[0180] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (70% EtOAc/heksan; Rf: 0.2). Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (150 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (2 x 100 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0181] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 4% MeOH/CHCl3i 1 mL trietilamina), i alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 5.0 g; prinos, 33% (u odnosu na alkohol).
[0182] ATX-0043: korak 7
[0183] U rastvor sa 14 g 4-bromo buternom kiselinom (1 ekv.) rastvorenom u DCM (100 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 21 g EDC.HCl (1.3 ekv.), 15.2 mL Et3N (1.3 ekv.), i 1 g DMAP (0.1 ekv.) sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalima od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor 8.3 g (Z)-non-2-en-1-ol (0.7 ekv.) je dodat, tako što je rastvoren u 50 mL DCM, koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 16 sati pod atmosferom azota.
[0184] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (50 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 50 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3 rastvorom (100 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (2 x 50 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0185] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 5% EtOAc/heksan. Proizvedena količina, 11.0 g; prinos, 64% .
[0186] ATX-0043: korak 8
[0187] U tikvicu sa okruglim dnom od 250 ml, 2 g undekan-6-il 4-aminobutanoata (1 ekv.) i 2.2 g (Z)-non-2-en-1-il 4-bromobutanoata (1 ekv.) u DMF, 1.2 g kalijum karbonata (1.2 ekv.) je dodato i rezultujuća smeša je refluksovana na 90°C u toku 4 sata pod atmosferom azota.
[0188] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Ledena voda je dodata u reakcionu masu i zatim je ekstrahovana sa EtOAc i osušena preko natrijum-sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom.
[0189] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (100 - 200 mrežasti silika gel) koristeći 15% EtOAc/heksan. Polazna aminska i bromo jedinjenja su povraćena. Proizvedena količina, 1.45 g; prinos, 40% .
[0190] ATX-0043: korak 9
[0191] U rastvor sa 1.45 g (Z)-non-2-en-1-il 4-((4-okso-4-(undekan-6-iloksi)butil)amino)butanoata (1 ekv.) rastvoren u suvom DCM, je dodato 1.29 mL trietilamina (3 ekv.) i 360 mg trifozgena (0.4 ekv.) sa intervalima od 5 minuta na 0°C pod atmosferom azota. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi, pod atmosferom azota u toku 1 sata. Rezultujuća reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i držana pod atmosferom azota.
[0192] U 360 mg natrijum hidrida (5.5 ekv.) rastvorenog u suvom THF (20 ml), u tikvici sa okruglim dnom sa 2 grla od 250 mL mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 2.1 g 2-(dimetilamino)etan-1-tiol hidrohlorid (5.5 ekv.) u THF (30 ml) i održavano je mešanje u toku 5 minuta pod atmosferom azota. U ovaj rezultujući rastvor gore pomenuti karbonil hlorid rastvoren u THF (50 mL) je dodat koristeći dodatni levak polako za oko 15 minuta, dodat u ovaj rezultujući rastvor i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0193] Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (20 ml) i zatim EtOAc (20 mL) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x20 mL). Kombinovani organski sloj je koncentrisan i rezultujuće sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni.
Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (60% EtOAc/Heks; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje).
[0194] Prečišćavanje je obavljeno koristeći silika gel (100-200 mreža; 18% EtOAc/heksan) hromatografiju. Proizvedena količina, 500 mg; prinos, 26% ; potvrđeno uz pomoć<1>H NMR; HPLC; i masene spektroskopije (Mass).
[0195] ATX-0043 / RL-43A:<1>H-NMR (PPM, 400 MHz, CDCl3): į = 5.63 (m, 1), 5.54 (m, 1), 4.87 (m, 1), 4.63 (d, J = 7.0, 2), 3.37 (brs, 4), 3.03 (t, J = 7.0, 2), 2.27 (s, 6), 2.22-2.32 (4), 2.09 (m, 2), 1.80-1.90 (4), 1.45-1.55 (4), 1.20-1.40 (22), 0.83-0.92 (9).
Primer 3: Sinteza ATX-0057 (Uporedni primer)
[0196] SL.2 prikazuje put sinteze za ATX-0057 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0197] ATX-0057: korak 1: N-metoksi-N-metiloktanamid
[0198] U tikvici sa okruglim dnom od 2 litra sa dva grla, oktanska kiselina (1 ekv.) rastvorena u DCM (300 ml) je uzeto i zatim je dodato 1.5 ekv. oksalil hlorida polako na 0°C, i mešano je pod atmosferom azota. Rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. U posebnoj tikvici sa okruglim dnom od 2 litra sa dva grla, u 2 ekv. N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida u DCM (200 ml), je dodato 3 ekv. trimetilamina koristeći dodatni levak, i mešano je na 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, gore pomenuti hlorid kiseline, posle koncentrisanja pod sniženim pritiskom, je dodato pod atmosferom azota rastvaranjem u DCM (150 ml), u kapima koristeći levak za dodavanje u toku 20 minuta. Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0199] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (20% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je razblažena sa vodom (250 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa DCM (3 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 10% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 85 g; prinos, 65% .
[0200] ATX-0057: korak 2: heksadekan-8-on
[0201] U rastvor sa oktil magnezijum bromidom u THF (100 ml), uzeto u tikvicu sa okruglim dnom od 1 litra sa dva grla, mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato N-metoksi-N-metiloktanamid rastvor (rastvoren u 200 mL THF) i rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0202] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (250 ml) i zatim EtOAc (350 ml) je dodat.
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 2% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 65 g; prinos, 63% .
[0203] ATX-0057: korak 3: heksadekan-8-ol
[0204] U rastvor sa heksadekan-8-on (1 ekv.) rastvoren u MeOH/THF, 1 ekv. natrijum borhidrid je dodat na 0°C i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1.5 sati.
[0205] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (75 ml). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i rezultujuće sirovo jedinjenje je podeljeno između EtOAc (150 ml) i vode (100 ml).
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom kako bi se dobila bela čvrsta supstanca. Proizvedena količina, 60 g; prinos, 91% .
[0206] ATX-0057: korak 4: 4-((terc-butoksikarbonil) amino)butanoična kiselina
[0207] U rastvor sa 4-aminobutanoičnom kiselinom, rastvorenom u THF, vodeni 1 N NaOH rastvor je dodat na 0°C, a nakon toga Boc anhidrid, sekvencijalno koristeći dodatni levak, tokom perioda od 15 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0208] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (250 ml) i zatim EtOAc (300 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 150 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobila gumasta tečnost. Proizvedena količina, 80 g; prinos, 81% .
[0209] ATX-0057: korak 5: heksadekan-8-il 4-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoat
[0210] U rastvor sa 4-((terc-butoksikarbonil) amino)butanoičnom kiselinom, rastvorenom u DCM (200 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato EDC.HCl, Et3N, i 4-dimetilaminopiridin (DMAP), sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor, 1 ekv. heksadekan-8-ol alkohol je dodat na istoj temperaturi, rastvaranjem u DCM (150 ml), koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0211] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (150 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (150 ml) i zatim EtOAc (200 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen, koncentrovan pod sniženim pritiskom, i pređeno je na sledeći korak sa sirovom supstancom. Proizvedena količina, 80 g (sirovo; potrebno jedinjenje i alkohol).
[0212] ATX-0057: korak 6: heksadekan-8-il 4-aminobutanoat
[0213] U rastvor sa heksadekan-8-il-4-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoatom, rastvorenim u DCM, je dodato TFA na 0°C i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.3). Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je oprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (300 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (2 x 200 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 4% MeOH/CHCl3i 1 mL trietilamina), i alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 40 g; prinos, 59% za dva koraka; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0214] ATX-0057: korak 7: (Z)-non-2-en-1-il 4-bromobutanoat
[0215] U rastvor sa 4-bromo buternom kiselinom, rastvorenom u DCM (400 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato u EDC.HCl, Et3N, i DMAP sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalima od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor (Z)-non-2-en-1-ol je dodat, tako što je rastvoren u 100 mL DCM, koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0216] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (300 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 150 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (200 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (150 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 5% EtOAc/heksan. Alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 27 g; prinos, 51% .
[0217] ATX-0057: korak 8: heksadekan-8-il (Z)-4-((4-(non-2-en-1-iloksi)-4-oksobutil)amino)butanoat
[0218] U rastvor sa heksadekan-8-il 4-aminobutanoat, (Z)-non-2-en-1-il 4-bromobutanoatom u acetonitrilu (ACN), kalijum karbonat je dodat i rezultujuća smeša je refluksovana na 90°C u toku 4 sata pod atmosferom azota. Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je filtrirana, isprana sa ACN (20 ml), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (100 - 200 mrežasti silika gel) koristeći 15% EtOAc/heksan. Polazni materijali, amino i bromo jedinjenja, su povraćena. Proizvedena količina, 20 g; prinos, 40% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0219] ATX-0057: korak 9
[0220] U rastvor sa heksadekan-8-il (Z)-4-((4-(non-2-en-1-iloksi)-4-oksobutil) amino) butanoatom, rastvorenim u suvom DCM, je dodato trimetilamina i trifozgena sa intervalom od 5 minuta na 0°C pod atmosferom azota. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi, pod atmosferom azota u toku 1 sata. Rezultujuća reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i držana pod atmosferom azota.
[0221] U natrijum hidrid koji je rastvoren u suvom THF (50 ml), u tikvici sa okruglim dnom od 100 mL sa dva grla mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodat 2-(dimetilamino)propan-1-tiol hidrohlorid i održavano je mešanje u toku 5 minuta pod atmosferom azota. U ovaj rezultujući rastvor gore pomenuti karbamoil hlorid, rastvoren u THF (80 ml), je dodat preko šprica polako za oko 10 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 6 sati pod atmosferom azota.
[0222] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (60% EtOAC/heksan; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (75 ml) i zatim EtOAc (150 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 40 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrisan i rezultujuće sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni.
[0223] Prvo prečišćavanje je obavljeno koristeći silika gel (60-120 mrežica) 22 g sirovog jedinjenja je apsorbovano na 60 g silika gela i izliveno na 500 g silika gela uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 35% EtOAc/heksan. Drugo prečišćavanje je obavljeno koristeći neutralnu glinu sa rastvaračima HPLC kvaliteta. Sirovo jedinjenje, 7.5 g, je apsorbovano na 18 g neutralne gline i rezultujuće je izliveno na 130 g neutralne gline, uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 10% EtOAc/heksan. Prinos, 29% ; potvrđeno uz pomoć<1>H NMR, HPLC, i Mas. sp.
[0224] ATX-0057 / RL-43C:<1>H-NMR (PPM, 400MHz, CDCl3): į = 5.63 (m, 1), 5.51 (m, 1), 4.68 (m, 1), 4.83 (d, J = 7.0, 2), 3.19 (brs, 4), 3.22 (m, 2), 2.52 (m, 2), 2.23-2.37 (4), 2.18 (s, 6), 2.08 (m, 2), 1.84-1.93 (4), 1.46-1.54 (4), 1.20-1.40 (30), 0.83-0.91 (9).
Primer 4: Sinteza ATX-0058 (Uporedni primer)
[0225] SL.3 prikazuje put sinteze za ATX-0058 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0226] ATX-0058: korak 1
[0227] U tikvici sa okruglim dnom od 500 mL sa dva grla pod atmosferom N2, 30 g 8-bromooktanske kiseline (1 ekv.) rastvorene u 200 mL DCM je uzeto i zatim je dodato polako u 26.7 mL oksalil hlorida (1.5 ekv.) na 0°C, mešano pod atmosferom azota. Rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata.
[0228] U posebnoj tikvici sa okruglim dnom od 1 litra sa dva grla, 40.5 g N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (2 ekv.) u 300 mL DCM je dodato 87 mL trimetilamina (3 ekv.) mešano na 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, gore pomenuti hlorid kiseline je dodat posle koncentrisanja pod sniženim pritiskom, tako što je rastvoren u 500 mL DCM, u kapima koristeći levak za dodavanje u toku 15 minuta. Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0229] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (20% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je razblažena sa vodom (300 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0230] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 10% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 28 g.
[0231] ATX-0058: korak 2
[0232] U rastvor sa 28 g heksil magnezijum bromida (1 ekv.) u THF (100 ml), mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 36.8 g N-metoksi-N-metiloktanamid (1.3 ekv.) u 200 mL THF i rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 5 sati.
[0233] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (100 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0234] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 2% etil acetate/heksan). Proizvedena količina, 24 g; prinos, 77% .
[0235] ATX-0058: korak 3
[0236] U rastvor sa 24 g tetradekan-7-ona (1 ekv.) rastvorenog u MeOH/THF, 4.27 g natrijum borhidrid (1 ekv.) je dodat na 0°C i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0237] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (50 ml). Metanol je redukovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je podeljeno između EtOAc (200 ml) i vode. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 80 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Proizvedena količina, 21.5 g; prinos, 89% .
[0238] ATX-0058: korak 4
[0239] U rastvor sa 20 g 4-aminobutanske kiseline rastvorene u 140 mL THF, 196 mL vodenog 1N NaOH rastvora je dodato na 0°C, a nakon toga 36.8 g Boc anhidrida, koristeći levak. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0240] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (100 ml) i zatim EtOAc (200 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobila gumasta tečnost. Proizvedena količina, 30 g; prinos, 76% .
[0241] ATX-0058: korak 5
[0242] U rastvor sa 10 g 4-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoičnom kiselinom (1 ekv.) rastvorenom u DCM (150 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 12.2 g EDC.HCl (1.3 ekv.), 20.4 mL Et3N (3 ekv.), i 488 mg DMAP (0.1 ekv.) sekvencijalno sa intervalom od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor alkohol je dodat, tako što je rastvoren u DCM, koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0243] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (100 ml) i organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 50 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom i EtOAc (100 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom, i pređeno je na sledeći korak sa sirovom supstancom. Proizvedena količina, 12.7 g (sirov).
[0244] ATX-0058: korak 6
[0245] U rastvor sa 12.5 g tetradekan-7-il 4-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoata (1 ekv.) rastvorenog u 100 mL DCM, je dodato 23.9 mL TFA (10 ekv.) na 0°C i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0246] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.3). Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (100 ml) i EtOAc (100 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0247] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 4% MeOH/CHCl3) i alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 7 g za dva koraka; prinos, 47% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0248] ATX-0058: korak 7
[0249] U rastvor sa 20 g 4-bromo buternom kiselinom (1 ekv.) rastvorenom u DCM (150 ml), ohlađen do 0°C je dodato 1.5 ekv. EDC.HCl, 3 ekv. Et3N, i 0.1 ekv. DMAP sekvencijalno sa intervalom od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor 0.7 ekv. (Z)-non-2-en-1-ol je dodat, tako što je rastvoren u 100 mL DCM, koristeći levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0250] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (100 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom i EtOAc (150 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0251] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 5% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 17 g; prinos, 69% ; potvrđeno uz pomoć<1>H NMR.
[0252] ATX-0058: korak 8
[0253] U rastvor sa 6 g tetradekan-7-il 4-aminobutanoatom (1 ekv.), 5.8 g (Z)-non-2-en-1-il 4-bromobutanoat (1 ekv.) u ACN (125 ml), 2.7 g kalijum karbonat (1.2 ekv.) je dodato i rezultujuća smeša je refluksovana na 90°C u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0254] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0255] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (100 - 200 mrežasti silika gel; 15% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 4.5 g; prinos, 44% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0256] ATX-0058: korak 9
[0257] U rastvor sa 4.4 g (Z)-non-2-en-1-il 4-((4-okso-4-(tetradekan-7-iloksi)butil)amino)butanoata (1 ekv.) rastvorenog u 30 mL suvog DCM, je dodato 0.83 mL trimetilamina (3 ekv.) i 418 mg trifozgena (0.5 ekv.) sa 5 minuta intervalom, na 0°C pod atmosferom azota. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi, pod atmosferom azota u toku 1 sata. Rezultujuća reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i držana pod atmosferom azota.
[0258] U 192 mg natrijum hidrida (10 ekv.) rastvorenog u suvom THF (25 ml), u balon sa okruglim dnom od 100 mL sa dva grla, je dodato 564 mg 2-(dimetilamino)propan-1-tiol hidrohlorida (5 ekv.) na 0°C i održavano je mešanje u toku 5 minuta pod atmosferom azota. U ovaj rezultujući rastvor gore pomenuti karbamoil hlorid, rastvoren u THF (35 ml), je dodat preko šprica polako za oko 10 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata pod atmosferom azota.
[0259] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (60% EtOAC/heksan; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl (30 ml) i zatim EtOAc (100 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 50 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrisan i rezultujuće sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni.
[0260] Prvo prečišćavanje je obavljeno koristeći silika gel (60-120 mrežica).5.0 g sirovog jedinjenja je apsorbovano na 9 g silika gela i izliveno na 90 g silika gela uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 35% EtOAc/heksan. Drugo prečišćavanje je obavljeno koristeći neutralnu glinu sa rastvaračima HPLC kvaliteta.1.5 g sirovog jedinjenja je apsorbovano na 4 g neutralne gline i rezultujuće je izliveno na 40 g neutralne gline uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 10% EtOAc/heksan. Proizvedena količina, 1.2 g; prinos, 21% ; potvrđeno uz pomoć<1>H NMR; HPLC; Mas. sp.
[0261] ATX-0058 / RL-43B:<1>H-NMR (PPM, 400MHz, CDCl3): į = 5.65 (m, 1), 5.52 (m, 1), 4.86 (m, 1), 4.63 (d, J = 7.0, 2), 3.37 (brs, 4), 3.02 (t, J = 6.0, 2), 2.53 (t, J = 6.0, 2), 2.27-2.36 (4), 2.27 (s, 6), 2.09 (m, 2), 1.83-1.96 (4), 1.46-1.54 (4), 1.20-1.40 (26), 0.84-0.91 (9).
Primer 5: Sinteza ATX-0081 (Uporedni primer)
[0262] SL.4 prikazuje put sinteze za ATX-0081 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0263] ATX-0081: korak 1
[0264] U tikvici sa okruglim dnom od 2 litra sa dva grla, oktanska kiselina rastvorena u DCM (200 ml) je uzeta i zatim je dodato 1.5 ekv. oksalil hlorida polako na 0°C, mešano pod atmosferom azota. Rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. U posebnoj tikvici sa okruglim dnom od 2 litra sa dva grla, u 2 ekv. N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida u DCM (200 ml), je dodato 3 ekv. trimetilamina koristeći dodatni levak, i mešano na 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, gore pomenuti hlorid kiseline, posle koncentrisanja pod sniženim pritiskom, je dodat pod atmosferom azota rastvaranjem u DCM (150 ml), u kapima koristeći levak za dodavanje u toku 20 minuta. Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0265] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (20% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je razblažena sa vodom (250 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa DCM (3 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 10% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 33 g; prinos, 84% .
