RS65660B1 - Konјugati koji sadrže samozapaljive grupe i postupci povezani sa njima - Google Patents

Konјugati koji sadrže samozapaljive grupe i postupci povezani sa njima

Info

Publication number
RS65660B1
RS65660B1 RS20240697A RSP20240697A RS65660B1 RS 65660 B1 RS65660 B1 RS 65660B1 RS 20240697 A RS20240697 A RS 20240697A RS P20240697 A RSP20240697 A RS P20240697A RS 65660 B1 RS65660 B1 RS 65660B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
compound
mmol
preparation
antibody
reaction mixture
Prior art date
Application number
RS20240697A
Other languages
English (en)
Inventor
Yong Zu Kim
Yeong Soo Oh
Jeiwook Chae
Ho Young Song
Chul-Woong Chung
Yun Hee Park
Hyo Jung Choi
Kyung Eun Park
Hyoungrae Kim
Jinyeong Kim
Ji Young Min
Sung Min Kim
Byung Soo Lee
Dong Hyun Woo
Ji Eun Jun
Su In Lee
Original Assignee
Ligachem Biosciences Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ligachem Biosciences Inc filed Critical Ligachem Biosciences Inc
Publication of RS65660B1 publication Critical patent/RS65660B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6845—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a cytokine, e.g. growth factors, VEGF, TNF, a lymphokine or an interferon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)

Description

Opis
STANJE TEHNIKE
Tehnologija konjugata antitelo-lek (ADC) je ciljno orijentisana tehnologija, koja omogućava selektivnu apoptozu ćelija raka. Obično, ADC-ovi funkcionišu tako što ciljaju ćelije raka koristeći antitelo, a zatim otpuštaju toksični materijal (tj. lek) u ćeliju, čime pokreću ćelijsku smrt. Pošto ADC tehnologija omogućava da se lek tačno isporuči u ciljnu ćeliju raka i oslobodi pod određenim uslovima, dok se minimiziraju kolateralna oštećenja zdravih ćelija, ADC tehnologija povećava efikasnost terapeutskog antitela i smanjuje rizik od neželjene reakcije.
Osnovna struktura konjugata antitelo-lek je „antitelo-linker-niskomolekularni lek (toksin)”. Linker idealno omogućava leku da ispoljava efekat na ciljnu ćeliju raka, na primer, nakon što se odvoji od antitela (na primer, hidrolizom posredovanom enzimom), nakon što lek stigne u ciljnu ćeliju. Linker, takođe, igra funkcionalnu ulogu, tako što povezuje antitelo i lek. Efikasnost i toksičnost konjugata antitelo-lek stoga zavise, delimično, od stabilnosti linkera, i stoga linker igra važnu ulogu u bezbednosti leka.
Linkeri konjugata antitelo-lek mogu se grubo klasifikovati kao necepivi ili cepivi (otcepljivi). Mnogi necepivi linkeri vezani su za antitela korišćenjem tioetra, koji sadrži cistein antitela. Prikačeni lek se generalno ne može odvojiti od antitela in vivo. U slučaju široko korišćene metode tiol-maleimid, međutim, konjugat antitelo-lek je nestabilan, što može dovesti do disocijacije leka od konjugata pre ili nakon što stigne do ciljne ćelije.
Cepivi linkeri mogu biti hidrolizovani, na primer, pomoću lizozomskog enzima. Cepivi linker može da sadrži disulfidnu vezu, npr. uključujući cistein antitela. Disulfidni linker, koji omogućava disocijaciju putem reakcije razmene tiola, delimično se oslanja na unos konjugata antitelo-lek u ciljnu ćeliju i izlaganje disulfida citozolu, koji je redukciono okruženje. Pošto su različite vrste tiola (na primer, albumin i glutation) prisutne u krvi, lek može da se odvoji od antitela pre nego što stigne do cilja.
Nedavno je opisan novi pristup pravljenju konjugata antitelo-lek, koji koristi prenilaciju proteina C-terminalne sekvence amino-kiselina da bi se instalirala modifikovana izoprenoidna jedinica koja omogućava vezivanje leka ili drugog aktivnog sredstva za antitelo na blag i način specifičan za mesto (npr. vidi U.S. Patent No. 2012/0308584). Moguće je dalje usavršavanje. Lee et al. (2015), Angewandte Chemie, 54(41):12020-12024 opisuju enzimsku prenilaciju i oksimsku ligaciju za sintezu stabilnih i homogenih konjugata protein-lek za ciljanu terapiju.
U svetlu prethodno navedenog, poboljšani linkeri za konjugate antitelo-lek su poželjni.
SUŠTINA PRONALASKA
Predmetni pronalazak definisan je patentnim zahtevima. Predmetni pronalazak se u prvom aspektu odnosi na konjugat ligand-lek, koji sadrži ligand, linker i aktivno sredstvo, a koji ima formulu:
A predstavlja antitelo;
B predstavlja aktivno sredstvo;
W predstavlja -C(O)-, -C(O)NR’-, -C(O)O-, -S(O)2NR’-, -P(O)R”NR’-, -S(O)NR’- ili -PO2NR’-, u svakom slučaju gde je C(O), S ili P direktno vezan za fenilni prsten, i R’ i R” su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil, (C3-C8)cikloalkil, (C1-C8)alkoksi, (C1-C8)alkiltio, mono- ili di-(C1-C8)alkilamino, (C3-C20)heteroaril ili (C6-C20)aril;;
svaki Z nezavisno predstavlja vodonik, (C1-C8)alkil ili grupu koja povlači elektrone (kao što je amid, karboksilna kiselina, estar karboksilne kiseline, halogen, cijano ili nitro), (C1-C8)alkil, halogen, cijano ili nitro;
n je ceo broj od 1 do 3;
m je 0 ili 1;
L je linker koji kovalentno vezuje A sa W, pri čemu linker sadrži peptid koji sadrži najmanje jednu hidrofilnu amino-kiselinu;
R1i R2su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil ili (C3-C8)cikloalkil; ili R1i R2uzeti zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju (C3-C8)cikloalkilni prsten;
R3je vodonik ili karboksilna zaštitna grupa; i
svaki R4je nezavisno vodonik ili hidroksilna zaštitna grupa.
U skladu sa poželjnom realizacijom, antitelo je monoklonsko antitelo, poliklonsko antitelo, fragment antitela, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)2, Fv, jednolančani Fv („scFv”), dijatelo, linearno antitelo, bispecifično antitelo, multispecifično antitelo, himerno antitelo, humanizovano antitelo, humano antitelo ili fuzioni protein koji sadrži deo antitela koji se vezuje za antigen.
U skladu sa drugom poželjnom realizacijom, antitelo je muromonab-CD3 abciksimab, rituksimab, daklizumab, palivizumab, infliksimab, trastuzumab, etanercept, basiliksimab, gemtuzumab, alemtuzumab, ibritumomab, adalimumab, alefacept, omalizumab, efalizumab, tositumomab, bevacizumab, natalizumab, ranibizumab, eculizumab, rilonacept, certolizumab, romiplostim, AMG-531, golimumab, ustekinumab, ABT-874, belatacept, belimumab, atacicept, anti-CD20 antitelo, kanakinumab, tocilizumab, atlizumab, mepolizumab, pertuzumab, HuMax CD20, tremelimumab, ticilimumab, ipilimumab, IDEC-114, inotuzumab, aflibercept, HuMax-CD4, teplizumab, oteliksizumab, katumaksomab, anti-EpCAM antitelo IGN101, adekatumomab, oregovomab, dinutuksimab, girentuksimab, denosumab, bapineuzumab, motavizumab, efumgumab, raksibakumab, anti-CD20 antitelo, LY2469298 ili veltuzumab.
U skladu sa poželjnom realizacijom, R3i R4su svaki vodonik.
U skladu sa daljom poželjnom realizacijom, W je -C(O)NR’-, gde je C(O) vezan za fenilni prsten, a NR’ je vezan za L.
U skladu sa daljom poželjnom realizacijom, linker sadrži alkilen koji ima 1 do 100 atoma ugljenika, i ili: alkilen uključuje najmanje jednu nezasićenu vezu; alkilen uključuje najmanje jedan heteroarilen; atom ugljenika alkilena je zamenjen jednim ili više heteroatoma izabranih iz azota (N), kiseonika (O) i sumpora (S); ili je alkilen dalje supstituisan jednim ili više alkila koji imaju 1 do 20 atoma ugljenika.
U skladu sa poželjnom realizacijom, peptid sadrži alanin, aspartat, asparagin, glutamat, glutamin, glicin, lizin, ornitin, prolin, serin ili treonin.
U skladu sa daljom poželjnom realizacijom, peptid sadrži aspartat ili glutamat.
U skladu sa još jednom poželjnom realizacijom, ligand sadrži obrazac amino-kiseline koga prepoznaje izoprenoid transferaza; a tioetarska veza sadrži atom sumpora cisteina obrasca amino-kiseline.
U skladu sa poželjnom realizacijom, linker sadrži najmanje jednu izoprenilnu jedinicu.
U skladu sa drugom poželjnom realizacijom, linker sadrži jedinicu veze koju predstavljaju -(CH2)r(V(CH2)p)q-, -((CH2)pV)q-, -(CH2)r(V(CH2)p)qY-, - ((CH2)pV)q(CH2)r-, -Y(((CH2)pV)q- ili -(CH2)r(V(CH2)p)qYCH2-pri čemu:
r je ceo broj od 0 do 10;
p je ceo broj od 1 do 10;
q je ceo broj od 1 do 20;
V i Y su svaki nezavisno jednostruka veza, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, - NR23C(O)-, -NR24SO2-, ili -SO2NR25-, ili SO2NR25-; i
R21do R25su svaki nezavisno vodonik, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkil(C6-C20)aril ili (C1-C6)alkil (C3-C20)heteroaril.
U skladu sa daljom poželjnom realizacijom, linker sadrži vezujuću jedinicu koja je predstavljena bilo kojom od formula A, B, C ili D:
pri čemu:
L1je jednostruka veza ili alkilen koji ima 1 do 30 atoma ugljenika;
R11je vodonik ili alkil sa 1 do 10 atoma ugljenika; i
L2je alkilen koji ima 1 do 30 atoma ugljenika.
U skladu sa još jednom poželjnom realizacijom, linker sadrži:
V je jednostruka veza, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2-, ili -SO2NR25-, poželjno -O-;
R21do R25su svaki nezavisno vodonik, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkil(C6-C20)aril ili (C1-C6)alkil(C3-C20)heteroaril;
r je ceo broj od 1 do 10, poželjno 2 ili 3;
p je ceo broj od 0 do 10, poželjno 1 ili 2;
q je ceo broj od 1 do 20, poželjno 1 do 6; i
L1je jednostruka veza.
U skladu sa poželjnom realizacijom, aktivno sredstvo se bira između:
(a) erlotiniba, bortezomiba, fulvestranta, sutenta, letrozola, imatinib mesilata, PTK787/ZK 222584, oksaliplatina, 5-fluorouracila, leukovorina, rapamicina, lapatiniba, lonafarniba, sorafeniba, gefitiniba, AG1478, AG1571, tiotepe, ciklofosfamida, busulfana, improsulfana, piposulfana, benzodope, karbokvona, meturedope, uredope, etilenimina, altretamina, trietilenemelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida, trimetilolomelamina, bulatacina, bulatacinona, kamptotecina, topotekana, briostatin, kalistatina, CC-1065, adozelezina, karzelezina, bizelezina, kriptoficina 1, kriptoficina 8, dolastatina, duokarmicina, KW-2189, CB1-TM1, eleuterobina, pankratistatina, sarkodiktina, spongistatina, hlorambucila, hlornafazina, holofosfamida, estramustina, ifosfamida, mehloretamina, melfalana, novembicina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, uramustina, karmustina, hlorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimnustina, kaliheamicina, kaliheamicin gamma 1, kaliheamicina omega 1, dinemicina, dinemicina A, klodronata, esperamicina, neokarzinostatin hromofora, aklacinomizina, aktinomicina, antrmicina, azaserina, bleomicina, kaktinomicina, karabicina, karninomicin, karzinofilina, hromomicina, daktinomicina, daunorubicina, detorubucina, 6-diazo-5-okso-L-norleucina, doksorubicina, morfolino-doksorubicina, cijanomorfolinodoksorubicina, 2-pirolino-doksorubucina, lipozomnog doksorubicina, dezoksidoksorubicina, epirubicina, ezorubicina, marcelomicina, mitomicina C, mikofenolne kiseline, nogalamicina, olivomicina, peplomicina, potfiromicina, puromicina, kvelamicina, rodorubicina, streptomigrina, streptozocina, tubercidina, ubenimeksa, zinostatina, zorubicina, 5-fluorouracila, denopterina, metotreksata, pteropterina, trimetreksata, fludarabina, 6-merkaptopurina, tiamiprins, tiguanina, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, karmofura, citarabina, didezoksiuridina, doksifluridina, enocitabina, floksuridina, kalusterona, dromostanolon propionata, epitiostanola, mepitiostana, testolaktona, aminoglutetimida, mitotana, trilostana, folinske kiseline, aceglatona, aldofosfamid glkozida, aminolevulinske kiseline, eniluracila, amsakrina, bestrabucila, bisantrena, edatraksata, defofamina, demekolcina, dijazikvona, elfornitina, eliptinium acetata, etoglucida, galijum nitrata, hidroksiuree, lentinana, lonidainina, majtanzina, ansamitocina, mitogvazona, mitoksantrona, mopidanmola, nitraerina, pentostatina, fenameta, pirarubicina, losoksantrona, 2-etilhidrazida, prokarbazina, polisaharida-k, razoksana, rizoksina, sizofirana, spirogermanijuma, tenuazonske kiseline, triazikvona, 2,2’,2”-trihlorotrietilamina, T-2 toksina, verakurina A, roridina A, i angvidina, uretana, vindezina, dakarbazina, manomustina, mitobronitola, mitolaktola, pipobromana, gacitozina, arabinozida, ciklofosfamida, tiotepe, paklitaksela, formulacije paklitaksela sa nanočesticama projektovanim za albumin, doksetaksela, hlorambucila, gemcitabina, 6-tiogvanina, merkaptopurina, cisplatina, karboplatina, vinblastina, platine, topozida, ifosfamida, mitoksantrona, vinkristina, vinorelbina, novantrona, teniposida, edatreksata, daunomicina, aminopterina, kselode, ibandronata, CPT-11, inhibitor topoizomeraze RFS 2000, difluorometilornitina, retinoične kiseline, kapecitabina, ili farmaceutski prihvatljivih soli, solvata ili kiselina bilo kog od prethodno navedenih;
(b) monokina, limfokina, tradicionalnog polipeptidnog hormona, paratiroidnog hormona, tiroksina, relaksina, prorelaksina, glikoproteinskog hormona, folikularno stimulišućeg hormona, tiroidno stimulišućeg hormona, luteinizirajućeg hormona, faktora rasta jetre, faktora rasta fibroblasta, prolaktina, placentalnog laktogena, faktora-α nekroze tumora, faktora-β nekroze tumora, Antimilerijanskog hormona, peptida povezanog sa gonadotropinom miša, inhibina, aktivina, faktora rasta vaskularnog endotela, trombopoetina, eritropoetina, osteoinduktivnog faktora, interferona, interferona-α, interferona-β, interferonaγ, faktora stimulacije kolonija („CSF”), makrofag-CSF, granulocit-makrofag-CSF, granulocit-CSF, interleukina IL-1, IL-1 α, IL-2, IL -3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, faktora nekroze tumora, TNF-α, TNF- β, polipeptidnog faktora, LIF, seta liganda, ili kombinacije bilo kog od prethodno navedenih;
(c) toksina difterije, botulinskog toksina, toksina tetanusa, toksina dizenterije, toksina kolere, amanitina, α-amanitina, derivata amanitina, pirolobenzodijazepina, derivata pirolobenzodijazepina, tetrodotoksina, brevetoksina, cigvatoksina, ricina, AM toksina, auristatina (npr. auristatina E (MMAE), ili auristatina F (MMAF)), tubulizina, geldanamicina, majtansinoida, kaliheamicina, daunomicina, doksorubicina, metotreksata, vindezina, SG2285, dolastatina, analoga dolastatina, kriptoficina, kamptotecina, derivata kamptotecinita (SN-38), rizoksina, derivata rizoksina, CC-1065, analoga ili derivata CC-1065, duokarmicina, endiinskog antibiotika, esperamicina, epotilona, azonafida, aplidin, toksoida ili kombinacije bilo kog od prethodno navedenih;
(d) afinitetnog liganda, pri čemu je afinitetni ligand supstrat, inhibitor, stimulaciono sredstvo, neurotransmiter, radioizotop, ili kombinacija bilo kog od prethodno navedenih;
(e) radioaktivne oznake,<32>P,<35>S, fluorescentne boje, elektronski gustog reagensa, enzima, biotina, streptavidina, dioksigenina, haptena, imunogenog proteina, molekula nukleinske kiseline sa sekvencom koja je komplementarna cilju, ili kombinacije bilo kog od prethodno navedenih;
(f) imunomodulatornog jedinjenja, sredstva protiv raka, antivirusnog sredstva, antibakterijskog sredstva, sredstva protiv gljivica i sredstva protiv parazita, ili kombinacije bilo kog od prethodno navedenih;
(g) tamoksifena, raloksifena, droloksifena, 4-hidroksitamoksifena, trioksifena, keoksifena, LY117018, onapristona ili toremifena;
(h) 4(5)-imidazola, aminoglutetimida, megestrol acetata, eksemestana, letrozola ili anastrozola;
(i) flutamida, nilutamida, bikalutamida, leuprolida, goserelina ili troksacitabina;
(j) inhibitora aromataze;
(k) inhibitora protein kinaze; i
(l) inhibitora lipidne kinaze.
U skladu sa daljom poželjnom realizacijom, aktivno sredstvo se bira između antisens oligonukleotida, ribozima i vakcine i anti-angiogenog sredstva.
Predmetni pronalazak se u drugom aspektu odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži konjugat prema prvom aspektu pronalaska i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
Predmetni pronalazak se u trećem aspektu odnosi na konjugat prema prvom aspektu pronalaska za upotrebu u lečenju raka.
Predmetni pronalazak se u trećem aspektu odnosi na postupak za izradu konjugata ligand-lek prema prvom aspektu pronalaska, koji obuhvata reakciju biomolekula sa prolekom, pri čemu: biomolekul sadrži ligand i keton ili aldehid;
prolek sadrži alkoksiamin;
reakcija proizvodi oksim, čime se kovalentno povezuje ligand sa prolekom.
KRATAK OPIS CRTEŽA
Slika 1 prikazuje mehanizam aktivnog oslobađanja leka iz linkera na bazi β-glukuronida.
Slika 2 je grafik koji prikazuje hidrolizu linkera pomoću β-glukuronidaze iz eksperimentalnog primera 1.
Slika 3 je grafik koji prikazuje stabilnost u plazmi dva konjugata lek-linker iz eksperimentalnog primera 2.
Slika 4 je grafik koji prikazuje stabilnost u plazmi jedinjenja 47a, opisanog u Primeru 68.
Slika 5 je grafik koji prikazuje stabilnost u plazmi jedinjenja 49a, opisanog u Primeru 70.
Slika 6 je grafik koji prikazuje stabilnost u plazmi jedinjenja 48a, opisanog u Primeru 69.
Slika 7 sastoji se od dva panela, Slike 7A i Slike 7B. Slika 7A prikazuje strategiju za konjugaciju leka sa antitelom (DAR2). Slika 7B prikazuje strategiju za konjugaciju leka sa antitelom (DAR4).
Slika 8 pokazuje relativne in vitro aktivnosti DAR2 MMAE-konjugata, sa promenljivom dužinom PEG u linkeru, nasuprot JIMT-1 (HER2 pozitivne) i MCF7 ćelijama (HER2 negativne).
Slika 9 pokazuje relativne in vitro aktivnosti DAR4 MMAE-konjugata, koji imaju različitu PEG dužinu u delu linkera, nasuprot JIMT-1 (HER2 pozitivne) i MCF7 ćelijama (HER2 negativne).
Slika 10 pokazuje reaktivnost humane beta-glukuronidaze u DAR4 ADC-ovima, koji imaju različite tipove linkera. 12 µM ADC-a je inkubirano sa 0,01 µg humane betaglukuronidaze (R&D Systems) tokom 3 sata na 37°C.
Slika 11 pokazuje stabilnost u plazmi ADC2 i Kadcila u plazmi miša ili čoveka.
Slika 12 pokazuje stabilnost ljudske plazme ADC33 i ADC34 tokom 7 dana.
Slika 13 pokazuje PK profil Herceptina i ADC2 pacova.
Slika 14 prikazuje PK profil pacova ADC23 i ADC34.
Slika 15 pokazuje poboljšanje PK profila pacova kod ADC-a zasnovanih na MMAE zamenom linker-toksina sa 2g na 11j.
Slika 16 pokazuje poboljšanje PK profila pacova pomoću razgranate jedinice linkera. Slika 17 pokazuje uticaj polarne amino-kiseline na PK profil pacova u MMAE ADC. Slika 18 pokazuje poboljšanje PK profila pacova razgranatim linker toksinom sa ili bez polarnih amino-kiselina u ADC sa DAR2.
Slika 19 pokazuje efekte Asp u jedinici linker-toksin na PK profil pacova ADC sa DAR4.
Slika 20 pokazuje efekte Glu u jedinici linker-toksin na PK profil pacova ADC sa DAR4.
Slika 21 pokazuje in vivo efikasnost reprezentativnog tipa amina DAR4 ADC korišćenjem MMAF (ADC23) ili MMAE (ADC24).
Slika 22 pokazuje in vivo efikasnost reprezentativnog tipa amida DAR4 ADC korišćenjem MMAF (ADC34) ili MMAE (ADC33).
DETALJAN OPIS
Ovde su generalno opisani konjugati antitelo-lek (ADC). Konjugat antitelo-lek može da sadrži samozapaljivu grupu, na primer, za upotrebu u odvajanju aktivnog sredstva od ADC-a. Međutim, kao što će stručnjak u tehnici prepoznati, deo antitela takvih konjugata može biti zamenjen bilo kojim pogodnim ligandom, i stoga se opis u jednakoj meri odnosi na konjugate ligand-lek. Shodno tome, reference i diskusije o konjugatima antitelo-lek ovde treba podrazumevati, tamo gde nisu u suprotnosti sa kontekstom, kao podjednako primenljive na konjugate ligand-lek i njihove odgovarajuće intermedijere (npr. konjugate ligand-linker). U svim aspektima koji se odnose na različite konjugate ligand-lek koji su ovde stavljeni na uvid, međutim, ligand je poželjno antitelo.
U nekim realizacijama, pronalazak se odnosi na konjugat antitelo-lek, koji sadrži antitelo, linker i aktivno sredstvo (npr. lek). Linker može da sadrži O-supstituisani oksim. U poželjnim primenama, atom kiseonika oksima je supstituisan grupom koja kovalentno vezuje oksim sa aktivnim sredstvom, a atom ugljenika oksima je supstituisan grupom koja kovalentno vezuje oksim sa antitelom. U nekim realizacijama, atom ugljenika oksima je supstituisan grupom koja kovalentno vezuje oksim sa aktivnim sredstvom, a atom kiseonika oksima je supstituisan grupom koja kovalentno vezuje oksim sa antitelom. U nekim implementacijama, linker ne sadrži oksim.
Na primer, linker može da sadrži heterocikl koji je rezultat cikloadicije, kao što je supstituisani triazol, umesto oksima.
ADC može biti predstavljen formulom (I), koja sadrži antitelo (A) koje ima specifičnost vezivanja za molekul, linker i aktivno sredstvo (B), kao što je lek, toksin, ligand, sonda za detekciju, ili slično, koji imaju željenu funkciju ili aktivnost:
pri čemu
G je šećer ili šećerna kiselina, poželjno glukuronska kiselina ili njen derivat;
A predstavlja antitelo;
B predstavlja aktivno sredstvo, kao što je lek;
W predstavlja grupu koja povlači elektrone, poželjno -C(O)NR’-, gde je C(O) vezan za fenilni prsten, a NR’ je vezan za L;
svaki Z nezavisno predstavlja (C1-C8)alkil, halogen, cijano ili nitro, poželjno vodonik; n je ceo broj od 0 do 3, poželjno 3;
L sadrži lanac od 3 do 100 atoma koji kovalentno vezuje A sa W; i
R1i R2su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil ili (C3-C8)cikloalkil, poželjno vodonik, ili R1i R2uzeti zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju (C3-C8)cikloalkilni prsten.
Komponente koje povezuju A i B, uzete zajedno (tj., od L do OC(=O)), formiraju linker.
U nekim implementacijama, konjugat ima formulu:
pri čemu G predstavlja šećer, šećernu kiselinu ili modifikovani šećer, poželjno šećer ili šećernu kiselinu, najpoželjnije glukuronsku kiselinu;
A predstavlja ligand;
B predstavlja aktivno sredstvo;
W predstavlja -C(O)-, -C(O)NR’-, -C(O)O-, -S(O)2NR’-, -P(O)R”NR’-, -S(O)NR’- ili -PO2NR’-, u svakom slučaju gde je C(O), S ili P direktno vezan za fenilni prsten, a R’ i R” su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil, (C3-C8)cikloalkil, (C1-C8)alkoksi, (C1-C8)alkiltio, mono- ili di-(C1-C8)alkilamino, (C3-C20)heteroaril, ili (C6-C20)aril;
svaki Z nezavisno predstavlja vodonik, (C1-C8)alkil, ili grupu koja povlači elektrone (kao što je amid, karboksilna kiselina, estar karboksilne kiseline, halogen, cijano ili nitro), poželjno vodonik, (C1-C8)alkil, halogen, cijano ili nitro, najpoželjnije vodonik;
n je ceo broj od 1 do 3, poželjno 3;
m je 0 ili 1, poželjno 1;
L je linker (npr. koji sadrži oksim) koji kovalentno vezuje A sa W;
R1i R2su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil, ili (C3-C8)cikloalkil, poželjno vodonik, ili R1i R2uzeti zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju (C3-C8)cikloalkilni prsten.
U nekim implementacijama, konjugat ima formulu:
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu
A predstavlja ligand;
B predstavlja aktivno sredstvo;
G može predstavljati šećer, šećernu kiselinu ili modifikovani šećer, poželjno šećer ili šećernu kiselinu, najpoželjnije glukuronsku kiselinu;
W može predstavljati -C(O)-, -C(O)NR’-, -C(O)O-, -S(O)2NR’-, -P(O)R"NR’-, -S(O)NR’-, ili - PO2NR’-, u svakom slučaju gde je C(O), S ili P direktno vezan za fenilni prsten, a R’ i R” su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil, (C3-C8)cikloalkil, (C1-C8)alkoksi, (C1-C8)alkiltio, mono- ili di-(C1-C8)alkilamino, (C3-C20)heteroaril ili (C6-C20)aril;
svaki Z nezavisno predstavlja vodonik, (C1-C8)alkil, ili grupu koja povlači elektrone (kao što je amid, karboksilna kiselina, estar karboksilne kiseline, halogen, cijano ili nitro), poželjno vodonik, (C1-C8)alkil, halogen, cijano ili nitro, najpoželjnije vodonik;
n je ceo broj od 1 do 3, poželjno 3;
L predstavlja linker, koji sadrži oksim, koji kovalentno vezuje A sa W;
R1i R2su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil, ili (C3-C8)cikloalkil, poželjno vodonik, ili R1i R2uzeti zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju (C3-C8)cikloalkilni prsten.
Konjugat ligand-lek može da sadrži ligand; linker; i aktivno sredstvo, predstavljen sledećom strukturom:
pri čemu:
G predstavlja šećer ili šećernu kiselinu, poželjno glukuronsku kiselinu;
A predstavlja ligand;
B predstavlja aktivno sredstvo;
W predstavlja grupu za povlačenje elektrona, poželjno -C(O)NR’-, gde je C(O) vezan za fenilni prsten, a NR’ je vezan za L;
svaki Z nezavisno predstavlja vodonik, (C1-C8)alkil, ili grupu koja povlači elektrone (kao što je amid, karboksilna kiselina, estar karboksilne kiseline, halogen, cijano ili nitro), poželjno vodonik, (C1-C8)alkil, halogen, cijano ili nitro, najpoželjnije vodonik;
n je ceo broj od 1 do 3, poželjno 3;
L sadrži lanac od 3 do 100 atoma koji kovalentno vezuje A sa W;
R1i R2su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil, ili (C3-C8)cikloalkil, poželjno vodonik, ili R1i R2uzeti zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju (C3-C8)cikloalkilni prsten; i
delovi koji povezuju A i B, uzeti zajedno (tj., od L do OC(=O)), formiraju linker.
Konjugat ligand-lek može da sadrži ligand, linker i aktivno sredstvo, koji je predstavljen sledećom strukturom:
pri čemu:
G predstavlja šećer, šećernu kiselinu ili modifikovani šećer, poželjno šećer ili šećernu kiselinu, najpoželjnije glukuronsku kiselinu;
A predstavlja ligand;
B predstavlja aktivno sredstvo;
W predstavlja -C(O)-, -C(O)NR’-, -C(O)O-, -S(O)2NR’-, -P(O)R”NR’-, -S(O)NR’- ili -PO2NR’-, u svakom slučaju gde je C(O), S ili P direktno vezan za fenilni prsten, a R’ i R” su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil, (C3-C8)cikloalkil, (C1-C8)alkoksi, (C1-C8)alkiltio, mono- ili di-(C1-C8)alkilamino, (C3-C20)heteroaril, ili (C6-C20)aril
svaki Z nezavisno predstavlja vodonik, (C1-C8)alkil, ili grupu koja povlači elektrone (kao što je amid, karboksilna kiselina, estar karboksilne kiseline, halogen, cijano ili nitro), poželjno vodonik, (C1-C8)alkil, halogen, cijano ili nitro, najpoželjnije vodonik;
n je ceo broj od 1 do 3, poželjno 3;
m je 0 ili 1, poželjno 1;
L je linker koji kovalentno vezuje A sa W;
R1i R2su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil, ili (C3-C8)cikloalkil, poželjno vodonik, ili R1i R2uzeti zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju (C3-C8)cikloalkilni prsten.
Konjugat ligand-lek može da sadrži ligand, linker i aktivno sredstvo predstavljen sledećom strukturom:
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu
A predstavlja ligand;
B predstavlja aktivno sredstvo;
G predstavlja šećer, šećernu kiselinu ili modifikovani šećer, poželjno šećer ili šećernu kiselinu, najpoželjnije glukuronsku kiselinu;
W predstavlja -C(O)-, -C(O)NR’-, -C(O)O-, -S(O)2NR’-, -P(O)R”NR’-, -S(O)NR’- ili -PO2NR’-, u svakom slučaju gde je C(O), S ili P direktno vezan za fenilni prsten, a R’ i R” su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil, (C3-C8)cikloalkil, (C1-C8)alkoksi, (C1-C8)alkiltio, mono- ili di-(C1-C8)alkilamino, (C3-C20)heteroaril, ili (C6-C20)aril
svaki Z nezavisno predstavlja vodonik, (C1-C8)alkil, ili grupu koja povlači elektrone (kao što je amid, karboksilna kiselina, estar karboksilne kiseline, halogen, cijano ili nitro), poželjno vodonik, (C1-C8)alkil, halogen, cijano ili nitro, najpoželjnije vodonik;
n je ceo broj od 1 do 3, poželjno 3;
L predstavlja linker koji kovalentno vezuje A sa W;
R1i R2su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil, ili (C3-C8)cikloalkil, poželjno vodonik, ili R1i R2uzeti zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju (C3-C8)cikloalkilni prsten.
Linker može da sadrži šećer ili šećernu kiselinu, npr. spojena vezom podložnom enzimskom cepanju, kao što je glikozidna veza. Ovaj šećer ili šećerna kiselina je predstavljen sa G u formuli (I). Šećer ili šećerna kiselina je poželjno monosaharid. Šećer ili šećerna kiselina može biti glukuronska kiselina, ili njen derivat, koji je sposoban da se odcepi od ADC pomoću βglukuronidaze. Glukuronska kiselina, ili njen derivat, može biti predstavljena Formulom (II):
pri čemu je R3je vodonik ili karboksilna zaštitna grupa, poželjno vodonik, i svaki R4je nezavisno vodonik ili hidroksilna zaštitna grupa, poželjno vodonik.
Karboksilna zaštitna grupa može biti bilo koja pogodna zaštitna grupa za maskiranje karboksilne kiseline, npr. u organskoj sintezi, kao što su metil, metoksimetil, metiltiometil, tetrahidropiranil, benziloksimetil, fenacil, N-ftalimidometil, 2,2,2-trihloretil, 2-haloetil, 2-(p-toluensulfonil)etil, tbutil, cinamil, benzil, trifenilmetil, bis(o-nitrofenil)metil, 9-antrilmetil, 2-(9,10-diokso)antrilmetil, piperonil, 2-trimetilsililetil, trimetilsilil ili t-butildimetilsilil. U nekim implementacijama, ceo deo R3-OC(=O)- je zamenjen delom koji maskira karboksil kao što je 2-alkil-1,3-oksazolinil.
Hidroksil zaštitna grupa može biti bilo koja pogodna zaštitna grupa pogodna za maskiranje hidroksilne grupe, npr. u organskoj sintezi, kao što su acetil, metil, etoksietil, benzoil, benzil, 4-metoksibenzil, 3,4-dimetoksibenzil, tetrahidropiranil (THP), tetrahidrofuranil (THF), tercbutildimetilsilil (TBDMS), trimetilsilil (TMS), trietilsilil (TES), triizopropilsilil (TIPS), tercbutildifenilsilil (TBDPS), tri-izopropilsililoksimetil (TOM), β-metoksietoksimetil (MEM), metoksimetil (MOM), alil ili tritil.
Grupa za povlačenje elektrona W može biti -C(O)-, -C(O)NR’-, -C(O)O-, -SO2NR’-, -P(O)R”NR’-, -SONR’- ili -PO2NR’-, poželjno -C(O)NR’-, a R’ i R” mogu svaki nezavisno biti vodonik, (C1-C8)alkil, (C3-C8)cikloalkil, (C1-C8)alkoksi, (C1-Cs)alkiltio, mono- ili di-(C1-C8)alkilamino, (C3-C20)heteroaril, ili (C6-C20)aril, poželjno vodonik. U takvim primenama, W je poželjno orijentisan tako da je karbonil, fosforil, sulfonil ili sulfinil grupa direktno vezana za fenilni prsten. Kada Z predstavlja grupu koja povlači elektrone, Z može predstavljati bilo koji od delova opisanih u ovom paragrafu za W.
Linker može da sadrži grupu za povlačenje elektrona, izabranu iz -C(O)-, -C(O)NR’-, -C(O)O-, -SO2NR’-, -P(O)R”NR’-, -SONR’- i -PO2NR’-, poželjno - C(O)NR’-, pri čemu R’ i R” mogu svaki nezavisno biti vodonik, (C1-C8)alkil, (C3-C8)cikloalkil, (C1-C8)alkoksi, (C1-C8)alkiltio, mono- ili di-(C1-C8)alkilamino, (C3-C20)heteroaril, ili (C6-C20)aril, poželjno vodonik.
L i/ili linker može da sadrži supstituisani ili nesupstituisani alkilen koji ima 1 do 100 atoma ugljenika, poželjno 16 do 50 atoma ugljenika ili 50 do 100 atoma ugljenika, i zadovoljava najmanje jedan, poželjno najmanje dva, od sledećeg (i) do (iv):
(i) alkilen uključuje najmanje jednu nezasićenu vezu, poželjno 3 ili 4 dvostruke veze i nijednu trostruku vezu,
(ii) alkilen uključuje najmanje jedan heteroarilen,
(iii) najmanje jedan atom ugljenika alkilena je zamenjen sa jednim ili više heteroatoma izabranih iz azota (N), kiseonika (O) i sumpora (S), poželjno najmanje jednog azota i najmanje jednog kiseonika (npr. kao u oksimu), i
(iv) alkilen je supstituisan sa jednim ili više alkila koji imaju 1 do 20 atoma ugljenika, poželjno 2 ili 3 metila.
Na primer, L i/ili linker mogu da sadrže najmanje jednu izoprenilnu jedinicu, poželjno dve izoprenilne jedinice, svaku predstavljenu formulom (III), koja je poželjno prepoznatljiva po izoprenoid transferazi, npr. kao deo proizvoda ili supstrata izoprenoid transferaze.
U poželjnim realizacijama, cistein antitela formira tioetarsku vezu sa atomom ugljenika izoprenilne jedinice, čime kovalentno povezuje antitelo sa linkerom.
L i/ili linker može da sadrži vezujuću jedinicu formiranu reakcijom 1,3-dipolarne cikloadicije, hetero-Diels-Alderovom reakcijom, reakcijom nukleofilne supstitucije, karbonilnom reakcijom nealdolnog tipa, adicijom višestrukoj vezi ugljenik-ugljenik, reakcijom oksidacije ili klik reakcijom. Vezujuća jedinica može biti formirana reakcijom između acetilena i azida, ili karbonilnom reakcijom nealdolnog tipa, kao što je reakcija između aldehidne ili ketonske grupe i hidrazina ili alkoksiamina; takve vezujuće jedinice mogu biti predstavljene Formulom (A), (B), (C) ili (D).
L1je jednostruka veza ili alkilen koji ima 1 do 30 atoma ugljenika, poželjno 12 atoma ugljenika; R11je vodonik ili alkil sa 1 do 10 atoma ugljenika, poželjno metil; i L2je alkilen koji ima 1 do 30 atoma ugljenika, npr. 10 ili 11, poželjno 11 atoma ugljenika. U nekim implementacijama, L1i/ili L2može da sadrži najmanje jednu izoprenilnu jedinicu, predstavljenu Formulom (III), poželjno dve izoprenilne jedinice. L2se može sastojati od najmanje jedne izoprenilne jedinice, predstavljene Formulom (III), poželjno dve izoprenilne jedinice. U poželjnim realizacijama, atom ugljenika izoprenilne jedinice formira tioetarsku vezu sa atomom sumpora cisteina antitela, najpoželjnije na C-kraju teškog ili lakog lanca, čime kovalentno povezuje antitelo i linker.
Konjugat antitelo-lek može da sadrži vezujuću jedinicu predstavljenu Formulom (D) supra, pri čemu se L2sastoji od najmanje jedne izoprenilne jedinice, poželjno dve izoprenilne jedinice. Vezujuća jedinica može biti O-supstituisani oksim, tj. azot vezujuće jedinice može biti kovalentno vezan za supstituisani kiseonik. Atom ugljenika izoprenilne jedinice može da formira tioetarsku vezu sa atomom sumpora cisteina antitela, najpoželjnije na C-kraju teškog ili lakog lanca, čime kovalentno povezuje vezujuću jedinicu i antitelo.
L i/ili linker mogu da sadrže izoprenilnu grupu predstavljenu sa
npr. pri čemu atom ugljenika izoprenilne grupe formira tioetarsku vezu sa atomom sumpora cisteina antitela, čime kovalentno povezuje izoprenilnu grupu i antitelo. Azot izoprenilne grupe može kovalentno da veže izoprenilnu grupu sa jedinicom polietilen glikola L i/ili linkera.
U nekim realizacijama, L i/ili linker mogu da sadrže izoprenilnu grupu predstavljenu sa
npr. gde atom ugljenika izoprenilne grupe formira tioetarsku vezu sa atomom sumpora cisteina antitela, čime kovalentno povezuje izoprenilnu grupu i antitelo. Azot izoprenilne grupe može kovalentno da veže izoprenilnu grupu sa jedinicom polietilen glikola L i/ili linkera.
Klik hemijske reakcije se mogu izvesti pod blagim uslovima, koji se mogu izvesti u prisustvu antitela bez denaturacije antitela. Klik hemijska reakcija pokazuje visoku specifičnost reakcije. Stoga, iako antitela imaju različite funkcionalne grupe (na primer, amini, karboksili, karboksamidi i gvanidinijumi), klik hemijska reakcija može se izvesti, na primer, bez uticaja na bočne lance amino-kiselina antitela. Klik hemijska reakcija između azidne grupe i acetilenske grupe, na primer, može se desiti u prisustvu antitela bez modifikacije funkcionalnih grupa bočnog lanca amino-kiselina antitela. Dalje, klik hemijska reakcija može precizno ciljati određenu funkcionalnu grupu, kao što su funkcionalne grupe koje se retko nalaze u prirodi, bez obzira na prirodu reaktanata. U nekim slučajevima, reaktanti se biraju da poboljšaju ukupnu efikasnost reakcije. Na primer, azid-acetilen klik hemijska reakcija može da proizvede triazol sa visokim prinosom (vidi, npr. Hia, RK et al., Chem. Rev., 109:5620 (2009); Meldal, M & Tornoe, CW, Chem Rev., 108:2952 (2008); Kolb, HC et al., Angew. Chemie Int. Ed. Engl., 40:2004 (2001)).
