RS65471B1 - Bioherbicid za suzbijanje ambrozije i metod primene - Google Patents

Description

Oblast tehnike

Predloženi pronalazak je iz oblasti zaštite bilja i uže oblasti biopesticida odn. herbicida na bazi prirodnih komponenti a odnosi se na suzbijanje invazivne korovske biljke ambrozije. Aktivna supstanca je esencijalno ulje biljke Litsea citrata Blumel. a pomoćna supstanca odn. emulgator je takođe prirodna komponenta-hidrogenizovano ricinusovo ulje, pri čemu se bioherbicid primenjuje kao zemljišni a deluje kao translokacioni herbicid za ambroziju i druge mono i dikotiledone biljke na ruderalnim i drugim nepoljoprivrednim površinama.

Tehnički problem

Ambrozija je invazivna korovska vrsta sa tendencijom sve većeg širenja i izuzetno značajna za ljudsku populaciju zbog polena kao jednog od najsnažnijih alergena u našoj zemlji. U našoj zemlji je dominantna Ambrosia artemisifolia dok je A. trifida pronađena u Bačkom i Mačvanskom regionu (Savić, A. 2020. Kompeticija vrsta Ambrosia trifida L. i Ambrosia artemisifolia L. u prirodnom ekosistemu. Doktorska disertacija, Univerzitet u Beogradu, Poljoprivredni fakultet, pp. 1-126). Ambrozija nije problem samo u Srbiji, već i šire u jugoistočnom delu Evrope (Mađarska, Rumunija, Bugarska) ali i u zapadnoj Evropi-Austriji i u južnoj Francuskoj, sa značajnim posledicama po zdravlje ljudi (Leru et al., 2019. Assessment of the risks associated with the invasive weed Ambrosia artemisiifolia in urban environments in Romania. Ecocycles, 5, pp. 56-61). Ova vrsta koja pripada familiji Asteraceae se javlja masovno na neobrađenim površinama kao što su ruderalne površine, ivice puteva, prostor između i pored železničkih šina itd., a zatim se semenom širi na velike razdaljine. Jedan od zaključaka EFSA (European Food Safety Authority) dokumenta iz 2010. godine (Scientific Opinion on the effect on public or animal health or on the environment on the presence of seeds of Ambrosia spp. in animal feed, EFSA Journal 2010; 8(6):1566) o efektu prisustva semena Ambrosia spp. u hrani životinja po javno zdravlje, zdravlje životinja i životnu sredinu je da postoji dovoljno naučnih dokaza da vrste roda Ambrosia zbog alergenih osobina izazivaju štetan uticaj na zdravlje ljudi. Takođe se navodi da je kontrola ambrozije teška u određenim usevima i na ruderalnim odn. neobrađenim površinama. Primena konvencionalnih herbicida i drugih pesticida je dovela do velikog zagađenja životne sredine i zabrane toksičnih hemikalija. U tom smislu, evropska regulativa (Regulation (EC) no. 1107/2009), reguliše primenu prirodnih sredstava za zaštitu bilja kao primarnu metodu izbora.

Prirodne komponente poput etarskih i biljnih ulja su poslednjih godina sve više predmet proučavanja jer nemaju dugotrajne štetne efekte po spoljašnju sredinu i zdravlje ljudi. Predloženi bioherbicid je ispitan na sledećim vrstama: Ambrosia artemisifolia, Ambrosia trifida, Artemisia vulgaris, Dactylis glomerata i Setaria glauca.

Tehnički problem koji se rešava predmetnim pronalaskom je što novi bioherbicid efikasno suzbija ambroziju i druge korovske vrste, sadrži prirodne komponente kao aktivnu materiju i pomoćne materije, efikasan je jer deluje u malim koncentracijama i tehnički je jednostavan za proizvodnju i primenu a može se koristiti na teško pristupačnim nepoljoprivrednim površinama.

Stanje tehnike

Biološko suzbijanje korova (pa i ambrozije) se u dostupnoj literaturi zasniva na korišćenju bioherbicida na bazi mikroorganizama (bakterija i gljiva), esencijalnih ulja, kao i na mehaničkoj kontroli korova ali i na fizičkom tretiranju na pr. plamenom.