[0266] ATX-0081: korak 2
[0267] U rastvor sa 22 g heptil magnezijum bromida (1.5 ekv.) u THF (100 ml), uzeto u tikvicu sa okruglim dnom od 1 litra sa dva grla, mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato N-metoksi-N-metiloktanamid (1 ekv.) rastvora (rastvoren u 200 mL THF) i rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0268] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (250 ml) i zatim EtOAc (350 ml) je dodat.
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 2% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 22 g; prinos, 65% .
[0269] ATX-0081: korak 3
[0270] U rastvor sa 22 g pentadekan-8-ona (1 ekv.) rastvorenog u MeOH/THF, 1.5 ekv. natrijum borhidrida je dodato na 0°C i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0271] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (75 ml). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i rezultujuće sirovo jedinjenje je podeljeno između EtOAc (150 ml) i vode (100 ml).
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom kako bi se dobila bela čvrsta supstanca. Proizvedena količina, 20 g; prinos, 90% .
[0272] ATX-0081: korak 4
[0273] U rastvor sa 50 g 4-aminobutanske kiseline rastvorene u 350 mL THF, 490 mL vodeni 1 N NaOH rastvor je dodat na 0°C, a nakon toga 140 mL Boc anhidrida, sekvencijalno koristeći dodatni levak, tokom perioda od 15 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0274] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (250 ml) i zatim EtOAc (300 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 150 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobila gumasta tečnost. Proizvedena količina, 80 g; prinos, 81% .
[0275] ATX-0081: korak 5
[0276] U rastvor sa 10 g 4-((terc-butoksikarbonil) amino)butanoične kiseline, rastvorene u DCM (250 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 1.3 ekv. EDC.HCl, Et3N, i 4-dimetilaminopiridina (DMAP), sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor, 1 ekv. pentadekan-7-ol alkohola je dodato na istoj temperaturi, rastvaranjem u DCM (150 ml), koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0277] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (150 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (150 ml) i zatim EtOAc (200 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen, koncentrovan pod sniženim pritiskom, i pređeno je na sledeći korak sa sirovom supstancom. Proizvedena količina, 8.5 g (sirovo; potrebno jedinjenje i alkohol).
[0278] ATX-0081: korak 6
[0279] U rastvor sa 8.5 g pentadekan-8-il 4-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoata rastvorenog u 65 mL DCM, je dodato 10 ekv. TFA na 0°C i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0280] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.3). Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je oprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (300 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (2 x 200 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 4% MeOH/CHCl3i 1 mL trietilamina), i alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 4 g za dva koraka; prinos, 25% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0281] ATX-0081: korak 7
[0282] U rastvor sa 4-bromo buternom kiselinom, rastvorenom u DCM (300 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato EDC.HCl, Et3N, i DMAP sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalima od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor 20 g (Z)-non-2-en-1-ol je dodat, tako što je rastvoren u 100 mL DCM, koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0283] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (300 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 150 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (200 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (150 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 5% EtOAc/heksan. Alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 19 g; prinos, 55% .
[0284] ATX-0081: korak 8
[0285] U rastvor sa 4.5 g pentadekan-8-il 4-aminobutanoata, 1 ekv. (Z)-non-2-en-1-il 4-bromobutanoat u 70 mL acetonitrila (ACN), 1.4 ekv. kalijum karbonata je dodato i rezultujuća smeša je refluksovana na 90°C u toku 4 sata pod atmosferom azota.
[0286] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je filtrirana, isprana sa ACN (20 ml), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (100 - 200 mrežasti silika gel) koristeći 15% EtOAc/heksan. Polazni materijali, amino i bromo jedinjenja, su povraćena. Proizvedena količina, 2.1 g; prinos, 27% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0287] ATX-0081: korak 9
[0288] U rastvor sa 2.1 g pentadekan-8-il (Z)-4-((4-(non-2-en-1-iloksi)-4-oksobutil) amino) butanoata, rastvorenog u 150 mL suvog DCM, je dodato 3 ekv. trietilamina i trifozgena sa intervalom od 5 minuta na 0°C pod atmosferom azota. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi, pod atmosferom azota u toku 1 sata. Rezultujuća reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i držana pod atmosferom azota.
[0289] U 7 ekv. natrijum hidrida rastvorenog u suvom THF (80 ml), u tikvici sa okruglim dnom od 100 mL sa dva grla mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 3.5 ekv.2-(dimetilamino)propan-1-tiol hidrohlorida i održavano je mešanje u toku 5 minuta pod atmosferom azota. U ovaj rezultujući rastvor gore pomenuti karbamoil hlorid, rastvoren u THF (80 ml), je dodat preko šprica polako za oko 10 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na 0°C do sobne temperature preko noći pod atmosferom azota.
[0290] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (60% EtOAC/heksan; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NHaCl rastvorom (75 ml) i zatim EtOAc (150 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 × 40 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrisan i rezultujuće sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni.
[0291] Prvo prečišćavanje je obavljeno koristeći silika gel (60-120 mrežica) sirovo jedinjenje je apsorbovano na 60 g silika gela i izliveno na 500 g silika gela uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 35% EtOAc/heksan. Drugo prečišćavanje je obavljeno koristeći neutralnu glinu sa rastvaračima HPLC kvaliteta. Sirovo jedinjenje je apsorbovano na 18 g neutralne gline i rezultujuće je izliveno na 130 g neutralne gline uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 10% EtOAc/heksan. Proizvedena količina, 1.5 g; prinos, 45% ; potvrđeno uz pomoć<1>H NMR, HPLC, i Mas. sp.
[0292] ATX-0081 / RL-48B:<1>H-NMR (PPM, 500 MHz, CDCl3): į = 5.64 (m, 1), 5.52 (m, 1), 4.86 (m, 1), 4.63 (d, J = 7.0, 2), 3.31-3.44 (4), 3.02 (t, J = 7.0, 2), 2.52 (t, J = 7.0, 2), 2.26-2.36 (4), 2.27 (s, 6), 2.10 (m, 2), 1.84-1.95 (4), 1.46-1.54 (4), 1.20-1.40 (26), 0.85-0.94 (9).
Primer 6: Sinteza ATX-0082
[0293] SL.5 prikazuje put sinteze za ATX-0082 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0294] ATX-0082: korak 1
[0295] U tikvici sa okruglim dnom od 2 litra sa dva grla, 30 g oktanske kiseline rastvorene u DCM (200 ml) je uzeto i zatim je dodato 1.5 ekv. oksalil hlorida polako na 0°C, mešano pod atmosferom azota. Rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. U posebnoj tikvici sa okruglim dnom od 2 litra sa dva grla, u 2 ekv. N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida u DCM (200 ml), je dodato 3 ekv. trimetilamina koristeći dodatni levak, mešano na 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, gore pomenuti hlorid kiseline, posle koncentrisanja pod sniženim pritiskom, je dodat pod atmosferom azota rastvaranjem u DCM (150 ml), u kapima koristeći levak za dodavanje u toku 20 minuta.
Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0296] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (20% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je razblažena sa vodom (250 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa DCM (3 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 10% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 33 g; prinos, 84% .
[0297] ATX-0082: korak 2
[0298] U rastvor sa heptil magnezijum bromidom (1.5 ekv.) u THF (100 ml), uzeto u tikvicu sa okruglim dnom od 1 litra sa dva grla, mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 28 g N-metoksi-N-metiloktanamid (1 ekv.) rastvora (rastvoren u 200 mL THF) i rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0299] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (250 ml) i zatim EtOAc (350 ml) je dodat.
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 2% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 22 g; prinos, 65% .
[0300] ATX-0082: korak 3
[0301] U rastvor sa 22 g pentadekan-8-ona (1 ekv.) rastvorenog u MeOH/THF, 1.5 ekv. natrijum borhidrida je dodato na 0°C i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0302] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (75 ml). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i rezultujuće sirovo jedinjenje je podeljeno između EtOAc (150 ml) i vode (100 ml).
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom kako bi se dobila bela čvrsta supstanca. Proizvedena količina, 20 g; prinos, 90% .
[0303] ATX-0082: korak 4
[0304] U rastvor sa 15 g 4-aminobutanske kiseline rastvorene u 120 mL THF, 185 mL vodeni 1 N NaOH rastvor je dodato na 0°C, a nakon toga 50 mL Boc anhidrid, sekvencijalno koristeći dodatni levak, tokom perioda od 15 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0305] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (250 ml) i zatim EtOAc (300 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 150 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobila gumasta tečnost. Proizvedena količina, 27 g; prinos, 85% .
[0306] ATX-0082: korak 5
[0307] U rastvor sa 10 g 4-((terc-butoksikarbonil) amino)butanoičnom kiselinom, rastvorenom u DCM (250 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 1.3 ekv. EDC.HCl, Et3N, i 4-dimetilaminopiridina (DMAP), sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor, 1 ekv. pentadekan-7-ol alkohol je dodat na istoj temperaturi, rastvaranjem u DCM (150 ml), koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0308] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (150 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (150 ml) i zatim EtOAc (200 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen, koncentrovan pod sniženim pritiskom, i pređeno je na sledeći korak sa sirovom supstancom. Proizvedena količina, 8 g (sirovo; potrebno jedinjenje i alkohol).
[0309] ATX-0082: korak 6
[0310] U rastvor sa 8.0 g pentadekan-8-il 4-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoatom rastvorenim u 60 mL DCM, je dodato 10 ekv. TFA na 0°C i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0311] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.3). Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je oprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (300 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (2 x 200 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 4% MeOH/CHCl3i 1 mL trietilamina), i alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 4 g; prinos, 25% za dva koraka; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0312] ATX-0082: korak 7
[0313] U rastvor sa 4-bromo buternom kiselinom, rastvorenom u DCM (400 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato do 1.5 ekv. EDC.HCl, 3 ekv. Et3N, i DMAP sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalima od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor 20 g (Z)-non-2-en-1-ol je dodat, tako što je rastvoren u 100 mL DCM, koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0314] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (300 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 × 150 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (200 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (150 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 5% EtOAc/heksan. Alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 18 g; prinos, 55% .
[0315] ATX-0082: korak 8
[0316] U rastvor sa 4.0 g pentadekan-8-il 4-aminobutanoata, 1 ekv. (Z)-non-2-en-1-il 4-bromobutanoat u 90 mL ACN, 1.4 ekv. kalijum karbonat je dodato i rezultujuća smeša je refluksovana na 90°C u toku 4 sata pod atmosferom azota.
[0317] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je filtrirana, isprana sa ACN (20 ml), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (100 - 200 mrežasti silika gel) koristeći 15% EtOAc/heksan. Polazni materijali (amino i bromo jedinjenja) su povraćena. Proizvedena količina, 2.2 g; prinos, 30% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0318] ATX-0082: korak 9
[0319] U rastvor sa 2.2 g pentadekan-8-il (Z)-4-((4-(non-2-en-1-iloksi)-4-oksobutil) amino) butanoata, rastvorenog u 25 mL suvog DCM, je dodato 3 ekv. trietilamina i trifozgena sa intervalom od 5 minuta na 0°C pod atmosferom azota. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi, pod atmosferom azota u toku 1 sata. Rezultujuća reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i držana pod atmosferom azota.
[0320] U 7 ekv. natrijum hidrida rastvorenog u suvom THF (100 ml), u tikvici sa okruglim dnom od 100 mL sa dva grla mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 3.5 ekv.2-(dimetilamino)propan-1-tiol hidrohlorid i održavano je mešanje u toku 5 minuta pod atmosferom azota. U ovaj rezultujući rastvor gore pomenuti karbamoil hlorid, rastvoren u THF (100 ml), je dodat preko šprica polako za oko 10 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na 0°C do sobne temperature preko noći pod atmosferom azota.
[0321] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (60% EtOAc/heksan; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (75 ml) i zatim EtOAc (150 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 40 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrisan i rezultujuće sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni.
[0322] Prvo prečišćavanje je obavljeno koristeći silika gel (60-120 mrežica) sirovo jedinjenje je apsorbovano na 60 g silika gela i izliveno na 500 g silika gela uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 35% EtOAc/heksan. Drugo prečišćavanje je obavljeno koristeći neutralnu glinu sa rastvaračima HPLC kvaliteta. Sirovo jedinjenje je apsorbovano na 18 g neutralne gline i rezultujuće je izliveno na 130 g neutralne gline uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 10% EtOAc/heksan. Proizvedena količina, 1.2 g; prinos, 43% ; potvrđeno uz pomoć<1>H NMR, HPLC, i Mas. sp.
[03253] ATX-0082 / RL-47A:<1>H-NMR (PPM, 500 MHz, CDCl3): į = 5.64 (m, 1), 5.52 (m, 1), 4.87 (m, 1), 4.62 (d, J = 7.0, 2), 3.61 (t, J = 7.0, 2), 3.28-3.37 (2), 3.02 (t, J = 7.0, 2), 2.61 (m, 2), 2.52 (t, J = 7.0, 2), 2.31 (m, 2), 2.27 (s, 6), 2.10 (m, 2), 1.62-1.70 (6), 1.21-1.40 (32), 0.85-0.91 (9).
Primer 7: Sinteza ATX-0086
[0324] SL.6 prikazuje put sinteze za ATX-0086 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0325] ATX-0086: korak 1
[0326] U tikvici sa okruglim dnom od 2 litra sa dva grla, 30 g oktanske kiseline koja je rastvorena u DCM (200 ml) je uzeto i zatim je dodato 1.5 ekv. oksalil hlorida polako na 0°C, mešano pod atmosferom azota. Rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. U posebnoj tikvici sa okruglim dnom od 2 litra sa dva grla, u 2 ekv. N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida u DCM (200 ml), je dodato 3 ekv. trimetilamina koristeći dodatni levak, mešano na 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, gore pomenuti hlorid kiseline, posle koncentrisanja pod sniženim pritiskom, je dodat pod atmosferom azota rastvaranjem u DCM (150 ml), u kapima koristeći levak za dodavanje u toku 20 minuta. Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0327] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (20% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je razblažena sa vodom (250 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa DCM (3 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 10% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 38 g; prinos, 84% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0328] ATX-0086: korak 2
[0329] U rastvor sa heksil magnezijum bromidom (1.5 ekv.) u THF (100 ml), uzeto u tikvicu sa okruglim dnom od 1 litra sa dva grla, mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 38 g N-metoksi-N-metiloktanamid (1 ekv.) rastvora (rastvoren u 200 mL THF) i rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0330] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (250 ml) i zatim EtOAc (350 ml) je dodat.
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 2% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 44 g; prinos, 65% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0331] ATX-0086: korak 3
[0332] U rastvor sa 44 g tridekan-7-ona (1 eq) rastvorenog u MeOH/THF, 1.5 ekv. natrijum borhidrid je dodat na 0°C i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0333] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (75 ml). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i rezultujuće sirovo jedinjenje je podeljeno između EtOAc (150 ml) i vode (100 ml).
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom kako bi se dobila bela čvrsta supstanca. Proizvedena količina, 40 g; prinos, 90% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0334] ATX-0086: korak 4
[0335] U rastvor sa 50 g 4-aminobutanske kiseline rastvorene u 350 mL THF, 490 mL vodeni 1 N NaOH rastvor je dodat na 0°C, a nakon toga 140 mL Boc anhidrid, sekvencijalno koristeći dodatni levak, tokom perioda od 15 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0336] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (250 ml) i zatim EtOAc (300 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 150 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobila gumasta tečnost. Proizvedena količina, 80 g; prinos, 81% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0337] ATX-0086: korak 5
[0338] U rastvor sa 10 g 4-((terc-butoksikarbonil) amino) butanoične kiseline, rastvoren u DCM (250 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 1.3 ekv. EDC.HCl, Et3N, i 4-dimetilaminopiridina (DMAP), sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor, 1 ekv. pentadekan-7-ol alkohol je dodat na istoj temperaturi, rastvaranjem u DCM (150 ml), koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0339] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (150 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (150 ml) i zatim EtOAc (200 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen, koncentrovan pod sniženim pritiskom, i pređeno je na sledeći korak sa sirovom supstancom. Proizvedena količina, 8 g (sirovo; potrebno jedinjenje i alkohol).
[0340] ATX-0086: korak 6
[0341] U rastvor sa 8.0 g pentadekan-8-il 4-((terc-butoksikarbonil) amino) butanoata rastvorenog u 60 mL DCM, je dodato 10 ekv. TFA na 0°C i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0342] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.3). Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je oprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (300 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (2 x 200 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 4% MeOH/CHCl3i 1 mL trietilamina), i alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 3.5 g; prinos, 52% za dva koraka; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0343] ATX-0086: korak 7
[0344] U rastvor sa 4-bromo buternom kiselinom, rastvorenom u DCM (400 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato do 1.5 ekv. EDC.HCl, 2 ekv. Et3N, i DMAP sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalima od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor 20 g (Z)-non-2-en-1-ol je dodat, tako što je rastvoren u 100 mL DCM, koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0345] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (300 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 × 150 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (200 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (150 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 5% EtOAc/heksan. Alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 18 g; prinos, 55% .
[0346] ATX-0086: korak 8
[0347] U rastvor sa 4.0 g tridekan-7-il 4-aminobutanoata, 1 ekv. (Z)-non-2-en-1-il 4-bromobutanoat u 90 mL ACN, 1.4 ekv. kalijum karbonat je dodat i rezultujuća smeša je refluksovana na 90°C u toku 4 sata pod atmosferom azota.
[0348] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je filtrirana, isprana sa ACN (20 ml), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (100 - 200 mrežasti silika gel) koristeći 15% EtOAc/heksan. Polazni materijali, amino i bromo jedinjenja, su povraćena. Proizvedena količina, 2.2 g; prinos, 30% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0349] ATX-0086: korak 9
[0350] U rastvor sa 2.2 g tridekan-7-il (Z)-4-((4-(non-2-en-1-iloksi)-4-oksobutil) amino) butanoata, rastvorenog u 25 mL suvog DCM, je dodato 3 ekv. trietilamina i trifozgena sa intervalom od 5 minuta na 0°C pod atmosferom azota. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi, pod atmosferom azota u toku 1 sata. Rezultujuća reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i držana pod atmosferom azota.
