RS65630B1 - Farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju ili prevenciji bolesti povezane sa c5 - Google Patents

Description

Opis

[Oblast tehnike]

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na doze i primene anti-C5 antitela, kao što je definisano u patentnim zahtevima.

[Stanje tehnike]

[0002] Sistem komplementa igra centralnu ulogu u klirensu imunih kompleksa i u imunim odgovorima na infektivne agense, strane antigene, virusom-inficirane ćelije i tumorske ćelije. Postoji približno 25-30 proteina komplementa, koji se nalaze u vidu kolekcije kompleksa od plazmatskih proteina i membranskih kofaktora. Komponente komplementa postižu svoje odbrambene imune funkcije posredstvom interakcija u serijama složenih enzimskih cepanja i slučajevima vezivanja za membranu. Proistekle kaskade komplemenata dovode do stvaranja produkata sa funkcijama opsonizacije, imunoregulacije i liziranja.

[0003] Trenutno je opšte-prihvaćeno da se sistem komplementa može aktivirati posredstvom tri zasebna puta, koje čine: klasični put, lecitinski put i alternativni put. Ovi putevi imaju mnogo zajedničkih komponenti, ali se razlikuju u inicijalnim koracima, pri čemu oni teže i dele istovetne završne komponente komplementa (C5 do C9), koje su odgovorne za aktivaciju i razgradnju ciljnih ćelija.

[0004] Klasični put se, normalno, aktivira posredstvom obrazovanja kompleksa antigen-antitelo. Na nezavisan način, prvi korak u aktivaciji lecitinskog puta jeste vezivanje specifičnih lecitina, kao što su manan-vezujući lectin (MBL), H-fikolin, M-fikolin, L-fikolin i C-tip lectina CL-11. Suprotno tome, u alternativnom putu se odvija spontano podvrgavanje niskom nivou aktivacije obrta, što se, jednostavno, može proširiti na strane ili druge abnormalne površine (bakterije, kvasci, ćelije, inficirane virusom ili oštećeno tkivo). Ovi putevi se slivaju u tačku kada se komponenta komplementa C3 otcepljuje posredstvom aktivne proteaze, da bi se proizvele C3a i C3b.

[0005] C3a je anafilatoksin. C3b se vezuje za bakterijske i druge ćelije, kao i za određene viruse i imune komplekse, i označava ih za odstranjivanje iz cirkulacije (uloga, koja je poznata kao opsonin). C3b, takođe, obrazuje kompleks sa drugim komponentama, kako bi se formirala C5 konvertaza, koja cepa C5 na C5a i C5b.

[0006] C5 je protein od 190 kDa, koji se, u normalnom serumu, nalazi u koncentraciji od približno 80 mikro g/ml (0.4 mikro M). C5 je glikoziliran, tako da se približno 1.5-3% njegove mase pripisuje ugljenim hidratima. Zreli C5 je heterodimer, koji čini alfa lanac od 115 kDa, koji je disulfidnom vezom povezan sa beta lancem od 75 kDa. C5 se sintetiše kao jedno-lančani prekursorski protein (pro-C5 prekursor) od 1676 aminokiselina (vidi, npr., PTL1 i PTL2). Pro-C5 prekursor se otcepljuje, da bi se dobio beta lanac kao fragment sa amino krajem, i alfa lanac kao fragment sa karbosil krajem. Polipeptidni fragmenti alfa lanca i beta lanca se povezuju, jedan sa drugim, preko disulfidne veze, i konstituišu zreli C5 protein.

[0007] Zreli C5 se cepa na fragmente C5a i C5b, tokom aktivacije puta komplementa. C5a se otcepljuje sa alfa lanca C5, posredstvom C5 konvertaze, u vidu amino-terminalnog fragmenta koji sadrži prve 74 aminokiseline alfa lanca. Preostali deo zrelog C5 predstavlja fragment C5b, koji sadrži ostatak alfa lanca, koji je disulfidnom vezom, povezan na beta lanac. Približno 20% mase C5a od 11 kDa pripisuje se ugljenim hidratima.

[0008] C5a je drugi anafilatoksin. C5b se sjedinjuje sa C6, C7, C8 i C9, da bi se obrazovao kompleks koji napada membranu (MAC, C5b-9, kompleks terminalnog komplementa (TCC)) na površini ciljne ćelije. Kada se u membrane ciljnih ćelija uvuče dovoljan broj MAC-a, obrazuju se MAC pore da bi se posredovalo u brzoj osmotskoj lizi ciljnih ćelija..

[0009] Kao što je prethodno razmotreno, C3a i C5a su anafilatoksini. Oni mogu pokrenuti degranulaciju mastocitnih ćelija, čime se oslobađa histamin i drugi medijatori zapaljenja, što dovodi do kontrakcije glatkih mišića, povećane vaskularne permeabilnosti, aktivacije leukocita i ostalih inflamatornih fenomena, uključujući ćelijsku proliferaciju, koja dovodi do hipercelularnosti. C5a, takođe, deluje kao hemotaktični peptid, koji služi da privuče granulocite, kao što su, neutrofili, eozinofili i bazofili, i monocite na poziciju aktivacije komplementa.

[0010] Aktivnost C5a reguliše plazmatski enzim karboksipeptidaza N, koji odstranjuje karboksiterminalni arginin iz C5a, čime se obrazuje C5a-des-Arg derivat. C5a-des-Arg ispoljava samo 1% anafilaktičke aktivnosti i polimorfonuklearne hemotaktičke aktivnosti nemodifikovanog C5a.

[0011] Budući da ispravno funkcionisanje sistema komplementa obezbeđuje snažnu odbranu od infektivnih mikroorganizama, neodgovarajuća regulacija ili aktivacija komplementa uključena je u patogenezu brojnih poremećaja, koji uključuju, npr., reumatoidni artritis (RA); lupusni nefritis; ishemijsko-reperfuziono oštećenje; paroksizmalnu noćnu hemoglobinuriju (PNH); atipični hemolitičko-uremijski sindrom (aHUS); bolest gustog depozita (DDD); makularnu degeneraciju (npr., makularna degeneracija, povezana sa starenjem (AMD)); sindrom hemolize, povišenih nivoa jetrenih enzima i niskih nivoa trombocita (HELLP), trombotičnu trombocitopenijsku purpuru (TTP); spontane gubitke fetusa; Pauci-imuni vaskulitis; epidermolizu bulozu; rekurentni gubitak fetusa; multiplu sklerozu (MS); traumatsko oštećenje mozga i oštećenja, koja proističu iz infarkta miokarda, kardiopulmonalnog bajpasa i hemodijalize (vidi, npr., NPL1). Sledstveno tome, inhibicija prekomernih ili nekontrolisanih aktivacija kaskade komplementa, može proizvesti klinički povoljne efekte kod pacijenta sa navedenim poremećajima.

[0012] Paroksizmalna noćna hemoglobinurija (PNH) je retki poremećaj krvi, u kome crvena krvna zrnca bivaju narušena, i, sledstveno tome, razgrađuju se mnogo brže od normalnih crvenih krvnih zrnaca. PNH je posledica klonske ekspanzije hematopoetskih stem ćelija sa somatskim mutacijama u genu PIG-A (fosfatidilinozitol glikan klase A), koji je lociran na X hromozomu. Mutacije u PIG-A dovode do rane blokade u sintezi glikozilfosfatidilinozitola (GPI), molekula, koji je neophodan za usidravanje mnogih proteina za ćelijske površine. Sledstveno tome, ćelije krvi u PNH su deficijentne u GPI-usidrenim proteinima, koji uključuju komplementregulatorne proteine CD55 i CD59. Pod normalnim okolnostima, ovi komplement-regulatorni proteini blokiraju formiranje MAC-a na površinama ćelija, sprečavajući, na taj način, lizu eritrocita. Odsustvo GPI-usidrenih proteina ima za posledicu hemolizu, posredovanu komplementom, u PNH.

[0013] PNH je karakterisana hemolitičkom anemijom (smanjeni broj crvenih krvnih ćelija), hemoglobinurijom (prisustvo hemoglobina u urinu, posebno uočljivo nakon spavanja) i hemoglobinemijom (prisustvo hemoglobina u cirkulaciji). Poznato je da pojedinci, koji boluju od PNH imaju paroksizme, koji se ovde definišu kao slučajevi tamno-prebojenog urina. Hemolitička anemija je posledica intravaskularne razgradnje crvenih krvnih zrnaca posredstvom komponenti komplementa. Ostali poznati simptomi uključuju: disfaziju, umor, erektilnu disfunkciju, trombozu i rekurentni bol u abdomenu.

[0014] Ekulizumab je humanizovano monoklonsko antitelo, usmereno prema proteinu komplementa C5, i predstavlja prvu terapiju, koja je odobrena za lečenje paroksizmalne noćne hemoglobinurije (PNH) i atipičnog hemolitičko-uremijskog sindroma(aHUS) (vidi, npr., NPL2). Ekulizumab vrši inhibiciju cepanja C5 na C5a i C5b, posredstvom C5 konvertaze, čime se sprečava proizvodnja terminalnog kompleksa komplementa C5b-9. I C5a i C5b-9 izazivaju terminalna komplementom-posredovana dešavanja, koja su karakteristična za PNH i aHUS (vidi, takođe, PTL3, PTL4, PTL5 i PTL6).

[0015] Postoji nekoliko prikaza koji opisuju anti-C5 antitela. Na primer, PTL7 opisuje anti-C5 antitelo koje se vezuje za alfa lanac C5, ali se ne vezuje za C5a, i vrši blokladu aktivacije C5, dok PTL8 opisuje anti-C5 monoklonsko antitelo, koje opisuje formiranje C5a. S druge strane. PTL9 opisuje anti-C5 antitelo, koje prepoznaje proteolitički položaj za C5 konvertazu na alfa lancu C5, i inhibira konverziju C5 u C5a i C5b. PTL10 opisuje anti-C5 antitelo, koje poseduje konstantu afiniteta od najmanje 1 X 10<7>M<-1>. Prikazani su režimi doziranja za anti-C5 antitela (vidi, PTL14, PTL15, PTL16 i NPL6).

[0016] Antitela (IgG) se vezuju za neonatalni Fc receptor (FcRn), i imaju duga vremena retencije u plazmi. Vezivanje IgG za FcRn se obično zapaža pod uslovima kisele reakcije (npr., pH 6.0), a retko se zapaža pod neutralnim uslovima (npr., pH 7.4). Uobičajeno se IgG nespecifično ugrađuju u ćelije, posredstvom endocitoze, a na ćelijske površine se vraćaju putem vezivanja za endozomalni FcRn, pod kiselim uslovima u endozomima. Nakon toga dolazi do disocijacije IgG-a iz FcRn, pod neutralnim uslovima u plazmi. IgG koji se ne uspeju vezati za FcRn, razgrađuju se u lizozomima. Kada se sposobnost vezivanja IgG za FcRn pod kiselim uslovima, ukloni putem uvođenja mutacija u njegov Fc region, IgG se ne reciklira iz endozoma u plazmu, što dovodi do upadljivog narušavanja plazmatske retencije IgG-a. Da bi se poboljšala retencija IgG u plazmi, prikazan je postupak koji povećava njihovo vezivanje za FcRn, pod uslovima kisele reakcije. Kada se vezivanje IgG za FcRn pod uslovima kisele reakcije poboljša uvođenjem aminokiselinske supstitucije u njegov Fc region, IgG se mnogo efikasnije reciklira iz endozoma u plazmu, ispoljavajući, na taj način, poboljšanu plazmatsku retenciju. Prikazano je, međutim, da IgG sa povećanim vezivanjem za FcRn pod uslovima neutralne reakcije, takođe, ne disocira iz FcRn, pod neutralnim uslovima u plazmi, čak i kada se vrati na površinu ćelije, posredstvom njegovog vezivanja za FcRn, pod uslovima kisele reakcije u endozomima, tako da, sledstveno tome, njegova retencija u plazmi ostaje nepromenjena, ili se, pre, pogoršava (vidi, npr., NPL3; NPL4; NPL5).

[0017] Nedavno su prikazana antitela koja se za antigene vezuju na način, nezavisan od vrednosti pH (vidi, npr., PTL11 i PTL12). Ova antitela se snažno vezuju za antigene pod neutralnim uslovima u plazmi, a disociraju iz antigena pod endozomalnim kiselim uslovima. Nakon disocijacije iz antigena, antitela ponovo postaju sposobna za vezivanje sa antigenima, nakon recikliranja iz plazme, posredstvom FcRn. Sledstveno tome, jedan molekul antitela se može ponovljeno vezivati za više molekula antigena. Uopšteno, plazmatska retencija antigena je mnogo kraća od retencije antitela, koje poseduje prethodno-pomenuti mehanizam recikliranja, uz posredovanje FcRn. Stoga, kada se antigen vezuje za antitelo, antigen, normalno, pokazuje produženo vreme retencije u plazmi, što za posledicu ima povećenu koncentraciju antigena u plazmi. S druge strane, prikazano je kako prethodno-opisana antitela, koja se za antigene vezuju na pH-nezavisan način, odstranjuju antigene iz plazme mnogo brže od uobičajenih antitela, budući da ona disociraju iz antigena unutar endozoma, tokom procesa recikliranja, uz posredovanje FcRn. U PTL13, je, takođe, opisana analiza kompjuterskog modelovanja, koja pokazuje da bi antitelo sa pH-nezavisnim vezivanjem, usmerenim prema C5, moglo produžiti uklanjanje antigena.

[Spisak citata]

[Patentna literatura]

[0018]

[PTL1] US Patent No.6,355,245

[PTL2] US Patent No.7,432,356

[PTL3] WO 2005/074607

[PTL4] WO 2007/106585

[PTL5] WO 2008/069889

[PTL6] WO 2010/054403

[PTL7] WO 95/29697

[PTL8] WO 2002/30985

[PTL9] WO 2004/007553

[PTL10] WO 2010/015608

[PTL11] WO 2009/125825

[PTL12] WO 2011/122011

[PTL13] WO 2011/111007

[PTL14] WO 2017/123636

[PTL15] EP 2975055 A1

[PTL16] WO 2016/098356

[Ne-Patentna literatura]

[0019]

[NPL1] Holers et al., Immunol. Rev.223:300-316 (2008)

[NPL2] Dmytrijuk et al., The Oncologist 13(9):993-1000 (2008)

[NPL3] Yeung et al., J Immunol.182(12): 7663-7671 (2009)

[NPL4] Datta-Mannan et al., J Biol. Chem.282(3):1709-1717 (2007)

[NPL5] Dall’Acqua et al., J. Immunol.169(9):5171-5180 (2002)

[NPL6] Fukuzawa et al., Sci Rep.7(1): 1080 (2017)

[Suština pronalaska]

[0020] Pronalazak obezbeđuje farmaceutske kompozicije za korišćenje u lečenju ili prevenciji bolesti, povezane sa C5.

[0021] Vršena su istraživanja efektivnijih i bezbednijih dozaža i primena anti-C5 antitela, namenjenih korišćenju u lečenju i/ili prevenciji bolesti, povezanih sa C5, kojima se, takođe, smanjuje opterećenje pacijenata. Polazeći od takvog stanovišta, utvrđeno je da primena niže doze najmanje jednom pre primene više doze u dugim intervalima, pruža povoljne efekte za lečenje ili prevenciju bolesti, povezane sa C5, uz korišćenje subkutanog davanja anti-C5 antitela.

[0022] Takođe su ispitani pogodni uslovi za doziranje, koji uključuju dozu antitela, učestalost i intervale subkutanih primena.