Funkcionalne grupe azida i acetilena ne postoje u prirodnim proteinima. Dakle, ni na jedan od bočnih lanaca amino-kiselina, N-terminalnih amina ili C-terminalnih karboksila ne bi trebalo da utiče klik hemijska reakcija koja koristi ove funkcionalne grupe.
L deo Formule I i/ili linker mogu dalje da uključuju veznu jedinicu predstavljenu sa -(CH2)r(V(CH2)p)q- ili -(CH2CH2X)w-, pri čemu
V je jednostruka veza, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2-, ili SO2NR25-, poželjno -O-;
X je -O-, (C1-C8)alkilen, ili -NR21-, poželjno -O-;
R21do R25su svaki nezavisno vodonik, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkil(C6-C20)aril ili (C1-C6)alkil (C3-C20)heteroaril, poželjno vodonik;
r je ceo broj od 1 do 10, poželjno 2 ili 3;
p je ceo broj od 0 do 12, poželjno 1 ili 2;
q je ceo broj od 1 do 20; i
w je ceo broj od 1 do 20, poželjno 1, 3, 6 ili 12.
U nekim implementacijama, p je ceo broj od 11 ili 12. U nekim implementacijama, q je ceo broj od 11 do 20, kao što je 11, 12, 13, 14, 15 ili 16. U nekim implementacijama, w je ceo broj od 11 do 20, kao što su 11, 12, 13, 14, 15 ili 16.
U određenim poželjnim implementacijama, q je ceo broj od 4 do 20. U drugim poželjnim implementacijama, q je ceo broj od 2 do 12.
L i/ili linker poželjno sadrži vezujuću jedinicu predstavljenu Formulom (A), (B), (C) ili (D) i spojnu jedinicu predstavljenu sa -(CH2)r(V(CH2)p)q- ili - (CH2CH2X)w-.
U poželjnim implementacijama, L i/ili linker sadrži najmanje jednu polietilen glikol jedinicu predstavljenu bilo
Jedinica polietilen glikola može biti -OCH2CH2-. Konjugat antitelo-lek može da sadrži od 1 do 20 jedinica polietilen glikola, kao što je 1 do 12 jedinica polietilen glikola, 5 do 12 jedinica polietilen glikola, 6 do 12 jedinica polietilen glikola, 5 do 20 jedinica polietilen glikola, ili 6 do 20 jedinica polietilen glikola. Konjugat antitelo-lek može da sadrži od 1 do 20 -OCH2CH2-jedinica, kao što su 1 do 12 -OCH2CH2- jedinica, 5 do 12 -OCH2CH2- jedinica, 6 do 12 -OCH2CH2- jedinica, 5 do 20 -OCH2CH2- jedinica, ili 6 do 20 -OCH2CH2- jedinica. U realizacijama u kojima L i/ili linker sadrži oksim, jedinica polietilen glikola prvenstveno kovalentno vezuje oksim sa aktivnim sredstvom. U implementacijama u kojima L i/ili linker sadrži oksim, jedinica polietilen glikola prvenstveno kovalentno vezuje oksim sa W, npr. gde je W predstavljen sa predstavlja -C(O)NR’-.
L i/ili linker poželjno sadrže polietilen glikol grupu predstavljenu sa -(CH2CH2O)n-, pri čemu je n 1 do 20, kao što je 1 do 12, 5 do 12, 6 do 12, 5 do 20 ili 6 do 20. U implementacijama u kojima L i/ili linker sadrži oksim, polietilen glikol grupa prvenstveno kovalentno vezuje oksim sa aktivnim sredstvom. U implementacijama u kojima L i/ili linker sadrži oksim, grupa polietilen glikola prvenstveno kovalentno vezuje oksim sa W, npr. pri čemu je W predstavljen sa reprezentom -C(O)NR’-. Ugljenik polietilen glikol grupe može da formira kovalentnu vezu sa atomom W (npr. azotom iz -C(O)NR’-) i/ili kiseonik iz polietilen glikol grupe može biti kiseonik oksima.
U nekim implementacijama, L je poželjno predstavljen jednom od sledeće dve strukture, i stoga, linker može da sadrži jednu od sledeće dve strukture:
pri čemu je n ceo broj od 1 do 20. Na primer, n može biti ceo broj od 2 do 20, 3 do 20, 4 do 20, 5 do 20, 6 do 20, 7 do 20, 8 do 20, 9 do 20, 10 do 20, 2 do 16, 3 do 16, 4 do 16, 5 do 16, 6 do 16, 7 do 16, 8 do 16, 9 do 16 ili 10 do 16.
L i/ili linker mogu da sadrže
pri čemu
V predstavlja jednostruku vezu, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2-, ili SO2NR25-, poželjno -O-;
R21do R25predstavlja svaki nezavisno vodonik, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkil(C6-C20)aril, ili (C1-C6)alkil(C3-C20)heteroaril;
r je ceo broj od 1 do 10, poželjno 2 ili 3;
p je ceo broj od 0 do 10, poželjno 1 ili 2;
q je ceo broj od 1 do 20, poželjno 1 do 6; i
L1je jednostruka veza.
U nekim implementacijama, q je ceo broj od 11 do 20, kao što su 11, 12, 13, 14, 15 ili 16.
U nekim implementacijama, L i/ili linker sadrži hidrofilnu amino-kiselinu, npr. da se poveća rastvorljivost u vodi konjugata antitelo-lek, linkera i/ili prekursora konjugata antitelo-lek. Hidrofilna amino-kiselina može biti locirana proksimalno do aktivnog sredstva, proksimalno do antitela, ili umetnuta bilo gde duž linkera. Konkretno, hidrofilna amino-kiselina može kovalentno da veže oksim L i/ili linker sa jedinicom polietilen glikola L i/ili linkera. Peptid može kovalentno da veže oksim L i/ili linker sa jedinicom polietilen glikola L i/ili linkera.
U nekim primenama, konjugat antitelo-lek sadrži peptid, a peptid sadrži najmanje jednu hidrofilnu amino-kiselinu. Peptid može da sadrži 2 do 20 amino-kiselina. Većina amino-kiselina peptida može biti nezavisno izabrana iz alanina, aspartata, asparagina, glutamata, glutamina, glicina, lizina, ornitina, prolina, serina i treonina. Na primer, svaka amino-kiselina peptida može biti nezavisno izabrana iz alanina, aspartata, asparagina, glutamata, glutamina, glicina, lizina, ornitina, prolina, serina i treonina.
U nekim realizacijama, konjugat antitelo-lek ima strukturu Formule (I) kao što je gore opisano, ili odgovarajuću strukturu u kojoj grupa za cepanje ima strukturu bilo koje formule grupe za cepanje definisane ovde.
U određenim takvim implementacijama, W može predstavljati -C(O)NR’-, a azot W može biti atom azota hidrofilne amino-kiseline. Slično, W može predstavljati -C(O)NR’-, a azot W može biti atom azota N-terminalne amino-kiseline u peptidu.
Hidrofilna amino-kiselina može biti amino-kiselina koja se javlja u prirodi ili amino-kiselina koja se ne pojavljuje u prirodi. Hidrofilna amino-kiselina može biti α-amino-kiselina ili β-aminokiselina. Hidrofilna amino-kiselina može biti arginin, aspartat, asparagin, glutamat, glutamin, histidin, lizin, ornitin, prolin, serin ili treonin, i može biti D-amino-kiselina ili L-amino-kiselina. U određenim poželjnim primenama, hidrofilna amino-kiselina je aspartat ili glutamat, kao što je L-aspartat ili L-glutamat. U drugim poželjnim primenama, hidrofilna amino-kiselina je lizin ili ornitin, kao što je L-lizin ili L-ornitin. U određenim primenama, hidrofilna amino-kiselina je arginin, kao što je L-arginin. U određenim primenama, hidrofilna amino-kiselina sadrži bočni lanac koji ima deo koji nosi naelektrisanje pri neutralnom pH u vodenom rastvoru (npr. amin, gvanidin ili karboksilni deo).
Peptid može da sadrži amino-kiseline koje se javljaju u prirodi i/ili amino-kiseline koje se ne nalaze u prirodi. Peptid može da sadrži α-amino-kiseline i/ili β-amino-kiseline. U nekim primenama, peptid se u suštini sastoji od α-amino-kiselina. U nekim primenama, peptid se u suštini sastoji od amino-kiselina koje se javljaju u prirodi. Peptid može da sadrži, suštinski se sastoji od, ili se čak sastoji od amino-kiselina izabranih iz alanina, aspartata, asparagina, glutamata, glutamina, glicina, lizina, ornitina, prolina, serina i treonina, od kojih svaka može biti L-amino-kiselina i / ili D-amino-kiseline. U nekim primenama, peptid se u suštini sastoji od L-amino-kiselina. U određenim primenama, peptid ne sadrži hidrofobnu amino-kiselinu, kao što je amino-kiselina izabrana iz izoleucina, metionina, leucina, fenilalanina, triptofana, tirozina ili valina; drugim rečima, u takvim primenama, peptid je slobodan ili suštinski bez ovih aminokiselina. U poželjnim primenama, peptid ne sadrži izoleucin, metionin, leucin, fenilalanin, triptofan, tirozin i valin.
Hidrofilna amino-kiselina može kovalentno da veže oksim L i/ili linkera sa jedinicom polietilen glikola L i/ili linkera. Peptid može kovalentno da veže oksim L i/ili linkera sa jedinicom polietilen glikola L i/ili linkera.
U nekim primenama, konjugat antitelo-lek sadrži strukturu:
ili
pri čemu A predstavlja antitelo, B predstavlja aktivno sredstvo, m je ceo broj od 0 do 20 (npr. 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10), n je ceo broj od 1 do 20 (poželjno od 2 do 20, npr.4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, ili 16), R1je vodonik ili metil grupa, i R2je bočni lanac amino-kiseline, poželjno hidrofilna amino-kiselina, najpoželjnije aspartat ili glutamat.
U nekim primenama, konjugat antitelo-lek sadrži strukturu:
ili
pri čemu A predstavlja antitelo, B predstavlja aktivno sredstvo, m je ceo broj od 0 do 20 (npr. 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10), n je ceo broj od 1 do 20 (poželjno od 2 do 20, npr. 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, ili 16), R1je vodonik ili metil grupa, i R2je bočni lanac amino-kiseline, poželjno hidrofilna amino-kiselina, najpoželjnije aspartat ili glutamat. U nekim implementacijama, n je ceo broj od 0 do 20, poželjno 0 ili 2.
U nekim primenama, konjugat antitelo-lek sadrži strukturu:
pri čemu A predstavlja antitelo, B predstavlja aktivno sredstvo, x je ceo broj od 1 do 20 (npr. 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10), y je ceo broj od 1 do 20 (npr. 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10), z je ceo broj od 1 do 20 (poželjno 2 do 20, npr. 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ili 16), i R je vodonik ili metil grupa. U nekim implementacijama, n je ceo broj od 0 do 20, poželjno 0 ili 2.
U nekim primenama, konjugat antitelo-lek sadrži strukturu:
pri čemu A predstavlja antitelo, B predstavlja aktivno sredstvo, R1je vodonik ili metil grupa, x je ceo broj od 0 do 20 (npr.0, 1, 2, 3, 4, ili 5), y je ceo broj od 0 do 20 (npr.2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10), z je ceo broj od 1 do 20 (poželjno 2 do 20, npr. 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ili 16), i svaki R2je nezavisno izabran iz bočnog lanca amino-kiseline, poželjno bočnog lanca hidrofilne amino-kiseline. Na primer, u određenim poželjnim implementacijama, x je 1 i R2je bočni lanac aspartata ili glutamata.
U poželjnim primenama, antitelo sadrži obrazac amino-kiseline koji može da se prepozna pomoću izoprenoid transferaze. Na primer, najmanje jedan C-terminus antitela može da sadrži obrazac amino-kiseline koji može da bude prepoznat od strane izoprenoid transferaze (npr. kao supstrat, na primer, pre formiranja konjugata antitelo-lek, ili kao proizvod izoprenoid transferaze, na primer, nakon formiranja konjugata antitelo-lek). Antitelo može dalje da sadrži spejser, kao što je amino-kiselina ili deo amino-kiselina koji povezuje peptidni lanac antitela sa obrascem amino-kiseline. Spejser se može sastojati od 1 do 20 uzastopnih amino-kiselina, poželjno 7-20 amino-kiselina. U nekim primenama, glicin i prolin su poželjne amino-kiseline za spejser i mogu se koristiti u bilo kojoj kombinaciji, kao što je serija od najmanje oko 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 glicina, ili serija od oko 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 glicina. U drugim implementacijama, obrazac amino-kiseline je svaki nezavisno izabran iz glicina, asparaginske kiseline, arginina i serina. Antitelo može da sadrži adiciju ili deleciju na karboksi terminusu, npr. u odnosu na oblik antitela koji nije uključen u ADC.
Primeri izoprenoidnih transferaza uključuju farnezil protein transferazu (FTaza) i geranilgeranil transferazu (GGTaza), koje mogu da katalizuju transfer farnezil ili geranil-geranil grupe na najmanje jedan C-terminalni cistein ciljnog proteina. GGTaza se može klasifikovati kao GGTaza I ili GGTaza II. FTaza i GGTaza I mogu prepoznati CAAKS obrazac, a GGTaza II može prepoznati XXCC, XCXC ili CXX obrazac, pri čemu C predstavlja cistein, A predstavlja alifatičnu amino-kiselinu (npr. izoleucin, valin, metionin, leucin), a svaki X nezavisno predstavlja, na primer, glutamin, glutamat, serin, cistein, metionin, alanin ili leucin (vidi Nature Rev. Cancer, 5(5):405-12 (2005); Nature Chemical Biology 17:498-506 (2010); Lane KT, Bees LS, J. Lipid Research, 47:681-699 (2006); Kasey PJ, Seabra MC, J. Biological Chemistry, 271(10):5289-5292 (1996)).
Konjugati antitelo-lek prema predmetnom pronalasku mogu da sadrže obrazac amino-kiseline, kao što je CYYX, XXCC, XCXC ili CXX, poželjno CYYX (gde, C predstavlja cistein, Y predstavlja alifatičnu amino-kiselinu, kao što je leucin, izoleucin, valin, i/ili metionin, a X predstavlja amino-kiselinu koja određuje specifičnost supstrata izoprenoid transferaze, kao što su glutamin, glutamat, serin, cistein, metionin, alanin i/ili leucin).
Mogu se koristiti izoprenoidne transferaze iz različitih izvora. Na primer, izoprenoid transferaza se može dobiti od čoveka, životinje, biljke, bakterije, virusa ili drugog izvora. U nekim primenama, koristi se prirodna izoprenoid transferaza. U nekim primenama, može se koristiti prirodno modifikovana ili veštački modifikovana izoprenoid transferaza. Na primer, izoprenoid transferaza može da sadrži jednu ili više amino-kiselinskih supstitucija, adicija i/ili delecija, i/ili izoprenoid transferaza može biti modifikovana dodavanjem najmanje jednog od Histidin-taga, GST, GFP, MBP, CBP , Isopeptaga, BCCP, Mic-tag, Calmodulin-taga, FLAG-taga, HA-taga, proteinske oznake koja vezuje maltozu, Nus-taga, Glutation-S-transferaza-taga, zelene fluorescentne proteinske oznake, Tioredoksin-taga, S -taga, Softtaga 1, Softtaga 3, Strep-taga, SBP-taga, Ti-taga i slično.
Izoprenoidne transferaze prepoznaju izosupstrat i/ili supstrat. Izraz izosupstrat se odnosi na analog supstrata koji sadrži hemijsku modifikaciju. Izoprenoidne transferaze mogu alkilovati specifični obrazac amino-kiseline (na primer, CAAX obrazac) na C-kraju antitela (vidi, npr. Duckworth, BP et al., ChemBioChem, 8:98 (2007); Uyen TT et al., ChemBioChem, 8:408 (2007); Labadie, GR et al., J. Org. Chem., 72(24):9291 (2007); Wollack, JW et al., Chem-BioChem, 10:2934 (2009)). Funkcionalizovano antitelo se može proizvesti korišćenjem izoprenoid transferaze i izosupstrata, koji mogu alkilovati C-terminalni cistein.
Izosupstrat može biti, na primer, jedinjenje formule IV.
Cistein C-terminalnog CAAX obrasca može biti vezan za izosupstrat korišćenjem izoprenoid transferaze. U nekim implementacijama, deo obrasca, na primer, AAX, može naknadno biti uklonjen proteazom, npr. ostavljajući samo cistein za koji je vezan izoprenoid. Cistein može opciono biti metilovan na karboksilnom kraju, npr. pomoću enzima (vidi, npr. Bell, IM, J. Med. Chem., 47(8): 1869 (2004))).
Konjugati antitelo-lek prema pronalasku mogu biti pripremljeni korišćenjem bilo kog postupka poznatog u tehnici, uključujući metode molekularne biologije i ćelijske biologije. Na primer, mogu se koristiti metode tranzijentne ili stabilne transfekcije. Genetske sekvence koje kodiraju specifični amino-kiselinski obrazac koji može da se prepozna izoprenoidnom transferazom mogu biti umetnute u poznati plazmidni vektor korišćenjem standardne PCR i/ili tehnologije ligacije tako da se eksprimuje antitelo koje ima specifičan amino-kiselinski obrazac na svom C-kraju. Antitelo koje ima najmanje jedan obrazac amino-kiseline koji je sposoban da bude prepoznat od strane izoprenoid transferaze može se tako eksprimovati u odgovarajućem domaćinu, npr. CHO ćeliju ili u E. coli.
Izraz „antitelo” se odnosi na molekul imunoglobulina koji prepoznaje i specifično se vezuje za različite molekule preko najmanje jednog mesta za prepoznavanje antigena unutar varijabilnog regiona molekula imunoglobulina. Kako se ovde koristi, izraz „antitelo” uključuje intaktna poliklonska antitela, intaktna monoklonska antitela, fragmente antitela (na primer, Fab, Fab’, F(ab’)2, Fd i Fv fragmenti), jednolančane Fv (scFv) mutante, multispecifična antitela kao što su bispecifična antitela generisana iz dva ili više intaktnih antitela, himerna antitela, humanizovana antitela, humana antitela, fuzione proteine uključujući deo antitela za određivanje antigena, i bilo koji drugi modifikovani molekul imunoglobulina uključujući mesto za prepoznavanje antigena. Antitelo može biti bilo koja od pet glavnih klasa imunoglobulina: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, ili njihove podklase (izotipovi) (na primer, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2), na osnovu identiteta njegovih konstantnih domena teškog lanca, koji se nazivaju alfa, delta, epsilon, gama i mu, tim redosledom. Različite klase imunoglobulina imaju različite i dobro poznate strukture podjedinica i trodimenzionalne konfiguracije. Izraz „antitelo” se ne odnosi na molekule koji ne dele homologiju sa sekvencom imunoglobulina. Na primer, izraz „antitelo” kako se ovde koristi ne uključuje „repetela”.
Izraz „fragment antitela” se odnosi na deo intaktnog antitela i odnosi se na antigeno determinišuće varijabilne regione intaktnog antitela. Primeri fragmenata antitela uključuju Fab, Fab’, F(ab’)2, Fd i Fv fragmente, linearna antitela, jednolančana antitela i multispecifična antitela formirana od fragmenata antitela.
Izraz „monoklonsko antitelo” se odnosi na homogenu populaciju antitela koja je uključena u visoko specifično prepoznavanje i vezivanje jedne antigene determinante ili epitopa. Ovo je u suprotnosti sa poliklonskim antitelima koja obično uključuju različita antitela usmerena protiv niza različitih antigenskih determinanti. Izraz „monoklonsko antitelo” uključuje fragmente antitela (kao što su Fab, Fab’, F(ab’)2, Fd, Fv), jednolančani (scFv) mutanti, fuzione proteine koji uključuju deo antitela i bilo koje druge modifikovane molekule imunoglobulina koji sadrže mesto za prepoznavanje antigena, kao i intaktna i monoklonska antitela pune dužine, ali nisu ograničeni na njih. Dodatno, „monoklonsko antitelo” se odnosi na takva antitela napravljena bilo kojim brojem metoda, uključujući, ali ne ograničavajući se na hibridom, selekciju faga, rekombinantnu ekspresiju i transgene životinje.
Izraz „humanizovano antitelo” odnosi se na oblike nehumanih (npr. mišjih) antitela koja su specifični imunoglobulinski lanci, himerni imunoglobulini ili njihovi fragmenti koji sadrže minimalan broj nehumanih (npr. mišjih) sekvenci. Uopšteno govoreći, humanizovana antitela su humani imunoglobulini u kojima su ostaci iz regiona koji određuje komplementarnost (CDR) zamenjeni ostacima iz CDR nehumane vrste (npr. miš, pacov, zec i hrčak) koji imaju željenu specifičnost, afinitet i sposobnost (vidi, npr. Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)). U nekim slučajevima, ostaci Fv okvirnog regiona (FR) humanog imunoglobulina su zamenjeni odgovarajućim ostacima u antitelu ne-humane vrste koji imaju željenu specifičnost, afinitet i/ili sposobnost vezivanja. Humanizovano antitelo može biti dalje modifikovano supstitucijom dodatnih ostataka bilo u Fv okvirnom regionu i/ili unutar zamenjenih ostataka koji nisu humani da bi se poboljšala i optimizovala specifičnost antitela, afinitet i/ili sposobnost vezivanja. Uopšteno govoreći, humanizovano antitelo uključuje uglavnom sve od najmanje jednog, a obično dva ili tri, varijabilna domena koji sadrže sve ili u suštini sve CDR koji odgovaraju ne-humanom imunoglobulinu, dok svi ili u suštini svi okvirni regioni (FR) imaju one konsenzus sekvence humanog imunoglobulina. Humanizovano antitelo može, takođe, da uključuje barem deo konstantnog regiona ili domena imunoglobulina (Fc), obično onaj humanog imunoglobulina. Primeri postupaka koji se koriste za stvaranje humanizovanih antitela su opisani u U.S. Patent No.5,225,539.
Izraz „humano antitelo” kako se ovde koristi odnosi se na antitelo kodirano humanom nukleotidnom sekvencom ili antitelo koje ima sekvencu amino-kiselina koja odgovara antitelu koje proizvodi čovek korišćenjem bilo koje tehnike poznate u tehnici. Ova definicija humanog antitela uključuje intaktna antitela pune dužine i/ili njihove fragmente.
Izraz „himerno antitelo” se odnosi na antitelo u kome je sekvenca amino-kiseline molekula imunoglobulina izvedena iz dve ili više vrsta, od kojih je jedna poželjno čovek. Generalno, varijabilni regioni i lakih i teških lanaca odgovaraju varijabilnim regionima antitela dobijenih od jedne vrste sisara (npr. miša, pacova, zeca, itd.) sa željenom specifičnošću, afinitetom i sposobnošću, dok su konstantni regioni homologni sekvencama u antitelima koja potiču od druge vrste (obično ljudi), npr. da bi se izbeglo izazivanje imunološkog odgovora kod te vrste.
Izrazi „epitop” i „antigenska determinanta” se ovde koriste naizmenično i odnose se na onaj deo antigena koji može da bude prepoznat i specifično vezan od strane određenog antitela. Kada antigen jeste ili sadrži polipeptid ili protein, epitopi se mogu formirati od susednih i/ili nesusednih amino-kiselina, npr. nasuprot sekundarnom, tercijarnom i/ili kvaternarnom savijanju proteina. Epitopi formirani od susednih amino-kiselina se obično zadržavaju nakon denaturacije proteina, dok se epitopi formirani tercijarnim savijanjem mogu izgubiti denaturacijom proteina. Epitop obično uključuje 3 ili više, 5 ili više, ili 8 do 10 ili više amino-kiselina u jedinstvenoj prostornoj konformaciji.
Antitelo se „specifično vezuje” za epitop ili antigenski molekul, što znači da antitelo interaguje ili se povezuje češće, brže, sa dužim trajanjem, sa većim afinitetom, ili sa nekom kombinacijom prethodno navedenog za epitop ili antigenski molekul u odnosu na alternativnu supstancu, uključujući nesrodne proteine. U specifičnim primenama, „specifično se vezuje” znači, na primer, da se antitelo vezuje za protein sa KDod oko 0,1 mM ili manje, ali češće, manje od oko 1 µM. U specifičnim primenama, „specifično se vezuje” znači da se antitelo vezuje za protein povremeno sa KDod oko 0,1 µM ili manje, a u drugim slučajevima, sa KDod oko 0,01 µM ili manje. Zbog identiteta sekvenci između homolognih proteina u različitim vrstama, specifično vezivanje može da uključuje antitelo koje prepoznaje određeni protein u više vrsta. Podrazumeva se da antitelo ili vezujući ostatak koji se specifično vezuje za prvu metu može ili ne mora specifično da se veže za drugu metu. Kao što je gore opisano, „specifično vezivanje” ne zahteva nužno (iako može da uključuje) ekskluzivno vezivanje, to jest, vezivanje za jedan cilj. Uopšteno, ali ne nužno, izraz vezivanje koji se ovde koristi označava specifično vezivanje.
Antitela, uključujući njihove fragmente/derivate i monoklonska antitela, mogu se dobiti korišćenjem postupaka poznatih u tehnici (vidi, npr. McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Clackson et al., Nature 352:624-628; Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991); Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Waterhouse et al., Nucleic Acids Res.
21:2265-2266 (1993); Morimoto et al., J Biochemical & Biophysical Methods 24:107-117 (1992); Brennan et al., Science 229:81(1985); Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992); Kohler et al., Nature 256:495 (1975); Kilpatrick et al., Hybridoma 16(4):381-389 (1997); Wring et al., J. Pharm. Biomed. Anal. 19(5):695-707 (1999); Bynum et al., Hybridoma 18(5):407-411 (1999), Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggemann et al., Year Immuno. 7:33 (1993); Barbas et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al., Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al., J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et. al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); Hawkins et al., J. Mol. Biol.226:889-896 (1992), U.S. Pat. Nos.4,816,567, 5,514,548, 5,545,806, 5,569,825, 5,591,669, 5,545,807; PCT Patent Application Publication No. WO 97/17852).
Antitelo može biti muromonab-CD3 abciksimab, rituksimab, daklizumab, palivizumab, infliksimab, trastuzumab, etanercept, baziliksimab, gemtuzumab, alemtuzumab, ibritumomab, adalimumab, alecefat, omalizumab, efalizumab, tositumomab, bevacizumab, natalizumab, ranibizumab, ekulizumab, rilonacept, certolizumab, romiplostim, AMG-531, golimumab, ustekinumab, ABT-874, belatacept, belimumab, atacicept, anti-CD20 antitelo, kanakinumab, tocilizumab, atlizumab, mepolizumab, pertuzumab, HuMax-CD20, tremelimumab, ticilimumab, ipilimumab, IDEC-114, inotuzumab, aflibercept, HuMax-CD4, teplizumab, oteliksizumab, katumaksomab, anti-EpCAM antitelo IGN101, adekatumomab, oregovomab, dinutuksimab, girentuksimab, denosumab, bapineuzumab, motavizumab, efumgumab, raksibakumab, anti-CD20 antitelo, LY2469298, ili veltuzumab.
U određenim poželjnim primenama, antitelo se ne vezuje specifično za CD 19 ili EGFR (receptor epidermalnog faktora rasta). U drugim primenama, antitelo može biti anti-CD19 ili EGFR antitelo.
Kada antitelo sadrži najmanje jedan laki lanac i najmanje jedan teški lanac, najmanje jedan laki lanac antitela ili najmanje jedan teški lanac antitela ili oba mogu da sadrže region amino-kiselina koji ima obrazac amino-kiselina koga može da prepozna izoprenoid transferaza. Kako antitelo može da sadrži četiri polipeptidna lanca (npr. dva teška lanca i dva laka lanca), antitelo može da sadrži četiri obrasca amino-kiselina, od kojih se svaki može koristiti za konjugaciju aktivnog sredstva sa antitelom preko linkera. Dakle, konjugat antitelo-lek može da sadrži 4 linkera, od kojih je svaki konjugovan sa aktivnim sredstvom, npr. svaki konjugovan sa C-terminusom različitog lanca antitela. Shodno tome, konjugat antitelo-lek može da sadrži najmanje jedan linker i najmanje jedno aktivno sredstvo. Konjugat antitelo-lek može da sadrži najmanje dva linkera i konjugat antitelo-lek može da sadrži najmanje dva aktivna sredstva. Konjugat antitelolek može da sadrži 1, 2, 3 ili 4 linkera. Konjugat antitelo-lek može da sadrži 1, 2, 3 ili 4 aktivna sredstva. U konjugatu antitelo-lek koji uključuje 2 ili više aktivnih sredstava, sva aktivna sredstva mogu biti ista, sva mogu biti različita ili mogu biti prisutna u bilo kojoj smeši ili odnosu.
Aktivno sredstvo može biti lek, toksin, ligand afiniteta, sonda za detekciju ili kombinacija bilo čega od prethodnog.
Aktivno sredstvo se može izabrati iz erlotiniba; bortezomiba; fulvestranta; sutenta; letrozola; imatinib mezilata; PTK787/ZK 222584; oksaliplatina; 5-fluorouracila; leukovorina; rapamicina (Sirolimus); lapatiniba; lonafarniba; sorafeniba; gefitiniba; AG1478; AG1571; sredstva za alkilovanje (na primer, tiotepa ili ciklofosfamida); alkil sulfonata (na primer, busulfana, improsulfana ili piposulfana); aziridina (na primer, benzodopa, karbokvona, meturedopa ili uredopa); etilenimina, metilmelamina, altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida, trimetilolmelamina; acetogenina (na primer, bulatacina ili bulatacinona); kamptotecina; derivata ili metabolita kamptotecina (npr. SN-38); topotekana; briostatina; kalistatina; CC-1065 (uključujući njegove sintetičke analoge adozelesina, karzelesina ili bizelesina); kriptoficina (na primer, kriptoficina 1 ili kriptoficina 8); dolastatina; duokarmicina (uključujući sintetičke analoge, npr. KW-2189 i CB1-TM1); eleuterobina; pankratistatina; sarkodiktiina; spongistatina; azotnog senfa (azotnog iperita) (na primer, hlorambucila, hlonafazina, hlorfosfamida, estramustina, ifosfamida, mehloretamina, mehloretamin oksid hidrohlorida, melfalana, novembihina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida ili uramustina); nitrousuree (na primer, karmustina, hlorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina ili ranimnustina); antibiotika (na primer, enediinski antibiotici kao što je kaliheamicin izabran iz kaliheamicina gamma 1I i kaliheamicina omega 1I, ili dinemicina uključujući dinemicina A); bisfosfonata (na primer, klodronata; esperamicina, neokarzinostatin hromofora ili srodnih hromoproteinskih enediinih antibiotskih hromofora, aklacinomizina, aktinomicina, antramicina, azaserina, bleomicina, kaktinomicina, karabicina, karninomicina, karzinofilina, hromomicina, daktinomicina, daunorubicina, detorubucina, 6-diazo-5-okso-L-norleucina, doksorubicina (na primer, morfolino-doksorubicina, cijanomorfolino-doksorubicina, 2-pirolino-doksorubucina, lipozomalnog doksorubicina ili dezoksidoksorubicina), epirubicina, ezorubicina, marcelomicina, mitomicina (for example, mitomicina C, mikofenolne kiseline, nogalamicina, olivomicina, peplomicina, potfiromicina, puromicina, kvelamicina, rodorubicina, streptomigrina, streptozocina, tubercidina, ubenimeksa, zinostatina ili zorubicina); anti-metabolita (npr. 5-fluorouracila); analozi folne kiseline (na primer, denopterin, metotreksat, pteropterin,
ili trimetreksat); analoga purina (na primer, fludarabina, 6-merkaptopurina, tiamiprina ili tiguanina); analoga pirimidina (na primer, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, karmofura, citarabina, didezoksiuridina, doksifluridina, enocitabina ili floksuridina); androgena (na primer, kalusterona, dromostanolon propionata, epitiostanola, mepitiostana) ili testolaktona); antiadrenala (na primer, aminoglutetimida, mitotana ili trilostana); dopuna folne kiseline (na primer, folinske kiseline); aceglatona; aldofosfamid glikozida; aminolevulinske kiseline; eniluracila; amsakrina; bestrabucila; bisantrena; edatraksata; defofamina; demekolcina; diazikvona; elfomitina; eliptinijum acetata; epotilona; etoglucida; galijum nitrata; hidroksiuree; lentinana; lonidainina; maitansinoidi (na primer, maitanzina ili ansamitocina); trihotecena (posebno T-2 toksina, verakurina A, roridina A ili anguidina); mitogvazona; mitoksantrona; mopidanmola; nitraerina; pentostatina; fenameta; pirarubicina; losoksantrona; 2-etilhidrazida; prokarbazina; polisaharid K kompleksa; razoksana; rizoksina; sizofirana; spirogermanijuma; tenuazonske kiseline; triazikvona; 2,2’,2”-trihlorotrietilamina; trihotecena (posebno, T-2 toksina, verakurina A, roridina A i anguidina); uretana; vindezina; dakarbazina; manomustina; mitobronitola; mitolaktola; pipobromana; gacitozina; arabinozida; ciklofosfamida; tiotepa; taksoida (na primer, paklitaksela), ABRAXANE™ bez kremofora, albumin-projektovana formulacija nanočestica paklitaksela, doksetaksela; hlorambucila; gemcitabina; 6-tiogvanina; merkaptopurina; analoga platine (na primer, cisplatina ili karboplatina); vinblastina; platine; etopozida, ifosfamida; mitoksantrona; vinkristina; vinorelbina; novantrona; tenipozida; edatreksata; daunomicina; aminopterina; kselode; ibandronata; CPT-11; inhibitora topoizomeraze (RFS 2000); difluorometilornitina; retinoida (na primer, retinoinske kiseline); kapecitabina, i njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, solvata, kiselina ili derivata, ali ne nužno ograničeno na to.
Aktivno sredstvo može biti izabrano iz (i) antihormonskih sredstava koja deluju na regulisanje ili inhibiranje delovanja hormona na tumore kao što su antiestrogeni i selektivni modulatori estrogenskih receptora, uključujući, na primer, tamoksifen, raloksifen, droloksifen, 4-hidroksitamoksifen, trioksifen, keoksifen, LY117018, onapriston i toremifen; (ii) inhibitora aromataza koji inhibiraju enzim aromataze, koji reguliše proizvodnju estrogena u nadbubrežnim žlezdama, kao na primer, 4(5)-imidazoli, aminoglutetimid, megestrol acetat, eksemestan, letrozol i anastrozol; (iii) anti-androgena kao što su flutamid, nilutamid, bikalutamid, leuprolid i goserelin; kao i troksacitabin (analog 1,3-dioksolan nukleozid citozina); (iv) inhibitora aromataza; (v) inhibitora protein kinaze; (vi) inhibitora lipidne kinaze; (vii) antisens oligonukleotida, posebno onih koji inhibiraju ekspresiju gena u signalnim putevima uključenim u adherentne ćelije, kao na primer, PKC-alfa, Raf, H-Ras; (viii) ribozima, na primer, inhibitor VEGF kao što su inhibitori ekspresije ribozima i HER2; (ix) vakcine kao što je vakcina za gensku terapiju; ALLOVECTIN<®>vakcina, LEUVECTIN vakcina, VAXID vakcina; PROLEUKIN<®>rlL-2; LURTOTECAN<®>inhibitor topoizomeraze 1; ABARELIX<®>rmRH; (x) anti-angiogenih sredstava kao što je bevacizumab; i (xi) njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, solvata, kiselina ili derivata.
Pored toga, citokini se mogu koristiti kao aktivno sredstvo. Citokini su mali ćelijski signalni proteinski molekuli koje luče brojne ćelije i predstavljaju kategoriju signalnih molekula koji se intenzivno koriste u međućelijskoj komunikaciji. Citokini uključuju monokine, limfokine, tradicionalne polipeptidne hormone i slično. Primeri citokina uključuju hormon rasta (na primer, humani hormon rasta, N-metionil humani hormon rasta ili goveđi hormon rasta); paratiroidni hormon; tiroksin; insulin; proinsulin; relaksin; prorelaksin; glikoproteinski hormon (na primer, folikularno stimulišući hormon (FSH), tiroidni stimulišući hormon (TSH) ili luteinizirajući hormon (LH)); faktor rasta jetre; faktor rasta fibroblasta; prolaktin; placentni laktogen; faktor nekroze tumora-α, faktor nekroze tumora-β; Antimilerijanski hormon; peptid povezan sa mišjim gonadotropinom; inhibin; aktivin; faktor rasta vaskularnog endotela; integrin, trombopoetin (TPO); faktor rasta nerva (na primer, NGF-β); faktor rasta trombocita; transformišući faktor rasta (TGF) (na primer, TGF-α ili TGF-β); insulinu sličan faktor rasta-I, insulin sličan faktor rasta-II; eritropoetin (EPO); osteoinduktivni faktor; interferon (na primer, interferon-α, interferon-β ili interferon-γ); faktor stimulacije kolonije (CSF) (na primer, makrofag-CSF (M-CSF), granulocitmakrofag-CSF (GM-CSF) ili granulocit-CSF (G-CSF)); interleukin (IL) (na primer, IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL- 10, IL-11 ili IL-12); faktor tumorske nekroze (TNF) (na primer, TNF-α ili TNF-β); i polipeptidni faktor (na primer, LIF ili kit ligand), ali nisu ograničeni na njih. Dalje, izraz „citokin”, takođe, uključuje citokine iz prirodnih izvora ili rekombinantnih ćelijskih kultura i biološki aktivne ekvivalente citokina prirodne sekvence.
Izraz „toksin” odnosi se na supstance koje su otrovne za žive ćelije ili organizme. Toksini mogu biti mali molekuli, peptidi ili proteini koji mogu da izazovu disfunkciju ćelije ili ćelijsku smrt nakon kontakta sa telesnim tkivom ili apsorpcije u tkivu, na primer, kroz interakciju sa jednim ili više bioloških makromolekula kao što su enzimi ili ćelijski receptori. Toksini uključuju biljne i životinjske toksine. Primeri životinjskih toksina uključuju toksin difterije, botulinski toksin, tetanusni toksin, toksin dizenterije, toksin kolere, tetrodotoksin, brevetoksin i ciguatoksin, ali nisu ograničeni na njih. Primeri biljnih toksina uključuju ricin i AM-toksin, ali nisu ograničeni na njih.
Primeri toksina malih molekula uključuju auristatin, tubulizin, geldanamicin (Kerr et al., 1997, Bioconjugate Chem. 8(6):781-784), maitansinoid (EP 1391213, ACR 2008, 41, 98-107), kalihemicin (U.S. Patent br. 2009/0105461, Cancer Res. 1993, 53, 3336-3342), daunomicin, doksorubicin, metotreksat, vindezin, SG2285 (Cancer Res.2010, 70(17), 6849-6858), dolastatin, analoge dolastatina, auristatin (U.S. Patent br. 5,635,483), kriptoficin, kamptotecin, derivat ili metabolit kamptotecina, (npr. SN-38), derivat rizoksina, analog ili derivat CC-1065, duokarmicin, endiin antibiotik, esperamicin, epotilon, derivate pirolobenzodiazepina (PBD), amanitin, derivate amanitina, α-amanitin, aplidina, azonafid i toksoid, ali nisu ograničeni na njih.
Toksini mogu da ispolje citotoksičnost i aktivnost inhibicije rasta ćelija vezivanjem tubulina, vezivanjem DNK, supresijom topoizomeraze i slično.