[0351] U 7 ekv. natrijum hidrida rastvorenog u suvom THF (100 ml), u tikvici sa okruglim dnom od 100 mL sa dva grla mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 3.5 ekv.2-(dimetilamino)propan-1-tiol hidrohlorida i održavano je mešanje u toku 5 minuta pod atmosferom azota. U ovaj rezultujući rastvor gore pomenuti karbamoil hlorid, rastvoren u THF (100 ml), je dodat preko šprica polako za oko 10 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na 0°C do sobne temperature preko noći pod atmosferom azota.
[0352] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (60% EtOAC/heksan; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (75 ml) i zatim EtOAc (150 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 40 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrisan i rezultujuće sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni.
[0353] Prvo prečišćavanje je obavljeno koristeći silika gel (60-120 mrežica) sirovo jedinjenje je apsorbovano na 60 g silika gela i izliveno na 500 g silika gela uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 35% EtOAc/heksan. Drugo prečišćavanje je obavljeno koristeći neutralnu glinu sa rastvaračima HPLC kvaliteta. Sirovo jedinjenje je apsorbovano na 18 g neutralne gline i rezultujuće je izliveno na 130 g neutralne gline uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 10% EtOAc/heksan. Proizvedena količina, 1.2 g; prinos, 43% ; potvrđeno uz pomoć<1>H NMR, HPLC, i Mas. sp.
[0354] ATX-0086 / RL-48A:<1>H-NMR (PPM, 500 MHz, CDCl3): į = 5.64 (m, 1), 5.51 (m, 10, 4.87 (m, 1), 4.63 (d, J = 7.0, 2), 3.30-3.44 (4), 3.02 (t, J = 7.0, 2), 2.52 (t, J = 7.0, 2), 2.26-2.36 (4), 2.27 (s, 6), 2.09 (m, 2), 1.82-1.96 (4), 1.46-1.54 (4), 1.21-1.40 (24), 0.84-0.91 (9).
Primer 8: Sinteza ATX-0087
[0355] SL.7 prikazuje put sinteze za ATX-0087 koji uključuje devet koraka.
[0356] ATX-0087: korak 1
[0357] U tikvici sa okruglim dnom od 2 litra sa dva grla, 20 g oktanska kiselina rastvorena u DCM (200 ml) je uzeta i zatim je dodato 1.5 ekv. oksalil hlorida polako na 0°C, mešano pod atmosferom azota. Rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. U posebnoj tikvici sa okruglim dnom od 2 litra sa dva grla, u 2 ekv. N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida u DCM (200 ml), je dodato 3 ekv. trimetilamina koristeći dodatni levak, mešano na 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, gore pomenuti hlorid kiseline, posle koncentrisanja pod sniženim pritiskom, je dodat pod atmosferom azota rastvaranjem u DCM (150 ml), u kapima koristeći levak za dodavanje u toku 20 minuta.
Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0358] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (20% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je razblažena sa vodom (250 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa DCM (3 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 10% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 20 g; prinos, 84% .
[0359] ATX-0087: korak 2
[0360] U rastvor sa heksil magnezijum bromidom (1.5 ekv.) u THF (100 ml), uzeto u tikvicu sa okruglim dnom od 1 litra sa dva grla, mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 20 g N-metoksi-N-metiloktanamid (1 ekv.) rastvora (rastvoren u 200 mL THF) i rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0361] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (250 ml) i zatim EtOAc (350 ml) je dodat.
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 2% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 25 g; prinos, 65% .
[0362] ATX-0087: korak 3
[0363] U rastvor sa 25 g tridekane-7-ona (1 eq) rastvorenog u MeOH/THF, 1.5 ekv. natrijum borhidrid je dodat na 0°C i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0364] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (75 ml). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i rezultujuće sirovo jedinjenje je podeljeno između EtOAc(150 ml) i vode (100 ml).
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom kako bi se dobila bela čvrsta supstanca. Proizvedena količina, 22 g; prinos, 90% .
[0365] ATX-0087: korak 4
[0366] U rastvor sa 50 g 4-aminobutanske kiseline rastvorene u 350 mL THF, 490 mL vodeni 1 N NaOH rastvor je dodat na 0°C, a nakon toga 140 mL Boc anhidrid, sekvencijalno koristeći dodatni levak, tokom perioda od 15 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0367] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (250 ml) i zatim EtOAc (300 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 150 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobila gumasta tečnost. Proizvedena količina, 80 g; prinos, 81% .
[0368] ATX-0087: korak 5
[0369] U rastvor sa 17 g 4-((terc-butoksikarbonil) amino)butanoične kiseline, rastvorene u DCM (250 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 1.3 ekv. EDC.HCl, Et3N, i 4-dimetilaminopiridina (DMAP), sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor, 1 ekv. tridekan-7-ol je dodat na istoj temperaturi, rastvaranjem u DCM (150 ml), koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0370] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (150 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (150 ml) i zatim EtOAc (200 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen, koncentrovan pod sniženim pritiskom, i pređeno je na sledeći korak sa sirovom supstancom. Proizvedena količina, 15 g (sirovo; potrebno jedinjenje i alkohol).
[0371] ATX-0087: korak 6
[0372] U rastvor sa 15.0 g pentadekan-8-il 4-((terc-butoksikarbonil) amino) butanoata rastvorenog u 80 mL DCM, je dodato 10 ekv. TFA na 0°C i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0373] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.3). Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je oprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (300 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (2 x 200 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 4% MeOH/CHCl3i 1 mL trietilamina), i alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 7 g; prinos, 24% za dva koraka; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0374] ATX-0087: korak 7
[0375] U rastvor sa 4-bromo buternom kiselinom, rastvorenom u DCM (400 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato do 1.5 ekv. EDC.HCl, 2 ekv. Et3N, i DMAP sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalima od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor 20 g (Z)-non-2-en-1-ola je dodato, tako što je rastvoren u 100 mL DCM, koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0376] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (300 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 150 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (200 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (150 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 5% EtOAc/heksan. Alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 19 g; prinos, 55% .
[0377] ATX-0087: korak 8
[0378] U rastvor sa 4.0 g tridekan-7-il 4-aminobutanoata, 1 ekv. (Z)-non-2-en-1-il 4-bromobutanoat u 90 mL ACN, 1.4 ekv. kalijum karbonat je dodato i rezultujuća smeša je refluksovana na 90°C u toku 4 sata pod atmosferom azota.
[0379] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je filtrirana, isprana sa ACN (20 ml), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (100 - 200 mrežasti silika gel) koristeći 15% EtOAc/heksan. Polazni materijali, amino i bromo jedinjenja, su povraćena. Proizvedena količina, 2.2 g; prinos, 30% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0380] ATX-0087: korak 9
[0381] U rastvor sa 2.2 g tridekan-7-il (Z)-4-((4-(non-2-en-1-iloksi)-4-oksobutil) amino) butanoata, rastvorenog u 25 mL suvog DCM, je dodato 3 ekv. trietilamina i trifozgena sa intervalom od 5 minuta na 0°C pod atmosferom azota. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi, pod atmosferom azota u toku 1 sata. Rezultujuća reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i držana pod atmosferom azota.
[0382] U 7 ekv. natrijum hidrida rastvorenog u suvom THF (100 ml), u tikvici sa okruglim dnom od 100 mL sa dva grla mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 3.5 ekv.2-(dimetilamino)propan-1-tiol hidrohlorida i održavano je mešanje u toku 5 minuta pod atmosferom azota. U ovaj rezultujući rastvor gore pomenuti karbamoil hlorid, rastvoren u THF (100 ml), je dodat preko šprica polako za oko 10 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na 0°C do sobne temperature preko noći pod atmosferom azota.
[0383] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (60% EtOAc/heksan; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (75 ml) i zatim EtOAc (150 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 40 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrisan i rezultujuće sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni.
[0384] Prvo prečišćavanje je obavljeno koristeći silika gel (60-120 mrežica) sirovo jedinjenje je apsorbovano na 60 g silika gela i izliveno na 500 g silika gela uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 35% EtOAc/heksan. Drugo prečišćavanje je obavljeno koristeći neutralnu glinu sa rastvaračima HPLC kvaliteta. Sirovo jedinjenje je apsorbovano na 18 g neutralne gline i rezultujuće je izliveno na 130 g neutralne gline uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 10% EtOAc/heksan. Proizvedena količina, 1.2 g; prinos, 43% ; potvrđeno uz pomoć<1>H NMR, HPLC, i Mas. sp.
[0385] ATX-0087 / RL-48C:<1>H-NMR (PPM, 500 MHz, CDCl3): į = 5.64 (m, 1), 5.52 (m, 1), 4.87 (m, 1), 4.63 (d, J=7.0, 2), 3.30-3.44 (4), 3.02 (t, J = 7.0, 2), 2.52 (t, J = 7.0, 2), 2.26-2.36 (4), 2.27 (s, 6), 2.09 (m, 2), 1.83-1.96 (4), 1.46-1.54 (4), 1.21-1.40 (32), 0.85-0.90 (9).
Primer 9: Sinteza ATX-0088 (Uporedni primer)
[0386] SL.8 prikazuje put sinteze za ATX-0088 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0387] ATX-0088: korak 1
[0388] U tikvici sa okruglim dnom od 500 mL sa dva grla pod atmosferom N2, 25 g 8-bromooktanske kiseline (1 ekv.) rastvorene u 200 mL DCM je uzeto i zatim je dodato polako u oksalil hlorid, 1.5 ekv., na 0°C, mešano pod atmosferom azota. Rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata.
[0389] U posebnoj tikvici sa okruglim dnom od 1 litra sa dva grla, 2 ekv. N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorid u 300 mL DCM je dodato 3 ekv. trimetilamina i mešano na 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, gore pomenuti hlorid kiseline je dodat posle koncentrisanja pod sniženim pritiskom, tako što je rastvoren u 500 mL DCM, u kapima koristeći levak za dodavanje u toku 15 minuta. Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0390] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (20% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je razblažena sa vodom (300 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0391] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 10% EtOAC/heksan). Proizvedena količina, 21 g; prinos, 66% .
[0392] ATX-0088: korak 2
[0393] U rastvor sa 1.3 ekv. oktil magnezijum bromid u THF (100 ml), mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 20 g N-metoksi-N-metiloktanamida u 100 mL THF i rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0394] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (100 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0395] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 2% etil acetate/heksan). Količinski prinos je bio 17.4 g; 68% .
[0396] ATX-0088: korak 3
[0397] U rastvor sa 17 g heksadekan-7-ona (1 ekv.) rastvorenog u 135 mL MeOH/THF, 1.5 ekv. natrijum borhidrid je dodat na 0°C i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0398] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (50 ml). Metanol je redukovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je podeljeno između EtOAc (200 ml) i vode. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 80 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Proizvedena količina, 14.5 g; prinos, 85% .
[0399] ATX-0088: korak 4
[0400] U rastvor sa 50 g 4-aminobutanske kiseline rastvorene u 350 mL THF, 490 mL vodenog 1N NaOH rastvora je dodato na 0°C, a nakon toga 140 mL Boc anhidrid, koristeći levak. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0401] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (100 ml) i zatim EtOAc (200 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobila gumasta tečnost. Proizvedena količina, 80 g; prinos, 81% .
[0402] ATX-0088: korak 5
[0403] U rastvor sa 1 ekv.4-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoičnom kiselinom rastvorenom u DCM (200 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 3 ekv. EDC.HCl, Et3N (3 ekv.), i DMAP (0.1 ekv.) sekvencijalno sa intervalom od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor alkohol je dodat, tako što je rastvoren u DCM, koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0404] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (100 ml) i organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 50 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom i EtOAc (100 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom, i pređeno je na sledeći korak sa sirovom supstancom. Proizvedena količina, 19 g (sirov).
[0405] ATX-0088: korak 6
[0406] U rastvor sa 19 g heksadekan-7-il 4-((terc-butoksikarbonil) amino) butanoata (1 ekv.) rastvorenog u 140 mL DCM, je dodato 10 ekv. TFA na 0°C i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0407] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.3). Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (100 ml) i EtOAc (100 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0408] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 4% MeOH/CHCl3) i alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 9.4 g; prinos, 50% za dva koraka; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0409] ATX-0088: korak 7
[0410] U rastvor sa 30 g 4-bromo buterne kiseline (1 ekv.) rastvorene u DCM (500 ml), ohlađen do 0°C je dodato 1.5 ekv. EDC.HCl, 3 ekv. Et3N, i 0.1 ekv. DMAP sekvencijalno sa intervalom od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor 0.7 ekv. (Z)-non-2-en-1-ol je dodat, tako što je rastvoren u 100 mL DCM, koristeći levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0411] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (100 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom i EtOAc (150 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0412] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 5% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 27 g; prinos, 51% ; potvrđeno uz pomoć<1>H NMR.
[0413] ATX-0088: korak 8
[0414] U rastvor sa 6 g heksadekan-8-il 4-aminobutanoata (1 ekv.), 1 ekv.5 (Z)-non-2-en-1-il 4-bromobutanoat u ACN (70 ml), 1.2 ekv. kalijum karbonat je dodato i rezultujuća smeša je refluksovana na 90°C u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0415] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0416] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (100 - 200 mrežasti silika gel; 15% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 4.5g; prinos, 44% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0417] ATX-0088: korak 9
[0418] U rastvor sa 4.4 g (Z)-non-2-en-1-il 4-((4-okso-4-(tetradekan-7-iloksi)butil)amino)butanoata (1 ekv.) rastvorenog u 30 mL suvog DCM, je dodato 0.83 mL trimetilamina (3 ekv.) i 418 mg trifozgena (0.5 ekv.) sa 5 minuta intervalom, na 0°C pod atmosferom azota. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi, pod atmosferom azota u toku 1 sata. Rezultujuća reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i držana pod atmosferom azota.
[0419] U 192 mg natrijum hidrida (10 ekv.) rastvorenog u suvom THF (25 ml), u balon sa okruglim dnom od 100 mL sa dva grla, je dodato 564 mg 3-(dietilamino)propan-1-tiola (5 ekv.) na 0°C i održavano je mešanje u toku 5 minuta pod atmosferom azota. U ovaj rezultujući rastvor gore pomenuti karbamoil hlorid, rastvoren u THF (35 ml), je dodat preko šprica polako za oko 10 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata pod atmosferom azota.
[0420] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (60% EtOAC/heksan; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (30 ml) i zatim EtOAc (100 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 50 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrisan i rezultujuće sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni.
[0421] Prvo prečišćavanje je obavljeno koristeći silika gel (60-120 mrežica).5.0 g sirovog jedinjenja je apsorbovano na 9 g silika gela i izliveno na 90 g silika gela uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 35% EtOAc/heksan. Drugo prečišćavanje je obavljeno koristeći neutralnu glinu sa rastvaračima HPLC kvaliteta. Sirovo jedinjenje, 1.5 g, je apsorbovano na 4 g neutralne gline i rezultujuće je izliveno na 40 g neutralne gline uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 10% EtOAc/heksan. Proizvedena količina, 1.2 g; prinos, 21% ; potvrđeno uz pomoć<1>H NMR; HPLC; Mas. sp.
[0422] ATX-0088 / RL-48D:<1>H-NMR (PPM, 500 MHz, CDCl3): į = 5.64 (m, 1), 5.51 (m, 1), 4.87 (m, 1), 4.63 (d, J = 7.0, 2), 3.30-3.44 (4), 2.90 (t, J = 7.0, 2), 2.46-2.55 (6), 2.26-2.37 (4), 2.09 (m, 2), 1.71-1.80 (4), 1.46-1.55 (4), 1.21-1.41 (32), 1.01 (t, J = 7.0, 6), 00.85-0.91 (9).
Primer 10: Sinteza ATX-0083 (Uporedni primer)
[0423] SL.9 prikazuje put sinteze za ATX-0083 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0424] ATX-0083: korak 1
[0425] U tikvici sa okruglim dnom od 500 mL sa jednim grlom, 50 g oktanske kiseline (1 ekv.) rastvorene u DCM (200 ml) je uzeto i zatim je dodato 44.6 mL oksalil hlorida (1.5 ekv.) polako na 0°C, preko dodatnog levka, mešano pod atmosferom azota i zatim je dodato 1 mL DMF (katalitički). Rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata.
[0426] U odvojenoj tikvici sa 2 grla sa okruglim dnom u 67.4 g N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (2 ekv.) u DCM (300 ml), je dodato 144 mL trietilamina (3 ekv.) koristeći dodatni levak, mešano na 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, gore pomenuti hlorid kiseline, posle koncentrisanja pod sniženim pritiskom, je dodat pod atmosferom azota rastvaranjem u DCM (350 ml), u kapima koristeći levak za dodavanje u toku 20 minuta. Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0427] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (20% EtOAc/heksan; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje). Reakciona masa je razblažena sa vodom (300 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa DCM (3 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0428] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 10% EtOAc/heksan. Proizvedena količina, 55.0 g; prinos, 84%
[0429] ATX-0083: korak 2
[0430] U rastvor sa 55 g heptil magnezijum bromida (1 ekv.) u etru, uzeto je u tikvicu sa okruglim dnom od 2 l sa dva grla, mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 89.6 g N-metoksi-N-metiloktanamid rastvora (1.5 ekv.) rastvorenog u 400 mL suvog etra i rezultujući reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0431] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7; PMA ugljenisanje). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (250 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa etrom (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0432] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 2% EtOAc/heksan. Proizvedena količina, 50.0g; prinos, 75% .
[0433] ATX-0083: korak 3
[0434] U rastvor sa 50 g pentadekan-8-ona (1 ekv.) rastvorenog u 290 mL MeOH/THF, 12.5 g natrijum borhidrid (1.5 ekv.) je dodat na 0°C i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 2 sata.
[0435] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (80 ml). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i rezultujuće sirovo jedinjenje je raspodeljeno između EtOAc (250 ml) i vode (100 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 80 ml).
Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4koncentrovan pod sniženim pritiskom i osušen pod vakuumom kako bi se dobila bela čvrsta supstanca. Proizvedena količina, 46.0 g; prinos, 90% .
[0436] ATX-0083: korak 4
[0437] U rastvor sa 50 g 4-aminobutanske kiseline (1 ekv.) rastvorene u THF, 490 mL 1 N vodeni NaOH rastvor (1 ekv.) je dodat na 0°C, a nakon toga 140 mL Boc anhidrid (1.3 ekv.), sekvencijalno koristeći dodatni levak, tokom perioda od 15 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0438] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (350 ml) i zatim EtOAc (300 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 150 ml). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobila gumasta tačnost. Proizvedena količina, 77.0 g; prinos, 78% .