[0023] Specifično, ovaj pronalazak se odnosi na:

[1] Farmaceutsku kompoziciju, koja je formulisana za subkutano injiciranje, koja obuhvata anti-C5 antitelo, koje obuhvata VH sekvencu od SEQ ID NO: 2 i VL sekvencu od SEQ ID NO: 6, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije bolesti povezane sa C5, koja je odabrana iz grupe koju čine: reumatoidni artritis (RA); lupusni nefritis; ishemijskoreperfuziono oštećenje; paroksizmalna noćna hemoglobinurija (PNH), atipični hemolitičkouremijski sindrom (aHUS), bolest gustog depozita (DDD); makularna degeneracija; sindrom hemolize, povišenih nivoa jetrenih enzima i niskih trombocita (HELLP); trombotična trombocitopenijska purpura (TTP); spontani gubitak ploda; Pauci-imuni vaskulitis; bulozna epidermoliza; rekurentni gubici ploda; multipla skleroza (MS); traumatsko oštećenje mozga; oštećenje proisteklo iz infarkta miokarda, kardiopulmonalnog bajpasa ili hemodijalize; refraktorna generalizovana mijastenia gravis (gMG) i neuromijelitis optika (NMO),

pri čemu se kompozicija primenjuje subkutano u dve faze, nakon primene farmaceutske kompozicije formulisane za intravensko injiciranje, koja obuhvata anti-C5 antitelo, pri čemu u obe faze subkutane primene postoji interval između svake dve subkutane primene,

pri čemu svaka faza obuhvata najmanje jedan interval,

pri čemu je doza antitela za intravensko davanje 1,000 mg,

pri čemu se prva subkutana primena iz prve faze primenjuje 0 do 8 dana nakon završne primene intravenski primenjene farmaceutske kompozicije,

pri čemu je doza antitela u subkutanoj primeni iz prve faze 170 mg ili 340 mg,

pri čemu se farmaceutska kompozicija primenjuje u prvoj fazi jedanput svake nedelje (nedeljno),

i pri čemu se farmaceutska kompozicija za subkutanu primenu primenjuje u drugoj fazi četiri nedelje u dozi od 680 mg.

[2] Farmaceutsku formulaciju za upotrebu [1], pri čemu je broj potkožnih administracija u prvoj fazi 1 do 12.

[Kratak opis slika]

[0024]

[Sl. 1]

Paneli A i B na Slici 1 prikazuju promene plazmatske koncentracije 305LO15 kod cynomolgus majmuna, tokom vremena, nakon subkutane injekcije (A) ili intravenske injekcije (B) antitela 305LO15. Plazmatska koncentracija 305LO15 je izmerena posredstvom ELISA testa. Svaka tačka predstavlja srednju vrednost određivanja kod tri mužjaka ili tri ženke pod (A) i srednju vrednost određivanja kod šest mužjaka ili šest ženki pod (B).

[Sl. 2]

Slika 2 prikazuje promenu plazmatske koncentracije 305LO15 kod cynomolgus majmuna, sa protokom vremena, tokom koga su majmunima date inicijalna intravenska injekcija 305LO15 i, nakon nje, subkutane injekcije održavanja 305LO15. Plazmatska koncentracija 305LO15 je izmerena posredstvom ELISA testa. Svaka tačka predstavlja srednju vrednost određivanja kod pet mužjaka ili pet ženki.

[Sl. 3A]

Slika 3A je grafik na kome su plazmatske koncentracije slobodnog C5 iscrtane u odnosu na svaku plazmatsku koncentraciju antitela za svaku naznačenu doznu količinu i put primene. IV, intravenska injekcija; SC, subkutana injekcija.

[Sl. 3B]

Slika 3B je grafik na kome su izmerene aktivnosti komplementa iscrtane u odnosu na svaku plazmatsku koncentraciju antitela za svaku naznačenu doznu količinu i put primene. IV, intravenska injekcija; SC, subkutana injekcija.

[Sl. 4A]

Slika 4A prikazuje simulirana vremenska kretanja plazmatske koncentracije 305LO15 u režimima doziranja, koji su dizajnirani za Deo 1 kliničke studije. IV, intravenska injekcija; SC, subkutana injekcija.

[Sl. 4B]

Slika 4B prikazuje simulirana vremenska kretanja plazmatske koncentracije 305LO15 u režimu doziranja, koji je dizajniran za Deo 2 kliničke studije. SC, subkutana injekcija; QW, primena jednom svake nedelje.

[Sl. 4C]

Slika 4C prikazuje simulirana vremenska kretanja plazmatske koncentracije 305LO15 u režimima doziranja, koji su dizajnirani za Deo 3 kliničke studije. SC, subkutana injekcija; QW, primena jednom svake nedelje; Q2W, primena jednom svake dve nedelje; Q4W, primena jednom svake četiri nedelje.

[Sl. 5]

Slika 5 prikazuje profil imunokompleksa, koji se obrazuju sa ekulizumabom (ECZ), humanim C5 (hC5) i/ili 305LO15, koji su analizirani posredstvom in vitro hromatografije sa isključivanjem prema veličini, pri pH 7.4 (gore) i pri pH 6.0 (dole).

[Sl. 6]

Slika 6 prikazuje pojedinačne utvrđene i simulirane profile plazmatskih koncentracija 305LO15 prema vremenu kod zdravih ispitanika, koji su primili dozu od 75 mg IV infuzijom (tokom 60 minuta). Sivo-zasenčena površina predstavlja 95%-tni predikcioni interval simuliranog profila koncentracije 305LO15 prema vremenu. Puna linija, označena strelicom, predstavlja simuliranu medijanu profila koncentracije 305LO15 prema vremenu. Isprekidana linija označava prag PD od 40 mikro g/mL.

[Sl. 7]

Slika 7 prikazuje pojedinačne utvrđene i simulirane profile plazmatskih koncentracija 305LO15 prema vremenu kod zdravih ispitanika, koji su primili dozu od 125 mg IV infuzijom (tokom 60 minuta). Sivo-zasenčena površina predstavlja 95%-tni predikcioni interval simuliranog profila koncentracije 305LO15 prema vremenu. Puna linija, označena strelicom, predstavlja simuliranu medijanu profila koncentracije 305LO15 prema vremenu. Isprekidana linija označava prag PD od 40 mikro g/mL.

[Sl. 8]

Slika 8 prikazuje pojedinačne utvrđene i simulirane profile plazmatskih koncentracija 305LO15 prema vremenu kod zdravih ispitanika, koji su primili dozu od 100 mg SC putem. Sivozasenčena površina predstavlja 95%-tni predikcioni interval simuliranog profila koncentracije 305LO15 prema vremenu. Puna linija, označena strelicom, predstavlja simuliranu medijanu profila koncentracije 305LO15 prema vremenu. Za simulacije, provedene davanjem jedne SC doze od 100 mg, očekivana bioraspoloživost je bila 90%. Isprekidana linija označava prag PD od 40 mikro g/mL.

[Sl. 9]

Slika 9 prikazuje odnos između plazmatskih koncentracija 305LO15 i hemolitičke aktivnosti (LIA), nakon jedne IV infuzije ili SC injekcije, primenjene zdravim ispitanicima. Kriva odnosa doze i odgovora ex vivo LIA dobijena je korišćenjem uzoraka humane plazme, kojima su dodavane različite koncentracije 305LO15.

[Sl. 10A]

Slika 10A prikazuje vremenski profil serumskih nivoa LDH kod pacijenta sa PNH, pacijenta X, koji je primio IV dozu od 375 mg 305LO151. dana, IV dozu od 500 mg 305LO158. dana, IV dozu od 1000 mg 305LO1522. dana, SC dozu od 170 mg 305LO1536. dana i SC dozu od 170 mg 305LO1543. dana, u Delu 2 studije.

[Sl. 10B]

Slika 10B prikazuje vremenski profil hemolitičke aktivnosti (LIA) kod pacijenta sa PNH, pacijenta X, koji je primio IV dozu od 375 mg 305LO151. dana, IV dozu od 500 mg 305LO158. dana, IV dozu od 1000 mg 305LO1522. dana, SC dozu od 170 mg 305LO1536. dana i SC dozu od 170 mg 305LO1543. dana u Delu 2 studije.

[Sl. 11]

Slika 11 prikazuje optimizovani režim SC doziranja u Delu 3 Studije BP39144.

[Opis ostvarenja]

[0025] Tehnike i procedure, koje su ovde opisane ili navedene u referencama, uopšteno su dobro poznate i široko primenjene, pri korišćenju konvencionalnih postupaka, od strane stručnjaka u ovoj oblasti, kao što su, na primer, široko korišćene metodologije, opisane u: Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)); serije Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); i Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993).

I. Definicije

[0026] "Interval" (interval između pojedinačnih primena) označava razmak između primena n-te doze (n je ceo broj od 1 ili više) i primene (n+1) doze.

II. Farmaceutska kompozicija za subkutano injiciranje

[0027] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije bolesti povezane sa C5. Farmaceutska kompozicija je formulisana za subkutano injiciranje, i obuhvata anti-C5 antitelo, pri čemu se kompozicija primenjuje subkutano u dve faze, pri čemu u obe faze postoji interval između svake dve subkutane primene,

pri čemu svaka faza obuhvata najmanje jedan interval, i pri čemu je u prvoj fazi

i) najmanje jedan interval kraći od najmanje jednog intervala u drugoj fazi, i

ii) doza antitela po primeni je niža ili ista kao što je doza antitela pri primeni u drugoj fazi.

[0028] Subkutano injiciranje se može izvesti korišćenjem konvencionalnih uređaja i postupaka za administraciju farmaceutske kompozicije u potkožno tkivo injekcijom. Takođe se mogu odabrati specifična sredstva i postupci za subkutano injiciranje.

Primeri anti-C5 antitela

[0029] Naziv "anti-C5 antitelo" ili "antitelo koje se vezuje za C5" odnosi se na antitelo koje se može vezivati za C5 sa dovoljnim afinitetom vezivanja, tako da je antitelo od koristi kao terapeutsko sredstvo u ciljanom delovanju na C5.

[0030] U jednom aspektu, anti-C5 antitela inhibiraju aktivaciju C5. U određenim ostvarenjima, anti-C5 antitela sprečavaju cepanje C5, da bi se obrazovali C5a i C5b, čime se sprečava razvoj anafilaktičke aktivnosti, povezane sa C5a, kao što se sprečava i sastavljanje kompleksa koji napada membranu C5b-9 (MAC), koji je povezan sa C5b. U određenim ostvarenjima, anti-C5 antitela blokiraju konverziju C5 u C5a i C5b, posredstvom C5 konvertaze. U određenim ostvarenjima, anti-C5 antitela blokiraju pristup C5 konvertaze položaju cepanja na C5. U određenim ostvarenjima, anti-C5 antitela blokiraju hemolitičku aktivnost, koju izaziva aktivacija C5. U daljim ostvarenjima, anti-C5 antitela inhibiraju aktivaciju C5 posredstvom klasičnog puta i/ili posredstvom alternativnog puta.

[0031] U jednom aspektu, farmaceutske kompozicije za korišćenje u postupcimaa tekućeg pronalaska od koristi su u lečenju ili prevenciji bolesti, povezane sa C5, barem delimično, na osnovu prethodno-razmotrenih aktivnosti anti-C5 antitela u vezi sa inhibicijom aktivnosti C5.

[0032] U određenim ostvarenjima, aktivnost C5 se može izmeriti kao funkcija njihove sposobnosti liziranja ćelija u telesnim tečnostima ispitanika. Sposobnost liziranja ćelija, ili redukcija iste, u odnosu na C5, može se izmeriti postupcima, koji su u ovoj oblasti, dobro poznati, kao što su, na primer, konvencionalni test hemolize, kao što je hemolitički test, koji je opisan u: Kabat i Mayer (eds) Experimental Immunochemistry, 2nd Edition, 135-240, Springfield, IL, CC Thomas (1961), strane 135-139, ili uobičajena varijacija tog testa, kao što je postupak hemolize pilećih eritrocita, kao što je, npr., opisan u Hillmen et al., N. Engl. J. Med.

350(6): 552-559 (2004). U određenim ostvarenjima, aktivnost C5, ili njena inhibicija, kvantitativno se utvrđuje korišćenjem CH50eq testa. CH50eq test predstavlja postupak za merenje ukupne aktivnosti klasičnog komplementa. Ovaj test je test litičke aktivnosti, koji koristi antitelima-senzibilisane eritrocite, kao aktivatore klasičnog puta komplementa, i razna razblaženja test seruma, kako bi se utvrdila količina, potrebna za postizavanje 50%-tne lize (CH50). Procenat hemolize može se utvrditi, primera radi, korišćenjem spektrofotometra.

CH50eq tes pruža indirektnu meru obrazovanja završnog kompleksa komplementa (TCC), budući da su TCC, sami po sebi, direktno odgovorni za izmerenu hemolizu. Inhibicija aktivacije C5, može, isto tako, biti detektovana i/ili izmerena korišćenjem postupaka koji su ovde navedeni i posredstvom primera objašnjeni u radnim primerima. Korišćenjem testova ovog ili drugog pogodnog tipa, može biti izvršen skrining kandidata antitela, koja su u stanju da inhibiraju aktivaciju inhibiting C5. U određenim ostvarenjima, inhibicija aktivacije C5 uključuje najmanje 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, ili 40%, ili veće smanjenje aktivacije C5 u testu, ako se uporedi sa efektom negativne kontrole, pod istovetnim uslovima. U nekim ostvarenjima, navedeno se odnosi na inhibiciju aktivacije C5 za najmanje 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, ili 95%, ili više.

[0033] U poželjnim ostvarenjima, epitop na anti-C5 antitelu se razlikuje od epitopa ekulizumaba.

[0034] U određenim ostvarenjima, anti-C5 antitelo, sadržano u farmaceutskoj kompoziciji, namenjenoj za korišćenje u tekućem pronalasku, vezuje se za epitop u okviru beta lanca C5. U naročitim ostvarenjima, anti-C5 antitelo se vezuje za epitop unutar okvira MG1-MG2 domena beta lanca C5. U određenim ostvarenjima, anti-C5 antitelo se vezuje za epitop u okviru fragmenta, koji je sastavljen od aminokiselina 19-180 beta lanca C5. U naročitim ostvarenjima, anti-C5 antitelo se vezuje za epitop unutar domena MG1 (aminokiseline 20-124 iz SEQ ID NO: 1) beta lanca C5. U određenim ostvarenjima, anti-C5 antitelo se vezuje za epitop unutar fragmenta, koji je sastavljen od aminokiselina 33-124 beta lanca C5 (SEQ ID NO: 1).

[0035] U određenim ostvarenjima, anti-C5 antitelo, sadržano u farmaceutskoj kompoziciji, koja je namenjena za korišćenje u ovom pronalasku, vezuje se za epitop unutar beta lanca C5, koji se sastoji od domena MG1. U naročitim ostvarenjima, anti-C5 antitelo se vezuje za epitop unutar beta lanca (SEQ ID NO: 1) C5, koji sadrži najmanje jedan fragment, odabran iz grupe, koju sačinjavaju aminokiseline 47-57, 70-76 i 107-110. U određenim ostvarenjima, anti-C5 antitelo se vezuje za epitop, koji se nalazi unutar fragmenta beta lanca (SEQ ID NO: 1) C5, koji sadrži najmanje jednu aminokiselinu, odabranu iz grupe, koju sačinjavaju: Thr47, Glu48, Ala49, Phe50, Asp51, Ala52, Thr53, Lys57, His70, Val71, His72, Ser74, Glu76, Val107, Ser108, Lys109 i His110. U naročitim ostvarenjima, anti-C5 antitelo se vezuje za epitop unutar okvira fragmenta beta lanca (SEQ ID NO: 1) C5, koji sadrži najmanje jednu aminokiselinu, odabranu iz grupe, koju sačinjavaju: Glu48, Asp51, His70, His72, Lys109 i His110. U određenim ostvarenjima, vezivanje anti-C5 antitela za mutant C5, smanjeno je u poređenju sa njegovim vezivanjem za C5 divljeg tipa, pri čemu mutant C5 poseduje najmanje jednu aminokiselinsku supstituciju na poziciji, odabranoj iz grupe, koju sačinjavaju: Glu48, Asp51, His72 i Lys109. U drugom ostvarenju, pH-zavisno vezivanje (opisano u nastavku) anti-C5 antitela za mutant C5 je smanjeno u poređenju sa njegovim pH-zavisnim vezivanjem za C5 divljeg tipa, pri čemu mutant C5 poseduje najmanje jednu aminokiselinsku supstituciju na poziciji , odabranoj iz grupe, koju sačinjavaju: His70, His72 i His110. U daljem ostvarenju, aminokiselina na poziciji, koja je odabrana od: Glu48, Asp51 i Lys109, supstituisana je sa alaninom, a aminokiselina na poziciji, koja je odabrana od: His70, His72 i His110, zamenjena je tirozinom u mutantu C5.