„Detektabilan deo” ili „oznaka” se odnosi na kompoziciju koja se može detektovati spektroskopskim, fotohemijskim, biohemijskim, imunohemijskim, radioaktivnim ili hemijskim sredstvima. Na primer, korisne oznake uključuju<32>P,<35>S, fluorescentne boje, reagense elektronske gustine, enzime (na primer, enzime koji se obično koriste u ELISA testu), biotinstreptavidin, dioksigenin, haptene i proteine za koje su dostupni antiserumi ili monoklonska antitela, ili molekuli nukleinske kiseline sa sekvencom komplementarnom cilju. Detektabilni deo često generiše merljivi signal, kao što je radioaktivni, hromogeni ili fluorescentni signal, koji se može koristiti za kvantifikaciju količine vezanog ostatka koji se može detektovati u uzorku. Kvantifikacija signala se može postići, na primer, scintilacionim brojanjem, denzitometrijom, protočnom citometrijom, ELISA-om ili direktnom analizom masenom spektrometrijom intaktnih ili naknadno digestiranih peptida (može se testirati jedan ili više peptida).
Izraz „sonda” kako se ovde koristi odnosi se na materijal koji može da (i) obezbedi signal koji se može detektovati, (ii) stupi u interakciju sa prvom sondom ili drugom sondom da bi modifikovao detektabilni signal koji daje prva ili druga sonda, kao što je fluorescentno rezonantni energetski transfer (FRET), (iii) stabilizuje interakciju sa antigenom ili ligandom ili povećanje afiniteta vezivanja; (iv) utiče na pokretljivost elektroforeze ili aktivnost upada u ćeliju fizičkim parametrom kao što je naelektrisanje, hidrofobnost, itd., ili (v) kontroliše afinitet liganda, vezivanje antigen-antitelo ili formiranje jonskog kompleksa.
Aktivno sredstvo može biti imunomodulatorno jedinjenje, sredstvo protiv raka, antivirusno sredstvo, antibakterijsko sredstvo, antifungalno sredstvo, antiparazitsko sredstvo ili njihova kombinacija.
Imunomodulatorno jedinjenje može biti izabrano iz aminokapronske kiseline, azatioprina, bromokriptina, hlorambucila, hlorokina, ciklofosfamida, ciklosporina, ciklosporina A, danazola, dehidroepiandrosterona, deksametazona, etanercepta, hidrokortizona, hidroksihlorokina, infliksimaba, meloksikama, metotreksata, mikofenilat mofetila, prednizona, sirolimusa i takrolimusa. Antikancerogeno sredstvo se može izabrati iz 1-metil-4-fenilpiridinijum jona, 5-etinil-1-beta-D-ribofuranozilimidazol-4-karboksamida (EICAR), 5-fluorouracila, 9-aminokamptotecina, aktinomicina D, asparaginaze, bikalutamida, bis-hloretilnitrozouree (BCNU), bleomicina, bleomicina A2, bleomicina B2, busulfana, kamptotecina, derivata ili metabolita kamptotecina, npr. SN-38, carboplatina, karmustina, CB1093, hlorambucila, cisplatina, krisnatola, ciklofosfamida, citarabina, citozin arabinozida, citoksana, dakarbazina, daktinomicina, daunorubicina, dekarbazina, deferoksamina, demetoksi-hipokrelina A, docetaksela, doksifluridina, doksorubicina, EB1089, epirubicina, etopozida, floksuridina, fludarabina, flutamida, gemcitabina, goserelina, hidroksiureje, idarubicina, ifosfamida, interferona-α, interferona-γ, irinotekana, KH1060, leuprolid acetata, lomustina, lovastatina, megestrola, melfalana, merkaptopurina, metotreksata, mitomicina, mitomicina C, mitoksantrona, mikofenolne kiseline, azotnog senfa, nitrozourea, paklitaksela, peplomicina, fotosenzibilizatora Pe4, ftalocijanina, pirarubicina, plikamicina, prokarbazina, raloksifena, raltitrekseda, revlimida, ribavirina, staurosporina, tamoksifena, tenipozida, talomida, tapsigargina, tioguanina, tiazofurina, topotekana, treosulfana, trimetreksata, faktora tumorske nekroze, velkadea, verapamila, verteporfina, vinblastina, vinkristina, vinorelbina i zorubicina. Antivirusno sredstvo se može izabrati iz penciciklovira, valaciklovira, ganciciklovira, foskarneta, ribavirina, idoksuridina, vidarabina, trifluridina, aciklovira, famciciklovira, amantadina, rimantadina, cidofovira, antisens oligonukleotida, imunoglobulina i interferona. Antibakterijski sredstvo se može izabrati iz hloramfenikola, vankomicina, metronidazola, trimetoprina, sulfametazola, kinupristina, dalfopristina, rifampina, spektinomicina i nitrofurantoina. Antifungalno sredstvo se može izabrati iz amfotericina B, kandicidina, filipina, hamicina, natamicina, nistatina, rimocidina, bifonazola, butokonazola, klotrimazola, ekonazola, fentikonazola, izokonazola, ketokonazola, lulikonazola, mikonazola, omokonazola, oksikonazola, sertakonazola, sulikonazola, tiokonazola, albakonazola, flukonazola, isavukonazola, itrakonazola, posakonazola, ravukonazola, terkonazola, vorikonazola, abafungina, amorolfina, butenafina, naftifina, terbinafina, anidulafungina, kaspofungina, mikafungina, benzoeve kiseline, ciklopiroksa, flucitozina, grizeofulvina, haloprogina, tolnaftata, undecilenske kiseline, kristala violet, peruanskog balzama, ciklopiroks olamina, pirokton olamina, cink piritiona i selen sulfida. Antiparazitski sredstvo se može izabrati iz mebendazola, pirantel pamoata, tiabendazola, dietilkarbamazina, ivermektina, niklozamida, prazikvantela, albendazola, rifampina, amfotericina B, melarsoprola, eflornitina, metronidazolina, tinitemilfozola.
Antitelo može da sadrži obrazac amino-kiseline izabran iz Ab-HC-(G)zCVIM, Ab-HC-(G)zCVLL, Ab-LC-(G)zCVIM, i Ab-LC-(G)zCVLL, Ab-HC-(G)zCVIM/ LC-(G)zCVIM, Ab-HC-(G)zCVLL/LC-(G)zCVIM, Ab-HC-(G)zCVIM/LC-(G)zCVLL, i Ab-HC-(G)zCVLL/LC-(G)zCVLL, pri čemu Ab predstavlja antitelo, -HC- predstavlja teški lanac, -LC- predstavlja laki lanac, G predstavlja glicin, C predstavlja cistein, V predstavlja valin, I predstavlja izoleucin, M predstavlja metionin, L predstavlja leucin i z je ceo broj od 0 do 20, poželjno od 1 do 10.
Konjugat antitelo-lek može imati strukturu formule (V) ili (VI).
Z je vodonik, (C1-C8)alkil, halogen, cijano ili nitro, poželjno vodonik;
X je -O-, (C1-C8)alkilen, ili -NR21-, poželjno -O-;
R21je vodonik, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkil(C6-C20)aril, ili (C1-C6)alkil(C3-C20)heteroaril; n je ceo broj od 1 do 3, poželjno 3, a kada je n ceo broj od 2 ili više, svaki od Z(ova) je isti ili različit jedan od drugog, poželjno isti;
r je ceo broj od 1 do 10, poželjno 3;
w je ceo broj od 1 do 20, poželjno od 2-10, najpoželjnije 3;
x je ceo broj od 0 do 10, poželjno 0;
g je ceo broj od 1 do 10, poželjno 1 ili 2, najpoželjnije 1;
-S-mAb je antitelo; i
B je aktivno sredstvo.
U nekim implementacijama, w je ceo broj od 11 do 20, kao što su 11, 12, 13, 14, 15 ili 16.
U nekim implementacijama, B se bira između bilo koje od sledećih struktura:
pri čemu je y ceo broj od 1 do 10.
Konjugat antitelo-lek se može koristiti za prenošenje aktivnog sredstva u ciljnu ćeliju subjekta za lečenje subjekta korišćenjem postupka za pripremu kompozicije poznate stručnjacima u tehnici. U nekim aspektima, pronalazak se odnosi na kompoziciju (npr. farmaceutsku kompoziciju) koja sadrži konjugat antitelo-lek kao što je ovde opisan.
Kompozicije se mogu pripremiti u obliku za injekcije, bilo kao tečni rastvor ili kao suspenzija. Čvrsti oblici pogodni za injekcije mogu se takođe pripremiti, na primer, kao emulzije, ili sa konjugatom antitelo-lek inkapsuliranim u lipozome. Konjugati antitelo-lek se mogu kombinovati sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, koji uključuje bilo koji nosač koji ne indukuje proizvodnju antitela štetnih za subjekta koji prima nosač. Pogodni nosači obično obuhvataju velike makromolekule koji se sporo metabolišu, na primer, proteine, polisaharide, polimlečne kiseline, poliglikolne kiseline, polimerne amino-kiseline, kopolimere amino-kiselina, lipidne agregate i slično.
Kompozicije, takođe, mogu da sadrže razblaživače, na primer, vodu, fiziološki rastvor, glicerol i etanol. Pomoćne supstance, na primer, sredstva za vlaženje ili emulgatori, pH puferske supstance i slično mogu takođe biti prisutne u njima. Kompozicije se mogu davati parenteralno putem injekcije, pri čemu takva injekcija može biti ili supkutana ili intramuskularna injekcija. U nekim primenama, kompozicija se može primeniti u tumor. Kompozicija se može ubaciti (npr. ubrizgati) u tumor. Dodatne formulacije su pogodne za druge oblike primene, kao što su supozitorije ili oralna primena. Oralne kompozicije se mogu davati kao rastvor, suspenzija, tableta, pilula, kapsula ili formulacija sa produženim oslobađanjem.
Kompozicije se mogu davati na način kompatibilan sa dozom i formulacijom. Kompozicija poželjno sadrži terapeutski efikasnu količinu konjugata antitelo-lek. Izraz „terapeutski efikasna količina” označava pojedinačnu dozu ili kompoziciju koja se primenjuje u shemi višestrukih doza koja je efikasna za lečenje ili prevenciju bolesti ili poremećaja. Doza može da varira u zavisnosti od subjekta koji se leči, zdravstvenog i fizičkog stanja subjekta, željenog stepena zaštite i drugih relevantnih faktora. Tačna količina aktivnog sastojka (npr. konjugata antitelo-lek) može zavisiti od procene lekara. Na primer, terapeutski efikasna količina konjugata antitelo-lek ili kompozicije koja ih sadrži može se dati pacijentu koji boluje od raka ili tumora za lečenje raka ili tumora.
Konjugat antitelo-lek u skladu sa predmetnim pronalaskom ili kompozicija koja ga sadrži može se primeniti u obliku njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata. U nekim realizacijama, konjugat antitelo-lek u skladu sa predmetnim pronalaskom ili kompozicija koja ga sadrži može se primeniti sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom i/ili farmaceutski prihvatljivim aditivom. Efektivna količina i vrsta farmaceutski prihvatljive soli ili solvata, ekscipijensa i aditiva mogu se meriti standardnim metodama (vidi, npr. Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th Edition, 1990).
Izraz „terapeutski efikasna količina” u odnosu na rak ili tumor označava količinu koja može smanjiti broj ćelija raka; smanjiti veličinu ćelija raka; inhibirati ćelije raka od prodora u periferne sisteme ili smanjiti upad; inhibirati širenje ćelija raka na druge sisteme ili smanjiti širenje; inhibirati rast ćelija raka; i/ili ublažiti najmanje jedan simptom povezan sa rakom. U lečenju raka, efikasnost leka se može proceniti vremenom do progresije tumora (TTP) i/ili stopom odgovora (RR).
Izraz „farmaceutski prihvatljive soli” koji se ovde koristi uključuje organske soli i neorganske soli. Njihovi primeri uključuju hidrohlorid, hidrobromid, hidrojodid, sulfat, citrat, acetat, oksalat, hlorid, bromid, jodid, nitrat, bisulfat, fosfat, kiseli fosfat, izonikotinat, laktat, salicilat, kiseli citrat, tartarat, oleat, tanat, pantonat, bitartrat, askorbat, sukcinat, maleat, gentizinat, fumarat, glukonat, glukoronat, saharat, format, benzoat, glutamat, metan sulfonat, etan sulfonat, benzen sulfonat, p-benzol sulfonat i pamoat, (tj. 1,1'-metilenbis-(2-hidroksi-3-naftoat)). Farmaceutski prihvatljiva so može da uključuje drugi molekul (na primer, acetatni jone, sukcinatni jone i/ili druge kontra jone).
Primeri solvata koji se mogu koristiti za farmaceutski prihvatljive solvate konjugata antitelo-lek koji su ovde opisani uključuju vodu, izopropanol, etanol, metanol, dimetil sulfoksid, etil acetat, sirćetnu kiselinu i etanol amin.
Kako se ovde koristi, terapeutik koji „sprečava” poremećaj ili stanje odnosi se na jedinjenje koje, u statističkom uzorku, smanjuje pojavu poremećaja ili stanja u tretiranom uzorku u odnosu na netretirani kontrolni uzorak, ili odlaže početak ili smanjuje ozbiljnost jednog ili više simptoma poremećaja ili stanja u odnosu na netretirani kontrolni uzorak.
Izraz „lečenje” uključuje profilaktičke i/ili terapeutske tretmane. Izraz „profilaktički ili terapeutski” tretman je poznat u tehnici i uključuje davanje domaćinu jedne ili više predmetnih kompozicija. Ako se primenjuje pre kliničke manifestacije neželjenog stanja (npr. bolesti ili drugog neželjenog stanja životinje domaćina), onda je tretman profilaktički (tj. štiti domaćina od razvoja neželjenog stanja), dok ako se primenjuje nakon manifestacija neželjenog stanja, tretman je terapeutski (tj. namenjen je smanjenju, poboljšanju ili stabilizaciji postojećeg neželjenog stanja ili njegovih neželjenih efekata).
U nekim realizacijama, pronalazak se odnosi na postupak lečenja raka kod subjekta, koji obuhvata davanje subjektu farmaceutske kompozicije koja sadrži konjugat antitelo-lek kao što je ovde opisano. U poželjnim primenama, subjekt je sisar. Na primer, subjekt može biti izabran iz glodara, lagomorfa, mačaka, pasa, svinja, ovaca, goveda, kopitara i primata. U određenim poželjnim primenama, subjekt je čovek.
U daljem tekstu, konfiguracije predmetnog pronalaska će biti detaljno opisane kroz primere, ali sledeći primeri služe samo da pomognu u razumevanju predmetnog pronalaska. Obim predmetnog pronalaska nije ograničen na njih. Dalje, osim ako nije drugačije opisano, reagens, rastvarač i početni materijal opisani u specifikaciji mogu se lako nabaviti od komercijalnog dobavljača.
PRIMERI
U tabeli ispod su navedene skraćenice koje se koriste u sledećim primerima:
Primer 1. Priprema jedinjenja 1i
Priprema jedinjenja 1b
U suspenziju 5-formilsalicilne kiseline 1a (10,0 g, 60,1 mmol) u THF (30 mL) dodaju se DIPEA (29,8 mL, 180 mmol) i benzil bromid (7,15 mL, 60,1 mmol) na sobnoj temperaturi. Zatim je reakciona smeša zagrevana pod refluksom. Posle 18 sati pod refluksom, reakciona smeša je razblažena sa 2 N aq. HCl (100 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 1b (12,9 g, 83 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11,38 (s, 1H), 9,86 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,01 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,44 (m, 5H), 7,12 (d, J = 8,0 Hz, IH), 5,42 (s, 2H).
Priprema jedinjenja 1c
U rastvor jedinjenja 1b (5,0 g, 19,5 mmol) i jedinjenja M (8,5 g, 21,4 mmol, videti Primer 66) u MeCN (100 mL) dodato je 4 Å molekulsko sito (10 g) i Ag2O (18,0 g, 78,0 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 12 sati pod N2, reakciona smeša je koncentrovana. Zatim je koncentrovana reakciona smeša razblažena sa H2O (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 200 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 1c (8,63 g, 77 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,94 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,02 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,46-7,28 (m, 6H), 5,41-5,32 (m, 6H), 4,27 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,05 (m, 9H).
Priprema jedinjenja 1d
U rastvor jedinjenja 1c (3,10 g, 5,41 mmol) in i-PrOH/CHCl3(9 mL/45 mL) je dodat silika gel (3 g) i NaBH4(0,41 g, 10,82 mmol) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata pod N2, reakciona smeša je ugašena sa H2O (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (200 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog MgSO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 1d (2,73 g, 87 %) kao bela čvrsta supstanca.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,74 (s, 1H), 7,48-7,34 (m, 6H), 7,16 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,35-5,26 (m, 5H), 5,15 (m, 1H), 4,17 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,04 (s, 9H), 1,73 (t, 1H) .
Priprema jedinjenja 1e
U rastvor jedinjenja 1d (2,40 g, 4,17 mmol) u EtOH (150 mL) dodat je Pd/C (10 tež. %, 240 mg). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 10 minuta pod vodonikom. Zatim je reakciona smeša filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa EtOH (100 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod 1e kao bela čvrsta supstanca (2,10 g), koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,06 (s, 1H) 7,61 (dd, J = 8,8 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,0 Hz 1H), 5,43-5,29 (m, 5H), 4,17 (s, 2H), 4,32 (d, J = 8,4 Hz, 1H) 3,69 (s, 3H), 2,11-2,08 (t, 9H), 1,24 (t, 1H).
Priprema jedinjenja 1f
U rastvor sirovog jedinjenja 1e (2,10 g, 4,33 mmol) u DMF (50 mL) je dodat K2CO3(1,79 g, 13,01 mmol) i alil bromid (0,41 mL, 4,76 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata, reakciona smeša je razblažena sa 2 N aq. HCl (100 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (200 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog MgSO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 1f (1,55 g, 70 % za 2 koraka).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,74 (s, 1H), 7,45 (dd, J = 8,0 Hz, 2,0 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,02 (m, 1H), 5,40-5,26 (m, 5H), 5,16 (m, 1H), 4,76 (m, 2H), 4,66 (s, 2H), 4,19 (m, 1H) , 3,73 (s, 3H), 2,07-2,05 (m, 9H), 1,68 (t, 1H).
Priprema jedinjenja 1g
U rastvor jedinjenja 1f (2,50 g, 4,77 mmol) u DMF (20 mL) su dodati bis(4-nitrofenil)karbonat (1,30 g, 4,29 mmol) i DIPEA (0,80 mL 4,77 mmol) na 0 °C pod N2. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min i ostavljena da se zagreje do sobne temperature 1 sat. Reakciona smeša je razblažena sa H2O (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (200 mL). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (100 mL) i osušen preko anhidrovanog MgSO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 1g (2,80 g, 85 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,28 (d, J = 15,2 Hz, 2H), 7,85 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,55 (dd, J = 3,2 Hz, 2,4 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 15,2 Hz, 2H), 7,20 (d, J = 8,8 Hz, 1H) 6,03 (m, 1H), 5,42-5,19 (m, 8H), 4,78 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 4,12 (d, J = 7,2 Hz, IH), 3,74 (s, 3H).
Priprema jedinjenja 1h
Jedinjenje 1g (528 mg, 0,77 mmol), MMAE (500 mg, 0,7 mmol) i anhidrovani HOBt (19 mg, 0,14 mmol) rastvoreni su u DMF (3 mL) na 0 °C. Zatim su dodati piridin (0,7 mL) i DIPEA (0,24 mL, 1,39 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 24 sata pod N2, reakciona smeša je razblažena sa H2O/zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (100 mL/50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 1h (600 mg, 67 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1269.5, [M+Na]<+>1291.5.
Priprema jedinjenja 1i
U rastvor jedinjenja 1h (600 mg, 0,47 mmol) i trifenilfosfina (31 mg, 0,12 mmol) u DCM (10 mL) dodati su pirolidin (0,047 mL, 0,57 mmol) i Pd(PPh3)4(27 mg, 0,02 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja tokom 2 sata, reakciona smeša je razblažena sa H2O/1 N aq. HCl (50 mL/50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (Hex/EtOAc 1/1 do EtOAc) da bi se dobilo jedinjenje 1i (480 mg, 82 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: [M+H]<+>1228.4, [M+Na]<+>1250.4.
Primer 2. Priprema jedinjenja 1j
Jedinjenje 1j je pripremljeno od MMAF-OMe sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 1i u primeru 1.
Primer 3. Priprema jedinjenja 2g
Priprema jedinjenja 2a
2-(2-(2-Hloroetoksi)etoksi)etanol (10 g, 59,3 mmol) je rastvoren u DMF (90 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom, a zatim je dodat NaN3(5.78 g, 88,9 mmol). Posle mešanja na 100 °C tokom 13 sati, dodati su hloroform (200 mL) i destilovana voda (300 mL) da bi se ekstrahovao organski sloj, a ekstrahovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 2a (10,3 g, 99 %).<1>H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 3,75-3,73 (m, 2H), 3,70-3,68 (m, 6H), 3,63-3,61 (m, 2H), 3,40 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 2,20 (t, J = 6,0 Hz, 1H).
Priprema jedinjenja 2b
CBr4(21,4 g, 64,6 mmol) je rastvoreno u DCM (100 mL) na 0°C pod azotom, a zatim su dodati trifenilfosfin (16,9 g, 64,6 mmol) u DCM (100 mL) i jedinjenje 2a (10.3 g, 58,7 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 13 sati. Nakon što je reakcija završena, dodati su DCM (300 mL) i destilovana voda (300 mL) da bi se ekstrahovao organski sloj, a ekstrahovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 2b (12 g, 85 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,83 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,72-3,67 (m, 6H), 3,48 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,40 (t, J = 4,8 Hz, 2H)
Priprema jedinjenja 2c
Jedinjenje 2b (1g, 4,20 mmol) je rastvoreno u MeCN na sobnoj temperaturi pod azotom, a zatim su dodati N-Boc-hidroksilamin (643 mg, 4,82 mmol) i DBU (0,66 mL, 4,41 mmol). Posle mešanja na 60 °C tokom 13 sati, dodaju se DCM (300 mL) i destilovana voda (300 mL) da bi se ekstrahovao organski sloj, a ekstrahovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 2c (748 mg, 70 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,55 (s, 1H), 4,05-4,03 (m, 2H), 3,76-3,74 (m, 2H), 3,74-3,69 (m, 6H), 3,42 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 1,49 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 2d
Jedinjenje 2c (200 mg, 0,688 mmol) je rastvoreno u MeOH (5 mL), a zatim je dodat Pd/C (10% tež., 70 mg) i mešan pod vodonikom 3 sata. Nakon što je reakcija završena, reakciona smeša je filtrirana kroz celit i koncentrovana pod sniženim pritiskom, čime je proizvedeno jedinjenje 2d (180 mg, 98 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,04-4,01 (m, 2H), 3,74-3,62 (m, 7H), 3,55 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 2,88 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 2,81 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 1,64 (s, 2H), 1,48 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 2e
DIPEA (0,042 mL, 0,32 mmol) i PyBOP (126 mg, 0,24 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 1i (200 mg, 0,16 mmol) i jedinjenja 2d (51 mg, 0,19 mmol) u DMF (4 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 4 sata pod N2, reakciona smeša je razblažena sa H2O (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 2e (142 mg, 60 %). ELMS m/z: [M+H]<+>1474.7.
Priprema jedinjenja 2f
U rastvor jedinjenja 2e (142 mg, 0,096 mmol) u MeOH (2 mL) dodat je LiOH monohidrat (36 mg, 0,86 mmol) u H2O (2 mL) na -20 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je razblažena sa H2O/2 N aq. rastvorom HCl (50 mL/2 mL) i ekstrahovana sa CHCl3(2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobilo sirovo jedinjenje 2f (128 mg), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+H]<+>1334.5.
Priprema jedinjenja 2g
U rastvor sirovog jedinjenja 2f (105 mg, 0,08 mmol) u DCM (3 mL) je dodata HCl (4 M u 1,4-dioksanu, 1 mL) na 0 °C. Posle 1 sata, rastvarač i višak HCl su uklonjeni pomoću N2protoka, a zatim je ostatak prečišćen pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 2g (47 mg, 46 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: [M+H]<+>1234.4.
Primer 4. Priprema jedinjenja 2h
Jedinjenje 2h je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 2d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 2g u primeru 3. ELMS m/z: [M+H]<+>1248.9.
Primer 5. Priprema jedinjenja 3f
Priprema jedinjenja 3a
Smeša heksaetilen glikola (1,0 g, 3,54 mmol), Ag2O (1,23 g, 5,31 mmol) i KI (117 mg, 0,71 mmol) u DCM (10 mL) je sonikirana tokom 15 min. Suspenzija je ohlađena na -30 °C i rastvor p-toluensulfonil hlorida (688 mg, 3.61 mmol) u DCM (13 mL) je dodat u kapima. Smeša je zatim postepeno zagrejana do 0 °C i držana 15 minuta na ovoj temperaturi. Zatim je reakciona smeša osušena preko anhidrovanog MgSO4, filtrirana i koncentrovana da bi se dobio sirupasti ostatak. Zatim je sirupasti ostatak prečišćen hromatografijom na koloni (EtOAc do EtOAc/MeOH 10/1). Čiste frakcije su uparene u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje 3a (1,18 g, 77 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,16 (m, 2H), 3,72-3,58 (m, 22H), 2,97 (br, 1H), 2,45 (s, 3H).
Priprema jedinjenja 3b
Jedinjenje 3a (1,18 g, 2,71 mmol) i NaN3(264 mg, 4,07 mmol) rastvoreno je u DMF (3 mL). Zatim je reakciona smeša zagrejana na 100 °C. Posle 15 sati na 100 °C, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EtOAc do EtOAc/MeOH 10/1) da bi se dobilo jedinjenje 3b (728 mg, 87 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,75-3,70 (m, 2H), 3,69-3,63 (m, 18H), 3,62-3,60 (m, 2H), 3,39 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 3,07 (br, 1H).
Priprema jedinjenja 3c
U mešani rastvor jedinjenja 3b (728 mg, 2,36 mmol) u THF (10 mL) na 0 °C dodaju se trietilamin (0,73 mL, 5,21 mmol) i anhidrid metansulfonske kiseline (619 mg, 3,55 mmol). Posle 2 sata, LiBr (1,03 g, 11,8 mmol) je dodat u mešani rastvor i dobijena reakciona smeša je refluksovana 5 sati. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EtOAc do EtOAc/MeOH 10/1) da bi se dobilo jedinjenje 3c (810 mg, 92 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,81 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,69-3,65 (m, 18H), 3,47 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,39 (t, J = 5,2 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 3d
NaH (60 % u ulju, 564 mg, 12,9 mmol) je dodat u mešanu smešu jedinjenja 3c (3,42 g, 9,24 mmol) i N,N-diBoc-hidroksilamina (2,80 g, 12,0 mmol, sintetizovan postupkom u PCT dokumentu dr. WO2004/018466A2) u DMF (20 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i držana 2 sata na ovoj temperaturi. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EtOAc/Hex 1/20 do 1/5), čime je dobijeno jedinjenje 3d (3,51 g, 73 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,08 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,73 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,69-3,62 (m, 18H), 3,39 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 1,53 (s, 18H).
Priprema jedinjenja 3e
U mešanu smešu jedinjenja 3d (123 mg, 0,23 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 25 mg) u MeOH (5 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,05 mL, 0,21 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 5 sati pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (100 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 3e (118 mg, 95 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3,98 (t, J = 4,4 Hz, 2H), 3,61-3,51 (m, 22H), 2,95 (br, 3H), 1,46 (s, 18H). EI-MS m/z:
[M+H]<+>497.6.
Priprema jedinjenja 3f
Jeidnjenje 3f je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 3e sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 2g u Primeru 3. EI-MS m/z: [M+H]<+>1366.6, [M+Na]<+>1389.6.
Primer 6. Priprema jedinjenja 3g
Jedinjenje 3g je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 3e sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 2g u Primeru 3. EI-MS m/z: [M+H]<+>1380.6, [M+Na]<+>1403.6.
Primer 7. Priprema jedinjenja 4f
Priprema jedinjenja 4a
U mešani rastvor dodekaetilen glikola (1,8 g, 3,2 mmol) u DCM (18 mL) je dodat ptoluensulfonil hlorid (656 mg, 3,4 mmol), Ag2O (1,13 g, 4,9 mmol) i KI (108 mg, 0,65 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa DCM (50 mL). Filtrat je koncentrovan. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 4a (490 mg, 21 %) kao svetlo žućkasto ulje.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,81 (d, 2H), 7,35 (d, 2H), 4,16 (t, 2H), 3,72-3,58 (m, 46H), 2,82 (br s, 1H), 2,45 (s, 3H).
Priprema jedinjenja 4b
Jedinjenje 4a (490 mg, 0,69 mmol) i NaN3(68 mg, 1,04 mmol) rastvoreno je u DMF (16 mL) i reakciona smeša je zagrevana na 100 °C tokom 3 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 4b (267 mg, 67 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,72-3,60 (m, 46H), 3,39 (t, 2H), 2,84 (t, 1H), 3,40 (m, 2H).
Priprema jedinjenja 4c
U mešani rastvor jedinjenja 4b (265 mg, 0,46 mmol) u THF (10 mL) na 0 °C dodati su 4-metilmorfolin (0,066 mL, 0,60 mmol) i anhidrid metansulfonske kiseline (121 mg, 0,69 mmol). Posle 2 sata, LiBr (120 mg, 1,38 mmol) je dodat u mešani rastvor i dobijena reakciona smeša je refluksovana 6 sati. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EtOAc do EtOAc/MeOH 10/1) da bi se dobilo jedinjenje 4c (178 mg, 60 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,81 (t, 2H), 3,65 (m, 42H), 3,47 (t, 2H), 3,39 (t, 2H).
Priprema jedinjenja 4d
NaH (60 % u ulju, 14 mg, 0,33 mmol) je dodat u mešanu smešu jedinjenja 4c (175 mg, 0,27 mmol) i N-Boc-hidroksilamin (47 mg, 0,35 mmol) u DMF (5 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i držana 12 sati na ovoj temperaturi. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (MeOH/CHCl31/20 do 1,5/20), čime se dobilo jedinjenje 4d (148 mg, 78 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,00 (t, 2H), 3,66 (m, 44H), 3,39 (t, 2H), 1,47 (d, 9H).
Priprema jedinjenja 4e
U mešanu smešu jedinjenja 4d (148 mg, 0,21 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 28 mg) u MeOH (5 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,053 mL, 0,21 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (30 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 4e (142 mg, 96 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4,00 (t, 2H), 3,92 (t, 2H), 3,76-3,64 (m, 42H), 3,18 (t, 2H) 1,47 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 4f
Jedinjenje 4f je bilo pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 4e sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 2g u Primeru 3. ELMS m/z: [M+H]<+>1631.9.
Primer 8. Priprema jedinjenja 4g
Jedinjenje 4g je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 4e sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 2g u Primeru 3. ELMS m/z: ELMS m/z [M+H]<+>1645.3.
Primer 9. Priprema jedinjenja 5e
Priprema jedinjenja 5a
U rastvor 2-aminoetanola (10 g, 164 mmol) u DCM (70 mL) dodati su trietilamin (3,9 mL, 28,1 mmol) i benzil hloroformat (30 mL, 213 mmol) u DCM (30 mL) na 0 °C pod N2. Posle 24 sata, reakciona smeša je koncentrovana. Dobijeni ostatak je razblažen sa H2O (50 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 5a (17 g, 53 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,40-7,27 (m, 5H), 5,11 (s, 2H), 3,72 (s, 2H), 3,56 (s, 2H), 2,13 (br s, 1H).
Priprema jedinjenja 5b
U rastvor jedinjenja 5a (5,0 g, 25,6 mmol) u DCM (70 mL) i trietilamina (3,9 mL, 28,1 mmol) su dodati DMAP (100 mg, 5,12 mmol) i p-toluensulfonil hlorid (5,4 g, 28,1 mmol) u DCM (30 mL) na 0 °C pod N2. Posle 15 sati na 0 °C, reakciona smeša je razblažena sa zasićenim aq. NH4Cl (100 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 5b (8,29 g, 92 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,77 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,40-7,28 (m, 7H), 5,07 (s, 3H), 4,09 (s, 2H), 3,45 (s, 2H), 2,43 (s, 3H).
Priprema jedinjenja 5c
U rastvor jedinjenja 5b (2.0 g, 7,23 mmol) u THF (20 mL) je dodat N,N-diBoc-hidroksilamin (1,7 g, 7,44 mmol) i NaH (300 mg, 6,86 mmol) na 0 °C pod N2. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 17 sati, reakciona smeša je razblažena zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 5c (375 mg, 16 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,27 (m, 5H), 5,11 (s, 2H), 4,01 (br s, 2H), 3,44 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 1,52 (s, 18H). ELMS m/z:
[M+H]<+>410.7.
Priprema jedinjenja 5d
U rastvor jedinjenja 5c (187 mg, 0,45 mmol) u MeOH (20 mL) je dodat Pd/C (10 % tež. %, 20 mg) i zatim je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 4 sata pod vodonikom. Reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (20 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 5d (120 mg) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.
Priprema jedinjenja 5e
Jedinjenje 5e je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 5d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 2g u Primeru 3. EI-MS m/z: [M+H]<+>1146.4.
Primer 10. Priprema jedinjenja 5f
Jedinjenje 5f je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 5d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 2g u Primeru 3. EI-MS m/z: [M+H]<+>1160.3.
Primer 11. Priprema jedinjenja 6e
Priprema jedinjenja 6a
DIPEA (1,2 mL, 9,96 mmol) i HBTU (1,69 g, 6,22 mmol) su dodati u mešanu smešu Z-Asp(OMe)-OH (500 mg, 1,78 mmol) i jedinjenja 2d (642 mg, 2,98 mmol) u DMF (5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 22 sata pod N2. Reakciona smeša je razblažena sa H2O (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 6a (368 mg, 40 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,85-7,70 (m, 1 H), 7,45-7,28 (m, 5H), 7,04 (s, 1H), 6,02 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,11 (s, 2H), 4,65-4,50 (m, 1H), 4,00 (d, J = 3,6 Hz, 2H), 3,72-3,30 (m, 10H), 2,80 (dd, J = 5,6 Hz, 2H), 1,46 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 6b
U mešanu smešu jedinjenja 6a (150 mg, 0,28 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 20 mg) u MeOH (5 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,07 mL, 0,28 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (20 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 6b (169 mg) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+1]<+>393.7.
Priprema jedinjenja 6c
DIPEA (0,022 mL, 0,12 mmol) i HBTU (20 mg, 0,05 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 1i (50 mg, 0,04 mmol) i jedinjenja 6b (22 mg, 0,05 mmol) u DMF (1 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 14 sati pod N2. Zatim je reakciona smeša razblažena sa H2O (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 6c (38 mg, 60 %). EI-MS m/z:
[M+H]<+>1604.5.
Priprema jedinjenja 6d
U rastvor jedinjenja 6c (38 mg, 0,023 mmol) u MeOH (1 mL) dodat je LiOH monohidrat (5 mg, 0,118 mmol) u H2O (1 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, pH rastvora je podešen sa AcOH na 4-5 i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u DMSO (1,5 mL) i prečišćen pomoću HPLC da bi se dobilo jedinjenje 6d (26 mg, 78 %).
EI-MS m/z: [M+H]<+>1450.5.
Priprema jedinjenja 6e
TFA (0,3 mL) je dodat u mešani rastvor jedinjenja 6d (26 mg, 0,018 mmol) u DCM (1,5 mL). Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 6e (19,5 mg, 80 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: [M+H]<+>1350.6.
Primer 12. Priprema jedinjenja 7e
Priprema jedinjenja 7a
NaH (60 tež. %, 500 mg, 12,49 mmol) je dodat u mešanu smešu jedinjenja 4c (6,10 g, 9,61 mmol) i N,N-diBoc-hidroksilamina (2,69 g, 11,53 mmol) u DMF (90 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i držana 12 sati na ovoj temperaturi. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni. Čiste frakcije su uparene u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje 7a (5,70 g, 75 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ4,05 (t, 2H), 3,71 (t, 2H), 3,64 (m, 42H), 3,37 (t, 2H), 1,51 (d, 18H).
Priprema jedinjenja 7b
U mešanu smešu jedinjenja 7a (5,70 g, 7,21 mmol), i Pd/C (10 tež. %, 570 mg) u MeOH (100 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 1,9 mL, 7,2 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (30 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 7b (5,10 g, 87 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4,21 (t, 2H), 4,07 (s, 2H), 3,95-3,78 (m, 42H), 3,32 (s, 2H) 1,63 (s, 18H).
Priprema jedinjenja 7c
DIPEA (0,25 mL, 1,42 mmol) i HBTU (337 g, 0,89 mmol) su dodati u mešanu smešu Z-Asp(OMe)-OH (100 mg, 0,36 mmol) i jedinjenja 7b (340 mg, 0,43 mmol) u DMF (10 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 20 sati pod N2. Zatim je reakciona smeša razblažena sa H2O (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 7c (123 mg, 58 %). EI-MS m/z:
[M+H]<+>1024.2.
Priprema jedinjenja 7d
U mešanu smešu jedinjenja 7c (120 mg, 0,12 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 20 mg) u MeOH (5 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,03 mL, 0,12 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (20 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 7d (120 mg) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.
Priprema jedinjenja 7e
Jedinjenje 7e je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 7d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 6e u Primeru 11. ELMS m/z: [M+H]<+>1747.1.
Primer 13. Priprema jedinjenja 8f
Priprema jedinjenja 8a
U rastvor 2-(2-(2-hloroetoksi)etoksi)etanola (5,0 g, 29,6 mmol) u acetonu (30 mL) dodat je NaI (13,3 g, 88,9 mmol). Reakciona smeša je refluksovana 12 sati. Nakon što je reakcija završena, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 8a (7,0 g, 91 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,80-3,73 (m, 4H), 3,72-3,65 (m, 4H), 3,63-3,61 (m, 2H), 3,27 (t, J = 6,4 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 8b
NaH (500 mg, 12.49 mmol) je dodat u mešanu smešu jedinjenja 8a (2,0 g, 7,69 mmol), i N,N-diBoc-hidroksilamina (2,33 g, 10,00 mmol) u DMF (20 mL) na 0 °C pod N2. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 17 sati, reakciona smeša je razblažena sa zasićenim aq. NH4Cl (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 k 50 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 8b (1,54 g, 54 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,27 (m, 5H), 5,11 (s, 2H), 4,01 (br s, 2H), 3,44 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 1,52 (s, 18H). ELMS m/z:
[M+H]<+>410.7.
Priprema jedinjenja 8c
U mešani rastvor jedinjenja 8b (123 mg, 0,242 mmol) u DMSO (2 mL) i DCM (2 mL) su dodati kompleks SO3.piridin (116 mg, 0,726 mmol) i trietilamin (0,17 mL, 1,21 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 1 sata, reakciona smeša je razblažena sa zasićenim aq. NH4Cl (10 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 x 10 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, i filtrirani. Koncentrovanje pod sniženim pritiskom dalo je jedinjenje 8c (88 mg), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,74 (s, 1H), 4,19 (s, 2H), 3,77-3,69 (m, 6H), 3,42 (m, 2H).
Priprema jedinjenja 8d
U rastvor β-glutaminske kiseline (500 mg, 0,339 mmol) u MeOH (10 mL) dodat je tionil hlorid (0,148 mL, 2,04 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 24 sata, reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje 8d (697 mg), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,40-7,27 (m, 5H), 5,11 (s, 2H), 3,72 (s, 2H), 3,56 (s, 2H), 2,13 (br s, 1H).
Priprema jedinjenja 8e
U rastvor jedinjenja 8d (34 mg, 0,16 mmol) i jedinjenja 8c (88 mg, 0.24 mmol) u MeOH (5 mL) je dodat NaCNBH3(10 mg, 0,16 mmol) na sobnoj temperaturi pod N2. Posle 3 sata, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 8e (53 mg, 63 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,25 (m, 10H), 5,60 (br s, 2H), 5,03 (s, 4H), 3,80-3,25 (m, 20H), 2,81 (s, 4H).
Priprema jedinjenja 8f
Jedinjenje 8f je bilo pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 8e sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 6e u Primeru 11. ELMS m/z: [M+H]<+>1365.0.