[0439] ATX-0083: korak 5
[0440] Sinteza je obavljena u 4 serije . U svakoj, u rastvor sa 23 g 4-((terc-butoksikarbonil) amino)butanoične kiseline (1 ekv.) u DCM (400 ml), ohlađene do ispod 0°C, je bilo dodato 32.3 g EDC.HCl (1.5 ekv.), 47 mL Et3N (3 ekv.), i 1.3 g DMAP (0.1 ekv.) sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 min. U ovaj rezultujući rastvor 20 g pentadekan-8-ol (0.77 ekv.) je dodat, rastvaranjem u DCM (200 ml), koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0441] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.4). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (250 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ovaj rezultujući sirovi materijal je opran sa zasićenim NaHCO3rastvorom (150 ml) i EtOAc (250 ml) je dodat.
Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom i zatim je nastavljeno na sledeći korak sa sirovim materijalom. Proizvedena količina, 105 g (sirovo; potrebno jedinjenje i alkohol).
[0442] ATX-0083: korak 6
[0443] U rastvor sa 105 g pentadekan-8-il 4-((terc-butoksikarbonil) amino) butanoata (1 ekv.) rastvorenog u 450 mL DCM, je dodato 194 mL TFA (10 ekv.) na 0°C i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0444] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.3).
[0445] Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je mešano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (200 ml) u toku 10 minuta i zatim sa EtOAc (300 ml).
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0446] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (silika gel 60-120 mrežica) koristeći 4% MeOH/CHCl3i 1 mL trietilamina. Proizvedena količina, 60.0 g za dva koraka; prinos, 54% .
[0447] ATX-0083: korak 7
[0448] Reakcija je obavljena u dve serije, u svakoj, u rastvor sa 20 g 6-bromoheksanske kiseline (1 ekv.) rastvorene u DCM (300 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 29.3 g EDC.HCl (1.5 ekv.), 42.8 mL Et3N (3 ekv.), i 1.2 g DMAP (0.1 ekv.) sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalima od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor 14.5 g (Z)-non-2-en-1-ol (1 ekv.) je dodato (tako što je rastvoren u 100 mL DCM) koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0449] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (200 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (150 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (2 x 150 ml). Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0450] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 4% EtOAc/heksan. Alkoholni reaktant je povraćen. Proizvedena količina, 36.0 g; prinos, 55% .
[0451] ATX-0083: korak 8
[0452] Reakcija je obavljena u šest serija. U svakoj, u rastvor sa 10 g pentadekan-8-il 4-aminobutanoata (Int 6, 1 ekv.), 10.1 g (Z)-non-2-en-1-il 6-bromoheksanoata (Int 7, 1 ekv.) u 120 mL ACN, 6.1 g anhidrovani kalijum karbonat (1.4 ekv.) je dodat i rezultujuća smeša je refluksovana na 90°C u toku 4 sata pod atmosferom azota.
[0453] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je filtrirana, isprana sa ACN (2 x 20 ml), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0454] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (silika gel 100-200 mrežica) koristeći 20-80% EtOAc/heksan. Polazni materijali su povraćeni. Proizvedena količina, 36.9 g; prinos, 35% .
[0455] ATX-0083: korak 9
[0456] Reakcija je obavljena u tri serije. U svakoj, u rastvor sa 10 g (Z)-non-2-en-1-il 6-((4-okso-4-(pentadekan-8-iloksi)butil)amino)heksanoata (1 ekv.) rastvorenog u 100 mL suvog DCM, je dodato 7.5 mL trietilamina (3 ekv.) i 2.68 g trifozgena (0.5 ekv.) sa intervalima od 5 minuta na 0°C pod atmosferom azota. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi, pod atmosferom azota u toku 1 sata. Rezultujuća reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i držana pod atmosferom azota.
[0457] U suspenziju sa 3 g natrijum hidrida (7 ekv.) u suvom THF (100 ml), u RB balonu sa 2 grla od 500 mL mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 8.9 g 2-(dimetilamino)etan-1-tiol hidrohlorida (3.5 ekv.) i održavano je mešanje u toku 5 minuta pod atmosferom azota. U ovaj rezultujući rastvor gore pomenuti karbamoil hlorid, rastvoren u suvom THF (200 ml), je dodato preko šprica polako za oko 10 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi preko noći pod atmosferom azota.
[0458] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (100 ml) i zatim EtOAc (350 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 80 ml). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0459] Prvo prečišćavanje je obavljeno koristeći neutralnu glinu. Sirovo jedinjenje, rastvoreno u heksanu, je izliveno na vrh neutralne gline (700 g izliveno u kolonu). Jedinjenje je eluirano na 8-10% EtOAc/heksan. Drugo prečišćavanje je obavljeno koristeći silika gel (100-200 mrežica). Jedinjenje, rastvoreno u heksan, je izliveno na vrh silika gela (500g izliveno u kolonu). Jedinjenje je eluirano na 20-25% EtOAc/heksan. Finalno jedinjenje (rastvoreno u heksan) je podvrgnuto tretmanu sa ugljem (200 mg/g) i filtrirano kroz celitne kuglice (nakon toga je mešano je u toku 20 minuta), i zatim prolazi kroz membranski filter na kraju šprica (PTFE; 0.2 mikrona, 25 mm prečnik). Rezultujući filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Proizvedena količina, 15.5 g; prinos, 41% .
[0460] ATX-0083 / RL-47B:<1>H-NMR (PPM, 500 MHz, CDCl3): į = 5.64 (m, 1), 5.52 (m, 1), 4.87 (m, 1), 4.62 (d, J = 7.0, 2), 3.24-3.42 (4), 3.02 (t, J = 7.0, 2), 2.53 (t, J = 7.0, 2), 2.26-2.34 (4), 2.26 (s, 6), 2.10 (m, 2), 1.45-1.70 (6), 1.20-1.41 (34), 0.84-0.92 (9).
Primer 11: Sinteza ATX-0084
[0461] SL.10 prikazuje put sinteze za ATX-0084 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0462] ATX-0084: korak 1
[0463] U tikvici sa okruglim dnom od 500 mL sa jednim grlom, 30 g heptanske kiseline (1 ekv.) rastvorene u DCM (200 ml) je uzeto i zatim je dodato 26.7 g oksalil hlorida (1.5 ekv.) polako na 0°C, mešano pod atmosferom azota i zatim je dodato 1 mL DMF (katalitički). Rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata.
[0464] U posebnoj tikvici sa okruglim dnom od 1 l sa dva grla, u 40.5 g N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (2 ekv.), u DCM (250 ml), je dodato 86.6 mL trimetilamina (3 ekv.) koristeći dodatni levak, mešano na 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, gore pomenuti hlorid kiseline, posle koncentrisanja pod sniženim pritiskom, je dodat pod atmosferom azota rastvaranjem u DCM (100 ml), u kapima koristeći levak za dodavanje u toku 20 minuta. Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0465] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (20% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je razblažena sa vodom (250 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa DCM (3 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0466] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60-120 silika gel) koristeći 10% EtOAc/heksan. Proizvedena količina, 38.0 g; prinos, 84% .
[0467] ATX-0084: korak 2
[0468] U rastvor sa 8 g heksil magnezijum bromida (1 ekv.) u 250 mL suvog etra, uzeto u tikvici sa okruglim dnom od 1 litar sa dva grla, mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 2.3 g N-metoksi-N-metilheptanamid (0.5 ekv.) rastvoren u 250 mL etra i rezultujuća reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0469] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (200 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa etrom (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0470] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 2% EtOAc/heksan. Proizvedena količina, 30.8g; prinos, 71% .
[0471] ATX-0084: korak 3
[0472] U rastvor sa 30 g tridekan-7-ona (1 ekv.) rastvorenog u 200 mL MeOH/THF, 8.5 g natrijum borhidrida (0.5 ekv.) je dodato na 0°C i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 2 sata.
[0473] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (80 ml). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i rezultujuće sirovo jedinjenje je raspodeljeno između EtOAc (200 ml) i vode (100 ml). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 70 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom kako bi se dobila bela čvrsta supstanca. Proizvedena količina, 27.2 g; prinos, 90% .
[0474] ATX-0084: korak 4
[0475] U rastvor sa 5 g 6-aminoheksanske kiseline (1 ekv.), rastvorene u 120 mL THF, 125 mL sa 1N vodenim NaOH rastvorom je dodato na 0°C, a nakon toga 34 mL Boc anhidrida (1.3 ekv.), sekvencijalno koristeći dodatni levak, tokom perioda od 15 min. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0476] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (100 ml) i zatim EtOAc (150 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobila gumasta tačnost. Proizvedena količina, 22.4 g; prinos, 85% .
[0477] ATX-0084: korak 5
[0478] U rastvor sa 10 g 6-((terc-butoksikarbonil)amino)heksanske kiselina (1 ekv.) rastvorene u DCM (200 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 10.7 g EDC.HCl (1.3 ekv.), 18 mL Et3N (3 ekv.), i 525 mg DMAP (0.1 ekv.) sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor 6 g tridekan-7-ola (Int 3, 0.7 ekv.) je dodato na istoj temperaturi, rastvaranjem u DCM (50 ml), koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0479] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.4). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (150 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 75 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (100 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (2 x 100 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom, i pređeno je na sledeći korak sa sirovom supstancom. Proizvedena količina, 8.5 g (sirovo; potrebno jedinjenje i alkohol).
[0480] ATX-0084: korak 6
[0481] U rastvor sa 10 g tridekan-7-il 6-((terc-butoksikarbonil)amino)heksanoata (1 ekv.) rastvorenog u 65 mL DCM, je dodato 18.5 mL TFA (10 ekv.) na 0°C i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0482] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.3). Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (100 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (3 x 100 ml). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0483] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 4% MeOH/CHCl3i 1 mL trietilamin), i alkohol kao polazni materijal je povraćen. Količina, 4.5 g u dva koraka; prinos, 33% .
[0484] ATX-0084: korak 7
[0485] U rastvor sa 20 g 6-bromoheksanske kiseline (1 ekv.) rastvorene u DCM (300 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 29.3 g EDC.HCl (1.5 ekv.), 42.8 mL Et3N (3 ekv.), i 1.2 g DMAP (0.1 ekv.) sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 minuta. U ovaj rezultujući rastvor 14.5 g (Z)-non-2-en-1-ola (1 ekv.) je dodato, rastvoren u 100 mL DCM, koristeći dodatni levak, i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0486] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7). Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (200 ml) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je isprano sa zasićenim NaHCO3rastvorom (150 ml) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (2 x 150 ml). Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0487] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 4% EtOAc/heksan. Alkohol kao polazni materijal je povraćen. Proizvedena količina, 18.0 g; prinos, 55% .
[0488] ATX-0084: korak 8
[0489] U rastvor sa 4.5 g tridekan-7-il 6-aminoheksanoata (Int 6, 1 ekv.) i 4.5 g (Z)-non-2-en-1-il 6-bromoheksanoata (Int 7, 1 ekv.) u 90 mL ACN, 2.7 g kalijum karbonata (1.4 ekv.) je dodato i rezultujuća smeša je refluksovana na 90°C u toku 4 sata pod atmosferom azota.
[0490] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5). Reakciona masa je filtrirana, isprana sa ACN (2 x 20 ml), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0491] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (100 - 200 mrežasti silika gel) koristeći 20% EtOAc/heksan. Polazni materijali su povraćeni. Proizvedena količina, 3.0 g; prinos, 37% .
[0492] ATX-0084: korak 9
[0493] U rastvor sa 2.5 g (Z)-non-2-en-1-il 6-((6-okso-6-(tridekan-7-iloksi) heksil) amino) heksanoata (1 ekv.) rastvorenog u 30 mL suvog DCM, je dodato 1.8 mL trietilamina (3 ekv.) i 672 mg trifozgena (0.5 ekv.) sa intervalom od 5 minuta na 0°C pod atmosferom azota. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota u toku 1 sata. Rezultujuća reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i držana pod atmosferom azota.
[0494] U suspenziju sa 761 mg natrijum hidrida u suvom THF (50 ml), u tikvici sa okruglim dnom sa 2 grla od 250 mL mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 2.2 g 2-(dimetilamino)etan-1-tiol hidrohlorid (3.5 ekv.) i održavano je mešanje u toku 5 minuta pod atmosferom azota. U rezultujući rastvor gore pomenuti karbamoil hlorid, rastvoren u THF (60 ml), je dodato preko šprica polako za oko 10 minuta. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi preko noći pod atmosferom azota.
[0495] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje). Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (60 ml) i zatim EtOAc (130 ml) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 40 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrisan i rezultujuće sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni.
[0496] Prvo prečišćavanje je obavljeno koristeći silika gel (100-200 mrežica). 4.6 g sirovog jedinjenja je apsorbovano na 10.0 g silika gela i izliveno na 90.0 g silika gela uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 50% EtOAc/heksan. Drugo prečišćavanje je obavljeno koristeći neutralnu glinu sa rastvaračima HPLC kvaliteta.2.0 g sirovog jedinjenja je apsorbovano na 6.0 g neutralne gline i rezultujuće je izliveno na 40.0 g neutralne gline uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 20% EtOAc/heksan. Proizvedena količina, 1.2 g; prinos, 38 % (300 mg mixture).
[0497] ATX-0084 / RL-47C:<1>H-NMR (PPM, 500 MHz, CDCl3): į = 5.64 (m, 1), 5.52 (m, 1), 4.86 (m, 1), 4.62 (d, J = 7.0, 2), 3.22-3.35 (4), 3.01 (t, J = 7.0, 2), 2.53 (t, J = 7.0, 2), 2.25-2.34 (4), 2.27 (s, 6), 2.10 (m, 2), 1.45-1-73 (10), 1.20-1.40 (30), 00.84-0.91 (9).
Primer 12: Sinteza ATX-0061 (Uporedni primer)
[0498] SL.11 prikazuje put sinteze za ATX-0061 koja je dalje opisana na sledeći način
[0499] ATX-0061: korak 1
[0500] 12 g glicin estar (1 ekv.) je rastvoreno u THF (100 ml) i ohlađeno do ispod 0°C. U ovaj rastvor, 24.2 mL trietilamina (1.5 ekv.) i 38.11 g Boc anhidrida (1.5 ekv.) kroz jedan dodatni levak su dodati sekvencijalno.
[0501] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC koristeći 50% EtOAc/heksan; Rf: 0.4.
[0502] Reakciona masa je kvenčovana sa vodom i EtOAc (100 ml) je dodat, nakon 16 sati. Organski sloj je odvojen, vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 40 ml) i kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum-sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom.
[0503] Sirov proizvod je podvrgnut 60-120 silika gela (25% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 20.8; prinos, 88% .
[0504] ATX-0061: korak 2
[0505] U rastvor sa 18.9 g N-Boc glicin estra (1 ekv.) rastvorenog u THF (130 ml) je dodat vodeni rastvor od 5.85 g LiOH (1.5ekv.) i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0506] Reakcija je bila praćena uz pomoć TLC (60% EtOAc/heksan; Rf: 0.3), SM je odsutan.
[0507] Reakciona masa je koncentrisana i sirova masa je kvenčovana sa 5% HCl (pH 3) i zatim ekstrahovana sa EtOAc (4 x 80 ml), osušena preko natrijum-sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje. Proizvedena količina, 15g; prinos, 92% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0508] ATX-0061: korak 3
[0509] U rastvor sa 5 g N-Boc-glicin estra (Int 1, 1 ekv.) rastvorenog u DCM (30 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 4.5 mL Et3N (1.2 ekv.) i 6.44 g EDC.HCl (1.2 ekv.). U ovaj reakcioni rastvor 5.12 g heptaden-9-ola (0.7 ekv.) u 20 mL DCM je dodato i mešano je na sobnoj temperaturi preko noći.
[0510] Uočeno je da nema početnog materijala uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.6).
Reakciona masa je bila razblažena sa zasićenim NaHCO3rastvorom, organski sloj je odvojen, vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 30 ml) i osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Nastavljeno je na sledeći korak sa sirovim jedinjenjem (6.8 g; smeša proizvoda i alkohola).
[0511] ATX-0061: korak 4
[0512] 4 g heptadekan-9-il (terc-butoksikarbonil)glicinata (Int 2, 1 ekv.) je rastvoreno u DCM (40 ml) i ohlađeno do 0°C, dodat je 7.4 mL TFA (10 ekv.) i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0513] Završetak reakcije je proveren za 2 sata uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.5).
[0514] Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom, rezidualna masa je isprana sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (30 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 ml), organski sloj osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo Int 3.
[0515] Sirov proizvod je podvrgnut hromatografiji na koloni (silica, 60-120) koristeći 1-3% MeOH/CHCl3i 2 mL Et3N. Proizvedena količina, 1 g; potvrđeno uz pomoć<1>H-NMR i Mas. sp.
[0516] ATX-0061: korak 5
[0517] U rastvor sa 4 g brom sirćetne kiseline (1 ekv.) rastvorene u DCM (35 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 4.7 mL Et3N (1.2 ekv.) i 354 mg DMAP (0.1 ekv.), a nakon toga 13.23 g HATU (1.2 ekv.). U ovaj reakcioni rastvor 2.88 g (Z)-non-2-en-1-ol (0.7 ekv.) u 20 mL DCM je dodato i mešan je na sobnoj temperaturi preko noći.
[0518] Reakcija je praćena uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.7).
[0519] Reakciona masa je bila razblažena sa zasićenim NaHCO3rastvorom (80 ml), organski sloj je odvojen, vodeni sloj je ispran sa DCM (40 ml), osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezidualna masa je prečišćena uz pomoć silika gel (60-120) hromatografije na koloni (1.5% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 4 g; prinos, 52% .
[0520] ATX-0061: korak 6
[0521] 1 g heptadekan-9-il glicinat (Int 3, 1 ekv.) je rastvoren u THF (25 ml), dodat je 0.5 mL TEA (1.3 ekv.) i 1.08 g (Z)-non-2-en-1-il 2-bromoacetat derivat (Int 4, 1.3 ekv.), i mešan je na sobnoj temperaturi preko noći.
[0522] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.4). Reakciona smeša je razblažena sa vodom (30 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (20 mL x 2), kombinovani organski sloj je osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0523] Rezidualna masa je prečišćena uz pomoć kolonske (silika gel; 100-200) hromatografije (2% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 700mg; prinos, 47% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0524] ATX-0061: korak 7
[0525] U rastvor sa 700 mg heptadekan-9-il (Z)-(2-(non-2-en-1-iloksi)-2-oksoetil)glicinat) (1 ekv.) rastvoren u 15 mL DCM, ohlađen do ispod 5°C je dodato 0.4 mL Et3N (3 ekv.), a nakon toga 209 mg trifozgena (0.5 ekv.) porcionisan u toku 10 minuta.