Patent US 2007/0191228 pod nazivom Natural herbicide (Prirodni herbicid) koristi prečišćene frakcije toksina bakterije Burkholderia andropogonis. Proces proizvodnje je kompleksan i pod strogo kontrolisanim uslovima a samim tim i skup jer koristi prečišćene frakcije toksina različitih molekulskih masa od 180 do 5 000 Daltona. Proces proizvodnje predloženog patenta nije kompleksan i ne zahteva slične uslove.

U patentu CA 02421373 pod nazivom Control of chickweed using Burkhotderia andropogonis as a bioherbicide, za kontrolu korovske vrste Stellaria media tj. mišjakinje koristi se bakterijska vrsta koja je fitopatogena ne samo za korove već i za gajene biljke (Cother et al., 2004. A new bacterial disease of jojoba (Simmondsia chinensis) caused by Burkholderia andropogonis. Plant Pathology, 53,129- 135); Li & De Boer, 2005. First Report of Burkholderia andropogonis Causing Leaf Spots of Bougainvillea sp. in Hong Kong and Clover in Canada. Plant Disease, 89, 10, 1132). Način primene predloženog bioherbicida onemogućava kontakt sa gajenim biljkama jer se primenjuje na nepoljoprivrednim površinama.

CN 103229785 patent pod nazivom Method for controlling Ambrosia trifida by using rust fungus se zasniva na primeni teleutospora gljive Puccinia xanthii. Ova gljiva je fitopatogena za veći broj biljaka kao i za neke gajene biljke poput suncokreta (Zhao, et al., 2014. First Report of Rust Caused b yPuccinia xanthii on Xanthium orientale subsp. italicum in China. Plant Diseases, 98, 11, 1582.; Gulya & Charlet, 2002. First Report of Puccinia xanthii on Sunflower in North America. Plant Diseases, 86, 5, 564).

U patentu WO 2009015245 pod nazivom Hinokitiol as a plant pesticide (Hinokitiol kao biljni pesticid), hinokitiol se koristi kao baktericid i fungicid ali i kao herbicid. Formulacija ovog herbicida je veoma kompleksna a samim tim i skupa jer pored aktivne materije sadrži niz pomoćnih materija poput stabilizatora, ph regulatora, helatora, UV agenasa koji predstavljaju različite hemikalije poput benzoata, polietilena, benzotriazola itd., koje nisu prirodnog porekla suprotno predloženom patentu.

WO 2020049401 patent pod nazivom Herbicide comprising plant extracts (herbicid koji sadrži biljne ekstrakte) se zasniva na herbicidnom delovanju različitih fitotoksina koji se koriste u optimalnim koncentracijama od 3.4% u slučaju Callistemon citrinus do 10.17% Nospospondia vrste, koje su znatno veće od koncentracije predloženog patenta.

W0 2009049153 opisuje prirodni herbicid koji sadrži esencijalno ulje limun-trave (A natural herbicide containing lemongrass essential oil) odn. biljke roda Cymbopogon. U eksperimentu pod kontrolisanim uslovima ovaj bioherbicid u koncentraciji od 2% na tretiranim biljkama mišjakinje (Stellaria media) je imao efikasnost od 35% a na Poa annua je imao herbicidni efekat od 45% u odnosu na kontrolu, što je znatno niže od predloženog patenta koji je u koncentraciji od 2% na tretiranim biljkama imao efikasnost od 100%.

EP 2684457 patent opisuje prirodni herbicid baziran na esencijalnim uljima i formulisan kao kvašljivi prah (Natural herbicide based on etheric оil and formulated as wettable powđer). Proces proizvodnje praha zahteva posebne uslove poput liofilizacije tj. izlaganje temperaturi od -120°C i vakumu, što zahteva posebnu opremu i poskupljuje proizvodnju. Bioherbicid se koristi u koncentraciji 3-6% esencijalnog ulja. Proces proizvodnje predloženog patenta ne zahteva izlaganje veoma niskim temperaturama i vakumu a i koncentracija pri kojoj bioherbicid deluje je niža od opisanog patenta.