Primer 14. Priprema jedinjenja 9j
Priprema jedinjenja 9a
U rastvor heksaetilen glikola (10,48 g, 37,12 mmol) u DCM (400 mL) dodat je imidazol (3,20 g, 44,54 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 5 minuta, reakciona smeša je dodata u kapima u rastvor TBSCl (5,60 g, 37,12 mmol) u DCM (50 mL) na istoj temperaturi pod N2atmosferom. Reakciona smeša je mešana na 0 °C i zagrevana do sobne temperature 21 sat pod N2. Nakon što je reakcija završena, reakciona smeša je razblažena vodom (200 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 x 100 mL). Organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4 i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni. Čiste frakcije su uparene u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje 9a (6,70 g, 46 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,77-3,71 (m, 4H), 3,66-3,60 (m, 18H), 3,56-3,54 (t, 2H), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H).
Priprema jedinjenja 9b
U rastvor jedinjenja 9a (3,32 g, 8,37 mmol) u suvom THF (40 mL) dodat je NaH (55 % u ulju, 438 mg, 10,05 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 30 minuta, MeI (0,78 mL, 12,56 mmol) je dodat u reakcionu smešu na istoj temperaturi pod N2. Reakciona smeša je mešana i zagrevana do sobne temperature 18 sati pod N2. Nakon što je reakcija završena, ugašena je sa H2O (10 mL) i ekstrahovana sa EA (3 x 10 mL). Organski slojevi su kombinovani, isprani zasićenim aq. NH4Cl (5 mL) i slanim rastvorom (10 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i upareni pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni. Čiste frakcije su uparene u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje 9b (3,16 g, 92 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,78-3,75 (t, 2H), 3,65 (s, 20H), 3,57-3,54 (t, 4H), 3,38 (s, 3H), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H).
Priprema jedinjenja 9c
U rastvor jedinjenja 9b (3.16 g, 7,69 mmol) u acetonu (100 mL) je dodat Džonsov reagens (10 mL) na 0 °C pod N2. Reakciona smeša je mešana i zagrevana do sobne temperature 17 sati pod N2. Nakon što je reakcija završena, reakciona smeša je filtrirana i uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa H2O (100 mL) i ekstrahovan sa CHCl3(3 x 50 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i upareni pod sniženim pritiskom. Dobijeno sirovo jedinjenje 9c (2.28 g, 95 %) je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,16 (s, 2H), 3,76-3,75 (t, 2H), 3,69-3,67 (m, 16H), 3,57-3,55 (t, 2H), 3,38 (s, 3H).
Priprema jedinjenja 9d
DIPEA (3,8 mL, 22,03 mmol), HOBt (1,29 g, 9,55 mmol) i EDC·HCl (1,83 g, 9,55 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 9c (2,28 g, 7,34 mmol) i H-Lys(Z)-OMe hidrohlorida (2,91 g, 8,81 mmol) u DMF (30 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je koncentrovana. Prečišćavanje hromatografijom na koloni dalo je jedinjenje 9d (1,23 g, 72 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,38-7,31 (m, 5H), 5,10 (s, 2H), 5,00 (s, 1H) 4,68-4,62 (m, 1H), 4,03 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,68-3,64 (m, 16H), 3,56 (t, 2H), 3,39 (s, 3H), 3,20 (m, 2H), 1,89 (m, 1H), 1,74 (m, 1H), 1,55 (m, 1H), 1,40 (m, 1H). ELMS m/z:
[M+H]<+>586.8, [M+Na]<+>608.9.
Priprema jedinjenja 9e
U rastvor jedinjenja 9d (2,16 g, 3,68 mmol) u THF/MeOH/H2O (18 mL/6 mL/6 mL) je dodat LiOH monohidrat (307 mg, 7,31 mmol) na 0 °C pod N2. Reakciona smeša je mešana 1 sat na sobnoj temperaturi. Zatim je pH rastvora podešen na 2-3 sa 1 N aq. HCl. Reakciona smeša je sipana u H2O (20 mL) i ekstrahovana sa DCM (3 x 50 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko Na2SO4. Filtracija i koncentracija su proizvele jedinjenje 9e (2.28 g, 99 %), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,34-7,30 (m, 5H), 5,08 (s, 2H), 4,66-4,60 (q, 1H), 4,01 (s, 2H), 3,67-3,55 (m, 18H), 3,37 (s, 3H), 3,20 (m, 2H), 1,87 (m, 1H), 1,72 (m, 1H), 1,53 (m, 1H), 1,38 (m, 1H).
Priprema jedinjenja 9f
DIPEA (0,45 mL, 2,63 mmol), HOBt (154 mg, 0,11 mmol) i EDC·HCl (218 mg, 0,11 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 9e (502 mg, 0,88 mmol) i jedinjenja 7b (700 mg, 0,88 mmol) u DMF (8 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vod. NaHCOs (20 mL) i slani rastvor (20 mL) i osušen preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 9f (499 mg, 43 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,35-7,30 (m, 5H), 6,83 (s, 1H), 5,15 (s, 1H), 5,08 (s, 2H), 4,43 (q, 1H) 4,07 (t, 1H), 3,65-3,60 (m , 54H), 3,55-3,53 (m, 4H), 3,37 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 1,85 (m, 1H), 1,53-1,52 (d, 19H), 1,38 (m, 2H). ELMS m/z: [M+H]<+>1337.5.
Priprema jedinjenja 9g
U mešanu smešu jedinjenja 9f (499 mg, 0,37 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 50 mg) u MeOH (20 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,1 mL, 0,37 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 90 minuta pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (10 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 9g (458 mg, 98 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. EI-MS m/z: [M+H]<+>1218.6.
Priprema jedinjenja 9h
DIPEA (0,019 mL, 0,11 mmol) i HBTU (18 mg, 0,05 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 1i (45 mg, 0,04 mmol) i jedinjenja 9g (57 mg, 0,05 mmol) u DMF (0,5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 14 sati pod N2. Reakciona smeša je razblažena sa H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC, čime se dobilo jedinjenje 9h (65 mg, 57 %). EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1181.7.
Priprema jedinjenja 9i
U rastvor jedinjenja 9h (65 mg, 0,03 mmol) u MeOH (1,5 mL) dodat je LiOH monohidrat (10 mg, 0,24 mmol) u H2O (1,5 mL) na 0 °C. Posle 1 sata na 0 °C, pH rastvora je podešen sa AcOH na 4-5 i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Zatim je reakciona smeša rastvorena u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC, čime se dobilo jedinjenje 9i (45 mg, 55 %). EI-MS m/z: 1/2 [M+Na]<+>1098.7.
Priprema jedinjenja 9j
TFA (0,2 mL) je dodat u mešani rastvor jedinjenja 9i (45 mg, 0,02 mmol) u DCM (1 mL). Posle mešanja na 0 °C tokom 30 minuta, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u H2O/DMSO (1 mL/1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 9j (14 mg, 32 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>1026.3.
Primer 15. Priprema jedinjenja 10c
Priprema jedinjenja 10a
DIPEA (0,03 mL, 0,17 mmol), HOBt (10 mg, 0,075 mmol) i EDC·HCl (14 mg, 0,075 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 9e (33 mg, 0,058 mmol) i jedinjenja 7d (54 mg, 0,058 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (8 mL), zasićenim aq. NaHCO3(8 mL) i slanim rastvorom (8 mL), i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 10a (61 mg, 73 %). ELMS m/z:
[M+H]<+>1445.0, [M+H-Boc]<+>1344.9.
Priprema jedinjenja 10b
U mešanu smešu jedinjenja 10a (60 mg, 0,04 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 30 mg) u MeOH (10 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,01 mL, 0,01 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (40 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 10b (56 mg, 100 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. EI-MS m/z: [M+H]<+>1311.0, [M+Na+]<+>1332.9.
Priprema jedinjenja 10c
Jedinjenje 10c je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 10b sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 9j u Primeru 14. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1083.8.
Primer 16. Priprema jedinjenja 10d
Jedinjenje 10d je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 10b sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 9j u Primeru 14. EI-MS m/z: [M+H]<+>2181.3, 1/2 [M+H]<+>1091.3.
Primer 17. Priprema jedinjenja 11j
Priprema jedinjenja 11a
U rastvor jedinjenja 3a (8,0 g, 18,3 mmol) u THF (50 mL) je dodat LiBr (7,9 g, 91,6 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja tokom 17 sati pod refluksom, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 11a (3.2 g, 50 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,95-3,50 (m, 24H).
Priprema jedinjenja 11b
U rastvor jedinjenja 11a (3,2 g, 12,3 mmol) u acetonu (20 mL) na 0 °C dodat je Džonsov reagens (20 mL). Posle 15 sati na 0 °C, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je razblažen sa H2O (50 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 11b (3.2 g, 72 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,16 (s, 2H), 3,95-3,30 (m, 20H).
Priprema jedinjenja 11c
U rastvor jedinjenja 11b (3,2 g, 8,90 mmol) u MeOH (30 mL) dodat je oksalil hlorid (1,15 mL, 13,3 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 16 sati, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni, čime se dobilo jedinjenje 11c (2.7 g, 81 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,17 (s, 2H), 3,80-3,60 (m, 21H), 3,47 (t, J = 6,4 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 11d
Jedinjenje 11c (1,0 g, 2,67 mmol) i NaN3(261 mg, 4,01 mmol) rastvoreno je u DMF (3 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 100 °C tokom 5 sati. Nakon što je reakcija završena, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EtOAc do EtOAc/MeOH 10/1), čime je dobijeno jedinjenje 11d (854 mg, 95 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,17 (s, 2H), 3,76-3,64 (m, 21H), 3,39 (t, J = 5,2 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 11e
U mešani rastvor jedinjenja 11d (854 mg, 2,54 mmol) u MeOH (25 mL) na 0 °C je dodato 2 M aq. NaOH (6,3 mL, 12,64 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Rastvor je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijena suspenzija je zakiseljena sa 2N vodenim rastvorom HCl uz hlađenje na 0 °C. Ostatak je ekstrahovan sa CHCl3(8 x 50 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko Na2SO4i koncentrisani da bi se dobilo jedinjenje 11e (783 mg, 96 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,16 (s, 2H), 3,76-3,65 (m, 18H), 3,40 (t, J = 5,2 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 11f
DIPEA (0,47 mL, 2,72 mmol), HOBt (160 mg, 1,18 mmol) i EDC·HCl (226 mg, 1,18 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 9e (520 mg, 0,91 mmol) i jedinjenja 2d (270 mg, 0,91 mmol) u DMF (5 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (15 mL), zasićenim aq. NaHCO3(15 mL) i rastvorom soli (15 mL), i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 11f (631 mg, 85 %).
ELMS m/z: [M+H]<+>819.1, [M+H-Boc]<+>719.1 [M+Na+]<+>841.1.
Priprema jedinjenja 11g
U mešanu smešu jedinjenja 11f (300 mg, 0,36 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 70 mg) u MeOH (20 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,08 mL, 0,08 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (40 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 11g (200 mg, 99 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+H]<+>685.1, [M+Na]<+>707.1.
Priprema jedinjenja 11h
DIPEA (0,024 mL, 0,41 mmol), HOBt (24 mg, 0,18 mmol) i EDC·HCl (34 mg, 0,18 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 11g (100 mg, 0,14 mmol) i jedinjenja 11e (44 mg, 0,14 mmol) u DMF (5 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (10 mL) i ekstrahovana sa DCM (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 11h (73 mg, 53 %). ELMS m/z:
[M+H]<+>988.4, [M+Na-Boc]<+>888.2, [M+Na]<+>1010.4.
Priprema jedinjenja 11i
U mešanu smešu jedinjenja 11h (73 mg, 0,07 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 10 mg) u MeOH (7 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,018 mL, 0,018 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (30 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 11i (72 mg, 99 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+H]<+>962.4, [M+Na]<+>984.4.
Priprema jedinjenja 11j
Jedinjenje 11j je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 11i sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 9j u Primeru 14. ELMS m/z: [M+H]<+>1932.5.
Primer 18. Priprema jedinjenja 11k
Jedinjenje 11k je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 11i sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 9j u Primeru 14. ELMS m/z: [M+H]<+>1947.1.
Primer 19. Priprema jedinjenja 12c
Priprema jedinjenja 12a
DIPEA (0,13 mL, 0,77 mmol) i HBTU (110 mg, 0,35 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 9g (235 mg, 0,1929 mmol) i Z-Asp(OMe)-OH (54 mg, 0,212 mmol) u DMF (5 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (7 mL), zasićenim aq. NaHCOs (7 mL) i slanim rastvorom (7 mL), i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 12a (260 mg, 93 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,07 (t, 1H), 7,62 (t, 1H), 7,54-7,52 (m, 1H), 5,73 (s, 2H), 4,27-4,25 (q, 1H), 3,96 (t, 2H), 3,88 (s, 2H), 3,82 (s, 2H), 3,58-3,48 (m, 52H), 3,19-3,18 (m, 3H), 3,04-3,03 (m, 3H), 1,44 (s , 18H), 1,39-1,37 (m, 3H), 1,21-1,19 (m, 3H). ELMS m/z: [M+H-2Boc]<+>1031.6.
Priprema jedinjenja 12b
U mešanu smešu jedinjenja 12a (260 mg, 0,179 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 72 mg) u MeOH (20 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,040 mL, 0,179 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (40 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 12b (242 mg, 100 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z:
[M+H]<+>625.0, [M+H-Boc]<+>525.0, [M+H-2Boc]<+>424.9.
Priprema jedinjenja 12c
Jedinjenje 12c je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 12b sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 9j u Primeru 14. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1083.5.
Primer 20. Priprema jedinjenja 12d
Jedinjenje 12d je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 12b sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 9j u Primeru 14. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1090.5.
Primer 21. Priprema jedinjenja 13e
Priprema jedinjenja 13a
DIPEA (0,22 mL, 1,25 mmol) i HBTU (356 mg, 0,94 mmol) su dodati u mešanu smešu Z-Glu(OMe)-OH (222 mg, 0,75 mmol) i jedinjenja 7b (500 mg, 0,62 mmol) u DMF (5,0 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 14 sati pod N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (200 mL) i ekstrahovana sa EA (3 x 100 mL). Organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 13a (370 mg, 57 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,34 (br, 5H), 6,73 (br, 1H), 5,72 (d, J=7,6Hz, 1H), 5,06 (br, 2H), 4,28-4,18 (m, 1H), 4,07 (t, J= 4,4Hz, 2H), 3,76-3,71 (m, 2H), 3,70-3,50 (m, 45H), 3,48-3,42 (m, 2H), 2,53-2,36 (m, 2H), 2,20-2,08 (m, 1H), 2,00-1,88 (m,1H), 1,53 (s, 18 H). EI-MS m/z: [M+Na]<+>1061.2.
Priprema jedinjenja 13b
4N HCl u 1,4-dioksanu (0,08 mL, 0,32 mmol) je dodat u mešanu smešu jedinjenja 13a (370 mg, 0,35 mmol) i Pd/C (38 mg) u MeOH (8 mL) na 0 °C. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 20 sati pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (400 mL). Filtrat je koncentrovan, čime se dobilo jedinjenje 13b (301 mg, 90 %) kao žuta tečnost, koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,41 (br, 1H), 8,09 (br, 3H), 4,13 (br, 1H), 3,85-3,56 (m, 51 H), 2,55 (br, 2H), 2,38-2,18 (m, 2H), 1,53 (s, 18H). EI-MS m/z: [M+H]<+>905.0.
Priprema jedinjenja 13c
DIPEA (0,165 mL, 0,96 mmol) i HBTU (279 mg, 0,74 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 13b (300 mg, 0,32 mmol) i jedinjenja 9e (366 mg, 0,64 mmol) u DMF (5,0 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 14 sati pod N2. Reakciona smeša je razblažena vodom (200 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 13c (290 mg, 62 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,40-7,32 (m, 7H), 7,00 (br, 1H), 6,73 (br, 1H), 5,07 (br, 2H), 4,44-4,36 (m, 2H), 4,07 (t, J=4,8Hz, 2H), 4,02 (br, 2H), 3,73 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,71-3,52 (m, 68H), 3,24-3,14 (m, 2H), 2,52-2,34 (m, 3H), 2,18-2,06 (m, 2H), 1,98-1,82 (m, 4H), 1,76-1,64 (m, 3H), 1,53 (s, 18H). EI-MS m/z: [M+H]<+>1459.7.
Priprema jedinjenja 13d
Pd/C (21 mg) je dodat u mešanu smešu jedinjenja 13c (290 mg, 0,19 mmol) u MeOH (5 mL) na 0 °C. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 20 sati pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (400 mL). Filtrat je koncentrovan, čime se dobilo jedinjenje 13c (247 mg, 94 %) kao žuta tečnost, koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,20 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,74 (br, 1H), 7,30 (br, 1H), 4,66-4,48 (m, 2H), 4,07 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 4,01 (br, 2H), 3,74-3,62 (m, 70H), 3,57-3,53 (m, 2H), 3,04-2,98 (m, 2H), 2,24-2,15 (m, 2H), 2,14-2,06 (m, 2H), 1,99-1,86 (m, 4H), 1,84-1,74 (m, 2H), 1,53 (s, 18H). ELMS m/z: [M+H]<+>1325.5.
Priprema jedinjenja 13e
Jedinjenje 13e je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 13d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 9j u Primeru 14. ELMS m/z: [M+H]<+>2181.5.
Primer 22. Priprema jedinjenja 13f
Jedinjenje 13f je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 13d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 9j u Primeru 14. ELMS m/z: [M+H]<+>2195.5.
Primer 23. Priprema jedinjenja 14m
Priprema jedinjenja 14a
U rastvor 6-amino-1-heksanola (5,0 g, 42,6 mmol) u DCM (30 mL) dodat je di-terc-butil dikarbonat (9,3 g, 42,6 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja tokom 18 sati, trietilamin (8,7 mL, 63,9 mmol) i t-butildimetilsilil hlorid (7,7 g, 51,2 mmol) su dodati u reakcionu smešu na 0 °C. Posle 24 sata na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je razblažena zasićenim aq. NH4Cl (200 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (100 mL). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (100 mL) i osušen preko anhidrovanog MgSO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 14a (12 g, 84 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,50 (br s, 1H), 3,58 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,10 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 1,72-1,20 (m, 17H), 0,88 (s, 9H), 0,04 (s, 6H).
Priprema jedinjenja 14b
U rastvor jedinjenja 14a (6,0 g, 18,1 mmol) u THF (30 mL) dodaju se NaH (60 % u ulju, 2,4 g, 54,2 mmol) i metil jodid (3,4 mL, 54,2 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 14 sati, reakciona smeša je razblažena sa H2O (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 14b (4,3 g, 69 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,59 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,17 (br s, 2H), 2,82 (s, 3H), 1,62-1,21 (m, 17H), 0,88 (s, 9H), 0,04 (s, 6H).
Priprema jedinjenja 14c
U rastvor jedinjenja 14b (4,3 g, 12,4 mmol) u THF (15 mL) dodat je TBAF (1 M u THF, 15 mL, 14,9 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 5 sati, reakciona smeša je razblažena sa H2O (50 mL) i ekstrahovana sa dietil etrom (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 14c (3,0 g, 98 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,63 (br s, 2H), 3,20 (br s, 2H), 2,82 (s, 3H), 1,65-1,23 (m, 17H).
Priprema jedinjenja 14d
U rastvor jedinjenja 14c (3,0 g, 12,9 mmol) u THF (30 mL) dodat je tetrabromometan (6,4 g, 19,4 mmol) i trifenilfosfin (5,1 g, 19,4 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 2 sata, reakciona smeša je filtrirana kroz silika gel i isprana dietil etrom (100 mL). Filtrat je koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 14d (3,3 g, 86 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,40 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,19 (br s, 2H), 2,83 (s, 3H), 1,90-1,70 (m, 2H), 1,65-1,40 (m, 13H), 1,38-1,25 (m, 2H).
Priprema jedinjenja 14e
DIPEA (53,0 mL, 302,5 mmol) i EDC.HCl (35,7 g, 186,2 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 2d (35,0 g, 116,4 mmol) i 5-formilsalicilne kiseline (21,3 g, 128,0 mmol) u DCM (1,6 L) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 20 sati pod N2. Reakciona smeša je razblažena sa zasićenim aq. NH4Cl rastvorom (1,5 L) i ekstrahovana sa DCM (2 x 1,5 L). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (1,5 L) i osušeni anhidrovanim MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 14e (28.2 g, 59 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13,37 (br s, 1H), 9,86 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,07 (br s, 2H), 7,90 (d, J = 8,4 Hz, IH), 7,07 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,06-4,01 (m, 2H), 3,79-3,66 (m, 10H), 1,47 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 14f
U rastvor jedinjenja 14e (28,0 g, 67,9 mmol) u MeCN (500 mL) je dodato jedinjenje M (29,7 g, 74,7 mmol), 4 Å molekulsko sito (30 g) i Ag2O (62,9 g, 272 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 12 sati pod N2, reakciona smeša je koncentrovana, razblažena sa H2O (800 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (1 L). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 14f (30.1 g, 61 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,99 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,44 (br s, 1H), 7,18 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,45-5,30 (m, 4H), 4,26 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,02-3,97 (m, 2H), 3,80-3,55 (m, 13H), 2,06 (s, 9H), 1,46 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 14g
U rastvor jedinjenja 14f (29,0 g, 39,8 mmol) in i-PrOH/CHCl3(90 mL/450 mL) je dodat silika gel (16,7 g) i NaBH4(3,70 g, 99,5 mmol) na 0 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata pod N2, reakciona smeša je ugašena sa H2O (500 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (1 L). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog MgSO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 14g (24,1 g, 83 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,98 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,46 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,41 (br, 1H), 7,04 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,41-5,24 (m, 4H), 4,67 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 4,19 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,99-3,93 (m, 2H), 3,79-3,65 (m, 12H), 3,59-3,50 (m, 1H), 2,08-2,00 (m, 10H), 1,46 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 14h
U rastvor jedinjenja 14g (23,7 g, 31,5 mmol) u DMF (50 mL) je dodat bis(4-nitrofenil)karbonat (8,9 g, 29,3 mmol) i DIPEA (5,65 mL, 31,5 mmol) na 0 °C pod N2. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i ostavljena da se zagreje do sobne temperature 1 sat. Reakciona smeša je razblažena sa H2O (500 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (500 mL). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (2 x 200 mL), osušen preko anhidrovanog MgSO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 14h (22,4 g, 77 %) kao bela pena.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,28 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 8,13 (s, 1H), 7,68 (br s, 1H), 7,52 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,47 (br, 1H), 7,38 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,08 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,44-5,24 (m, 6H), 4,21 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,00 (br s, 2H), 3,80-3,64 (m, 12 H), 3,64-3,54 (m, 1H), 2,06 (s, 9H), 1,47 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 14i
α-Amanitin (60,0 mg, 0,065 mmol) je rastvoren u DMSO (2 mL) i jedinjenje 14d (114 mg, 0,39 mmol) i kalijum terc-butoksid (0,065 mL, 0,065 mmol) su dodati na 0 °C pod N2. Posle 4 sata na 0 °C, pH rastvora je podešen na 4-5 sa sirćetnom kiselinom. Ostatak je rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 14i (29 mg, 39 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: [M-Boc]<+>1032.4.
Priprema jedinjenja 14j
U rastvor jedinjenja 14i (29 mg, 0,026 mmol) u DCM (3 mL) je dodata TFA (0,5 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka i dobijeni ostatak je prečišćen pomoću HPLC, čime je proizvedeno jedinjenje 14j (26 mg, 99 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: [M+H]<+>1032.3, [M+Na]<+>1054.3.
Priprema jedinjenja 14k
Jedinjenje 14j (13 mg, 0,011 mmol), jedinjenje 14h (10 mg, 0,011 mmol) i anhidrovani HOBt (0,3 mg, 0,002 mmol) rastvoreni su u DMF (0,5 mL) na 0 °C. Zatim su dodani piridin (0,2 mL) i DIPEA (0,004 mL, 0,023 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 24 sata pod N2,reakciona smeša je rastvorena u DMSO (1 mL) i prečišćena pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 14k (11 mg, 54 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1788.1.
Priprema jedinjenja 14l
U rastvor jedinjenja 14k (11 mg, 0,006 mmol) u MeOH (0,2 mL) dodat je LiOH monohidrat (1,3 mg, 0,03 mmol) u H2O (0,2 mL) na -20 °C. Posle 1 sata na 0 °C, pH rastvora je podešen na 4-5 sa sirćetnom kiselinom. Dobijeni rastvor je rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC, čime je proizvedeno jedinjenje 14l (7,5 mg, 75 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z:
[M+H]<+>1648.6.
Priprema jedinjenja 14m
U rastvor jedinjenja 14l (7,5 mg, 0,0045 mmol) u DCM (3 mL) je dodata TFA (0,5 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak prečišćen pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 14m (6,2 mg, 85 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: [M+H]<+>: 1548.5.
Primer 24. Priprema jedinjenja 15b
Priprema jedinjenja 15a
Jedinjenje 15a je pripremljeno od jedinjenja 3e postupkom sličnim postupku pripreme jedinjenja 14h Primera 23. EI-MS m/z: [M+H]<+>1128.3, [M+H-Boc]<+>1028.3, [M+H-2Boc]<+>928.2.
Priprema jedinjenja 15b
Jedinjenje 15b je pripremljeno od jedinjenja 14j i jedinjenja 15a postupkom sličnim postupku pripreme jedinjenja 14m Primera 23. ELMS m/z: [M+H]<+>1681.6.
Primer 25. Priprema jedinjenja 16f
Priprema jedinjenja 16a
U mešani rastvor oksalil hlorida (2,8 mL, 32,5 mmol) u DCM (5 mL) dodat je DMSO (3,08 mL, 43,4 mmol) u DCM (15 mL), a zatim je reakciona smeša mešana na -78 °C tokom 30 minuta. Ovom rastvoru je dodato jedinjenje 2a (3,8 g, 21,7 mmol) na -78 °C i mešan je 1 sat. Dodat je trietilamin (15,1 mL, 108 mmol) u DCM (20 mL), a zatim je reakciona smeša ostavljena da se zagreje do sobne temperature, razblažena sa H2O (100 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 16a (1,8 g, 48 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,74 (s, IH), 4,19 (s, 2H), 3,77-3,69 (m, 6H), 3,42 (m, 2H).
Priprema jedinjenja 16b
U rastvor jedinjenja 16a (1,0 g, 3,32 mmol) i jedinjenja 2d (1,72 g, 9,96 mmol) u MeOH (15 mL) je dodat AcOH (0,19 mL, 3,32 mmol) na 0 °C. Posle mešanja tokom 30 minuta na 0 °C, NaCNBH3(658 mg, 9,96 mmol) je dodat i ostavljen da se zagreje do sobne temperature tokom 2 sata. Nakon što je reakcija završena, reakciona smeša je razblažena sa H2O (50 mL), a zatim ekstrahovana sa DCM (3 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 16b (800 mg, 41 %) kao svetlo žućkasto ulje.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,78 (brs, 1H), 4,01 (m, 2H), 3,69-3,65 (m, 24H), 3,39 (m, 4H), 3,04 (m, 6H), 1,47 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 16c
U rastvor jedinjenja 16b (350 mg, 0,60 mmol) u MeOH (10 mL) Pd/C (10 tež. %, 300 mg). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 8 sati pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (100 mL). Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 16c kao bezbojno ulje (300 mg, 94 %), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,02 (m, 2H), 3,71 (m, 2H), 3,65-3,55 (m, 22H), 2,92 (m, 4H), 2,76 (t, J = 5,2 Hz, 6H), 1,47 (s, 9H). ELMS m/z: [M+H]<+>527.6.
Priprema jedinjenja 16d
DIPEA (0,40 mL, 2,24 mmol) i PyBOP (711 mg, 1,34 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 1j (1,57 g, 1,23 mmol) i jedinjenja 16c (300 mg, 0,56 mmol) u DMF (15 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 4 sata pod N2, reakciona smeša je razblažena H2O (200 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u H2O/DMSO (5 mL/5 mL) i prečišćen HPLC-om daje jedinjenje 16d (1,57 g, 91,8 %). EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1502.7.
Priprema jedinjenja 16f
U rastvor jedinjenja 16d (1,10 g, 0,36 mmol) u MeOH/THF (5 mL/10 mL) NaOH (175 mg, 4,32 mmol) je dodat kap po kap u H2O (3 mL) na 0 °C. Posle 3 sata na 0 °C, pH rastvora je podešen na pH 4 korišćenjem 2 N aq. HCl i koncentrovan. Ostatak je razblažen sa DCM (12 mL) i TFA (3 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Ostatak je rastvoren u H2O/MeCN (7,5 mL/7,5 mL) i prečišćen HPLC-om daje jedinjenje 16f (432 mg, 46 %) kao belu čvrstu supstancu. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1298.5.
Primer 26. Priprema jedinjenja 16g
Jedinjenje 16g je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 16c sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 16f Primera 25. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1284.5.
Primer 27. Priprema jedinjenja 17d
Priprema jedinjenja 17a
U mešani rastvor oksalil hlorida (0,62 mL, 7,3 mmol) u DCM (4 mL) dodat je DMSO (1,04 mL, 14,6 mmol) u DCM (10 mL), a zatim je reakciona smeša mešana na -78 °C tokom 30 minuta. Ovom rastvoru je dodato jedinjenje 3b (1,5 g, 4,88 mmol) na -78 °C i mešano 1 sat. Dodat je trietilamin (2,72 mL, 19,50 mmol) u DCM (7 mL), a zatim je reakciona smeša ostavljena da se zagreje do sobne temperature. Posle koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EtOAc do EtOAc/MeOH 10/1), čime je dobijeno jedinjenje 17a (1,23 g, 82 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,73 (s, 1H), 4,16 (s, 2H), 3,75-3,61 (m, 18H), 3,39 (t, J = 5,2 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 17b
NaCNBH3(257 mg, 4,09 mmol) je dodat u mešanu smešu jedinjenja 17a (1.30 g, 4,25 mmol) i jedinjenja 2d (492 mg, 1,63 mmol) u MeOH (5 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je zatim postepeno zagrevana do sobne temperature tokom 2 sata. Nakon što je reakcija završena, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EtOAc do EtOAc/MeOH 10/1), čime je dobijeno jedinjenje 17b (620 mg, 45 %).
<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,96 (br, 1H), 3,79 (t, J = 4,8 Hz, 2H) 3,59 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,56-3,46 (m, 38H), 3,44-3,37 (m, 10H), 2,66-2,56 (m, 6H), 1,39 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 17c
U rastvor jedinjenja 17b (300 mg, 0,35 mmol) u MeOH (7 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 38 mg). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 4 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (400 mL). Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 17c kao bezbojno ulje (253 mg, 90 %), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3,79 (t, J=4,4Hz, 2H), 3,55-3,45 (m, 38H), 3,42 (t, J = 6,0 Hz, 10H), 2,66-2,56 (m, 10H), 1,39 (s, 9H). EI-MS m/z: [M+H]<+>791.0.
Priprema jedinjenja 17d
Jedinjenje 17d je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 17c sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 16f u Primeru 25. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1415.6.
Primer 28. Priprema jedinjenja 18c
Priprema jedinjenja 18a
NaCNBH3(197 mg, 3,14 mmol) je dodat u mešanu smešu jedinjenja 17a (998 mg, 3,26 mmol) i jedinjenja 3e (670 mg, 1,25 mmol) u MeOH (4 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je zatim postepeno zagrevana do sobne temperature tokom 2 sata. Nakon što je reakcija završena, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EtOAc do EtOAc/MeOH 10/1), čime je dobijeno jedinjenje 18a (668 mg, 49%).<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3,97 (m, 2H) 3,63-3,57 (m, 6H), 3,56-3,44 (m, 46H), 3,44-3,36 (m, 12H), 2,66-2,61 (m, 6H), 1,45 (s, 12H), 1,45 (s, 12H) .
Priprema jedinjenja 18b
U rastvor jedinjenja 18a (60 mg, 0,055 mmol) u MeOH (1,2 mL) dodat je Pd/C (10 tež. %, 6 mg). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 4 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (400 mL). Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 18b (55 mg, 96 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3,97 (m, 2H), 3,62-3,57 (m, 4H), 3,54-3,45 (m, 50H), 3,45-3,39 (m, 10H), 2,66-2,61 (m, 10H), 1,46 (s, 10H). ). ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>1023.3.
Jedinjenje 18c je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 18b sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 16f u Primeru 25. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1481.7.
Primer 29. Priprema jedinjenja 19c
Priprema jedinjenja 19a
NaCNBH3(197 mg, 3.14 mmol) je dodat u mešanu smešu jedinjenja 17a (118 mg, 0,16 mmol) i jedinjenja 4e (232 mg, 0,76 mmol) u MeOH (1 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je zatim postepeno zagrevana do sobne temperature tokom 2 sata. Nakon što je reakcija završena, reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EtOAc do EtOAc/MeOH 10/1), čime je dobijeno jedinjenje 19a (135 mg, 68 %).<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,72 (br s, 1H) 4,02 (t, 2H), 3,72-3,53 (m, 86H), 3,39 (t, 4H), 2,77 (bs, 4H), 1,47 (s, 9H). EI-MS m/z: [M+H]<+>1239.6.
Priprema jedinjenja 19b
U rastvor jedinjenja 19a (133 mg, 0,107 mmol) u MeOH (2 mL) su dodati Pd/C (10 tež. %, 26 mg) i HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,054 mL, 0,21 mmol) na 0 °C. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (40 mL). Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 19b (132 mg, 97 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,79 (s, 1H), 4,06-4,02 (m, 8H), 3,88 (m, 2H), 3,73-3,64 (m, 80H), 3,22 (s, 4H), 1,47 (s, 9H). EI-MS m/z: [M+H]<+>: 1187.5.
Priprema jedinjenja 19c
Jedinjenje 19c je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 19b sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 16f in Primer 25. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1614.5.
Primer 30. Priprema jedinjenja 20q
Priprema jedinjenja 20a
U rastvor 2-(2-(2-hloroetoksi)etoksi)etanola (5,0 g, 29,6 mmol) u acetonu (30 mL) dodat je NaI (13,3 g, 88,9 mmol). Reakciona smeša je refluksovana 12 sati. Nakon što je reakcija završena, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 20a (7.0 g, 91 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,80-3,73 (m, 4H), 3,72-3,65 (m, 4H), 3,63-3,61 (m, 2H), 3,27 (t, J = 6,4 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 20b
U rastvor jedinjenja 20a (7,0 g, 26,9 mmol) u acetonu (200 mL) na 0 °C dodat je Džonsov reagens (20 mL). Posle 15 sati na 0 °C, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je razblažen sa H2O (150 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 20b (7,0 g, 94 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) 84,22 (s, 2H), 3,85-3,70 (m, 6H), 3,35-3,25 (m, 2H).
Priprema jedinjenja 20c
U rastvor jedinjenja 20b (7,0 g, 25,5 mmol) u MeOH (70 mL) oksalil hlorid (3,2 mL, 38,3 mmol) je dodat na 0 °C pod N2. Posle 16 sati, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni, čime se dobilo jedinjenje 20c (5,7 g, 77 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,19 (s, 2H), 3,80-3,67 (m, 9H), 3,27 (t, J = 6,8 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 20d
U rastvor jedinjenja 20c (2,5 g, 8,67 mmol) i N,N-diBoc-hidroksilamin (2,6 g, 11,2 mmol) u DMF (30 mL) dodat je NaH (60 % u ulju, 454 mg, 10,4 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 15 sati, reakciona smeša je razblažena sa H2O (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 20d (1.87 g, 73 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,17 (s, 2H), 4,08 (m, 2H), 3,78-3,65 (m, 9H), 1,53 (s, 18H).
Priprema jedinjenja 20e
U rastvor jedinjenja 20d (1,87 g, 6,38 mmol) u THF/MeOH/H2O (45 mL/15 mL/15 mL) je dodat NaOH (600 mg, 15,9 mmol) na 0 °C pod N2. Reakciona smeša je mešana 3 sata na sobnoj temperaturi. Zatim je pH rastvora podešen na 4-5 sa 1 N vodenim rastvorom HCl. Reakciona smeša je sipana u H2O (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Kompleks 20e (1,6 g, 90 %) je proizvedeno kao bezbojno ulje i korišćeno je bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,17 (s, 2H), 4,08-4,02 (m, 2H), 3,80-3,67 (m, 6H), 1,48 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 20f
Pd/C (10 tež. %, 1,0 g) je dodat u rastvor jedinjenja 2a (6,7 g, 38,2 mmol) u MeOH (38 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 8 sati pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (100 mL). Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 20f (5,6 g, 99 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,95-3,25 (m, 12H), 2,90 (s, 2H).
Priprema jedinjenja 20g
Benzil hloroformat (6 mL, 42,2 mmol) je polako dodat u rastvor jedinjenja 20f (5,6 g, 38,2 mmol) i trietilamina (8 mL, 57,6 mmol) u THF (200 mL) na 0 °C tokom 30 minuta pod N2. Posle mešanja tokom 1 sata na 0 °C, reakciona smeša je koncentrovana i sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni, čime se dobilo jedinjenje 20g (5,7 g, 53 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,20 (m, 5H), 5,61 (br s, 1H), 5,07 (s, 2H), 3,85-3,20 (m, 12H).
Priprema jedinjenja 20h
U rastvor jedinjenja 20g (2,7 g, 9,53 mM) u DCM (30 mL) je dodat trietilamin (1,9 mL, 12,3 mmol) i p-toluensulfonil hlorid (2,3 g, 10,4 mmol) na sobnoj temperaturi pod N2. Posle 8 sati, reakciona smeša je razblažena sa H2O (50 mL) i ekstrahovana sa DCM (3 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 20h (3,51 g, 84 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,78 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,45-7,25 (m, 7H), 5,20 (br s, 1H), 5,09 (s, 2H), 4,20-4,05 (m, 2H), 3,75-3,25 (m, 10H), 2,43 (s, 3H).
Priprema jedinjenja 20i
Rastvor jedinjenja 20h (3,51 g, 8,02 mmol) i NaN3(3,8 g, 57,6 mmol) u DMF (27 mL) je zagrevan na 100 °C tokom 15 sati. Nakon što je reakcija završena, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je razblažen sa H2O (50 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 20i (2,05 g, 83 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,25 (m, 5H), 5,20 (br s, 1H), 5,10 (s, 2H), 3,80-3,25 (m, 12H).
Priprema jedinjenja 20i
Trifenilfosfin (2,09 g, 7,97 mmol) je dodat u rastvor jedinjenja 20i (2,05 g, 6,64 mmol) u THF (27 mL) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja tokom 2 sata pod N2, dodata je H2O (0,6 mL, 33,2 mmol) i reakciona smeša je refluksovana 3 sata. Zatim je reakciona smeša koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 20j (1,78 g, 95 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,25 (m, 5H), 5,63 (br s, 1H), 5,10 (s, 2H), 3,80-3,25 (m, 10H), 2,88 (s, 2H).
Priprema jedinjenja 20k
U mešani rastvor oksalil hlorida (1,4 mL, 15,9 mmol) u DCM (14 mL) dodat je DMSO (2,3 mL, 31,9 mmol) u DCM (28 mL), a zatim je reakciona smeša mešana na -78 °C tokom 30 minuta. Ovom rastvoru je dodato jedinjenje 20g (3,01 g, 10,6 mmol) na -78 °C. Posle mešanja tokom 1 sata na -78 na 0 °C, dodat je trietilamin (7,4 mL, 53,1 mmol) i reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature. Reakciona smeša je sipana u H2O (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko MgSO4. Filtracija i koncentracija su proizveli jedinjenje 20k (2,6 g), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,70 (s, 1H), 7,45-7,25 (m, 5 H), 5,25 (br s, 1 H), 5,10 (s, 2 H), 3,80-3,25 (m, 10 H).
Priprema jedinjenja 20l
U rastvor jedinjenja 20j (1,78 g, 6,30 mmol) i jedinjenja 20k (2,13 g, 7,56 mmol) u MeOH (63 mL) je dodat NaCNBH3(674 mg, 10,7 mmol) na sobnoj temperaturi pod N2. Posle 3 sata, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 20l (2,01 g, 58 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,25 (m, 10H), 5,60 (br s, 2H), 5,03 (s, 4H), 3,80-3,25 (m, 20H), 2,81 (s, 4H).