[0526] Napredovanje reakcione smeše je praćeno uz pomoć TLC, reakcija je završena za 0,5 sati, reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom.
[0527] U rastvor sa 423 mg N, N-dimetil etantiol hidrohlorida (3 ekv.) u suvom THF (10 ml) i DMF (3 ml), mešano na 0°C pod atmosferom azota je dodato 144 mg natrijum hidrida (6 ekv.). Nakon 10 minuta, u ovu reakcionu masu je dodat gore pomenuti rastvor, tako što je rastvoren u THF (15 ml). Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0528] Završetak reakcije je zapažen uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.5), nakon 1 sata.
[0529] Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (20 ml), vodom (20 ml) i EtOAc (30 ml) je dodat. Vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 20 ml), i kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom (20 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0530] Sirov materijal je podvrgnut hromatografiji na koloni koristeći silika gel (100-200) sa 15% EtOAC/heksan, i zatim sa neutralnom glinom sa15% EtOAc/heksan, da bi se dobilo čisto jedinjenje. Proizvedena količina, 520 mg; prinos, 58% ; potvrđeno uz pomoć<1>H-NMR, HPLC i Mas. sp.
[0531] ATX-0061 / RL-42D:<1>H-NMR (PPM, 400MHz, CDCl3): į = 5.67 (m, 1), 5.51 (m, 1), 4.92 (m, 1), 4.70 (m, 2), 4.16-4.27 (4), 3.07 (m, 2), 2.53 (m, 2), 2.27 (s, 6), 2.10 (m, 2), 1-47-1.57 (4), 1.19-1.40 (32), 0.83-0.92 (9).
Primer 13: Sinteza ATX-0063 (Uporedni primer)
[0532] SL.12 prikazuje put sinteze za ATX-0063 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0533] ATX-0063: korak 1
[0534] 12 g glicin estra (1 ekv.) je rastvoreno u THF (100 mL) i ohlađeno do ispod 0°C. U ovaj rastvor, 24.2 mL trietilamin (1.5 ekv.) i 38.11 g Boc anhidrid (1.5 ekv.) kroz jedan dodatni levak su dodati sekvencijalno.
[0535] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC koristeći 50% EtOAc/heksan; Rf: 0.4.
[0536] Reakciona masa je kvenčovana sa vodom i EtOAc (100 ml) je dodat, nakon 16 sati. Organski sloj je odvojen, vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 40 ml) i kombinovani organski slojevi su osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom.
[0537] Sirov proizvod je podvrgnut 60-120 silika gelu (25% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 20.8; prinos, 88% .
[0538] ATX-0063: korak 2
[0539] U rastvor sa 18.9 g N-Boc glicin estra (1 ekv.) rastvorenog u THF (130 ml) je dodat vodeni rastvor od 5.85 g LiOH (1.5 ekv.) i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0540] Reakcija je bila praćena uz pomoć TLC (60% EtOAc/heksan; Rf: 0.3), polazni materijal je izostao iz produkta reakcije.
[0541] Reakciona masa je koncentrisana i sirova masa je kvenčovana sa 5% HCl (pH 3) i zatim ekstrahovana sa EtOAc (4 x 80 ml), osušena preko natrijum-sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje. Proizvedena količina, 15 g; prinos, 92% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0542] ATX-0063: korak 3
[0543] U rastvor sa 5 g N-Boc-glicin estrom (Int 1, 1 ekv.), rastvorenim u DCM (50 ml), ohlađen do ispod 0°C je dodato 4.5 mL Et3N (1.2 ekv.) i 6.4 g EDC.HCl (1.2 ekv.). U ovaj reakcioni rastvor 3.4 g undekan-6-ola (0.7 ekv.) u 20 mL DCM je dodato i mešan je na sobnoj temperaturi preko noći.
[0544] Uočeno je da nema početnog materijala uz pomoć TLC (15% EtOAc/heksan; Rf: 0.6).
Reakciona masa je bila razblažena sa zasićenim NaHCO3rastvorom (20 ml), organski sloj je odvojen, vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 40 mL) i osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Nastavljeno je na sledeći korak sa sirovim jedinjenjem (5.5 g; smeša proizvoda i alkohola), nakon filtracije na koloni.
[0545] ATX-0063: korak 4
[0546] 3.3 g sirov undekan-6-il (terc-butoksikarbonil)glicinat (Int 2, 1 ekv.) je rastvoreno u DCM (20 ml) i ohlađeno do 0°C, dodat je 7.6 mL TFA (10 ekv.) i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0547] Završetak reakcije je proveren za 2 sata uz pomoć TLC (10% MeOH/DCM; Rf: 0.5).
Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom, rezidualna masa je isprana sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 25 ml), organski sloj osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo Int 3.
[0548] Sirov proizvod je podvrgnut hromatografiji na koloni (silica, 60-120) koristeći 1-3% MeOH/CHCl3i 2 mL Et3N. Proizvedena količina, 1.2 g; prinos, 40% ; potvrđeno uz pomoć<1>H-NMR i Mas. sp.
[0549] ATX-0063: korak 5
[0550] U rastvor sa 4 g brom sirćetne kiseline (1 ekv.) rastvorene u DCM (35 mL), ohlađen do ispod 0°C je dodato 4.7 mL Et3N (1.2 ekv.) a nakon toga 13.23 g HATU (1.2 ekv.) i 354 mg DMAP (0.1 ekv.). U ovaj reakcioni rastvor 2.88 g (Z)-non-2-en-1-ol (0.7 ekv.) u 20 mL DCM je dodato i mešan je na sobnoj temperaturi preko noći.
[0551] Reakcija je praćena uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.7).
[0552] Reakciona masa je bila razblažena sa zasićenim NaHCO3rastvorom (80 ml), organski sloj je odvojen, vodeni sloj je ispran sa DCM (40 ml), osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezidualna masa je prečišćena uz pomoć silika gel (60-120) hromatografije na koloni (1.5% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 4 g; prinos, 52% .
[0553] ATX-0063: korak 6
[0554] 1.2 g undekan-6-il glicinat (Int 3, 1 ekv.) je rastvoren u 25 mL THF, dodat je 0.9 mL TEA (1.3 ekv.) i 1.37 g (Z)-non-2-en-1-il 2-bromoacetata (Int 4, 1 ekv.), i mešan je na sobnoj temperaturi preko noći.
[0555] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona smeša je razblažena sa vodom (30 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (20 mL x 2), kombinovani organski sloj je bio osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0556] Rezidualna masa je prečišćena uz pomoć kolonske (silika gel; 100-200) hromatografije (3% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 800 mg; prinos, 37% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0557] ATX-0063: korak 7
[0558] U rastvor sa 800 mg (Z)-non-2-en-1-il (2-okso-2-(undekan-6-iloksi)etil)glicinata (1 ekv.) rastvorenog u DCM, ohlađenog do ispod 5°C je dodato 0.4 mL Et3N (3 ekv.), a nakon toga 209 mg trifozgena (0.5 ekv.) porcionisano u toku 10 minuta.
[0559] Napredovanje reakcione smeše je praćeno uz pomoć TLC, reakcija je bila završena u toku 1 sata, reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom.
[0560] U rastvor sa 423 mg N, N-dimetil etantiol hidrohlorida (3 ekv.) u suvom THF i DMF (10 mL i 5 ml, redom), mešano na 0°C pod atmosferom azota je dodato 144 mg natrijum hidrida (6 ekv.). Nakon 10 minuta, u ovu reakcionu masu je dodat gore pomenuti rastvor, tako što je rastvoren u THF. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0561] Završetak reakcije je zapažen uz pomoć TLC (70% EtOAc/heksan; Rf: 0.4), nakon 1 sata. Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (25 ml), vodom (20 ml) i EtOAc (20 ml) je dodat. Vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 20 ml), i kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom (20 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0562] Sirov proizvod je podvrgnut hromatografiji na koloni koristeći silika gel (100-200) sa 20% EtOAc/heksan, i zatim sa neutralnom glinom sa 5% EtOAc/heksan, da bi se dobilo čisto jedinjenje. Proizvedena količina, 510 mg; prinos, 48% ; potvrđeno uz pomoć<1>H-NMR, HPLC i Mas. sp.
[0563] ATX-0063 / RL-42A:<1>H-NMR (PPM, 400MHz, CDCl3): į = 5.67 (m, 1), 5.52 (m, 1), 4.92 (m, 1), 4.70 (m, 2), 4.15-4.27 (4), 3.06 (m, 2), 2.53 (m, 2), 2.27 (s, 6), 2.09 (m, 2), 1.47-1.57 (4), 1.20-1.41 (20), 0.82-0.92 (9).
Primer 14: Sinteza ATX-0064 (Uporedni primer)
[0564] SL.13 prikazuje put sinteze za ATX-0064 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0565] ATX-0064: korak 1
[0566] 12 g etil glicinata (1 ekv.) je rastvoreno u THF (100 ml) i ohlađeno do ispod 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, 24.2 mL trietilamin (1.5 ekv.) i 38.11 g Boc anhidrid (1.5 ekv.) kroz jedan dodatni levak su dodati sekvencijalno.
[0567] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC koristeći 50% EtOAc/heksan; Rf: 0.4.
[0568] Reakciona masa je kvenčovana sa vodom i EtOAc (100 m) je dodat, nakon 16 sati. Organski sloj je odvojen, vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 40 ml) i kombinovani organski slojevi su osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom.
[0569] Sirov proizvod je podvrgnut 60-120 silika gela (25% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 20.8; prinos, 88% .
[0570] ATX-0064: korak 2
[0571] U rastvor sa 18.9 g N-Boc glicin estra (1 ekv.) rastvorenog u THF (130 ml) je dodat vodeni rastvor od 5.85 g LiOH (1.5 ekv.) i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 4 sata.
[0572] Reakcija je bila praćena uz pomoć TLC (60% EtOAc/heksan; Rf: 0.3), polazni materijal je bio odsutan iz produkta reakcije.
[0573] Reakciona masa je koncentrisana i sirova masa je kvenčovana sa 5% HCl (pH 3) i zatim ekstrahovana sa EtOAc (4 x 80 ml), osušena preko natrijum-sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje. Proizvedena količina, 15 g; prinos, 92% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0574] ATX-0064: korak 3
[0575] U rastvor sa 5 g N-Boc-glicin estra (Int 1, 1 ekv.), rastvorenog u DCM (50 mL), ohlađen do ispod 0°C je dodato 4.5 mL Et3N (1.2 ekv.) i 6.4 g EDC.HCl (1.2 ekv.). U ovaj reakcioni rastvor 4.84 g heksadekan-10-ol (0.7 ekv.) u 15 mL DCM je dodato i mešan je na sobnoj temperaturi preko noći.
[0576] Uočeno je da nema početnog materijala uz pomoć TLC (15% EtOAc/heksan; Rf: 0.6).
Reakciona masa je bila razblažena sa zasićenim NaHCO3rastvorom, organski sloj je odvojen, vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 30 ml) i osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0577] Nastavljeno je na sledeći korak sa sirovim jedinjenjem (5.5 g; smeša proizvoda i alkohola) nakon filtracije na koloni.
[0578] ATX-0064: korak 4
[0579] 3.85 g sirovog heptadekan-9-il (terc-butoksikarbonil)glicinata (Int 2, 1 ekv.) je rastvoreno u 30 mL DCM i ohlađeno do 0°C, dodat je 7.4 mL TFA (10 ekv.), i mešan je na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0580] Završetak reakcije je proveren za 2 sata uz pomoć TLC (10% MeOH/DCM; Rf: 0.5).
[0581] Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom, rezidualna masa je isprana sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (30 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 ml), organski sloj osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo Int 3.
[0582] Sirov proizvod je podvrgnut hromatografiji na koloni (silica, 60-120) koristeći 1-3% MeOH/CHCl3i 2 mL Et3N. Proizvedena količina, 2.2 g; potvrđeno uz pomoć<1>H-NMR i Mas. sp.
[0583] ATX-0064: korak 5
[0584] U rastvor sa 4 g brom sirćetne kiseline (1 ekv.) rastvorene u DCM (35 mL), ohlađen do ispod 0°C je dodato 4.7 mL Et3N (1.2 ekv.) a nakon toga 13.23 g HATU (1.2 ekv.) i 354 mg DMAP (0.1 ekv.). U ovaj reakcioni rastvor 2.88 g (Z)-non-2-en-1-ol (0.7 ekv.) u 20 mL DCM je dodato i mešan je na sobnoj temperaturi preko noći.
[0585] Reakcija je praćena uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.7).
[0586] Reakciona masa je bila razblažena sa zasićenim NaHCO3rastvorom (80 ml), organski sloj je odvojen, vodeni sloj je ispran sa DCM (40 ml), osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0587] Rezidualna masa je prečišćena uz pomoć silika gel (60-120) hromatografije na koloni (1.5% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 4 g; prinos, 52% .
[0588] ATX-0064: korak 6
[0589] 2.1 g heksadekan-8-il glicinat1 (Int 3, 1 ekv.) je rastvoreno u 50 mL THF, dodat je 1.2 mL TEA (1.3 ekv.) i 2.39 g (Z)-non-2-en-1-il 2-bromoacetata (Int 4, 1.3 ekv.), i mešan je na sobnoj temperaturi preko noći.
[0590] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/heksan; Rf: 0.5). Reakciona smeša je razblažena sa vodom (30 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 30 ml), kombinovani organski sloj je osušen preko natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0591] Rezidualna masa je prečišćena uz pomoć kolonske (silika gel; 100-200) hromatografije (3% EtOAc/heksan). Proizvedena količina, 2.2 g; prinos, 65% ; potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0592] ATX-0064: korak 7
[0593] U rastvor sa 2.2 g heptadekan-9-il (Z)-(2-(non-2-en-1-iloksi)-2-oksoetil) glicinata (1 ekv.) rastvorenog u 15 mL DCM, ohlađen do ispod 5°C je dodato 1.6 mL Et3N (3 ekv.), a nakon toga 678 mg trifozgena (0.5 ekv.) porcionisan u toku 10 minuta.
[0594] Napredovanje reakcione smeše je praćeno uz pomoć TLC, reakcija je bila završena u toku 1 sata, reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom.
[0595] U rastvor sa 3.94 g N, N-dimetil etantiol hidrohlorida (7 ekv.) u suvom THF i DMF (35 mL i 15 ml, redom), mešano na 0°C pod atmosferom azota je dodato 672 mg natrijum hidrida (7 ekv.). Nakon 10 minuta, u ovu reakcionu masu je dodato gore pomenuti rastvor, tako što je rastvoren u THF. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sata.
[0596] Završetak reakcije je zapažen uz pomoć TLC (70% EtOAc/heksan; Rf: 0.4), nakon 1 sata. Reakciona masa je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl rastvorom (25 ml), vodom (20 ml) i EtOAc (20 ml) je dodat. Vodeni sloj je ispran sa EtOAc (20 mL x 2), i kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom (20 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0597] Sirov proizvod je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći silika gel (100-200) sa 25% EtOAc/heksan, i zatim sa neutralnom glinom sa 15-20% EtOAc/heksan, da bi se dobilo čisto jedinjenje. Proizvedena količina, 1.0 mg; prinos, 40% ; potvrđeno uz pomoć<1>H-NMR, HPLC i Mas. sp.
[0598] ATX-0064 / RL-42C:<1>H-NMR (PPM, 400MHz, CDCl3): į = 5.67 (m, 1), 5.50 (m, 1), 4.92 (m, 1), 4.70 (t, J = 7.0, 2), 3.06 (, m, 2), 2.53 (m, 2), 2.27 (s, 6), 1.47-1.57 (4), 1.17-1.40 (30), 0.82-0.93 (9).
Primer 15: Sinteza ATX-0081
[0599] SL.14 prikazuje put sinteze za ATX-0081 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0600] ATX-0081: korak 1
[0601] U rastvor sa heptil magnezijum bromidom u 370 mL suvog THF (in situ generisan) (1.5 ekv.), ohlađen do -15°C pod atmosferom azota, je dodat etilformat rastvoren u 80 mL THF (0.5 ekv.) u kapima putem dodatnog levka preko 20 min, i rezultujuća reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana je preko noći.
[0602] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.5).
[0603] Reakciona masa je kvenčovana sa zasić. NHaCl rastvorom (500 mL). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0604] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni sa silika gelom (60-120 mrežica) koristeći 20% EtOAc/Heks. Proizvedena količina, 169.0 g; prinos 60% .
[0605] ATX-0081: korak 2
[0606] U rastvor sa 100 g 4-aminobutanske kiseline (1 ekv.) u THF, je dodato 1N. vod. NaOH rastvora (1.065 lit) (1.1 ekv.) u ledenom kupatilu, a nakon toga 1.3 ekv. Boc anhidrida, sekvencijalno koristeći levak za dodavanje tokom perioda od 15 min. Rezultujući rastvor je ostavljen da se zagreje do ST i mešan je u toku 4 sata.
[0607] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.5).
[0608] Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (1 Lit) i zatim EtOAc (300 mL) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 200 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom kako bi se dobila gumasta tačnost.
[0609] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni sa silika gelom (60-120 mrežica) koristeći 80-100% EtOAc/Heks. Proizvedena količina, 161.0 g; prinos, 82% .
[0610] ATX-0081: korak 3
[0611] U rastvor sa 3 x 17.8 g 4-((terc-butoksikarbonil) amino) butanoičnom kiselinom u DCM (350 mL) (1 ekv.), ohlađen u ledenom kupatilu je dodato 2 x 25.1 g EDC.HCl (1.5 eq), Et3N (2.0 ekv.), i 3 x 1.0 g DMAP (0.1 ekv.) sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 min. U ovaj rezultujući rastvor 3 x 20.0 g alkohola (1.0 ekv.) je dodato (u 150 mL DCM) u kapima preko dodatnog levka, na istoj temperaturi, i rezultujuća reakciona masa je ostavljen da se zagreje do ST i mešan je u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0612] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u Heks; Rf: 0.5).