Tworkoski (2002, Herbicide effects of essential oils, Weed science, 50, 425-431) je ispitivao herbicidni efekat 25 esencijalnih ulja na biljkama maslačka i dr. korovima i utvrdio da su najveći fitotoksični efekat ispoljila ulja Cinnamomum zeylanicum, Thymus vulgaris i Satureja hortensis ako se primene na nadzemne delove odn. listove biljaka. Predloženi patent se razlikuje i po tome što se primenjuje kao zemljišni a ne kao folijarni herbicid.

Grulova et al., (2020, Thymol Chemotype Origanum vulgare L. Essential Oil as a Potential Selective Bio-Based Herbicide on Monocot Plant Species, Molecules, 25, 595; doi:10.3390/molecules25030595) su ispitivali fitotoksični efekat esencijalnog ulja origana na nekim monokotilama i dikotilama i ustanovili da ispoljava herbicidno dejstvo na monokotile (pšenicu i ječam) ali ne i dikotiledone biljke. Predloženi patent podjednako efikasno deluje i na monokotile i dikotile.

WO 2019238948 Bioherbicide based on essential oil (bioherbicid baziran na esencijalnom ulju) opisuje esencijalna ulja različitih biljaka u sadejstvu sa većim brojem pomoćnih materija kao što su surfaktanti (okvašivači), kosurfaktanti, rastvarači, antioksidansi itd., što za razliku od predloženog patenta komplikuje i poskupljuje proizvodnju a koncentracija ulja je veća od 2%.

Korišćenje plamena za korove se pored toga što zahteva skupe uređaje pokazalo korisnim za širokolisne korove dok je efekat izostao za travne korove (Smith et al.,2000. Weed Management for Organic Crops., Volume 7250, p. 2. Available online: https://anrcatalog.ucanr.edu/pdf/7250.pdf). Predloženi patent podjednako efikasno suzbija dikotiledone i monokotiledone korove, što je značajno za nepoljoprivredne površine.

U patentu CN 109429925 se opisuje mehanička kontrola gigantske ambrozije (A trifida) putem košenja mehaničkom kosilicom (A kind of machinery of prevention and control of Ambrosia trifida). Pomoću ovog patenta se na biološki odn. mehanički način vrši suzbijanje ovog opasnog korova. Nedostatak patenta je taj što, za razliku od predloženog patenta, se kosilica ne može koristiti na neravnim nepoljoprivrednim površinama koje često u strukturi zemljišnog supstrata sadrže kamenje i drugi građevinski materijal.

Suština pronalaska

Suština pronalaska se sastoji u novom bioherbicidnom preparatu koji se sastoji iz prirodnih komponenti, esencijalnog ulja biljke Litsea citrata (Marigold) niske koncentracije, hidrogenizovanog ricinusovog ulja PEG-40 (Avena lab) niske koncentracije kao emulgatora i vode, koji se primenjuje kao zemljišni pre-emergence ili post-emergence herbicid putem zalivanja biljaka. Ovaj bioherbicid prirodnog porekla se koristi za suzbijanje nekih uskolisnih i širokolisnih korova u prvom redu ambrozije koja je jedan od najznačajnijih alergena i predstavlja globalnu pretnju po zdravlje ljudske populacije a samim tim i globalni problem. Posledice primene konvencionalnih herbicida su dovele do zagađenja životne sredine usled dugotrajnog prisustva rezidua u njoj ali i dospevanja toksičnih supstanci u lanac ishrane koji ozbiljno ugrožavaju zdravlje ljudi, što je rezultiralo zabranom hemijskih herbicida koji takođe predstavljaju globalni problem. Na ovaj način se rešavaju dva značajna globalna problema jer predloženi patent efikasno suzbija ambroziju, jednog od glavnih alergena i ne zagađuje spoljašnju sredinu. Može se primeniti u uslovima visokih temperatura, kada se ne mogu primeniti konvencionalni herbicidi i na svakoj vrsti terena, uključujući i slabo pristupačne, kamenite i druge nepoljoprivredne površine. Bioherbicid deluje translokaciono, uz izazivanje simptoma poleganja, uvenuća i sušenja biljaka.