[0036] U drugom aspektu, anti-C5 antitela, sadržana u farmaceutskoj kompoziciji, namenjenoj za korišćenje u ovom pronalasku, mogu ispoljavati karakteristike pH-zavisnog vezivanja. Kako je ovde korišćen, izraz "pH-zavisno vezivanje" znači da antitelo ispoljava "smanjeno vezivanje za C5, pri kiselom pH, u poređenju sa njegovim vezivanjem pri neutralnom pH" (za potrebe ovog izlaganja, oba izraza se mogu koristi kao zamena jedan drugom). Na primer, antitela "sa karakteristikama pH-zavisnog vezivanja" uključuju antitela, koja se vezuju za C5, sa višim afinitetom pri neutralnom pH, nego pri kiselom pH. U naročitim ostvarenjima, antitela se vezuju za C5 sa najmanje 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000 ili više puta većim afinitetom pri neutralnom pH nego pri kiselom pH. U nekim ostvarenjima, antitela se vezuju sa C5 sa većim afinitetom pri pH 7.4, nego pri pH 5.8. U daljim ostvarenjima, antitela se vezuju za C5 sa najmanje 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000, ili više puta višim afinitetom pri pH 7.4, nego pri pH 5.8.

[0037] "Afinitet" antitela za C5, za potrebe ovog izlaganja, izražava se posredstvom vrednosti KD antitela. KD antitela se odnosi na konstantu ravnoteže disocijacije antitelo-antigen interakcije. Veća vrednost KD je za vezivanje antitela za svoj antigen, slabiji afinitet vezivanja jeste za određeni antigen. Sledstveno tome, kako je ovde korišćen, izraz "viši afinitet vezivanja pri neutralnom pH, nego pri kiselom pH" (ili ekvivalentni izraz "pH-zavisno vezivanje") označava da je KD za vezivanje antitela za C5 pri kiselom pH, veća od vrednosti KD za vezivanje antitela za C5, pri neutralnom pH. Primera radi, u okviru tekućeg pronalaska, smatra se da se antitelo vezuje za C5 sa višim afinitetom pri neutralnom pH nego pri kiselom pH, ukoliko je vrednost KD za vezivanje antitela za C5 pri kiselom pH najmanje 2 puta veća od vrednosti KD za vezivanje antitela za C5 pri neutralnom pH. Sledstveno tome, anti-C5 antitelo u ovom pronalasku uključuje antitela, koja se vezuju za C5, pri kiselom pH, sa KD, koja je najmanje 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000, ili više puta veća od KD za vezivanje antitela za C5 pri neutralnom pH. U drugom ostvarenju, vrednost KD<za vezivanje antitela pri neutralnom pH može biti 10-7>M, 10<-8>M, 10<-9>M, 10<-10>M, 10<-11>M, 10<-12>M, ili manja. U drugom ostvarenju, vrednost KD za vezivanje antitela pri kiselom pH može biti 10<-9>M, 10<-8>M, 10<-7>M, 10<-6 M>, ili viša.

[0038] U daljim ostvarenjima, smatra se da se antitelo vezuje za C5 sa višim afinitetom pri neutralnom pH nego pri kiselom pH, ukoliko je KD za vezivanje antitela za C5, pri pH 5.8, najmanje 2 puta veća od vrednosti KD za vezivanje antitela za C5, pri pH 7.4. U nekim ostvarenjima, antitela se vezuju za C5 pri pH 5.8 sa KD, koja je najmanje 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000, ili više puta veća od vrednosti KD za vezivanje antitela za C5, pri pH 7.4. U drugom ostvarenju, vrednost KD antitela pri pH 7.4 može biti 10<-7>M, 10<-8>M, 10<-9>M, 10<-10>M, 10<-11>M, 10<-12>M, ili manje. U drugom ostvarenju, vrednost KD antitela pri pH 5.8 može biti 10<-9>M, 10<-8>M, 10<-7>M, 10<-6>M, ili više.

[0039] Karakteristike vezivanja antitela za određeni antigen mogu se, takođe, izražavati posredstvom vrednosti kd antitela. Vrednost kd antitela se odnosi na konstantu brzine disocijacije antitela u odnosu na određeni antigen i izražava se u recipročnim sekundima (t.j., sek<-1>). Povećanje vrednosti kd označava slabije vezivanje antitela za svoj antigen. Ovaj pronalazak, sledstveno tome, uključuje antitela koja se vezuju za C5 sa većom vrednošću kd pri kiselom pH nego pri neutralnom pH. Antitela za tekući pronalazak uključuju antitela koja se vezuju za C5 pri kiselom pH, sa kd, koja je najmanje 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000, ili više puta veća od kd za vezivanje antitela za C5 pri neutralnom pH. U drugom ostvarenju, vrednost kd antitela pri neutralnom pH može biti 10<-2>1/s, 10<-3>1/s, 10<-4>1/s, 10<-5>1/s, 10<-6>1/s, ili manje. U drugom ostvarenju, vrednost kd antitela pri kiselom pH može biti 10<-3>1/s, 10<-2>1/s, 10<-1>1/s, ili više. Antitela za ovaj pronalazak uključuju, takođe, antitela koja se vezuju za C5, sa većom vrednošću kd pri pH 5.8, nego pri pH 7.4. Antitela za ovaj pronalazak uključuju antitela koja se vezuju za C5 pri pH 5.8 sa vrednošću kd, koja je najmanje 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000, ili više puta veća od vrednosti kd za vezivanje antitela za C5 pri pH 7.4. U drugom ostvarenju, vrednost kd antitela pri pH 7.4 može biti 10<-2>1/s, 10<-3>1/s, 10<-4>1/s, 10<-5>1/s, 10<-6>1/s, ili manje. U drugom ostvarenju, vrednost kd antitela pri pH 5.8 može biti 10<-3>1/s, 10<-2>1/s, 10<-1>1/s, ili više.

[0040] U određebim slučajevima, "smanjeno vezivanje za C5 pri kiselom pH u poređenju sa njegovim vezivanjem pri neutralnom pH" izražava se uz pomoć odnosa vrednosti KD value za vezivanje antitela za C5 pri kiselom pH prema vrednosti KD za vezivanje antitela za C5 pri neutralnom pH (ili obrnuto). Primera radi, može se smatrati da antitelo ispoljava "smanjeno vezivanje za C5 pri kiselom pH u poređenju sa njegovim vezivanjem pri neutralnom pH", za potrebe ovog pronalaska, ukoliko antitelo pokazuje odnos KD u kiselom/neutralnom, koji iznosi 2 ili više. U određenim primernim ostvarenjima, odnos KD antitela pri pH 5.8/pH 7.4 iznosi 2 ili više. U određenim primernim ostvarenjima, odnos KD antitela u kiselom/neutralnom može biti 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000, ili više. U drugom ostvarenju, vrednost za KD antitela pri neutralnom pH može biti 10<-7>M, 10<-8>M, 10<-9>M, 10<-10>M, 10<-11>M, 10<-12>M, ili manje. U drugom ostvarenju, vrednost KD antitela pri kiselom pH može biti 10<-9>M, 10<-8>M, 10<-7>M, 10<-6>M, ili više. U ostalim slučajevima, može se smatrati da antitelo ispoljava "smanjeno vezivanje za C5 pri kiselom pH u poređenju sa njegovim vezivanjem pri neutralnom pH", za potrebe ovog pronalaska, ukoliko antitelo pokazuje odnos KD pri pH 5.8/pH 7.4, koji iznosi 2 ili više. U određenim primernim ostvarenjima, odnos KD antitela pH 5.8/pH 7.4 K može biti 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000, ili više. U drugom ostvarenju, vrednost KD antitela pri pH 7.4 može biti 10<-7>M, 10<-8>M, 10<-9>M, 10<-10>M, 10<-11>M, 10<-12>M, ili manje. U drugom ostvarenju, vrednost KD antitela pri pH 5.8 može biti 10<-9>M, 10<-8>M, 10<-7>M, 10<-6>M, ili više.

[0041] U određenim slučajevima, "smanjeno vezivanje za C5 pri kiselom pH, u poređenju sa njegovim vezivanjem pri neutralnom pH" izražava se posredstvom odnosa kd vrednosti za vezivanje antitela za C5 pri kiselom pH prema kd vrednosti za vezivanje antitela za C5 pri neutralnom pH (ili obrnuto). Primera radi, može se smatrati da antitelo ispoljava " smanjeno vezivanje za C5 pri kiselom pH, u poređenju sa njegovim vezivanjem pri neutralnom pH", za potrebe ovog pronalaska, ukoliko antitelo pokazuje odnos vrednosi kd u kiselom/neutralnom koji iznosi 2 ili više. U naročitim primernim ostvarenjima, odnos vrednosti kd antitela pri pH 5.8/pH 7.4 iznosi 2 ili više. U određenim primernim opstvarenjima, odnos kd antitela u kiselom/neutralnom može biti 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000, ili više. U daljim primernim ostvarenjima, odnos vrednosti kd antitela pri pH 5.8/pH 7.4 može biti 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 400, 1000, 10000, ili više. U drugom ostvarenju, vrednost kd antitela pri neutralnom pH može biti 10<-2>1/s, 10<-3>1/s, 10<-4>1/s, 10<-5>1/s, 10<-6>1/s, ilimanje. U daljem ostvarenju, vrednost kd antitela pri pH 7.4 može biti 10<-2>1/s, 10<-3>1/s, 10<-4>1/s, 10<-5>1/s, 10<-6>1/s, ili manje. U drugom ostvarenju, vrednost kd antitela pri kiselom pH može biti 10<-3>1/s, 10<-2>1/s, 10<-1>1/s, ili više. U daljem ostvarenju, vrednost kd antitela pri pH 5.8 može biti 10<-3>1/s, 10<-2>1/s, 10<-1>1/s, ili više.

[0042] Kao što je ovde korišćen, izraz "kiseli pH" označava pH od 4.0 do 6.5. Izraz "kiseli pH" uključuje vrednosti pH koje obuhvataju bilo koju od navedenih vrednosti: 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4 i 6.5. U posebnim aspektima, "kiseli pH" je 5.8.

[0043] Kako je ovde korišćen, izraz "neutralni pH" označava pH od 6.7 do oko 10.0. Izraz "neutralni pH" obuhvata vrednosti pH koje uključuju bilo koju od navedenih vrednosti: 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 i 10.0. U pojedinim aspektima, "neutralni pH" iznosi 7.4.

[0044] Vrednosti KD i vrednosti kd, kako se ovde izražavaju, mogu se utvrditi korišćenjem biosenzora na bazi površinske plazmonske rezonance, kako bi se okarakterisale interakcije antitelo-antigen. Vrednosti KD i vrednosti kd mogu se odrediti na 25 stepeni C ili na 37 stepeni C.

[0045] U drugom aspektu, anti-C5 antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (VH), koja poseduje 100%-tnu istovetnost u odnosu aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 2. U određenim ostvarenjima tekućeg pronalaska, VH sekvenca je aminokiselinska sekvenca SEQ ID NO: 2. U određenim ostvarenjima, VH sekvence može sadržavati supstitucije (npr., konzervativne supstitucije), insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu, ali anti-C5 antitelo, koje sadrži tu sekvencu, zadržava sposobnost vezivanja za C5. U određenim ostvarenjima, ukupno 1 do 10 aminokiselina je podvrgnuto supstituciji, inserciji i/ili deleciji u SEQ ID NO: 2. U naročitim ostvarenjima, supstitucije, insercije ili delecije odvijaju se u regionima izvan HVR-a (t.j., u FR regionima). Opciono, anti-C5 antitelo sadrži VH sekvencu od SEQ ID NO: 2, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U određenom ostvarenju, VH sadrži jedan, dva ili tri HVR-a, odabrana od: (a) HVR-H1, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu iz SEQ ID NO: 3, (b) HVR-H2, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu iz SEQ ID NO: 4 i (c) HVR-H3, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu iz SEQ ID NO: 5.

[0046] Kako je ovde korišćen, izraz "HVR" predstavlja "hipervarijabilni region", a izraz "FR" predstavlja "region okvira".

[0047] "Region okvira ili "FR" se odnosi na ostatke varijabilnog domena, koji se razlikuju od ostataka hipervarijabilnog regiona (HVR). FR varijabilnog domena uopšteno se sastoji od četiri FR domena: FR1, FR2, FR3 i FR4. Sledstveno tome, sekvence HVR i FR uopšteno se javljaju u sledećem nizu u VH (ili VL): FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.

[0048] Izraz "hipervarijabilni region" ili "HVR", kako je ovde korišćen, odnosi se na svaki od regiona varijabilnog domena antitela, koji je po sekvenci hipervarijabilan ("regioni koji određuju komplementarnost" ili "CDR-i") i/ili obrazuju strukturno definisane petlje ("hipervarijabilne petlje") i/ili ostatke za kontakt sa antigenom ("antigen-kontakti"). Uopšteno, antitela sadrže šest HVR-a: tri u VH (H1, H2, H3) i tri u VL (L1, L2, L3). Primeri HVR-a ovde uključuju: (a) hipervarijabilne petlje koje se pojavljuju na aminokiselinskim ostacima 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) i 96-101 (H3) (Chothia, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)); (b) CDR-e, koji se javljaju na aminokiselinskim ostacima 24-34 (L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (H2) i 95-102 (H3) (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NIH, Bethesda, MD (1991)); (c) antigene kontakte, koji se javljaju na aminokiselinskim ostacima 27c-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (H2) i 93-101 (H3) (MacCallum et al. J. Mol. Biol.262:732-745 (1996)); i (d) kombinacije navoda pod (a), (b) i/ili (c), uključujući HVR aminokiselinske ostatke 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (H2), 93-102 (H3) i 94-102 (H3). Ostaci HVR i drugi ostaci u varijabilnom domenu (npr., ostaci FR) ovde su brojčano označeni prema Kabat et al., supra.

[0049] U drugom aspektu, anti-C5 antitelo sadrži varijabilni domen lakog lanca (VL), koji poseduje 100%-tnu istovetnost sekvence u odnosu na aminokiselinsku sekvencu od SEQ ID NO: 6. U određenim ostvarenjima ovog pronalaska, VL sekvenca je aminokiselinska sekvenca SEQ ID NO: 6. U određenim ostvarenjima, sekvenca VL može sadržavati supstitucije (npr., konzervativne supstitucije), insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu, ali anti-C5 antitelo, koje sadrži tu sekvencu, zadržava sposobnost vezivanja za C5. U određenim ostvarenjima, ukupno 1 do 10 aminokiselina je podvrgnuto supstituciji, inserciji i/ili deleciji u SEQ ID NO: 6. U naročitim ostvarenjima, supstitucije, insercije ili delecije odvijaju se u regionima izvan HVR-a (t.j., u FR regionima). Opciono, anti-C5 antitelo sadrži VL sekvencu od SEQ ID NO: 6, uključujući post-translacione modifikacije te sekvence. U određenom ostvarenju, VL sadrži jedan, dva ili tri HVR-a, odabrana od: (a) HVR-L1, koji uključuje aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8; i (c) HVR-L3, koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 9.