[0613] Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (450 mL) i organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je mešano sa zasić. NaHCO3rastvorom (300 mL), u toku 5 min, i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 150 mL). Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom, i pređeno je na sledeći korak sa sirovom supstancom. Proizvedena količina, 69.0 g (sirovo; potrebno jedinjenje i alkohol);
[0614] ATX-0081: korak 4
[0615] U rastvor sa 69.0 g pentadekan-8-il 4-((terc-butoksikarbonil) amino) butanoata (1 ekv.) rastvorenog u DCM, je dodato TFA (10 ekv.) u ledenom kupatilu i rezultujući reakcioni rastvor je ostavljen da se zagreje do ST i mešan je u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0616] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.3). Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je oprano sa zasić. NaHCO3rastvorom (450 mL) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (3 x 150 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0617] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 4% MeOH/CHCl3i 1 mL trietilamina), i alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 47.0 g; prinos, 57 % za dva koraka
[0618] ATX-0081: korak 5
[0619] U rastvor sa 50.0 g 4-brom buterne kiseline u DCM (450 mL) (1.0 ekv.), uzetu u tikvicu sa okruglim dnom od 2 l, ohlađen do ispod 0°C je dodato 86.0 g EDC.HCl (1.5 ekv.), 83.3 mL Et3N (2.0 ekv.), i 3.6 g DMAP (0.1 ekv.) sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 min. . U ovaj rezultujući rastvor 42.5 g alkohola (1.0 ekv.) je dodato (tako što je rastvoren u 200 mL DCM) koristeći dodatni levak i dobijeni rastvor je zagrejan do sobne temperature i mešan je u toku 24h pod atmosferom azota.
[0620] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u Heks; Rf: 0.7).
[0621] Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (250 mL) i organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 150 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je oprano sa zasić. NaHCO3rastvorom (150 mL) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (2 x150 mL). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0622] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni sa silika gelom (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 5% EtOAc/Heks. Proizvedena količina, 55.0 g; prinos, 63 %
[0623] ATX-0081: korak 6
[0624] U rastvor sa 2 x 20.0 g pentadekan-8-il 4-aminobutanoata (1 ekv.), 2 x 18.5 g (Z)-non-2-en-1-il 4-bromobutanoata (1 ekv.) u 180 mL sa ACN, 2 x 17.6 g kalijum karbonata (2 ekv.) je dodato i rezultujuća smeša je refluksovana na 70<0>C u toku 5h pod atmosferom azota.
[0625] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.4). Reakciona masa je filtrirana, isprana sa ACN (2 x 20 mL), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0626] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (100 - 200 mrežasti silika gel) koristeći 30% EtOAc/Heks. SMs (Amin) je povraćen. Proizvedena količina, 24.0 g; prinos, 36% .
[0627] ATX-0081: korak 7
[0628] U rastvor sa 24.0 g (Z)-non-2-en-1-il 4-((4-okso-4-(pentadekan-8-iloksi)butil)amino)butanoata (1 ekv.), rastvorenog u 250 mL suvog DCM , 13.5 g trifozgena (1 ekv.) je dodato i reakciona smeša je ohlađena do 0°C, i 18.4 mL piridina (5 ekv.) je dodato u kapima tokom perioda od 10 min. Reakciona smeša je mešana na 20°C u toku 4 h.
[0629] DCM je uklonjen pod sniženim pritiskom i smeša je uzeta sa piridinom (300 mL). Nakon toga je ohlađen do 0°C, 32.3 g dimetilaminoetantiol hidrohlorid soli (5 ekv.) je dodato u porcijama i rezultujući rastvor je mešan preko noći na 20°C pod atmosferom azota.
[0630] Reakciona masa, nakon TLC provere, je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva. U ovaj ostatk je dodato 250 mL EA i 200 mL (10% ) limunske kiseline. Organska faza je odvojena i zatim organski sloj je ispran ponovo sa 10% limunske kiseline (100 mL) jednom i ponovo sa 10% slanog rastvora (200 mL) jednom. Rezultujuća organski sloj je osušen preko anhid. Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo sirov product.
[0631] Prvo prečišćavanje je obavljeno na silika gelu (100-200 mreža; 500 g). U gradijentnom eluiranju, jedinjenje je eluirano na 70% EtOAc/Heks. Nakon koncentrovanja, jedinjenje (22.0 g) se pojavljuje u crvenkastoj boji. Drugo prečišćavanje je obavljeno koristeći neutralnu glinu (400 g) sa rastvaračima HPLC kvaliteta. Jedinjenje je eluirano na 15% EtOAc/Heks i čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 19.0 g žute tečnosti.
[0632] Proizvod (14.0 g) je bila razblažen sa 200 mL EtOH (HPLC čistoće), zatim je dodat aktivni ugalj (50% W/W) 7.0 g u rastvor i nastavljeno je mešanje na sobnoj temperaturi preko noći.
Rezultujući rastvor je filtriran kroz jastučLć od celita i filtrat je bio koncentrovan. Na kraju, jedinjenje je rastvoreno u 120 mL 50% EtOAc/Heks i filtrirano (da bi se uklonile čestice glinice i silicijum dioksida) kroz jastučLć od pamuka i koncentrovano pod sniženim pritiskom. Finalno jedinjenje (11.5 g) se pojavljuje u svetlo žutoj boji.
[0633] Druga serija (5.0 g) je bila razblažena sa 80 mL EtOH (HPLC čistoće), zatim je dodat aktivni ugalj (50% W/W) 2.5 g u rastvor i nastavljeno je mešanje na sobnoj temperaturi preko noći.
Rezultujući rastvor je filtriran kroz jastučLć od celita i filtrat je bio koncentrovan. Na kraju, jedinjenje je rastvoreno u 60 mL 50% EtOAc/Heks i filtrirano (da bi se uklonile čestice glinice i silicijum dioksida) kroz jastučLć od pamuka i koncentrovano pod sniženim pritiskom. Finalno jedinjenje (4.0 g) se pojavljuje u crvenkasto žutoj boji. Proizvedena količina, 15.5 g; prinos, 51% .
[0634] ATX-0081:<1>H-NMR (PPM, 400MHz, CDCl3): į =5.62 (m, 1), 5.51 (m, 1), 4.86 (m, 1), 4.62 (d, J = 6.0Hz, 2), 3.37 (brs, 4), 3.01 (t, J = 7.1Hz, 2), 2.51 (t, J = 7.1Hz, 2), 2.31 (m, 4), 2.26 (s, 6), 2.07 (m, 2), 1.89 (brs, 4), 1.42-1.57 (4), 1.16-1.40 (28), 0.82-0.91 (9)
Primer 15: Sinteza ATX-0085
[0635] SL.15 prikazuje put sinteze za ATX-0085 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0636] ATX-0085: korak 1
[0637] U RB boci sa jednim grlom od 500 mL 30.0 g heptanske kiseline (1 ekv.) rastvorene u DCM (200 mL) je uzeto i zatim je dodato 26.7 mL oksalil hlorida (1.5 ekv.) polako na 0°C, mešano pod atmosferom azota i zatim je dodato 1 mL DMF (katalitički). Rezultujuća reakciona smeša je mešana na ST u toku 2h.
[0638] U posebnoj RB tikvici od 1 l sa dva grla, u 40.5 g N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (2 ekv.) u DCM (250 mL), je dodato 86.6 mL trimetilamina (3 ekv.) koristeći dodatni levak, mešano na 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, gore pomenuti hlorid kiseline, posle koncentrisanja pod sniženim pritiskom, je dodat pod atmosferom azota tako što je rastvoren u DCM (100 mL), u kapima koristeći levak za dodavanje u toku 20min. Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na ST u toku 3h pod atmosferom azota.
[0639] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (20% EtOAc/Heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je razblažena sa vodom (250 mL).
[0640] Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa DCM (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom.
[0641] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60-120 silika gel) koristeći 10% EtOAc/Heks. Proizvedena količina, 38.0 g; prinos, 84% .
[0642] ATX-0085: korak 2
[0643] U rastvor sa 62.3 g heksilmagnezijum bromida (1.5 ekv.) u etru, uzeto u RB tikvici od 1 l sa dva grla, mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 38.0 g N-metoksi-N-metilheptanamida (1 ekv.) rastvorenog u 250 mL etra i rezultujuća reakciona smeša je mešana na ST u toku 4 h.
[0644] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.7).
[0645] Reakciona masa je kvenčovana sa zasić. NHaCl rastvorom (200 mL). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa etrom (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom.
[0646] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 2% EtOAc/Heks. Proizvedena količina, 30.8g; prinos, 71% .
[0647] ATX-0085: korak 3
[0648] U rastvor sa 30.0 g tridekan-7-ona (1 ekv.), rastvorenog u 200 MeOH/THF (10:1, v:v), 8.5 g natrijum borhidrida (1.5 ekv.) je dodato na 0°C i rezultujući rastvor je mešan na ST u toku 2 h.
[0649] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/Heksan; Rf: 0.5).
[0650] Reakciona masa je kvenčovana sa zasić. NHaCl rastvorom (80 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i rezultujuće sirovo jedinjenje je raspodeljeno između EtOAc (200 mL) i vode (100 mL). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 70 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom kako bi se dobila bela čvrsta supstanca. Proizvedena količina, 27.2 g; prinos, 90% .
[0651] ATX-0085: korak 4
[0652] U rastvor sa 50.0 g 4-aminobutanske kiseline (1 ekv.) rastvorene u THF/vod. NaOH rastvor (490 mL) je dodat na 0°C, a nakon toga 140 mL Boc anhidrida (1.3 ekv.), sekvencijalno koristeći dodatni levak, tokom perioda od 15 min. Rezultujući rastvor je mešan na ST u toku 4 sata.
[0653] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.5).
[0654] Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (250 mL) i zatim EtOAc (300 mL) je dodat.
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 150 mL). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobila gumasta tačnost. Proizvedena količina, 80.0 g; prinos, 81% . Potvrđeno uz pomoć 1H NMR.
Napomena: Pošto je Boc-kiselina (Int 4) imala neku nečistoću (20-30% ) što je primećeno u 1H NMR, to se odrazilo u koraku 5 i koraku 6 prinosom
[0655] ATX-0085: korak 5
[0656] U rastvor sa 10.0 g 4-((terc-butoksikarbonil) amino) butanoičnom kiselinom (1 ekv.) rastvorenom u DCM (200 mL), ohlađen do ispod 0°C je dodato 12.2 g EDC.HCl (1.3 ekv.), 20.4 mL Et3N (3 ekv.), i 601 mg DMAP (0.1 ekv.) sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 min.. U ovaj rezultujući rastvor alkohol je dodat na istoj temperaturi, rastvaranjem u DCM (150mL), koristeći dodatni levak, i mešano na ST u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0657] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u Heks; Rf: 0.5).
[0658] Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (150 mL) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 75 mL). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je oprano sa zasić. NaHCO3rastvorom (100mL) i zatim EtOAc (200 mL) je dodat. Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom, i pređeno je na sledeći korak sa sirovom supstancom. Proizvedena količina, 8.0 g (sirovo; potrebno jedinjenje i alkohol).
[0659] ATX-0085: korak 6
[0660] U rastvor sa 8.0 g tridekan-7-il 4-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoata (1 ekv.) rastvorenog u 65 mL DCM, je dodato 15.7 mL TFA (10 ekv.) na 0°C i mešano na ST u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0661] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH u CHCl3; Rf: 0.3).
[0662] Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je oprano sa zasić. NaHCO3rastvorom (100 mL) i zatim ekstrahovano sa EtOAc (3 x 100 mL). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel; 4% MeOH/CHCl3i 1 mL trietilamina), i alkohol je povraćen. Proizvedena količina, 3.5 g; prinos, 25% za dva koraka. Potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0663] ATX-0085: korak 7
[0664] U 20.0 g heksanske kiseline (1 ekv.) rastvorene u DCM (150 mL) je dodato polako 22.1 mL oksalil hlorida (1.5 ekv.) na 0<0>C, mešano pod atmosferom azota i zatim je dodat 1 mL DMF (katalitički). Rezultujuća reakciona smeša je mešana na ST u toku 2 sata.
[0665] U posebnoj posudi, u 33.5 g N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (2 ekv.) u DCM (250 mL), je dodato 71.7 mL trimetilamina (3 ekv.) koristeći jedan dodatni levak, mešano na 0°C. U ovaj rezultujući rastvor, gore pomenuti hlorid kiseline, posle koncentrisanja pod sniženim pritiskom, je dodat pod atmosferom azota rastvaranjem u DCM (100 mL), u kapima koristeći levak za dodavanje u toku 20 min. Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na ST u toku 3 sata pod atmosferom azota.
[0666] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (20% EtOAc/Heksan; Rf: 0.5). Reakciona masa je razblažena sa vodom (250 mL). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 mL). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0667] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60-120 silika gel) koristeći 10% EtOAc/Heks. Proizvedena količina, 21.0 g; prinos, 76% .
[0668] ATX-0085: korak 8
[0669] U rastvor sa 33.0 g pentilmagnezijum bromida (1.5 ekv.) u etru na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 20.0 g N-metoksi-N-metilheksanamida (1 ekv.) rastvorenog u 220 mL etra i rezultujuća reakciona smeša je mešana na ST u toku 4 sata.
[0670] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u heksanu; Rf: 0.6).
[0671] Reakciona masa je kvenčovana sa zasić. NHaCl rastvorom (200 mL). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa etrom (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 2% EtOAc/Heks.
Proizvedena količina, 15.4g; prinos, 72% .
[0672] ATX-0085: korak 9
[0673] U rastvor sa 15.0 g undekan-6-ona (1 ekv.) rastvorenog u 100 mL MeOH/ 15 mL THF, 4.9 g natrijum borhidrid (1.5 ekv.) je dodat na 0°C i rezultujući rastvor je mešan na ST u toku 2 h.
[0674] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc/Heksan; Rf: 0.5).
[0675] Reakciona masa je kvenčovana sa zasić. NHaCl rastvorom (80 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i rezultujuće sirovo jedinjenje je raspodeljeno između EtOAc (200 mL) i vode (100 mL). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 70 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom kako bi se dobila bela čvrsta supstanca. Proizvedena količina, 13.9 g; bela čvrsta supstanca; prinos, 92%
[0676] ATX-0085: korak 10
[0677] U rastvor sa 10.0 g 5-bromopentanske kiseline (1 ekv.), rastvorene u DCM (300 mL), ohlađen do ispod 0°C je dodato 13.7 g EDC.HCl (1.3 ekv.), 23.0 mL Et3N (3 ekv.), i 674 mg DMAP sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 min. U ovaj rezultujući rastvor 9.5 g alkohol (1 ekv.) je dodat na istoj temperaturi, rastvaranjem u DCM (150 mL), koristeći dodatni levak, i mešano na ST u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0678] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u Heks; Rf: 0.7).
[0679] Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (200 mL) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 100 mL). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je oprano sa zasić. NaHCO3rastvorom (100 mL) i zatim EtOAc (3 x 100 mL) je dodat. Organski slojevi su odvojeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom, i pređeno je na sledeći korak sa sirovom supstancom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni koristeći (60 - 120 mrežasti silika gel) koristeći 5% EtOAc/Hex, i SM (alkohol) je povraćen. Proizvedena količina, 11.6 g; prinos, 62% .
[0680] ATX-0085: korak 11
[0681] U rastvor sa 4.5 g tridekan-7-il 4-aminobutanoata (1 ekv.), 5.2 g undekan-6-il 5-bromopentanoata (1 ekv.) u ACN, 3.0 g kalijum karbonata (1.4 ekv.) je dodato i rezultujuća smeša je refluksovana na 90°C u toku 4 sata pod atmosferom azota.
[0682] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.45).
[0683] Reakciona masa je filtrirana, isprana sa ACN (2 x 20 mL), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni (100 - 200 mrežasti silika gel) koristeći 20% EtOAc/Heks. SMs (amin i bromo jedinjenje) su povraćena. Proizvedena količina, 2.2 grama čistog jedinjenja; prinos, 25% ; i 1.1 gram smeše. Potvrđeno uz pomoć Mas. sp.
[0684] ATX-0085: korak 12
[0685] U rastvor sa 2.2 g of undekan-6-il 5-((4-okso-4-(tridekan-7-iloksi)butil)amino)pentanoata (1 ekv.) rastvorenog u suvom DCM, je dodato 1.6 mL trimetilamina (3 ekv.) i 604 mg trifozgena (0.5 ekv.) sa intervalom od 5 min na 0°C pod atmosferom azota. Rezultujući rastvor je mešan na ST, pod atmosferom azota u toku 1 h. Rezultujuća reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i držana pod atmosferom azota.
[0686] U suspenziju sa 684 mg natrijum hidrida (7 ekv.) u suvom THF (30 mL), u boci mešano na 0°C pod atmosferom azota, je dodato 2.0 g 2-(dimetilamino)etan-1-tiol hidrohlorida (3.5 ekv.) i držana na mešanju u toku 5 min pod atmosferom azota. U ovaj rezultujući rastvor gore pomenuti karbamoil hlorid, rastvoren u THF (50 mL), je dodat preko šprica polako za oko 10 min. Rezultujući rastvor je mešan na ST preko noći pod atmosferom azota.
[0687] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje).
[0688] Reakciona masa je kvenčovana sa zasić. NHaCl (40 mL) i zatim EtOAc (100 mL) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 40 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani i rezultujuće sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni. Prvo prečišćavanje je obavljeno koristeći silika gel (100-200 mrežica). 5.0 g sirovog jedinjenja je apsorbovano na 9.0 g silika gela i izliveno na 70 g silika gela uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 50% EtOAc/Heks. Drugo prečišćavanje je obavljeno koristeći neutralnu glinu sa rastvaračima HPLC kvaliteta. 2.0 g sirovo jedinjenje je apsorbovano na 7.0 g neutralne gline i rezultujuće je izliveno na 40 g neutralne gline uzeto je u kolonu. Jedinjenje je eluirano na 25% EtOAc/Heks.
Količina: 1.4 g; prinos: 51% . Potvrđeno uz pomoć<1>H NMR.
[0689] ATX-0085<1>H-NMR (PPM, 400MHz, CDCl3): į = 4.87 (m, 2), 3.36 (brs, 4), 3.02 (t, J = 7.1Hz, 2), 2.52 (t, J = 7.1Hz, 2), 2.31 (m, 4), 2.27 (s, 6), 1.88 (brs, 2), 1.56-1.66 (4), 1.46-1.54 (8), 1.21-1.34 (30), 0.89 (m, 12).
Primer 15: Sinteza ATX-0134
[0690] SL.16 prikazuje put sinteze za ATX-0134 koja je dalje opisana na sledeći način.
[0691] ATX-0134: korak 1
[0692] U RB tikvici sa jednim grlom od 1 L, u mešani rastvor sa 50.0 g metil 2-bromoacetata (1 ekv.) u 400 mL DMF, je dodato 90.3 g kalijum karbonata (2 ekv.) a nakon toga 17.5 g benzil amina (0.5 ekv.), na temperaturi ledenog kupatila pod atmosferom azota, i rezultujuća reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do ST i nastavljeno je mešanje u toku 36 h.