Detaljan opis pronalaska sa primerima izvođenja

Bioherbicid se sastoji iz 2% rastvora etarskog ulja (v/v) biljke Litsea citrata poreklom iz Kine (Marigold), napravljenog u 1% (w/v) vodenom rastvoru hidrogenizovanog ricinusovog ulja PEG-40 kao emulgatora. Po mešanju komponenti, emulziju je potrebno pre primene promućkati. Ulje je žuta tečnost, dobijena vodenom destilacijom voća biljke, karakterističnog je mirisa, relativne gustine 0.884, refraktivnog indeksa 1.486, optičke rotacije 11.3° sa najznačajnijim komponentama kao što su oksidovani monoterpeni geranial i neral preko 70%, zatim monoterpenski ugljovodonik limonin, seskviterpeni i druge komponente prikazane u tabeli 1.

Tab. 1 Hemijski sastav esencijalnog ulja biljke Litsea citrata u %

Delovanje bioherbicida je translokaciono, biljka ga usvaja preko korena pri čemu se bioherbicid translocira prema listovima i u tom pravcu se javljaju simptomi uvenuća, nekroze i sušenja biljaka koji su ireverzibilnog karaktera. Bioherbicid je primenjen u različitim fenofazama biljaka (kao post-emergence) ali i kao pre-emergence i pri različitim temperaturama, posebno na visokim temperaturama koje nisu preporučene za konvencionalne herbicide. Nije potrebna aktivacija preparata kišom, deluje i u uslovima velikih suša i temperatura viših od 30° C.

Novost je što je predloženi patent novi zemljišni bioherbicid na bazi komponenata prirodnog porekla koji efikasno suzbija snažni alergen kao što je ambrozija.

Prednost je što je to prirodni preparat koji efikasno suzbija ambroziju u malim koncentracijama, može se primeniti u uslovima visokih temperatura (kada se konvencionalni herbicidi ne smeju primenjivati), može se primeniti na bilo kojoj vrsti terena odn. zemljišne podloge i tehnički je jednostavan za proizvodnju ali i za primenu.

Kratak opis slika nacrta

Slika 1 Efekat bioherbicida na klijanje Ambrosia artemisifolia 10 (a), 20 (b) i 28 dana (c) posle u pre-emergence testu

Slika 2 Biljke Ambrosia artemisifolia sedam dana posle tretiranja 5% rastvorom bioherbicida (a) i vodom (b) u post-emergence testu

Slika 3 Efekat bioherbicida pre (a) i sedam dana posle tretiranja (b) na Ambrosia artemisifolia u post-emergence testu

Primer 1: Delovanje bioherbicida na biljke pelenaste ambrozije-Ambrosia artemisifolia (preemergence test)

U pravougaone otvorene kontejnere (21X15X5 cm) napunjene supstratom za gajenje biljaka je posejano po 30 semena Ambrosia artemisifolia u šest ponavljanja od kojih su tri ponavljanja zalivena sa po 200 ml 2% bioherbicida a preostala tri zalivena sa po 200 ml obične vode na temperaturi 18-23° C. Odmereno je 6 g emulgatora hidrogenizovanog ricinusovog ulja i rastvoreno u 600 ml vode da bi se dobio 1% (w/v) rastvor emulgatora. Zatim je odmereno 12 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 588 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 600 ml 2% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo seme ambrozije sa 200 ml bioherbicida po kontejneru. Posle 10 dana u kontejnerima zalivenih vodom ambrozija je počela da niče, dok u kontejnerima sa bioherbicidom nije nikla ni jedna biljka (slika 1). U sledećim danima nicanje u kontroli je nastavljeno. Posle 20 dana od setve u kontrolnim kontejnerima je niklo 10-17 klijanaca, posle 28 dana nikle biljke su počele da razvijaju stalne listove, dok u tretiranim kontejnerima nije nikla ni jedna biljka iako su posle tretiranja svi kontejneri zalivani samo vodom, što ukazuje da je herbicidni efekat bio 100%, odn. 2% bioherbicid se u slučaju Ambrosia artemisifolia može koristiti i kao pre-emergence odn. pre nicanja korova.