[0050] U drugom ostvarenju, antitelo je antitelo pune dužine, npr., intaktno IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4 antitelo, ili antitelo, dobijeno inženjeringom, da bi posedovalo regione iz dva ili više IgG-a, odabrana od: IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4 unutar jednog ili više regiona sa homologijom među subklasama IgG, posredstvom rekombinacije. Antitelo može sadržavati bilo koji pogodni Fc region, koji uključuje sekvencu humanog Fc regiona (npr., Fc region humanog IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4).

Varijante Fc regiona

[0051] U određenim ostvarenjima, anti-C5 antitelo, koje je sadržano u farmaceutskoj kompoziciji, namenjenoj za korišćenje u ovom pronalasku, sadrži varijantu Fc regiona, u kojoj su jedna ili više modifikacija aminokiselina uvedene u Fc region nativne sekvence antitela. Varijanta Fc regiona može sadržavati sekvencu humanog Fc regiona (npr., Fc region humanog IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4), koja uključuje aminokiselinsku modifikaciju (npr., supstituciju), na jednoj ili više pozicija u aminokiselinama.

[0052] U određenim ostvarenjima, pronalazak razmatra varijantu antitela, koja poseduje neke, ali ne sve, efektorske funkcije, koje ih čine poželjnim kandidatom za aplikovanja u kojima je polu-život antitela in vivo važan, dok su određene efektorske funkcije (kao što su komplement i ADCC) nepotrebne ili štetne. Mogu se izvesti testovi in vitro i/ili in vivo citotoksičnosti, da bi se potvrdilo smanjenje/gubitak CDC i/ili ADCC aktivnosti. Na primer, mogu se izvesti testovi vezivanja za Fc receptor (FcR), da bi se obezbedilo odsustvo Fc gama R vezivanja (sledstveno tome i verovatni gubitak ADCC aktivnosti), ali uz zadržavanje sposobnosti vezivanja za FcRn. Primarne ćelije za provođenje ADCC, NK ćelije, ekspresuju samo Fc gama RIII, dok monociti ekspresuju Fc gama RI, Fc gama RII i Fc gama RIII. Ekspresija FcR na hematopoetskim ćelijama sažeto je prikazana u Tabeli 3, na strani 464 u Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol.

9:457-492 (1991). Ne-ograničavajući primeri in vitro testova za procenu ADCC aktivnosti molekula od značaja opisani su u US Patent No. 5,500,362 (vidi, npr., Hellstrom et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) i Hellstrom et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); US Pat. No. 5,821,337 (vidi Bruggemann et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)). Alternativno, mogu biti korišćeni postupci sa ne-radioaktivnim testovima (vidi, na primer, ACTI™ ne-radioaktivni test citotoksičnosti za protočnu citometriju (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA); i CytoTox 96 (registrovana trgovačka marka) ne-radioaktivni test citotoksičnosti (Promega, Madison, WI)). Efektorske ćelije, koje su od koristi za takve testove uključuju mkononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) i "Natural Killer" (NK) ćelije. Alternativno, ili dodatno, ADCC aktivnost molekula od značaja može biti procenjena in vivo, npr., na životinjskom modelu, kao što je onaj koji je izložen u Clynes et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998). Takođe se mogu izvršiti testovi C1q vezivanja, da bi se potvrdilo da antitelo ne može da se vezuje za C1q, te, stoga, gubi CDC aktivnost. Vidi, npr., ELISA testove C1q i C3c vezivanja u WO 2006/029879 i WO 2005/100402. Da bi se procenila aktivacija komplementa, može se izvršiti CDC test (vidi, na primer, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg et al., Blood 101:1045-1052 (2003); i Cragg et al., Blood 103:2738-2743 (2004)). Takođe se mogu izvesti testovi vezivanja za FcRn i in vivo određivanja klirensa/polu-života, uz korišćenje postupaka, poznatih u ovoj oblasti (vidi, npr., Petkova et al., Int’l. Immunol.18(12):1759-1769 (2006)).

[0053] Antitela sa smanjenom efektorskom funkcijom uključuju antitela sa supstitucijom jednog ili više ostataka Fc regiona: 238, 265, 269, 270, 297, 327 i 329 (US Patent No. 6,737,056). Takvi mutanti Fc uključuju Fc mutante sa supstitucijama na dve ili više aminokiselinskih pozicija: 265, 269, 270, 297 i 327, uključujući takozvani "DANA" Fc mutant sa supstitucijom ostataka 265 i 297 sa alaninom (US Patent No.7,332,581).

[0054] Opisane su određene varijante antitela sa unapređenim ili smanjenim vezivanjem za FcR-e. (Vidi, npr., US Patent No. 6,737,056; WO 2004/056312, i Shields et al., J. Biol. Chem.

9(2):6591-6604 (2001)).

[0055] U određenim ostvarenjima, varijanta antitela sadrži Fc region sa jednom ili više supstitucija aminokiselina, kojima se poboljšava ADCC, npr., supstitucije na pozicijama: 298, 333 i/ili 334 Fc regiona (EU brojčano označavanje ostataka).

[0056] U nekim ostvarenjima, izvršene su izmene u Fc regionu, koje dovode do izmenjenog (t.j., ili poboljšanog ili smanjenog) C1q vezivanja i/ili komplement-zavisne citotoksičnosti (CDC), kao što je npr., opisana u US Patent No. 6,194,551, WO 1999/51642 i Idusogie et al., J. Immunol.

164:4178-4184 (2000).

[0057] Antitela sa produženim polu-životima i poboljšanim vezivanjem za neonatalni Fc receptor (FcRn), koji je odgovoran za prenos maternalnih IgG u fetus (Guyer et al., J. Immunol.117:587 (1976) i Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)), opisana su u US2005/0014934 (Hinton et al.). Ta antitela sadrže Fc region sa uključenom jednom ili više supstitucija, kojima se poboljšava vezivanje Fc regiona za FcRn. Takve varijante Fc uključuju one koje poseduju supstitucije na jednom ili više ostataka Fc regiona: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 ili 434, npr., supstitucija ostatka 434 Fc regiona (US Patent No.7,371,826).

[0058] Vidi, takođe, Duncan, Nature 322:738-40 (1988); US Patent No. 5,648,260; US Patent No. 5,624,821 i WO 1994/29351, koji daju druge primere varijanti Fc regiona.

[0059] U određenim ostvarenjima, anti-C5 antitelo, koje je sadržano u farmaceutskoj kompoziciji, namenjenoj za korišćenje u ovom pronalasku, sadrži VH, kao u bilo kom od prethodno obezbeđenih ostvarenja, i konstantni region teškog lanca, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu iz bilo koje od SEQ ID NO: 10, 11, 12, 13, 14 i 15. U određenim ostvarenjima, anti-C5 antitelo sadrži VL, kao u bilo kom od prethodno navedenih ostvarenja, i konstantni region lakog lanca, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu iz bilo koje od SEQ ID NO: 16, 17 i 18.

[0060] U određenim ostvarenjima, anti-C5-antitelo za ovaj pronalazak čine antitela, koja su opisana u WO2016/098356, WO2017/123636 i WO2017/132259.

Subkutana primena

[0061] Kompozicija za korišćenje ovog pronalaska se primenjuje subkutano kroz dve faze. U obe faze, postoji interval između svaka dva subkutana primenjivanja. Svaka faza obuhvata najmanje jedan interval. Poslednji interval prve faze je između poslednjeg subkutanog primenjivanja prve faze i prvog subkutanog primenjivanja druge faze.

[0062] Adekvatan interval u prvoj fazi se može odrediti u okviru pogodnog opsega prema stanjima subjekta ili pacijenta. Specifični interval primenjivanja između subkutanih injekcija može biti 3 dana, 4 dana, 5 dana, 6 dana, 7 dana, 8 dana, 9 dana, 10 dana, 11 dana, 12 dana, ili 13 dana. U najpoželjnijim ostvarenjima, interval u prvoj fazi je 7 dana. Farmaceutska kompozicija može da se primeni jednom svake nedelje (nedeljno) u prvoj fazi.

[0063] Adekvatna dužina bar jednog intervala u drugoj fazi se može odrediti u okviru pogodnog opsega prema stanjima subjekta ili pacijenta. Primer dužine najmanje jednog intervala u drugoj fazi može biti 2 dana, 3 dana, 4 dana, 5 dana, 6 dana, 7 dana, 8 dana, 9 dana, 10 dana, 11 dana, 12 dana, 13 dana, 14 dana, 15 dana, 16 dana, 17 dana, 18 dana, 19 dana, 20 dana, 21 dan, 22 dana, 23 dana, 24 dana, 25 dana, 26 dana, 27 dana, 28 dana, 29 dana, 30 dana, 31 dan, 32 dana, 33 dana, 34 dana, ili 35 dana. U drugoj fazi, farmaceutska kompozicija može da se primeni jednom svakog meseca (mesečno). Duži rok može smanjiti teret pacijenta ili patnju.

[0064] Adekvatna doza se može odrediti unutar pogodnog opsega prema stanjima subjekta ili pacijenta.

[0065] U izvesnim ostvarenjima, specifična poželjna doza uključuje 170 mg u ovom slučaju. Farmaceutska kompozicija za primenu ovog pronalaska se primenjuje nedeljno (sa otprilike 7 dnevnim intervalom) u prvoj fazi, u dozi od 170 mg ili 340 mg.

[0066] Farmaceutska kompozicija za primenu ovog pronalaska se primenjuje četvoro-nedeljno (sa otprilike 28 dnevnim intervalom) ili mesečno, doza je 680 mg. Režim doziranja subkutanog primenjivanja 680 mg antitela četvoro-nedeljno ili mesečno bio bi posebno poželjan, jer može smanjiti teret pacijenta ili patnju.

[0067] U izvesnim ostvarenjima, doza antitela po subkutanom primenjivanju u prvoj fazi može biti četiri puta niža od doze antitela po subkutanom primenjivanju u drugoj fazi.

[0068] U izvesnim ostvarenjima, broj subkutanih primenjivanja u prvoj fazi je 1 do 12. U poželjnim ostvarenjima, broj je 5 puta do 10 puta. U sledećim poželjnim ostvarenjima, postoji 8 subkutanih primenjivanja u prvoj fazi.

[0069] U izvesnom ostvarenju, farmaceutska kompozicija može uključiti svaki farmaceutski prihvatljiv nosač koji je raspoloživ za uobičajenu kompoziciju za subkutanu injekciju. Vrsta nosača, koja će se koristiti za subkutanu injekciju može pogodno biti odabrana od nosača koji su generalno poznati u ovoj oblasti.

[0070] U izvesnom ostvarenju, formulacija farmaceutske kompozicije može biti bilo koja, izabrana iz grupe koju čine tečna, polu-čvrsta, i čvrsta. Čvrsta kompozicija je obično načinjena liofilizacijom iz tečne formulacije. Liofilizovana kompozicija se obično rekonstituiše korišćenjem vode ili slanog rastvora neposredno pre subkutane injekcije.

[0071] Gde se kompozicija za primenu ovog pronalaska primenjuje subkutano, koncentracija antiC5 antitela u tečnoj formulaciji kompozicije je određena unutar uobičajenog opsega u ovoj oblasti. U nekim ostvarenjima, volumen kompozicije za subkutanu injekciju je određen unutar uobičajenog opsega u ovoj oblasti.

[0072] U izvesnim ostvarenjima, C5-povezana bolest je komplement-posredovana bolest ili stanje, koja obuhvata višak ili nekontrolisanu aktivaciju C5. C5-povezana bolest koja će se lečiti ili sprečiti farmaceutskom kompozicijom ovog pronalaska je najmanje jedna, izdvojena iz grupe koju čine: reumatoidni artritis (RA); lupus nefritis; ishemijsko-reperfuziono oštećenje; paroksizmalna noćna hemoglobinurija (PNH); atipični hemolitički uremijski sindrom (aHUS); bolest gustih depozita (DDD); makularna degeneracija; hemoliza, povišeni enzimi jetre, i sindrom niskih trombocita (HELLP); trombotična trombocitopenijska purpura (TTP); spontani gubitak fetusa; Pauci-imuni vaskulitis; bulozna epidermoliza; gubitak fetusa koji se ponavlja; multipla skleroza (MS); traumatična povreda mozga; i oštećenje nastalo od miokardijalnog infarkta, kardioplućni bajpas ili hemodijaliza; refraktorna generalizovana mijastenija gravis (gMG); neuromijelitis optika (NMO). U poželjnom ostvarenju, C5-povezana bolest je najmanje jedna, izdvojena iz grupe koju čine: PNH, aHUS, gMG i NMO. U sledećem poželjnom ostvarenju, C5-povezana bolest je PNH.

[0073] Farmaceutska kompozicija, koja je formulisana za intravensko primenjivanje i koja sadrži anti-C5 antitelo, primenjuje se pre prvog subkutanog primenjivanja u prvoj fazi. Poželjno, anti-C5 antitelo intravenski primenjene kompozicije je isto kao anti-C5 antitelo subkutano primenjene kompozicije. Intravenski primenjena farmaceutska kompozicija je ista kao što je ovde navedena.

[0074] Kompozicija za subkutanu injekciju, koja se primenjuje subkutano istog dana ili jedan do 8 dana posle finalne doze kompozicije za intravensku injekciju, koja je primenjena intravenski. Jedna ili više doza kompozicije za intravensku injekciju može se primeniti subjektu ili pacijentu pre primenjivanja prve doze kompozicije za subkutanu injekciju. Prva doza kompozicije za subkutanu injekciju primenjuje se posle finalne doze kompozicije za intravensku injekciju.

[0075] Prvo subkutano primenjivanje prve faze se primenjuje 0 dana (tj., unutar 24 časa) do 8 dana posle finalne primene intravenski primenjene farmaceutske kompozicije.

III. Farmaceutska kompozicija za intravensku injekciju

[0076] Prvo subkutano primenjivanje u prvoj fazi farmaceutske kompozicije za primenu ovog pronalaska se odvija posle poslednje primene kompozicije za intravensko primenjivanje.

[0077] Zbog toga, kompozicija koja je formulisana za intravensku primenu i sadrži anti-C5 antitelo se primenjuje intravenski pre prve subkutane primene u prvoj fazi. U poželjnom ostvarenju, anti-C5 antitelo intravenske kompozicije je isto kao i anti-C5 antitelo subkutane kompozicije.

[0078] Nema intravenskih primena posle prve subkutane primene. Zbog toga, poslednja intravenska primena prethodi prvoj subkutanoj primeni.

[0079] Farmaceutska kompozicija koja je formulisana za intravensku injekciju u ovom pronalasku za primenu u lečenju ili sprečavanju C5-povezane bolesti, sadrži anti-C5 antitelo, i primenjuje se intravenozno. Intravenska injekcija se može dati korišćenjem redovnih uređaja i postupaka za primenjivanje farmaceutske kompozicije u venu injekcijom. Specifični uređaji i postupci za intravensu injekciju se isto tako mogu odabrati.

[0080] Anti-C5 antitelo, korišćeno u intravenskoj injekciji, može biti ma koje antitelo kako je prethodno opisano za farmaceutske kompozicije za subkutanu injekciju. Farmaceutska kompozicija za intravensku injekciju i farmaceutska kompozicija za subkutanu injekciju mogu sadržavati isto anti-C5 antitelo ili mogu sadržavati različito anti-C5 antitelo. U poželjnim ostvarenjima, anti-C5 antitelo koje se koristi u intravenskoj injekciji je isto antitelo kao ono u subkutanoj injekciji, koje je prethodno opisano.

[0081] Farmaceutska kompozicija se primenjuje intravenski u dozi od 1,000 mg.

[0082] U izvesnim ostvarenjima, broj primenjivanja farmaceutske kompozicije intravenskom injekcijom nije posebno ograničen i može biti jednom ili više puta. U poželjnim ostvarenjima, broj je jednom, dva puta, ili tri puta. U sledećim poželjnim ostvarenjima, broj puta je jednom ili dva puta. U najpoželjnijem ostvarenju, broj puta je jednom. Manji broj puta može smanjiti opterećenje pacijenta ili patnju.