[0693] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (20% EtOAc/Heksan; Rf: 0.4; ninhidrin ugljenisanje).
[0694] Reakciona masa je bila razblažena sa ledenom vodom (1 L) i zatim EtOAc (250 mL) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski sloj je ponovo ispran sa ledenom vodom (500 mL) i rezultujući organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom.
[0695] Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni sa silika gelom (60-120 mrežica) koristeći 15-20% EtOAc/Heks. Proizvedena količina, 35.0 g; prinos, 85% .
[0696] ATX-0134: korak 2
[0697] 10.5 g 10% Pd/C je dodato u reakciju u bocu za hidrogenaciju od 500 mL, koja sadrži 35.0 g dimetil 2,2'-(benzilazanediil)diacetata u EtOAc, i reakciona masa je podvrgnuta hidrogenaciji koristeći Parr šejker (60 psi) sve dok polazni materijal nije nestao (2 h).
[0698] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (5% MeOH/CHCl3; Rf: 0.5; ninhidrin ugljenisanje).
[0699] Reakciona masa je filtrirana kroz jastučLć od celita i isprana je sa EtOAc (2 x 60 mL).
Kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Proizvedena količina, 30.0 g (sirov).
[0700] ATX-0134: korak 3
[0701] U rastvor sa 30.0 g dimetil 2,2'-azanediildiacetata (1.0 ekv.) u THF, je dodato 38.7 mL trietilamina (1.5 ekv.) a nakon toga 55.5 mL Boc anhidrida (1.3 ekv.), pod temperaturom ledenog kupatila, sekvencijalno koristeći jedan dodatni levak. Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na ST preko noći pod atmosferom azota.
[0702] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (40% EtOAc/Heksan; Rf: 0.5).
[0703] Reakciona masa je razblažena sa vodom (250 mL) i zatim EtOAc (150 mL) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4 i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni sa silika gelom (60-120 mrežica) koristeći 15% - 20% EtOAc/Heks.
Proizvedena količina, 35.0 g; prinos, 96% .
[0704] ATX-0134: korak 4
[0705] U rastvor sa 35.0 g dimetil 2,2'-((terc-butoksikarbonil)azanediil)diacetata (1.0 ekv.) u THF mešan pod temperaturom ledenog kupatila, je dodat vod. rastvor sa 16.8 g litijum hidroksida (75 mL od 5.3 M) (3 ekv.). Rezultujući reakcioni rastvor je mešan na ST u toku 5 sati pod atmosferom azota.
[0706] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.2).
[0707] Reakciona masa je kvenčovana sa 5% HCl (400 mL) i zatim EtOAc (200 mL) je dodat.
Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni sa silika gelom (60-120 mrežica) koristeći 100% EtOAc.
Proizvedena količina, 29.0 g; prinos, 93% .
[0708] ATX-0134: korak 5
[0709] 1 2,2'-((terc-butoksikarbonil)azanediil)diacetatna kiselina 233.22 0.051 1.0
[0710] 2 Alkohol 228.42 0.102 2.0
[0711] 3 EDC.HCl 191.70 0.154 3.0
[0712] 4 Trietilamin 101 0.154 3.0
[0713] 5 DMAP 122.170.002 0.1
[0714] 6 DCM 400 mL
[0715] U rastvor sa 12.0 g 4,4'-((terc-butoksikarbonil) azanediil) dibutanoičnom kiselinom (1 ekv.) u 250 mL DCM, ohlađen do između 0°C do 50°C (ledeno kupatilo), je dodato 29.5 g EDC.HCl (3 ekv.), 21.4 mL Et3N (3 ekv.), i 628 mg DMAP (0.1 ekv.) sekvencijalno pod atmosferom azota sa intervalom od 10 min. U ovaj rezultujući rastvor 23.5 g alkohola (u 150 mL DCM) (2 ekv.) je dodato na istoj temperaturi preko dodatnog levka i rezultujuća reakciona masa je ostavljena da se zagreje do ST i mešana je u toku 24 sata pod atmosferom azota.
[0716] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% EtOAc u Heks; Rf: 0.6; PMA ugljenisanje).
[0717] Reakciona masa je kvenčovana sa vodom (100 mL) i zatim organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ispran sa DCM (2 x 80 mL). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Rezultujuće sirovo jedinjenje je mešano sa zasić. NaHCO3rastvorom (100 mL) u toku 5 min, da bi se uklonila neizreagovana kiselina, i zatim EtOAc (2 x 80 mL) je dodat. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni sa silika gelom (60-120 mrežica) koristeći 2-3% EtOAc/Heks. Proizvedena količina, 15.0 g; prinos, 44% .
[0718] ATX-0134: korak 6
[0719] U rastvor sa 15.0 g di(pentadekan-8-il) 2,2'-((terc-butoksikarbonil)azanediil)diacetata (1 ekv.) u 120 mL DCM, je dodato 17.7 mL TFA (10 ekv.), između 0°C do 50°C (ledeno kupatilo), i reakciona masa je ostavljena da se zagreje do ST i mešana je u toku 4 sata pod atmosferom azota.
[0720] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% ETOAc/Heks; Rf: 0.5).
[0721] Reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i rezultujuće sirovo jedinjenje je mešano sa zasić. NaHCO3rastvorom (100 mL) u toku 5 min (da bi se uklonili tragovi TFA) i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni sa silika gelom (60-120 mrežica) i jedinjenje je eluirano sa 10% EtOAc/Heks. Proizvedena količina, 10.4 g; prinos, 82% .
[0722] ATX-0134: korak 7
[0723] U rastvor sa 1.5 g di(pentadekan-8-il) 2,2'-azanediildiacetata (1 ekv.) u 20 mL suvog DCM, je dodato 1.1 mL trimetilamina (3 ekv.) i 401 mg trifozgena (0.5 ekv.) sa intervalom od 5 min pod temperaturom ledenog kupatila i atmosferom azota. Rezultujući rastvor je zatim ostavljen da se zagreje na ST i mešan je u toku 1h pod atmosferom azota. Nakon iscrpljenja početnog materijala (provereno uz pomoć TLC), rezultujuća reakciona masa je koncentrovana pod sniženim pritiskom i držana pod atmosferom azota. 1.1 g 3-(dietilamino)propan-1-tiola (3 ekv.), rastvorenog u 10 mL THF, je dodato u suspenziju sa 129 mg natrijum hidrida (2 ekv.) u suvom THF (10 mL), ohlađena do između 0°C do 50°C pod atmosferom azota, i mešanje je nastavljeno u toku 5 min. U ovaj rezultujući rastvor gore pomenuti karbamoil hlorid, rastvoren u THF (30 mL), je dodat na istoj temperaturi preko levka za dodavanje za oko 5 min. Rezultujući rastvor je zagrejan na ST i nastavljeno je mešanje preko noći pod atmosferom azota.
[0724] Napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć TLC (10% MeOH/CHCl3; Rf: 0.5; PMA ugljenisanje).
[0725] Reakciona masa je kvenčovana sa zasić. NH4Cl (30 mL) i zatim EtOAc (50 mL) je dodat. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ispran sa EtOAc (2 x 40 mL). Kombinovani organski sloj je koncentrisan i rezultujuće sirovo jedinjenje je podvrgnuto hromatografiji na koloni. Prvo prečišćavanje je obavljeno koristeći neutralnu glinu (100 g). U gradijentnom eluiranju, jedinjenje je eluirano na 20% EtOAc/Heks. Drugo prečišćavanje je obavljeno koristeći silika gel (100-200 mreža; 80 g) sa rastvaračima HPLC kvaliteta. Jedinjenje je eluirano na 50% EtOAc/Heks. Količina: 680 mg; prinos: 34% .
[0726] ATX-0134<1>H-NMR (PPM, 400MHz, CDCl3): į = 4.91 (m, 2), 4.21 (s, 2), 4.16 (s, 2), 2.95 (t, J = 7.1Hz, 2), 2.54 (m, 6), 1.79 (m, 2), 1.46-1.52 (8), 1.17-1.36 (40), 1.03 (t, J = 7.8Hz, 6), 0.87 (t, J = 7.1Hz, 12).
Primer 15: Sinteza ATX-0044 i ATX-0091 do ATX-0133.
[0727] ATX-0044, ATX-0085, ATX-0111, ATX-0132, ATX-0100, ATX-0117, ATX-0114, ATX-0115, ATX-0101, ATX-0106, ATX-0116, ATX-0122, ATX-0123, ATX-0124, ATX-0126, ATX-0129, i ATX-0133 su sintetizovani koristeći metode date za prethodne primere.
Primer 16: pKa vrednosti
[0728] pKa katjonskih lipida u LNP ili micelarnim formulacijama je merena postupkom Jayaramana, 2012, Angew. Chem. Int. Ed., 51:8529-33. Lipidne micelije ili LNP se razblažuju do 1 mM ukupnih lipida u univerzalnom puferu sa pH rasponom između 3 i 12 u prisustvu 0.06 mg/ mL 6-(p-toluidino)-2-naftalensulfonatne kiseline natrijumove soli (TNS) reagensa (Sigma Aldrich), sa pH osetljivim fluorescentnim sondama. Anjonska TNS molekula fluorescira kada je povezana sa površinom pozitivno naelektrisanih membrana, ali nije fluorescentna kada je slobodna u rastvoru, što omogućava merenje pKa. TNS signal se meri na spektralnom pločnom čitaču. TNS signal se crta kao funkcija pH i analizira se koristeći nelinearnu (Boltzman) metodu da bi se odredila pKa.
[0729] Reagensi korišćeni u testu uključuju
o Hepes slobodan od kiselina, CAS: 7365-45-9 (VWR, 0511-1KG ili ekvivalent)
o MES, HPLC čistoće: (Sigma 105228-100G ili ekvivalent)
o Amonijum acetat, HPLC čistoće: (Sigma 90335-100 mL ili ekvivalent)
o Natrijum hlorid, HPLC čistoće (VWR EM-MX0475-1 ili ekvivalent)
o TNS (Sigma-Aldrich T9792-250mg ili ekvivalent)
o Hlorovodonična kiselina
o DMSO
o DPBS bez kalcijuma i magnezijuma (GE, SH30028.O2 ili ekvivalent)
o H2O, HPLC čistoće (OmniSolv, WX0004-1 ili ekvivalent)
[0730] Da bi se pripremio osnovni rastvor univerzalnog pufera (UB) u polistirenskoj sterilnoj boci za skladištenje, priprema se 1 L koristeći sledeću tabelu.
Reagensi se sterilno filtriraju kroz filter od 0.2 µm. Priprema UB rastvora uključuje dodavanje 5 mL 1 M HCl u 350 mL matičnog rastvora.
[0731] Za pripremu pH opsega koriste se centrifugalne epruvete (50 mL) sa 20 mL UB pufera (pH ~3) i različitim količinama 2 N NaOH. Matični rastvori TNS-a na 1 mg/ mL u DMSO.60 µL TNS-a na 1 mg/ mL se dodaje u 940 µL vode da bi se dobila radna koncentracija rastvora od 0.06 mg/mL. Pet test uzoraka, 1 mL LNP uzorka u PBS-u na 1 mM ukupnih lipida, i 1 referentni uzorak se analiziraju po ploči. Uzorci na različitim pH vrednostima se pripremaju u bunarčLćima u koje se dodaje 25 µL 0.06 mg/ mL TNS-a. Po bunaru se dodaje 15 µL test uzoraka. Mikroploča se inkubira tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi u mraku. TNS šablon se može koristiti za formatiranje podataka iz čitača ploča. Izvršiti nelinearnu (Boltzman) regresijsku analizu uzoraka u Origin Pro 8 ili ekvivalentnom softveru.
[0732] Rezultati su prikazani u Tabeli 1. Generalno, povećanje lipofilnosti preko estera blizu jonizovane glave grupe snižava mereni pKa, dok čini izračunati pKa baznijim. Dodavanje lipofilnosti u alkoholu dok se skraćuje dužina lanca estera može imati veliki uticaj na mereni pKa. Na primer, skraćivanje estera na butanoatu nema uticaja kada se lipofilnost alkohola poveća do razgranatog alkil grupe (vidi: ATX-0057 i ATX-0058 u odnosu na ATX-0002). Veliki uticaj se vidi kada se skraćuje ester do acetata, npr. ATX-0061 / ATX-0064 (ǻ = -0.90) i ATX-0063 (ǻ = -0.7) za 1-razgranati / 1-Z-2-nonenol estar; i ATX-0062/ATX-0065 (ǻ = -3.20) za acetat / bis-razgranati estar sa ǻ cLogP 4.0 u odnosu na ATX-0002.
[0733] Bez pristajanja na obavezu teorijskim objašnjenjem, rezultati pokazuju značaj povećane lipofilnosti (merene cLogP vrednostima) u kombinaciji sa skraćivanjem lanca u snižavanju merenog pKa u poređenju sa predviđenim, i u povećanju bioaktivnosti lipidnih nanočestica.
Primer 17: in vivo EPO mRNA stabilnost
[0734] Nivoi mRNK u plazmi su mereni i upoređivani nakon injekcije nanočestica koje sadrže različite katjonske lipide. Ženski miševi Balb/c (starosti 6-8 nedelja) su korišćeni za evaluaciju nivoa eritropoetina (epo) u plazmi in vivo nakon injekcije mišjeg epo mRNK inkapsuliranog lipidima. Sve formulacije su administrirane intravenski preko injekcije u repnu venu u dozi od 0.03 i 0.1 mg/kg sa doziranjem volumena od 5 ml/kg. Krajnje uzorkovanje krvi je obavljeno putem kardijalne punkcije pod 2% izofluranom 6 sati nakon injekcija formulacija. Krv je prikupljena u epruvetu sa 0.109 M citratnim puferom i obrađena centrifugiranjem na 5000 obrtaja u minuti tokom 10 minuta. Serum je prikupljen i nivoi epo mRNK su analizirani. Rezultati su prikazani na SL.17. Rezultati pokazuju značajno poboljšanje u odnosu na ATX-0002 za ATX-0057, ATX-0081, ATX-0082, ATX-0083, ATX-0084, ATX-0085, ATX-0086 i ATX-0087.
Primer 18: In vivo utišavanje mišjeg Faktora VII i EPO ekspresija
[0735] Koristeći skrining usmeren na jetru in vivo biblioteka lipozoma, testirana je serijjedinjenje koja olakšavaju visoke nivoe siRNK posredovanog utišavanja gena u hepatocitima, ćelijama koje čine parenhim jetre. Faktor VII, faktor zgrušavanja krvi, je pogodan ciljni gen za ispitivanje funkcionalne isporuke siRNK u jetru. Budući da se ovaj faktor proizvodi specifično u hepatocitima, utišavanje gena ukazuje na uspešnu isporuku parenhimu, za razliku od isporuke ćelijama retikulo-endotelijalnog sistema (npr. Kupferove ćelije). Štaviše, Faktor VII je protein koji se luči i koji se može lako meriti u serumu, eliminišući potrebu za eutanazijom životinja. Utišavanje na nivou iRNK može se lako odrediti merenjem nivoa proteina. To je zato što protein ima kratko poluvreme (2-5 sati). Kompozicije sa siRNK usmerenom na Faktor VIII su formulisane sa lipidom, i uporednim uzorkom fosfatnopuferskog rastvora (PBS). Ženski miševi C57BL/6 (starosti 6-8 nedelja) su korišćeni za eksperimente smanjenja siRNK FVII (KD).
[0736] Sve formulacije su administrirane intravenski preko injekcije u repnu venu u dozi od 0.03 i 0.1 mg/kg sa doziranjem volumena od 5 mg/kg. Krajnje uzimanje krvi je obavljeno putem kardijalne punkcije pod 2% izofluranom 48 sati nakon injekcija formulacija. Krv je prikupljena u epruvetu sa 0.109 M citratnim puferom i obrađena centrifugiranjem na 1200 G u toku 10 min. Plazma je prikupljena i nivoi proteina Faktora VII su analizirani hromogenim testom (Biophen FVII, Aniara Corporation). Standardna kriva je konstruisana koristeći uzorke iz miševa injektovanih PBS-om i relativno eksprimiranje Faktora VII je određeno poređenjem tretiranih grupa sa netretiranom PBS kontrolom. Rezultati su pokazali da su ATX-0057 i ATX-0058 znatno efikasniji od ATX-002 i na dozama od 0.03 i 0.1 mg/kg (SL. 18).
[0737] Tabela 1 prikazuje rezultirajuće smanjenje iz lipidnih nanočestica koje sadrže lipide opisane ovde.
[0738] Ekspresija EPO nakon isporuke iRNK koristeći lipidne nanočestice koje sadrže opisane lipide je merena.
[0739] Ženski miševi Balb/c (starosti 6-8 nedelja) su korišćeni za evaluaciju eksprimiranje proteina EPO in vivo nakon isporuke mišje epo iRNK inkapsulirane lipidima. Sve formulacije su administrirane intravenski preko injekcije u repnu venu u dozi od 0.03 i 0.1mg/kg sa doziranjem volumena od 5mL/kg. Krajnje uzimanje krvi je obavljeno putem kardijalne punkcije pod 2% izofluranom 6 sati nakon injekcija formulacija. Krv je prikupljena u epruvetu sa 0.109 M citratnim puferom i obrađena centrifugiranjem na 5000 obrtaja u minuti u toku 10 minuta. Serum je prikupljen i nivoi proteina EPO su analizirani ELISA testom za EPO (R&D systems). Standardna kriva je konstruisana koristeći uzorke iz miševa injektovanih PBS-om i relativno eksprimiranje Faktora VII je određeno poređenjem tretiranih grupa sa netretiranom PBS kontrolom. Rezultati su pokazali da je iRNK EPO eksprimirana u znatno većim količinama u nanočesticama ATX-0057 nego ATX-002 na 0.1 mg/ mL (SL.19).

Claims (12)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule I
  2. u kojoj R1je razgranat, neciklični alkil ili alkenil sa 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, ili 22 ugljenika; L1je linearni alkilen sa 1 do 15 ugljenika; R2je razgranat, neciklični alkil ili alkenil sa 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, ili 22 ugljenika; L2je linearni alkilen sa 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ili 15 ugljenika; X je O ili S; R3je linearni alkilen sa 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 ugljenika; i R4i R5su isti ili različiti, svaki linearni ili razgranati, neciklični alkil sa 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 ugljenika; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, gde jedinjenje je
  3. 3. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu R1ima 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 16, ili 17 ugljenika.
  4. 4. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu R1obuhvata dve identične alkil ili alkenil grupe.