Primer 2: Delovanje bioherbicida na biljke pelenaste ambrozije-Ambrosia artemisifolia (post-emergence test)

Za ogled tretiranja bioherbicida na biljke pelenaste ambrozije, u plastičnim čašama (7X9 cm) je odgajeno 120 biljaka Ambrosia artemisifolia do stadijuma 8-10 stalnih listova tj. pred cvetanje na temperaturi od 18-20°C, biljke su pojedinačno zalivane sa 50 ml bioherbicida odn. vode. Odmereno je 50 g emulgatora hidrogenizovanog ricinusovog ulja i rastvoreno u 5000 ml vode da bi se dobio 1% (w/v) rastvor emulgatora. Zatim je odmereno 50 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 950 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 1000 ml 5% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo 20 biljaka ambrozije. Zatim je odmereno 20 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 980 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 1 000 ml 2% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo 20 biljaka ambrozije. Za sledeću koncentraciju je odmereno 5 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 995 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 1000 ml 0.5% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo sledećih 20 biljaka ambrozije. Za narednu koncentraciju je odmereno 1.25 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 998.75 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 1 000 ml 0.125% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo 20 novih biljaka ambrozije. Za poslednju koncentraciju je odmereno 0.625 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 999.375 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 1000 ml 0.0625% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo sledećih 20 biljaka ambrozije. Pre samog tretiranja biljaka emulzija je promućkana. I poslednjih 20 biljaka ambrozije je tretirano sa 1 000 ml vode kao kontrolom. Posle tri dana efekat je bio takav da su biljke tretirane sa 5, 2 i 0.5% rastvorom polegle i uvele, dok su kod koncentracije 0.125% polegle 2 biljke od 20, dok su biljke tretirane uljem koncentracije 0.0625% i vodom delovale normalno. Posle 3 dana sve biljke su zalivene vodom da bi se videlo da li je uvenuće reverzibilnog karaktera. Sedmi dan po tretiranju biljke tretirane 5, 2 i 0.5% su uvele i požutele (slike 2 i 3) i tada je zaključeno da je uvenuće ireverzibilno, herbicidni efekat je bio 100%, sušenje ide od donjeg dela prema listovima što znači da je bioherbicid translokacioni po tipu delovanja. U grupi tretiranoj sa 0.125% bioherbicida su uvele i požutele 2 biljke, dok su biljke tretirane uljem koncentracije 0.0625% i vodom bile bez promena.

Primer 3: Delovanje bioherbicida na biljke džinovske ambrozije-Ambrosia trifida (preemergence test)

U pravougaone otvorene kontejnere (21X15X5 cm) napunjene supstratom za gajenje biljaka je posejano po 30 semena Ambrosia trifida u šest ponavljanja od kojih su tri ponavljanja zalivena sa po 200 ml 2% bioherbicida a preostala tri zalivena sa po 200 ml obične vode na temperaturi 20-23° C. Odmereno je 6 g emulgatora hidrogenizovanog ricinusovog ulja i rastvoreno u 600 ml vode da bi se dobio 1% (w/v) rastvor emulgatora. Zatim je odmereno 12 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 588 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 600 ml 2% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo seme džinovske ambrozije sa 200 ml bioherbicida po kontejneru. Posle 7 dana u kontejnerima zalivenih vodom ambrozija je počela da niče, dok u kontejnerima sa bioherbicidom nije nikla ni jedna biljka. U sledećim danima nicanje u kontroli je nastavljeno. Posle 14 dana od setve u kontrolnim kontejnerima je niklo 12-15 klijanaca, koje su počele da razvijaju stalne listove, dok u tretiranim kontejnerima nije nikla ni jedna biljka iako su posle tretiranja svi kontejneri zalivani samo vodom, što ukazuje da je herbicidni efekat bio 100%, odn. 2% bioherbicid se u slučaju Ambrosia artemisifolia može koristiti i kao pre-emergence odn. pre nicanja korova.

Primer 4: Delovanje bioherbicida na biljke džinovske ambrozije-Ambrosia trifida (postemergence test)

Za ogled tretiranja bioherbicida na biljke džinovske ambrozije, u plastičnim čašama (7X9 cm) je odgajeno 120 biljaka Ambrosia trifida do stadijuma 6-8 stalnih listova na temperaturi od 18-20°C, biljke su pojedinačno zalivane sa 50 ml bioherbicida odn. vode. Odmereno je 50 g emulgatora hidrogenizovanog ricinusovog ulja i rastvoreno u 5 000 ml vode da bi se dobio 1% (w/v) rastvor emulgatora. Zatim je odmereno 50 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 950 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 1 000 ml 5% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo 20 biljaka ambrozije.