[0083] U izvesnim ostvarenjima, u slučaju da se farmaceutska kompozicija ponavljano primenjuje intravenski subjektu ili pacijentu, kompozicija se primenjuje jednom na sat do jednom svakih 14 dana. Adekvatni interval primenjivanja između intravenskih injekcija se može odrediti unutar pogodnog opsega prema stanju subjekta ili pacijenta. Specifični interval primenjivanja između intravenskih injekcija je jedan sat, 2 sata, 3 sata, 4 sata, 5 sati, 6 sati, 7 sati, 8 sati, 9 sati, 10 sati, 11 sati, 12 sati, 13 sati, 14 sati, 15 sati, 16 sati, 17 sati, 18 sati, 19 sati, 20 sati, 21 sat, 22 sata, 23 sata, 24 sata, 25 sati, 26 sati, 27 sati, 28 sati, 29 sati, 30 sati, 31 sat, 32 sata, 33 sata, 34 sata, 35 sati, 36 sati, 37 sati, 38 sati, 39 sati, 40 sati, 41 sat, 42 sata, 43 sata, 44 sata, 45 sati, 46 sati, 47 sati, 48 sati, 3 dana, 4 dana, 5 dana, 6 dana, 7 dana, 8 dana, 9 dana, 10 dana, 11 dana, 12 dana, 13 dana, ili 14 dana. U poželjnim ostvarenjima, interval primenjivanja je 24 sata do 10 dana. U sledećim poželjnim ostvarenjima, interval primenjivanja je 48 sati do 7 dana. U najpoželjnijim ostvarenjima, interval primenjivanja je 3 do 5 dana.

[0084] U izvesnom ostvarenju, kompozicija može uključiti ma koji farmaceutski prihvatljiv nosač, raspoloživ za redovnu kompoziciju za intravensku injekciju. Vrsta nosača koja će se koristiti za intravensku injekciju se može prikladno izabrati od nosača koji su uopšteno poznati u ovoj stručnoj oblasti.

[0085] U izvesnim ostvarenjima, formulacija farmaceutske kompozicije može biti bilo koja, izabrana iz grupe koju čine tečna, polu-čvrsta, i čvrsta. Čvrsta kompozicija se obično pravi liofilizacijom od tečne formulacije. Liofilizovana kompozicija se obično rekonstituiše korišćenjem vode ili slanog rastvora neposredno pre intravenske injekcije. Formulacija farmaceutske kompozicije za intravensku injekciju može biti ista ili različita od formulacije farmaceutske kompozicije za subkutanu injekciju. U poželjnim ostvarenjima, formulacija farmaceutske kompozicije za intravensku injekciju je ista kao i formulacija farmaceutske kompozicije za subkutanu injekciju da bi se smanjili troškovi proizvodnje.

[0086] Kada se kompozicija primenjuje intravenski, koncentracija anti-C5 antitela u tečnoj formulaciji kompozicije se određuje unutar redovnog raspona u ovoj stručnoj oblasti. U izvesnom ostvarenju, zapremina kompozicije za intravensku injekciju se određuje unutar redovnog raspona u ovoj stručnoj oblasti.

[0087] Doza kompozicije za intravensku injekciju se primenjuje pre početne doze druge farmaceutske kompozicije koja se primenjuje subkutano. Farmaceutska kompozicija za subkutanu injekciju je ista ona koja je prethodno opisana.

[0088] U izvesnim ostvarenjima, kompozicija za intravensku injekciju se primenjuje intravenski istog dana ili jedan do 8 dana pre prve doze kompozicije za subkutanu injekciju koja se primenjuje subkutano. Subjektu ili pacijentu se može primeniti jedna ili više doza kompozicije za intravensku injekciju pre primenjivanja prve doze kompozicije za subkutanu injekciju. Poslednja doza kompozicije za intravensku injekciju se primenjuje pre prve doze kompozicije za subkutanu injekciju.

[0089] Doza kompozicije za intravensku injekciju se primenjuje 0. dana (tj., unutar 24 sata) do 8 dana pre prve doze kompozicije za subkutanu injekciju.

IV. Prebacivanje sa drugog farmakološkog proizvoda

[0090] U drugom aspektu, prethodne farmaceutske kompozicije za subkutanu ili intravensku injekciju mogu biti korisne za tretman ili prevenciju C5-povezane bolesti kod subjekta koji je bio tretiran sa bar jednim farmakološkim proizvodom za primenu u tretmanu ili prevenciji bolesti jednom ili više puta. Na primer, farmaceutska kompozicija za primenu ovog pronalaska može biti korisna za lečenje pacijenta koji ima C5-povezanu bolest, koji je primao prethodni tretman sa najmanje jednim farmakološkim proizvodom za lečenje ili prevenciju bolesti, ali se očekuje da bolje odgovori na tretman sa farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska. U takvim slučajevima, medikacija se može prebaciti sa farmakološkog proizvoda na farmaceutsku kompoziciju za primenu ovog pronalaska. U poželjnim ostvarenjima, početna doza kompozicije za intravensku injekciju u ovom pronalasku se primenjuje posle poslednje doze farmakološkog proizvoda koji se koristio u prethodnom tretmanu.

[0091] U izvesnim ostvarenjima, farmakološki proizvod obuhvata aktivnu supstancu koja se razlikuje od anti-C5 antitela u gornjoj kompoziciji za subkutanu i intravensku injekciju. U nekim ostvarenjima, aktivna supstanca farmakološkog proizvoda je siRNA koja cilja C5 mRNA, ili anti-C5 antitelo koje se razlikuje od anti-C5 antitela sadržanog u gornjoj kompoziciji za subkutanu i intravensku injekciju. U poželjnim ostvarenjima, farmakološki proizvod obuhvata antitelo koje je različito antitelo od onih u gornjoj kompoziciji za subkutanu i intravensku injekciju. U najpoželjnijem ostvarenju, antitelo sadržano u farmakološkom proizvodu koji se koristio u prethodnom tretmanu je ekulizumab ili njegovi derivati.

[0092] U izvesnim ostvarenjima, početna doza kompozicije za intravensku injekciju u ovom pronalasku se primenjuje istog dana ili jedan ili više dana nakon primenjene poslednje doze farmakološkog proizvoda. Specifični interval između poslednje doze farmakološkog proizvoda i početne doze kompozicije za intravensku injekciju ovog pronalaska je 0 dana, što znači da se početna doza kompozicije za intravensku injekciju primenjuje istog dana kada i poslednja doza farmakološkog proizvoda, 1 dan, 2 dana, 3 dana, 4 dana, 5 dana, 6 dana, 7 dana, 8 dana, 9 dana, 10 dana, 11 dana, 12 dana, 13 dana, 14 dana, 15 dana, 16 dana, 17 dana, 18 dana, 19 dana, 20 dana, ili 21 dan. U poželjnim ostvarenjima, kompozicija za intravensku injekciju ovog pronalaska se primenjuje 3 ili više dana posle poslednje doze farmakološkog proizvoda. U poželjnijim ostvarenjima, kompozicija za intravensku injekciju ovog pronalaska se primenjuje 7 ili više dana posle poslednje doze farmakološkog proizvoda. U još nekim poželjnim ostvarenjima, kompozicija za intravensku injekciju ovog pronalaska se primenjuje 14 ili više dana posle poslednje doze farmakološkog proizvoda. U najpoželjnijim ostvarenjima, kompozicija za intravensku injekciju ovog pronalaska se primenjuje 21 ili više dana posle poslednje doze farmakološkog proizvoda.

V. Postupak za lečenje ili prevenciju

[0093] Ovde su izloženi ali se ne zahtevaju postupci za lečenje ili prevenciju C5-povezane bolesti.

[0094] Postupak obuhvata subkutano primenjivanje subjektu farmaceutske kompozicije, koja je formulisana za subkutanu injekciju i sadrži anti-C5 antitelo, pri čemu se kompozicija subkutano primenjuje u dve faze, gde u obe faze postoji interval između svaka dva subkutana primenjivanja, pri čemu svaka faza sadrži najmanje jedan interval, i gde u prvoj fazi

i) najmanje jedan interval je kraći u odnosu na najmanje jedan interval u drugoj fazi, i ii) doza antitela po primenjivanju je niža od ili ista kao doza antitela po primenjivanju u drugoj fazi.

Subkutano primenjena farmaceutska kompozicija je ista kao što je ovde prethodno navedena.

[0095] Farmaceutska kompozicija formulisana za intravensko primenjivanje i koja sadrži anti-C5 antitelo, primenjuje se pre prvog subkutanog primenjivanja u prvoj fazi. Intravensko primenjivanje farmaceutske kompozicije je isto kao što je ovde prethodno navedeno.

[0096] Stanja i ciljne bolesti farmaceutske kompozicije za subkutanu ili intravensku injekciju koja se koristi u postupku su isti kao oni koji se pominju u prethodnim delovima "II. Farmaceutska kompozicija za subkutanu injekciju" i "III. Farmaceutska kompozicija za intravensku injekciju ".

VI. Vakcinacija

[0097] Infektivna bolest, npr. meningokokalne infekcije, mogu da se jave kod subjekta kome je primenjeno anti-C5 antitelo. Da bi se sprečile takve infektivne bolesti, subjekt može prethodno biti imunizovan poznatom vakcinom za lečenje ili sprečavanje bolesti, nakon ili kada se gornja kompozicija za subkutanu i intravensku injekciju primeni.

VII. Predmet proizvodnje

[0098] Obezbeđen je predmet proizvodnje ili proizvod, koji je izložen ali nije zahtevan, i koji sadrži materijale korisne za lečenje ili prevenciju prethodno opisanih C5-povezanih bolesti. Predmet proizvodnje ili proizvod obuhvata jedan ili više kontejnera i signaturu ili insert pakovanja na ili unutar kontejnera. Pogodni kontejneri uključuju, na primer, boce, ampule, špriceve, špriceve sa SC rastvorom, itd. Kontejneri mogu biti proizvedeni od raznovrsnih materijala, kao što su staklo ili plastika. U kontejneru se nalazi kompozicija koja sama ili u kombinaciji sa drugom kompozicijom efikasnom u lečenju ili sprečavanju stanja i može imati sterilan pristupni ulaz (na primer, kontejner može biti ampula koja ima čep koji se može probiti hipodermalnom injekcionom iglom). Najmanje jedan aktivan sastojak u kompoziciji je gore opisano anti-C5 antitelo. Signatura, insert pakovanja, ili sličan dokument ukazuje na to da se kompozicija koristi za lečenje stanja izbora, na primer, ma koje od gore opisanih C5-povezanih bolesti.

[0099] Kompozicija koja je sadržana u kontejneru predmeta proizvodnje ili proizvodu je formulisana za subkutanu injekciju. Predmet proizvodnje ili proizvod mogu dalje uključiti insert pakovanja koji upućuje na sledeći postupak primene. Farmaceutska kompozicija se subkutano primenjuje kroz dve faze, pri čemu u obe faze postoji interval između svaka dva subkutana primenjivanja. Svaka faza obuhvata najmanje jedan interval. U prvoj fazi i) bar jedan interval je kraći od najmanje jednog intervala u drugoj fazi, i ii) doza antitela po primenjivanju je niža od doze antitela po primenjivanju u drugoj fazi.

[0100] Predmet proizvodnje ili proizvod mogu dalje obuhvatiti dodatni kontejner sa kompozicijom koja je u njemu sadržana, pri čemu kompozicija sadrži još neki terapeutski agens. Predmet proizvodnje može dalje imati insert pakovanja koji označava da se kompozicija može koristiti za naročito stanje. Alternativno, ili dodatno, predmet proizvodnje može još uključiti još jedan dodatni kontejner koji sadrži farmaceutski prihvatljiv pufer, kao što je bakteriostatska voda za injekcije (BWFI), fosfatno-puferovan slani rastvor, Ringerov rastvor i rastvor dekstroze. Može još uključiti druge materijale, poželjne sa komercijalne i korisničke tačke gledišta, uključujući druge pufere, diluente, punjače, igle, i špriceve.

[Primeri]

[0101] Slede primeri postupaka i kompozicija pronalaska. Razume se da se mogu praktikovati raznovrsna druga ostvarenja, s obzirom na opšti opis koji je dat prethodno.

[Primer 1]

Generisanje anti-C5 antitela

[0102] Anti-C5 antitelo 305LO15 u WO2016/098356 je proizvedeno uobičajenim postupkom. Ukratko, geni koji kodiraju varijabilni domen teškog lanca (VH) za 305LO15 su kombinovani sa genima koji kodiraju modifikovani konstantni domen teškog lanca (CH) humanog IgG1 varijante SG115 (SEQ ID NO: 13). Geni koji kodiraju varijabilni domen lakog lanca (VL) za 305LO15 su kombinovani sa genima koji kodiraju konstantni domen lakog lanca (CL) (SK1, SEQ ID NO: 18). Antitela su ekspresovana u HEK293 ćelijama koje su bile ko-transfektovane sa kombinacijom ekspresionih vektora teškog i lakog lanca, i bila su prečišćena pomoću proteina A.

[Primer 2]

[0103] Proteinski farmaceutici, npr. lekovi antitela, se obično primenjuju intravenski zbog toga što je proteine teško koncentrisati. Ustvari, ekulizumab, koje je jedino odobreno antitelo koje se može nabaviti za lečenje trenutno, primenjuje se intravenski. Ukoliko postanu dostupne subkutane injekcije, smanjiće se opterećenje pacijenta, npr. ambulantni tretman i puno vremena provedenog u bolnici zbog intravenske injekcije, jer bi u tom slučaju bilo moguće samostalno davanje injekcije.

[0104] Da bi ispitali mogućnost subkutane primene anti-C5 antitela, odabrano je 305LO15 koje je izloženo u WO2016/098356 zbog njegove visoke rastvorljivosti. Smatrano je da veća rastvorljivost obezbeđuje mogućnost da se proteinski farmaceutik može primeniti u manjoj zapremini, dozvoljavajući subkutanu injekciju. Pripremljene su farmaceutske formulacije za intravensku injekciju i subkutanu injekciju, kako bi bila sledeća opšta formulacija.

170mg/mL 305LO15

30 mM histidin/asparaginska kiselina

100 mM arginin hidrohlorid

0.05% Poloksamer 188

pH 5.8

[0105] Da bi se uporedile farmakokinetike 305LO15 posle subkutane injekcije i intravenske injekcije, cinomolgus majmuni su podeljeni u dve grupe, grupa za subkutanu injekciju i grupa za intravensku injekciju. 305LO15 se subkutano primenjivao životinjama prve grupe (tri mužjaka i tri ženke) jednom svake nedelje preko dvadeset i dva puta od ukupno 40 mg/kg antitela za svako doziranje. Plazmatske 305LO15 koncentracije su tim životinjama određivane korišćenjem ELISA testa u vremenskim tačkama prikazanim na Slici 1a.305LO15 je intravenski primenjivan životinjama druge grupe (šest mužjaka i šest ženki) jednom svake nedelje preko pet puta od ukupno 40 mg/kg antitela za svako doziranje. Plazmatske 305LO15 koncentracije su tim životinjama određivane korišćenjem ELISA testa u vremenskim tačkama prikazanim na Slici 1b.

[0106] Kako je prikazano na Slici 1a, plazma 305LO15 koncentracija kod cinomolgus majmuna raste sa subkutanim injekcijama, potvrđujući da se 305LO15 može primeniti putem subkutane injekcije za terapiju. Stopa početnog rasta koncentracije u plazmi posle inicijalne doze je niža kod subkutane primene (Slika 1a) u odnosu na intravensku injekciju (Slika 1b).