Priprema jedinjenja 20m
DIPEA (0,4 mL, 2,28 mmol) i PyBOP (713 mg, 1,36 mmol) su dodati u mešani rastvor jedinjenja 20l (500 mg, 0,91 mmol) i jedinjenja 20e (306 mg, 1,09 mmol) u DMF (10 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 6 sati pod N2,reakciona smeša je razblažena vodom (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 20m (318 mg, 43 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,25 (m, 10H), 5,47 (br s, 1H), 5,37 (br s, 1H), 5,09 (s, 4H), 3,80-3,25 (m, 34H), 1,46 (s, 9H). ELMS m/z: [M+H]<+>808.9.
Priprema jedinjenja 20n
U rastvor jedinjenja 20m (318 mg, 0,39 mmol) u MeOH (30 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 1,0 g). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (100 mL). Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 20n (180 mg) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+H]<+>541.2.
Priprema jedinjenja 20o
DIPEA (0,034 mL, 0,19 mmol) i PyBOP (63 mg, 0,12 mmol) su dodati u mešani rastvor jedinjenja 1i (130 mg, 0,10 mmol) i jedinjenja 20n (26 mg, 0,04 mmol) u DMF (3 mL) na 0 °C.
Posle mešanja na 0 °C tokom 30 minuta, reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature tokom 20 sati pod N2. Reakciona smeša je sipana u H2O (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Organski slojevi su kombinovani, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 20o (28 mg, 10 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>1481.5, 1/2 [M+Na]<+>1503.8.
Priprema jedinjenja 20p
U rastvor jedinjenja 20o (28 mg, 0,009 mmol) u MeOH (1 mL) dodat je LiOH monohidrat (2 mg, 0,047 mmol) u H2O (1 mL) na -5 °C. Reakciona smeša je mešana na -5 °C 1 sat. Nakon što je reakcija završena, pH rastvora je podešen na 4-5 sa sirćetnom kiselinom. Ostatak je rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 20p (16 mg, 67 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>: 1341.4.
Priprema jedinjenja 20q
U rastvor jedinjenja 20p (16 mg, 0,0059 mmol) u DCM (2 mL) je dodat TFA (0,2 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Ostatak je rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 20q (8,5 mg, 56 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>: 1291.3.
Primer 31. Priprema jedinjenja 21i
Priprema jedinjenja 21a
U rastvor jedinjenja 3b (9,0 g, 29,2 mmol) u MeOH (146 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 3,0 g) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 5 sati pod vodonikom. Zatim je reakciona smeša filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (100 mL). Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 21a (8.2 g, 100 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,80-3,60 (m, 24H), 3,01 (t, J = 4,8 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 21b
U rastvor jedinjenja 21a (8,24 g, 29,2 mmol) u THF (190 mL) dodat je trietilamin (6,1 mL, 43,9 mmol) i benzil hloroformat (4,6 mL 32,2 mmol) na 0 °C pod N2. Reakciona smeša je koncentrovana i sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 21b (5,59 g, 46 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,20 (m, 5H), 5,61 (br s, 1H), 5,09 (s, 2H), 3,85-3,50 (m, 22H), 3,39 (m, 2H).
Priprema jedinjenja 21c
U rastvor jedinjenja 21b (3,09 g, 7,43 mmol) u THF (75 mL) su dodati 4-metilmorfolin (1,1 mL, 9,66 mmol) i metansulfonski anhidrid (1,43 g, 8,18 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 5 sati na 0 °C, NaN3(969 mg, 14,9 mmol) i DMF (20 mL). Posle 16 sati pod refluksom, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je razblažen sa H2O (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 21c (2,62 g, 80 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,20 (m, 5 H), 5,45 (br s, 1 H), 5,09 (s, 2 H), 3,85-3,25 (m, 24 H).
Priprema jedinjenja 21d
Trifenilfosfin (1,87 g, 7,13 mmol) je dodat u rastvor jedinjenja 21c (2,62 g, 5,94 mmol) u THF (30 mL) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja tokom 2 sata pod N2, dodata je H2O (0,54 mL, 29,7 mmol) i reakciona smeša je refluksovana 3 sata. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni, čime se dobilo jedinjenje 21d (2,47 g, 95 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,25 (m, 5 H), 5,63 (br s, 1 H), 5,09 (s, 2 H), 3,80-3,25 (m, 22 H), 3,00-2,80 (m, 2 H).
Priprema jedinjenja 21e
U mešani rastvor oksalil hlorida (0,78 mL, 9,02 mmol) u DCM (14 mL) dodat je DMSO (1,3 mL, 18,1 mmol) u DCM (6 mL), a zatim je reakciona smeša mešana na -78 °C tokom 30 minuta. Ovom rastvoru je dodato jedinjenje 21b (2,5 g, 6,01 mmol) na -78 °C. Posle mešanja 1 sat na -78 °C, dodat je trietilamin (4,2 mL, 30,1 mmol) i reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature. Reakciona smeša je sipana u H2O (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko MgSO4. Filtracija i koncentracija su proizvele jedinjenje 21e (2.29 g), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) 5 9,70 (s, 1H), 7,45-7,25 (m, 5H), 5,25 (br s, 1H), 5,10 (s, 2H), 3,80-3,25 (m, 24H).
Priprema jedinjenja 21f
U rastvor jedinjenja 21d (2,47 g, 5,95 mmol) i jedinjenje 21e (2,29 g, 5,52 mmol) u MeOH (50 mL) je dodat NaCNBH3(530 mg, 8,44 mmol) na sobnoj temperaturi pod N2. Posle 3 sata, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 21f (2,05 g, 51 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,25 (m, 10H), 5,47 (br s, IH), 5,37 (br s, 1H), 5,09 (s, 4H), 3,80-3,25 (m, 48H).
Priprema jedinjenja 21g
DIPEA (0,27 mL, 1,53 mmol) i HBTU (350 mg, 0,92 mmol) su dodati u mešani rastvor jedinjenja 21f (380 mg, 0,61 mmol) i jedinjenje 20e (206 mg, 0,73 mmol) u DMF (6 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 6 sati pod N2,reakciona smeša je razblažena vodom (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 21g (210 mg, 42 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,25 (m, 10 H), 5,47 (br s, 1 H), 5,37 (br s, 1 H), 5,09 (s, 4 H), 3,80-3,25 (m, 34 H), 1,46 (s, 9 H).
Priprema jedinjenja 21h
U rastvor jedinjenja 21g (210 mg, 0,19 mmol) u MeOH (30 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 1,0 g) i zatim je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 4 sata pod vodonikom. Reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (50 mL). Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 21h (30 mg) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+H]<+>805.2, [M+Na]<+>827.2.
Priprema jedinjenja 21i
Jedinjenje 21i je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 21h sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 20q u Primeru 30. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1423.7, 1/2 [M+Na]<+>1445.2.
Primer 32. Priprema jedinjenja 22h
Priprema jedinjenja 22a
U rastvor jedinjenja 3a (8,0 g, 18,3 mmol) u THF (50 mL) je dodat LiBr (7,9 g, 91,6 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja tokom 17 sati pod refluksom, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 22a (3,2 g, 50 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,95-3,50 (m, 24H).
Priprema jedinjenja 22b
U rastvor jedinjenja 22a (3,2 g, 12,3 mmol) u acetonu (20 mL) na 0 °C dodat je Džonsov reagens (20 mL). Posle 15 sati na 0 °C, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je razblažen sa H2O (50 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 22b (3.2 g, 72 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,16 (s, 2H), 3,95-3,30 (m, 20H).
Priprema jedinjenja 22c
U rastvor jedinjenja 22b (3,2 g, 8,90 mmol) u MeOH (30 mL) dodat je oksalil hlorid (1,15 mL, 13,3 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 16 sati, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni, čime se dobilo jedinjenje 22c (2,7 g, 81 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,17 (s, 2H), 3,80-3,60 (m, 21H), 3,47 (t, J = 6,4 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 22d
NaH (60 % u ulju, 378 mg, 8,63 mmol) je dodat u rastvor jedinjenja 22c (2,7 g, 7,23 mmol) i N,N-diBoc-hidroksilamin (2,2 g, 9,4 mmol) u DMF (30 mL) na 0 °C pod N2. Posle 17 sati, reakciona smeša je koncentrovana. Ostatak je razblažen sa H2O (50 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 22d (2,1 g, 55 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,17 (s, 2H), 4,08 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,78-3,60 (m, 21 H), 1,53 (s, 18 H).
Priprema jedinjenja 22e
U rastvor jedinjenja 22d (2,1 g, 3,99 mmol) u THF/MeOH/H2O (30 mL/10 mL/10 mL) je dodat NaOH (400 mg, 9,98 mmol) na 0 °C pod N2. Reakciona smeša je mešana 3 sata na sobnoj temperaturi. Zatim je pH rastvora podešen na 4-5 sa 1 N vodenim rastvorom HCl. Reakciona smeša je sipana u H2O (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko MgSO4. Filtracija i koncentracija su proizveli jedinjenje 22e (1,6 g) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,90 (s, 1H), 4,15 (s, 2H), 4,03 (br s, 2H), 3,80-3,60 (m, 18H), 1,47 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 22f
DIPEA (0,13 mL, 0,73 mmol) i HBTU (187 mg, 0,49 mmol) su dodati u mešani rastvor jedinjenja 21f (200 mg, 0,24 mmol) i jedinjenja 22e (152 mg, 0,36 mmol) u DMF (5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 6 sati pod N2. Reakciona smeša je razblažena H2O (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 22f (100 mg, 34 %). ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>1205.6.
Priprema jedinjenja 22g
U rastvor jedinjenja 22f (100 mg, 0,08 mmol) u MeOH (20 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 20 mg) i zatim je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 4 sata pod vodonikom. Reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (20 mL). Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 22g kao bezbojno ulje (70 mg), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. EI-MS m/z: [M+H]<+>937.4, [M+Na]<+>959.3.
Priprema jedinjenja 22h
Jedinjenje 22h je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 22g sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 20q u Primeru 30. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1489.4.
Primer 33. Priprema jedinjenja 23h
Priprema jedinjenja 23a
U rastvor jedinjenja 4a (483 mg, 0,69 mmol) u THF (10 mL) je dodat LiBr (180 mg, 2,06 mmol). Reakciona smeša je refluksovana 12 sati pod N2. Zatim je reakciona smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 23a (330 mg, 78 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,81 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,72-3,59 (m, 44H), 3,47 (t, J = 6,4 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 23b
U rastvor jedinjenja 23a (330 mg, 0,54 mmol) u acetonu (2 mL) na 0 °C dodat je Džonsov reagens (2 mL). Posle 15 sati na 0 °C, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je razblažen sa H2O (15 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (2 x 20 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Dobijeno sirovo jedinjenje 23b je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.
Priprema jedinjenja 23c
U rastvor sirovog jedinjenja 23b (266 mg, 0,43 mmol) u MeOH (5 mL) dodat je oksalil hlorid (0,054 mL, 0,64 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 16 sati, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni, čime se dobilo jedinjenje 23c (200 mg, 58 % za 2 koraka).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,17 (s, 2H), 3,81 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,79-3,64 (m, 43H), 3,48 (t, J = 6,4 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 23d
U rastvor jedinjenja 23c (200 mg, 0,31 mmol) u DMF (3 mL) dodati su N,N-diBochidroksilamin (95 mg, 0,40 mmol) i NaH (60 % u ulju, 16 mg, 0,37 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 17 sati, reakciona smeša je koncentrovana. Ostatak je razblažen sa H2O (5 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 10 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 23d (120 mg, 49 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,17 (s, 2H), 4,13 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 3,75-3,64 (m, 45H), 1,53 (s, 18H).
Priprema jedinjenja 23e
U rastvor jedinjenja 23d (120 mg, 0,15 mmol) u THF/MeOH/H2O (3 mL/1 mL/1 mL) je dodat NaOH (15 mg, 0,38 mmol) na 0 °C pod N2. Reakciona smeša je mešana 1 sat na sobnoj temperaturi. Zatim je pH rastvora podešen na 4-5 sa 1 N vodenim rastvorom HCl. Reakciona smeša je sipana u H2O (10 mL) i ekstrahovana sa CHCl3(2 x 20 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Filtracija i koncentracija su proizveli jedinjenje 23e (100 mg), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,23 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 4,15 (s, 2H), 4,08 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 4,01 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 3,74-3,64 (m, 40H), 1,53 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 23f
DIPEA (0,052 mL, 0,29 mmol) i HBTU (75 mg, 0,20 mmol) su dodati u mešani rastvor jedinjenja 21f (80 mg, 0,09 mmol) i jedinjenja 23e (100 mg, 0,15 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 6 sati pod N2, reakciona smeša je razblažena sa H2O (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 23f (140 mg, 97 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,38-7,31 (m, 10 H), 5,44 (br, 2 H), 5,09 (s, 4 H), 4,34 (s, 2 H), 4,26-4,17 (m, 4 H), 4,09-4,08 (m, 1 H), 4,07 (br, 1 H), 3,73-3,47 (m, 76 H), 3,39-3,38 (m, 4 H), 1,53 (s, 9 H). ELMS m/z: [M+Na]<+>1491.6, [M+H-Boc]<+>: 1369.6.
Priprema jedinjenja 23g
U rastvor jedinjenja 23f (140 mg, 0,09 mmol) u MeOH (20 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 20 mg) i zatim je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 4 sata pod vodonikom. Reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (20 mL). Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 23g kao bezbojno ulje (120 mg), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+H]<+>1201.7, [M+Na]<+>1223.7.
Priprema jedinjenja 23h
Jedinjenje 23h je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 23g sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 20q u Primeru 30. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1620.3, 1/2 [M+Na]<+>1632.1.
Primer 34. Priprema jedinjenja 241
Priprema jedinjenja 24a
Džonsov reagens (90 mL) je polako dodat u rastvor jedinjenja 2-[2-(2-hloroetoksi)etoksi]etanola (15,0 g, 88,9 mmol) u acetonu (600 mL) na 0 °C. Posle 15 sati na 0 °C, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je razblažen sa H2O (200 mL) i ekstrahovan sa CHCl3(5 x 300 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4. Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 24a (20,0 g), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) 84,18 (s, 2H), 3,81-3,64 (m, 8H).
Priprema jedinjenja 24b
U rastvor jedinjenja 24a (20.0 g, 88,9 mmol) u MeOH (500 mL) dodat je oksalil hlorid (11,5 mL, 133,4 mmol) na 0 °C tokom 30 minuta pod N2. Posle 16 sati, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni, čime se dobilo jedinjenje 24b (13,0 g, 75 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,18 (s, 2H), 3,78-3,67 (m, 9H), 3,65 (t, J = 5,6 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 24c
Jedinjenje 24b (13,0 g, 66,1 mmol) i NaN3(6,4 g, 99,2 mmol) rastvoreni su u DMF (130 mL). Posle mešanja na 100 °C tokom 2 sata, reakciona smeša je razblažena slanim rastvorom (200 mL) i ekstrahovana sa CHCl3(2 x 100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog MgSO4. Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 24c (11,7 g, 87 %), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,18 (s, 2H), 3,76-3,67 (m, 9H), 3,41 (t, J = 5,6 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 24d
U rastvor jedinjenja 24c (11,5 g, 56,6 mmol) u THF/MeOH/H2O (300 mL/100 mL/100 mL) je dodat NaOH (4,53 g, 113,2 mmol) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C pod N2,pH rastvora je podešen na 2 sa 4 M vodenim rastvorom HCl. Reakciona smeša je sipana u H2O (100 mL) i ekstrahovana sa CHCl3(3 x 500 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko MgSO4. Filtracija i koncentracija su proizvele jedinjenje 24d (10,7 g, 99 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,19 (s, 2H), 3,79-3,77 (m, 2H), 3,72-3,70 (m, 4H), 3,44 (t, J = 5,2 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 24e
Boca sa tri grla je uzastopno napunjena sa H2O (40 mL), 1,4-dioksan (70 mL) i H-Lis(Z)-OH (10 g, 35,7 mmol). Smeša je mešana do potpunog rastvaranja. pH je podešen na oko 10,5 dodavanjem 2 M vodenog rastvora Na2CO3. Dodan je benzil hloroformat (6,69 g, 39,2 mmol) uz održavanje pH na oko 10-11 dodavanjem u isto vreme 2 M vodenog rastvora Na2CO3. Po završetku dodavanja, reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 1 sata. Zatim je dodat EtOAc (50 mL) i pH dobijene smeše je podešen na 2-3 sa c-HCl. Organski sloj je odvojen, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 mL) i osušeni preko Na2SO4. Filtracija i koncentracija pod sniženim pritiskom dale su jedinjenje 24e kao žućkasto ulje (14,7 g, 99 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,33-7,27 (m, 10H), 5,07-5,04 (d, 4H), 4,08 (m, 1H), 3,09 (t, 2H), 1,51 (br s, 1H), 1,49 (bs, 1H), 1,47 -1,40 (m, 4H).
Priprema jedinjenja 24f
DIPEA (0,40 mL, 2,37 mmol), HOBt (143 mg, 1,06 mmol) i EDC·HCl (240 mg, 1,25 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 24e (400 mg, 0,96 mmol) i jedinjenja 2d (261 mg, 0,86 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (50 mL), ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL), isprana sa vodenim NaHCO3(50 mL) i slanim rastvorom (50 mL) i osušena preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 24f (380 mg, 59 %).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,16 (s, 1H), 7,34-7,28 (m, 10H), 7,49 (s, 1H) 5,08-5,07 (m, 5H), 4,17 (m, 1H), 3,99 (t, 2H), 3,68-3,16 (m, 10H), 3,17 (d, 2H), 1,66 (m, IH), 1,51-1,27 (m, 14H). ELMS m/z: [M+H]<+>661.0.
Priprema jedinjenja 24g
U mešanu smešu jedinjenja 24f (370 mg, 0,55 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 74 mg) u MeOH (10 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,27 mL, 1,1 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (40 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 24g (223 mg, 87 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,02 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,22 (br, 2H), 7,90 (br, 2H), 3,81 (t, 2H), 3,56 (m, 4H), 3,46 (t, 2H) , 3,39-3,27 (m, 26H), 2,75 (m, 2H), 1,73 (k, 2H), 1,55 (p, 2H), 1,40-1,33 (m, 14H).
Priprema jedinjenja 24h
DIPEA (1,6 mL, 9,45 mmol), HOBt (746 mg, 5,52 mmol) i EDC·HCl (1,19 g, 6,42 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 24g (1,0 g, 5,29 mmol) i jedinjenje 24d (1,1 g, 2,35 mmol) u DMF (15 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (20 mL), ekstrahovana sa DCM (3 x 50 mL) i osušena preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 24h (1,25 g, 70 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,36 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,68 (t, 1H), 4,46 (q, 1H), 4,07-3,98-4,01 (m, 4H), 3,98 (s, 2H), 3,75-3,663 (m, H), 3,57 (t, 2H), 3,44 (m, 6H), 3,28 (m, 2H), 1,87 (m, 1H), 1,66 (m, 1H), 1,59- 1,52 (p, 2H), 1,48 (s, 9H), 1,41-1,33 (m, 2H). ELMS m/z: [M+H]<+>735.0.
Priprema jedinjenja 24i
U mešanu smešu jedinjenja 24h (1,2 g, 0,163 mmol), i Pd/C (10 tež. %, 250 mg) u MeOH (30 mL) na 0 °C, dodat je 4 N HCl (1,4-dioksan, 0,81 mL, 3,26 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (100 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 24i (1,39 g, 99 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,99 (s, 1H), 8,22 (t, 1H), 7,74 (t, 1H), 7,61 (d, 1H), 4,31, (q, 1H), 3,93 (s, 2H), 3,86 (s, 2H), 3,79 (t, 2H), 3,60-3,50 (m, 18H), 3,06 (q, 2H), 2,97 (p, 4H), 1,60-1,49 (m, 2H), 1,39 (m, 11H), 1,20 (m, 2H). ELMS m/z: [M+H]<+>683.
Priprema jedinjenja 24j
DIPEA (0,021 mL, 0,125 mmol) i HBTU (29 mg, 0,078 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 1i (85 mg, 0,069 mmol) i jedinjenja 24i (23 mg, 0,031 mmol) u DMF (0,7 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je rastvorena u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i koncentrovane da bi se dobilo jedinjenje 24j (67 mg, 68 %). ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>1552.5.
Priprema jedinjenja 24k
U rastvor jedinjenja 24j (67 mg, 0,021 mmol) u MeOH (1,7 mL) dodat je LiOH monohidrat (16 mg, 0,388 mmol) u H2O (1,7 mL) na 0 °C. Posle mešanja tokom 2 sata na 0 °C, reakciona smeša je neutralizovana sirćetnom kiselinom (0,018 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom.
Reakciona smeša je rastvorena u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i koncentrovane da bi se dobilo jedinjenje 24k (37 mg, 62 %). EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1412.3.
Priprema jedinjenja 24l
TFA (0,4 mL) je dodat u mešani rastvor jedinjenja 24k (37 mg, 0,013 mmol) u DCM (2,0 mL). Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata, rastvarač i višak TFA su izduvani sa N2. Ostatak je rastvoren u H2O/acetonitrilu (1 mL/1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 24l (19,8 mg, 53 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1362.3.
Primer 35. Priprema jedinjenja 25e
Priprema jedinjenja 25a
Jedinjenje 22c (1,0 g, 2,67 mmol) i NaN3(261 mg, 4,01 mmol) rastvoreno je u DMF (3 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 100 °C tokom 5 sati. Nakon što je reakcija završena, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EtOAc do EtOAc/MeOH 10/1), čime je dobijeno jedinjenje 25a (854 mg, 95 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,17 (s, 2H), 3,76-3,64 (m, 21H), 3,39 (t, J= 5,2 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 25b
U mešani rastvor jedinjenja 25a (854 mg, 2,54 mmol) u MeOH (25 mL) na 0 °C, dodato je 2 M aq. NaOH (6,3 mL, 12,64 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Rastvor je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijena suspenzija je zakiseljena sa 2 N vodenim rastvorom HCl uz hlađenje na 0 °C. Ostatak je ekstrahovan sa CHCl3(8 x 500 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani da bi se dobilo jedinjenje 25b (783 mg, 96 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,16 (s, 2H), 3,76-3,65 (m, 18H), 3,40 (t, J= 5,2 Hz, 2H).
Priprema jedinjenja 25c
DIPEA (0,30 mL, 1,70 mmol) i HBTU (483 mg, 1,27 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 25b (337 mg, 1,05 mmol) i jedinjenja 24g (198 mg, 0,42 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni (EtOAc do EtOAc/MeOH 10/1), čime se dobija jedinjenje 25c (358 mg, 84 %).<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,98 (s, 1H), 8,09 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 7,63 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,31-4,25 (m, 1H), 3,90 (s, 2H), 3,84 (s, 2H), 3,80 (m, 2H), 3,62-3,46 (m, 34H), 3,42-3,36 (m, 6H), 3,25-3,17 (m, 2H), 3,08-3,03 (m, 2H), 1,61-1,51 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 1,26-1,10 (m, 7H). EI-MS m/z: [M+H]<+>999.1.
Priprema jedinjenja 25d
U rastvor jedinjenja 25c (358 mg, 0,35 mmol) u MeOH (7 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 38 mg) i HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,18 mL, 0,72 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 5 sati pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (400 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 25d (314 mg, 93 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,98 (s, 1H), 8,10 (m, 1H), 7,68 (m, 1H), 7,57 (m, 1H), 4,31-4,25 (m, 1H), 3,90 (s, 2H), 3,84 (s, 2H), 3,80 (m, 2H), 3,62-3,46 (m, 30H), 3,42-3,36 (m, 10H), 3,45-3,16 (m, 4H), 3,08-3,03 (m, 3H), 2,72-2,66 (m, 3H), 1,61-1,51 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 1,26-1,10 (m, 6H). EI-MS m/z: [M+H]<+>947.1.
Priprema jedinjenja 25e
Jedinjenje 25e je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 25d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 24l u Primeru 34. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1493.7.
Primer 36. Priprema jedinjenja 25f
Jedinjenje 25f je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 25d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 24l u Primeru 34. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1508.2.
Primer 37. Priprema jedinjenja 26e
Priprema jedinjenja 26a
DIPEA (0,65 mL, 0,004 mmol), HOBt (218 mg, 1,61 mmol) i EDC·HCl (364 mg, 1,9 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 24e (1,0 g, 2,43 mmol) i jedinjenja 3e (810 mg, 1,52 mmol) u DMF (10 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 k 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (30 mL), zasićenim aq. NaHCO3(30 mL), i slanim rastvorom (30 mL), i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 26a (988 mg, 73 %).
<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,33-7,26 (m, 8 H), 6,85 (s, 1H), 5,63 (s, 1H), 5,08-5,02 (s, 4 H), 4,16-4,11 (m, 1 H), 4,09-4,05 (m, 2 H), 3,72-3,70 (m, 2 H), 3,62-3,59 (m, 14H), 3,53 (s, 2H), 3,44-3,43 (m, 2H), 3,18-3,16 (m, 2H), 1,82 (m, 1H), 1,72 (s, 7H), 1,66 (m, 1H), 1,52 (s, 18H), 1,38-1,36 (m, 2H), 1,24-1,27 (s, 1H). ELMS m/z: [M+H-2Boc]<+>693.1.
Priprema jedinjenja 26b
U mešanu smešu jedinjenja 26a (988 mg, 1,1 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 196 mg) u MeOH (6 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,55 mL, 2,2 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (40 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 26b (767 mg, 99 %) kao žuti oblik, koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+H]<+>625.0, [M+H-Boc]<+>525.0, [M+H-2Boc]<+>424.9.
Priprema jedinjenja 26c
DIPEA (0,2 mL, 1,14 mmol), HOBt (89 mg, 0,66 mmol) i EDC·HCl (142 mg, 0,74 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 26b (200 mg, 0,29 mmol) i jedinjenja 25b (202 mg, 0,63 mmol) u DMF (5 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (10 mL) i ekstrahovana sa DCM (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 26c (270 mg, 77 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,07 (t, 1H), 7,62 (t, 1H), 7,54-7,52 (m, 1H), 5,73 (s, 2H), 4,27-4,25 (q, 1H), 3,96 (t, 2H), 3,88 (s, 2H), 3,82 (s, 2H), 3,58-3,48 (m, 52H), 3,19-3,18 (m, 3H), 3,04-3,03 (m, 3H), 1,44 (s, 18H), 1,39-1,37 (m, 3H), 1,21-1,19 (m, 3H), ELMS m/z: [M+H-2Boc]<+>1031.6.
Priprema jedinjenja 26d
U mešanu smešu jedinjenja 26c (160 mg, 0,13 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 28 mg) u MeOH (20 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,07 mL, 0,28 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (30 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 26d (140 mg, 91 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+H]<+>1179.7.
Priprema jedinjenja 26e
Jedinjenje 26e je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 26d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 24l u Primeru 34. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1560.6, 1/3 [M+H]<+>1040.7.
Primer 38. Priprema jedinjenja 27e
Priprema jedinjenja 27a
DIPEA (0,19 ml, 1,1 mmol), HOBt (64 mg, 0,47 mmol) i EDC·HCl (91 mg, 0,47 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 24e (228 mg, 0,55 mmol) i jedinjenja 4e (256 mg, 0,36 mmol) u DMF (4 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 4 sata pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 15 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (20 mL), zasićenim aq. NaHCO3(10 mL), i slanim rastvorom (10 mL), i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 27a (327 mg, 85 %).
<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.73 (s, 1H), 7,33-7,26 (m, 11 H), 6,91 (s, 1H), 5,67 (br, 1H) 5,08-5,07 (m, 5 H), 4,15 (m, 1 H), 4,02 (t, 2 H), 3,72-3,44 (m, 46H), 3,16 (d, 2H), 1,82 (m, 1H), 1,63 (m, 1H), 1,55-1,36 (m, 13H).
Priprema jedinjenja 27b
U mešanu smešu jedinjenja 27a (327 mg, 0,309 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 65 mg) u MeOH (6 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,15 mL, 0,618 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (40 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 27b (244 mg, 91 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. EI-MS m/z: [M+H]<+>789.2.
Priprema jedinjenja 27c
DIPEA (0,19 ml, 1,13 mmol), HOBt (95 mg, 0,707 mmol) i EDC·HCl (135 mg, 0,707 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 25b (227 mg, 0,707 mmol) i jedinjenja 27b (244 mg, 0,283 mmol) u DMF (6 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (5 mL) i ekstrahovana sa DCM (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 27c (339 mg, 85 %).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,69 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,99 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 4,39 (q, 1H), 3,99-3,94 (m, 6H), 3,69-3,58 (m, 80H), 3,51 (t, 2H), 3,44-3,34 (m, 8H), 3,25 (m, 2H), 1,68-1,64 (m, 1H), 1,53-1,48 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,33 (m, 2H), EI-MS m/z: [M+H]<+>1395.6.
Priprema jedinjenja 27d
U mešanu smešu jedinjenja 27c (339 mg, 0,242 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 67 mg) u MeOH (6 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,12 mL, 0,484 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (30 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 27d (300 mg, 87 %) kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. EI-MS m/z: [M+H]<+>1343.5.
Priprema jedinjenja 27e
Jedinjenje 27e je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 27d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 24l u Primeru 34. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1692.5.
Primer 39. Priprema jedinjenja 28d
Priprema jedinjenja 28c
Jedinjenje 28c je pripremljeno od H-D-Lis(Z)-OH sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25d u primeru 35.
Priprema jedinjenja 28d
Jedinjenje 28d je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 28c sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25e u Primeru 35. EI-MS m/z: 1/2[M+H]<+>1494.9.
Primer 40. Priprema jedinjenja 28e
Jedinjenje 28e je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 28c sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25e u Primeru 35. EI-MS m/z: 1/2[M+H]<+>1509.2.
Primer 41. Priprema jedinjenja 29j
Priprema jedinjenja 29a
U rastvor heksaetilen glikola (25,0 g, 88,5 mmol) u DCM (100 mL) dodat je trietilamin (61,7 mL, 443 mmol) i p-toluensulfonil hlorid (50,6 g, 266 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 5 sati na 0 °C, reakciona smeša je sipana u 1 N aq. HCl (200 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 x 200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim aq. NaHCO3(100 mL) i rastvorom soli (100 mL), i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 29a (45,0 g, 87 %) kao smeđe ulje.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,79 (d, J = 7,6 Hz, 4H), 7,34 (d, J = 7,6 Hz, 4H), 4,16-4,14 (m, 4H), 3,69-3,67 (m, 4H), 3,64-3,56 (m, 16H), 2,44 (s, 6H).
Priprema jedinjenja 29b
U rastvor jedinjenja 29a (17,6 g, 29.7 mmol) u DMF (100 mL) je dodat NaN3(9,65 g, 148 mmol) i tetrabutilamonijum jodida (550 mg, 1,49 mmol). Reakciona smeša je zagrejana do 80 °C. Posle mešanja tokom 16 sati na 80 °C, reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa DCM (100 mL). Posle koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 29b (9,4 g, 94 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,68 (m, 20H), 3,39 (t, 4H).
Priprema jedinjenja 29c
U rastvor 29b (8,4 g, 24,9 mmol) u DCM (24 mL) i toluena (24 mL) su dodati 1 N aq. HCl (40,3 mL) i trifenilfosfin (6,9 g, 23,6 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod N2tokom 16 sati. Nakon uklanjanja rastvarača pod sniženim pritiskom, H2O (20 mL) je dodata u reakcionu smešu, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (20 mL). Zatim je pH vodene faze podešen na 13. Dobijena vodena faza je ekstrahovana sa DCM (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje 29c (6,6 g, 84 %) kao bezbojno ulje.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,67 (m, 20 H), 3,52 (t, 2H), 3,39 (t, 2H), 2,86 (t, 2H). ELMS m/z: [M+H]<+>306.9.
Priprema jedinjenja 29d
DIPEA (2,67 mL, 15,4 mmol) i HBTU (3,49 g, 9,21 mmol) su dodati u mešanu smešu hidrohlorida dimetil estra L-glutaminske kiseline (1,3 g, 6,14 mmol) i jedinjenja 20e (1,72 g, 6,14 mmol) u DMF (15 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i ostavljena da se zagreje do sobne temperature tokom 16 sati pod N2. Reakciona smeša je sipana u vodu (50 mL) i ekstrahovana sa DCM (3 k 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 0,5 N HCl (50 mL), zasićenim aq. NaHCOs (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 29d (2.18 g, 81 %).<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,00 (s, 1H), 8,04 (d, 1H), 4,34 (m, 1H), 3,93 (s, 1H), 3,77 (s, 1H), 3,63 (s, 3H), 3,58 (s, 9H), 3,38-3,34 (t, 2H), 2,14(m, H), 1,90 (m, 1H), 1,39 (s, 9H). ELMS m/z: [M+H]<+>437.35.
Priprema jedinjenja 29e
U rastvor jedinjenja 29d (2,18 g, 4,99 mmol) u THF:MeOH:H2O (12 mL:4 mL:4 mL) je dodat NaOH (499 mg, 12,5 mmol) na sobnoj temperaturi pod N2. Posle 3 sata, pH reakcione smeše je podešen na 4 i koncentrovana je. Zatim je ostatak ekstrahovan sa DCM/MeOH (80 mL/20 mL). Koncentracija obezbeđuje jedinjenje 29e (1,0 g, 49 %) kao žuto ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z:
[M+H-Boc]<+>309.20.
Priprema jedinjenja 29f
DIPEA (1,7 mL, 9,79 mmol) i HBTU (2,79 g, 7,35 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 29e (1,0 g, 2,45 mmol) i jedinjenja 29c (2,25 g, 7,35 mmol) u DMF (10 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i ostavljena da se zagreje do sobne temperature tokom 16 sati pod N2. Reakciona smeša je sipana u vodu (50 mL) i ekstrahovana sa DCM (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 0,5 N aq. HCl (50 mL), zasićenim aq. NaHCOs (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 29f (611 mg, 25 %).<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,97 (s, 1H), 8,08 (t, 1H), 7,85 (t, 1H), 7,64 (d, 1H), 4,27 (m, 1H), 3,83 (s, 2H), 3,82-3,61 (m, 2H), 3,61-3,50 (m, 42H), 3,42-3,37 (m, 8H), 3,28-3,15 (m, 4H), 2,90 (s, H), 2,08-2,04(m,2 H), 1,88 (m, 1H), 1,75 (m, 1H), 1,39 (s, 9H), EI-MS m/z:
[M+H]<+>986.73.
Priprema jedinjenja 29g
U mešanu smešu jedinjenja 29f (611 mg, 0,62 mmol) u MeOH (50 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 132 mg 0,62 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (40 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 29g kao bezbojno ulje (518 mg, sirovo), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. EI-MS m/z: [M+H]<+>933.85.
Priprema jedinjenja 29h
DIPEA (0,026 mL, 0,150 mmol) i HBTU (40 mg, 0,105 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 29g (35 mg, 0,037 mmol) i jedinjenja 1i (106 mg, 0,086 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 16 sati pod N2,reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 0,5 N HCl (20 mL), zasićenim aq. NaHCOs (20 mL) i slanim rastvorom (20 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 29h (81,4 mg, 65 %). ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>1677,94, 1/3 [M+H]<+>1119.03.
Priprema jedinjenja 29i
U rastvor jedinjenja 29h (81 mg, 0,024 mmol) u MeOH (1 mL) dodat je LiOH monohidrat (8,1 mg, 0,19 mmol) u H2O (1 mL) na -10 °C. Posle mešanja tokom 2 sata na -10 °C, reakciona smeša je neutralizovana sirćetnom kiselinom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Zatim je reakciona smeša rastvorena u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćen pomoću HPLC, čime je proizvedeno jedinjenje 29i (53 mg, 72 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1537.86, 1/3 [M+H]<+>1025.66.
Priprema jedinjenja 29j
TFA (0,3 mL) je dodat u mešani rastvor jedinjenja 29i (53 mg, 0,017 mmol) u DCM (1,0 mL) na 0 °C. Posle mešanja tokom 1 sata, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u H2O/MeCN (1 mL/1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 29j (23,1 mg, 43 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>1487.99, 1/3 [M+H]<+>992.40.
Primer 42. Priprema jedinjenja 29k
Jedinjenje 29k je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 29g sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 29j u Primeru 41. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1501,93, 1/3 [M+H]<+>1001.69.
Primer 43. Priprema jedinjenja 30b
Priprema jedinjenja 30a
Jedinjenje 30a je pripremljeno od dimetil estra hidrohlorida D-glutaminske kiseline sličnim postupkom dobijanja kao kod jedinjenja 29g u primeru 41. ELMS m/z: [M+H]<+>933.89.
Priprema jedinjenja 30b
Jedinjenje 30b je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 30a sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 29j u Primeru 41. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1488.07, 1/3 [M+H]<+>992.40.
Primer 44. Priprema jedinjenja 30c
Jedinjenje 30c je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 30a sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 29j u Primeru 41. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1501,93, 1/3 [M+H]<+>1001.69.
Primer 45. Priprema jedinjenja 31f
Priprema jedinjenja 31a
Boca sa tri grla je uzastopno napunjena sa H2O (18 mL), 1,4-dioksanom (30 mL) i L-ornitin monohidrohloridom (3,0 g, 17,8 mmol). Smeša je mešana do potpunog rastvaranja. pH je podešen na oko 10,5 dodavanjem 2 M aq. Na2CO3. Dodat je benzil hloroformat (6,37 g, 37,4 mmol) uz održavanje pH na oko 10-11 dodavanjem u isto vreme 2 M aq. Na2CO3. Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 1 sata. Zatim je dodat EtOAc (50 mL) i pH dobijene smeše je podešen na 2-3 sa c-HCl. Organski sloj je odvojen, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 mL) i osušeni preko Na2SO4. Filtracija i koncentracija pod sniženim pritiskom daju jedinjenje 31a (7,1 g).<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,54 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,44-7,29 (m, 10H), 7,24-7,22 (m, 1H), 5,16-5,00 (d, 4H), 3,95-3,89 (m, 1H) ), 3,00-2,96 (m, 2H), 1,98-1,57 (m, 1H), 1,56-1,46 (m, 3H).
Priprema jedinjenja 31b
DIPEA (1,41 mL, 8,12 mmol) i HBTU (1,85 g, 4,87 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 31a (1,30 g, 3,25 mmol) i jedinjenja 2d (891 mg, 3,57 mmol) u DMF (10 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i ostavljena da se zagreje do sobne temperature tokom 16 sati pod N2. Reakciona smeša je sipana u vodu (50 mL) i ekstrahovana sa DCM (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 0,5 N aq. HCl (50 mL), zasićenim aq. NaHCO3(50 mL) i slanim rastvorom (50 mL) uzastopce, i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 31b (1.2 g, 57 %). ELMS m/z: [M+H]<+>647.54, [M+H-Boc]<+>547.47
Priprema jedinjenja 31c
U mešanu smešu jedinjenja 31b (1,2 g, 1,86 mmol) u MeOH (50 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 59 mg 5,57 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (40 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 31c (717 mg), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,93 (s, 1H), 3,81 (t, 2H), 3,55 (t, 2H), 3,51 (s, 5H), 3,42-3,22 (m, 13H), 1,37 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 31d
DIPEA (0,55 mL, 3,17 mmol) i HBTU (902 mg, 2,38 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 31c (300 mg, 0,79 mmol) i jedinjenja 25b (637 mg, 1,98 mmol) u DMF (5 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i ostavljena da se zagreje do sobne temperature tokom 16 sati pod N2. Reakciona smeša je sipana u vodu (30 mL) i ekstrahovana sa DCM (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 0,5 N aq. HCl (30 mL), zasićenim aq. NaHCOs (30 mL) i slanim rastvorom (30 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 31d (551 mg, 71%). ELMS m/z: [M+H]<+>985.87.
Priprema jedinjenja 31e
U mešanu smešu jedinjenja 31d (491 mg, 0,50 mmol) u MeOH (30 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 106 mg 1,00 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (40 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 31e (452 mg), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+H]<+>933.94.
Priprema jedinjenja 31f
Jedinjenje 31f je bilo pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 31e sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25e u Primeru 35. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1488.20, 1/3 [M+H]<+>992.54.
Primer 46. Priprema jedinjenja 31g
Jedinjenje 31g je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 31e sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25e u Primeru 35. EI-MS m/z: 1/2[M+H]<+>1502,23, 1/3 [M+H]<+>1001.86.