Zatim je odmereno 20 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 980 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 1 000 ml 2% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo 20 biljaka ambrozije. Za sledeću koncentraciju je odmereno 5 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 995 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 1000 ml 0.5% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo sledećih 20 biljaka ambrozije. Za narednu koncentraciju je odmereno 1.25 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 998.75 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 1000 ml 0.125% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo 20 novih biljaka ambrozije. Za poslednju koncentraciju je odmereno 0.625 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 999.375 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 1 000 ml 0.0625% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo sledećih 20 biljaka ambrozije. Pre samog tretiranja biljaka emulzija je promućkana. I poslednjih 20 biljaka ambrozije je tretirano sa 1 000 ml vode kao kontrolom. Posle tri dana efekat je bio takav da su biljke tretirane sa 5, 2 i 0.5% rastvorom polegle i uvele a kod koncentracije 0.125% uvelo je 5 biljaka od 20 dok su ostale biljke i biljke tretirane uljem koncentracije 0.0625% i vodom delovale normalno. Posle tri dana sve biljke su zalivene vodom da bi se videlo da li je uvenuće reverzibilnog karaktera. Sedmi dan po tretiranju sve biljke tretirane 5, 2 i 0.5% su uvele i zaključeno je da je herbicidni efekat bio 100%, sušenje ide od donjeg dela prema listovima što znači da je bioherbicid translokacioni po tipu delovanja. U grupi tretiranoj sa 0.125% bioherbicida su uvele još 4 biljke dakle ukupno 9 od 20, dok su biljke tretirane uljem koncentracije 0.0625% i vodom bile bez promena.

Primer 5: Delovanje bioherbicida na biljke običnog pelena-Artemisia vulgaris (ргеemergence test)

U pravougaone otvorene kontejnere (21X15X5 cm) napunjene supstratom za gajenje biljaka je posejano po 30 semena Artemisia vulgaris u šest ponavljanja od kojih su tri ponavljanja zalivena sa po 200 ml 2% bioherbicida a preostala tri zalivena sa po 200 ml obične vode na temperaturi 20-23° C. Odmereno je 6 g emulgatora hidrogenizovanog ricinusovog ulja i rastvoreno u 600 ml vode da bi se dobio 1% (w/v) rastvor emulgatora. Zatim je odmereno 12 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 588 ml rastvora emiulgatora da bi se dobilo 600 ml 2% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo seme običnog pelena sa 200 ml bioherbicida ро kontejneru.

Posle 5 dana u kontejnerima zalivenih vodom pelen je počeo da niče, dok u kontejnerima sa bioherbicidom nije nikla ni jedna biljka. U sledećim danima nicanje u kontroli je nastavljeno. Posle 10 dana od setve u kontrolnim kontejnerima je niklo 15- 20 klijanaca, koje su počele da razvijaju stalne listove, dok u tretiranim kontejnerima nije nikla ni jedna biljka iako su posle tretiranja svi kontejneri zalivani samo vodom, što ukazuje da je herbicidni efekat bio 100%, odn. 2% bioherbicid se u slučaju Artemisia vulgaris može koristiti i kao pre-emergence odn. pre nicanja korova.

Primer 6: Delovanje bioherbicida na biljke običnog pelena-Artemisia vulgaris (postemergence test)

Za ogled tretiranja bioherbicida na biljke običnog pelena, u kontejneru od stiropora sa otvorima prečnika 5 cm i visinom 6 cm su odgajene 64 biljke Artemisia vulgaris do stadijuma pred formiranje cvetova, odn. 8-10 stalnih listova na temperaturi od 18-20°C. Odmereno je 12 g emulgatora hidrogenizovanog ricinusovog ulja i rastvoreno u 1 200 ml česmenske vode da bi se dobio 1% (w/v) rastvor emulgatora. Zatim je odmereno 8 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 392 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 400 ml 2% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo 16 biljaka pelena sa po 25 ml bioherbicida pojedinačno. Zatim je odmereno 2 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 398 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 400 ml 0.5% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo 16 novih biljaka pelena. I na kraju je odmereno 0.2 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 399.8 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 400 ml 0.05% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo 16 novih biljaka pelena. Pre samog tretiranja biljaka emulzija je promućkana. I poslednjih 16 biljaka pelena je tretirano sa 400 ml vode kao kontrolom odn. svaka biljka sa po 25 ml vode. Posle sedam dana efekat je bio takav da su biljke tretirane sa 2% rastvorom polegle i uvele, odn. herbicidni efekat je bio 100%, dok kod biljka tretiranih sa 0.5% je uvelo 10 biljaka, dok su biljke tretirane uljem koncentracije 0.05% i vodom delovale normalno.