[Primer 3]

[0107] Sledeće, istraženo je da li relativno sporija stopa porasta plazmatske koncentracije posle početne doze subkutanom injekcijom može biti kompenzovana intravenskom injekcijom 305LO15. Intravenski je cinomolgus majmunima, pet mužjaka i pet ženki, primenjena početna doza 305LO15 jednom u dozi od 100 mg/kg antitela. Nedelju dana posle početne intravenske primene, otpočele su subkutane injekcije 305LO15. Ukupno je dato subkutanih injekcija dvadeset šest puta, tempom jednom nedeljno u dozi od 40 mg/kg antitela za svaku dozu.

[0108] Kako je prikazano na Slici 2, stopa porasta plazma koncentracije 305LO15 je brža u slučaju kada je početna doza antitela primenjena u vidu intravenske injekcije pre doza održavanja putem subkutane injekcije nego u slučaju kada nema početne doze intravenskom injekcijom. Plazma koncentracija 305LO15 dostiže i održava se na nivou koji je uporediv sa onim prikazanim na Slici 1a. Mislilo se da ovaj brži porast plazma 305LO15 koncentracije doprinosi bržem postizanju terapeutskog efekta lekom.

[Primer 4]

[0109] Da bi se odredila efikasnost plazmatske koncentracije 305LO15, određen je odnos između plazmatske koncentracije slobodnog antigena (C5) ili aktivnost komplementa i plazmatska koncentracija antitela (305LO15) kod cinomolgus majmuna.305LO15 je primenjeno intravenski (0.8 mg/kg, 4 mg/kg, ili 20 mg/kg) ili subkutano (4 mg/kg). Plazma koncentracija antitela i slobodnog C5 su izmerene ELISA-om. Aktivnost komplementa je merena testom RBC hemolize. Kako je prikazano na Slici 3, koncentracija slobodnog C5 je potisnuta na nivo manji od submikro g/mL dok se plazma koncentracija 305LO15 održava iznad 40 mikro g/mL 305LO15 (Slika 3a) i 40 mikro g/mL ili više plazmatske koncentracije 305LO15 inhibiraju aktivnost komplementa (hemoliza) na manje od 20% od polazne (tj. ne primenjuje se antitelo) (Slika 3b). Određeno je da je aktivnost komplementa potisnuta na manje od 20% od polazne (tj. nije injektovano antitelo) kada 40 mikro g/mL ili više koncentracije 305LO15 se održavaju u plazmi.

[Primer 5]

[0110] Za određivanje pogodnih doza i primenjevanje 305LO15 za održavanje efikasnih plazma 305LO15 koncentracija za klinička ispitivanja, simulacijom je predviđen tok plazmatskih 305LO15 koncentracija kod ljudi. Prvo, plazma 305LO15 koncentracije su merene tokom vremena posle primene antitela cinomolgus majmunima od 0.8, 4, 20 mg/kg antitela za svaku dozu. PK parametri cinomolgus majmuna su određeni analiziranjem podataka pomoću modela 2-kompartmenta. Primenom alometrijskog rangiranja, PK parametri čoveka su određeni na osnovu PK parametara cinomolgus majmuna. Određeni PK parametri čoveka su prikazani u Tabeli 1 (skraćenice parametara u Tabeli 1: BW, telesna težina; CL, ukupni klirens leka; F, bioraspoloživost, ili frakcija primenjene doze leka koja postaje sistemski raspoloživa; Ka, konstanta brzine apsorpcije; mAb, monoklonsko antitelo; PK, farmakokinetika; Q, međukompartmentni (među –prostorni) klirens; SC, subkutano; Vc, zapremina raspodele za centralni kompartment; Vp, zapremina raspodele za periferni kompartment).

[Tabela 1]

Parametar Jedinica Cynomolgus Čovek Komentar

majmun (alometrijski

podešen)

BW kg 3.5 70

F frakc ja 0.91 0.75 N je rang rano; uob čajeno za v soku SC

b oraspo ož vost mAb kod čoveka*

Kana h 0.0485 0.0125 N je rang rano; uob čajena vrednost za mAb kod čoveka*

VcmL/kg 46.6 46.6

Rang rano prema te esnoj tež n sa eksponentom 1 VpmL/kg 26.1 26.1

Rang rano prema te esnoj tež n sa eksponentom 1 Cl mIJh/kg 0.116 0.074

Rang rano prema te esnoj tež n sa eksponentom 0.85 Rang rano prema te esnoj tež n sa eksponentom 0.85 Q mL/h/kg 1.16 0.741

* Dirks NL, Meibohm B. Population pharmacokinetics of therapeutic monoclonal antibodies. Clin Pharmacokinet 2010; 49:633-59.

[0111] Humani PK profil je određen za svaku kohortu očekivanu u fazi 1/2 studije (Slika 4). Deo 1 studije je tako dizajniran da obuhvati tri grupe subjekata. Prva grupa je grupa subjekata kojima se 305LO15 primanjuje intravenski jednom u dozi od 75 mg/telu. Druga grupa je grupa subjekata kojima se 305LO15 primenjuje intravenski jednom u dozi od 150 mg/telu. Treća grupa je grupa subjekata kojima se 305LO15 primenjuje subkutano jednom u dozi od 170 mg/telu. Bilo je predviđeno da se plazma 305LO15 koncentracije kod subjekata koji su primili ma koju od gornjih doza ne održava iznad praga (40 mikro g/mL) duže od jedne nedelje (Slika 4a).

[0112] Deo 2 studije je bio tako dizajniran da obuhvati grupu subjekata kojima se 305LO15 primenjuje intravenski tri puta (početno u dozi od 300 mg/telu, zatim 500 mg/telu nedelju dana posle početnog primenjivanja, i na kraju 1000 mg/telu dve nedelje posle drugog primenjivanja) i, počevši dve nedelje posle poslednje intravenske primene, 305LO15 se primenjuje subkutano jednom nedeljno u dozi od 170 mg/telu. Predviđeno je da se 305LO15 koncentracija održava većom od PD praga (40 mikro g/mL) režimom doziranja za Deo 2 studije (Slika 4b).

[0113] Deo 3 je bio tako dizajniran da obuhvati tri grupe subjekata. 305LO15 se početno primenilo subjektima svih grupa intravenski jednom u dozi od 500 mg/telu. Polazeći od dana posle početnog primenjivanja, 305LO15 se primenjivalo subkutano subjektima prve grupe jednom svake nedelje u dozi od 170 mg/telu, subjektima druge grupe jednom svake dve nedelje u dozi od 340 mg/telu, i subjektima treće grupe jednom svake četiri nedelje u dozi od 600 mg/telu. Predviđeno je da se 305LO15 koncentracija održava višom od PD praga (40 mikro g/mL) u sve tri grupe Dela 3 studije (Slika 4c).

[Primer 6]

[0114] Ekulizumab se koristi za lečenje pacijenata koji boluju od PNH ili aHUS. U slučaju kada se očekuje da će 305LO15 imati poželjniji efekat od ekulizumaba kod pacijenata sa PNH ili sa aHUS, lek, koji se u terapiji primenjuje pacijentu se može prebaciti sa ekulizumaba na 305LO15. Međutim, postoji mogućnost da 305LO15 formira imunokompleks sa C5 i ekulizumabom unutar organizma, jer je epitop 305LO15 različit od onog kod ekulizumaba, tako da se 305LO15 vezuje za beta lanac C5, dok se ekulizumab vezuje za alfa lanac C5. Formiranje ovakvog imunokompleksa može dovesti do abnormalne aktivacije, i zbog toga je poželjno izbeći ga koliko je god moguće.

[0115] Da se istraži da li 305LO15 formira imunokompleks sa ekulizumabom (ECZ, sekvenca teškog lanca je prikazana u SEQ ID NO: 19 i sekvenca lakog lanca je prikazana u SEQ ID NO: 20) i humanim C5 (hC5, SEQ ID NO: 21), izvedena je in vitro analiza korišćenjem hromatografije isključivanja na osnovu veličine (SEC). hC5 je pripremljen prema postupku izloženom u WO2016/098356. ECZ, hC5, i 305LO15 su podvrgnuti dijalizi naspram DPBS pH7.4 za pufersku izmenu. Zatim, ECZ i hC5 su pomešani i inkubirani na 37 stepeni C u toku 3-4 sata. Posle inkubacije, 305LO15 se dodaje u ovu mešavinu, koja sadrži ECZ i hC5. Konačna koncentracija ECZ i hC5 je podešena na 200 mikro g/mL, i 305LO15 koncentracija je podešena na 0, 25, 125, 250 ili 1250 mikro g/mL. Posle inkubiranja ovih mešavina na 37 stepeni C tokom 3-4 sata, izvedena je SEC analiza na pH7.4 i na pH6.0. Specifični SEC uslovi su navedeni u nastavku.

HPLC sistem: Waters Alliance e2695 HPLC sistem

Kolona: TSKgel G4000SWXI,

Temp. kolone: 25 stepeni C

Eluent: 50 mM Na-PB/300 mM NaCl, pH7.4 ili pH6.0

Brzina protoka: 0.5 mL/min

Detekcija: 220 nm UV apsorpcija

Injekcija: 10 mikro L

[0116] Kao rezultat, 305LO15 u koncentracijama od 125 do 1250 mikro g/mL nije uticao na SEC profil pri pH6.0 ali je uticao na profil pri pH7.4. Preciznije, kada je 305LO15 bio pomešan sa ECZ i hC5, pikovi velikih ECZ/hC5/305LO15 imunokompleksa koji nisu detektovani pri pH6.0, detektovani su pri pH7.4 (vidi pikova označene strelicama na Slici 5, gore), zajedno sa pikovima malih kompleksa (vidi pikove, ’2Ag+Ab’ i ’Ag+Ab’, na Slici 5, gore). Samo pikovi malih kompleksa su detektovani pri pH6.0 (vidi pikove na Slici 5, dole, koji odgovaraju ’2Ag+Ab’ i ’Ag+Ab’ na Slici 5, gore). Ovo znači da se 305LO15 vezuje za ECZ/hC5 kompleks pri pH7.4, ali ne pri pH6.0, u skladu sa karakteristikama vezivanja 305LO15 (vezivanje za hC5 pri pH7.4 ali ne pri pH6.0). Iz ovih rezultata, sugerisano je da istovremeno primenjivanje 305LO15 i ECZ subjektu može dovesti do formiranja velikih imunokompleksa u plazmi.

[Primer 7]

[0117] Studija BP39144, adaptivna faza I/II studije, procenjuje bezbednost, efikasnost, farmakokinetike (PK), i fharmakodinamije (PD) 305LO15 kod zdravih volontera i kod pacijenata koji boluju od paroksizmalne noćne hemoglobinurije (PNH).

[0118] Deo 1 Studije BP39144 (randomizovana, istraživač/subjekt slepa, adaptivna, placebokontrolisana, studija sa paralelnim grupama) ispitivao je bezbednost i tolerabilnost pojedinačnih doza 305LO15 kod zdravih volontera. Za svaku dozni nivo/kohortu, randomizovano je ukupno 5 zdravih volontera za primanje pojedinačnih intravenskih (IV; Kohorte 1 i 2) ili subkutanih (SC; Kohorta 3) primanja 305LO15 ili placeba. Studija je imala adaptivan dizajn, sa stalnim procenjivanjem podataka raspoložive bezbednosti, tolerabilnosti, PK, i PD pre početka sledećeg primenjivanja. Planirani nivoi doza za kohorte 1, 2 i 3 su bile 75 mg IV, 150 mg IV, odnosno 170 mg SC (Slika 4a). Na osnovu preliminarnog pregleda podataka PK i PD iz Kohorte 1, doze za Kohorte 2 i 3 su snižene na 125 mg IV (Kohorta 2) i 100 mg SC (Kohorta 3).

[0119] Za IV infuziju, uzorci krvi su sakupljani pre-doze, po isteku IV infuzije (1 sat), 2, 6, 12, 24, 48, 72, 96, i 144 sata posle doze, i u dane: 14, 21, 28, 35, 42, 56, 84, i 91. Za SC primenjivanje, uzorci krvi su sakupljani pre-doze, 12, 24, 48, 72, 96 i 144 sata posle doze, i u dane: 14, 21, 28, 35, 42, 56, 84, i 91.

[0120] Preliminarni rezultati bezbednosti iz Dela 1 Studije BP39144 ukazuju na to da je 305LO15 bilo dobro tolerisano u svim ispitanim doznim nivoima (75 i 125 mg IV i 100 mg SC). Raspoložive informacije o kliničkoj sigurnosti ne izazivaju značajnu zabrinutost u pogledu bezbednosti, i ne pokazuju evidenciju koja bi ukazivala na obrazac neželjenih događaja ili abnormalnosti u laboratorijskim testovima. Nije bilo nalaza vrednih pažnje ili trendova u pogledu vitalnih znakova ili 12-kanalnog elektrokardiograma ni u jednoj grupi tretmana.

[0121] Preliminarni PK rezultati za serum i profile simulirana koncentracija-vreme za 305LO15 predstavljeni su na Slici 6, Slici 7, i Slici 8. Na osnovu ovih podataka, 305LO15 PK kod zdravih subjekata je u skladu sa početnim predviđanjima humane PK zasnovanih na PK podacima za cinomolgus majmune (Primer 5). Posle IV doza, ispostavlja se da je izlaganje dozno proporcionalno između 75 do 125 mg. Određeno je da je terminalni polu-život (t1/2) za uobičajenog pacijenta telesne mase 70 kg oko 25 dana. Posle SC primenjivanja, preliminarni PK rezultati pokazuju da je pik 305LO15 izlaganju oko 7. dana i da je bioraspoloživost bila oko 90%. Posle apsorpcije, t1/2 može da se uporedi sa t1/2 IV infuzije.

[0122] Preliminarno procenjivanje odnosa izlaganje-odgovor podržava početno predviđanje, tj., otprilike je neophodno 40 mikro g 305LO15 po mL krvi da bi se postigla potpuna inhibicija komplementa (Slika 9).

[Primer 8]

[0123] Deo 2 Studije BP39144 (otvorena, više-dozna, globalno multicentrična, studija sa povećanjem intraindividualne doze) ispitivao je bezbednost i tolerabilnost u ukupnom trajanju od 5 meseci, i farmakodinamski efekat višestrukih doza 305LO15 na aktivnost komplementa u tretmanu prirodnih PNH pacijenata. U ovoj studiji je evidentirano šest PNH pacijenata. Prijavljeni pacijenti nisu bili tretirani ni sa kakvim inhibitorom komplementa niti su bili prethodno tretirani pa im je tretman zaustavljen zbog nedostatka efikasnosti na osnovu jedne misens mutacije C5 heterozigota, i imali su povećane nivoe serumske LDH (>1.5 x ULN) na skriningu (ULN: gornji limit normale).

[0124] Jedan pacijent (pacijent X) od šest pacijenata je bio PNH pacijent i kandidat za tretman sa inhibitorima komplementa. Pacijent X je primio tri jedno-ulazne IV doze; jednu infuziju sa 375 mg 305LO15 1. dana, a zatim, jednu infuziju sa 500 mg 305LO158. dana, i dalje još jednu infuziju ali sa 1000 mg 305LO1522. dana. Prvo SC primenjivanje (170 mg) je započeto 36. dana, a posle toga nedeljno (QW) SC injekcije (170 mg) 305LO15 su nastavljene tokom ukupnog trajanja tretmana od 5 meseci.

[0125] Preliminarni farmakodinamski rezultati za Pacijenta X su prikazani u Tabeli 2 i na Slici 10. Nivoi LDH, kao farmakodinamskog markera hemolize, padaju na nivoe u okvir granica normalnog opsega do 15. dana, padaju dalje do 36. dana, i održavaju se na normalizovanom nivou 43. dana (Tabela 2 i Slika 10a). Kako je prikazano u Tabeli 2 i na Slici 10b, rezultati lipozomskog imunotesta (LIA) pokazuju da je aktivnost komplementa potpuno inhibirana po isticanju infuzije početnog dana studije, 1. dana. Doza od 375 mg 305LO151. dana održava potpunu inhibiciju komplementa sve do sledeće doze od 500 mg 305LO158. dana. Doza od 500 mg 305LO15 8. dana održava potpunu inhibiciju komplementa sve do sledeće doze od 1000 mg 305LO1522. dana. Doza od 1000 mg 305LO1522. dana održava potpunu inhibiciju komplementa sve do sledeće SC doze od 170 mg 305LO15 36. dana. SC doza 36. dana održava potpunu inhibiciju komplementa 43. dana.

[0126] 305LO15 se dobro toleriše samo sa blagim abdominalnim bolom koji nije povezan sa tretmanom.

[Tabela 2]

[Primer 9]

[0127] Deo 3 Studije BP39144 (otvorena, više-dozna, globalno multicentrična studija) ispitivao je bezbednost i tolerabilnost tokom ukupnog trajanja od 5 meseci, i i farmakodinamski efekat višestrukih doza 305LO15 na aktivnost komplementa kod pacijenata sa PNH koji su na tretmanu sa ekulizumabom. U ovoj studiji 18 PNH pacijenata će biti evidentirano. Evidentirani pacijenti su kontinuirano tretirani sa ekulizumabom najmanje 3 meseca pre evidentiranja u ispitivanje i pacijenti su morali primati regularne infuzije ekulizumaba.

[0128] Jedan pacijent (pacijent Y) od 18 pacijenata je PNH pacijent tretiran sa ekulizumabom, kod koga se ekulizumab na kraju primenjivao 14 dana pre prve IV infuzije 305LO15. Pacijent Y je primio jednu IV dozu opterećenja; jednu infuziju od 1000 mg 305LO15 1. dana. Prvo SC primenjivanje (680 mg) je ostvareno 8. dana, a zatim svake 4 nedelje (Q4W) SC injekcije (680 mg) 305LO15 koje će se nastaviti davati tokom ukupnog trajanja tretmana od 5 meseci.

[0129] Preliminarni farmakodinamski rezultati za Pacijenta Y su prikazani u Tabeli 3. Nivoi LDH, kao farmakodinamskog markera hemolize, održani su na polaznim nivoima od prve doze do 43. dana (Tabela 3). Kako je prikazano u Tabeli 3, rezultati lipozomskog imunotesta (LIA) pokazuju da je aktivnost komplementa potpuno inhibirana po isticanju infuzije početnog dana studije, 1. dana. Doza od 1000 mg 305LO151. dana održava potpunu inhibiciju komplementa sve do SC doze od 680 mg 305LO158. dana. SC doza 8. dana održava potpunu inhibiciju komplementa 43. dana.

[Tabela 3]

[Primer 10]

Nalazi režima doziranja kod pacijenata sa PNH

[0130] Ovo je otvorena, više-dozna, globalno multicentrična studija sa pacijentima koji boluju od PNH koji su tretirani sa ekulizumabom (vidi, takođe ’Primer 9’). Otprilike je evidentirano osamnaest odraslih muških i ženskih PNH pacijenata koji su tretirani sa ekulizumabom. Cilj Dela 3 je određivanje optimalnog režima SC doziranja sa niskim opterećenjem pacijenata u pogledu tretmana. Svi ispitani režimi doziranja imaju za cilj da se postignu 305LO15 izlaganja koja inhibiraju aktivaciju terminalnog puta komplementa tokom ukupnog perioda doziranja. Ciljno izlaganje je definisano na osnovu dostupnih PK, PD, i podataka o efikasnosti iz Dela 2. Za sve pacijente u Delu 3, 305LO15 doziranje je otpočelo ne kasnije od dve nedelje posle poslednje doze ekulizumaba koju je pacijent primio. IV dozu opterećenja su pratile ponavljane SC doze održavanja.

[0131] Tokom Dela 3, deo početnog režima SC doziranja je izmenjen radi daljeg poboljšanja sigurnosti. Ispitana su tri različita režima SC doziranja (uključiv nedeljno [QW], dvonedeljno [Q2W], ili mesečno [Q1M] doziranje) 305LO15 (vidi Sliku 11). Pacijenti označeni kao pripadajući Kraku A, primali su SC doze od 170 mg QW 8 puta u prvoj fazi. Sa 9. SC dozom (64. dan studije) što je ujedno i prvo primenjivanje u drugoj fazi, pacijenti Kraka A otpočinju 680 mg Q4W režim održavanja. Primenjena je IV doza opterećenja, na primer, otprilike 24 časa pre prve SC doze za pacijente. U Delu 3, pacijenti primaju tretman najduže 5 meseci. U slučaju da pacijent iskusi znakove i simptome njene/njegove osnovne bolesti, kao što je prodor hemolize, koji mogu biti posledica akutnog događaja kao što je akutna bolest, trauma ili hirurška intervencija, npr., mogu se primeniti jedna ili više dodatnih IV doza 305LO15. Pre ovih IV doza, treba uraditi neplanirani Biomarker PD uzorak kako bi se ispitao osnovni uzrok prodora hemolize.

[0132] Preliminarni farmakodinamski rezultati za Pacijente Z1 i Z2 u Kraku A su prikazani u Tabeli 4. Nivoi LDH, kao farmakodinamskog markera hemolize, održani su na polaznim nivoima od prve doze do 106. dana (Tabela 4). Kako je prikazano u Tabeli 4, rezultati lipozomskog imunotesta (LIA) pokazuju da je aktivnost komplementa potpuno inhibirana po isticanju infuzije početnog dana studije, 1. dana. Doza od 1000 mg 305LO151. dana održava potpunu inhibiciju komplementa sve do SC doze od 170 mg 305LO158. dana. Od 9. SC doze (64. dan studije), ovi pacijenti su primili 680 mg Q4W kroz režim održavanja. Potpuna inhibicija komplementa (LIA [U/mL] < 10) kod Pacijenta Z2 održavana je tokom SC doza (64. dan do 106. dan). Inhibicija komplementa kod Pacijenta Z1 bila je potpuna ili dovoljna tokom SC doza (64. dan do 106. dan). Krak A režima je imao dobru toleranciju sa samo blagim neželjenim efektima (parestezija ramena kod Pacijenta Z 1, prehlada kod Pacijenta Z2) koji nisu bili povezani sa tretmanom.

[Tabela 4]

[Primer 11]

Otvorena proširena studija, OLE, kod pacijenata sa PNH

[0133] Ovo je OLE za pacijente koji su učestvovali u Delu 3 i koji su imali korist od tretmana sa 305LO15. Broj evidentiranih pacijenata nije prevazilazio broj prijavljenih u Delu 3 studije ’Primera 10’. Pacijenti, prelazeći iz Dela 3 studije, početno su ostali na istom režimu SC doze kako su primali i u Delu 3. U zavisnosti od bezbednosne urgencije, PK, i PD podataka iz Dela 3 studije, režim SC doziranja za pacijente prijavljene u OLE je prema tome prilagođavan. Trajanje tretmana je do najduže dve godine od ulaska u OLE.

SEQUENCE LISTING

<110> CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA

F. HOFFMANN-LA ROCHE AG

<120> FARMACEUTSKA KOMPOZICIJA ZA UPOTREBU U LEČENJU ILI PREVENCIJI BOLESTI POVEZANE SA C5 I POSTUPAK ZA LEČENJE

ILI PREVENCIJU BOLESTI POVEZANE SA C5

<130> C1-A1820P

<150> US 62/713,211

<151> 2018-08-01

<150> US 62/764,952

<151> 2018-08-17

<150> US 62/760,204

<151> 2018-11-13

<160> 21

<170> Patentna verzija 3.5

<210> 1

<211> 673

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Gly Leu Leu Gly Ile Leu Cys Phe Leu Ile Phe Leu Gly Lys Thr 1 5 10 15

Trp Gly Gln Glu Gln Thr Tyr Val Ile Ser Ala Pro Lys Ile Phe Arg

20 25 30

Val Gly Ala Ser Glu Asn Ile Val Ile Gln Val Tyr Gly Tyr Thr Glu 35 40 45

Ala Phe Asp Ala Thr Ile Ser Ile Lys Ser Tyr Pro Asp Lys Lys Phe 50 55 60

Ser Tyr Ser Ser Gly His Val His Leu Ser Ser Glu Asn Lys Phe Gln 65 70 75 80

Asn Ser Ala Ile Leu Thr Ile Gln Pro Lys Gln Leu Pro Gly Gly Gln

85 90 95 Asn Pro Val Ser Tyr Val Tyr Leu Glu Val Val Ser Lys His Phe Ser

100 105 110

Lys Ser Lys Arg Met Pro Ile Thr Tyr Asp Asn Gly Phe Leu Phe Ile 115 120 125

His Thr Asp Lys Pro Val Tyr Thr Pro Asp Gln Ser Val Lys Val Arg 130 135 140

Val Tyr Ser Leu Asn Asp Asp Leu Lys Pro Ala Lys Arg Glu Thr Val 145 150 155 160

Leu Thr Phe Ile Asp Pro Glu Gly Ser Glu Val Asp Met Val Glu Glu

165 170 175

Ile Asp His Ile Gly Ile Ile Ser Phe Pro Asp Phe Lys Ile Pro Ser

180 185 190

Asn Pro Arg Tyr Gly Met Trp Thr Ile Lys Ala Lys Tyr Lys Glu Asp 195 200 205

Phe Ser Thr Thr Gly Thr Ala Tyr Phe Glu Val Lys Glu Tyr Val Leu 210 215 220

Pro His Phe Ser Val Ser Ile Glu Pro Glu Tyr Asn Phe Ile Gly Tyr 225 230 235 240

Lys Asn Phe Lys Asn Phe Glu Ile Thr Ile Lys Ala Arg Tyr Phe Tyr

245 250 255

Asn Lys Val Val Thr Glu Ala Asp Val Tyr Ile Thr Phe Gly Ile Arg

260 265 270

Glu Asp Leu Lys Asp Asp Gln Lys Glu Met Met Gln Thr Ala Met Gln 275 280 285

Asn Thr Met Leu Ile Asn Gly Ile Ala Gln Val Thr Phe Asp Ser Glu 290 295 300

4

Thr Ala Val Lys Glu Leu Ser Tyr Tyr Ser Leu Glu Asp Leu Asn Asn 305 310 315 320

Lys Tyr Leu Tyr Ile Ala Val Thr Val Ile Glu Ser Thr Gly Gly Phe

325 330 335

Ser Glu Glu Ala Glu Ile Pro Gly Ile Lys Tyr Val Leu Ser Pro Tyr

340 345 350

Lys Leu Asn Leu Val Ala Thr Pro Leu Phe Leu Lys Pro Gly Ile Pro 355 360 365

Tyr Pro Ile Lys Val Gln Val Lys Asp Ser Leu Asp Gln Leu Val Gly 370 375 380

Gly Val Pro Val Thr Leu Asn Ala Gln Thr Ile Asp Val Asn Gln Glu 385 390 395 400

Thr Ser Asp Leu Asp Pro Ser Lys Ser Val Thr Arg Val Asp Asp Gly

405 410 415

Val Ala Ser Phe Val Leu Asn Leu Pro Ser Gly Val Thr Val Leu Glu

420 425 430

Phe Asn Val Lys Thr Asp Ala Pro Asp Leu Pro Glu Glu Asn Gln Ala 435 440 445

Arg Glu Gly Tyr Arg Ala Ile Ala Tyr Ser Ser Leu Ser Gln Ser Tyr 450 455 460

Leu Tyr Ile Asp Trp Thr Asp Asn His Lys Ala Leu Leu Val Gly Glu 465 470 475 480

His Leu Asn Ile Ile Val Thr Pro Lys Ser Pro Tyr Ile Asp Lys Ile

485 490 495

Thr His Tyr Asn Tyr Leu Ile Leu Ser Lys Gly Lys Ile Ile His Phe

500 505 510

Gly Thr Arg Glu Lys Phe Ser Asp Ala Ser Tyr Gln Ser Ile Asn Ile 515 520 525

Pro Val Thr Gln Asn Met Val Pro Ser Ser Arg Leu Leu Val Tyr Tyr 530 535 540

Ile Val Thr Gly Glu Gln Thr Ala Glu Leu Val Ser Asp Ser Val Trp 545 550 555 560

Leu Asn Ile Glu Glu Lys Cys Gly Asn Gln Leu Gln Val His Leu Ser

565 570 575

Pro Asp Ala Asp Ala Tyr Ser Pro Gly Gln Thr Val Ser Leu Asn Met

580 585 590

Ala Thr Gly Met Asp Ser Trp Val Ala Leu Ala Ala Val Asp Ser Ala 595 600 605

Val Tyr Gly Val Gln Arg Gly Ala Lys Lys Pro Leu Glu Arg Val Phe 610 615 620

Gln Phe Leu Glu Lys Ser Asp Leu Gly Cys Gly Ala Gly Gly Gly Leu 625 630 635 640

Asn Asn Ala Asn Val Phe His Leu Ala Gly Leu Thr Phe Leu Thr Asn

645 650 655

Ala Asn Ala Asp Asp Ser Gln Glu Asn Asp Glu Pro Cys Lys Glu Ile

660 665 670

Leu

<210> 2

<211> 123

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 2

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val His Ser Ser

20 25 30

Tyr Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45

Val Gly Ala Ile Phe Thr Gly Ser Gly Ala Glu Tyr Lys Ala Glu Trp 50 55 60

Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Ser Asp Ala Gly Tyr Asp Tyr Pro Thr His Ala Met His Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 3

<211> 6

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 3

Ser Ser Tyr Tyr Met Ala

1 5

<210> 4

<211> 17

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 4

4

Ala Ile Phe Thr Gly Ser Gly Ala Glu Tyr Lys Ala Glu Trp Ala Lys 1 5 10 15

Gly

<210> 5

<211> 13

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 5

Asp Ala Gly Tyr Asp Tyr Pro Thr His Ala Met His Tyr

1 5 10

<210> 6

<211> 110

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 6

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Glu Thr Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Thr Lys Val Gly Ser Ser

85 90 95 Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 7

<211> 11

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 7

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser Leu Ala

1 5 10

<210> 8

<211> 7

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 8

Gly Ala Ser Glu Thr Glu Ser

1 5

<210> 9

<211> 12

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 9

Gln Asn Thr Lys Val Gly Ser Ser Tyr Gly Asn Thr

1 5 10

<210> 10

<211> 325

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

4

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 10

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205

4

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu

325

<210> 11

<211> 325

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 11

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

4

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125

Asp Thr Leu Tyr Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

4

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Tyr His Val Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu

325

<210> 12

<211> 325

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 12

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

4

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro

325

<210> 13

<211> 328

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 13

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160

1

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205

Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr 305 310 315 320

Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro

325

<210> 14

<211> 325

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

2

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300

Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Pro

325

<210> 15

<211> 325

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 15

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

4

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300

Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Pro

325

<210> 16

<211> 107

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 16

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Cys 50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<211> 107

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 17

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 18

<211> 107

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Veštački sintetizovana sekvenca

<400> 18

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 19

<211> 448

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Ekulizumab teški lanac

<400> 19

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe 50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 210 215 220

Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445

<210> 20

<211> 214

<212> PRT

<213> Veštačka sekvenca

<220>

<223> Ekulizumab teški lanac

<400> 20

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45

Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Asn Thr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 21

<211> 1676

<212> PRT

<213> Homo sapiens

1

Met Gly Leu Leu Gly Ile Leu Cys Phe Leu Ile Phe Leu Gly Lys Thr 1 5 10 15

Trp Gly Gln Glu Gln Thr Tyr Val Ile Ser Ala Pro Lys Ile Phe Arg

20 25 30

Val Gly Ala Ser Glu Asn Ile Val Ile Gln Val Tyr Gly Tyr Thr Glu 35 40 45

Ala Phe Asp Ala Thr Ile Ser Ile Lys Ser Tyr Pro Asp Lys Lys Phe 50 55 60

Ser Tyr Ser Ser Gly His Val His Leu Ser Ser Glu Asn Lys Phe Gln 65 70 75 80

Asn Ser Ala Ile Leu Thr Ile Gln Pro Lys Gln Leu Pro Gly Gly Gln

85 90 95

Asn Pro Val Ser Tyr Val Tyr Leu Glu Val Val Ser Lys His Phe Ser

100 105 110

Lys Ser Lys Arg Met Pro Ile Thr Tyr Asp Asn Gly Phe Leu Phe Ile 115 120 125

His Thr Asp Lys Pro Val Tyr Thr Pro Asp Gln Ser Val Lys Val Arg 130 135 140

Val Tyr Ser Leu Asn Asp Asp Leu Lys Pro Ala Lys Arg Glu Thr Val 145 150 155 160

Leu Thr Phe Ile Asp Pro Glu Gly Ser Glu Val Asp Met Val Glu Glu

165 170 175

Ile Asp His Ile Gly Ile Ile Ser Phe Pro Asp Phe Lys Ile Pro Ser

180 185 190

Asn Pro Arg Tyr Gly Met Trp Thr Ile Lys Ala Lys Tyr Lys Glu Asp 195 200 205

2

Phe Ser Thr Thr Gly Thr Ala Tyr Phe Glu Val Lys Glu Tyr Val Leu 210 215 220

Pro His Phe Ser Val Ser Ile Glu Pro Glu Tyr Asn Phe Ile Gly Tyr 225 230 235 240

Lys Asn Phe Lys Asn Phe Glu Ile Thr Ile Lys Ala Arg Tyr Phe Tyr

245 250 255

Asn Lys Val Val Thr Glu Ala Asp Val Tyr Ile Thr Phe Gly Ile Arg

260 265 270

Glu Asp Leu Lys Asp Asp Gln Lys Glu Met Met Gln Thr Ala Met Gln 275 280 285

Asn Thr Met Leu Ile Asn Gly Ile Ala Gln Val Thr Phe Asp Ser Glu 290 295 300

Thr Ala Val Lys Glu Leu Ser Tyr Tyr Ser Leu Glu Asp Leu Asn Asn 305 310 315 320

Lys Tyr Leu Tyr Ile Ala Val Thr Val Ile Glu Ser Thr Gly Gly Phe

325 330 335

Ser Glu Glu Ala Glu Ile Pro Gly Ile Lys Tyr Val Leu Ser Pro Tyr

340 345 350

Lys Leu Asn Leu Val Ala Thr Pro Leu Phe Leu Lys Pro Gly Ile Pro 355 360 365

Tyr Pro Ile Lys Val Gln Val Lys Asp Ser Leu Asp Gln Leu Val Gly 370 375 380

Gly Val Pro Val Thr Leu Asn Ala Gln Thr Ile Asp Val Asn Gln Glu 385 390 395 400

Thr Ser Asp Leu Asp Pro Ser Lys Ser Val Thr Arg Val Asp Asp Gly

405 410 415

Val Ala Ser Phe Val Leu Asn Leu Pro Ser Gly Val Thr Val Leu Glu Phe Asn Val Lys Thr Asp Ala Pro Asp Leu Pro Glu Glu Asn Gln Ala 435 440 445

Arg Glu Gly Tyr Arg Ala Ile Ala Tyr Ser Ser Leu Ser Gln Ser Tyr 450 455 460

Leu Tyr Ile Asp Trp Thr Asp Asn His Lys Ala Leu Leu Val Gly Glu 465 470 475 480

His Leu Asn Ile Ile Val Thr Pro Lys Ser Pro Tyr Ile Asp Lys Ile

485 490 495

Thr His Tyr Asn Tyr Leu Ile Leu Ser Lys Gly Lys Ile Ile His Phe

500 505 510

Gly Thr Arg Glu Lys Phe Ser Asp Ala Ser Tyr Gln Ser Ile Asn Ile 515 520 525

Pro Val Thr Gln Asn Met Val Pro Ser Ser Arg Leu Leu Val Tyr Tyr 530 535 540

Ile Val Thr Gly Glu Gln Thr Ala Glu Leu Val Ser Asp Ser Val Trp 545 550 555 560

Leu Asn Ile Glu Glu Lys Cys Gly Asn Gln Leu Gln Val His Leu Ser

565 570 575

Pro Asp Ala Asp Ala Tyr Ser Pro Gly Gln Thr Val Ser Leu Asn Met

580 585 590

Ala Thr Gly Met Asp Ser Trp Val Ala Leu Ala Ala Val Asp Ser Ala 595 600 605

Val Tyr Gly Val Gln Arg Gly Ala Lys Lys Pro Leu Glu Arg Val Phe 610 615 620

Gln Phe Leu Glu Lys Ser Asp Leu Gly Cys Gly Ala Gly Gly Gly Leu 625 630 635 640

4

Asn Asn Ala Asn Val Phe His Leu Ala Gly Leu Thr Phe Leu Thr Asn

645 650 655

Ala Asn Ala Asp Asp Ser Gln Glu Asn Asp Glu Pro Cys Lys Glu Ile

660 665 670

Leu Arg Pro Arg Arg Thr Leu Gln Lys Lys Ile Glu Glu Ile Ala Ala 675 680 685

Lys Tyr Lys His Ser Val Val Lys Lys Cys Cys Tyr Asp Gly Ala Cys 690 695 700

Val Asn Asn Asp Glu Thr Cys Glu Gln Arg Ala Ala Arg Ile Ser Leu 705 710 715 720

Gly Pro Arg Cys Ile Lys Ala Phe Thr Glu Cys Cys Val Val Ala Ser

725 730 735

Gln Leu Arg Ala Asn Ile Ser His Lys Asp Met Gln Leu Gly Arg Leu

740 745 750

His Met Lys Thr Leu Leu Pro Val Ser Lys Pro Glu Ile Arg Ser Tyr 755 760 765

Phe Pro Glu Ser Trp Leu Trp Glu Val His Leu Val Pro Arg Arg Lys 770 775 780

Gln Leu Gln Phe Ala Leu Pro Asp Ser Leu Thr Thr Trp Glu Ile Gln 785 790 795 800

Gly Val Gly Ile Ser Asn Thr Gly Ile Cys Val Ala Asp Thr Val Lys

805 810 815

Ala Lys Val Phe Lys Asp Val Phe Leu Glu Met Asn Ile Pro Tyr Ser

820 825 830

Val Val Arg Gly Glu Gln Ile Gln Leu Lys Gly Thr Val Tyr Asn Tyr 835 840 845

Arg Thr Ser Gly Met Gln Phe Cys Val Lys Met Ser Ala Val Glu Gly Ile Cys Thr Ser Glu Ser Pro Val Ile Asp His Gln Gly Thr Lys Ser 865 870 875 880

Ser Lys Cys Val Arg Gln Lys Val Glu Gly Ser Ser Ser His Leu Val

885 890 895

Thr Phe Thr Val Leu Pro Leu Glu Ile Gly Leu His Asn Ile Asn Phe

900 905 910

Ser Leu Glu Thr Trp Phe Gly Lys Glu Ile Leu Val Lys Thr Leu Arg 915 920 925

Val Val Pro Glu Gly Val Lys Arg Glu Ser Tyr Ser Gly Val Thr Leu 930 935 940

Asp Pro Arg Gly Ile Tyr Gly Thr Ile Ser Arg Arg Lys Glu Phe Pro 945 950 955 960

Tyr Arg Ile Pro Leu Asp Leu Val Pro Lys Thr Glu Ile Lys Arg Ile

965 970 975

Leu Ser Val Lys Gly Leu Leu Val Gly Glu Ile Leu Ser Ala Val Leu

980 985 990

Ser Gln Glu Gly Ile Asn Ile Leu Thr His Leu Pro Lys Gly Ser Ala 995 1000 1005

Glu Ala Glu Leu Met Ser Val Val Pro Val Phe Tyr Val Phe His 1010 1015 1020

Tyr Leu Glu Thr Gly Asn His Trp Asn Ile Phe His Ser Asp Pro 1025 1030 1035

Leu Ile Glu Lys Gln Lys Leu Lys Lys Lys Leu Lys Glu Gly Met 1040 1045 1050

Leu Ser Ile Met Ser Tyr Arg Asn Ala Asp Tyr Ser Tyr Ser Val 1055 1060 1065

Trp Lys Gly Gly Ser Ala Ser Thr Trp Leu Thr Ala Phe Ala Leu 1070 1075 1080

Arg Val Leu Gly Gln Val Asn Lys Tyr Val Glu Gln Asn Gln Asn 1085 1090 1095

Ser Ile Cys Asn Ser Leu Leu Trp Leu Val Glu Asn Tyr Gln Leu 1100 1105 1110

Asp Asn Gly Ser Phe Lys Glu Asn Ser Gln Tyr Gln Pro Ile Lys 1115 1120 1125

Leu Gln Gly Thr Leu Pro Val Glu Ala Arg Glu Asn Ser Leu Tyr 1130 1135 1140

Leu Thr Ala Phe Thr Val Ile Gly Ile Arg Lys Ala Phe Asp Ile 1145 1150 1155

Cys Pro Leu Val Lys Ile Asp Thr Ala Leu Ile Lys Ala Asp Asn 1160 1165 1170

Phe Leu Leu Glu Asn Thr Leu Pro Ala Gln Ser Thr Phe Thr Leu 1175 1180 1185

Ala Ile Ser Ala Tyr Ala Leu Ser Leu Gly Asp Lys Thr His Pro 1190 1195 1200

Gln Phe Arg Ser Ile Val Ser Ala Leu Lys Arg Glu Ala Leu Val 1205 1210 1215

Lys Gly Asn Pro Pro Ile Tyr Arg Phe Trp Lys Asp Asn Leu Gln 1220 1225 1230

His Lys Asp Ser Ser Val Pro Asn Thr Gly Thr Ala Arg Met Val 1235 1240 1245

Glu Thr Thr Ala Tyr Ala Leu Leu Thr Ser Leu Asn Leu Lys Asp 1250 1255 1260

Ile Asn Tyr Val Asn Pro Val Ile Lys Trp Leu Ser Glu Glu Gln Arg Tyr Gly Gly Gly Phe Tyr Ser Thr Gln Asp Thr Ile Asn Ala 1280 1285 1290

Ile Glu Gly Leu Thr Glu Tyr Ser Leu Leu Val Lys Gln Leu Arg 1295 1300 1305

Leu Ser Met Asp Ile Asp Val Ser Tyr Lys His Lys Gly Ala Leu 1310 1315 1320

His Asn Tyr Lys Met Thr Asp Lys Asn Phe Leu Gly Arg Pro Val 1325 1330 1335

Glu Val Leu Leu Asn Asp Asp Leu Ile Val Ser Thr Gly Phe Gly 1340 1345 1350

Ser Gly Leu Ala Thr Val His Val Thr Thr Val Val His Lys Thr 1355 1360 1365

Ser Thr Ser Glu Glu Val Cys Ser Phe Tyr Leu Lys Ile Asp Thr 1370 1375 1380

Gln Asp Ile Glu Ala Ser His Tyr Arg Gly Tyr Gly Asn Ser Asp 1385 1390 1395

Tyr Lys Arg Ile Val Ala Cys Ala Ser Tyr Lys Pro Ser Arg Glu 1400 1405 1410

Glu Ser Ser Ser Gly Ser Ser His Ala Val Met Asp Ile Ser Leu 1415 1420 1425

Pro Thr Gly Ile Ser Ala Asn Glu Glu Asp Leu Lys Ala Leu Val 1430 1435 1440

Glu Gly Val Asp Gln Leu Phe Thr Asp Tyr Gln Ile Lys Asp Gly 1445 1450 1455

His Val Ile Leu Gln Leu Asn Ser Ile Pro Ser Ser Asp Phe Leu 1460 1465 1470

Cys Val Arg Phe Arg Ile Phe Glu Leu Phe Glu Val Gly Phe Leu 1475 1480 1485

Ser Pro Ala Thr Phe Thr Val Tyr Glu Tyr His Arg Pro Asp Lys 1490 1495 1500

Gln Cys Thr Met Phe Tyr Ser Thr Ser Asn Ile Lys Ile Gln Lys 1505 1510 1515

Val Cys Glu Gly Ala Ala Cys Lys Cys Val Glu Ala Asp Cys Gly 1520 1525 1530

Gln Met Gln Glu Glu Leu Asp Leu Thr Ile Ser Ala Glu Thr Arg 1535 1540 1545

Lys Gln Thr Ala Cys Lys Pro Glu Ile Ala Tyr Ala Tyr Lys Val 1550 1555 1560

Ser Ile Thr Ser Ile Thr Val Glu Asn Val Phe Val Lys Tyr Lys 1565 1570 1575

Ala Thr Leu Leu Asp Ile Tyr Lys Thr Gly Glu Ala Val Ala Glu 1580 1585 1590

Lys Asp Ser Glu Ile Thr Phe Ile Lys Lys Val Thr Cys Thr Asn 1595 1600 1605

Ala Glu Leu Val Lys Gly Arg Gln Tyr Leu Ile Met Gly Lys Glu 1610 1615 1620

Ala Leu Gln Ile Lys Tyr Asn Phe Ser Phe Arg Tyr Ile Tyr Pro 1625 1630 1635

Leu Asp Ser Leu Thr Trp Ile Glu Tyr Trp Pro Arg Asp Thr Thr 1640 1645 1650

Cys Ser Ser Cys Gln Ala Phe Leu Ala Asn Leu Asp Glu Phe Ala 1655 1660 1665

Glu Asp Ile Phe Leu Asn Gly Cys

1670 1675

Claims (2)

Patentni zahtevi

1. Farmaceutska kompozicija, koja je formulisana za subkutano injiciranje, koja obuhvata anti-C5 antitelo, koje obuhvata VH sekvencu od SEQ ID NO: 2 i VL sekvencu od SEQ ID NO: 6, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije bolesti povezane sa C5, koja je odabrana iz grupe koju čine: reumatoidni artritis (RA); lupusni nefritis; ishemijskoreperfuziono oštećenje; paroksizmalna noćna hemoglobinurija (PNH), atipični hemolitičkouremijski sindrom (aHUS), bolest gustog depozita (DDD); makularna degeneracija; sindrom hemolize, povišenih nivoa jetrenih enzima i niskih trombocita (HELLP); trombotična trombocitopenijska purpura (TTP); spontani gubitak ploda; Pauci-imuni vaskulitis; bulozna epidermoliza; rekurentni gubici ploda; multipla skleroza (MS); traumatsko oštećenje mozga; oštećenje proisteklo iz infarkta miokarda, kardiopulmonalnog bajpasa ili hemodijalize; refraktorna generalizovana mijastenia gravis (gMG) i neuromijelitis optika (NMO),

pri čemu se kompozicija primenjuje subkutano u dve faze, nakon primene farmaceutske kompozicije formulisane za intravensko injiciranje, koja obuhvata anti-C5 antitelo, pri čemu u obe faze subkutane primene postoji interval između svake dve subkutane primene, pri čemu svaka faza obuhvata najmanje jedan interval,

pri čemu je doza antitela za intravensko davanje 1,000 mg,

pri čemu se prva subkutana primena iz prve faze primenjuje 0 do 8 dana nakon završne primene intravenski primenjene farmaceutske kompozicije,

pri čemu je doza antitela u subkutanoj primeni iz prve faze 170 mg ili 340 mg,

pri čemu se farmaceutska kompozicija primenjuje u prvoj fazi jedanput svake nedelje (nedeljno),

i pri čemu se farmaceutska kompozicija za subkutanu primenu primenjuje u drugoj fazi četiri nedelje u dozi od 680 mg.

2. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 1, pri čemu je broj potkožnih administracija u prvoj fazi 1 do 12.