  5. 5. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu L2ima 4, 5, 6, ili 7 ugljenika.
  6. 6. Jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od
  7. 7. Jedinjenje prema zahtevu 6, gde jedinjenje je
  8. 8. Jedinjenje prema zahtevu 6, gde jedinjenje je
  9. 9. Jedinjenje prema zahtevu 6, gde jedinjenje je
  10. 10. Lipidna kompozicija koja obuhvata jedinjenje prema bilo kom od zahteva od 1 do 9 i nukleinsku kiselinu.
  11. 11. Lipidna kompozicija prema zahtevu 10, pri čemu lipidna kompozicija je lipidna nanočestica koja inkapsulira nukleinsku kiselinu.
  12. 12. Lipidna kompozicija prema zahtevu 10, pri čemu nukleinska kiselina je iRNK.
RS20240048A 2016-12-21 2017-12-20 Jonizujući katjonski lipid za dostavu rnk RS65078B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US15/387,067 US10383952B2 (en) 2016-12-21 2016-12-21 Ionizable cationic lipid for RNA delivery
PCT/US2017/015886 WO2018118102A1 (en) 2016-12-21 2017-01-31 Ionizable cationic lipid for rna delivery
EP17826404.0A EP3558943B1 (en) 2016-12-21 2017-12-20 Ionizable cationic lipid for rna delivery
PCT/US2017/067756 WO2018119163A1 (en) 2016-12-21 2017-12-20 Ionizable cationic lipid for rna delivery

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS65078B1 true RS65078B1 (sr) 2024-02-29

Family

ID=58191571

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20240048A RS65078B1 (sr) 2016-12-21 2017-12-20 Jonizujući katjonski lipid za dostavu rnk

Country Status (18)

Country Link
US (3) US10383952B2 (sr)
EP (4) EP3558942B1 (sr)
JP (7) JP6905062B2 (sr)
KR (3) KR20190134593A (sr)
CN (3) CN110337429B (sr)
AU (3) AU2017379587B2 (sr)
CA (2) CA3047033A1 (sr)
DK (1) DK3558943T3 (sr)
ES (1) ES2969232T3 (sr)
FI (1) FI3558943T3 (sr)
HR (1) HRP20231742T1 (sr)
HU (1) HUE065439T2 (sr)
IL (4) IL267317B2 (sr)
PL (1) PL3558943T3 (sr)
PT (1) PT3558943T (sr)
RS (1) RS65078B1 (sr)
SI (1) SI3558943T1 (sr)
WO (1) WO2018118102A1 (sr)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2014348212C1 (en) * 2013-11-18 2018-11-29 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US11028388B2 (en) 2014-03-05 2021-06-08 Editas Medicine, Inc. CRISPR/Cas-related methods and compositions for treating Usher syndrome and retinitis pigmentosa
EP3540061A1 (en) 2014-04-02 2019-09-18 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating primary open angle glaucoma
US10383952B2 (en) 2016-12-21 2019-08-20 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US10526284B2 (en) 2016-12-21 2020-01-07 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US11433143B2 (en) * 2017-05-18 2022-09-06 The Regents Of The University Of California Nano-enabled immunotherapy in cancer
BR112019025224A2 (pt) 2017-05-31 2020-12-08 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Terapêutica para doença de armazenamento de glicogênio tipo iii
EP3630200A4 (en) 2017-05-31 2021-02-24 Arcturus Therapeutics, Inc. THERAPEUTICS FOR PHENYLKETONURIA
HRP20240586T1 (hr) 2018-10-09 2024-07-19 The University Of British Columbia Sastavi i sustavi koji sadrže transfekcijske sposobne vezikle bez organskih otapala i deterdženta i s njim povezanim postupcima
AU2019394996B2 (en) 2018-12-06 2025-11-06 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating ornithine transcarbamylase deficiency
SG11202110036RA (en) 2019-03-19 2021-10-28 Arcturus Therapeutics Inc Method of making lipid-encapsulated rna nanoparticles
WO2020255062A1 (en) 2019-06-20 2020-12-24 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Lipid nanoparticle or liposome delivery of hepatitis b virus (hbv) vaccines
JP7672394B2 (ja) 2019-09-03 2025-05-07 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッド 治療的に活性な複合体のアシアロ糖タンパク質受容体媒介送達
WO2021067598A1 (en) 2019-10-04 2021-04-08 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Methods for improved therapeutic use of recombinant aav
KR102433471B1 (ko) * 2019-10-17 2022-08-18 한국과학기술원 지질이 접합된 유전자편집 단백질 기반 crispr 복합체 및 이의 제조방법
US12351834B2 (en) 2020-03-03 2025-07-08 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
AU2021236068A1 (en) * 2020-03-09 2022-10-06 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and methods for inducing immune responses
IL299571A (en) 2020-07-08 2023-02-01 Janssen Sciences Ireland Unlimited Co Rna replicon vaccines against hbv
BR112023000568A2 (pt) * 2020-07-17 2023-01-31 Sanofi Pasteur Compostos lipídicos cliváveis, composições contendo os mesmos, e usos dos mesmos
EP4196128A4 (en) 2020-08-14 2024-06-12 Arcturus Therapeutics, Inc. METHOD FOR FREEZE DILIZATION OF LIPID NANOPARTICLES
EP4228658A4 (en) 2020-10-14 2025-02-19 George Mason Research Foundation, Inc. IONIZABLE LIPIDS AND METHODS FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
TW202245809A (zh) 2020-12-18 2022-12-01 美商詹森藥物公司 用於治療b型肝炎病毒感染之組合療法
WO2022146654A1 (en) 2020-12-28 2022-07-07 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Transcription activator-like effector nucleases (talens) targeting hbv
CA3207753A1 (en) * 2021-02-10 2022-08-18 Jessica DETERLING Compounds, compositions, and methods of using thereof
KR20240008872A (ko) * 2021-05-06 2024-01-19 아크투루스 쎄라퓨틱스, 인크. Rna 전달을 위한 이온화 가능한 양이온성 지질
CN113633766B (zh) * 2021-08-11 2023-06-30 通用生物(安徽)股份有限公司 一种脂质体核酸疫苗佐剂及其制备方法
US20240398940A1 (en) 2021-09-03 2024-12-05 CureVac SE Novel lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
AR127312A1 (es) 2021-10-08 2024-01-10 Suzhou Abogen Biosciences Co Ltd Compuestos lipídicos ycomposiciones de nanopartículas lipídicas
EP4422698A1 (en) 2021-10-29 2024-09-04 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
IL313876A (en) * 2021-12-27 2024-08-01 Univ Texas Compositions and methods for targeted delivery to cells
US20250099614A1 (en) 2022-01-28 2025-03-27 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
CN116354836A (zh) * 2022-03-25 2023-06-30 深圳市新合生物医疗科技有限公司 阳离子脂质化合物及其制备方法和应用、以及mRNA递送系统
WO2023218420A1 (en) 2022-05-13 2023-11-16 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Mrna compositions for inducing latent hiv-1 reversal
US20250345407A1 (en) 2022-05-25 2025-11-13 CureVac SE Nucleic acid based vaccine encoding an escherichia coli fimh antigenic polypeptide
WO2023233290A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Rnai agents targeting pd-l1
CN117460711B (zh) * 2022-06-02 2025-07-08 厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司 一种含有不饱和键的氨基酸阳离子脂质
WO2024040194A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering
EP4608442A1 (en) 2022-10-28 2025-09-03 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Nucleic acid based vaccine
CN120435314A (zh) 2022-12-29 2025-08-05 波普瓦克斯私人有限公司 多靶疫苗和治疗剂
WO2024141784A2 (en) 2022-12-29 2024-07-04 Popvax Private Limited Broadly protective betacoronavirus vaccines and compositions
CN115745820B (zh) * 2023-01-05 2023-04-28 北京悦康科创医药科技股份有限公司 长效低毒的新型阳离子脂质化合物及其组合物
CN115677518B (zh) * 2023-01-05 2023-04-14 北京悦康科创医药科技股份有限公司 用于递送核酸的可电离阳离子脂质化合物和组合物及用途
WO2024184500A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 CureVac SE Novel lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
WO2024230934A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 CureVac SE Therapeutic nucleic acid for the treatment of ophthalmic diseases
AU2024279278A1 (en) 2023-05-31 2025-12-18 Capstan Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations and compositions
WO2025006799A1 (en) 2023-06-27 2025-01-02 Capstan Therapeutics, Inc. Extracorporeal and ex vivo engineering of select cell populations from peripheral blood
WO2025080555A1 (en) * 2023-10-10 2025-04-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Substituted amidine ionizable lipid compounds, methods of preparation thereof, lipid nanoparticles (lnps) comprising the same, and methods of use thereof
WO2025080939A1 (en) 2023-10-13 2025-04-17 Ultragenyx Pharmaceutical, Inc. Compositions and methods for treating conditions associated with cartilage oligomeric matrix protein (comp) mutations
WO2025128853A2 (en) 2023-12-13 2025-06-19 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Compositions and methods for treating conditions associated with ube3a overexpression
US20250332281A2 (en) 2023-12-15 2025-10-30 Capstan Therapeutics, Inc. Humanized anti-cd8 antibodies and uses thereof
WO2025144938A1 (en) 2023-12-26 2025-07-03 Emmune, Inc. Systems for nucleic acid transfer
WO2025166325A1 (en) 2024-02-02 2025-08-07 Editas Medicine, Inc. MODIFIED GUIDE RNAs
TW202543585A (zh) 2024-03-08 2025-11-16 美商健臻公司 脂質奈米粒子
WO2025213138A1 (en) 2024-04-05 2025-10-09 Editas Medicine, Inc. Crispr/rna-guided nuclease related methods and compositions for treating primary open angle glaucoma
WO2026003582A2 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Axelyf ehf. Lipids and lipid nanoparticles
WO2026030375A2 (en) 2024-07-30 2026-02-05 Genzyme Corporation Lipid nanoparticles and methods of manufacture and use thereof

Family Cites Families (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1481016A (fr) 1962-04-02 1967-05-19 Bruneau & Cie Lab Dérivés de la pipérazine et leur fabrication
JPS58500845A (ja) 1981-06-04 1983-05-26 デラウェア・ケミカルス・コーポレーション ポンプ
JPS6189286A (ja) 1984-10-08 1986-05-07 Tokuyama Soda Co Ltd 液晶組成物
JPS61136584A (ja) 1984-12-07 1986-06-24 Tokuyama Soda Co Ltd 液晶組成物
US4778810A (en) 1987-01-08 1988-10-18 Nastech Pharmaceutical Co., Inc. Nasal delivery of caffeine
ES2061416T3 (es) 1990-10-12 1997-03-01 Max Planck Gesellschaft Ribozimas modificadas.
US5652094A (en) 1992-01-31 1997-07-29 University Of Montreal Nucleozymes
US5849902A (en) 1996-09-26 1998-12-15 Oligos Etc. Inc. Three component chimeric antisense oligonucleotides
CA2532228C (en) 2003-07-16 2017-02-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
FR2858216B1 (fr) 2003-07-31 2008-04-04 Oreal Composition contenant un 2-thioacetamide, son utilisation pour stimuler la pousse des fibres keratiniques et/ou freiner leur chute
EP2118127A4 (en) 2007-01-31 2010-12-01 Affymax Inc NICKET-BASED LINKER FOR BONDING MODIFYING GROUPS OF POLYPEPTIDES AND OTHER MACROMOLECULES
AR065986A1 (es) 2007-04-12 2009-07-15 Uniqema Americas Inc Composiciones agroquimicas
TW201021852A (en) * 2008-11-17 2010-06-16 Enzon Pharmaceuticals Inc Releasable fusogenic lipids for nucleic acids delivery systems
CN102292069B (zh) 2008-11-26 2014-07-30 中外制药株式会社 囊泡制剂
KR101766408B1 (ko) 2009-06-10 2017-08-10 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 향상된 지질 조성물
KR101773643B1 (ko) 2010-04-28 2017-08-31 교와 핫꼬 기린 가부시키가이샤 양이온성 지질
WO2011136369A1 (ja) 2010-04-28 2011-11-03 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質
KR20190039347A (ko) 2010-06-03 2019-04-10 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 활성제의 전달을 위한 생분해성 지질
CA2811430A1 (en) 2010-09-30 2012-04-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Low molecular weight cationic lipids for oligonucleotide delivery
EP3485913A1 (en) 2010-10-21 2019-05-22 Sirna Therapeutics, Inc. Low molecular weight cationic lipids for oligonucleotide delivery
EP2718261B1 (en) 2011-06-08 2016-02-24 Nitto Denko Corporation Compounds for targeting drug delivery and enhancing sirna activity
US9011903B2 (en) 2011-06-08 2015-04-21 Nitto Denko Corporation Cationic lipids for therapeutic agent delivery formulations
JP2013095755A (ja) * 2011-11-02 2013-05-20 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd カチオン性脂質
US9579338B2 (en) 2011-11-04 2017-02-28 Nitto Denko Corporation Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery
WO2013086373A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
HRP20181855T1 (hr) * 2012-06-08 2018-12-28 Nitto Denko Corporation Lipidi za formulacije namijenjene unosu terapijskog sredstva
WO2014089239A1 (en) 2012-12-07 2014-06-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Improved nucleic acid lipid particle formulations
AU2014348212C1 (en) 2013-11-18 2018-11-29 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US9365610B2 (en) 2013-11-18 2016-06-14 Arcturus Therapeutics, Inc. Asymmetric ionizable cationic lipid for RNA delivery
JP6637988B2 (ja) 2014-11-18 2020-01-29 アークトゥルス セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｒｎａ送達のためのイオン化可能カチオン性脂質
US9834510B2 (en) 2015-12-30 2017-12-05 Arcturus Therapeutics, Inc. Aromatic ionizable cationic lipid
CN206180768U (zh) 2016-09-09 2017-05-17 精进电动科技股份有限公司 一种电机和减速器连接的输入轴结构
US10743303B2 (en) 2016-09-29 2020-08-11 Panasonic Intellectual Property Corporation Of America Wireless communication method, apparatus and system
US10383952B2 (en) 2016-12-21 2019-08-20 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US10526284B2 (en) 2016-12-21 2020-01-07 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
BR112019025224A2 (pt) 2017-05-31 2020-12-08 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Terapêutica para doença de armazenamento de glicogênio tipo iii
SG11202110036RA (en) 2019-03-19 2021-10-28 Arcturus Therapeutics Inc Method of making lipid-encapsulated rna nanoparticles
US12351834B2 (en) 2020-03-03 2025-07-08 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
AU2021236068A1 (en) 2020-03-09 2022-10-06 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and methods for inducing immune responses
KR20240008872A (ko) 2021-05-06 2024-01-19 아크투루스 쎄라퓨틱스, 인크. Rna 전달을 위한 이온화 가능한 양이온성 지질
CN113264842B (zh) 2021-07-21 2022-03-01 苏州科锐迈德生物医药科技有限公司 一种脂质化合物及包含其的脂质载体、核酸脂质纳米粒组合物和药物制剂
WO2023086514A1 (en) 2021-11-11 2023-05-19 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids for rna delivery

Also Published As

Publication number Publication date
EP3558942C0 (en) 2023-09-06
WO2018118102A1 (en) 2018-06-28
KR102385562B1 (ko) 2022-04-11
IL267511B (en) 2022-04-01
KR102299053B1 (ko) 2021-09-07
US10980895B2 (en) 2021-04-20
IL267511A (en) 2019-08-29
EP3558942A1 (en) 2019-10-30
AU2017379059A1 (en) 2019-08-08
JP6905062B2 (ja) 2021-07-21
KR20190122653A (ko) 2019-10-30
JP7437935B2 (ja) 2024-02-26
JP7594038B2 (ja) 2024-12-03
JP2021088588A (ja) 2021-06-10
CN110325511B (zh) 2022-04-19
PT3558943T (pt) 2024-01-12
EP3558943B1 (en) 2023-10-18
JP2025081598A (ja) 2025-05-27
IL290592B1 (en) 2023-10-01
PL3558943T3 (pl) 2024-04-02
FI3558943T3 (fi) 2024-01-12
IL306099B1 (en) 2025-07-01
JP2023071947A (ja) 2023-05-23
IL267317B2 (en) 2023-11-01
JP2020504728A (ja) 2020-02-13
IL290592B2 (en) 2024-02-01
AU2017379587A1 (en) 2019-08-08
CA3047033A1 (en) 2018-06-28
EP4310075A3 (en) 2024-04-24
ES2969232T3 (es) 2024-05-17
EP4527831A2 (en) 2025-03-26
AU2017379587B2 (en) 2020-12-10
CA3046885C (en) 2023-03-07
KR20210112396A (ko) 2021-09-14
CN114917203A (zh) 2022-08-19
HRP20231742T1 (hr) 2024-03-15
CN110337429B (zh) 2021-12-21
SI3558943T1 (sl) 2024-03-29
US12527881B2 (en) 2026-01-20
JP7641308B2 (ja) 2025-03-06
IL306099A (en) 2023-11-01
EP3558942B1 (en) 2023-09-06
IL267317B1 (en) 2023-07-01
JP2023071950A (ja) 2023-05-23
AU2017379059B2 (en) 2020-11-12
IL290592A (en) 2022-04-01
HUE065439T2 (hu) 2024-05-28
CA3046885A1 (en) 2018-06-28
IL306099B2 (en) 2025-11-01
CN110337429A (zh) 2019-10-15
US20180169268A1 (en) 2018-06-21
EP4310075A2 (en) 2024-01-24
KR20190134593A (ko) 2019-12-04
EP4527831A3 (en) 2025-06-25
JP2021073263A (ja) 2021-05-13
US10383952B2 (en) 2019-08-20
JP2020504730A (ja) 2020-02-13
CN110325511A (zh) 2019-10-11
AU2021200663B2 (en) 2023-09-07
EP3558943A1 (en) 2019-10-30
AU2021200663A1 (en) 2021-03-04
US20190388562A1 (en) 2019-12-26
US20210252163A1 (en) 2021-08-19
IL267317A (en) 2019-08-29
DK3558943T3 (en) 2024-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7594038B2 (ja) Ｒｎａ送達のためのイオン化可能なカチオン性脂質
US10961188B2 (en) Ionizable cationic lipid for RNA delivery
EP3397614B1 (en) Ionizable cationic lipid
EP3221293B1 (en) Ionizable cationic lipid for rna delivery
US9670152B2 (en) Ionizable cationic lipid for RNA delivery
WO2018119163A1 (en) Ionizable cationic lipid for rna delivery