Primer 7: Delovanje bioherbicida na biljke ježevice-Dactylis glomerata (pre-emergence test)

U pravougaone otvorene kontejnere (21X15X5 cm) napunjene supstratom za gajenje biljaka je posejano po 30 semenki Dactylis glomerata u šest ponavljanja od kojih su tri ponavljanja zalivena sa po 200 ml 2% bioherbicida a preostala tri zalivena sa po 200 ml obične vode na temperaturi 20-22° C. Odmereno je 6 g emulgatora hidrogenizovanog ricinusovog ulja i rastvoreno u 600 ml vode da bi se dobio 1% (w/v) rastvor emulgatora. Zatim je odmereno 12 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 588 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 600 ml 2% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo seme ježevice sa 200 ml bioherbicida po kontejneru. Posle 3 dana u kontejnerima zalivenih vodom ježevica je počela da niče, dok u kontejnerima sa bioherbicidom nije nikla ni jedna biljka. U sledećim danima nicanje u kontroli je nastavljeno. Posle 10 dana od setve u kontrolnim kontejnerima je niklo 18-20 klijanaca, dok u tretiranim kontejnerima nije nikla ni jedna biljka iako su posle tretiranja svi kontejneri zalivani samo vodom, što ukazuje da je herbicidni efekat bio 100%, odn. 2% bioherbicid se u slučaju Dactylis glomerata može koristiti i kao pre-emergence odn. pre nicanja korova.

Primer 8: Delovanje bioherbicida na biljke ježevice-Dactylis glomerata (post- emergence test)

Za ogled tretiranja bioherbicida na biljke ježevice, u plastičnim čašama (7X9 cm) je odgajeno 100 biljaka Dactylis glomerata do stadijuma vlatanja pod kontrolisanim uslovima na temperaturi od 18-20°C, biljke su pojedinačno zalivane sa 50 ml bioherbicida odn. vode. Odmereno je 10 g emulgatora hidrogenizovanog ricinusovog ulja i rastvoreno u 1000 ml vode da bi se dobio 1% (w/v) rastvor emulgatora. Zatim je odmereno 12.5 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 237.5 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 250 ml 5% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo 20 biljaka (četiri biljke u pet ponavljanja) ježevice. Potom je odmereno 5 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 245 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 250 ml 2% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo sledećih 20 biljaka. Zatim je odmereno 1.25 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 248.75 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 250 ml 0.5% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo 20 novih biljaka ježevice. Za sledeću koncentraciju je odmereno 0.125 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 249.875 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 250 ml 0.05% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo još 20 biljaka ježevice. Pre samog tretiranja biljaka emulzija je promućkana. I poslednjih 20 biljaka ježevice je tretirano sa 250 ml vode kao kontrolom. Posle tri dana efekat je bio takav da su biljke tretirane sa 5, 2 i 0.5% rastvorom polegle a biljke tretirane bioherbicidom koncentracije 0.05% i vodom su delovale normalno, tada su sve biljke zalivene vodom da bi se videlo da li je uvenuće reverzibilnog karaktera. Sedmi dan po tretiranju sve biljke tretirane 5, 2 i 0.5% su uvele i zaključeno je da je uvenuće ireverzibilno, herbicidni efekat je bio 100%, sušenje ide od donjeg dela prema listovima što znači da je bioherbicid translokacioni po tipu delovanja. U grupi tretiranoj sa 0.05% bioherbicida i vodom su biljke bile bez promena.