Primer 47. Priprema jedinjenja 32c
Priprema jedinjenja 32a
DIPEA (0,6 mL, 7,07 mmol) i HBTU (972 mg, 5,30 mmol) su dodati u smešu jedinjenja 24g (483 mg, 0,855 mmol) i Fmoc-NH-PEG5-CH2CH2COOH (1,0 g, 3,89 mmol) u DMF (10 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (30 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (10 mL), zasićenim aq. NaHCO3(10 mL) i slanim rastvorom (10 mL) uzastopce, i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 32a (1,16 g, 90 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,77 (d, 4H), 7,60(d, 4H), 7,39 (t, 4H), 7,31 (t, 4H), 4,39 (d, 4H), 4,33 (m, 1H), 4,22 (m, 2H), 4,09 (m, 2H), 3,71-3,39 (m, 52H), 3,19 (m, 2H), 2,51 (m, 4H), 1,50 (m, 1H), 1,46 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 1,25 (m, 2H), ELMS m/z: [M+H]<+>1520.0.
Priprema jedinjenja 32b
U rastvor jedinjenja 32a (500 mg, 0,328 mmol) u THF (8 mL) dodat je piperidin (2 mL) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja tokom 20 minuta, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 32b (175 mg, 50 %).<1>H-NMR (400 MHz, δ 4,41 (m, 1H), 4,01 (m, 2H), 3,75-3,56 (m, 43H), 3,54 (m, 2H), 3,24 (m, 2H), 2,89 (m, 3H), 2,52 (m, 4H), 1,83 (m, 1H), 1,80 (m, 1H), 1,53 (s, 9H), 1,39 (m, 2H). ELMS m/z: [M+H].<+>975.5.
Priprema jedinjenja 32c
Jedinjenje 32c je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 32b sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25e u Primeru 35. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1508.8.
Primer 48. Priprema jedinjenja 32d
Jedinjenje 32d je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 32b sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25e u Primeru 35. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1522.8.
Primer 49. Priprema jedinjenja 33e
Priprema jedinjenja 33a
DIPEA (1,98 mL, 11,37 mmol) i HBTU (2,15 g, 5,68 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 24e (1,57 g, 3,79 mmol) i jedinjenja 6b (1,30 g, 3,15 mmol) u DMF (37 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (40 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 40 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (40 mL), zasićenim aq. NaHCOs (40 mL) i slanim rastvorom (40 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 33a (2,2 g, 88 %).<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,99 (s, 1H), 8,19 (d, 1H), 7,79 (t, 1H), 7,47 (d, 1H), 7,34-7,31 (m, 5H), 7,24 (t, 1H), 5,01 (d, 4H), 4,55 (q, 1H), 3,91 (q, 1H), 3,79 (t, 2H), 3,55-3,48 (m, 9H), 3,24-3,11 (m, 2H), 2,75-2,54 (m, 2H), 1,57-1,49 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,25 (m, 2H), ELMS m/z: [M+H]<+>790.47, [M+Na]<+>812.4.
Priprema jedinjenja 33b
U mešanu smešu jedinjenja 33a (2,2 g, 2,78 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 400 mg) u MeOH (60 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 1,39 mL, 5,56 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (40 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 33b (1,67 g, 99 %), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,98 (s, 1H), 8,87 (d, 1H), 8,28 (bs, 3H), 8,12 (1H), 7,96 (bs, 3H), 4,51 (q, 1H), 3,77 (t, 2H), 3,72 (bs, 1H), 3,57 (s, 3H), 3,52-3,47 (m, 7H), 3,12 (s, 3H), 2,76-2,61 (m,4H) 1,71 (q, 2H), 1,55 (q, 2H) 1,36 (s, 9H). EI-MS m/z: [M+H]<+>522.4, [M+Na]<+>544.3.
Priprema jedinjenja 33c
DIPEA (1,95 mL, 11,23 mmol) i HBTU (3,19 g, 8,42 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 25b (1,98 g, 6,17 mmol) i jedinjenja 33b (1,67 g, 2,80 mmol) u DMF (20 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni, čime se dobilo jedinjenje 33c (2 g, 63 %).<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,97 (s, 1H), 8,28 (d, 1H), 7,82 (t, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 4,54 (q, 1H), 4,25 (q, 1H), 3,91 (s, 2H), 3,84 (s, 2H), 3,80 (t, 2H), 3,60-3,49 (m, 48H), 3,26-3,12 (m,3H), 3,07 (q, 2H), 2,75-2,54 (m, 2H), 1,65-1,55 (m, 2H), 1,39 (s, 10H), 1,21 (m,3H). EI-MS m/z:
[M+H]<+>1128.8, [M+Na]<+>1150.7.
Priprema jedinjenja 33d
U mešanu smešu jedinjenja 33c (1 g, 0,88 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 200 mg) u MeOH (20 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,44 mL, 0,88 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (20 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 33d (936 mg, 92 %), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,98 (s 1H), 8,30 (d, 1H), 7,70 (t, 2H), 4,54 (q, 1H), 4,26 (q, 1H), 3,93 (s, 2H), 3,85 (s, 2H), 3,80 (t, 2H), 3,61-3,49 (m, 46H), 3,22-3,12 (m, 4H), 3,06 (q, 2H), 2,97 (q, 4H), 2,76-2,54 (m, 2H), 1,64-1,55 (m, 2H), 1,39 (s, 10H), 1,26 (m, 3H). EI-MS m/z: [M+H]<+>1076.8.
Priprema jedinjenja 33e
Jedinjenje 33e je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 33d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25e u Primeru 35. EI-MS m/z: 1/2[M+H]<+>1552.2.
Primer 50. Priprema jedinjenja 33f
Jedinjenje 33f je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 33d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25e u Primeru 35. EI-MS m/z: 1/2[M+H]<+>1566.4.
Primer 51. Priprema jedinjenja 34e
Priprema jedinjenja 34a
DIPEA (0,8 mL, 4,56 mmol) i HBTU (1,3 g, 3,42 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 24g (530 mg, 1,14 mmol) i Z-Asp(OMe)-OH (704 mg, 2,5 mmol) u DMF (5 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (40 mL), zasićenim aq. NaHCOs (40 mL) i slanim rastvorom (40 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 34a. (713 mg, 68 %).<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,97 (s, 1H), 7,88 (m, 3H), 7,64 (d, 2H), 7,51 (d, 2H), 7,35 (m, 10H), 5,02 (m, 4H), 4,43-4,31 (m, 2H), 4,17 (m, 1H), 3,80 (t, 2H), 3,58-3,50 (m, 12H), 3,41-3,16 (m, 6H), 2,98 (m, 2H), 2,79-2,67 (m, 3H), 2,57 (m, 2H), 1,60-1,34 (m, 13H).
Priprema jedinjenja 34b
U rastvor jedinjenja 34a (530 mg, 0,58 mmol) u MeOH (5 mL) je dodat Pd/C (20 tež. %, 106 mg) i HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,29 mL, 1,16 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (30 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 34b (420 mg, 100 %), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,97 (s, 1H), 8,62 (d, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,27 (m, 4H), 7,02 (s, 1H), 4,17 (m, 2H), 4,02 (m, 1H) , 3,76 (t, 2H), 3,61 (m, 4H), 3,51-3,11 (m, 12H), 3,09-2,77 (m, 8H), 1,60-1,24 (m, 13H). EI-MS m/z: [M+H]<+>651.5.
Priprema jedinjenja 34c
DIPEA (0,4 mL, 2,32 mmol) i HBTU (660 mg, 1,74 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 34b (420 mg, 0,58 mmol) i jedinjenja 25b (299 mg, 0,93 mmol) u DMF (5 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (30 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (20 mL), zasićenim aq. NaHCO3(20 mL) i slanim rastvorom (20 mL) uzastopce, i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 34c (466 mg, 70,8 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8,28 (s, 1H), 7,78 (q, 1H), 7,31 (d, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,94 ( s, 1H), 4,85 (m, 2H), 4,35 (m, 1H), 4,07-4,03(m, 6H), 3,75-3,41 (m, 56H), 3,23 (q, 2H), 2,92-2,84 (m, 4H),1,91-1,32 (m, 15H).
EI-MS m/z: [M+2H]<+>1158.1.
Priprema jedinjenja 34d
U mešanu smešu jedinjenja 34c (260 mg, 0,21 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 52 mg) u MeOH (20 mL) na 0 °C dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,10 mL, 0,41 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (50 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 34d (249 mg, 100 %), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. EI-MS m/z: [M+2H]<+>1206.1.
Priprema jedinjenja 34e
Jedinjenje 34e je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 34d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25e u Primeru 35. EI-MS m/z: 1/2[M+H]<+>1610.4.
Primer 52. Priprema jedinjenja 34f
Jedinjenje 34f je pripremljeno od jedinjenja 1j i jedinjenja 34d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25e u Primeru 35. EI-MS m/z: 1/2[M+H]<+>1624.3.
Primer 53. Priprema jedinjenja 35g
Priprema jedinjenja 35a
DIPEA (0,61 mL, 3,52 mmol) i HBTU (665 mg, 1,175 mmol) su dodati mešanoj smeši Fmoc-D-Glu(OtBu)-OH (500 mg, 1,17 mmol) i jedinjenja 2d (424 mg, 1,404 mmol) u DMF (10 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (30 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (20 mL), zasićenim aq. NaHCO3(20 mL) i slanim rastvorom (20 mL) uzastopce, i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 35a (708 mg, 89 %). ELMS m/z:
[M+H]<+>672.7.
Priprema jedinjenja 35b
U rastvor jedinjenja 35a (708 mg, 1,04 mmol) u THF (8 mL) je dodat piperidin (2 mL) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja tokom 20 minuta, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 35b (400 mg, 85 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>450.1.
Priprema jedinjenja 35c
DIPEA (0,19 mL, 1,1 mmol) i HBTU (253 mg, 0,66 mmol) su dodati u smešu jedinjenja 28a (203 mg, 0,484 mmol) i jedinjenja 35b (200 mg, 0,44 mmol) u DMF (10 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (30 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (10 mL), zasićenim aq. NaHCOs (10 mL) i slanim rastvorom (10 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 35c (235 mg, 63 %). EI-MS m/z:
[M+H]<+>847.0.
Priprema jedinjenja 35d
U rastvor jedinjenja 35c (235 mg, 0,277 mmol) u MeOH (15 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 30 mg). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (50 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 35d (160 mg, 100 %), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. EI-MS m/z:
[M+H]<+>578.7.
Priprema jedinjenja 35e
DIPEA (0,145 mL, 1,758 mmol) i HBTU (262 mg, 1,465 mmol) su dodati u smešu jedinjenja 35d (160 mg, 0,276 mmol) i jedinjenje 25b (187 mg, 0,581 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (30 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (10 mL), zasićenim aq. NaHCOs (10 mL) i slanim rastvorom (10 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 35e (260 mg, 79 %). EI-MS m/z:
[M+H]<+>1185.4.
Priprema jedinjenja 35f
U rastvor jedinjenja 35e (70 mg, 0,059 mmol) u MeOH (5 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 15 mg). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 90 minuta pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (30 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 35f (67 mg, 100 %), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. EI-MS m/z:
[M+H]<+>: 1133.3.
Priprema jedinjenja 35g
Jedinjenje 35g je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 35f sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25e u Primeru 35. EI-MS m/z: 1/2[M+H]<+>1559.9.
Primer 54. Priprema jedinjenja 36e
Priprema jedinjenja 36a
DIPEA (0,3 mL, 3,10 mmol) i HBTU (474 mg, 2,275 mmol) su dodati u smešu Fmoc-D-Glu(OtBu)-OH (484 mg, 1,138 mmol) i jedinjenja 28b (223 mg, 0,569 mmol) u DMF (7 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (30 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (20 mL), zasićenim aq. NaHCOs (20 mL) i slanim rastvorom (20 mL) i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 36a (593 mg, 86 %). ELMS m/z: [M+H]<+>1208.3.
Priprema jedinjenja 36b
U rastvor jedinjenja 36a (593 mg, 0,49 mmol) u THF (8 mL) je dodat piperidin (1 mL) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja tokom 20 minuta, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 36b (166 mg, 44 %). ELMS m/z: [M+H]<+>763.9.
Priprema jedinjenja 36c
DIPEA (0,15 mL, 0,84 mmol) i HBTU (247 mg, 0,63 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 36b (166 mg, 0,21 mmol) i jedinjenja 25b (147 mg, 0,441 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (30 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (10 mL), zasićenim aq. NaHCOs (10 mL) i slanim rastvorom (10 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 36c (195 mg, 68 %). ELMS m/z:
[M+H]<+>1370.6.
Priprema jedinjenja 36d
U rastvor jedinjenja 36c (195 mg, 0,14 mmol) u MeOH (10 mL) je dodat Pd/C (10 tež. %, 30 mg). Zatim je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 90 minuta pod vodonikom. Reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (30 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 36d (187 mg, 100 %), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+H]<+>1318.6.
Priprema jedinjenja 36e
Jedinjenje 36e je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 36d sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 25e u Primeru 35. ELMS m/z: 1/2[M+H]<+>1624.4.
Primer 55. Priprema jedinjenja 37d
Priprema jedinjenja 37a
DIPEA (0,083 mL, 0,71 mmol) i HBTU (136 mg, 0,36 mmol) su dodati u mešanu smešu propargil amina (0,018 mL, 0,285 mmol) i jedinjenja 1j (300 mg, 0,238 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (10 mL), zasićenim aq. NaHCOs (10 mL) i slanim rastvorom (10 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 37a (300 mg, 97 %). EI-MS m/z:
[M+H]<+>1294.0.
Priprema jedinjenja 37b
U rastvor jedinjenja 37a (300 mg, 0,24 mmol) u THF (2 mL) i MeOH (2 mL) je dodat LiOH monohidrat (50 mg, 1,20 mmol) u H2O (2 mL) na 0 °C. Posle mešanja tokom 2 sata na 0 °C, reakciona smeša je neutralizovana sirćetnom kiselinom i koncentrovana pod sniženim pritiskom.
Zatim je ostatak rastvoren u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i koncentrovane da bi se dobilo jedinjenje 37b (165 mg, 60 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1140.8.
Priprema jedinjenja 37c
CuSO45H2O (1 mg) i natrijum askorbat (2 mg) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 37b (50 mg, 0,042 mmol) i jedinjenja 25c (23 mg, 0,02 mmol) u THF (2 mL) i H2O (2 mL). pH je podešen na oko 7 dodavanjem 1 M aq. Na2CO3. Posle mešanja na 20 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je rastvorena u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i koncentrovane da bi se dobilo jedinjenje 37c (32,4 mg, 48 %). EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1638.2.
Priprema jedinjenja 37d
TFA (0,4 mL) je dodat u rastvor jedinjenja 37c (32,4 mg, 0,01 mmol) u DCM (2 mL). Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u H2O/MeCN (1 mL/1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 37d (19,6 mg, 62 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1590.2.
Primer 56. Priprema jedinjenja 38b
Priprema jedinjenja 38a
CuSO4·5H2O (1 mg) i natrijum askorbat (2 mg) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 37b (60 mg, 0,052 mmol) i jedinjenja 16b (14 mg, 0,025 mmol) u THF (2 mL) i H2O (2 mL). pH je podešen na oko 7 dodavanjem 1 M aq. Na2CO3. Posle mešanja na 20 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je rastvorena u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i koncentrovane da bi se dobilo jedinjenje 38a (61 mg, 82 %). EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1430.2.
Priprema jedinjenja 38b
TFA (0,4 mL) je dodat u rastvor jedinjenja 38a (59,8 mg, 0,02 mmol) u DCM (2,0 mL). Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u H2O/AN (1 mL/1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 38b (14,6 mg, 24 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1380.1.
Primer 57. Priprema jedinjenja 38e
Priprema jedinjenja 38c
DIPEA (0,075 mL, 0,428 mmol) i HBTU (122 mg, 0,321 mmol) su dodati u mešanu smešu propargil amina (0,016 mL, 0,256 mmol) i jedinjenja 1i (264 mg, 0,214 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u H2O (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (10 mL), zasićenim aq. NaHCOs (10 mL) i slanim rastvorom (10 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 38c (270 mg, 100 %). ELMS m/z:
[M+H]<+>1266.2.
Priprema jedinjenja 38d
U rastvor jedinjenja 38c (270 mg, 0,213 mmol) u THF (2 mL) i MeOH (2 mL) je dodat LiOH monohidrat (36 mg, 0,853 mmol) u H2O (2 mL) na 0 °C. Posle mešanja tokom 2 sata na 0 °C, reakciona smeša je neutralizovana sirćetnom kiselinom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Zatim je ostatak rastvoren u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i koncentrovane da bi se dobilo jedinjenje 38d (168 mg, 70 %). ELMS m/z: [M+H]<+>1126.1.
Priprema jedinjenja 38e
Jedinjenje 38e je pripremljeno od jedinjenja 38d i jedinjenja 16b sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 38b u Primeru 56. EI-MS m/z: 1/2[M+H]<+>1366.2.
Primer 58. Priprema jedinjenja 39e
Priprema jedinjenja 39a
Jedinjenje 1g (27 mg, 0,039 mmol), jedinjenje 14j (45 mg, 0,039 mmol) i anhidrovani HOBt (1 mg, 0,0078 mmol) rastvoreni su u DMF (2 mL) na 0 °C. Zatim su dodati piridin (0,2 mL) i DIPEA (0,014 mL, 0,078 mmol). Posle mešanja na 0 °C do sobne temperature tokom 24 sata pod N2,reakciona smeša je rastvorena u DMSO (1 mL) i prečišćena pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 39a (36 mg, 58 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: [M+H]<+>1582.9, [M+Na]<+>1604.5.
Priprema jedinjenja 39b
Jedinjenje 39a (35 mg, 0,022 mmol) i trifenilfosfin (1,5 mg, 0,005 mmol) rastvoreni su u DCM (2 mL). Pirolidin (0,0025 mL, 0,026 mmol) i Pd(PPh3)4(1,3 mg, 0,001 mmol) dodati su u reakcionu smešu na sobnoj temperaturi i zatim ostavljeni da se mešaju 2 sata. Reakciona smeša je razblažena sa H2O (50 mL) i ekstrahovana sa n-butanolom (2 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog MgSO4, upareni pod sniženim pritiskom.
Dobijeni ostatak je rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 39b (34 mg, sirovo) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: [M+H]<+>: 1542.7.
Priprema jedinjenja 39c
DIPEA (0,0026 mL, 0,039 mmol) i PyBOP (4,7 mg, 0,023 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 39b (15 mg, 0,009 mmol) i jedinjenja 16c (2,0 mg, 0,0038 mmol) u DMF (0,3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 13 sati pod N2,reakciona smeša je rastvorena u DMSO (1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 39c (12 mg, 35 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1788.5.
Priprema jedinjenja 39d
U rastvor jedinjenja 39c (12 mg, 0,0033 mmol) u MeOH (1 mL) dodat je LiOH monohidrat (1,4 mg, 0,033 mmol) u H2O (1 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, pH rastvora je podešen sirćetnom kiselinom na 4-5, a reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u DMSO (1,5 mL) i prečišćen pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 39d (11 mg, 98 %). EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1648.6.
Priprema jedinjenja 39e
TFA (0,5 mL) je dodat u mešani rastvor jedinjenja 39d (11 mg, 0,003 mmol) u DCM (3,0 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 39e (1,2 mg, 11 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1598.3.
Primer 59. Priprema jedinjenja 40c
Priprema jedinjenja 40a
DIPEA (0,004 mL, 0,021 mmol) i HBTU (5,0 mg, 0,013 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 39b (20 mg, 0,012 mmol) i jedinjenja 25d (5,0 mg, 0,005 mmol) u DMF (1,5 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je rastvorena u DMSO (1,0 mL) i prečišćena pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 40a (14,5 mg, 30 %). ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>1998.8.
Priprema jedinjenja 40b
U rastvor jedinjenja 40a (10 mg, 0,0025 mmol) u MeOH (1 mL) dodat je LiOH monohidrat (1,0 mg, 0,025 mmol) u H2O (1 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, reakciona smeša je neutralizovana sirćetnom kiselinom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Zatim je ostatak rastvoren u DMSO (1,5 mL) i prečišćen pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 40b (6,9 mg, 74 %). ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>1858.3.
Priprema jedinjenja 40c
TFA (0,2 mL) je dodat u mešani rastvor jedinjenja 40b (6,9 mg, 0,0018 mmol) u DCM (2,0 mL). Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 40c (1,5 mg, 23 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>1808.6.
Primer 60. Priprema jedinjenja 41c
Priprema jedinjenja 41a
DIPEA (0,116 mL, 0,66 mmol) i PyBOP (127 mg, 0,24 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 16c (280 mg, 0,22 mmol) i jedinjenja 1j (587 mg, 1,10 mmol) u DMF (10 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod N2, reakciona smeša je razblažena sa H2O (200 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 41a (250 mg, 64 %). ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>883.2, [M+H]<+>1766.
Priprema jedinjenja 41b
DIPEA (0,0017 mL, 0,0096 mmol) i PyBOP (2,0 mg, 0,0038 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 41a (5,7 mg, 0,0032 mmol) i jedinjenja 39b (5,0 mg, 0,0032 mmol) u DMF (0,5 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata pod N2,reakciona smeša je rastvorena u MeCN (1 mL) i prečišćena pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 41b (8,0 mg, 75 %). ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>1645.
Priprema jedinjenja 41c
U rastvor jedinjenja 41b (8,0 mg, 0,0024 mmol) u MeOH (0,5 mL) dodat je LiOH monohidrat (1,2 mg, 0,028 mmol) u H2O (0,1 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, reakciona smeša je neutralizovana upotrebom 2 N aq. rastvor HCl i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa DCM (2 mL) i H2O (3 kapi). Zatim je dodat TFA (0,1 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 41c (3,1 mg, 44 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1448, 1/2 [M+Na]<+>1459.
Primer 61. Priprema jedinjenja 42d
Priprema jedinjenja 42a
DIPEA (0,026 mL, 0,23 mmol) i HBTU (22 mg, 0,06 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 1j (60 mg, 0,048 mmol) i jedinjenja 25d (214 mg, 0,19 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je rastvorena u DMSO (1,0 mL) i prečišćena pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 42a (64 mg, 58 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>2286.8.
Priprema jedinjenja 42b
DIPEA (0,011 mL, 0,06 mmol) i HBTU (14 mg, 0,036 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 42a (68 mg, 0,03 mmol) i jedinjenja 39b (46 mg, 0,03 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je rastvorena u DMSO (1,0 mL) i prečišćena pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 42b (60 mg, 52 %). EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1906.3.
Priprema jedinjenja 42c
U rastvor jedinjenja 42b (60 mg, 0,016 mmol) u MeOH (2 mL) dodat je LiOH monohidrat (5 mg, 0,126 mmol) u H2O (2 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, reakciona smeša je neutralizovana sirćetnom kiselinom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Zatim je ostatak rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen prep. HPLC, čime se dobilo jedinjenje 42c (37 mg, 65 %). EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1759.3.
Priprema jedinjenja 42d
TFA (0,3 mL) je dodat u mešani rastvor jedinjenja 42c (37 mg, 0,01 mmol) u DCM (3 mL). Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 42d (15 mg, 45 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: 1/2 [M+H]<+>1659.6.
Primer 62. Priprema jedinjenja 43i
Priprema jedinjenja 43a
DIPEA (10,4 mL, 23,8 mmol) i HBTU (13,5 g, 35,7 mmol) su dodati u mešanu smešu H-Lys(z)-OMe hidrohlorida (7,0 g, 23,8 mmol) i jedinjenja 24e (9,86 mg, 23,8 mmol) u DMF (50 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 8 sati pod N2,reakciona smeša je razblažena vodom (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 0,5 N aq. HCl (50 mL), zasićenim aq. NaHCOs (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 43a (9,3 g, 57 %).<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,22 (d, 1H), 7,37-7,29 (m, 15H), 7,22 (m, 2H), 5,00 (s, 6H), 4,18 (m, 1H), 4,00 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 2,96 (m, 4H), 1,67-1,50 (m, 4H), 1,38-1,29 (m, 4H), 1,19-1,18 (m, 4H). ELMS m/z: [M+Na]<+>712.96.
Priprema jedinjenja 43b
U rastvor jedinjenja 43a (9.3 g, 13,5 mmol) u THF:MeOH:H2O (60 mL:30 mL:30 mL) je dodat LiOH monohidrat (1,13 g, 26,9 mmol) na 0 °C pod N2. Posle 2 sata, reakciona smeša je zakiseljena sa 1 N aq. HCl do pH 4, i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Filtracija i koncentracija pod sniženim pritiskom daju jedinjenje 43b (9,1 g, sirovo), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+H]<+>677,48, 2 [M+H]<+>1353.82.
Priprema jedinjenja 43c
DIPEA (1,47 mL, 8,44 mmol), HOBt (484 mg, 3,58 mmol) i EDC·HCl (809 mg, 4,22 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 43b (2,5 g, 3,71 mmol) i jedinjenja 3e (1,8 g, 3,38 mmol) u DMF (20 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2,reakciona smeša je sipana u vodu (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 0,5 N aq. HCl (50 mL), zasićenim aq. NaHCO3(50 mL) i slanim rastvorom (50 mL) uzastopce, i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 43c (2,3 g, 59 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1155.92, [M+H-Boc]<+>1055.83.
Priprema jedinjenja 43d
U mešanu smešu jedinjenja 43c (2,3 g, 1,99 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 424 mg 3,98 mmol) u MeOH (200 mL) dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,99 mL, 3,98 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (100 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 43d (1,5 g, sirovo), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+H]<+>753.29.
Priprema jedinjenja 43e
DIPEA (0,14 mL, 0,80 mmol), HOBt (59 mg, 0,43 mmol) i EDC·HCl (102 mg, 0,53 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 43d (2,5 g, 3,71 mmol) i jedinjenja 25b (150 g, 0,46 mmol) u DMF (5 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u vodu (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N aq. HCl (30 mL), zasićenim aq. NaHCO3(30 mL) i slanim rastvorom (30 mL) uzastopce, i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 43e (100 mg, 45 %) kao bezbojno ulje. EI-MS m/z: [M+Na]<+>1685.11, 1/2 [M+H-Boc]<+>731.82.
Priprema jedinjenja 43f
U mešanu smešu jedinjenja 43e (100 mg, 0,06 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 20 mg, 0,192 mmol) u MeOH (20 mL) dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,045 mL, 0,18 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (30 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 43f (95 mg) kao smeđa pena, koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. EI-MS m/z: [M+H]<+>1586,30, 1/2 [M+H]<+>793.02.
Priprema jedinjenja 43g
DIPEA (0,030 mL, 0,170 mmol) i HBTU (36 mg, 0,094 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 43f (45 mg, 0,028 mmol) i jedinjenja 1j (114 mg, 0,091 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 16 sati pod N2, reakciona smeša je rastvorena u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i koncentrovane da bi se dobilo jedinjenje 43g (31 mg, 21 %). ELMS m/z: 1/3 [M+H-Boc]<+>1705,74, 1/4 [M+H-2Boc]<+>1254.79.
Priprema jedinjenja 43h
U rastvor jedinjenja 43g (31 mg, 0,006 mmol) u MeOH (1 mL) dodat je LiOH monohidrat (3,7 mg, 0,088 mmol) u H2O (1 mL) na -20 °C. Posle mešanja tokom 2 sata na -20 °C, reakciona smeša je neutralizovana sirćetnom kiselinom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Zatim je reakciona smeša rastvorena u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC, čime je proizvedeno jedinjenje 43h (18 mg, 64 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: 1/3 [M+H-Boc]<+>1735.19, 1/4 [M+H]<+>1301,95, 1/5 [M+H-Boc]<+>1021.71.
Priprema jedinjenja 43i
TFA (0,3 mL) je dodat u mešani rastvor jedinjenja 43h (18 mg, 0,004 mmol) u DCM (1,0 mL) na 0 °C. Posle mešanja tokom 1 sata, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u H2O/MeCN (1 mL/1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 43i (6 mg, 33 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: 1/3 [M+H]<+>1547,75, 1/4 [M+H]<+>1161.14.
Primer 63. Priprema jedinjenja 43j
Jedinjenje 43j je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 43f sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 43i u Primeru 62. ELMS m/z: 1/3[M+H]<+>1532,37, 1/4 [M+H]<+>1149.69.
Primer 64. Priprema jedinjenja 44i
Priprema jedinjenja 44a
DIPEA (1,9 mL, 11,0 mmol) i HBTU (2,5 g, 6,64 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja H-Lys(z)-OMe hidrohlorida (1,3 g, 4,43 mmol) i jedinjenja 43b (3,0 g, 4,43 mmol) u DMF (30 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je razblažena vodom (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 0,5 N aq. HCl (50 mL), zasićenim aq. NaHCOs (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL), i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtriranja i koncentracije pod sniženim pritiskom, dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 44a (3,9 g, 93 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>953.42.
Priprema jedinjenja 44b
U rastvor jedinjenja 44a (2,1 g, 2,20 mmol) u THF:MeOH:H2O (24 mL:8 mL:8 mL) je dodat LiOH monohidrat (185 mg, 4,40 mmol) na sobnoj temperaturi pod N2. Posle 2 sata, reakciona smeša je zakiseljena sa 1 N aq. HCl do pH 4, i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Filtracija i koncentracija pod sniženim pritiskom dala su jedinjenje 44b (2,0 g), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. EI-MS m/z: [M+H]<+>939.35, [M+Na]<+>961.37.
Priprema jedinjenja 44c
DIPEA (0,93 mL, 5,33 mmol) i HBTU (1,21 g, 3,20 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 44b (2,0 g, 2,13 mmol) i jedinjenja 3e (1,14 g, 2,13 mmol) u DMF (20 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je sipana u vodu (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 0,5 N aq. HCl (50 mL), zasićenim aq. NaHCOs (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 44c (2,60 g, 86 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1418.44, [M+Na]<+>1440.39, [M+H-Boc]<+>1318.47.
Priprema jedinjenja 44d
U mešanu smešu jedinjenja 44c (2,60 g, 1,83 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 781 mg, 7,34 mmol) u MeOH (50 mL) dodata je HCl (4 N u 1,4-dioksanu, 0,9 mL, 3,67 mmol). Zatim je reakcija mešana na sobnoj temperaturi 2 sata pod vodonikom. Reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (50 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 44d (1,73 g) kao žuti oblik, koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. EI-MS m/z: [M+H]<+>881.90.
Priprema jedinjenja 44e
DIPEA (1,58 mL, 9,08 mmol) i HBTU (2,58 g, 6,81 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 44d (1,0 g, 1,13 mmol) i jedinjenja 25b (1,82 g, 5,67 mmol) u DMF (20 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je razblažena vodom (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 0,5 N HCl (50 mL), zasićenim aq. NaHCOs (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL) uzastopce, i sušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Posle filtracije i koncentrovanja pod smanjenim pritiskom, dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 44e (848 mg, 36 %). EI-MS m/z: 1/2 [M+H-2Boc]<+>947.63.
Priprema jedinjenja 44f
U mešanu smešu jedinjenja 44e (848 mg, 0,40 mmol) i Pd/C (10 tež. %, 172 mg, 1,62 mmol) u MeOH (50 mL) dodata je HCl (4N u 1,4-dioksanu, 0,4 mL, 1,62 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata pod vodonikom, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i isprana sa MeOH (50 mL). Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje 44f (625 mg, sirovo), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: 1/2 [M+H]<+>996.40, 1/3 [M+H]<+>664.59
Priprema jedinjenja 44g
DIPEA (0,067 mL, 0,386 mmol) i HBTU (110 mg, 0,289 mmol) su dodati u mešanu smešu jedinjenja 44f (96 mg, 0,048 mmol) i jedinjenja 1j (303 mg, 0,24 mmol) u DMF (3 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 16 sati pod N2, reakciona smeša je rastvorena u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i koncentrovane da bi se dobilo jedinjenje 44g (67 mg, 20 %). ELMS m/z: 1/3 [M+H]<+>2315,93, 1/4 [M+H]<+>1737,60, 1/5 [M+H]<+>1390.37.
Priprema jedinjenja 44h
U rastvor jedinjenja 44g (67 mg, 0,009 mmol) u MeOH (1 mL) dodat je LiOH monohidrat (8,1 mg, 0,192 mmol) u H2O (1 mL) na -20 °C. Posle mešanja tokom 2 sata na -20 °C, reakciona smeša je neutralizovana sirćetnom kiselinom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Zatim je reakciona smeša rastvorena u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC, čime je proizvedeno jedinjenje 44h (27,9 mg, 45 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: 1/3 [M+H]<+>2110.24, 1/4 [M+H]<+>1582,97, 1/4 [M+H-Boc]<+>1557.91.
Priprema jedinjenja 44i
TFA (0,3 mL) je dodat u mešani rastvor jedinjenja 44h (27,9 mg, 0,004 mmol) u DCM (1,0 mL) na 0 °C. Posle mešanja tokom 1 sata, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u H2O/MeCN (1 mL/1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 44i (13,6 mg, 50 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: 1/3 [M+H]<+>2043,49, 1/4 [M+H]<+>1532,96, 1/5 [M+H]<+>1226.62.
Primer 65. Priprema jedinjenja 44j
Jedinjenje 44j je pripremljeno od jedinjenja 1i i jedinjenja 44f sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 44i u Primeru 64. ELMS m/z: 1/3[M+H]<+>2025,37, 1/4 [M+H]<+>1519.10, 1/5 [M+H]<+>1215.60.
Primer 66. Priprema jedinjenja 45k
Priprema jedinjenja L
D-glukurono-6,3-lakton (25,0 g, 141,9 mmol) je rastvoren u MeOH (250 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom, i polako je dodat rastvor NaOH (141 mg) u MeOH (100 mL). Posle mešanja tokom 24 sata, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, a zatim su dodati piridin (66 mL) i anhidrid sirćetne kiseline (71 mL) ispod 10 °C. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 4 sata, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i podvrgnuta je hromatografiji na koloni, čime se dobilo jedinjenje L (41,6 g, 77 %).<1>H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 5,77 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,31 (t, J= 9,6 Hz, 1H), 5,24 (t, J = 9,6 Hz, 1H), 5,14 (m, 1H), 4,17 (d, J = 9 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,04 (m, 9H).
Priprema jedinjenja M
Jedinjenje L (10,0 g, 26,6 mmol) je rastvoreno u HBr (33% u AcOH, 20 mL) na 0 °C pod azotom. Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature. Posle mešanja tokom 2 sata, dodat je toluen (50 mL) i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje M (10,9 g, 99 %).<1>H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 6,64 (d, J = 3,6Hz, 1H), 5,61 (t, J= 3,6 Hz, 1H), 5,24 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,58 (d, d, J = 10,2 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,05 (s, 3H).
Priprema jedinjenja 45a
3-Amino-1-propanol (3,0 g, 66,57 mmol) je rastvoren u DCM (150 mL) na 0 °C pod azotom, i dodat je di-terc-butil dikarbonat (16 g, 73,23 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 12 sati. Nakon što je reakcija završena, rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 45a (6,4 g, 92 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,78 (s, 1H), 3,65 (m, 2H), 3,30 (m, 2H), 2,90 (s, 1H), 1,68 (m, 2H), 1,48 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 45b
Jedinjenje 45a (6,04 g, 34,47 mmol) i trietilamin (14,4 mL, 103,4 mmol) rastvoreni su u THF na 0 °C pod azotom i zatim, polako obrađeni metansulfonskim anhidridom (7,21 g, 41,36 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod azotom 12 sati. Nakon što je reakcija završena, rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 45b (9,01 g, 98 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,73 (s, 1H), 4,30 (t, J= 5,9 Hz, 2H), 3,31-3,24 (m, 2H), 3,04 (s, 3H), 1,94 (t, J= 6,1 Hz, 2H), 1,44 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 45c
Jedinjenje 45b (3,0 g, 11,84 mmol) je rastvoreno u DMF (40 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom, a zatim tretirano sa NaN3(924 mg, 14,21 mmol), i dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 12 sati. Nakon što je reakcija završena, EtOAc (50 mL), dodata je destilovana voda (50 mL) i 1 N aq. HCl (5 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 45c (2,3 g, 99 %).<1>H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4,63 (s, 1H), 3,36 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 3,24-3,18 (m, 2H), 1,80-1,75 (m, 2H), 1,45 (s, 9H).
Priprema jedinjenja 45d
Jedinjenje 45c (3,8 g, 18,98 mmol) je rastvoreno u DCM (10 mL) na 0 °C pod azotom, a zatim je polako dodato 4 M-HCl u dioksanu (10 mL). Posle mešanja tokom 12 sati, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, čime se dobija jedinjenje 45d (2,5 g, 99 %).<1>H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8,06 (s, 3H), 3,47 (t, J= 6,6 Hz, 2H), 2,82 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 1,84-1,79 (m, 2H).
Priprema jedinjenja 45e
Jedinjenje 45d (58 mg, 0,42 mmol) i 5-formilsalicilna kiselina (100 mg, 0,60 mmol) rastvoreni su u DMF (2 mL) na 0 °C pod azotom, a zatim DIPEA (0,2 mL, 1,20 mmol) i PyBOP (375 mg, 0,72 mmol) su dodati u reakcionu smešu. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata, dodaju se EtOAc (30 mL) i destilovana voda (10 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni, čime se dobija jedinjenje 45e (82 mg, 79 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13,39 (s, 1H), 9,87 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,89 (dd, J= 1,6, 7,2 Hz, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,10 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 3,63-3,57 (m, 2H), 3,48 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 1,99-1,92 (m, 2H).
Priprema jedinjenja 45f
Jedinjenje 45e (78 mg, 0,31 mmol) i jedinjenje M (125 mg, 0,31 mmol) su rastvoreni u MeCN (3 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom, a zatim su dodati srebrni oksid (291 mg, 1,26 mmol) i 4 Å molekulsko sito (125 mg). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 3 sata, smeša je filtrirana kroz celit, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 45f (160 mg, 90 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10,00 (s, 1H), 8,66 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,02 (dd, J = 2,0, 6,4 Hz, 1H), 7,46 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 7,14 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,48-5,33 (m, 4H), 4,28 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,73-3,64 (m, 1H), 3,50-3,42 (m, 3H), 2,09-2,07 (m, 9H), 2,00-1,92 (m, 2H).
Priprema jedinjenja 45g
Jedinjenje 45f (160 mg, 1,51 mmol) je rastvoreno u 2-propanolu (0,4 mL) i hloroformu (2 mL) na 0 °C pod azotom, a zatim su mu dodati silika gel (2 g) i natrijum borohidrid (27 mg, 0,71 mmol). Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata, reaktant je filtriran kroz celit, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni, čime je dobijeno jedinjenje 45g (115 mg, 71 %).<1>H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8,06 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 7,50-7,44 (m, 2H), 7,01 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 5,45-5,31 (m, 4H), 4,38 (s, 2H), 4,22 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,67-3,61 (m, 1H), 3,46-3,41 (m, 3H), 2,07-2,04 (m, 9H), 1,97-1,91 (m, 2H).
Priprema jedinjenja 45h
Jedinjenje 45g (100 mg, 0,18 mmol) je rastvoreno u DMF (1 mL) na 0 °C pod azotom, a zatim su mu dodati bis(4-nitrofenil)karbonat (110 mg, 0,35 mmol) i DIPEA (0,050 mL, 0,27 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, dodaju se EtOAc (30 mL) i destilovana voda (10 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 45h (75 mg, 58 %).<1>H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8,29-8,27 (m, 2H), 8,23 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 7,54 (dd, J= 2,4, 6,6 Hz, 1H), 7,49 (t, J= 6,4 Hz, 1H), 7,39-7,37 (m, 2H), 7,04 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,45-5,29 (m, 4H), 5,28 (s, 2H), 4,23 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,68-3,64 (m, 1H), 3,46-3,42 (m, 3H), 2,08-2,05 (m, 9H), 1,98-1,93 (m, 2H).
Priprema jedinjenja 45i
Jedinjenje 45h (50 mg, 0,068 mmol) je rastvoreno u DMF (0,8 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom, a zatim je dodat MMAF-OMe (51 mg, 0,068 mmol). Dobijena smeša je tretirana sa HOBT (2 mg, 0,013 mmol), piridinom (0,24 mL) i DIPEA (0,012 mL, 0,068 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 18 sati, dodaju se EtOAc (20 mL) i destilovana voda (10 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 45i (71 mg, 78 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1339.
Priprema jedinjenja 45i
Jedinjenje 45i (30 mg, 0,022 mmol) i fenilacetilen (3,7 µL, 0,033 mmol) rastvoreni su u EtOH (0,2 mL) i vodi (30 µL) na sobnoj temperaturi pod azotom, a zatim 0,1 M CuSO4aq. rastvora (30 µL) i 1,0 M aq. rastvora natrijum askorbata (30 µL) je dodato u to. Dobijena smeša je tretirana sa HOBT (2 mg, 0,013 mmol), piridinom (0,24 mL) i DIPEA (12 µL, 0,068 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 5 sati, dodaju se EtOAc (20 mL) i destilovana voda (5 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 45j (26 mg, 81 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1441.
Priprema jedinjenja 45k
Jedinjenje 45j (20 mg, 0,013 mmol) je rastvoreno u MeOH (0,2 mL) na 0 °C pod azotom, a zatim je dodato LiOH·H2O (6 mg, 0,14 mmol) u vodi (0,2 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, dodat je hloroform (10 mL), MeOH (1 mL), destilovana voda (10 mL) i 0,5 N aq. HCl (1 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 45k (17 mg, 87 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1286.
Primer 67. Priprema jedinjenja 46b
Priprema jedinjenja 46a
5-Formilsalicilna kiselina (1,0 g, 6,02 mmol) je rastvorena u DMF (20 mL) na 0 °C pod azotom, a zatim je dodat N-bromosukcinimid (1,07 g, 6,11 mmol) i smeša je mešana na 70 °C tokom 3 sata. Nakon što je reakcija završena, dodati su EtOAc (100 mL), 2 N aq. rastvor HCl (2 mL) i destilovana voda (100 mL). Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 46a (1,2 g, 84 %).<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,64 (s, 1H), 8,19 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,00 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 3,16 (s, 1H).
Priprema jedinjenja 46b
Jedinjenje 46b je pripremljeno od jedinjenja 46a sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 2h u Primeru 4. EI-MS m/z: [M+H]<+>1328.
Primeri 68 do 70. Priprema jedinjenja 47a, jedinjenja 48a, i jedinjenja 49a
Jedinjenje N je pripremljeno postupkom opisanim u otvorenoj korejskoj prijavi br.10-2014-0035393.
Primeri 68. Priprema jedinjenja 47a
Jedinjenje 2h (20 mg, 0,014 mmol) je rastvoreno u EtOH (0,7 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom, a zatim je dodato jedinjenje N (3,7 mg, 0,017 mmol) i smeša je mešana na 45 °C tokom 2 sata. Nakon što je reakcija završena, jedinjenje 47a (10,2 mg, 49 %) je dobijeno korišćenjem HPLC. EI-MS m/z: [M+H]<+>1441.
Primeri 69 i 70. Priprema jedinjenja 48a i 49a
Jedinjenje 48a (Primer 69) i jedinjenje 49a (Primer 70) su pripremljeni sličnim postupkom kao za pripremu jedinjenja 47a u primeru 68. ELMS jedinjenja 48a m/z: [M+H]<+>1353. ELMS jedinjenja 49a m/z: [M+H]<+>1520.
Uporedni primer 66. Priprema jedinjenja 50k
Priprema jedinjenja 50a
Etil 4-bromobutanoat (5,0 mL, 34,6 mmol) je rastvoren u MeOH (75 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom, a zatim je dodat NaN3(4.5 g, 69,2 mmol) u vodi (25 mL) i mešano je na 85 °C tokom 8 sati. Nakon što je reakcija završena, rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i u njega su dodati hloroform (300 mL) i destilovana voda (200 mL). Organski sloj dobijen kao što je gore opisano je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 50a (5,1 g, 94 %).<1>H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4,15 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,36 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,41 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,94-1,89 (m, 2H), 1,28 (t, J= 8,4 Hz, 3H).
Priprema jedinjenja 50b
Jedinjenje 50a (2,0 g, 12,7 mmol) je rastvoreno u MeOH (32 mL) na 0 °C pod azotom, a zatim je polako dodat KOH (3,56 g, 63,6 mmol) u vodi (26 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 6 sati, rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dodati su hloroform (300 mL), 1 N aq. HCl (100 mL) i destilovana voda (100 mL). Organski sloj dobijen kao što je gore opisano je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 50b (1,28 g, 78 %).<1>H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 3,38 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 2,48 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 1,95-1,90 (m, 2H).
Priprema jedinjenja 50c
Jedinjenje 50b (850 mg, 6,58 mmol) je rastvoreno u MeOH (10 mL) na 0 °C pod azotom, a zatim su mu dodati oksalil hlorid (1,1 mL, 13,2 mmol) i DMF (1 kap) i mešani na sobnoj temperaturi 6 sati. Nakon što je reakcija završena, rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje 50c (965 mg), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.
Priprema jedinjenja 50d
4-hidroksi-3-nitrobenzoeva kiselina (5,0 g, 27,3 mmol) je rastvorena u THF (120 mL) na 0 °C pod azotom, a zatim je dodat 1 M BH3-THF kompleks (54.6 mL, 54.6 mmol) u to i mešan na sobnoj temperaturi tokom 20 sati. Nakon što je reakcija završena, dodati su EtOAc (200 mL), 0,5 N aq. HCl (20 mL) i destilovana voda (100 mL). Organski sloj dobijen kao što je gore opisano je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 50d (4,2 g, 91 %).<1>H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ 8,06 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 7,59 (dd, J= 1,2, 7,8 Hz, 1H), 7,12 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 4,83 (s, 2H).
Priprema jedinjenja 50e
Jedinjenje 50d (937 mg, 5,54 mmol) je rastvoreno u MeCN (15 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom, a dodati su jedinjenje M (2,0 g, 5,04 mmol), srebrni oksid (4,66 g, 20,1 mmol) i 4 Å molekulsko sito (2,0 g) i mešani na sobnoj temperaturi 14 sati. Nakon što je reakcija završena, smeša je filtrirana kroz celit, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 50e (1,0 g, 40 %).<1>H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7,81 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 7,54 (dd, J= 1,8, 6,6 Hz, 1H), 7,37 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,37-5,27 (m, 3H), 5,20 (d, J= 6,6 Hz, 1H), 4,72 (d, J= 6,0 Hz, 2H), 4,21 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,04-2,02 (m, 1H).
Priprema jedinjenja 50f
Jedinjenje 50e (900 mg, 6,35 mmol) je rastvoreno u EtOAc (100 mL), a zatim je dodat platina (IV) oksid (84,2 mg, 0,370 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi pod vodonikom 3 sata. Nakon što je reakcija završena, smeša je filtrirana kroz celit, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje 50f (700 mg, 83%), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.
Priprema jedinjenja 50g
Jedinjenje 50f (350 mg, 0,77 mmol) je rastvoreno u DCM (10 mL) na 0 °C pod azotom, a zatim su dodati jedinjenje 50c (136 mg, 0,92 mmol) i DIPEA (0,27 mL, 1,54 mmol) i mešani na sobnoj temperaturi 20 minuta. Nakon što je reakcija završena, dodaju se EtOAc (50 mL) i destilovana voda (50 mL). Organski sloj dobijen kao što je gore opisano je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 50g (280 mg, 65 %).<1>H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8,37 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,07 (dd, J= 1,8, 6,6 Hz, 1H), 6,93 (d, J= 8,4Hz, 1H), 5,43-5,28 (m, 3H), 5,06 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 4,63 (s, 2H), 4,19 (d, J= 9,6 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,44-3,41 (m, 2H), 2,56 (t, J= 7,8 Hz, 2H), 2,17-2,00 (m, 12H).
Priprema jedinjenja 50h
Jedinjenje 50g (250 mg, 0,44 mmol) je rastvoreno u DMF (4 mL) na 0 °C pod azotom, a zatim su mu dodati bis(4-nitrofenil)karbonat (270 mg, 0,88 mmol) i DIPEA (0,12 mL, 0,66 mmol), i mešani na sobnoj temperaturi 1 sat. Nakon što je reakcija završena, dodaju se EtOAc (50 mL) i destilovana voda (50 mL). Organski sloj dobijen kao što je gore opisano je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 50h (290 mg, 90 %).<1>H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8,54 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 8,28-8,25 (m, 2H), 8,02 (s, 1H), 7,40-7,36 (m, 2H), 7,11 (dd, J= 1,8, 6,6 Hz, 1H), 6,96 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,44-5,29 (m, 3H), 5,23 (s, 2H), 5,10 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 4,21 (d, J= 9,6 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,45-3,42 (m, 2H), 2,58 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 2,11-2,00 (m, 12H).
Priprema jedinjenja 50i
Jedinjenje 50h (250 mg, 0,34 mmol) je rastvoreno u DMF (4 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom, a zatim je dodat MMAF-OMe (255 mg, 0,34 mmol). Dobijena smeša je tretirana sa HOBT (9 mg, 0,068 mmol), piridinom (1,2 mL) i DIPEA (0,060 mL, 0,34 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 dana, dodati su EtOAc (50 mL), 2 N aq. HCl (5 mL) i destilovana voda (50 mL). Organski sloj dobijen kao što je gore opisano je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 50i (340 mg, 74 %). ELMS m/z: [M+H]<+>1339.
Priprema jedinjenja 50j
Jedinjenje 50i (210 mg, 0,156 mmol) je rastvoreno u MeOH (2 mL) na 0 °C pod azotom, a zatim je dodat LiOH·H2O (66 mg, 1,56 mmol) u vodi (2 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata, dodati su hloroform (50 mL), MeOH (5 mL), destilovana voda (50 mL) i 0,5 N aq. HCl (5 mL). Organski sloj dobijen kao što je gore opisano je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 50j (107 mg, 57 %). ELMS m/z: [M+H]<+>1184.
Priprema jedinjenja 50k
Jedinjenje 50j (10 mg, 0,008 mmol) i fenilacetilen (0,92 µL, 0,008 mmol) rastvoreni su u EtOH (0,15 mL) i vodi (10 µL) na sobnoj temperaturi pod azotom, a zatim su 0,1 M CuSO4vodeni rastvor (10 µL) i 1,0 M vodeni rastvor natrijum askorbata (10 uL) dodati u to. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 5 sati, dodaju se EtOAc (10 mL) i destilovana voda (5 mL). Organski sloj dobijen kao što je gore opisano je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni da bi se dobilo jedinjenje 50k (5 mg, 46 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1286.
Primer 71. Priprema jedinjenja 51h
Priprema jedinjenja 51a
Jedinjenje 51a je pripremljeno od jedinjenja 7b postupkom sličnim postupku pripreme jedinjenja 14h Primera 23. EI-MS m/z: [M+H]<+>1392.8, [M+H-Boc]<+>1292.7, [M+Na]<+>1414.8.
Priprema jedinjenja 51b
Jedinjenje 51a (1,8 g, 1,29 mmol), propargilamin (0,1 mL, 1,55 mmol) i anhidrovani HOBt (35 mg, 0,25 mmol) rastvoreni su u DMF (5 mL) na 0 °C. Zatim su dodati piridin (0,2 mL) i DIPEA (0,45 mL, 2,59 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 24 sata pod N2, reakciona smeša je razblažena sa H2O (100 mL) i zasićenim aq. NH4Cl rastvor (50 mL). Posle ekstrakcije sa EtOAc (2 x 100 mL), kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 51b (1,15 g, 68 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,01 (s, 1H), 7,48-7,31 (m, 2H), 7,02 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,45-5,20 (m, 4H), 5,09 (s, 2H), 4,19 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 4,10-4,05 (m, 2H), 3,97 (s, 2H), 3,85-3,45 (m, 49H), 2,24 (s, 1H), 2,05 (s, 9H), 1,53 (s, 18H), EI-MS m/z:
[M+Na]<+>1330.3.
Priprema jedinjenja 51c
U rastvor jedinjenja 51b (1,15 g, 0,879 mmol) u THF/MeOH (20 mL/20 mL) dodat je LiOH monohidrat (151 mg, 3,603 mmol) u H2O (20 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, reakciona smeša je neutralizovana sirćetnom kiselinom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u DMSO (5 mL) i prečišćen prep. HPLC, čime se dobilo jedinjenje 51c (600 mg, 60 %). ELMS m/z: [M+H]<+>1169.2.
Priprema jedinjenja 51d
DIPEA (0,92 mL, 5,30 mmol) i HBTU (1,0 g, 2,64 mmol) su dodati u mešanu smešu 4-azidobutanske kiseline (228 mg, 1,76 mmol) i N-Me-Ala-OMe (298 mg, 1,94 mmol) u DMF (10 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 14 sati pod N2, reakciona smeša je razblažena sa H2O (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 51d (310 mg, 77 %).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,22 (q, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,39 (t, J= 6,6 Hz, 2H), 2,95 (s, 3H), 2,52-2,39 (m, 2H), 1,98-1,92 (m, 2H), 1,41 (d, 3H),
Priprema jedinjenja 51e
U rastvor jedinjenja 51d (310 mg, 1,36 mmol) u MeOH (3 mL) dodat je LiOH monohidrat (114 mg, 2,72 mmol) u H2O (3 mL) na -20 °C. Posle mešanja na 0 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je razblažena sa H2O/2 N aq. rastvorom HCl (50 mL/2 mL) i ekstrahovana sa Et2O (2 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Filtracija i koncentracija su proizveli jedinjenje 51e (246 mg), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,15 (q, 1H), 3,39 (t, J= 6,6 Hz, 2H), 2,98 (s, 3H), 2,49-2,45 (m, 2H), 1,98-1,92 (m, 2H), 1,41 (d, 3H).
Priprema jedinjenja 51f
U rastvor maitansinola (50 mg, 0,088 mmol) i jedinjenja 51e (113 mg, 0,528 mmol) u DCM (6 mL) pod N2je dodat rastvor DIC (0,087 mL, 0,557 mmol) u DCM (1,4 mL). Posle 1 minuta, dodat je rastvor ZnCl2(1 M u Et2O, 0,11 mL, 0,11 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (10 mL). Organski sloj je ispran zasićenim aq. NaHCO3(4 mL) i rastvorom soli (2 mL), osušen preko anhidrovanog Na2SO4i uparen pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobila smeša dijastereomernog jedinjenja maitansinoida 51f (50 mg, 74 %). ELMS m/z:
[M+H]<+>761.7.
Priprema jedinjenja 51g
CuSO4·5H2O (2 mg) i natrijum askorbat (10 mg) su dodati u smešu jedinjenja 51f (78 mg, 0,102 mmol) i jedinjenja 51c (132 mg, 0,112 mmol) u DMSO (4 mL) i H2O (1 mL). pH je podešen na oko 7 dodavanjem 1 M aq. Na2CO3. Posle mešanja na 20 °C tokom 1 sata, reakciona smeša je rastvorena u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i koncentrovane da bi se dobilo jedinjenje 51g (72,1 mg, 37 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1930.9, [M+H-Boc]<+>1830.9.
Priprema jedinjenja 51h
TFA (0,2 mL) je dodat u mešani rastvor jedinjenja 51g (72,1 mg, 0,037 mmol) u DCM (1 mL). Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u H2O/MeCN (1 mL/1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 51h (polarniji izomer 17 mg i manje polarni izomer 6,0 mg, 36 %) kao bela čvrsta supstanca. ELMS m/z: [M+H]<+>1730.8.
Primer 72. Priprema jedinjenja 52c
Priprema jedinjenja 52a
Taltobulin etil estar (TFA so, 80 mg, 0,029 mmol), jedinjenje 14h (128 mg, 0,0142 mmol) i anhidrovani HOBt (3,5 mg, 0,026 mmol) rastvoreni su u DMF (3 mL) na 0 °C. Zatim su dodati piridin (0,5 mL) i DIPEA (0,045 mL, 0,26 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 24 sata pod N2, reakciona smeša je razblažena sa H2O (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 52a (70 mg, 43 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1258.6, [M+H-Boc]<+>1158.6.
Priprema jedinjenja 52b
U rastvor jedinjenja 52a (70 mg, 0,055 mmol) u MeOH (1,4 mL) dodat je LiOH monohidrat (11,7 mg, 0,275 mmol) u H2O (1,4 mL) na -20 °C. Posle 1 sata na 0 °C, pH rastvora je podešen na 4~5 sa sirćetnom kiselinom. Dobijeni rastvor je rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC, čime je proizvedeno jedinjenje 52b (4.5 mg, 8 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: [M+H]<+>1090.4.
Priprema jedinjenja 52c
U rastvor jedinjenja 52b (4,5 mg, 0,0041 mmol) u DCM (1 mL) dodata je TFA (0,2 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak prečišćen pomoću HPLC, čime je dobijeno jedinjenje 52c (2,4 mg, 59 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: [M+H]<+>990.4.
Primer 73. Priprema jedinjenja 53f
Priprema jedinjenja 53b
Jedinjenje 53a (300 mg, 0,31 mmol, Jedinjenje 53a je pripremljeno postupkom stavljenim na uvid javnosti u patentu WO2013/055987 A1), jedinjenje 15a (355 mg, 0,31 mmol) i anhidrovani HOBt (10 mg, 0,06 mmol) rastvoreni su u DMF (0,5 mL) na 0 °C. Zatim su dodati piridin (0,3 mL) i DIPEA (0,14 mL, 0,78 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 23 sata pod N2, reakciona smeša je razblažena sa H2O/zasićenim aq. NH4Cl rastvorom (100 mL/50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 53b (250 mg, 41 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1943.6, [M+Na]<+>1965.6.
Priprema jedinjenja 53c
U rastvor jedinjenja 53b (300 mg, 0,31 mmol) u THF/H2O (2 mL/1 mL) je dodata sirćetna kiselina (3 mL) na 0 °C pod N2. Posle 22 sata, reakciona smeša je razblažena sa H2O (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 53c (140 mg, 68 %). EI-MS m/z: [M+H]<+>1713.6.
Priprema jedinjenja 53d
U rastvor jedinjenja 53c (120 mg, 0,07 mmol) u DCM (10 mL) dodaju se piridinijum hlorohromat (158 mg, 0,42 mmol) i 4 Å molekulsko sito (50 mg) na sobnoj temperaturi pod N2. Posle mešanja tokom 18 sati, reakciona smeša je filtrirana kroz celitnu podlogu i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeno jedinjenje 53d (95 mg, 75 %) je dobijeno kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. ELMS m/z: [M+Na]<+>1732.8.
Priprema jedinjenja 53e
U rastvor jedinjenja 53d (95 mg, 0,056 mmol) u MeOH (1 mL) dodat je LiOH monohidrat (12 mg, 0,278 mmol) u H2O (1 mL) na 0 °C. Posle 2 sata na 0 °C, reakciona smeša je neutralizovana sirćetnom kiselinom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen prep. HPLC, čime se dobilo jedinjenje 53e (6 mg, 7 %). ELMS m/z:
[M+H]<+>1569.7.
Priprema jedinjenja 53f
TFA (0.2 mL) je dodat u mešani rastvor jedinjenja 53e (6 mg, 0,004 mmol) u DCM (2 mL). Posle mešanja na 0 °C tokom 2 sata, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u DMSO (1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 53f (2.7 mg, 53 %) kao bela čvrsta supstanca. EI-MS m/z: [M+H]<+>1251.3.
Primer 74. Priprema jedinjenja 54a
Jedinjenje 54a je pripremljeno od jedinjenja 53a i jedinjenja 14h sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 53f Primera 73.
Primer 75. Priprema jedinjenja 55a
Jedinjenje 55a je pripremljeno od jedinjenja 53a i jedinjenja 51a sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 53f Primera 73. ELMS m/z: [M+H]<+>1516.7, 1/2 [M+H]<+>758.7.
Primer 76. Priprema jedinjenja 56d
Priprema jedinjenja 56b
Jedinjenje 56a (HCl so, 100 mg, 0,27 mmol, Jedinjenje 56a je pripremljeno postupkom opisanom u Curr. Med. Chem. 2009, 16, 1192-1213.), jedinjenje 14h (242 mg, 0,27 mmol) i anhidrovani HOBt (7,3 mg, 0,05 mmol) rastvoreni su u DMF (3 mL) na 0 °C. Zatim su dodati piridin (0,4 mL) i DIPEA (0,09 mL, 0,60 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 16 sati pod N2, reakciona smeša je razblažena sa zasićenim aq. NH4Cl rastvorom (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje 56b (184 mg, 63 %). EI-MS m/z: [M+H]+ 1091,9, [M+H-Boc]<+>991.7.
Priprema jedinjenja 56c
U rastvor jedinjenja 56b (90 mg, 0,08 mmol) u MeOH (2 mL) dodat je LiOH monohidrat (17 mg, 0,41 mmol) u H2O (2 mL) na -20 °C. Posle mešanja tokom 2 sata na -20 °C, reakciona smeša je neutralizovana sirćetnom kiselinom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Zatim je reakciona smeša rastvorena u H2O/DMSO (1,5 mL/1,5 mL) i prečišćena pomoću HPLC, čime je proizvedeno jedinjenje 56c (35 mg, 45 %) kao žuta čvrsta supstanca. EI-MS m/z: [M+H]+ 951,7, [M+H-Boc]<+>851.5.
Priprema jedinjenja 56d
TFA (0,3 mL) je dodat u mešani rastvor jedinjenja 56c (35 mg, 0,04 mmol) u DCM (2,0 mL) na 0 °C. Posle mešanja tokom 1 sata, rastvarač i višak TFA su uklonjeni pomoću N2toka. Zatim je ostatak rastvoren u H2O/MeCN (1 mL/1 mL) i prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije sa istim vremenom zadržavanja su kombinovane i liofilizovane da bi se dobilo jedinjenje 56d (24,9 mg, 68 %) kao žuta čvrsta supstanca. EI-MS m/z: [M+H]+ 851,6.
Primer 77. Priprema jedinjenja 57a
Jedinjenje 57a je pripremljeno od jedinjenja 56a i jedinjenja 15a sličnim postupkom pripreme kao kod jedinjenja 56d u Primeru 76. EI-MS m/z: [M+H]<+>983.3.
Primer 78. Sinteza ADC2
Primer 79. Sinteza ADC2
Primer 81. Sinteza ADC86
187
Primer 83. Sinteza ADC4
188
Primer 85. Sinteza ADC75
189
Eksperimentalni primer 1. Test poređenja odziva u odnosu na β-glukuronidazu.
Da bi se uporedila međusobna reakcija Jedinjenja 45k iz Primera 66 i Jedinjenja 50k iz Uporednog Primera 66 na β-glukuronidazu, uporedni test je izveden na sledeći način.
Jedinjenje 45k iz Primera 66 i Jedinjenje 50k iz Uporednog Primera 66 su pripremljeni kao osnovni rastvori od 500 µM i 50 µM DMSO. Pripremljeni su reakcioni rastvori u kojima su 880 µL rastvora fosfatnog pufera (PBS) i 100 µL osnovnih rastvora jedinjenja 45k i jedinjenja 50k pomešani jedan sa drugim (konačne koncentracije su bile 50 µM i 5 µM, respektivno). Posle 20 µL enzima E. coli β-glukuronidaze (1 mg/ml, Sigma: E.C.3.2.1.31 Tip IX-A; 1 mg/mL u PBS; 3,6 µg, 13 µmol) je dodato u reakcione rastvore, reakcije su započete u vodenom kupatilu sa konstantnom temperaturom na 37°C.100 µL pomešanih rastvora je podeljeno na 0 min, 25 min, 60 min i 90 min, respektivno, i dodato je 200 µL acetonitrila. MMAF oslobođen iz svakog od supernatanata dobijenih izvođenjem centrifugiranja (4°C, 15 min, 14000 rpm) na uzorcima smeše je kvantitativno analiziran korišćenjem LC-MS/MS (eksperiment je izveden metodom sličnom metodi stavljenoj na uvid javnosti u U.S. Patentu br.8,568,728).
Rezultati testa su prikazani na slici 2, a na slici 2 je potvrđeno da se MMAF značajno brzo oslobađa iz svakog jedinjenja 45k iz Primera 66 i jedinjenja 50k iz uporednog primera 66 kroz reakciju 1,6-eliminacije nakon enzimskih reakcija pomoću β- glukuronidaza (U.S. Patent br.
8,568,728).
Eksperimentalni primer 2. Test poređenja stabilnosti u plazmi linker toksina
Upoređena je stabilnost u plazmi Jedinjenja 45k iz Primera 66 i Jedinjenja 50k iz Uporednog Primera 66.
10 µL Jedinjenja 45k ili 50k je rastvoreno u DMSO na 5 mM, i svaka kompozicija je pomešana sa 990 µL mišje plazme, čime su pripremljeni uzorci od 50 µM, za procenu stabilnosti u plazmi. Rastvori plazme/jedinjenja su inkubirani na 37 °C tokom 7 dana. Tokom 6-dnevne inkubacije, alikvoti od 100 µL su uzeti 0, 1, 2. i 7. dana i pomešani sa 200 µL acetonitrila koji sadrži interni standard za praćenje precipitacije proteina plazme. Supernatanti su dobijeni centrifugiranjem uzoraka acetonitril/plazma (4 °C, 15 min, 14000 rpm), a količina svakog jedinjenja i proizvoda je kvantifikovana izvođenjem LC-MS/MS na supernatantima. (Eksperiment je izveden korišćenjem onih sličnih onima opisanim u J. Chromatography B, 780:451-457 (2002)).
Rezultati dobijeni za jedinjenje 45k iz Primera 66 i jedinjenje 50k iz uporednog primera 66 korišćenjem LS-MS/MS su prikazani na slici 3 i u tabeli 1. Stabilnost jedinjenja 50k iz uporednog primera 66 i stabilnost jedinjenja 45k iz primera 66 bila je 14% i 80% 1. dana, respektivno. Dakle, stabilnost Jedinjenja 45k Primera 66 u plazmi miša je bila superiornija od Jedinjenja 50k iz Uporednog Primera 66.
Tabela 1. Stabilnost jedinjenja 45k i jedinjenja 50k u plazmi miša
Stabilnost u plazmi jedinjenja 47a, 48a i 49a izvedena je korišćenjem gore pomenutog postupka (Slika 4-6).
Eksperimentalni primer 3. Priprema konjugata antitelo-lek
Korak 1. Postupak prenilovanog antitela (pripremljeno prema postupku objavljene publikacije korejskog patenta br.10-2014-0035393)
Pripremljena je reakciona smeša za prenilaciju antitela i reagovala je na 30°C tokom 16 sati. Korišćena su antitela koja sadrže GGGGGGGCVIM sekvencu („G7CVIM”) dodatu na C-kraju svakog lakog lanca. G7CVIM sekvenca je dodata na C-kraju teškog lanca (ADC86-91) ili i teškog i lakog lanca (ADC75-77). Izvori sekvenci korišćenih antitela su kao u tabeli 2.
Tabela 2. Lista korišćenih antitela za pripremu ADC
Reakciona smeša je sastavljena od puferskog rastvora (50 mM Tris-HCl (pH7,4), 5 mM MgCl2, 10 µM ZnCl2, 0,25 mM DTT) koji sadrži 24 µM antitela, 200 nM FTase (Calbiochem #344145) i 144 µM LCB 14-0606 (pripremljen u okviru firme, prema postupku iz otvorene korejske patentne prijave br. 10-2014-0035393). Nakon što je reakcija završena, prenilovano antitelo je prečišćeno pomoću FPLC.
Korak 2. Postupak pripreme ADC-a
Reakciona smeša za formiranje oksimske veze između prenilovanog antitela i linker-toksina je pripremljena mešanjem 100 mM Na-acetatnog pufera (pH 4,5, 10% DMSO), 12 µM prenilovanog antitela i 120 µM linker-toksina (u okviru firme) i nežno mešana na 30°C. Posle inkubacije reakcije tokom 24 sata, konjugat antitelo-lek je prečišćen odsoljavanjem pomoću FPLC i hidrofobne interakcije hromatografije-HPLC.
Tabela 3. Lista anti-HER2 ADC (DAR2)
Tabela 4. Lista anti-HER2 ADC (DAR4)
Tabela 5. Lista anti-HER2 ADC (DAR4<)
Tabela 6. Lista anti-HER2 ADC koji koriste amanitin kao korisni sadržaj
Tabela7. Lista ADC koji koriste antitela koja ciljaju različite proteine
Eksperimentalni primer 4. Citotoksičnost anti-HER2 ADC
Korišćene su komercijalno dostupne humane ćelijske linije raka dojke MCF-7 (HER2 negativan do normalan), OE-19 (HER2 pozitivan), NCI-N87 (HER2 pozitivan), SK-OV-3 (HER2 pozitivan), JIMT-1 (HER2 pozitivan) i SK-BR-3 (HER2 pozitivan). Ćelijske linije su kultivisane prema preporučenim specifikacijama koje su date uz komercijalno dostupne ćelijske linije.
Merene su antiproliferacione aktivnosti antitela, lekova i konjugata u odnosu na ćelijske linije raka. Ćelije su postavljene u ploče za kulturu tkiva sa 96 ležišta sa 1 x 10<4>ćelije po ležištu. Posle 24 sata inkubacije, dodata su antitela, lekovi i konjugati u različitim koncentracijama. Broj živih ćelija posle 72 sata je prebrojan korišćenjem SRB testa. Apsorpcija je merena na 540 nm korišćenjem SpectraMax 190 (Molecular Devices, SAD).
Tabela 8. IC50vrednost različitih anti-HER2 ADC (DAR2)
Tabela 9. IC50vrednost ADC različitih PEG dužina
Tabela 10. IC50vrednost MMAF ADC sa različitim tipovima linkera
Tabela 11. IC50vrednost MMAE ADC sa različitim tipovima linkera
Tabela 12. IC50vrednost hibridnih ADC
Poređenje ADC konjugovanih sa dva različita toksina i ADC konjugovanih sa istim toksinom
Tabela 13. IC50vrednost različitih DAR-ADC
Eksperimentalni primer 5. Citotoksičnost Erbitux (LC)-glukuronidnog linkera MMAF
A431 ćelije, koje eksprimuju visoke nivoe EGFR, i MCF-7 ćelije, koje eksprimuju niske nivoe EGFR, postavljene su na oko 1000 ćelija po ležištu na ploči sa 96 ležišta u 100 µL medijuma. Ćelije HCC-827, koje eksprimuju srednji nivo EGFR-a, postavljene su na oko 5000 ćelija po ležištu u ploči sa 96 ležišta u 100 µL medijuma. Ćelije su inkubirane na 37 °C u 5% CO2tokom 24 sata. Zatim su ćelijama dodata serijska razblaženja monometil auristatina F-OMe (MMAF-OMe), Erbitux (LC)-G7CVIM i konjugata antitelo-leka ADC64 koji sadrži Erbitux (LC)-G7CVIM i MMAF u koncentracijama od 100 do 0,00128 nM. Ćelije su inkubirane 72 sata, a zatim fiksirane 1 sat na 4°C nakon dodavanja 100 µL ledeno hladne 10% trihlorosirćetne kiseline u svako ležište bunar. Vijabilne ćelije su prebrojane korišćenjem SRB boje (Sulforhodamine B, Sigma S1402) i čitača ploča Molecular Devices SpectraMax 190 koji koristi Softmax Pro v5, nadgledajući apsorbanciju na 540 nm (Tabela 14)
Erbitux (LC)-G7CVIM je imao IC50veće od 100 nM za svaku ćelijsku liniju (A431, MCF-7 i HCC-827). MMAF-OMe je imao IC50od 1,81 nM protiv MCF-7 ćelija, 1,99 nM protiv ćelija HCC-827 i 1,11 nM protiv ćelija A431. Konjugat antitelo-lek ADC64, 65 i 66 imao je IC50veći od 100 nM protiv MCF-7 ćelija, 0,47, 0,17 i 0,11 nM protiv ćelija HCC-827, tim redosledom.
ADC64 je pokazao 1,3 nM protiv ćelija A431, pokazujući tako superiornu specifičnost u odnosu na MMAF-OMe i superiornu potentnost u odnosu na Erbitux (LC)-G7CVIM.
Tabela 14. IC50vrednost anti-EGFR mAb, ADC baziranih na Erbitux-u
Eksperimentalni primer 6. Citotoksičnost ABT-806 (LC)-glukuronidnog linkera-MMAF
Citotoksičnost ADC baziranih na ABT-806 testirana je na ćelijskim linijama dobijenim od pacijenata koje je uspostavio Samsung Medical Center (Seul, Republika Koreja). Ćelije su održavane u Neurobasal<®>-A medijumu (Thermo Fisher Scientific) sa dodatkom L-glutamina (200 nM), bFGF (20 ng/mL), EGF (20 ng/mL), N2 suplementa i B27 dodatka. Za test vijabilnosti, ćelije su alikvotovane na ploču sa 96 ležišta (5000 ćelija/ležište) i inkubirane na 37°C u 5% CO2tokom 1 dana pre tretmana. Posle tretmana sa ADC, ćelije su inkubirane 72 sata.
100 µL CellTiter-Glo<®>Reagensa (Promega) je dodato u svaki bunar da bi se analizirala vijabilnost ćelija. Posle 10 minuta inkubacije, luminiscentni signal je analiziran korišćenjem luminometra.
DAR4 ADC (ADC74, ADC75) imali su bolju potenciju od DAR2 ADC (ADC73) kako se i očekivalo. Ćelije nekih pacijenata su pokazale malo drugačiju osetljivost na korisni sadržaj. 22 i 780 ćelije su bile osetljivije na MMAF u odnosu na MMAE, a 464 ćelije obrnuto.
Tabela 15. Citotoksična aktivnost ADC baziranih na ABT-806 protiv ćelijskih linija dobijenih od pacijenata
Eksperimentalni primer 7. Citotoksičnost anti-CD19 ADC
Ramos ćelije, koje su ćelije humanog Burkitovog limfoma, zasejane su u ploču sa 96 ležišta na 20.000 ćelija/ležištu u 100 µL medijuma za rast. Ćelije su inkubirane na 37 °C u 5% CO2tokom 1 dana. Serijska razblaženja anti-CD19 antitela DI-B4-(LC)-G7CVIM i ADC od 33,33 nM do 5,1 pM u 100 µL medijuma su dodata u ležišta, a ćelije su inkubirane sa antitelom i ADC tokom 72 sata. Vijabilnost ćelija je procenjena korišćenjem VST-1 (TaKaRa MK400) i čitača ploča Molecular Devices SpectraMax 190 koji radi sa Softmax Pro v5, praćenjem apsorpcije na 450 nm (Tabela 16).
Eksperimenti u Ramos ćelijama su izvedeni uporedo sa eksperimentima na ćelijama K562, ćelijama humane mijeloidne leukemije koje ne eksprimuju CD19, kao negativna kontrola za procenu bilo kakve nespecifične citotoksičnosti.
ADC68 i ADC69 su prikazali IC50od 0,09 nM protiv Ramosovih ćelija, što je bilo superiornije od nekonjugovanog DI-B4 (Tabela 16). Nijedno antitelo nije pokazalo citotoksičnost ispod 33,33 nM protiv kontrolnih ćelija K562.
Tabela 16. Citotoksična aktivnost ADC zasnovanih na anti-CD19 antitelu
Eksperimentalni primer 8. Citotoksičnost ADC na bazi rituksana
Ramos ćelije, koje su ćelije humanog Burkitovog limfoma, zasejane su u ploču sa 96 ležišta na 20.000 ćelija/ležištu u 100 µL medijuma za rast. Ćelije su inkubirane na 37 °C u 5% CO2tokom 1 dana. Serijska razblaženja Rituksana (LC)-G7CVIM i ADC-a od 33,33 nM do 5,1 pM u medijumu od 100 µL dodata su u ležišta, a ćelije su inkubirane sa antitelom i ADC-ima tokom 72 sata. Vijabilnost ćelija je procenjena korišćenjem WST-1 (TaKaRa MK400) i čitača ploča Molecular Devices SpectraMax 190 koji radi sa Softmax Pro v5, praćenjem apsorbancije na 450 nm (Tabela 17).
Eksperimenti u Ramos ćelijama su izvedeni uporedo sa eksperimentima na ćelijama K562, ćelijama humane mijeloidne leukemije koje ne eksprimuju CD20, kao negativna kontrola za procenu bilo kakve nespecifične citotoksičnosti.
ADC70, ADC71 i ADC72 su prikazali IC50od 4,56 nM, 1,47 nM i 1,78 nM protiv Ramos ćelija, tim redosledom, što je bilo bolje od nekonjugovanog anti-CD20 antitela (Tabela 17). Nijedno antitelo nije pokazalo citotoksičnost ispod 33,33 nM protiv kontrolnih ćelija K562.
Tabela 17. Citotoksična aktivnost ADC na bazi rituksana
Eksperimentalni primer 9. Razlike u osetljivosti na beta glukuronidazu
ADC u 0,06 M Na-acetatnom puferu (pH5,2) su alikvotirani u mikroepruvetu od 1,5 mL. Konačna koncentracija ADC u smeši je podešena na 12 µM. U svaku epruvetu je dodato 0,001 µg humane β-glukuronidaze (R&D sistemi: 6144-GH-020). Zatim su smeše inkubirane u vodenom kupatilu na 37°C tokom 3 sata. Reakcija je prekinuta dodatkom hladnog PBS pufera (pH7.4) u 15-struko razblaženje. Promena ADC uzorka beta-glukuronidazom je analizirana pomoću HIC-HPLC. Efikasnost aktivnosti enzima je vizuelizovana % preostalih (Slika 10)
Činilo se da se podložnost pripisuje jeidnici ogranka (BR) dela linker-toksin. Kada je Lys lociran u BR, oslobađanje toksina je bilo veoma efikasno. Amid i amin su pokazali manju osetljivost od Lys.
Eksperimentalni primer 10. Stabilnost u plazmi ADC-a
Da bi se uporedila stabilnost u plazmi između ADC2 (Herceptin-LBG-MMAF, DAR2) i Kadcyla, ti ADC su inkubirani u mišjoj i humanoj plazmi 5 sekundi (0 h) ili 96 sati (96 h), a zatim je sledio SRB in vitro test citotoksičnosti korišćenjem SK-BR3 ćelija tokom 72 sata. ADC2 inkubiran u plazmi zadržava snažnu citotoksičnost (bez promene u IC50; 0,06 (0h) i 0,07 nM (96h) za MP, 0,08 (0h) i 0,08 nM (96h) za HP) dok je Kadcyla inkubirana u plazmi pokazala smanjenu citotoksičnost u poređenju sa 0h Kadcyla-om (povećanje IC50; 0,26 (0h) i 1,59 nM (96h) za MP, 0,29 (0h) i 4,21 nM (96h) za HP) (Slika 11)
Da bi se okarakterisala stabilnost u plazmi ADC napravljenih od različitih antitela, ADC su inkubirani u humanoj plazmi 5 sekundi (0 h) ili 168 sati (168 h), a zatim je sledio SRB in vitro test citotoksičnosti korišćenjem SK-BR3 ćelija tokom 72 sata. (Tabela 18-20 i Slika 12)
Tabela 18. Stabilnost u plazmi ADC baziranih na Herceptinu (nM)
Tabela 19. Stabilnost u plazmi ADC na bazi anti-CD19 antitela (nM)
Tabela 20. Stabilnost u plazmi ADC na bazi anti-CD20 antitela (nM)
Eksperimentalni primer 11. Farmakokinetika Herceptina<®>i ADC
Mužjacima Sprague Dawley pacova je intravenozno dozirano 3 mg/kg antitela ili konjugata antitelo-lek. Uzorci krvi su uzeti u više vremenskih tačaka nakon doziranja, ohlađeni u ledenoj vodi, a plazma je izolovana. Plazma je zamrznuta na -80°C do naknadne LC/MS/MS analize.
20 µL svakog uzorka je pomešan sa 340 µL PBS-a i 60 µL magnetnih kuglica proteina A i inkubiran 2 sata na sobnoj temperaturi uz lagano mućkanje. Kuglice su isprane tri puta sa PBS. Zatim je u kuglice dodato 25 µL internog standarda (peptidi obeleženi izotopima pri 10 µg/mL), 75 µL RapiGest SF (Waters) i 10 µL ditiotreitola. Smeša je mućkana 1 minut i zatim inkubirana 1 sat na 60°C. U smešu je dodato 25 µL jodosirćetne kiseline, smeša je mućkana 1 minut, a zatim inkubirana 30 minuta na sobnoj temperaturi. U smešu je dodato 10 µL modifikovanog tripsina klase za sekvencioniranje (Promega), smeša je mućkana 1 minut, i smeša je inkubirana preko noći na 37°C. U smešu je dodato 15 uL hlorovodonične kiseline, smeša je mućkana 1 minut, i smeša je inkubirana 30 minuta na 37°C. Smeša je centrifugirana na 5000 x g tokom 10 minuta na 4°C i supernatant je prebačen u HPLC bočicu.