Primer 9: Delovanje bioherbicida na biljke sivog muhara-Setaria glauca (pre-emergence test)

U pravougaone otvorene kontejnere (21X15X5 cm) napunjene supstratom za gajenje biljaka je posejano po 30 semenki Setaria glauca u šest ponavljanja od kojih su tri ponavljanja zalivena sa po 200 ml 2% bioherbicida a preostala tri zalivena sa po 200 ml obične vode na temperaturi 22-25° C. Odmereno je 6 g emulgatora hidrogenizovanog ricinusovog ulja i rastvoreno u 600 ml vode da bi se dobio 1% (w/v) rastvor emulgatora. Zatim je odmereno 12 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 588 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 600 ml 2% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretiralo seme sivog muhara sa 200 ml bioherbicida po kontejneru. Posle 5 dana u kontejnerima zalivenih vodom muhar je počeo da niče, dok u kontejnerima sa bioherbicidom nije nikla ni jedna biljka. U sledećim danima nicanje u kontroli je nastavljeno. Posle 10 dana od setve u kontrolnim kontejnerima je niklo 13-15 klijanaca, dok u tretiranim kontejnerima nije nikla ni jedna biljka iako su posle tretiranja svi kontejneri zalivani samo vodom, što ukazuje da je herbicidni efekat bio 100%, odn. 2% bioherbicid se u slučaju Setaria glauca može koristiti i kao pre-emergence odn. pre nicanja korova.

Primer 10: Delovanje bioherbicida na biljke sivog muhara-Setaria glauca (post-emergence test)

Za ogled tretiranja biljaka sivog muhara odgajeno je 120 biljaka u šest plastičnih saksija (balona) sa po 20 biljaka do stadijuma odraslih biljaka sa klasovima, visine 40-60 cm, od kojih su tri balona zalivena sa po 200 ml 2% bioherbicida a preostala tri zalivena sa po 200 ml obične vode. Odmereno je 6 g emulgatora hidrogenizovanog ricinusovog ulja i rastvoreno u 600 ml česmenske vode da bi se dobio 1% (w/v) rastvor emulgatora. Zatim je odmereno 12 ml esencijalnog ulja i pomešano sa 588 ml rastvora emulgatora da bi se dobilo 600 ml 2% (v/v) rastvora odn. emulzije ulja u vodi kako bi se tretirale biljke sivog muhara. Tretiranje 60 biljaka je izvršeno sa 200 ml 2% bioherbicidom a preostalih 60 biljaka sa 200 ml običnom vodom, na temperaturi od 32° C, pritisak 1005.1 mb, vlažnost vazduha 31%, vetar-slab, severo-zapadni 13 km/h, vreme vedro i veoma toplo. Posle tri dana biljke tretirane bioherbicidom su uvele i polegle, u međuvremenu nije bilo kiše, vreme je bilo veoma toplo, temperatura 36°C, dok su biljke zalivene samo vodom delovale normalno. Tada su sve biljke zalivene vodom da bi se ispitala reverzibilnost efekta bioherbicida. Posle sedam dana sve biljke zalivene 2% bioherbicidom su se osušile, herbicidni efekat je bio 100%, dok su one zalivane samo vodom imale normalan izgled.

Claims (6)

Patentni zahtevi

1. Bioherbicid, naznačen time, što se sastoji od 2% (v/v) esencijalnog ulja biljke Litsea citrata u 1% (w/v) rastvoru emulgatora PEG-40 hidrogenizovanog ricinisuvog ulja u vodi.

2. Postupak dobijanja bioherbicida prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što se određena količina esencijalnog ulja biljke Litsea citrata rastvori u odgovarajućoj količini 1% (w/v) rastvora emulgatora PEG-40 hidrogenizovanog ricinisuvog ulja u vodi da bi se dobio 2% (v/v) rastvor esencijalnog ulja biljke Litsea citrata, uz mućkanje.

3. Primena bioherbicida prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što se koristi u suzbijanju Ambrosia artemisifolia, Ambrosia trifida, Artemisia vulgaris, Dactylis glomerataiSetariaglauca.

4. Primena bioherbicida prema patentnom zahtevu 3, naznačena time što se bioherbicid koristi pre nicanja, odnosno kao pre-emergence herbicid.

5. Primena bioherbicida prema patentnom zahtevu 3, naznačena time što se bioherbicid koristi posle nicanja, odnosno kao post-emergence herbicid.

6. Primena bioherbicida prema patentnim zahtevima 3-5, naznačena time što se bioherbicid primenjuje duž ivica puteva, železničkih šina, na ruderalnim i drugim nepoljoprivrednim površinama.