Sistem tečne hromatografije-masene spektrometrije sastojao se od dve Shimadzu LC-20AD pumpe, Shimadzu CBM-20A HPLC kontrolora pumpe (Shimadzu Corporation, Kolumbija, MD, SAD), CTC HTS PAL autosamplera (CEAP Technologies, Carrboro, NC, SAD) i masenog spektrometra trostrukog vremena leta 5600 (Triple TOF MS) (AB Sciex, Foster City, Kalifornija, SAD). Analitička kolona je bila Phenomenex Kinetex KSB-C18 kolona, 2,1 x 30 (2,6 µm).
HPLC je izvedena sa gradijentom voda/acetonitril i zakiseljena sa 0,1% mravljom kiselinom. Zapremine injekcije su bile 10 µL. Triple TOF MS, opremljen Duospray<™>jonskim izvorom, korišćen je za završetak eksperimenta visoke rezolucije. Triple TOF MS je radio u režimu pozitivnih jona. Gas azota visoke čistoće je korišćen za nebulizator/Duospray<™>i zavesne gasove. Temperatura izvora je podešena na 500°C sa protokom zavesnog gasa od 30 L/min. Napon raspršivanja jona je postavljen na 5500 V, potencijal deklasteriranja je bio 145 V, a energija sudara je bila 38 V. Režim jona proizvoda je korišćen kao režim skeniranja. Analyst<®>TF verzija 1.6 (AB Sciex) koja radi pod Windows-om<®>(Microsoft) je korišćena za kontrolu instrumenta i prikupljanje podataka. Integracije pikova su izvedene sa MultiQuant-om<®>Verzija 2.1.1 (AB Sciex). Proračuni su obavljeni sa MultiQuant-om<®>Verzija 2.1.1 za odnose površina pikova, regresije standardne krive, vrednosti koncentracije uzorka i deskriptivnu statistiku. LC/MS/MS je kalibrisan korišćenjem standardnih rastvora pri koncentracijama od 0,1, 0,4, 1, 2, 5, 10, 20, 40, 80 i 100 µg/mL. Reprezentativni PK profil je prikazan na Slici 13. PK profil ADC2 (Herceptin (LC)-MMAF, DAR2) bio je veoma sličan onom Herceptina.
Eksperimentalni primer 12. Kombinovani efekat PEG (vezna jedinica) u razgranatom linkertoksinu
Da bi se identifikovali kritični atributi koji utiču na PK profil ADC-a, testirane su različite dužine i strukture vezne jedinice (broj i raspored PEG). Eksperiment za PK analizu je urađen kao što je opisano u eksperimentalnom Primeru 9. Iako je ADC23 (DAR4 ADC) imao snažniju efikasnost in vitro i in vivo nego DAR2 ADC, njegov PK profil je smanjen u poluživotu i AUC (Slika 14). Zamenom linker-toksina sa 16f na 25f (pričvršćivanje dodatne jedinice za povezivanje (3 PEG) nakon jedinice ogranka (BR), PK profil je dobijen koliko i Herceptin (Slika 14). Ovi efekti su dobro reprodukovani u ADC, ADC24 & ADC33 na bazi MMAE (Slika 15). Zato što je MMAE više hidrofobna od MMAF-a, ADC na bazi MMAE su se pogoršali u profilu, kako je prikazano sa ADC1 i ADC24. Dodavanje duše PEG jedinice je tradicionalna primena za produžavanje poluživata i AUC. Međutim, jednostavna elongacija brojeva PEG jedinica od 3 do 12 nije pokazala velike razlike, kada se uporedi ADC1 sa ADC5. S druge strane, zamenom linearne jedinice linkera (jedinjenje 2g ili 4f) sa razgranatom (jedinjenje 11j, ADC15), PK profil je značajno poboljšan (slika 16), što ukazuje da kritični atribut za PK možda nije samo jednostavna dužina, već struktura spojne jedinice.
Eksperimentalni primer 13. Efekti hidrofilne spojne jedinice u PK kod ADC
Mnogi korisni sadržaji koji se koriste za ADC imaju hidrofobni karakter, što je rezultiralo lošim svojstvima PK. Da bi se kompenzovala hidrofobnost, ispitana su hidrofilna jedinjenja kao deo spojne jedinice. Ubacivanje hidrofilnih jedinjenja kao što je Asp povećava AUC i poluživot ADC (Slika 17, 18, 19). U slučajevima DAR2, ADC sa spojnom jedinicom koja uključuje Asp pokazao je veći AUC od Herceptina (Slika 17, 18). Efekat kompenzacije polarnom aminokiselinom, kao što su Asp ili Glu, može se primetiti u ADC sa DAR4 (Slika 19, 20). ADC49 (2 Asp) i ADC52 (2 D-Glu) su bili superiorniji od ADC47 (1 Asp) i ADC51 (1D-Glu), respektivno, u AUC i poluživotu.
Eksperimentalni primer 14. in vivo efikasnost
Zamrznuta JIMT-1 ćelija je odmrznuta i kultivisana na 37°C, 5% CO2uslovi. Za implantaciju su korišćene JIMT-1 ćelije najboljeg stanja da je vijabilnost bila veća od 95%. Ćelije od 5x10<6>suspendovane u 50 µL hladnog fiziološkog rastvora implantirane su u desnu zadnju nogu balb/c-golog miša. Za eksperimente je korišćeno 5 miševa po grupi. Formiranje i rast tumora su periodično praćeni. Zapremina tumora je izračunata formulacijom; zapremina = (a<2>b)/2, „a” znači kratak prečnik, a „b” znači dugi prečnik.
Kada zapremina tumora dostigne oko 200 mm<3>, miševi sa prosečnom vrednošću su odabrani i grupisani prema zapremini tumora. Zatim su miševi tretirani PBS (kontrola vehikuluma) ili ADC prikazanim na slikama 21 i 22. Veličina tumora je određivana 2 puta nedeljno u intervalu od 3 do 4 dana tokom eksperimentalnog perioda. Zapremine tumora merene od prvog dana primene do krajnjeg datuma su ucrtane za krivu rasta tumora.
Reprezentativni ADC su testirani jednom injekcijom. Generalno, ADC sa ogrankom (BR) koji sadrži Lys imali su bolju efikasnost od ADC sa BR koji sadrži amid.

Claims (18)

  1. Patentni zahtevi 1. Konjugat ligand-lek, koji sadrži ligand, linker i aktivno sredstvo, koji ima formulu:
    pri čemu: G predstavlja
    A predstavlja antitelo; B predstavlja aktivno sredstvo; W predstavlja -C(O)-, -C(O)NR’-, -C(O)O-, -S(O)2NR’-, -P(O)R"NR’-, -S(O)NR’-, ili -PO2NR’-, gde je u svakom slučaju C(O), S ili P direktno vezan za fenilni prsten, a R’ i R” su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil, (C3-C8)cikloalkil, (C1-C8)alkoksi, (C1-C8)alkiltio, mono- ili di-(C1-C8)alkilamino, (C3-C20)heteroaril, ili (C6-C20)aril; svaki Z nezavisno predstavlja vodonik, (C1-C8)alkil, ili grupu koja povlači elektrone (kao što je amid, karboksilna kiselina, estar karboksilne kiseline, halogen, cijano ili nitro), (C1-C8)alkil, halogen, cijano ili nitro; n je ceo broj od 1 do 3; m je 0 ili 1; L je linker koji kovalentno vezuje A sa W, pri čemu linker sadrži peptid koji sadrži najmanje jednu hidrofilnu amino-kiselinu; R1i R2su svaki nezavisno vodonik, (C1-C8)alkil ili (C3-C8)cikloalkil-, ili R1i R2uzeti zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju (C3-C8)cikloalkilni prsten; R3je vodonik ili karboksilna zaštitna grupa; i svaki R4je nezavisno vodonik ili hidroksilna zaštitna grupa.
  2. 2. Konjugat prema zahtevu 1, pri čemu je antitelo monoklonsko antitelo, poliklonsko antitelo, fragment antitela, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)2, Fv, jednolančani Fv („scFv”), dijatelo, linearno antitelo, bispecifično antitelo, multispecifično antitelo, himerno antitelo, humanizovano antitelo, humano antitelo ili fuzioni protein koji sadrži deo antitela koji se vezuje za antigen.
  3. 3. Konjugat prema zahtevu 1, pri čemu je antitelo muromonab-CD3 abciksimab, rituksimab, daklizumab, palivizumab, infliksimab, trastuzumab, etanercept, baziliksimab, gemtuzumab, alemtuzumab, ibrituzumab, adalimumab, alefacept, omalizumab, efalizumab, tositumomab, bevacizumab, natalizumab, ranibizumab, ekulizumab, rilonacept, certolizumab, romiplostim, AMG-531, golimumab, ustekinumab, ABT-874, belatacept, belimumab, atacicept, anti-CD20 antitelo, kanakinumab, tocilizumab, atlizumab, mepolizumab, pertuzumab, HuMax CD20, tremelimumab, ticilimumab, ipilimumab, IDEC-114, inotuzumab, aflibercept, HuMax-CD4, teplizumab, oteliksizumab, katumaksomab, anti-EpCAM antitelo IGN101, adekatumomab, oregovomab, dinutuksimab, girentuksimab, denosumab, bapineuzumab, motavizumab, efumgumab, raksibakumab, LY2469298 ili veltuzumab.
  4. 4. Konjugat prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu su R3i R4svaki vodonik.
  5. 5. Konjugat prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu W je -C(O)NR’-, gde je C(O) vezan za fenilni prsten, a NR’ je vezan za L.
  6. 6. Konjugat prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu linker sadrži alkilen koji ima 1 do 100 atoma ugljenika, i bilo koji: alkilen uključuje najmanje jednu nezasićenu vezu; alkilen uključuje najmanje jedan heteroarilen; atom ugljenika alkilena je zamenjen sa jednim ili više heteroatoma izabranih iz azota (N), kiseonika (O) i sumpora (S); ili alkilen je dalje supstituisan sa jednim ili više alkila koji imaju 1 do 20 atoma ugljenika.
  7. 7. Konjugat prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu peptid sadrži alanin, aspartat, asparagin, glutamat, glutamin, glicin, lizin, ornitin, prolin, serin ili treonin.
  8. 8. Konjugat prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu peptid sadrži aspartat ili glutamat.
  9. 9. Konjugat prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu: linker je kovalentno vezan za ligand tioetarskom vezom, a tioetarska veza sadrži atom sumpora cisteina liganda, ligand sadrži obrazac amino-kiseline koji je prepoznat od strane izoprenoid transferaze; i tioetarska veza sadrži atom sumpora cisteina obrasca amino-kiseline.
  10. 10. Konjugat prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu linker sadrži najmanje jednu izoprenilnu jedinicu.
  11. 11. Konjugat prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu linker sadrži jedinicu veze predstavljenu sa -(CH2)r(V(CH2)p)q-, -((CH2)pV)q-, -(CH2)r(V(CH2)p)qY-, -((CH2)pV)q(CH2)r-, -Y(((CH2)pV)q- ili -(CH2)r(V(CH2)p)qYCH2-, pri čemu: r je ceo broj od 0 do 10; p je ceo broj od 1 do 10; q je ceo broj od 1 do 20; V i Y su svaki nezavisno jednostruka veza, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, - NR23C(O)-, -NR24SO2- ili -SO2NR25-; i R21do R25su svaki nezavisno vodonik, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkil(C6-C20)aril ili (C1-C6)alkil(C3-C20)heteroaril.
  12. 12. Konjugat prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu linker sadrži vezujuću jedinicu koja je predstavljena bilo kojom od formula A, B, C ili D:
    pri čemu: L1je jednostruka veza ili alkilen koji ima 1 do 30 atoma ugljenika; R11je vodonik ili alkil sa 1 do 10 atoma ugljenika; i L2je alkilen koji ima 1 do 30 atoma ugljenika.
  13. 13. Konjugat prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu linker sadrži:
    pri čemu V je jednostruka veza, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2-, ili -SO2NR25-, poželjno -O-; R21do R25su svaki nezavisno vodonik, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkil(C6-C20)aril ili (C1-C6)alkil(C3-C20)heteroaril; r je ceo broj od 1 do 10, poželjno 2 ili 3; p je ceo broj od 0 do 10, poželjno 1 ili 2; q je ceo broj od 1 do 20, poželjno 1 do 6; i L1je jednostruka veza.
  14. 14. Konjugat prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu je aktivno sredstvo izabrano između: (a) erlotiniba, bortezomiba, fulvestranta, sutenta, letrozola, imatinib mezilata, PTK787/ZK 222584, oksaliplatina, 5-fluorouracila, leukovorina, rapamicina, lapatiniba, lonafarniba, AG14178, lonafarnib, AG1571, tiotepa, ciklofosfamida, busulfana, improsulfana, piposulfana, benzodopa, karbokvona, meturedopa, uredopa, etilenimina, altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida, trimetilolomelamina, bulatacina, bulatacinona, kamptotecina, topotekana, briostatina, kalistatina, CC-1065, adozelesina, karzelezina, bizelesina, kriptoficina 1, kriptoficina 8, dolastatina, duokarmicina, KW-2189, CB1-TM1, eleuterobina, pankratistatina, sarkodiktiina, spongistatina, hlorambucila, hlornafazina, holofosfamida, estramustina, ifosfamida, mehloretamina, melfalana, novembicina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, uracil senfa, karmustina, hlorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimnustina, kaliheamicina, kaliheamicina gamma 1, kaliheamicina omega 1, dinemicina, dinemicina A, klodronata, esperamicina, neokarzinostatin hromofora, aklacinomizina, aktinomicina, antrmicina, azaserina, bleomicina, kaktinomicina, karabicina, karninomicina, karzinofilina, hromomicina, daktinomicina, daunorubicina, detorubucina, 6-dijazo-5-okso-L-norleucina, doksorubicina, morfolino-doksorubicina, cianomorfolino-doksorubicina, 2-pirolino-doksorubucina, lipozomalnog doksorubicina, dezoksidoksorubicina, epirubicina, ezorubicina, marcelomicina, mitomicina C, mikofenolne kiseline, nogalamicina, olivomicina, peplomicina, potfiromicina, puromicina, kvelamicina, rodorubicina, streptomigrina, streptozocina, tubercidina, ubenimeksa, zinostatina, zorubicina, 5-fluorouracila, denopterina, metotreksata, pteropterina, trimetreksata, fludarabina, 6-merkaptopurina, tiamiprina, tiguanina, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, karmofura, citarabina, didezoksiuridina, doksifluridina, enocitabina, floksuridina, kalusterona, dromostanolon propionata, epitiostanola, mepitiostana, testolactona, aminoglutetimida, mitotana, trilostana, folinske kiseline, aceglatona, aldofosfamid glicozida, aminolevulinske kiseline, eniluracila, amsakrina, bestrabucila, bizantrena, edatraksata, defofamina, demekolcina, dijazikvona, elfornitina, eliptinijum acetata, etoglucida, galijum nitrata, hidroksiuree, lentinana, lonidainina, maitansina, ansamitocina, mitogvazona, mitoksantrona, mopidanmola, nitraerina, pentostatina, fenameta, pirarubicina, losoksantrona, 2-etilhidrazida, prokarbazina, polisaharida-k, razoksana, rizoksina, sizofirana, spirogermanijuma, tenuazonske kiseline, triazikvona, 2,2’,2"-trihlorotrietilamina, T-2 toksina, verakurina A, roridina A, anguidina, uretana, vindezina, dakarbazina, manomustina, mitobronitola, mitolaktola, pipobromana, gacitozina, arabinozida, ciklofosfamida, tiotepa, paklitaksela, albumin-projektovane formulacije nanočestica paklitaksela, doksetaksela, hlorambucila, gemcitabina, 6-tiogvanina, merkaptopurina, cisplatina, karboplatina, vinblastina, platine, etopozida, ifosfamida, mitoksantrona, vinkristina, vinorelbina, novantrona, tenipozida, edatreksata, daunomicina, aminopterina, kseloda, ibandronata, CPT-11, inhibitora topoizomeraze RFS 2000, difluorometilornitina, retinoinske kiseline, kapecitabina ili farmaceutski prihvatljivih soli, solvata ili kiselina bilo kog od prethodno navedenih; (b) monokina, limfokina, tradicionalnih polipeptidnih hormona, paratiroidnog hormona, tiroksina, relaksina, prorelaksina, glikoproteinskog hormona, hormona stimulacije folikula, hormona stimulacije štitne žlezde, luteinizirajućeg hormona, faktora rasta jetre, faktora rasta fibroblasta, faktora rasta fibroblasta, prolaktina, prolaktinskog faktora nekroze tumora-α, faktora nekroze tumora-β, Antimilerijanskog hormona, peptida povezanog sa gonadotropinom miša, inhibina, aktivina, faktora rasta vaskularnog endotela, trombopoetina, eritropoetina, osteoinduktivnog faktora, interferona, interferonaα, interferona-γ, faktora stimulacije kolonija („CSF”), makrofaga-CSF, granulocitamakrofaga-CSF, granulocita-CSF, interleukina IL-1, IL-1 α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, faktora nekroze tumora, TNF-α, TNF -β, polipeptidnog faktora, LIF, kit liganda, ili kombinacije bilo kog od prethodno navedenih; (c) toksina difterije, botulinskog toksina, toksina tetanusa, toksina dizenterije, toksina kolere, amanitina, α-amanitina, derivata amanitina, pirolobenzodijazepina, derivata pirolobenzodijazepina, tetrodotoksina, brevetoksina, cigvatoksina, ricina, AM toksina, auristatina (npr. auristatina E (MMAE), ili auristatina F (MMAF)), tubulizina, geldanamicina, majtansinoida, kaliheamicina, daunomicina, doksorubicina, metotreksata, vindezina, SG2285, dolastatina, analoga dolastatina, kriptoficina, kamptotecina, derivata kamptotecinita (SN-38), rizoksina, derivata rizoksina, CC-1065, analoga ili derivata CC-1065, duokarmicina, endiinskog antibiotika, esperamicina, epotilona, azonafida, aplidin, toksoida ili kombinacije bilo kog od prethodno navedenih; (d) afinitetnog liganda, pri čemu je afinitetni ligand supstrat, inhibitor, stimulišuće sredstvo, neurotransmiter, radioizotop, ili kombinacije bilo kog od prethodno navedenih; (e) radioaktivne oznake,<32>P,<35>S, fluorescentne boje, elektronski gustog reagensa, enzima, biotina, streptavidina, dioksigenina, haptena, imunogenog proteina, molekula nukleinske kiseline sa sekvencom koja je komplementarna cilju, ili kombinacije bilo kog od prethodno navedenih; (f) imunomodulatornog jedinjenja, sredstva protiv raka, antivirusnog sredstva, antibakterijskog sredstva, sredstva protiv gljivica i sredstva protiv parazita, ili kombinacije bilo kog od prethodno navedenih; (g) tamoksifena, raloksifena, droloksifena, 4-hidroksitamoksifena, trioksifena, keoksifena, LY117018, onapristona ili toremifena; (h) 4(5)-imidazola, aminoglutetimida, megestrol acetata, eksemestana, letrozola ili anastrozola; (i) flutamida, nilutamida, bikalutamida, leuprolida, goserelina ili troksacitabina; (j) inhibitora aromataze; (k) inhibitora protein kinaze; i (l) inhibitora lipidne kinaze.
  15. 15. Konjugat prema bilo kom od zahteva 1-13, pri čemu je aktivno sredstvo izabrano između antisens oligonukleotida, ribozima, vakcine i anti-angiogenog sredstva.
  16. 16. Farmaceutska kompozicija koja sadrži konjugat prema bilo kom od prethodnih zahteva i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
  17. 17. Konjugat prema bilo kom od zahteva 1-15, za upotrebu u lečenju raka.
  18. 18. Postupak za izradu konjugata ligand-lek prema zahtevu 1, koji obuhvata reakciju biomolekula sa prolekom, pri čemu: biomolekul sadrži ligand i keton ili aldehid; prolek sadrži alkoksiamin; i reakcija proizvodi oksim, čime se kovalentno povezuje ligand sa prolekom.
RS20240697A 2015-11-25 2016-11-23 Konјugati koji sadrže samozapaljive grupe i postupci povezani sa njima RS65660B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562260046P 2015-11-25 2015-11-25
PCT/IB2016/001772 WO2017089890A1 (en) 2015-11-25 2016-11-23 Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto
EP16868091.6A EP3380124B1 (en) 2015-11-25 2016-11-23 Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS65660B1 true RS65660B1 (sr) 2024-07-31

Family

ID=58763083

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20240697A RS65660B1 (sr) 2015-11-25 2016-11-23 Konјugati koji sadrže samozapaljive grupe i postupci povezani sa njima

Country Status (20)

Country Link
US (1) US11413353B2 (sr)
EP (1) EP3380124B1 (sr)
JP (1) JP6949732B2 (sr)
KR (1) KR102847342B1 (sr)
CN (4) CN118105513A (sr)
AU (1) AU2016359230B2 (sr)
CA (1) CA3006242A1 (sr)
DK (1) DK3380124T3 (sr)
ES (1) ES2979090T3 (sr)
FI (1) FI3380124T3 (sr)
HR (1) HRP20240795T1 (sr)
HU (1) HUE067016T2 (sr)
LT (1) LT3380124T (sr)
PL (1) PL3380124T3 (sr)
PT (1) PT3380124T (sr)
RS (1) RS65660B1 (sr)
SI (1) SI3380124T1 (sr)
SM (1) SMT202400223T1 (sr)
TW (1) TWI801332B (sr)
WO (1) WO2017089890A1 (sr)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101847748B1 (ko) 2013-08-22 2018-04-10 소니 주식회사 수용성 형광 또는 유색 염료 및 그의 사용 방법
KR101628872B1 (ko) 2014-05-28 2016-06-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 자가-희생 기를 포함하는 화합물
EP3262055A4 (en) 2015-02-26 2018-09-05 Sony Corporation Water soluble fluorescent or colored dyes comprising conjugating groups
WO2017051249A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-cd19 antibody drug conjugates
WO2017051254A1 (en) * 2015-09-25 2017-03-30 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-egfr antibody drug conjugates
EP3380126A4 (en) 2015-11-25 2019-07-24 LegoChem Biosciences, Inc. ANTIBODY-ACTIVE CONJUGATES WITH BRANCHED LINKERS AND ASSOCIATED METHODS
EP3380124B1 (en) 2015-11-25 2024-04-03 LegoChem Biosciences, Inc. Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto
US11167040B2 (en) 2015-11-25 2021-11-09 Legochem Biosciences, Inc. Conjugates comprising peptide groups and methods related thereto
AU2017240154B2 (en) 2016-04-01 2021-08-12 Sony Group Corporation Ultra bright dimeric or polymeric dyes
RU2753706C2 (ru) 2016-04-06 2021-08-20 Сони Корпорейшн Ультраяркие димерные или полимерные красители со спейсерными линкерными группами
KR102526802B1 (ko) 2016-05-11 2023-05-02 소니그룹주식회사 초고명도 이량체성 또는 중합체성 염료
EP3491071A1 (en) 2016-07-29 2019-06-05 Sony Corporation Ultra bright dimeric or polymeric dyes and methods for preparation of the same
WO2018053004A2 (en) 2016-09-13 2018-03-22 Allergan, Inc. Non-protein clostridial toxin compositions
CN109790171B (zh) 2017-03-29 2022-07-26 乐高化学生物科学股份有限公司 吡咯并苯并二氮杂二聚物前体及其配体-连接体缀合化合物
CN111065623B9 (zh) * 2017-05-24 2024-10-25 德克萨斯州大学系统董事会 用于抗体药物缀合物的接头
JP7403744B2 (ja) 2017-10-05 2023-12-25 ソニーグループ株式会社 プログラマブルな樹枝状薬物
JP7551056B2 (ja) 2017-10-05 2024-09-17 ソニーグループ株式会社 プログラマブルなポリマー薬物
US11931419B2 (en) 2017-11-16 2024-03-19 Sony Group Corporation Programmable polymeric drugs
WO2019140128A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Sony Corporation Phosphoalkyl polymers comprising biologically active compounds
CN111565756A (zh) 2018-01-12 2020-08-21 索尼公司 包含生物活性化合物的具有刚性间隔基团的聚合物
JP2021510698A (ja) 2018-01-12 2021-04-30 ソニー株式会社 生物学的に活性な化合物を含むホスホアルキルリボースポリマー
KR102742386B1 (ko) 2018-03-19 2024-12-16 소니그룹주식회사 형광 신호 향상을 위한 2가 금속의 사용
WO2019182766A1 (en) 2018-03-21 2019-09-26 Sony Corporation Polymeric tandem dyes with linker groups
WO2019183270A1 (en) * 2018-03-23 2019-09-26 The Regents Of The University Of California Puromycin-based probes and methods of use thereof
US11827703B2 (en) * 2018-05-09 2023-11-28 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-CD19 antibody drug conjugates
US12006438B2 (en) 2018-06-27 2024-06-11 Sony Group Corporation Polymeric dyes with linker groups comprising deoxyribose
EP3820944A1 (en) 2018-07-13 2021-05-19 Sony Corporation Polymeric dyes having a backbone comprising organophosphate units
KR20200084802A (ko) * 2019-01-03 2020-07-13 주식회사 레고켐 바이오사이언스 안전성이 향상된 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물 및 이의 용도
JP7542266B2 (ja) * 2019-01-03 2024-08-30 リガケム バイオサイエンシズ， インク． 安定性が向上したピロロベンゾジアゼピン二量体化合物及びその用途
JP2022530482A (ja) * 2019-05-02 2022-06-29 レゴケム バイオサイエンシズ， インク． トリス構造を有するリンカーを含むリガンド―薬物複合体
KR102501394B1 (ko) * 2019-05-02 2023-02-21 주식회사 레고켐 바이오사이언스 트리스 구조를 가지는 링커를 포함하는 리간드-약물 접합체
KR20210028544A (ko) 2019-09-04 2021-03-12 주식회사 레고켐 바이오사이언스 인간 ror1에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
KR102486779B1 (ko) 2019-09-26 2023-01-12 소니그룹주식회사 링커 그룹을 갖는 중합체성 탠덤 염료
AR120218A1 (es) * 2019-10-15 2022-02-02 Heidelberg Pharma Res Gmbh Conjugados de amatoxina y anticuerpo específico de linfocitos b
KR102326738B1 (ko) * 2019-12-12 2021-11-15 고려대학교 산학협력단 다중약물내성 극복을 위한 항암 약물전구체
BR112022013008A2 (pt) 2019-12-31 2022-09-06 Legochem Biosciences Inc Composto derivado de pirrolobenzodiazepina, conjugado de derivado-ligante de pirrolobenzodiazepina, e, composição farmacêutica e método para prevenção ou tratamento de doença proliferativa
BR112022014391A2 (pt) * 2020-01-22 2022-09-13 Medimmune Ltd Compostos e conjugados dos mesmos
AU2021287998B2 (en) 2020-06-11 2026-03-12 Benaroya Research Institute At Virginia Mason Methods and compositions for preventing type 1 diabetes
EP4256078A1 (en) 2020-12-07 2023-10-11 Sony Group Corporation Spacing linker group design for brightness enhancement in dimeric or polymeric dyes
CN112679448B (zh) * 2020-12-31 2022-08-19 苏州昊帆生物股份有限公司 N-(2-氨基乙基)吗啉的制备方法
EP4301415A4 (en) * 2021-03-03 2026-03-18 Scherer Technologies Llc R P Branched-Cell Networks for Antibody-Drug Conjugates and Their Methods of Use
US20250326855A1 (en) 2021-03-05 2025-10-23 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses
WO2022211508A1 (ko) * 2021-03-30 2022-10-06 주식회사 레고켐바이오사이언스 인간 cldn18.2에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
AU2022283271A1 (en) 2021-05-24 2023-12-07 Provention Bio, Inc. Methods for treating type 1 diabetes
CA3228178A1 (en) 2021-08-05 2023-02-09 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-muc4 antibodies and their uses
CN113636931B (zh) * 2021-08-05 2024-02-13 康龙化成(宁波)科技发展有限公司 基因编码化合物库起始头片段化合物及其在基因编码化合物库合成上的应用
CN113979889A (zh) * 2021-11-09 2022-01-28 西安康福诺生物科技有限公司 一种双官能化聚乙二醇基胺的合成方法
GB202203070D0 (en) 2022-03-04 2022-04-20 Iksuda Therapeutics Ltd Anti-canag antibody conjugate
GB202210407D0 (en) 2022-07-15 2022-08-31 Iksuda Therapeutics Ltd Folate receptor targeting antibody-drug conjugates
KR20240077919A (ko) * 2022-11-25 2024-06-03 주식회사 레고켐 바이오사이언스 링커-약물 접합체 제조방법
WO2024173384A1 (en) 2023-02-14 2024-08-22 Bolt Biotherapeutics, Inc. Aza-benzazepine immunoconjugates, and uses thereof
GB202313214D0 (en) 2023-08-30 2023-10-11 Iksuda Therapeutics Ltd Co-administration of antibody-drug conjugate
CN119909194A (zh) * 2024-01-16 2025-05-02 复星医药产业发展(深圳)有限公司 一种含抗体药物偶联物的药物组合物及其应用
CN118754934B (zh) * 2024-06-05 2025-02-07 浙江新码生物医药有限公司 一种用于制备药物偶联物的毒素衍生物
CN118846111B (zh) * 2024-06-27 2025-12-26 浙江新码生物医药有限公司 一种抗trop2抗体-药物偶联物及其制备方法和用途
WO2026050213A1 (en) 2024-08-27 2026-03-05 Usbolt Biotherapeutics, Inc. Tlr agonist immunoconjugates and uses thereof

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5112739A (en) * 1988-08-02 1992-05-12 Polaroid Corporation Enzyme controlled release system
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
DE69133476T2 (de) 1990-08-29 2006-01-05 GenPharm International, Inc., Palo Alto Transgene Mäuse fähig zur Produktion heterologer Antikörper
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
DE614989T1 (de) 1993-02-17 1995-09-28 Morphosys Proteinoptimierung Verfahren für in vivo Selektion von Ligandenbindende Proteine.
DE19512484A1 (de) 1995-04-04 1996-10-17 Bayer Ag Kohlenhydratmodifizierte Cytostatika
DE19544393A1 (de) 1995-11-15 1997-05-22 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Synergistische herbizide Mischungen
ES2257756T3 (es) 1996-03-12 2006-08-01 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Nuevos profarmacos para la terapia de tumores y enfermedades inflamatorias.
US6218519B1 (en) 1996-04-12 2001-04-17 Pro-Neuron, Inc. Compounds and methods for the selective treatment of cancer and bacterial infections
AU5159798A (en) 1996-11-05 1998-05-29 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
EP1391213A1 (en) 2002-08-21 2004-02-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for treating cancer using maytansinoid CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
ATE318815T1 (de) 2002-08-22 2006-03-15 Neurosearch As Verfahren zur herstellung von enantiomeren von indol-2,3-dion-3-oximderivaten
JP2006510626A (ja) 2002-12-05 2006-03-30 シエーリング アクチエンゲゼルシャフト 増殖疾患の処理における部位特異的供給のためのエポチロン類似体
NZ583292A (en) 2003-11-06 2012-03-30 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
AR048098A1 (es) 2004-03-15 2006-03-29 Wyeth Corp Conjugados de caliqueamicina
MX2007002826A (es) 2004-09-10 2007-04-27 Wyeth Corp Anticuerpos anti-5t4 humanizados y conjugados de anticuerpos anti-5t4/caliqueamicina.
PL1912671T3 (pl) 2005-07-18 2018-02-28 Seattle Genetics, Inc. Koniugaty beta-glukuronid-linker-lek
CN101287500A (zh) 2005-08-19 2008-10-15 恩多塞特公司 多药物配体缀合物
JP2010503706A (ja) 2006-09-15 2010-02-04 エンゾン ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド リジン系ポリマーリンカー
AU2007318483B2 (en) 2006-11-10 2013-05-02 Livtech Inc. Anti-human Dlk-1 antibody showing anti-tumor activity in vivo
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
ATE543826T1 (de) 2007-08-01 2012-02-15 Council Scient Ind Res Als selektive antitumormittel geeignete pyrroloä2,1-cüä1,4übenzodiazepinglycosid-prodru s
US9316646B2 (en) 2009-04-23 2016-04-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-human ROR1 antibodies
WO2011066418A1 (en) 2009-11-25 2011-06-03 Academia Sinica The tumor-selective anti-cancer prodrug bqc-g
WO2011130613A1 (en) * 2010-04-15 2011-10-20 Seattle Genetics, Inc. Targeted pyrrolobenzodiazapine conjugates
FR2960153B1 (fr) 2010-05-20 2012-08-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux bras autoreactifs et prodrogues les comprenant
US9591882B2 (en) 2010-08-05 2017-03-14 Robert LaGrand Duffin Absorbent sleeve
US9228023B2 (en) 2010-10-01 2016-01-05 Oxford Biotherapeutics Ltd. Anti-ROR1 antibodies and methods of use for treatment of cancer
KR20120107741A (ko) 2011-03-22 2012-10-04 한국생명공학연구원 패혈증 단백질 치료제의 효능 분석 및 스크리닝 방법
KR101461706B1 (ko) 2011-04-04 2014-11-18 한국생명공학연구원 Ｄｌｋ１ 세포 외 수용성 도메인을 포함하는 액티빈 수용체 타입 2ｂ 억제제
CN103502990A (zh) 2011-04-29 2014-01-08 惠普发展公司，有限责任合伙企业 用于事件的内存中处理的系统和方法
HRP20191586T1 (hr) * 2011-05-08 2019-12-13 Legochem Biosciences Inc Konjugati agensa aktivni na proteine i postupak pripreme istih
CN108164551A (zh) 2011-10-14 2018-06-15 西雅图基因公司 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物
EA026827B1 (ru) 2011-10-14 2017-05-31 Медимьюн Лимитед Пирролбензодиазепины и их конъюгаты
WO2013103707A1 (en) 2012-01-03 2013-07-11 Invictus Oncology Pvt. Ltd. Ligand-targeted molecules and methods thereof
US9562049B2 (en) 2012-12-21 2017-02-07 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN110433139A (zh) 2013-03-15 2019-11-12 艾伯维德国有限责任两合公司 抗egfr抗体药物偶联物制剂
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
WO2015052533A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3057585B1 (en) 2013-10-15 2020-07-22 Seattle Genetics, Inc. Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
CA2928087A1 (en) 2013-11-26 2015-06-04 Novartis Ag Methods for oxime conjugation to ketone-modified polypeptides
KR20220127364A (ko) 2013-12-19 2022-09-19 씨젠 인크. 표적화된-약물 컨쥬게이트와 함께 사용되는 메틸렌 카바메이트 링커
EP2913064A1 (en) 2014-02-26 2015-09-02 celares GmbH Branched drug-linker conjugates for the coupling to biological targeting molecules
KR101628872B1 (ko) * 2014-05-28 2016-06-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 자가-희생 기를 포함하는 화합물
TWI751102B (zh) 2014-08-28 2022-01-01 美商奇諾治療有限公司 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體
SI3191502T1 (sl) * 2014-09-11 2021-10-29 Seagen Inc Ciljana dostava zdravilnih snovi, ki vsebujejo terciarne amine
JP2018502839A (ja) 2014-12-09 2018-02-01 アッヴィ・インコーポレイテッド Ｂｃｌ−ｘＬ阻害性化合物およびこれを含む抗体薬物コンジュゲート
KR20160080832A (ko) * 2014-12-29 2016-07-08 주식회사 레고켐 바이오사이언스 리피바디 유도체-약물 복합체, 그 제조방법 및 용도
US20160208018A1 (en) 2015-01-16 2016-07-21 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for ror1
SI3250237T1 (sl) 2015-01-30 2021-11-30 Sutro Biopharma, Inc. Derivati hemiasterlina za konjugacijo in terapijo
WO2017051249A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-cd19 antibody drug conjugates
WO2017051254A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-egfr antibody drug conjugates
EP3362479A4 (en) 2015-10-13 2019-05-15 Eureka Therapeutics, Inc. FOR HUMANESE CD19 SPECIFIC ANTIBODY AGENTS AND USES THEREOF
EP3380124B1 (en) 2015-11-25 2024-04-03 LegoChem Biosciences, Inc. Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto
EP3380126A4 (en) 2015-11-25 2019-07-24 LegoChem Biosciences, Inc. ANTIBODY-ACTIVE CONJUGATES WITH BRANCHED LINKERS AND ASSOCIATED METHODS
US11167040B2 (en) 2015-11-25 2021-11-09 Legochem Biosciences, Inc. Conjugates comprising peptide groups and methods related thereto
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
AU2017353936A1 (en) 2016-11-04 2019-05-02 Novimmune Sa Anti-CD19 antibodies and methods of use thereof
CN109790171B (zh) 2017-03-29 2022-07-26 乐高化学生物科学股份有限公司 吡咯并苯并二氮杂二聚物前体及其配体-连接体缀合化合物
IL324994A (en) 2017-06-23 2026-01-01 Velosbio Inc ROR1 antibody immunoconjugates
KR20190018400A (ko) 2017-08-14 2019-02-22 주식회사 레고켐 바이오사이언스 EGFRvIII에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체
US11306141B2 (en) 2017-09-08 2022-04-19 Y-Biologics Inc. Antibody against human DLK1 and use thereof
US11827703B2 (en) 2018-05-09 2023-11-28 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-CD19 antibody drug conjugates
WO2019225777A1 (ko) 2018-05-23 2019-11-28 에이비엘바이오 주식회사 항-ror1 항체 및 그 용도
US20220339291A1 (en) 2019-03-06 2022-10-27 Legochem Biosciences, Inc. Antibody-drug conjugates that target dlk1 and uses thereof
KR20210028544A (ko) * 2019-09-04 2021-03-12 주식회사 레고켐 바이오사이언스 인간 ror1에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
TW201726174A (zh) 2017-08-01
TWI801332B (zh) 2023-05-11
WO2017089890A1 (en) 2017-06-01
PT3380124T (pt) 2024-04-30
HRP20240795T1 (hr) 2024-09-13
CN118105513A (zh) 2024-05-31
EP3380124A1 (en) 2018-10-03
CN117244076A (zh) 2023-12-19
WO2017089890A8 (en) 2018-07-19
JP6949732B2 (ja) 2021-10-13
DK3380124T3 (da) 2024-06-24
AU2016359230B2 (en) 2020-04-23
SMT202400223T1 (it) 2024-07-09
FI3380124T3 (fi) 2024-05-28
CN112451682A (zh) 2021-03-09
JP2019503980A (ja) 2019-02-14
KR102847342B1 (ko) 2025-08-19
SI3380124T1 (sl) 2024-10-30
CN107847606A (zh) 2018-03-27
EP3380124B1 (en) 2024-04-03
PL3380124T3 (pl) 2024-08-19
EP3380124A4 (en) 2019-06-19
US20200297865A1 (en) 2020-09-24
CA3006242A1 (en) 2017-06-01
KR20180079452A (ko) 2018-07-10
LT3380124T (lt) 2024-06-25
AU2016359230A1 (en) 2018-05-31
US11413353B2 (en) 2022-08-16
ES2979090T3 (es) 2024-09-24
HUE067016T2 (hu) 2024-09-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11975076B2 (en) Antibody-drug conjugates comprising branched linkers and methods related thereto
TWI816638B (zh) 包含肽基之結合物及與其相關之方法
KR102847342B1 (ko) 자기-희생기를 포함하는 접합체 및 이의 제조방법
TWI765864B (zh) 關於抗-cd19抗體藥物共軛物之組合物及方法
TWI787153B (zh) 關於抗-egfr抗體藥物共軛物之組合物及方法
JP2024160336A (ja) トリス構造を有するリンカーを含むリガンド―薬物複合体
KR102501394B1 (ko) 트리스 구조를 가지는 링커를 포함하는 리간드-약물 접합체
HK1261957A1 (en) Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto
HK1261957B (en) Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto