RS66491B1 - Anti-fcrn antitela - Google Patents

Anti-fcrn antitela

Info

Publication number
RS66491B1
RS66491B1 RS20250136A RSP20250136A RS66491B1 RS 66491 B1 RS66491 B1 RS 66491B1 RS 20250136 A RS20250136 A RS 20250136A RS P20250136 A RSP20250136 A RS P20250136A RS 66491 B1 RS66491 B1 RS 66491B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
ser
gly
val
leu
thr
Prior art date
Application number
RS20250136A
Other languages
English (en)
Inventor
Helene Margaret Finney
Alastair David Griffiths Lawson
Stevan Graham Shaw
Bryan John Smith
Kerry Louise Tyson
Lara Kevorkian
Christoph Meier
Paul Alan Atherfold
Kaushik Sarkar
Original Assignee
UCB Biopharma SRL
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46458733&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS66491(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by UCB Biopharma SRL filed Critical UCB Biopharma SRL
Publication of RS66491B1 publication Critical patent/RS66491B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G01N33/6857—Antibody fragments
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70535—Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64 (CD2314/705F)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/02—Screening involving studying the effect of compounds C on the interaction between interacting molecules A and B (e.g. A = enzyme and B = substrate for A, or A = receptor and B = ligand for the receptor)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
    • G01N2800/101—Diffuse connective tissue disease, e.g. Sjögren, Wegener's granulomatosis
    • G01N2800/104—Lupus erythematosus [SLE]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/24—Immunology or allergic disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
    • Y10S530/809—Fused cells, e.g. hybridoma

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Rehabilitation Therapy (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Neurology (AREA)

Description

Opis pronalaska
[0001] Opis se odnosi na antitela specifična za FcRn, formulacije koje iste sadrže, upotrebu svakog od njih u terapiji, procese za ekspresiju i, po izboru, formulisanje navedenog antitela, DNK koja kodira antitela i domaćine koji sadrže navedenu DNK.
[0002] FcRn je nekovalentni kompleks α lanca membranskog proteina FcRn i β2 mikroglobulina (β2M). Kod odraslih sisara, FcRn ima klјučnu ulogu u održavanju nivoa antitela u serumu, delovanjem kao receptor koji vezuje i spašava antitela IgG izotipa. IgG molekuli se endocitozom preuzimaju u endotelne ćelije i zatim se, ukoliko se vežu za FcRn, recikliraju transcitozom napolje, u, na primer, cirkulaciju. Nasuprot tome, IgG molekuli koji se ne vežu za FcRn ulaze u ćelije i cilјano se transportuju u lizozomski put gde se degraduju. Varijantu IgG1 u kojoj je His435 mutiran u alanin, karakteriše selektivan gubitak vezivanja za FcRn i značajno smanjen poluživot u serumu (Firan i saradnici, 2001, International Immunology 13:993).
[0003] Postavljena je hipoteza da je FcRn potencijalan terapijski cilјni molekul za određene autoimune poremećaje koji su, barem delimično, prouzrokovani autoantitelima. Trenutno, tretman za određene takve poremećaje uklјučuje plazmaferezu. Plazmafereza se ponekad koristi zajedno sa imunosupresivnom terapijom za dugoročnu kontrolu oboljenja. Izmena plazme nudi najbrži kratkoročni odgovor u cilju uklanjanja štetnih autoantitela. Ipak, može biti poželјno i da se suprimira proizvodnja autoantitela od strane imunog sistema, na primer, upotrebom lekova kao što su prednizon, ciklofosfamid, ciklosporin, mikofenolat mofetil, rituksimab ili njihove smeše.
[0004] Primeri bolesti koje mogu biti lečeni plazmaferezom uklјučuju: Gilen-Bareov sindrom; hroničnu inflamatornu demijelinizacionu polineuropatiju; Gudpastureov sindrom; sindrome hiperviskoznosti; krioglobulinemiju; paraproteinemiju; Valdenstromovu makroglobulinemiju; mijasteniju gravis; trombotičnu trombocitopeničnu purpuru (TTP)/hemolitički uremični sindrom; Vegenerovu granulomatozu; Lamber-Itonov sindrom; sindrom antifosfolipidnog antitela (APS ili APLS); mikroskopski polangiitis; rekurentne fokalne i segmentne glomeruloskleroze u transplantiranom bubregu; HELLP sindrom; PANDAS sindrom; Refsumovu bolest; Behčetov sindrom; neuropatiju povezanu sa HIV-om; Gravesovu bolest kod odojčadi i novorođenčadi; pemfigus vulgaris; multiplu sklerozu, rabdomiolizu i aloimune bolesti.
[0005] Plazmafereza se ponekad upotrebljava kao terapija spasa, za uklanjanje terapeutika koji sadrže Fc, na primer, u hitnim slučajevima, da bi se smanjili ozbiljni sporedni efekti.
[0006] Iako je plazmafereza od pomoći u određenim medicinskim stanjima, postoje potencijalni rizici i komplikacije koji su povezani sa terapijom. Ubacivanje prilično velikog intravenskog katetera može dovesti do krvarenja, punkture pluća (u zavisnosti od mesta umetanja katetera), a ukoliko je kateter ostavlјen predugo, može doći i do infekcije i/ili oštećenja vena, što dalje ograničava mogućnost ponavljanja procedure.
[0007] Proceduru karakterišu i dodatne komplikacije koje su njom povezane, na primer, da kada je krv pacijenta van organizma i prolazi kroz instrument za plazmaferezu, ona ima tendenciju da se zgruša. Da bi se smanjila ova tendencija, u uobičajnom protokolu se, prilikom prolaska krvi kroz kružni sistem, infuzijom primenjuje i citrat. Citrat vezuje kalcijum u krvi, a kalcijum je neophodan za zgrušavanje krvi. Citrat je veoma efikasan u sprečavanju zgrušavanja krvi; međutim, njegova upotreba može dovesti do po život opasno niskih nivoa kalcijuma. Navedeno može biti detekovano upotrebom Chvostek-ovog znaka ili Trousseau-ovog znaka. Da bi se sprečila ovakva komplikacija, kalcijum se takođe primenjuje infuzijom, intravenski, dok se pacijent podvrgava plazmaferezi; dodatno, kalcijum može biti dat i u vidu oralnog suplementa.
[0008] Druge komplikacije procedure uklјučuju: hipotenziju; potencijalno izlaganje krvnim proizvodima, sa rizikom od reakcija na transfuziju ili na transfuzijom prenosiva oboljenja, supresiju imunog sistema pacijenta i krvarenje ili hematom usled postavlјanja igle.
[0009] Pored navedenog, medicinski centri koji obezbeđuju plazmaferezu su ograničenog broja i procedura je veoma skupa.
[0010] Alternativa plazmaferezi je intravenski imunoglobulin (IVIG), krvni proizvod koji sadrži objedinjene poliklonske IgG molekule ekstrahovane iz plazme više od hilјadu donora krvi. Terapija se primenjuje intravenski i traje u regionu od 2 nedelјe do 3 meseca.
[0011] Komplikacije IVIG tretmana uklјučuju glavobolјe, dermatitis, virusnu infekciju usled kontaminacije terapijskog proizvoda, na primer, HIV-om ili hepatitis, kao i plućni edem, alergijske reakcije, akutnu insuficijenciju bubrega, vensku trombozu i aseptični meningitis.
[0012] Postoji stoga značajna nezadovoljena potreba za terapijama za autoimune poremećaje koje su manje invazivne i koje pacijente manje izlažu medicinskim komplikacijama.
[0013] Postoji takođe značajna nezadovoljena potreba za terapijama za imunološke poremećaje i/ili autoimune poremećaje koje su manje invazivne i koje pacijente manje izlažu medicinskim komplikacijama.
[0014] Shodno navedenom, sredstva koja blokiraju ili redukuju vezivanje IgG-a za FcRn mogu biti korisna u lečenju ili prevenciji takvih autoimunih i inflamatornih oboljenja. Anti-FcRn antitela su prethodno opisana u WO2009/131702, WO2007/087289, WO2006/118772, US2007/092507 A1, WO/2005/013912 u Christianson i saradnici ("Monoclonal antibodies directed against human FcRn and their applications", MABS, (2012), tom 4, br.2) i Getman et al., (“Pharmacokinetic effects of 4C9, an anti-FcRn antibody, in rats: implications for the use of FcRn inhibitors for the treatment of humoral autoimmune and alloimmune conditions”, Journal of Pharmaceutical sciences, (2005), vol.94, no.4). Dodatno, nanotela specifična za FcRn su ranije opisana u WO2009/080764.
[0015] Ostaje, međutim, potreba za pobolјšanim anti-FcRn antitelima.
Kratko izlaganje suštine pronalaska
[0016] U jednom aspektu pronalaska obezbeđeno je anti-FcRn antitelo ili njegov fragment koji vezuje FcRn, koji sadrži teški lanca ili fragment teškog lanca koji ima varjabilni region, pri čemu taj varjabilni region sadrži tri CDR u kojima CDR H1 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 1; CDR H2 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 2; i CDR H3 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 3, i gde antitelo ili njegov fragment koji se veža za FcRn-dalje sadrži laki lanac ili fragment lakog lanca koji ima varjabilni region, gde pomenuti varjabilni region sadrži tri CDR-a, gde CDR L1 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 4, CDR L2 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 5 i CDR L3 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 6.
[0017] Antitela prema opisu blokiraju vezivanje IgG-a za FcRn i smatra se da su korisna u smanjenju jedne ili više bioloških funkcija FcRn, uklјučujući smanjenje poluživota cirkulišućih antitela. Navedeno može biti korisno time što omogućava pacijentu da brže izbaci antitela, kao što su autoantitela.
[0018] Važno je da su antitela predmetnog pronalaska sposobna da vezuju humani FcRn i na pH 6 i na pH 7,4, sa uporedivim i visokim afinitetom vezivanja. Prednost je zapravo što su antitela sposobna da nastave da se vezuju za FcRn čak i unutar endozoma, čime se maksimalno povećava blokiranje vezivanja FcRn za IgG; pogledati Sliku 10 radi ilustracije mehanizma.
[0019] Antitela ili vezujući fragmenti u skladu sa predmetnim pronalaskom sadrže CDR sekvence iz SEQ ID NO: 1 do 6, pri čemu CDR H1 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 1, CDR H2 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 2, CDR H3 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 3, CDR L1 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 4, CDR L2 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 5, a CDR L3 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 6.
[0020] Opis se takođe proširuje i na polinukleotid, kao što je DNK, koji kodira antitelo ili fragment kao što je ovde opisano.
[0021] Takođe je obezbeđena ćelija domaćin koja sadrži navedeni polinukleotid.
[0022] Ovde su obezbeđeni i postupci ekspresije antitela ili fragmenta, kao i postupci konjugacije antitela ili fragmenta sa polimerom, kao što je PEG.
[0023] Predmetni opis se takođe odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže navedena antitela i fragmente.
[0024] Prikazani pronalazak se takođe odnosi na antitela ili vezujuće fragmente koji za upotrebu u postupku za lečenje koje obuhvata davanje terapeutski efikasne količine antitela, fragmenta ili kompozicije kako je ovde opisano.
[0025] Predmetni pronalazak se proširuje i na antitelo, fragment ili kompoziciju u skladu sa predmetnim pronalaskom, za upotrebu u lečenju, naročito u lečenju imunološkog i/ili autoimunog poremećaja.
[0026] Antitela i fragmenti uklanjaju patogeni IgG, što se postiže ubrzavanjem prirodnog mehanizma za katabolizam IgG-a u organizmu.
[0027] Suštinski, antitela i fragmenti predmetnog opisa blokiraju sistem koji reciklira IgG u organizmu.
[0028] Predmetna terapija će verovatno obezbediti terapiju zamene ili suplementacije za određene bolesti u kojima je terapija plazmafereza ili je terapija tipa IVIg, što je povolјno za pacijente.
Detalјan opis pronalaska
[0029] FcRn, kako se ovde koristi, se odnosi na nekovalentan kompleks između alfa lanca humanog IgG receptora, poznatog i kao neonatalni Fc receptor, čija je aminokiselinska sekvenca u UniProt bazi podataka navedena pod brojem P55899, zajedno sa β2 mikroglobulinom (β2M), čija je aminokiselinska sekvenca u UniProt bazi navedena pod brojem P61769.
[0030] Molekul antitela, kako se ovde koristi, se odnosi na antitelo ili njegov vezujući fragment.
[0031] Termin "antitelo", kako se ovde upotrebljava, generalno se odnosi na intaktna (celovita) antitela, tj. ona koja sadrže elemente od dva teška lanca i dva laka lanca. Antitelo može dalje sadržavati dodatne domene za vezivanje, na primer, kao što su oni u molekulu DVD-Ig koji su opisani u WO 2007/024715 ili u takozvanom (FabFv)2Fc koji je opisan u WO2011/030107. Prema tome, antitelo kako se ovde koristi uklјučuje bi, tri ili tetravalentna antitela pune dužine.
[0032] Vezujući fragmenti antitela uključuju jednolančana antitela (tj. teški lanac i laki lanac pune dužine); Fab, modifikovani Fab, Fab’, modifikovani Fab', F(ab’)2, Fv, Fab-Fv, Fab-dsFv, antitela sa jednim domenom (npr. VH ili VL ili VHH), scFv, bi, tri ili tetravalentna antitela, Bis-scFv, dimerna, trimerna ili tetramerna antitela, kao i fragmente koji vezuju epitop iz bilo kog od prethodno navedenog (pogledati na primer, Holliger i Hudson, 2005, Nature Biotech. 23(9): 1126-1136; Adair i Lawson, 2005, Drug Design Reviews - Online 2(3), 209-217). Postupci za kreiranje i proizvodnju ovih fragmenata antitela su dobro poznati u stanju tehnike (pogledati, na primer, Verma i saradnici, 1998, Journal of Immunological Methods, 216, 165-181). Fab-Fv format je prvi put opisan u WO2009/040562, kao i njegove verzije stabilizovane disulfidima, Fab-dsFv je prvi put opisan u WO2010/035012, pogledati takođe ovde Sliku 25. Drugi fragmenti antitela za upotrebu u predmetnom pronalasku uklјučuju Fab i Fab’ fragmente opisane u Međunarodnim patentnim prijavama WO2005/003169, WO2005/003170 i WO2005/003171. Viševalentna antitela mogu karakterisati višestruke specifičnosti, npr. ona mogu biti bispecifična ili monospecifična (pogledati, na primer, WO 92/22583 i WO05/113605). Jedan takav primer drugonavedenog je Tri-Fab (ili TFM) opisan u WO92/22583.
[0033] Tipičan Fab’ molekul sadrži par teških i lakih lanca gde teški lanac sadrži varijabilni region VH, konstantni domen CH1 i prirodni ili modifikovani zglobni region, dok laki lanac sadrži varijabilni region VLi konstantni domen CL.
[0034] Obezbeđen dimer Fab’ u skladu sa predmetnim opisom, za pripremu F(ab')2gde, na primer, dimerizacija može biti izvedena preko zglobnog regiona.
[0035] Antitelo ili njegov vezujući fragment sadrži domen vezivanja koji sadrži 6 CDR sekvenci, tri iz teškog lanca i tri iz lakog lanca. CDR-ovi su unutar uokvirujućeg regiona i zajedno obrazuju varijabilni region. Prema tome, antitelo ili vezujući fragment sadrži vezujući domen koji je specifičan za antigen i koji sadrži varijabilni region lakog lanca i varijabilni region teškog lanca.
[0036] Potrebno je napomenuti da se jedna ili više (na primer, 1, 2, 3 ili 4) aminokiselinskih supstitucija, adicija i/ili delecija mogu uvesti u CDR ili druge sekvence (npr. varijabilne domene) koje su obezbeđene predmetnim opisom, bez značajne izmene sposobnosti antitela da se veže za FcRn. Efekat bilo kojih aminokiselinskih supstitucija, adicija i/ili delecija može lako biti proveren od strane stručnjaka, na primer, upotrebom postupaka koji su ovde opisani, posebno u Primerima, da bi se odredio FcRn.
[0037] U jednoj ili više (na primer, 1, 2, 3 ili 4) aminokiselinskih supstitucija, adicija i/ili delecija može biti uvedena u uokvirujući region koji je upotrebljen u antitelu ili fragmentu obezbeđenom predmetnim pronalaskom, pri čemu je afinitet vezivanja za FcRn zadržan ili povećan.
[0038] Ostaci u varijabilnim domenima antitela su konvencionalno numerisani prema sistemu koji su osmislili Kabat i saradnici. Ovaj sistem je prikazan u publikaciji Kabata i saradnika, 1987, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Department of Health and Human Services, NIH, SAD (u dalјem tekstu: Kabat i saradnici (navedno prethodno)). Navedeni sistem numeracije se koristi u predmetnoj specifikaciji, osim ukoliko nije drugačije naznačeno.
[0039] Oznake ostatka po Kabat-u ne odgovaraju uvek direktno linearnoj numeraciji ostataka aminokiselina. Stvarna linearna aminokiselinska sekvenca može sadržavati manje ili dodatan broj aminokiselina u odnosu na strogu Kabatovu numeraciju koja odgovara skraćivanju, ili inserciji u strukturnu komponentu, bilo uokvirujući region ili region koji određuje komplementarnost (CDR), iz osnovne varijabilne domenske strukture. Tačna Kabatova numeracija ostataka može biti određena za dato antitelo poravnavanjem ostataka homologije u sekvenci antitela sa sekvencom koja je "standardno" numerisana po Kabat-u.
[0040] CDR sekvence varijabilnog domena teškog lanca se nalaze, prema Kabatovom sistemu numeracije, u okviru ostataka 31-35 (CDR-H1), ostataka 50-65 (CDR-H2) i ostataka 95-102 (CDR-H3). Međutim, prema Čotija sistemu (Chothia, C. i Lesk A.M., J. Mol. Biol., 196, 901-917 (1987)), petlјa ekvivalentna CDR-H1 se proteže od ostatka 26 do ostatka 32. Stoga, ukoliko nije drugačije naznačeno, "CDR-H1", kako se ovde koristi, treba da se odnosi na ostatke od 26 do 35, kao što je opisano kombinacijom Kabatovog sistema numerisanja i Čotijine topološke definicije petlje.
[0041] CDR sekvence varijabilnog domena lakog lanca se, prema Kabatovom sistemu numerisanja, nalaze u okviru ostataka 24-34 (CDR-L1), ostataka 50-56 (CDR-L2) i ostataka 89-97 (CDR-L3).
[0042] Antitela i fragmenti predmetnog opisa blokiraju FcRn i na taj način mogu sprečiti njegovo funkcionisanje u recikliranju IgG-a. Blokiranje, kako se ovde koristi, se odnosi na fizičko blokiranje kao što je okluzija receptora, ali će takođe uklјučiti, kada se antitelo ili fragmenti vezuju za epitop koje prouzrokuje, na primer, konformacionu promenu, načine kojima se prirodni ligand više ne vezuje za receptor. Molekuli antitela predmetnog pronalaska se vezuju za FcRn i time smanjuju ili sprečavaju (npr. inhibiraju) vezivanje FcRn za konstantni region IgG-a.
[0043] Antitelo ili njegov fragment kompetitivno vezuju FcRn, tj. u kompeticiji su sa IgG.
[0044] U jednom primeru, antitelo ili njegov vezujući fragment funkcioniše kao kompetitivni inhibitor vezivanja humanog FcRn za humani IgG. U jednom primeru, antitelo ili njegov vezujući fragment se vezuju za mesto vezivanja IgG na FcRn. U jednom primeru, antitelo ili njegov vezujući fragment ne vezuju β2M.
[0045] Antitela za upotrebu u predmetnom pronalasku mogu biti dobijena upotrebom bilo kog pogodnog postupka koji je poznat u stanju tehnike. FcRn polipeptid/protein, uklјučujući i fuzione proteine, ćelije (rekombinantne ili prirodne) koje eksprimiraju polipeptid (kao što su aktivirane T ćelije), mogu biti upotrebljeni za proizvodnju antitela koja specifično prepoznaju FcRn. Polipeptid može biti "zreli" polipeptid ili njegov biološki aktivan fragment ili derivat. Humani protein je registrovan u Swiss-Prot bazi podataka pod brojem P55899. Vanćelijski domen alfa lanca humanog FcRn je obezbeđen kao SEQ ID NO: 94. Sekvenca β2M je obezbeđena kao SEQ ID NO: 95.
[0046] Antigen može biti oblik mutanta FcRn koji je konstruisan tako da predstavlјa FcRn na površini ćelije i tako da postoji mala ili nikakva dinamička obrada kada se FcRn internalizuje u ćeliju što se, na primer, može postići uvođenjem mutacije u citoplazmatski rep alfa lanca FcRn, pri čemu se di-leucin mutira u di-alanin, kao što je opisano u Ober i saradnici, 2001 Int. Immunol.13, 1551-1559.
[0047] Polipeptidi, za upotrebu u imunizaciji domaćina, mogu biti pripremlјeni procesima koji su dobro poznati u stanju tehnike, iz genetički konstruisanih ćelija domaćina koje sadrže ekspresione sisteme, ili polipeptidi mogu biti izdvojeni iz prirodnih bioloških izvora. U predmetnoj prijavi, termin "polipeptidi" uklјučuje peptide, polipeptide i proteine. Ukoliko nije drugačije naznačeno, termini se koriste naizmenično. FcRn polipeptid može, u pojedinim slučajevima, biti deo većeg proteina kao što je fuzioni protein, na primer, može biti fuzionisan sa obeleživačem afiniteta ili sličnim.
[0048] Antitela proizvedena na FcRn polipeptid mogu biti dobijena, gde je neophodna imunizacija životinje, primenom polipeptida životinji, poželјno životinji koja nije čovek, upotrebom dobro poznatih i rutinskih protokola; pogledati, na primer, Handbook of Experimental Immunology, D. M. Weir (ur.), tom 4, Blackwell Scientific Publishers, Oxford, Engleska, 1986). Mnoge toplokrvne životinje, kao što su zečevi, miševi, pacovi, ovce, krave, kamile ili svinje mogu biti imunizovane. Ipak, miševi, zečevi, svinje i pacovi su generalno najpogodniji.
[0049] Monoklonska antitela mogu biti pripremljena bilo kojim postupkom koji je poznat u stanju tehnike, kao što je tehnika hibridoma (Kohler i Milstein, 1975, Nature, 256: 495-497), tehnika trioma, tehnika humanih B-ćelijskih hibridoma (Kozbor i saradnici, 1983, Immunology Today, 4:72) i tehnika EBV-hibridoma (Cole i saradnici, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, str.77-96, Alan R Liss, Inc., 1985).
[0050] Antitela za upotrebu u pronalasku mogu takođe biti generisana upotrebom postupaka dobijanja antitela iz jednog limfocita, kloniranjem i ekspresijom cDNK za varijabilne regione imunoglobulina koja je generisana iz jednog limfocita izabranog za proizvodnju specifičnih antitela pomoću, na primer, postupaka opisanih od strane Babcook J. i saradnika, 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93(15):7843-78481; i u WO92/02551; WO2004/051268 i Međunarodnoj patentnoj prijavi broj WO2004/106377.
[0051] Skrining za antitela može biti urađen upotrebom testova za merenje vezivanja za humani FcRn i/ili testova za merenje sposobnosti da se blokira vezivanje IgG-a za receptor. Primer testa vezivanja je ELISA, naročito ona u kojoj se upotrebljavaju fuzioni protein humanog FcRn i humanog Fc koji je imobilizovan na pločama, i sekundarno antitelo za detekciju anti-FcRn antitela koje je vezano za fuzioni protein. Primeri pogodnih antagonističkih i testova blokiranja su opisani ovde u Primerima.
[0052] Humanizovana antitela (koja uklјučuju antitela sa graftom u CDR) su molekuli antitela koji sadrže jedan ili više regiona koji određuje komplementarnost (CDR) iz vrsta koje nisu čovek, kao i uokvirujući region iz molekula humanog imunoglobulina (pogledati, npr. US 5,585,089; WO91/09967). Potrebno je napomenuti da može biti neophodno da se prebace samo ostaci koji određuju specifilnost iz CDR-ova, a ne čitav CDR (pogledati, na primer, Kashmiri i saradnici, 2005, Methods, 36, 25-34). Humanizovana antitela mogu po izboru dalјe sadržavati jedan ili više ostataka uokvirujućeg regiona koji je izveden iz vrsta koje nisu čovek i iz kojih se izvode CDR-ovi. Drugonavedeni se često označavaju kao donorski ostaci.
[0053] Predviđeno je da se termin "specifičan", kako se ovde koristi, odnosi na antitelo koje prepoznaje samo antigen za koji je specifično ili antitelo koje je sa značajno većim afinitetom vezivanja za antigen za koji je specifično u odnosu na vezivanje za antigenen za koje nije specifično, na primer, sa najmanje 5, 6, 7, 8, 9, 10 puta većim afinitetom vezivanja. Afinitet vezivanja može biti utvrđen tehnikama kao što je BIAcore, kao što je ovde opisano. U jednom primeru, antitelo predmetnog pronalaska ne vezuje β2 mikroglobulin (β2M). U jednom primeru, antitelo predmetnog pronalaska vezuje FcRn Cynomolgus majmuna. U jednom primeru, antitelo predmetnog pronalaska ne vezuje FcRn pacova ili miša.
[0054] Aminokiselinske sekvence i polinukleotidne sekvence određenih antitela u skladu sa predmetnim opisom su obezbeđene na Slikama.
[0055] U jednom primeru izvođenja, antitelo ili fragmenti u skladu sa opisom su humanizovani.
[0056] Kako se ovde upotrebljava, termin "molekul humanizovanog antitela" se odnosi na molekul antitela gde teški i/ili laki lanac sadrži jedan ili više CDR (uklјučujući, ukoliko je poželјno, jedan ili više modifikovanih CDR-ova) iz donorskog antitela (npr. antitela koje nije humano, kao što je mišje monoklonsko antitelo) koje je ugrađeno u uokvirujući region varijabilnog regiona teškog i/ili lakog lanca akceptorskog antitela (npr. humanog antitela). Za revijski pregled, pogledati Vaughan i saradnici, Nature Biotechnology, 16, 535-539, 1998. U jednom aspektu opisa, ne prenosi se čitav CDR, već radije samo jedan ili više ostataka koji određuju specifičnost iz bilo kog od CDR-ova koji su ovde opisani, u uokvirujući region humanog antitela (pogledati, na primer, Kashmiri i saradnici, 2005, Methods, 36, 25-34). U jednom aspektu opisa, samo se ostaci koji određuju specifičnost, iz jednog ili više CDR-ova koji su ovde prethodno opisani, prenose u uokvirujući region humanog antitela. U drugom aspektu opisa, samo se ostaci koji određuju specifičnost iz svakog od CDR-ova koji su ovde prethodno opisani, prenose u uokvirujući region humanog antitela.
[0057] Kada su CDR-ovi ili ostaci koji određuju specifičnost ugrađeni, bilo koja odgovarajuća sekvenca uokvirujućeg regiona iz akceptorskog varijabilnog regiona može biti upotrebljena, imajući u vidu klasu/tip donorskog antitela iz koga su CDR-ovi izvedeni, uklјučujući mišje, iz primata i humane uokvirujuće regione.
[0058] Pogodno je da humanizovano antitelo u skladu sa predmetnim pronalaskom sadrži varijabilni domen koji dalje sadrži humane akceptorske uokvirujuće regione, kao CDR-ovi koji su ovde specifično navedeni. Prema tome, obezbeđeno je blokirajuće humanizovano antitelo koje vezuje humani FcRn, gde varijabilni domen sadrži humane akceptorske uokvirujuće regione i donorske CDR-ove koji nisu humani.
[0059] Primeri humanih uokvirujućih regiona koji mogu biti upotrebljeni u predmetnom pronalasku su KOL, NEWM, REI, EU, TUR, TEI, LAY i POM (Kabat i saradnici, navedeno prethodno). Na primer, KOL i NEWM mogu biti upotrebljeni za teški lanac, REI može biti upotrebljen za laki lanac, dok EU, LAY i POM mogu biti upotrebljeni i za teški lanac i za laki lanac. Alternativno, mogu biti upotrebljene humane sekvence germinativnih linija; one su dostupne na: http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/.
[0060] U humanizovanom antitelu predmetnog pronalaska, akceptorski teški i laki lanci ne moraju nužno da budu izvedeni iz istog antitela i mogu, ukoliko je to poželjno, sadržavati kompozitne lance sa uokvirujućim regionima izvedenim iz različitih lanaca.
[0061] Jedan takav pogodan uokvirujući region za teški lanac humanizovanog antitela predmetnog pronalaska je izveden iz humane podgrupe VH3 sekvenci 1-33-07, zajedno sa JH4 (SEQ ID NO: 56).
[0062] Shodno navedenom, u jednom primeru je obezbeđeno humanizovano antitelo koje sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 1 kao CDR-H1, sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 2 kao CDR-H2 i sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 3 za CDRH3, pri čemu je uokvirujući region teškog lanca izveden iz humane podgrupe VH3 sekvenci 1-33-07, zajedno sa JH4.
[0063] Sekvenca humanog JH4 je sledeća: (YFDY)WGQGTLVTVS (Seq ID No: 70). Motiv YFDY je deo CDR-H3 i nije deo uokvirujućeg regiona 4 (Ravetch JV. i saradnici, 1981, Cell, 27, 583-591).
[0064] U jednom primeru, varijabilni domen teškog lanca antitela sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 29.
[0065] Odgovarajući uokvirujući region za laki lanac humanizovanog antitela predmetnog pronalaska je izveden iz podgrupe VK1 sekvenci humane germinativne linije 2-1-(1) A30 zajedno sa JK2 (SEQ ID NO: 54).
[0066] Shodno tome, u jednom primeru je obezbeđeno humanizovano antitelo koje sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 4 kao CDR-L1, sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 5 kao CDR-L2 i sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 6 za CDRL3, pri čemu je uokvirujući region lakog lanca izveden iz podgrupe humane VK1 sekvence 2-1-(1) A30 zajedno sa JK2.
[0067] JK2 sekvenca je sledeća: (YT)FGQGTKLEIK (Seq ID No: 71). YT motiv je deo CDR-L3 i nije deo uokvirujućeg regiona 4 (Hieter PA. i saradnici, 1982, J. Biol. Chem., 257, 1516-1522).
[0068] U jednom primeru, varijabilni domen lakog lanca antitela sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 15.
[0069] U humanizovanom antitelu predmetnog pronalaska, uokvirujući regioni ne moraju imati potpuno istu sekvencu kao što je sekvenca akceptorskog antitela. Na primer, neuobičajeni ostaci mogu biti promenjenje u ostatke koji se češće javaljaju u određenim klasama ili tipovima akceptorskih lanaca. Alternativno, izabrani ostaci u akceptorskim uokvirujućim regionima mogu biti promenjeni tako da odgovaraju ostatku koji se nalazi na istom položaju u donorskom antitelu (pogledati Reichmann i saradnici, 1998, Nature, 332, 323-324). Ovakve promene treba održavati na minimumu koji je potreban da se povrati afinitet donorskog antitela. Protokol za selekciju ostataka u akceptorskim uokvirujućim regionima, koje je možda potrebno promeniti, je naveden u WO91/09967.
[0070] Stoga, u jednom primeru izvođenja, 1, 2, 3, 4 ili 5 ostataka uokvirujućeg regiona je zamenjeno sa alternativnim aminokiselinskim ostatkom.
[0071] U skladu sa navedenim, u jednom primeru je obezbeđeno humanizovano antitelo, pri čemu su najmanje ostaci na svakoj od pozicija 3, 24, 76, 93 i 94 varijabilnog domena teškog lanca (Kabatova numeracija) donorski ostaci, pogledati, na primer, sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 29.
[0072] U jednom primeru izvođenja, ostatak 3 varijabilnog domena teškog lanca je zamenjen sa alternativnom aminokiselinom, na primer, glutaminom.
[0073] U jednom primeru izvođenja, ostatak 24 varijabilnog domena teškog lanca je zamenjen sa alternativnom aminokiselinom, na primer, alaninom.
[0074] U jednom primeru izvođenja, ostatak 76 varijabilnog domena teškog lanca je zamenjen sa alternativnom aminokiselinom, na primer, asparaginom.
[0075] U jednom primeru izvođenja, ostatak 93 teškog lanca je zamenjen sa alternativnom aminokiselinom, na primer, alaninom.
[0076] U jednom primeru izvođenja, ostatak 94 teškog lanca je zamenjen sa alternativnom aminokiselinom, na primer, argininom.
[0077] U jednom primeru izvođenja, u varijabilnom regionu humanizovanog teškog lanca u skladu sa predmetnim opisom, ostatak 3 je glutamin, ostatak 24 je alanin, ostatak 76 je aspargin, ostatak 93 je alanin i ostatak 94 je arginin.
[0078] Shodno navedenom, u jednom primeru je obezbeđeno humanizovano antitelo, gde su najmanje ostaci na svakoj od pozicija 36, 37 i 58 varijabilnog domena lakog lanca (Kabatova numeracija) donorski ostaci, pogledati, na primer, sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 15.
[0079] U jednom primeru izvođenja, ostatak 36 varijabilnog domena lakog lanca je zamenjen sa alternativnom aminokiselinom, na primer, tirozinom.
[0080] U jednom primeru izvođenja, ostatak 37 varijabilnog domena lakog lanca je zamenjen sa alternativnom aminokiselinom, na primer, glutaminom.
[0081] U jednom primeru izvođenja, ostatak 58 varijabilnog domena lakog lanca je zamenjen sa alternativnom aminokiselinom, na primer, valinom.
[0082] U jednom primeru izvođenja, u varijabilnom regionu humanizovanog teškog lanca u skladu sa predmetnim opisom, ostatak 36 je tirozin, ostatak 37 je glutamin i ostatak 58 je valin.
[0083] Opis obezbeđuje sekvencu antitela koja je 80% slična ili identična sekvenci koja je ovde opisana, na primer, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% 96%, 97%, 98% ili 99%, sa delom ili čitavom relevantnom sekvencom, na primer, sa sekvencom varijabilnog domena, CDR sekvencom ili sekvencom varijabilnog domena, isklјučujući CDR-ove. U jednom aspektu opisa, relevantna sekvenca je SEQ ID NO: 15. U jednom aspektu opisa, relevantna sekvenca je SEQ ID NO: 29.
[0084] Prikazani opis obezbeđuje molekul antitela koji vezuje humani FcRn koji sadrži teški lanac, pri čemu varijabilni domen teškog lanca sadrži sekvencu koja je najmanje 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% 96%, 97%, 98% ili 99% identična ili slična sekvenci navedenoj u SEQ ID NO: 29.
[0085] Prikazani opis obezbeđuje molekul antitela koji vezuje humani FcRn koji sadrži laki lanac, pri čemu varijabilni domen lakog lanca sadrži sekvencu koja je najmanje 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% 96%, 97%, 98% ili 99% identična ili slična sekvenci navedenoj u SEQ ID NO: 15.
[0086] Prikazani opis obezbeđuje molekul antitela koji vezuje humani FcRn, pri čemu antitelo sadrži varijabilni domen teškog lanca koji je najmanje 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% 96%, 97%, 98% ili 99% sličan ili identičan sekvenci navedenoj u SEQ ID NO: 29, ali gde je molekul antitela sa sekvencom CDR-H1 koja je navedena u SEQ ID NO: 1, sekvencom CDR-H2 koja je navedena u SEQ ID NO: 2 i sekvencom CDR-H3 koja je navedena u SEQ ID NO: 3.
[0087] Prikazani opis obezbeđuje molekul antitela koji vezuje humani FcRn, pri čemu antitelo sadrži varijabilni domen lakog lanca koji je najmanje 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% 96%, 97%, 98% ili 99% sličan ili identičan sekvenci navedenoj u SEQ ID NO: 15, ali pri čemu je molekul antitela sa sekvencom CDR-L1 koja je navedena u SEQ ID NO: 4, sekvencom CDR-L2 koja je navedena u SEQ ID NO: 5 i sekvencom CDR-L3 koja je navedena u SEQ ID NO: 6.
[0088] Prikazani opis obezbeđuje molekul antitela koji vezuje humani FcRn, gde antitelo sadrži varijabilni domen teškog lanca koji je najmanje 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% 96%, 97%, 98% ili 99% sličan ili identičan sekvenci navedenoj u SEQ ID NO: 29 i varijabilni domen lakog lanca koji je najmanje 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% 96%, 97% 98% ili 99% sličan ili identičan sekvenci navedenoj u SEQ ID NO: 15, ali gde molekul antitela ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 1 kao CDR-H1, sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 2 kao CDR-H2, sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 3 kao CDR-H3, sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 4 kao CDR-L1, sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 5 kao CDR-L2 i sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 6 kao CDR-L3.
[0089] "Identitet", kako se ovde koristi, ukazuje da je na bilo kojoj određenoj poziciji u poravnatim sekvencama, aminokiselinski ostatak identičan između sekvenci. "Sličnost", kako se ovde upotrebljava, ukazuje da je na bilo kojoj određenoj poziciji u poravnatim sekvencama, aminokiselinski ostatak između sekvenci sličnog tipa. Na primer, leucin može biti supstituisan sa izoleucinom ili valinom. Ostale aminokiseline koje se često mogu supstituisati jedna sa drugom uklјučuju, ali nisu ograničene na:
- fenilalanin, tirozin i triptofan (aminokiseline koje sadrže aromatične bočne lance);
- lizin, arginin i histidin (aminokiseline koje sadrže bazne bočne lance);
- aspartat i glutamat (aminokiseline koje sadrže kisele bočne lance);
- asparagin i glutamin (aminokiseline koje sadrže amidne bočne lance); i
- cistein i metionin (aminokiseline koje sadrže bočne lance koji sadrže sumpor). Stepeni identiteta i sličnosti mogu biti lako izračunati (Computational Molecular Biology, Lesk A.M., ur., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing. Informatics and Genome Projects, Smith D.W., ur., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Deo 1, Griffin A.M. i Griffin H.G., ur., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje G., Academic Press, 1987, Sequence Analysis Primer, Gribskov M. i Devereux J., ur., M Stockton Press, New York, 1991, BLAST™ kompjuterski program dostupan kod NCBI (Altschul S.F. i saradnici, 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410; Gish W. i States D.J. 1993, Nature Genet. 3:266-272. Madden T.L. i saradnici, 1996, Meth. Enzymol.266:131-141; Altschul S.F. i saradnici, 1997, Nucleic Acids Res.25:3389-3402; Zhang J. i Madden T.L.1997, Genome Res.7:649-656).
[0090] Molekuli antitela predmetnog pronalaska mogu sadržavati kompletan molekul antitela koji sadrži teške i lake lance punih dužina ili njegov fragment i mogu biti, ali nisu ograničeni na Fab, modifikovani Fab, Fab’, modifikovani Fab', F(ab’)2, Fv, antitela jednog domena (npr. VH ili VL ili VHH), scFv, bi-, tri- ili tetravalentna antitela, bis-scFv, dimerna, trimerna i tetramerna antitela i fragmenti koji vezuju epitop iz bilo kog od prethodno navedenih (pogledati, na primer, Holliger i Hudson, 2005, Nature Biotech.23(9):1126-1136; Adair i Lawson, 2005, Drug Design Reviews - Online 2(3), 209-217). Postupci za kreiranje i proizvodnju ovih fragmenata antitela su dobro poznati u stanju tehnike (pogledati, na primer, Verma i saradnici, 1998, Journal of Immunological Methods, 216, 165-181). Drugi fragmenti antitela za upotrebu u predmetnom pronalasku uklјučuju Fab i Fab’ fragmente koji su opisani u Međunarodnim patentnim prijavama WO2005/003169, WO2005/003170 i WO2005/003171. Multivalentna antitela mogu sadržavati višestruke specifičnosti, npr. biti bispecifična ili mogu biti monospecifična (pogledati, na primer, WO 92/22853, WO05/113605, WO2009/040562 i WO2010/035012).
[0091] U jednom primeru izvođenja, molekul antitela predmetnog opisa je Fab’ fragment antitela koji sadrži varijabilne regione prikazane u SEQ ID NO: 15 i 29, na primer, za laki i teški lanac, tim redom. U jednom primeru izvođenja, molekul antitela je sa lakim lancem koji sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 22 i sa teškim lancem koji sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 36.
[0092] U jednom primeru izvođenja, molekul antitela predmetnog opisa je IgG1 antitelo pune dužine koje sadrži varijabilne regione prikazane u SEQ ID NOs: 15 i 29, na primer, za laki i teški lanac, tim redom. U jednom primeru izvođenja, molekul antitela je sa lakim lancem koji sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 22 i sa teškim lancem koji sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 72.
[0093] U jednom primeru izvođenja, molekul antitela predmetnog opisa je IgG4 formata pune dužine koji sadrži varijabilne regione prikazane u SEQ ID NOs: 15 i 29 na primer za laki i teški lanac, tim redom.
U jednom primeru izvođenja, molekul antitela je sa lakim lancem koji sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 22 i sa teškim lancem koji sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 87.
[0094] U jednom primeru izvođenja, molekul antitela predmetnog opisa je IgG4P formata pune dužine koji sadrži varijabilne regione prikazane u SEQ ID NOs: 15 i 29 na primer za laki i teški lanac, tim redom. U jednom primeru izvođenja, molekul antitela je sa lakim lancem koji sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 22 i sa teškim lancem koji sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 43.
[0095] IgG4P, kao što se ovde koristi, podrazumeva mutaciju izotipa IgG4 divlјeg tipa, gde je aminokiselina 241 zamenjena prolinom, na primer, pogledati gde je serin na poziciji 241 promenjen u prolin, kao što je opisano u Angal i saradnici, Molecular Immunology, 1993, 30 (1), 105-108.
[0096] U jednom primeru izvođenja, antitelo prema predmetnom pronalasku je obezbeđeno kao fuzioni protein antitela koje vezuje FcRn i koji sadrži imunoglobulinski deo, na primer, Fab ili Fab’ fragment, i jedan ili dva antitela sa jednim domenom (dAb), direktno ili indirektno povezana za njega, na primer, kao što je opisano u WO2009/040562, WO2010035012, WO2011/030107, WO2011/061492 i WO2011/086091.
[0097] U jednom primeru izvođenja, fuzioni protein sadrži dva domena antitela, na primer, kao što je uparivanje varijabilnog teškog (VH) i varijabilnog lakog (VL) domena, po izboru povezanih disulfidnom vezom.
[0098] U jednom primeru izvođenja, Fab ili Fab’ element fuzionog proteina ima istu ili sličnu specifičnost za antitelo ili antitela sa jednim domenom. U jednom primeru izvođenja, Fab ili Fab’ ima različitu specifičnost za antitelo ili antitela sa jednim domenom, što znači da je fuzioni protein multivalentan. U jednom primeru izvođenja, multivalentni fuzioni protein u skladu sa predmetnim pronalaskom sadrži mesto vezivanja albumina, na primer, sadrži VH/VL par koji mu obezbeđuje mesto za vezivanje albumina. U jednom takvom primeru izvođenja, teški lanac sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 50 i laki lanac sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 46 ili SEQ ID NO: 78. Ovaj Fab-dsFv format je ovde ilustrovan na Slici 25.
[0099] U jednom primeru izvođenja, Fab ili Fab’ prema predmetnom opisu je konjugovan sa PEG molekulom ili humanim serumskim albuminom.
[0100] CA170_01519g57 i 1519 i 1519.g57 se ovde koriste naizmenično i upotrebljavaju se za označavanje specifičnog para varijabilnih regiona antitela koji mogu biti upotrebljeni u više različitih formata. Ovi varijabilni regioni su sekvenca teškog lanca navedena u SEQ ID NO: 29 i sekvenca lakog lanca navedena u SEQ ID NO: 15 (Slika 1).
[0101] Domeni konstantnog regiona molekula antitela predmetnog pronalaska, ukoliko su prisutni, mogu biti izabrani imajući u vidu predloženu funkciju molekula antitela, a posebno efektorske funkcije koje mogu biti potrebne. Na primer, domeni konstantnog regiona mogu biti humani domeni IgA, IgD, IgE, IgG ili IgM. Preciznije, mogu biti upotrebljene domeni konstantnog regiona humanog IgG-a, naročito izotipa IgG1 i IgG3, kada je molekul antitela namenjen za terapijske upotrebe i potrebne su efektorske funkcije antitela. Alternativno, IgG2 i IgG4 izotipovi mogu biti upotrebljeni kada je molekul antitela namenjen za terapijske svrhe, ali efektorske funkcije antitela nisu potrebne. Potrebno je napomenuti da mogu biti upotrebljeni i sekvence varijanti ovih domena konstantnog regiona. Na primer, mogu biti upotrebljeni IgG4 molekuli u kojima je serin na poziciji 241 promenjen u prolin, kao što je opisano u Angal i saradnici, Molecular Immunology, 1993, 30 (1), 105-108. Stručnjak će takođe shvatiti da antitela mogu biti podvrgnuta raznim posttranslacionim modifikacijama. Tip i opseg ovih modifikacija često zavisi od linije ćelija domaćina koja je upotrebljena za ekspresiju antitela, kao i od uslova u kulturi. Ovakve modifikacije mogu uklјučivati varijacije u glikozilaciji, oksidaciji metionina, formiranju diketopiperazina, izomerizaciji aspartata i deamidaciji asparagina. Česta modifikacija je gubitak baznog ostatka na karboksilnom kraju (kao što je lizin ili arginin) usled dejstva karboksipeptidaza (kao što je opisano u Harris RJ., Journal of Chromatography 705:129-134, 1995). Prema tome, C-terminalni lizin teškog lanca antitela može biti odsutan.
[0102] U jednom primeru izvođenja, teški lanac antitela sadrži CH1 domen i laki lanac antitela sadrži CL domen, bilo kapa ili lambda.
[0103] U jednom primeru izvođenja, laki lanac sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 22 i teški lanac sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 43.
[0104] U jednom primeru izvođenja, laki lanac sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 22 i teški lanac sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 72.
[0105] U jednom primeru izvođenja, C-terminalna aminokiselina iz molekula antitela se iseca tokom post-translacionih modifikacija.
[0106] U jednom primeru izvođenja, N-terminalna aminokiselina iz molekula antitela se iseca tokom post-translacionih modifikacija.
[0107] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje specifičan region ili epitop humanog FcRn za koji se vezuje antitelo koje je obezbeđeno predmetnim pronalaskom, posebno antitelo koje sadrži sekvencu teškog lanca gH20 (SEQ ID NO: 29) i/ili sekvencu lakog lanca gL20 (SEQ ID NO: 15).
[0108] Navedeni specifičan region ili epitop humanog FcRn polipeptida može biti identifikovan bilo kojim pogodnim postupkom mapiranja epitopa koji je poznat u stanju tehnike, u kombinaciji sa bilo kojim od antitela koja su obezbeđena predmetnim pronalaskom. Primeri takvih postupaka uklјučuju skrining peptida različitih dužina izvedenih iz FcRn koji se vezuju za antitelo predmetnog pronalaska i utvrđivanje koje od njih je sa najmanjim fragmentom koji se može specifično vezati za antitelo koje sadrži sekvencu epitopa koji prepoznaje antitelo. FcRn peptidi mogu biti proizvedeni sintetski ili proteolitičkom digestijom FcRn polipeptida. Peptidi koji vezuju antitelo mogu biti identifikovani, na primer, analizom masene spektrometrije. U drugom primeru, za identifikaciju epitopa vezanog antitelom predmetnog pronalaska mogu biti upotrebljene NMR spektroskopija ili rendgenska kristalografija. Kada se jednom identifikuje, fragment epitopa koji vezuje antitelo predmetnog pronalaska može biti upotrebljen, ukoliko je potrebno, kao imunogen da bi se dobila dodatna antitela koja vezuju isti epitop.
[0109] U jednom primeru izvođenja, antitelo predmetnog pronalaska vezuje vanćelijsku sekvencu alfa lanca humanog FcRn, kao što je prikazano u nastavku teksta:
[0110] Podvučeni ostaci su oni za koje je poznato da su kritični za interakciju humanog FcRn sa Fc regionom humanog IgG-a, a oni ostaci koji su istaknuti podebljanim slovima predstavljaju ostatke koji su uklјučeni u interakciju FcRn sa 1519 antitelom predmetnog pronalaska koje sadrži sekvencu teškog lanca gH20 (SEQ ID NO: 29) i sekvencu lakog lanca gL20 (SEQ ID NO: 15).
[0111] U jednom primeru, predmetni opis obezbeđuje je molekul anti-FcRn antitela koji vezuje epitop humanog FcRn koji sadrži najmanje jednu aminokiselinu izabranu iz grupe koja se sastoji od ostataka V105, P106, T107, A108 i K109 iz SEQ ID NO: 94 i najmanje jedan ostatak, na primer, najmanje 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 ostataka izabranih iz grupe koja se sastoji od P100, E115, E116, F117, M118, N119, F120, D121, L122, K123, Q124, G128, G129, D130, W131, P132 i E133 iz SEQ ID NO: 94.
[0112] U jednom primeru, epitop molekula antitela je određen rendgenskom kristalografijom, upotrebom vanćelijske sekvence alfa lanca FcRn (SEQ ID NO: 94) u kompleksu sa β2M.
[0113] U jednom primeru, predmetni opis obezbeđuje molekul anti-FcRn antitela koji vezuje epitop humanog FcRn koji sadrži najmanje jednu aminokiselinu izabranu iz grupe koja se sastoji od ostataka V105, P106, T107, A108 i K109 iz SEQ ID NO: 94 i najmanje jedan ostatak, na primer, najmanje 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 ostataka izabranih iz grupe koja se sastoji od E115, E116, F117, M118, N119, F120, D121, L122, K123 i Q124 iz SEQ ID NO: 94.
[0114] U jednom primeru, predmetni opis obezbeđuje molekul anti-FcRn antitela koji vezuje epitop humanog FcRn koji sadrži najmanje dve, tri, četiri ili pet aminokiselina izabranih iz grupe koja se sastoji od ostataka V105, P106, T107, A108 i K109 iz SEQ ID NO: 94 i najmanje jedan ostatak izabran iz grupe koju čine E115, E116, F117, M118, N119, F120, D121, L122, K123 i Q124 iz SEQ ID N0: 94.
[0115] U jednom primeru, predmetni opis obezbeđuje molekul anti-FcRn antitela koji vezuje epitop humanog FcRn koji sadrži najmanje jednu aminokiselinu izabranu iz grupe koja se sastoji od ostataka V105, P106, T107, A108 i K109 iz SEQ ID NO: 94 i najmanje jedan ostatak izabran iz grupe koju čine P100, E115, E116, F117, M118, N119, F120, D121, L122, K123, Q124, G128, G129, D130, W131, P132 i E133 iz SEQ ID N0: 94.
[0116] U jednom primeru, predmetni opis obezbeđuje molekul anti-FcRn antitela koji vezuje epitop humanog FcRn koji sadrži najmanje jednu aminokiselinu izabranu iz grupe koja se sastoji od ostataka V105, P106, T107, A108 i K109 iz SEQ ID NO: 94 i najmanje jedan ostatak izabran iz grupe koju čine P100, M118, N119, F120, D121, L122, K123, Q124 i G128 iz SEQ ID N0: 94.
[0117] U jednom primeru, predmetni opis obezbeđuje molekul anti-FcRn antitela koji vezuje epitop humanog FcRn koji sadrži ostatke V105, P106, T107, A108 i K109 iz SEQ ID NO: 94 i najmanje jedan ostatak izabran iz grupe koja se sastoji od P100, M118, N119, F120, D121, L122, K123, Q124 i G128 iz SEQ ID NO: 94.
[0118] U jednom primeru, predmetni opis obezbeđuje molekul anti-FcRn antitela koji vezuje epitop humanog FcRn koji sadrži ostatke V105, P106, T107, A108 i K109 iz SEQ ID NO: 94 i najmanje jedan ostatak izabran iz grupe koja se sastoji od P100, E115, E116, F117, M118, N119, F120, D121, L122, K123, Q124, G128, G129, D130, W131, P132 i E133 iz SEQ ID NO: 94.
[0119] U jednom primeru, predmetni opis obezbeđuje molekul anti-FcRn antitela koji vezuje epitop humanog FcRn koji sadrži ostatke P100, V105, P106, T107, A108 i K109 iz SEQ ID NO: 94 i najmanje jedan ostatak izabran iz grupe koja se sastoji od E115, E116, F117, M118, N119, F120, D121, L122, K123, Q124, G128, G129, D130, W131, P132 i E133 iz SEQ ID NO: 94.
[0120] U jednom primeru, "najmanje jedan ostatak" može biti 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ili 16 ostataka.
[0121] U jednom primeru, predmetni opis obezbeđuje molekul anti-FcRn antitela koji vezuje epitop humanog FcRn koji sadrži ili se sastoji od ostataka 100, 105 do 109, 115 do 124 i 129 do 133 iz SEQ ID N0: 94.
[0122] Antitela koja unakrsno blokiraju vezivanje molekula antitela u skladu sa predmetnim opisom, a posebno molekula antitela koji sadrži sekvencu teškog lanca navedenu u SEQ ID NO: 29 i sekvencu lakog lanca navedenu u SEQ ID NO: 15, mogu biti slično korisna u blokiranju aktivnosti FcRn. Shodno tome, predmetni pronalazak takođe obezbeđuje molekul anti-FcRn antitela koje unakrsno blokira vezivanje bilo kog od ovde opisanih molekula antitela za humani FcRn i/ili je unakrsno blokirano vezivanjem humanog FcRn sa bilo kojim od ovih antitela. U jednom aspektu opisa, takvo antitelo se vezuje za isti epitop kao antitelo koje je ovde prethodno opisano. U još jednom aspektu opisa, unakrsno blokirajuće, neutrališuće antitelo se vezuje za epitop koji se graniči i/ili preklapa sa epitopom za koji je vezano antitelo koje je ovde prethodno opisano.
[0123] Unakrsno blokirajuća antitela se mogu identifikovati upotrebom bilo kog pogodnog postupka u stanju tehnike, na primer, upotrebom kompetitivnih ELISA ili BIAcore testova gde vezivanje antitela za unakrsno blokiranje na humani FcRn sprečava vezivanje antitela predmetnog pronalaska ili obrnuto. Takvi testovi unakrsnog blokiranja mogu koristiti izolovani prirodni ili rekombinantni FcRn ili odgovarajući fuzioni protein/polipeptid. U jednom primeru, vezivanje i unakrsno blokiranje se meri upotrebom vanćelijskog domena rekombinantnog humanog FcRn (SEQ ID NO: 94). U jednom primeru, alfa lanac vanćelijskog domena rekombinantnog humanog FcRn se koristi u kompleksu sa β2 mikroglobulinom (β2M) (SEQ ID NO: 95).
[0124] Obezbeđen je molekul anti-FcRn antitela koji blokira vezivanje FcRn za IgG i koji unakrsno blokira vezivanje antitela čiji teški lanac sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 29 i čiji laki lanac sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 15, za humani FcRn. U jednom aspektu opisa, unakrsno blokirajuća antitela obezbeđena predmetnim pronalaskom inhibiraju vezivanje antitela koje sadrži sekvencu teškog lanca navedenu u SEQ ID NO: 29 i sekvencu lakog lanca navedenu u SEQ ID NO: 15 za više od 80%, na primer, za više od 85%, kao što je za više od 90% i naročito za više od 95%.
[0125] Alternativno ili dodatno, anti-FcRn antitela prema ovom aspektu opisa, mogu biti unakrsno blokirana da se vežu za humani FcRn sa antitelom koje sadrži sekvencu teškog lanca navedenu u SEQ ID NO: 29 i sekvencu lakog lanca navedenu u SEQ ID NO: 15. Takođe je stoga obezbeđen molekul anti-FcRn antitela koje blokira vezivanje FcRn za IgG i koje je unakrsno blokirano da se veže za humani FcRn antitelom koje sadrži sekvencu teškog lanca navedenu u SEQ ID NO: 29 i sekvencu lakog lanca navedenu u SEQ ID NO: 15. Anti-FcRn antitela koja su obezbeđena ovim aspektom opisa su inhibirana da se vežu za humani FcRn sa antitelom koje sadrži sekvencu teškog lanca navedenu u SEQ ID NO: 29 i sekvencu lakog lanca navedenu u SEQ ID NO: 15 za više od 80%, na primer, za više od 85%, kao što je za više od 90% i naročito za više od 95%.
[0126] U jednom aspektu opisa, unakrsno blokirajuća antitela obezbeđena predmetnim pronalaskom su u potpunosti humana. U jednom aspektu unakrsno blokirajuća antitela obezbeđena predmetnim pronalaskom su humanizovana. U jednom aspektu, unakrsno blokirajuća antitela obezbeđena predmetnim pronalaskom imaju afinitet za humani FcRn od 100 pM ili manje. U jednom aspektu, unakrsno blokirajuća antitela obezbeđena predmetnim pronalaskom imaju afinitet za humani FcRn od 50 pM ili manje. Afinitet se može izmeriti upotrebom postupaka koji su ovde opisani u nastavku teksta.
[0127] Biološki molekuli, kao što su antitela ili fragmenti, sadrže kisele i/ili bazne funkcionalne grupe, što molekulu obezbeđuje neto pozitivno ili negativno naelektrisanje. Količina ukupnog "uočenog" naelektrisanja će zavisiti od apsolutne aminokiselinske sekvence entiteta, lokalne sredine naelektrisanih grupa u 3D strukturi i od uslova sredine molekula. Izoelektrična tačka (pI) je pH vrednost pri kojoj je određeni molekul ili njegova površina koja je pristupačna rastvaraču bez neto električnog naelektrisanja. U jednom primeru, FcRn antitelo i fragmenti pronalaska mogu biti konstruisani tako da imaju odgovarajuću izoelektričnu tačku. Ovo može dovesti do dobijanja antitela i/ili fragmenata sa robusnijim osobinama, naročito pogodnih profila rastvorlјivosti i/ili stabilnosti i/ili pobolјšanih karakteristika za prečišćavanje.
[0128] Opis obezbeđuje humanizovano FcRn antitelo koje je konstruisano tako da je sa izoelektričnom tačkom koja je različita od one koja karakteriše originalno identifikovano antitelo. Antitelo može, na primer, biti konstruisano zamenom aminokiselinskog ostatka, kao što je zamena kiselog aminokiselinskog ostatka sa jednim ili sa više baznih aminokiselinskih ostataka. Alternativno, bazni aminokiselinski ostaci mogu biti uvedeni ili kiseli aminokiselinski ostaci mogu biti uklonjeni. Alternativno, ukoliko je molekul sa neprihvatlјivo visokom vrednošću pI, mogu biti uvedeni kiseli ostaci kako bi se smanjio pl, ukoliko je to potrebno. Važno je da se prilikom manipulacije pI mora voditi računa da se zadrži želјena aktivnost antitela ili fragmenta. Prema tome, u jednom aspektu opisa konstruisano antitelo ili fragment ima istu ili suštinski istu aktivnost kao i "nemodifikovano" antitelo ili fragment.
[0129] Programi kao što su *ExPASY http://www.expasy.ch/tools/pi_tool.html i http://www.iutarles.up.univmrs.fr/w3bb/d_abim/compo-p.html, mogu biti upotrebljene za predviđanje izoelektrične tačke antitela ili fragmenta. ;[0130] Molekuli antitela predmetnog pronalaska pogodno imaju visok afinitet vezivanja, konkretno, u nanomolarnom opsegu. Afinitet može biti izmeren upotrebom bilo kog pogodnog postupka koji je poznat u stanju tehnike, uključujući BIAcore, kao što je ovde opisano u Primerima, upotrebom izolovanog prirodnog ili rekombinantnog FcRn ili odgovarajućeg fuzionog proteina/polipeptida. U jednom primeru, afinitet je izmeren upotrebom vanćelijskog domena rekombinantnog humanog FcRn, kao što je ovde opisano u Primerima (SEQ ID NO: 94). U jednom primeru, afinitet je izmeren upotrebom alfa lanca vanćelijskog domena rekombinantnog humanog FcRn (SEQ ID NO: 94) koji je bio udružen sa β2 mikroglobulinom (β2M) (SEQ ID NO: 95). Pogodno je da molekuli antitela predmetnog pronalaska imaju afinitet vezivanja za izolovani humani FcRn od oko 1 nM ili niže. U jednom primeru izvođenja, molekul antitela predmetnog pronalaska karakteriše afinitet vezivanja od oko 500 pM ili niže (tj. veći afinitet). U jednom primeru izvođenja, molekul antitela predmetnog pronalaska karakteriše afinitet vezivanja od oko 250 pM ili niži. U jednom primeru izvođenja, molekul antitela predmetnog pronalaska karakteriše afinitet vezivanja od oko 200 pM ili niže. U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje anti-FcRn antitelo sa afinitetom vezivanja od oko 100 pM ili niže. U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje humanizovano anti-FcRn antitelo sa afinitetom vezivanja od oko 100 pM ili niže. U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje anti-FcRn antitelo sa afinitetom vezivanja od 50 pM ili niže. ;[0131] Važno je da su antitela predmetnog pronalaska sposobna da vežu humani FcRn i na pH6 i pH7,4 sa uporedivim afinitetom vezivanja. Stoga je prednost što su antitela sposobna da nastave da vezuju FcRn čak i unutar endozoma, čime se maksimalno povećava blokiranje vezivanja FcRn za IgG – pogledati Sliku 10 radi ilustracije mehanizma. ;[0132] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje anti-FcRn antitelo sa afinitetom vezivanja od 100 pM ili niže, kada je merenje pri pH 6 i pH 7,4. ;[0133] Afinitet antitela ili vezujućeg fragmenta predmetnog pronalaska, kao i obim do koga agens vezivanja (kao što je antitelo) inhibira vezivanje, može biti određen od strane prosečno iskusnog stručnjaka upotrebom uobičajenih tehnika, na primer, onih koje su opisali Scatchard i saradnici (Ann. KY. Acad. Sci.51:660-672 (1949)) ili površinskom plazmonskom rezonancom (SPR), upotrebom sistema kao što je BIAcore. Za površinsku plazmonsku rezonancu, cilјni molekuli se imobilišu na čvrstoj fazi i izlažu ligandima u mobilnoj fazi koja se kreće kroz protočnu ćeliju. Ukoliko dođe do vezivanja liganda za imobilisani cilјni molekul, promeniće se lokalni refraktivni indeks, što dovodi do promene ugla SPR što se može pratiti u realnom vremenu, detektovanjem promena intenziteta reflektovane svetlosti. Stepeni promene SPR signala mogu biti analizirani da bi se dobile prividne konstante brzine za faze asocijacije i disocijacije reakcije vezivanja. Odnos ovih vrednosti daje prividnu konstantu ravnoteže (afinitet) (pogledati, npr. Wolff i saradnici, Cancer Res.53:2560-65 (1993)). ;[0134] U predmetnom pronalasku, afinitet ispitivanog molekula antitela se obično određuje upotrebom SPR na sledeći način. Molekul ispitivanog antitela se vezuje (engl. capture) na čvrstu fazu, a vanćelijski domen alfa lanca humanog FcRn u nekovalentnom kompleksu sa β2M se propušta preko tako vezanog antitela, u mobilnoj fazi, nakon čega se određuje afinitet ispitivanog molekula antitela za humani FcRn. Ispitivani molekul antitela može biti zadržan na čvrstoj fazi površine čipa, upotrebom bilo kog odgovarajućeg postupka, na primer, upotrebom anti-Fc ili anti Fab’ specifičnog agensa za hvatanje. U jednom primeru, afinitet je određen na pH 6. U jednom primeru, afinitet je određen na pH 7,4. ;[0135] Potrebno je napomenuti da afinitet antitela obezbeđenih predmetnim pronalaskom može biti izmenjen, upotrebom bilo kog pogodnog postupka poznatog u stanju tehnike. Predmetni opis se stoga takođe odnosi na varijante molekula antitela predmetnog pronalaska koje imaju pobolјšani afinitet za FcRn. Takve varijante se mogu dobiti brojnim protokolima afinitetnog "sazrevanja", uklјučujući mutiranje CDR-ova (Yang i saradnici, J. Mol. Biol., 254, 392-403, 1995), preslagivanje lanaca (Marks i saradnici, Bio/Technology, 10, 779-783, 1992), upotrebu mutirajućih sojeva E. coli (Low i saradnici, J. Mol. Biol., 250, 359-368, 1996), preslagivanje DNK (Patten i saradnici, Curr. Opin. Biotechnol., 8, 724733, 1997), ekspresiju od strane faga (Thompson i saradnici, J. Mol. Biol., 256, 77-88, 1996) i "seksualni" PCR (Crameri i dr., Nature, 391, 288-291, 1998). Vaughan i saradnici (navedeno pretnodno) razmatraju ovakve postupke sazrevanja afiniteta. ;[0136] U jednom primeru izvođenja, molekuli antitela predmetnog pronalaska blokiraju aktivnost humanog FcRn. Testovi koji su pogodni za određivanje sposobnosti antitela da blokira FcRn su opisani ovde u Primerima. Pogodni testovi za određivanje da li antitela blokiraju interakciju FcRn sa cirkulišućim molekulima IgG-a su kao što je ovde opisano u Primerima. Odgovarajući test za određivanje sposobnosti molekula antitela da blokira recikliranje IgG-a in vitro je ovde opisan u nastavku teksta. ;[0137] Ukoliko je poželjno, antitelo za upotrebu u predmetnom pronalasku može biti konjugovano sa jednim ili sa više efektorskih molekula. Bitna je napomena da efektorski molekul može sadržavati jedan efektorski molekul ili dve ili više takvih molekula koji su tako povezani da obrzuju jednu strukturu koja može biti vezana za antitela predmetnog pronalaska. Kada je poželjno dobiti fragment antitela povezan sa efektorskim molekulom, to može biti urađeno standardnim hemijskim ili rekombinantnim postupcima sa DNK u kojima je fragment antitela povezan, bilo direktno ili preko kuplujućeg agensa, sa efektorskim molekulom. Tehnike konjugovanja navedenih efektorskih molekula na antitela su dobro poznate u stanju tehnike (pogledati Hellstrom i saradnici, Controlled Drug Delivery, 2. izdanje, Robinson i saradnici, ur., 1987, str. 623-53; Thorpe i saradnici, 1982, Immunol. Rev., 62:119-58 i Dubowchik i saradnici, 1999, Pharmacology and Therapeutics, 83, 67-123). Određene hemijske procedure uklјučuju, na primer, one opisane u WO 93/06231, WO 92/22583, WO 89/00195, WO 89/01476 i WO 03/031581. Alternativno, kada je efektorski molekul protein ili polipeptid, povezivanje može biti postignuto upotrebom procedura rekombinantne DNK, na primer, kao što je opisano u WO 86/01533 i EP0392745. ;[0138] Termin efektorski molekul, kako se ovde upotrebljava, obuhvata, na primer, antineoplastične agense, lekove, toksine, biološki aktivne proteine, na primer enzime, druga antitela ili fragmente antitela, sintetske ili polimere koji se javljaju u prirodi, nukleinske kiseline i njihove fragmente npr. DNK, RNK i njihove fragmente, radionuklide, posebno radiojodid, radioizotope, helirane metale, nanočestice i reporterske grupe kao što su fluorescentna jedinjenja ili jedinjenja koja mogu biti detektovana NMR ili ESR spektroskopijom. ;[0139] Primeri efektorskih molekula mogu uklјučivati citotoksine ili citotoksične agense uklјučujući bilo koji agens koji je štetan za (npr. ubija) ćelije. Primeri uklјučuju kombrestatine, dolastatine, epotilone, staurosporin, majtanzinoide, spongistatine, rizoksin, halihondrine, roridine, hemiasterline, taksol, citokalazin B, gramicidin D, etidijum bromid, emetin, mitomicin, etopozid, tenopozid, vinkristin, vinblastin, kolhicin, doksorubicin, daunorubicin dihidroksi antracin dion, mitoksantron, mitramicin, aktinomicin D, 1-dehidrotestosteron, glukokortikoide, prokain, tetrakain, lidokain, propranolol i puromicin, kao i njihove analoge i homologe. ;[0140] Efektorski molekuli takođe uklјučuju, ali nisu ograničeni na, antimetabolite (npr. metotreksat, 6-merkaptopurin, 6-tioguanin, citarabin, 5-fluorouracil dekarbazin), alkilirajuće agense (npr. mehloretamin, tioepu hlorambucil, melfalan, karmustin (BSNU) i lomustin (CCNU), ciklotosfamid, busulfan, dibromomanitol, streptozotocin, mitomicin C i cis-diklorodiamin platina (II) (DDP) cisplatinu), antracikline (npr. daunorubicin (ranije daunomicin) i doksorubicin), antibiotike (npr. daktinomicin (ranije aktinomicin), bleomicin, mitramicin, antramicin (AMC), kaliheamicine ili duokarmicine) i antimitotička sredstva (npr. vinkristin i vinblastin). ;[0141] Drugi efektorski molekuli mogu uklјučivati helirane radionuklide kao što su<111>In i<90>Y, Lu<177>, Bizmut<213>, Kalifornijum<252>, Iridijm<192>i Tungsten<188>/Renijum<188>; ili lekove kao što su, ali bez ograničavanja samo na njih, alkilfosfoholini, inhibitori topoizomeraze I, taksoidi i suramin. ;[0142] Ostali efektorski molekuli uključuju proteine, peptide i enzime. Enzimi od interesa uklјučuju, ali nisu ograničeni na, proteolitičke enzime, hidrolaze, lijaze, izomeraze, transferaze. Proteini, polipeptidi i peptidi od interesa uklјučuju, ali nisu ograničeni na, imunoglobuline, toksine kao što su abrin, ricin A, egzotoksin pseudomonasa ili difterijski toksin, protein kao što je insulin, faktor nekroze tumora, αinterferon, β-interferon, nervni faktor rasta, faktor rasta izveden iz trombocita ili aktivator tkivnog plazminogena, trombotični agens ili anti-angiogeni agens, npr. angiostatin ili endostatin, ili modifikator biološkog odgovora kao što je limfokin, interleukin-1 (IL-1), interleukin-2 (IL-2), faktor stimulacije rasta kolonija granulocitnih makrofaga (GM-CSF), faktor stimulacije granulocitnih kolonija (G-CSF), nervni faktor rasta (NGF) ili drugi faktor rasta i imunoglobulini. ;[0143] Efektorski molekuli mogu dodatno uklјučivati detektabilne supstance koje su korisne, na primer, u dijagnostici. Primeri supstanci koje mogu biti detektovane obuhvataju razne enzime, prostetične grupe, fluorescentne materijale, luminiscentne materijale, bioluminiscentne materijale, radioaktivne nuklide, metale koji emituju pozitrone (za upotrebu u pozitronskoj emisionoj tomografiji) i neradioaktivne paramagnetske metalne jone. Pogledati radi opšteg pregleda U.S. Patent No. ;4,741,900 za metalne jone koji mogu biti konjugovani na antitela za upotrebu u vidu dijagnostičkih sredstava. Pogodni enzimi uklјučuju peroksidazu rena, alkalnu fosfatazu, beta galaktozidazu ili acetilholinesterazu; pogodne prostetične grupe uklјučuju streptavidin, avidin i biotin; pogodni fluorescentni materijali uklјučuju umbeliferon, fluorescein, fluorescein izotiocijanat, rodamin, dihlorotriazinilamin fluorescein, danzil hlorid i fikoeritrin; pogodni luminescentni materijali uklјučuju luminol; pogodni bioluminiscentni materijali uklјučuju luciferazu, luciferin i ekvorin; i pogodni radioaktivni nuklidi uklјučuju<125>J,<131>J,<111>In i<99>Tc. ;[0144] U drugom primeru, efektorski molekul može povećati poluživot antitela in vivo i/ili smanjiti imunogenost antitela i/ili povećati isporuku antitela preko epitelne barijere do imunog sistema. Primeri pogodnih efektorskih molekula ovog tipa uklјučuju polimere, albumin, proteine koji vezuju albumin ili jedinjenja koja vezuju albumin, kao što su ona opisana u WO05/117984. ;[0145] U jednom primeru izvođenja, poluživot obezbeđen efektorskim molekulom, koji je nezavisan od FcRn, je koristan. ;[0146] Kada je efektorski molekul polimer, on može, u principu, biti sintetski ili prirodni polimer, na primer, po izboru, supstituisani prav ili razgranat lanac polialkilenskog, polialkenilenskog ili polioksialkilenskog polimera ili razgranat ili nerazgranat polisaharid, npr. homo- ili hetero- polisaharid. ;[0147] Specifični supstituenti od izbora koji mogu biti prisutni na prethodno pomenutim sintetskim polimerima uklјučuju jednu ili više hidroksi, metil ili metoksi grupa. ;[0148] Specifični primeri sintetskih polimera uklјučuju po izboru supstituisani, prav ili razgranat lanac poli(etilen glikola), poli(propilenglikola) poli(vinilalkohola) ili njihove derivate, naročito, po izboru, supstituisani poli(etilenglikol) kao što su metoksipoli(etilenglikol) ili njegovi derivati. ;[0149] Specifični polimeri koji se javljaju u prirodi uklјučuju laktozu, amilozu, dekstran, glikogen ili njihove derivate. ;[0150] U jednom primeru izvođenja, polimer je albumin ili njegov fragment, kao što je humani serumski albumin ili njegov fragment. ;[0151] "Derivati", kako se ovde koristi, su predviđeni da obuhvate reaktivne derivate, na primer, tiolselektivne reaktivne grupe kao što su maleimidi i slično. Reaktivna grupa može biti direktno ili preko linkerskog segmenta vezana za polimer. Podrazumeva se da će ostatak takve grupe u nekim slučajevima biti deo proizvoda u vidu povezujuće grupa između fragmenta antitela i polimera. ;[0152] Veličina polimera može varirati po želјi, ali će generalno biti u opsegu prosečne molekulske težine od 500Da do 50000Da, na primer, od 5000 do 40000Da, kao što je od 20000 do 40000Da. Veličina polimera može biti posebno izabrana na osnovu upotrebe proizvoda koja se planira, na primer, sposobnosti da se lokalizuje u određenim tkivima kao što su tumori, ili na osnovu sposobnosti da produži poluživot u cirkulaciji (za revijski pregled pogledati Chapman, 2002, Advanced Drug Delivery Reviews, 54, 531-545). Tako, na primer, kada je proizvod namenjen da napusti cirkulaciju i prodre u tkivo, na primer, prilikom upotrebe u lečenju tumora, može biti korisno da se upotrebljava polimer male molekulske težine, na primer, sa molekulskom težinom od oko 5000Da. Za primene u kojima proizvod ostaje u cirkulaciji, može biti korisno da se upotrebljava polimer veće molekulske težine, na primer, sa molekulskom težinom u opsegu od 20000Da do 40000Da. ;[0153] Pogodni polimeri uklјučuju polialkilenski polimer, kao što je poli(etilenglikol) ili, posebno, metoksipoli(etilenglikol) ili njegov derivat, a naročito sa molekulskom težinom u opsegu od oko 15000Da do oko 40000Da. ;[0154] U jednom primeru, antitela za upotrebu u predmetnom pronalasku su vezana za ostatke poli(etilenglikola) (PEG). U jednom konkretnom primeru, antitelo je fragment antitela, a PEG molekuli mogu biti vezani preko bilo koje dostupne bočne ili terminalne aminokiselinske funkcionalne grupe u okviru aminokiselina koja se nalazi u fragmentu antitela, na primer, preko bilo koje slobodne amino, imino, tiolne, hidroksilne ili karboksilne grupe. Takve aminokiseline se mogu javljati prirodno u fragmentu antitela ili mogu biti ugrađene u fragment postupcima za rekombinantnu DNK (pogledati, na primer, US 5,219,996; US 5,667,425; WO98/25971, WO2008/038024). U jednom primeru, molekul antitela predmetnog pronalaska je modifikovani Fab fragment, gde modifikacija predstavlja adiciju jedne ili više aminokiselina na C-terminalni kraj njegovog teškog lanca da bi se omogućilo vezivanje efektorskog molekula. Pogodno je da dodatne aminokiseline formiraju modifikovani zglobni region koji sadrži jedan ili više cisteinskih ostataka na koje se može vezati efektorski molekul. Višestruka mesta mogu biti upotrebljena za vezivanje dva ili više PEG molekula. ;[0155] Pogodni PEG molekuli su kovalentno povezane preko tiolne grupe najmanje jednog cisteinskog ostatka koji se nalazi u fragmentu antitela. Svaka polimerni molekul koji je vezan za modifikovani fragment antitela može biti kovalentno povezan za atom sumpora iz ostatka cisteina koji se nalazi u fragmentu. Kovalentna veza će generalno biti disulfidna veza ili, konkretnije, veza sumpor-uglјenik. Tamo gde se tiol grupa koristi kao tačka vezivanja, mogu biti upotrebljene odgovarajuće aktivirani efektorski molekuli, na primer, tiol selektivni derivati kao što su maleimidi i cisteinski derivati. Aktivni polimer može biti upotrebljen kao polazni materijal u pripremi fragmenata antitela koji su modifikovani polimerom, kao što je prethodno opisano. Aktivirani polimer može biti bilo koji polimer koji sadrži tiolnu reaktivnu grupu, kao što je α-halokarboksilna kiselina ili estar, npr. jodoacetamid, imid, npr. maleimid, vinil sulfon ili disulfid. Takvi početni materijali mogu biti nabavljeni komercijalno (na primer, od firme Nektar, ranije Shearwater Polymers Inc., Huntsville, AL, SAD) ili mogu biti pripremlјeni od komercijalno dostupnih početnih materijala upotrebom konvencionalnih hemijskih procedura. Posebni PEG molekuli uklјučuju 20K metoksi-PEG-amin (koji se može nabaviti od firmi Nektar, ranije Shearwater; Rapp Polymere; i SunBio) i M-PEG-SPA (koji se može nabaviti od firme Nektar, ranije Shearwater). ;[0156] U jednom primeru izvođenja, antitelo je modifikovani Fab fragment, Fab’ fragment ili diFab koji je PEGilovan, tj. sadrži PEG (poli(etilenglikol)) kovalentno vezan za njega, npr. u skladu sa postupkom koji je opisan u EP 0948544 ili EP1090037 [takođe pogledati "Poly(ethyleneglycol) Chemistry, Biotechnical and Biomedical Applications", 1992, J. Milton Harris (ur.), Plenum Press, New York, "Poly(ethyleneglycol) Chemistry and Biological Applications", 1997, J. Milton Harris i S. Zalipsky (ur.), American Chemical Society, Washington DC i "Bioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciences", 1998, M. Aslam i A. Dent, Grove Publishers, New York; Chapman, A. 2002, Advanced Drug Delivery Reviews 2002, 54:531-545]. U jednom primeru, PEG je vezan za cistein zglobnog regiona. U jednom primeru, PEG modifikovani Fab fragment sadrži maleimidnu grupu kovalentno vezanu za jednu tiolnu grupu u modifikovanom zglobnom regionu. Lizinski ostatak može biti kovalentno vezan za maleimidnu grupu, a za svaku od aminskih grupa na lizinskom ostatku može biti vezan metoksipoli(etilenglikolni) polimer sa molekulskom težinom od približno 20,000Da. Ukupna molekulska težina PEG koji je vezana za Fab fragment može stoga iznositi približno 40,000Da. ;[0157] Posebni PEG molekuli uklјučuju lizin modifikovan sa 2-[3-(N-maleimido)propionamido]etil amidom N,N'-bis(metoksipoli(etilen glikola) MW 20,000), poznat i kao PEG2MAL40K (koji se može nabaviti od firme Nektar, ranije Shearwater). ;[0158] Alternativni izvori PEG linkera uključuju NOF koji obezbeđuje GL2-400MA3 (gde m u strukturi koja je prikazana ispod iznosi 5) i GL2-400MA (gde je m 2) i n je približno 450: ;;; ;; m je 2 ili 5 ;;[0159] To znači da je svaki PEG oko 20,000Da. ;[0160] Shodno navedenom, u jednom primeru izvođenja, PEG je 2,3-bis(metilpolioksietilen-oksi)-1-{[3-(6-maleimido-1-oksoheksil)amino]propiloksi}heksan (2-krako razgranati PEG, -CH2) 3NHCO(CH2)5-MAL, Mw 40,000 poznat kao SUNBRIGHT GL2-400MA3. ;[0161] Ostale alternative efektorskih molekula sa PEG sledećeg tipa: ;;; ; su dostupne od dr Reddy-ja, NOF i Jenkem. ;[0162] U jednom primeru izvođenja, obezbeđeno je antitelo koje je PEGilovano (na primer, sa ovde opisanim PEG), vezivanjem preko aminokiselinskog ostatka cisteina na ili oko aminokiseline na poziciji 226 u lancu, na primer, za aminokiselinu na poziciji 226 teškog lanca (sekvencijalna numeracija), na primer, za aminokiselinu 226 iz SEQ ID NO: 36. ;[0163] U jednom primeru izvođenja, predmetni opis obezbeđuje Fab' PEG molekul koji sadrži jedan ili više PEG polimera, na primer, 1 ili 2 polimera kao što su polimer ili polimeri od 40kDa. ;[0164] Fab'-PEG molekuli u skladu sa predmetnim opisom mogu biti posebno korisni iz razloga što imaju poluživot koji je nezavisan od Fc fragmenta. U jednom primeru, predmetni pronalazak obezbeđuje anti-FcRn antitelo ili njegov vezujući fragment koji vezuje FcRn, kao što je ovde definisano, za upotrebu u postupku lečenja bolesti ublažene blokiranjem humanog FcRn, koji se sastoji od primene terapijski efektivne količine anti-FcRn antitela ili njegovog vezujućeg fragmenta, pri čemu antitelo ili njegov vezujući fragment ima poluživot koji je nezavisan od vezivanja Fc za FcRn. ;[0165] U jednom primeru izvođenja, obezbeđen je Fab’ konjugovan sa polimerom kao što je PEG molekul, molekul skroba ili molekul albumina. ;[0166] U jednom primeru izvođenja, obezbeđen je scFv konjugovan sa polimerom kao što je PEG molekul, molekul skroba ili molekul albumina. ;[0167] U jednom primeru izvođenja, antitelo ili fragment je konjugovano sa molekulom skroba, na primer, da bi se povećao poluživot. Postupci konjugacije skroba sa proteinom kao što je opisano u US 8,017,739. ;[0168] U jednom primeru izvođenja, obezbeđen je anti-FcRn vezujući molekul koji: ;;● Poruzrokuje smanjenje koncentracije IgG u plazmi od 70%, ;● Sa ne više od 20% smanjenja koncentracije albumina u plazmi, i/ili ;● Sa mogućnošću ponovnog doziranja da bi se postiglo dugoročno održavanje niske koncentracije IgG-a u plazmi. ;;[0169] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje izolovanu sekvencu DNK koja kodira teški i/ili laki lanac/lance molekula antitela predmetnog pronalaska. Pogodno je da sekvenca DNK kodira teški ili laki lanac molekula antitela predmetnog pronalaska. DNK sekvenca predmetnog pronalaska može sadržavati sintetsku DNK, na primer, dobijenu hemijskom obradom, cDNK, genomsku DNK ili bilo koju njihovu kombinaciju. ;[0170] DNK sekvence koje kodiraju molekul antitela predmetnog pronalaska mogu biti dobijene postupcima koji su dobro poznati stručnjacima. Na primer, sekvence DNK koje kodiraju za deo ili sve teške i lake lance antitela mogu biti sintetisane po želјi iz određenih sekvenci DNK ili na osnovu odgovarajućih aminokiselinskih sekvenci. ;[0171] DNK koja kodira akceptorske uokvirujuće sekvence je široko dostupna stručnjacima i može se lako sintetisati na osnovu njihovih poznatih aminokiselinskih sekvenci. ;[0172] Standardne tehnike molekularne biologije mogu biti upotrebljene za pripremu sekvenci DNK koje kodiraju molekul antitela predmetnog pronalaska. Želјene DNK sekvence mogu biti sintetisane u potpunosti ili delimično upotrebom tehnika sinteze oligonukleotida. Kao odgovarajuće, mogu biti upotrebljene i tehnike cilјane mutageneze i lančana reakcija polimeraze (PCR). ;[0173] Ovde su obezbeđeni primeri pogodnih sekvenci DNK. ;[0174] Primeri pogodnih sekvenci DNK koje kodiraju varijabilni region lakog lanca 1519 su obezbeđeni u SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 i SEQ ID NO: 90. Primeri pogodnih sekvenci DNK koje kodiraju varijabilni region teškog lanca 1519 su obezbeđeni u SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 i SEQ ID NO: 92. ;[0175] Primeri pogodnih sekvenci DNK koje kodiraju laki lanac 1519 (varijabilne i konstatne regione) su obezbeđeni u SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 75 i SEQ ID NO: 91. ;[0176] Primeri pogodnih sekvenci DNK koje kodiraju teški lanac 1519 (varijabilne i konstatne regione, u zavisnosti od formata) su obezbeđeni u SEQ ID NO: 37, 38 i 76 (Fab’), SEQ ID NO: 72 ili 85 (IgG1), SEQ ID NO: 44 ili 93 (IgG4P) i SEQ ID: 88 (IgG4). ;[0177] U skladu sa navedenim, u jednom primeru, predmetni pronalazak obezbeđuje izolovanu sekvencu DNK koja kodira teški lanac Fab’ fragmenta antitela predmetnog pronalaska i sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 37. Takođe je obezbeđena izolovana sekvenca DNK koja kodira laki lanac Fab fragmenta antitela predmetnog pronalaska koja sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 23. ;[0178] U jednom primeru, predmetni pronalazak obezbeđuje izolovanu sekvencu DNK koja kodira teški lanac i laki lanac IgG4(P) antitela predmetnog pronalaska, u kojoj DNK koja kodira teški lanac sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 44 ili SEQ ID NO: 93, dok DNK koja kodira laki lanac sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 75 ili SEQ ID NO: 91. ;[0179] U jednom primeru, predmetni pronalazak obezbeđuje izolovanu sekvencu DNK koja kodira teški lanac i laki lanac Fab-dsFv antitela predmetnog pronalaska u kojoj DNK koja kodira teški lanac sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 51 ili SEQ ID NO: 80, a DNK koja kodira laki lanac sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 47 ili SEQ ID NO: 79. ;[0180] Predmetni pronalazak se takođe odnosi na vektor za kloniranje ili ekspresiju koji sadrži jednu ili više sekvenci DNK predmetnog pronalaska. Prema tome, obezbeđen je vektor za kloniranje ili ekspresiju koji sadrži jednu ili više sekvenci DNK koje kodiraju antitelo predmetnog pronalaska. Pogodno je da vektor za kloniranje ili ekspresiju sadrži dve sekvence DNK koje kodiraju laki lanac i teški lanac molekula antitela predmetnog pronalaska, tim redom, kao i odgovarajuće signalne sekvence. U jednom primeru, vektor sadrži intergensku sekvencu između teških i lakih lanaca (pogledati WO03/048208). ;[0181] Opšti postupci kojima se mogu konstruisati vektori, kao i postupci transfekcije i postupci gajenja u kulturi su dobro poznati stručnjacima. U tom smislu, upućuje se na "Current Protocols in Molecular Biology", 1999, F. M. Ausubel (ur.), Wiley Interscience, New York i Maniatis Manual koji štampa Cold Spring Harbor Publishing. ;[0182] Takođe je obezbeđena ćelija domaćin koja sadrži jedan ili više vektora za kloniranje ili ekspresiju koji sadrže jednu ili više sekvenci DNK koje kodiraju antitelo predmetnog pronalaska. Bilo koji pogodan sistem ćelija domaćina/vektora može biti upotrebljen za ekspresiju sekvenci DNK koje kodiraju molekul antitela predmetnog pronalaska. Bakterijski, na primer, E. coli, i drugi mikrobni sistemi mogu biti upotrebljeni ili eukariotski, na primer, sisarski, ekspresioni sistemi ćelija domaćina se takođe mogu upotrebiti. Pogodne ćelije domaćini sisara uklјučuju CHO, ćelije mijeloma ili hibridoma. ;[0183] Pogodni tipovi ćelija jajnika kineskog hrčka (CHO ćelije) za upotrebu u predmetnom pronalasku mogu uklјučivati CHO i CHO-K1 ćelije, uklјučujući dhfr-CHO ćelije kao što su CHO-DG44 ćelije i CHO-DXB11 ćelije, koje mogu biti upotrebljene sa selektivnim markerom DHFR, ili CHOK1-SV ćelije koje mogu biti upotrebljene sa glutamin sintetazom kao selektivnim markerom. Drugi tipovi ćelija za upotrebu u ekspresiji antitela uklјučuju limfocitne ćelijske linije, npr. NSO ćelije mijeloma i SP2 ćelije, COS ćelije. ;[0184] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje proces proizvodnje molekula antitela u skladu sa predmetnim pronalaskom koji obuhvata gajenje ćelije domaćina koja sadrži vektor predmetnog pronalaska u kulturi, pod uslovima koji su pogodni za usmerenu ekspresiju proteina sa DNK koja kodira molekul antitela predmetnog pronalaska, kao i izolaciju molekula antitela. ;[0185] Molekul antitela može sadržavati samo polipeptid teškog ili lakog lanca, a u tom slučaju je za transfekciju ćelija domaćina potrebna upotreba samo sekvence koja kodira polipeptid teškog lanca ili lakog lanca. Za proizvodnju produkata koji sadrže i teške i lake lance, ćelijska linija može biti transfektovana sa dva vektora, prvim vektorom koji kodira polipeptid lakog lanca i drugim vektorom koji kodira polipeptid teškog lanca. Alternativno, može biti upotrebljene jedan vektor, vektor koji sadrži sekvence koje kodiraju polipeptide lakog lanca i teškog lanca. ;[0186] Antitela i fragmenti u skladu sa predmetnim pronalaskom se eksprimiraju iz ćelija domaćina u dobrim nivoima. Prema tome, svojstva antitela i/ili fragmenata su odgovarajuća za komercijalnu obradu. ;[0187] U skladu sa navedenim, obezbeđen je postupak za kultivisanje ćelije domaćina i ekspresiju antitela ili njegovog fragmenta, izolovanje drugonavedenog i po izboru prečišćavanje istog da bi se dobilo izolovano antitelo ili fragment. U jednom primeru izvođenja, postupak dalјe obuhvata korak konjugacije efektorskog molekula sa izolovanim antitelom ili fragmentom, na primer, konjugacijom sa PEG polimerom, pre svega na način koji je ovde opisan. ;[0188] Obezbeđen je postupak za prečišćavanje antitela (posebno antitela ili fragmenta u skladu sa opisom) koji obuhvata korake: izvođenje hromatografije sa anjonskom izmenom u režimu nevezivanja, tako da se nečistoće zadržavaju na koloni, a antitelo eluira. ;[0189] U jednom aspektu prema opisu, prečišćavanje koristi afinitetno zadržavanje na FcRn koloni. ;[0190] U jednom aspektu prema opisu, prečišćavanje koristi cibakron plavu ili slično za prečišćavanje od fuzija albumina ili molekula konjugata. ;[0191] Pogodne jonoizmenjivačke smole za upotrebu u procesu uklјučuju Q.FF smolu (dobavljač je GE-Healthcare). Korak se može, na primer, izvesti na pH oko 8. ;[0192] Proces može dalјe sadržavati početni korak “hvatanja” u kome se koristi hromatografija sa kationskom izmenom, koja se izvodi na primer, pri pH od oko 4 do 5, kao što je 4,5. Hromatografija sa kationskom izmenom može, na primer, koristi smolu kao što je CaptoS smola ili SP sefaroza FF (dobavlјač je GE-Healthcare). Antitelo ili fragment se zatim može eluirati sa smole upotrebom jonskog rastvora soli kao što je natrijum hlorid, na primer, u koncentraciji od 200 mM. ;[0193] Dakle, korak ili koraci hromatografije mogu uklјučivati jedan ili više koraka ispiranja, prema potrebi. ;[0194] Proces prečišćavanja može takođe uključiti jedan ili više koraka filtriranja, kao što je korak dijafiltracije. ;[0195] Shodno navedenom, u jednom primeru izvođenja je obezbeđeno prečišćeno anti-FcRn antitelo ili fragment, na primer, humanizovano antitelo ili fragment, a naročito antitelo ili fragment u skladu sa pronalaskom, u suštinski prečišćenom obliku, preciznije, oslobođeno ili suštinski bez endotoksina i/ili proteina ili DNK ćelije domaćina. ;[0196] Termin “prečišćeni oblik”, koji se upotrebljava kao što je prethodno navedeno, je predviđen da se odnosi na čistoću od najmanje 90%, kao što su 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% w/w ili više. ;[0197] Predviđeno je da se termin suštinski oslobođen od endotoksina odnosi na sadržaj endotoksina od 1 EU ili manje po mg proizvoda antitela, kao što je 0,5 ili 0,1 EU po mg proizvoda. ;[0198] Predviđeno je da se termin suštinski oslobođen od proteina ili DNK ćelija domaćina obično odnosi na proteinski i/ili sadržaj DNK ćelije domaćina od 400 µg ili manje po mg proizvoda antitela, kao što je 100 µg po mg ili manje, a posebno 20 ug po mg, prema potrebi. ;[0199] Molekul antitela predmetnog pronalaska se takođe može koristiti u dijagnostici, na primer, u in vivo dijagnostici i medicinskim snimanjima bolesnih stanja u koje je uključen FcRn. ;[0200] Kako su antitela predmetnog pronalaska od koristi u tretmanu i/ili profilaksi patološkog stanja, predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži molekul antitela predmetnog pronalaska u kombinaciji sa jednim ili sa više farmaceutski prihvatlјivih ekscipijensa, razblaživača ili nosača. Shodno tome, obezbeđena je upotreba molekula antitela opisa za proizvodnju medikamenta. Kompozicija će obično biti dostavljena kao deo sterilne farmaceutske kompozicije koja će normalno uklјučivati farmaceutski prihvatlјiv nosač. Farmaceutska kompozicija predmetnog pronalaska može dodatno sadržavati farmaceutski prihvatlјiv ekscipijens. ;[0201] Predmetni opis takođe obezbeđuje postupak pripreme farmaceutske ili dijagnostičke kompozicije koji se sastoji od dodavanja i mešanja molekula antitela predmetnog pronalaska zajedno sa jednim ili sa više od farmaceutski prihvatlјivih ekscipijensa, razblaživača ili nosača. ;[0202] Molekul antitela može biti jedini aktivni sastojak u farmaceutskoj ili dijagnostičkoj kompoziciji ili može biti udružen sa drugim aktivnim sastojcima, uklјučujući druge sastojke tipa antitela ili sastojke koji nisu antitela kao što su steroidi ili drugi molekuli lekova i posebno molekuli lekova čiji je poluživot nezavisan od vezivanja FcRn. ;[0203] Farmaceutske kompozicije pogodno sadrže terapijski efektivnu količinu antitela pronalaska. Termin "terapijski efektivna količina", kako se ovde upotrebljava, se odnosi na količinu terapijskog agensa koja je potrebna za lečenje, ublažavanje ili prevenciju cilјanog obolјenja ili stanja, ili za ispoljavanje terapijskog ili preventivnog efekta koji se može detektovati. Za bilo koje antitelo, terapijski efektivna količina može biti određena inicijalno ili u testovima u kulturi ćelija ili upotrebom animalnih modela, obično na glodarima, zečevima, psima, svinjama ili kod primata. Animalni model takođe može biti upotrebljen da se odredi odgovarajući opseg koncentracija i način primene. Ovakve informacije se zatim mogu upotrebiti za određivanje korisnih doza i načina primene kod lјudi. ;[0204] Precizna terapijski efektivna količina za humanog subjekta će zavisiti od ozbiljnosti bolesnog stanja, opšteg zdravlјa subjekta, starosti, težine i pola subjekta, ishrane, vremena i učestalosti primene, kombinacije/kombinacija lekova, reakcije osjetlјivosti i tolerancije/odgovora na terapiju. Ova količina se može uvrditi rutinskim eksperimentima i na osnovu procene kliničara. Generalno, terapijski efektivna količina će biti od 0,01 mg/kg do 500 mg/kg, na primer, od 0,1 mg/kg do 200 mg/kg, kao što je 100 mg/kg. Farmaceutske kompozicije mogu biti konvencionalno pripremljene kao jedinični dozni oblici koji sadrže prethodno određenu količinu aktivnog agensa pronalaska po dozi. ;[0205] Terapijske doze antitela u skladu sa predmetnim pronalaskom ne pokazuju očigledne toksikološke efekte in vivo. ;[0206] U jednom primeru izvođenja antitela ili fragmenta u skladu sa pronalaskom, pojedinačna doza može obezbediti smanjenje u nivoima cirkulišućeg IgG do 70%. ;[0207] Maksimalna terapijska redukcija u cirkulišućem IgG-u može biti uočena oko 1 nedelјe nakon primene odgovarajuće terapijske doze. Nivoi IgG-a se mogu oporaviti tokom perioda od šest nedelјa, ukoliko se ne isporuče dodatne terapijske doze. ;[0208] Prednost je što se nivoi IgG-a in vivo mogu održavati na odgovarajućem niskom nivou primenom sekvencijalnih doza antitela ili fragmenata prema opisu. ;[0209] Kompozicije mogu biti primenjen pacijentu samostalno ili mogu biti primenjene u kombinaciji (npr. istovremeno, sekvencijalno ili odvojeno) sa drugim agensima, lekovima ili hormonima. ;[0210] U jednom primeru izvođenja, antitela ili fragmenti u skladu sa predmetnim pronalaskom se upotreblјavaju uz imunosupresivnu terapiju, kao što je primena steroda, naročito prednizona. ;[0211] U jednom primeru izvođenja, antitela ili fragmenti u skladu sa predmetnim pronalaskom se upotreblјavaju uz Rituksimab ili druge terapije za B ćelije. ;[0212] U jednom primeru izvođenja, antitela ili fragmenti u skladu sa predmetnim pronalaskom se upotreblјavaju uz bilo koji modulatorni agens B ili T ćelija ili uz imunomodulator. Primeri uklјučuju metotreksat, mikrofenolat i azatioprin. ;[0213] Doza u kojoj se primenjuje molekul antitela predmetnog pronalaska zavisiće od prirode stanja koje treba lečiti, obima prisutne inflamacije i od toga da li se molekul antitela koristi profilaktički ili da se leči postojeće stanje. ;[0214] Učestalost doze će zavisiti od poluživota molekula antitela i trajanja njegovog efekta. Ukoliko molekul antitela ima kratak poluživot (npr.2 do 10 sati), može biti neophodno da se daje jedna ili više doza dnevno. Alternativno, ukoliko molekul antitela ima dug poluživot (npr. 2 do 15 dana) i/ili dugotrajan farmakodinamički profil (PD), može biti potrebno da se primenjuje samo jedna doza dnevno, jednom nedelјno ili čak jednom na svakih 1 ili 2 meseca. ;[0215] U jednom primeru izvođenja, doza se isporučuje na dve nedelje, tj. dva puta mesečno. ;[0216] Predviđeno je da se termin “poluživot”, kako se ovde upotrebljava, odnosi na trajanje molekula u cirkulaciji, na primer, u serumu/plazmi. ;[0217] Farmakodinamika, kako se ovde koristi, se odnosi na profil i posebno na trajanje biološkog dejstva molekula u skladu sa predmetnim opisom. ;[0218] Farmaceutski prihvatlјiv nosač ne bi trebao da sam po sebi indukuje proizvodnju antitela koja bi bila štetna za osobu koja prima kompoziciju, a ne bi trebao ni da bude toksičan. Pogodni nosači mogu biti veliki, sporo metabolišući makromolekuli kao što su proteini, polipeptidi, lipozomi, polisaharidi, polilaktične kiseline, poliglikolne kiseline, polimerne aminokiseline, kopolimeri aminokiselina i neaktivne čestice virusa. ;[0219] Mogu biti upotrebljene farmaceutski prihvatlјive soli, na primer, soli mineralnih kiselina, kao što su hidrohloridi, hidrobromidi, fosfati i sulfati, ili soli organskih kiselina kao što su acetati, propionati, malonati i benzoati. ;[0220] Farmaceutski prihvatlјivi nosači u terapijskim kompozicijama mogu dodatno sadržavati tečnosti kao što su voda, fiziološki rastvor, glicerol i etanol. Dodatno, u takvim kompozicijama mogu biti prisutne pomoćne supstance, kao što su agensi za vlaženje ili emulgovanje ili pH puferske supstance. Ovakvi nosači omogućavaju da farmaceutske kompozicije budu formulisane kao tablete, pilule, dražee, kapsule, tečnosti, gelovi, sirupi, kaše i suspenzije koje pacijent može progutati. ;[0221] Pogodni oblici za primenu uklјučuju oblike pogodne za parenteralno davanje, npr. injekcijom ili infuzijom, na primer, bolusnom injekcijom ili kontinuiranom infuzijom. Kada je proizvod namenjen za injekciju ili infuziju, on može biti u obliku suspenzije, rastvora ili emulzije u ulјanom ili vodenom nosaču i može sadržavati agense za formulisanje, kao što su sredstva za resuspendovanje, konzervansi, agensi za stabilizaciju i/ili disperziju. Alternativno, molekul antitela može biti u suvom obliku, za rekonstituciju sa odgovarajućom sterilnom tečnošću pre upotrebe. ;[0222] Jednom formulisane, kompozicije pronalaska mogu biti direktno primenjene subjektu. Subjekti koji se tretiraju mogu biti životinje. Međutim, u jednom ili u više primera izvođenja, kompozicije su prilagođene za primenu lјudima. ;[0223] Pogodno je da u formulacijama u skladu sa predmetnim pronalaskom, pH konačne formulacije nije sličan vrednosti izoelektrične tačke antitela ili fragmenta, na primer, ukoliko je pl proteina u opsegu 8-9 ili iznad, može biti prikladno da pH formulacije bude 7. Iako bez želje da bude vezano za teoriju, smatra se da navedeno može na kraju obezbediti konačnu formulaciju sa pobolјšanom stabilnošću, na primer, tako da antitelo ili fragment ostaju u rastvoru. ;[0224] U jednom primeru, farmaceutska formulacija za pH u opsegu od 4,0 do 7,0 sadrži: 1 do 200 mg/mL molekula antitela u skladu sa predmetnim pronalaskom, 1 do 100 mM pufera, 0,001 do 1% surfaktanta, a) 10 do 500 mM stabilizatora, b) 10 do 500 mM stabilizatora i 5 do 500 mM agensa za toničnost ili c) 5 do 500 mM agensa za toničnost. ;[0225] Farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska se mogu primenjivati bilo kojim brojem od načina primene, uklјučujući, ali se ne ograničavajući na, oralni, intravenski, intramuskularni, intraarterijski, intramedularni, intratekalni, intraventrikularni, transdermalni, transkutani (na primer, pogledati WO98/20734), subkutani, intraperitonealni, intranazalni, enteralni, topikalni, sublingvalni, intravaginalni ili rektalni. Hiposprejevi mogu takođe biti upotrebljeni za primenu farmaceutskih kompozicija pronalaska. Obično, terapijske kompozicije mogu biti pripremlјene kao injektabilne, bilo kao tečni rastvori ili suspenzije. Takođe mogu biti pripremljeni čvrsti oblici za rastvaranje ili resuspendovanje u tečnom nosaču pre injeciranja. ;[0226] Direktna isporuka kompozicija će se generalno postići ubrizgavanjem, subkutano, intraperitonealno, intravenski ili intramuskularno, ili isporučiti u intersticijski prostor tkiva. Kompozicije se takođe mogu primeniti u leziju. Doziranje može biti po rasporedu tipa jednokratne doze ili po rasporedu tipa višestrukih doza. ;[0227] Podrazumeva se da će aktivni sastojak u kompoziciji biti molekul antitela. Kao takav, biće podložan degradaciji u gastrointestinalnom traktu. Prema tome, ukoliko se kompozicija primenjuje putem koji upotrebljava gastrointestinalni trakt, kompozicija će morati da sadrži agense koji štite antitelo od degradacije, ali koji oslobađaju antitelo jednom kada se apsorbuje iz gastrointestinalnog trakta. ;[0228] Detalјna diskusija o farmaceutski prihvatlјivim nosačima je dostupna u Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, N.J.1991). ;[0229] U jednom primeru izvođenja, formulacija je obezbeđena kao formulacija za topikalnu primenu, uklјučujući inhalaciju. ;[0230] Pogodni inhalacioni preparati uklјučuju praškove za inhalaciju, aerosole sa doziranjem koji sadrže potisne gasove ili inhalacione rastvore bez potisnih gasova. Inhalacioni praškovi opisa koji sadrže aktivnu supstancu, mogu se sastojati isklјučivo od prethodno navedenih aktivnih supstanci ili od smeše prethodno navedenih aktivnih supstanci sa fiziološki prihvatlјivim ekscipijensom. ;[0231] Navedeni inhalacioni praškovi mogu uklјučivati monosaharide (npr. glukozu ili arabinozu), disaharide (npr. laktozu, saharozu, maltozu), oligo- i polisaharide (npr. dekstrane), polialkohole (npr. sorbitol, manitol, ksilitol), soli (npr. natrijum hlorid, kalcijum karbonat) ili njihove smeše jednih sa drugima. Pogodno je da se koriste mono- ili disaharidi, tj. poželjna je upotreba laktoze ili glukoze, naročito, ali ne isklјučivo, u obliku njihovih hidrata. ;[0232] Čestice za taloženje u plućima zahtevaju veličinu čestica manju od 10 mikrona, kao što je 1-9 mikrona, na primer, od 1 do 5 µm. Veličina čestica aktivnog sastojka (kao što je antitelo ili fragment) je od primarne važnosti. ;[0233] Potisni gasovi koji mogu biti upotrebljeni za pripremu inhalacionih aerosola su poznati u stanju tehnike. Pogodni potisni gasovi se biraju između uglјovodonika kao što su n-propan, n-butan ili izobutan i halohidrouglјikovodika kao što su hlorisani i/ili fluorisani derivati metana, etana, propana, butana, ciklopropana ili ciklobutana. Prethodno navedeni potisni gasovi mogu biti upotrebljeni samostalno ili u njihovim smešama. ;[0234] Naročito pogodni potisni gasovi su halogenisani derivati alkana izabrani između TG 11, TG 12, TG 134a i TG227. Od prethodno navedenih halogenovanih uglјovodonika, posebno su pogodni TG134a (1,1,1,2-tetrafluoroetan) i TG227 (1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropan) i njihove smeše. ;[0235] Aerosoli za inhalaciju koji sadrže potisni gas takođe mogu sadržavati i druge sastojke kao što su ko-rastvarači, stabilizatori, površinski aktivna sredstva (surfaktanti), antioksidansi, lubrikanti i sredstva za podešavanje pH. Svi ovi sastojci su poznati u stanju tehnike. ;[0236] Aerosoli za inhalaciju koji sadrže potisni gas prema opisu, mogu sadržavati do 5% težine aktivne supstance. Aerosoli prema opisu sadrže, na primer, od 0,002 do 5 težinskih%, od 0,01 do 3 težinskih%, od 0,015 do 2 težinskih%, od 0,1 do 2 težinskih%, od 0,5 do 2 težinskih% ili od 0,5 do 1 težinskih% aktivnog sastojka. ;[0237] Alternativno, topikalna primena u pluća može biti i primenom tečnog rastvora ili suspenzije formulacije, na primer, upotrebom uređaja kao što je nebulizator, na primer, nebulizator koji je povezan sa kompresorom (npr. Pari LC-Jet Plus(R) nebulizator povezan sa kompresorom tipa Pari Master(R) proizveden od strane firme Pari Respiratory Equipment, Inc., Richmond, VA). ;[0238] Antitelo pronalaska može biti isporučeno dispergovano u rastvaraču, npr. u obliku rastvora ili suspenzije. Može biti resuspendovano u odgovarajućem fiziološkom rastvoru, npr. slanom rastvoru ili drugom farmakološki prihvatlјivom rastvaraču ili puferisanom rastvoru. U stanju tehnike poznati puferisani rastvori mogu sadržavati 0,05 mg do 0,15 mg dinatrijum edetata, 8,0 mg do 9,0 mg NaCl, 0,15 mg do 0,25 mg polisorbata, 0,25 mg do 0,30 mg anhidrovane limunske kiseline i 0,45 mg do 0,55 mg natrijum citrata u 1 ml vode, tako da se postigne pH od oko 4,0 do 5,0. Suspenzija može upotrebljavati, na primer, liofilizovano antitelo. ;[0239] Terapijske suspenzije ili formulacije rastvora mogu takođe sadržavati jedan ili više ekscipijenasa. Ekscipijensi su dobro poznati u stanju tehnike i uklјučuju pufere (npr. citratni pufer, fosfatni pufer, acetatni pufer i bikarbonatni pufer), aminokiseline, ureu, alkohole, askorbinsku kiselinu, fosfolipide, proteine (npr. serumski albumin), EDTA, natrijum hlorid, lipozome, manitol, sorbitol i glicerol. Rastvori ili suspenzije mogu biti inkapsulirani u lipozome ili biorazgradive mikrosfere. Formulacija će generalno biti obezbeđena u suštinski sterilnom obliku, upotrebom procesa sterilne proizvodnje. ;[0240] Navedeno može uklјučivati proizvodnju i sterilizaciju putem filtriranja puferisanog rastvarača/rastvora koji se upotrevljava za formulaciju, aseptičnog resuspendovanja antitela u sterilnom puferisanom rastvoru rastvarača, kao i dispergovanje formulacije u sterilne posude, postupcima koji su poznati prosečno iskusnom stručnjaku. ;[0241] Formulacija za raspršivanje u skladu sa predmetnim pronalaskom se može obezbediti, na primer, u vidu pojedinačnih doznih jedinica (npr. u zaptivenim plastičnim posudama ili bočicama), upakovanih u omotače od folije. Svaka bočica će sadržavati jediničnu dozu u zapremini od, npr.2 mL puferskog rastvarača/rastvora. ;[0242] Antitela koja su ovde opisana mogu biti pogodna za isporuku putem nebulizacije. ;[0243] Takođe je predviđeno da se antitelo predmetnog pronalaska može primeniti upotrebom genske terapije. Da bi se to postiglo, sekvence DNK koje kodiraju teške i lake lance molekula antitela pod kontrolom odgovarajućih DNK komponenti se uvode u pacijenta tako da se lanci antitela eksprimiraju sa sekvenci DNK i sastavlјaju in situ. ;[0244] Predmetni opis takođe obezbeđuje molekul antitela (ili kompozicije koje ga sadrže) za upotrebu u kontroli autoimunih oboljenja kao što su, na primer, akutni diseminovani encefalomijelitis (ADEM), akutni nekrotizirajući hemoragični leukoencefalitis, Adisonova bolest, agamaglobulinemija, alopecija areata, amiloidoza, vaskulitis udružen sa ANCA, ankilozirajući spondilitis, anti-GBM/Anti-TBM nefritis, antifosfolipidni sindrom (APS), autoimuni angioedem, autoimuna aplastična anemija, autoimuna disautonomija, autoimuni hepatitis, autoimuna hiperlipidemija, autoimuna imunodeficijencija, autoimunska bolest unutrašnjeg uha (AIED), autoimuni miokarditis, autoimuni pankreatitis, autoimuna retinopatija, autoimuna trombocitopenična purpura (ATP), autoimuna bolest štitne žlezde, autoimuna koprivnjača, aksonska neuropatija, Balo bolest, Behčetova bolest, bulozni pemfigoid, kardiomiopatija, Kastlemanova bolest, celijakija, Šagasova bolest, hronična inflamatorna demijelinizaciona polineuropatija (CIDP), hronični rekurentni multifokalni ostomijelitis (CRMO), Churg-Strauss-ov sindrom, cikatricialni pemfigoid/benigni mukozni pemfigoid, Kronova bolest, Kogansov sindrom, bolest hladnih aglutinina, kongenitalni srčani blok, Koksaki miokarditis, CREST bolest, esencijalna mešana krioglobulinemija, demijelinizaciona neuropatija, dermatitit herpetiformis, dermatomiozitis, Devikova bolest (neuromielitis optica), dilatirana kardiomiopatija, diskoidni lupus, Dreslerov sindrom, endometrioza, eozinofilna angiocentrična fibroza, eozinofilni fasciitis, eritem nodozum, eksperimentalni alergijski encefalomijelitis, Evansov sindrom, fibrozni alveolitis, arteritis džinovskih ćelija (temporalni arteritis), glomerulonefritis, Gudpastureov sindrom, granulomatoza sa polangiitisom (GPA) pogledati Vegenerovu bolest, Gravesova bolest, Gilen-Bareov sindrom, Hašimotov encefalitis, Hašimotov tiroiditis, hemolitička anemija, Henoch-Schonlein-ova purpura, gestacijski herpes, hipogamaglobulinemija, idiopatski hipokomplementemični tubulointesticijski nefritis, idiopatska trombocitopenična purpura (ITP), IgA nefropatija, bolest povezana sa IgG4, sklerozirajuća bolest povezana sa IgG4, imunoregulatorni lipoproteini, inflamatorna aneurizma aorte, inflamatorni pseudotumour, miozitis sa inkluzionim telima, dijabetes zavisan od insulin (tipa 1), intersticijski cistitis, juvenilni artritis, juvenilni dijabetes, Kavasakijev sindrom, Kutnerov tumor, Lamber-Itonov sindrom, leukocitoklastični vaskulitis, Lichen planus, Lichen sclerosus, konjuktivitis lignose, linearna IgA bolest (LAD), lupus (SLE), lajmska bolest, hronična, medijastinalna fibroza, Menijerova bolest, mikroskopski polangiitis, Mikulicz-ev sindrom, mešovita bolest vezivnog tkiva (MCTD), Murenov čir, Mucha-Habermann-ova bolest, multifokalna fibroskleroza, multipla skleroza, mijastenija gravis, miozitis, narkolepsija, neuromielitis optika (Devikov), neutropenija, okularni cikatricijalni pemfigoid, optički neuritis, Ormondova bolest (retroperitonealna fibroza); palindromski reumatizam, PANDAS (pedijatrijski autoimuni neuropsihijatrijski poremećaji povezani sa streptokokom), paraneoplastične cerebelarne degeneracije, paraproteinemične polineuropatije, paroksizmalna noćna hemoglobinurija (PNH), Parri Romberg-ov sindrom, Parsonnage-Turner-ov sindrom, pars planitis (periferni uveitis), pemfigus vulgaris, periaortitis, periarteritis, periferna neuropatija, perivenski encefalomijelitis, perniciozna anemija, POEMS sindrom, poliarteritis nodoza, autoimuni poliglandularni sindromi tipa I, II i III, reumatska polimijalgija, polimiozitis, sindrom postmiokardijalnog infarkta, postperikardiotomski sindrom, progesteronski dermatitis, primarna bilijarna ciroza, primarni sklerozni holangitis, psorijaza, psorijatični artritis, idiopatska plućna fibroza, pioderma gangrenozum, čista aplazija eritrocita, fenomen Raynauds-a, refleksna simpatička distrofija, Rajterov sindrom, relapsni polihondritis, sindrom nemirnih nogu, retroperitonealna fibroza (Ormondova bolest), reumatska groznica, reumatoidni artritis, Riedel-ov tiroiditis, sarkoidoza, Šmitov sindrom, skleritis, skleroderma, Sjogrenov sindrom, autoimunitet sperme i testisa, sindrom ukočene osobe, subakutni bakterijski endokarditis (SBE), Sušakov sindrom, simpatička oftalmija, Takayasu-ov arteritis, temporalni arteritis/arteritis džinovskih ćelija, trombotična, trombocitopenična purpura (TTP), Tolosa-Hunt-ov sindrom, transverzalni mijelitis, ulcerozni kolitis, nediferencirana bolest vezivnog tkiva (UCTD), uveitis, vaskulitis, vezikulobulozna dermatoza, vitilgo, Valdenstromova makroglobulilinemija, topla idiopatska hemolitička anemija i Vegenerova granulomatoza (sada označena kao granulomatoza sa polangiitisom (GPA). ;[0245] U jednom primeru izvođenja, antitela ili fragmenti u skladu sa opisom se koriste u lečenju ili profilaksi epilepsije ili epileptičnih napada. ;[0246] U jednom primeru izvođenja, antitela ili fragmenti u skladu sa opisom se koriste u lečenju ili profilaksi multiple skleroze. ;[0247] U primeru izvođenja, antitela i fragmenti opisa se koriste u aloimunskim bolestima/indikacijama koje uklјučuju: ;;● Neusklađenost donora transplantacije usled anti-HLA antitela ;● Fetalnu i neonatalnu aloimunsku trombocitopeniju, FNAIT (ili neonatalnu aloimunsku trombocitopeniju, NAITP ili NAIT ili NAT, ili feto-maternalnu aloimunsku trombocitopeniju, FMAITP ili FMAIT). ;;[0248] Dodatne indikacije uklјučuju: brz klirens biofarmaceutskih lekova koji sadrže Fc kod humanih pacijenata i kombinaciju anti-FcRn terapije sa drugim terapijama - IVIg, Rituksanom, plazmaferezom. Na primer, anti-FcRn terapija može biti primenjeno nakon terapije Rituksanom. ;[0249] U primeru izvođenja, antitela i fragmenti opisa se koriste u neurološkom poremećaju kao što je: ;;● Hronična inflamatorna demijelinizaciona polineuropatija (CIDP) ;● Gilen-Bareov sindrom ;● Paraproteinemične polineuropatije ;● Neuromielitis očnog nerva (NMO, poremećaji NMO spektra ili bolesti NMO spektra), i ;● Mijastenija gravis. ;;[0250] U primeru izvođenja, antitela i fragmenti opisa se koriste u dermatološkom poremećaju, kao što je: ;;● Bulozni pemfigoid ;● Pemfigus vulgaris ;● Vaskulitis povezan sa ANCA ;● Dilataciona kardiomiopatija ;;[0251] U primeru izvođenja, antitela i fragmenti pronalaska se koriste u poremećajima u imunologiji, hematologiji kao što su: ;;● Idiopatska trombocitopenična purpura (ITP) ;● Trombotična trombocitopenična purpura (TTP) ;● Topla idiopatska hemolitička anemija ;● Gudpastureov sindrom ;● Neusklađenost donora transplantacije usled anti-HLA antitela ;;[0252] U jednom primeru izvođenja, poremećaj je izabran od mijastenije gravis, neuromijelitisa očnog nerva, CIDP, Gilen-Bareovog sindroma, para-proteinemične polineuropatije, refraktorne epilepsije, ITP/TTP, hemolitičke anemije, Gudpastureovog sindroma, neusklađenosti ABO Sistema, lupusnog nefritisa, renalnog vaskulitisa, skleroderme, fibroznog alveolitisa, dilatacione kardiomiopatije, Graveove bolesti, dijabetesa tipa 1, autoimunog dijabetesa, pemfigusa, skleroderme, lupusa, ANCA vaskulitisa, dermato-miozitisa, Sjogrenove bolesti i reumatoidnog artritisa. ;[0253] U jednom primeru izvođenja, poremećaj je izabran od autoimunih poliendokrinih sindroma tipa 1 (APECED ili Vitakerovog sindroma) i 2 (Šmitovog sindroma); univerzalne alopecije; mijastenične krize; tiroidne krize; bolesti oka povezane sa štitnom žlezdom; tiroidne oftalmopatije; autoimunog dijabetesa; encefalitisa i/ili encefalopatije povezane sa autoantitelima: pemfigusa foliaceus; bulozne epidermolize; dermatitisa herpetiformis; Sidenhamove horee; akutne motorne aksonalne neuropatije (AMAN); Miller-Fisher-ovog sindroma; multifokalne motorne neuropatije (MMN); opsoklonusa; inflamatorne miopatije; Isakovog sindroma (autoimuna neuromiotonija), paraneoplastičnih sindroma i limbičkog encefalitisa. ;[0254] Antitela i fragmenti u skladu sa predmetnim pronalaskom mogu biti upotreblјeni u lečenju ili profilaksi. ;[0255] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje postupak za smanjenje koncentracije neželјenih antitela kod individue, postupak koji obuhvata korake primene terapijski efektivne doze anti-FcRn antitela ili vezujućeg fragmenta koji je ovde opisan individui. ;[0256] Predmetni opis uključuje upotrebu antitela ili njihovih fragmenata u vidu reagensa za dijagnozu, na primer, tako što su oni konjugovani sa reporterskim molekulom. Prema tome, obezbeđeno je antitelo ili fragment iz opisa koji su obeleženi. Obezbeđena je kolona koja sadrži antitelo ili fragment iz opisa. ;[0257] U skladu sa navedenim, obezbeđeno je anti-FcRn antitelo ili vezujući fragment za korišćenje u vidu reagensa, odnosno za upotrebe kao što su: ;;1) prečišćavanje FcRn proteina (ili njegovih fragmenata) – konjugovanjem za matriks i upotrebom u vidu afinitetne kolone, ili (kao modifikovani oblik anti-FcRn) u vidu agensa za taloženje (npr. kao oblik koji je modifikovan sa domenom koga prepoznaje drugi molekul i koji može biti modifikovan dodavanjem Fc (ili proizveden kao IgG pune dužine), a koji se po izboru precipitira sa anti-Fc reagensom) ;2) detekcija i/ili kvantifikacija FcRn na ćelijama ili u ćelijama, živim ili fiksiranim (ćelije in vitro ili na presecima tkiva ili ćelija). Upotrebe u ove svrhe mogu uklјučivati kvantifikaciju FcRn kao biomarkera da bi se ispratio efekat anti-FcRn tretmana. Za ove svrhe, kandidat može biti upotrebljen u modifikovanom obliku (npr. nakon adicije Fc domena, u vidu IgG-a pune dužine, ili nakon adicije nekog drugog ostatka, u vidu genetički fuzionisanog proteina, ili u vidu hemijskog konjugata, nakon adicije fluorescentnog obeleživača koji se upotrebljava u cilju detekcije). ;3) prečišćavanje ili sortiranje ćelija koje nose FcRn, vezivanjem za kandidata koji je modifikovan na načine koji su navedeni kao primeri u (1) i (2). ;;[0258] Predmetnim pronalaskom je takođe obezbeđen test koji je pogodan za procenu sposobnosti ispitivanog molekula, kao što je molekul antitela, da blokira aktivnost FcRn, a posebno sposobnosti ćelija da recikliraju IgG. Ovakav test može biti koristan za identifikaciju inhibitora aktivnosti FcRn, kao što su molekuli antitela ili mali molekuli, i kao takav takođe može biti koristan kao test prilikom analize serija u okviru proizvodnje ovakvog inhibitora. ;[0259] Prema jednom aspektu, obezbeđen je test koji je pogodan za procenu sposobnosti ispitivanog molekula, kao što je molekul antitela, da blokira aktivnost humanog FcRn, a naročito sposobnosti humanog FcRn da reciklira IgG, pri čemu postupak obuhvata korake: ;a) nanošenje na površinu ćelija, koje su poreklom od sisara koji nije čovek i koje rekombinantno eksprimiraju alfa lanac humanog FcRn i humani β2 mikroglobulin (β2M), ;b) dovođenje ćelija u kontakt, u blago kiselim uslovima kao što je pH oko 5,9, sa molekulom koji se ispituje i IgG molekulom koji će se reciklirati od strane ćelije, tokom perioda vremena koji je dovolјan da se omogući vezivanje i ispitivanog molekula i IgG-a za FcRn, po izboru i dodavanje molekula koji se ispituje pre IgG-a koji će se reciklirati i inkubiranje tokom perioda vremena koji je dovoljan da se omogući vezivanje ispitivanog molekula za FcRn. ;c) ispiranje sa blago kiselim puferom, i ;d) detekciju količine IgG-a koji je internalizovan i/ili recikliran od strane ćelija. ;;[0260] Prema jednom aspektu, obezbeđen je test koji je pogodan za procenu sposobnosti ispitivanog molekula, kao što je molekul antitela, da blokira aktivnost humanog FcRn, a naročito sposobnosti humanog FcRn da reciklira IgG, pri čemu postupak obuhvata korake: ;;a) nanošenje na površinu ćelija, koje su poreklom od sisara koji nije čovek i koje rekombinantno eksprimiraju alfa lanac humanog FcRn i humani β2 mikroglobulin (β2M), ;b) dovođenje ćelija u kontakt, u blago kiselim uslovima kao što je pH oko 5,9, sa molekulom antitela koji se ispituje i IgG molekulom koji će se reciklirati od strane ćelije, tokom perioda vremena koji je dovolјan da se omogući vezivanje i ispitivanog molekula antitela i IgG-a za FcRn, po izboru i dodavanje molekula antitela koji se ispituje pre IgG-a koji će se reciklirati i inkubiranje tokom perioda vremena koji je dovoljan da se omogući vezivanje ispitivanog molekula antitela za FcRn. c) ispiranje sa blago kiselim puferom da bi se uklonili nevezani IgG i ispitivani molekuli antitela, i d) detekciju količine IgG-a koji je recikliran od strane ćelija. ;;[0261] Prema jednom aspektu, obezbeđen je test pogodan za procenu sposobnosti ispitivanog molekula, kao što je molekul antitela, da blokira aktivnost humanog FcRn, a naročito sposobnosti humanog FcRn da reciklira IgG, pri čemu postupak obuhvata korake: ;;a) nanošenje na površinu ćelija, koje su poreklom od sisara koji nije čovek i koje rekombinantno eksprimiraju alfa lanac humanog FcRn i humani β2 mikroglobulin (β2M), ;b) dovođenje ćelija u kontakt, u blago kiselim uslovima kao što je pH oko 5,9, sa molekulom antitela koji se ispituje i IgG molekulom koji će se reciklirati od strane ćelije, tokom perioda vremena koji je dovolјan da se omogući vezivanje i ispitivanog molekula antitela i IgG-a za FcRn, po izboru i dodavanje molekula antitela koji se ispituje pre IgG-a koji će se reciklirati i inkubiranje tokom perioda vremena koji je dovoljan da se omogući vezivanje ispitivanog molekula antitela za FcRn. c) ispiranje sa blago kiselim puferom da bi se uklonili nevezani IgG i ispitivani molekuli antitela, i d) inkubiranje ćelija u neutralnom puferu, kao što je pufer sa pH oko 7,2 ;e) detekcija količine IgG koji je recikliran od strane ćelija, određivanjem količine IgG-a koji je oslobođen u supernatant. ;;[0262] Pogodne ćelije uklјučuju Madin-Darby ćelije bubrega psa (MDCK) tipa II. Transfekcija MDCKII ćelija sa alfa lancem humanog FcRn i humanim β2 mikroglobulinom (β2M) je prethodno opisana od strane Claypool-a i saradnika, 2002, Journal of Biological Chemistry, 277, 31, 28038-28050. Ovaj rad takođe opisuje recikliranje IgG-a od strane ovako transfektovanih ćelija. ;[0263] Medijum za gajenje ćelija tokom analize sadrži kompletan medijum koji sadrži MEM (Gibco #21090-022), 1xne-esencijalne aminokiseline (Gibco 11140-035), 1xnatrijum piruvat (Gibco #11360-039) i L-glutamin (Gibco #25030-024). ;[0264] Pufer za kiselo ispiranje može biti pripremljen upotrebom HBSS+ (PAA #H15-008) i dodavanjem 1M MES da bi se postigao pH 5,9 /- 0,5. Može se dodati i oko 1% BSA (Sigma #A9647). ;[0265] Pufer za neutralno ispranje može biti pripremljen upotrebom HBSS+ (PAA #H15-008) i dodavanjem 10M Hepes-a da bi se postigao pH 7,2 /- 0,5. Može se dodati i oko 1% BSA (Sigma #A9647). ;[0266] Ispiranje ćelija kiselim puferom uklanja nevezano antitelo koje se ispituje i nevezani IgG, čime se omogućava da se izvede dalјa analiza. Kiseli uslovi upotrebljeni u koraku (b) podstiču vezivanje IgG-a za FcRn, kao i internalizaciju i recikliranje istih. ;[0267] Količina ispitivanog antitela ili fragmenta i IgG-a samo na površini ćelija može biti određena ispiranjem ćelija sa neutralnim puferom i analizom supernatanta/tečnosti nakon ispiranja, da bi se detektovala količina ispitivanog antitela ili IgG-a. Važno je da se ne koristi pufer za lizu. Da bi se odredila količina IgG-a koji je internalizovan od strane ćelija, antitelo se prvo može ukloniti sa površine ćelije, ispiranjem sa neutralnim puferom za ispiranje, nakon čega se ćelije liziraju upotrebom pufera za liziranje i potom se analizira unutrašnji sadržaj. Da bi se odredila količina IgG koju ćelije recikliraju, ćelije se inkubiraju u neutralnim uslovima tokom odgovarajućeg vremenskog perioda, a okolni pufer se analizira na sadržaj IgG-a. Ukoliko je potreban sadržaj i na površini i u unutrašnjosit, ćelije mogu biti isprane kiselim puferom za ispiranje da bi se zadržalo prisustvo antitela na površini ćelije, nakon čega slede liza ćelija i analiza kombinovanog materijala. ;[0268] Tamo gde je poželјno da se izmeri i internalizacija i recikliranje IgG-a, uzorci se analiziraju u duplikatu, a analiza internalizacije i recikliranja se rade odvojeno. ;[0269] Pogodan pufer za lizu sadrži 150 mM NaCl, 20 mM Tris, pH 7,5, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1% Triton-X 100, pri čemu se na svakih 10 ml dodaju inhibitori proteaza/inhibitori fosfata kao što je opisano u uputstvima proizvođača. ;[0270] Uobičajeno je da je IgG koji se reciklira obeležen, tako da u jednom primeru može biti upotrebljen biotinizovani humani IgG. IgG se zatim može detektovati upotrebom, na primer, streptavidinskog detektujućeg antitela obeleženog sa SulfoTagom (kao što je MSD #r32ad-5), u 25 mL MSD blokirajućeg pufera sa koncentracijom od 0,2 ug/mL. Pufer za blokiranje može sadržavati 500 mM Tris, pH 7,5.1,5M NaCl i 0,2% Tween-20 i 1,5% BSA. ;[0271] Alternativno, IgG može biti prethodno obeležen fluoroforom ili sličnim obeleživačem. ;[0272] U jednom aspektu prema opisu, pogodna površina je plastična ploča ili bunarić, kao što je ploča sa 96 bunarića ili slično, staklena ploča ili membrana. U jednom primeru, ćelije su nanete na površinu u gustini koja rezultuje obrazovanjem monosloja. ;[0273] U jednom aspektu prema opisu, test koji je ovde opisan ne podrazumeva merenje transcitoze antitela preko membrane u pravcu od vrha do dna, u prisustvu gradijenta pH, na primer, pod kiselim uslovima sa jedne strane membrane i neutralnim uslovima sa donje strani membrane. ;[0274] U jednom primeru, ispitivano antitelo ili fragment i IgG mogu biti inkubirani sa ćelijama u koraku (b) oko 1 sat, na primer, na sobnoj temperaturi i u kiselim uslovima, da bi se omogućilo vezivanje. ;[0275] U jednom primeru, ispitivano antitelo ili fragment mogu biti inkubirani sa ćelijama u koraku (b) tokom oko 1 sata, na primer, na sobnoj temperaturi i u kiselim uslovima, da bi se omogućilo vezivanje, a pre dodavanja IgG-a koji će se reciklirati. Zatim se IgG koji se reciklira od strane ćelija može inkubirati sa ćelijama u koraku (b) oko 1 sat, na primer, na sobnoj temperaturi i u kiselim uslovima, da bi se omogućilo vezivanje. ;[0276] Neutralni uslovi olakšavaju oslobađanje IgG-a u supernatant. ;[0277] U kontekstu predmetne specifikacije, predviđeno je da termin “sadrži” označava “uključujući”. ;[0278] Kada se tehnički odgovarajući primeri izvođenja pronalaska mogu kombinovati. ;[0279] Primeri izvođenja su ovde opisani tako da podrazumevaju određene karakteristike/elemente. Opis se takođe proširuje na posebne primere izvođenja koji se sastoje ili se suštinski sastoje od navedenih karakteristika/elemenata. ;[0280] Predmetni pronalazak je dalјe opisan kroz ilustracije samo u primerima koji slede, a koji se odnose na priložene slike, na kojima: ;Slika 1 prikazuje određene aminokiselinske i polinukleotidne sekvence. ;Slika 2 prikazuje poravnanja određenih sekvenci. ;Slika 3 prikazuje poređenje vezivanja na humani MDCK II za Fab' fragment u skladu sa predmetnim opisom i za njegovu PEGilovanu verziju ;Slika 4 pokazuje da Fab’ fragment u skladu sa predmetnim opisom i njegova PEGilovana verzija inhibiraju recikliranje IgG-a na MDCK II ćelijama ;Slika 5 pokazuje da PEGilovani Fab’ fragment predmetnog opisa inhibira trancitozu IgG-a u apikalno-bazolateralnom pravcu u MDCK II ćelijama ;Slika 6 prikazuje poređenje vezivanja MDCK II iz Cynomolgus majmuna za Fab’ fragment u skladu sa predmetnim opisom i za njegovu PEGilovanu verziju ;Slika 7 pokazuje da PEGilovani Fab’ fragment u skladu sa predmetnim opisom inhibira recikliranje IgG-a na MDCK II ćelijama, za njegove humane i verzije kod Cynomolgus majmuna Figura 8 pokazuje efekat jednokratne doze PEGilovanog Fab’ molekula u skladu sa opisom, na nivoe IgG-a u plazmi Cynomolgus majmuna ;Slika 9 pokazuje efekat četiri nedelјne doze PEGilovanog Fab’ molekula u skladu sa opisom, na nivoe IgG-a u plazmi ;Slika 10 predstavlja dijagramski prikaz funkcije recikliranja antitela za FcRn koja se inhibira blokirajućim proteinom ;Slika 11 prikazuje protočnu citometriju zasnovanu na testu inhibicije humanog IgG-a upotrebom prečišćenih gama 1 IgG antitela ;Slika 12 prikazuje farmakodinamiku IgG-a nakon jednokratnih/intermitentnih IV doza Fab'PEG kod normalnih Cynomolgus majmuna - 20 mg/kg, Dani 1 i 67 ;Slika 13 prikazuje farmakodinamiku IgG-a nakon ponovljenih IV doza Fab'PEG kod normalnih Cynomolgus majmuna - 4 x 20 ili 100 mg/kg nedelјno ;Slika 14 prikazuje farmakodinamiku IgG-a nakon jednokratnih/intermitentnih IV doza Fab'PEG kod normalnih Cynomolgus majmuna - 20 mg/kg i 100 mg/kg dana 1 i 67 ;Slika 15 pokazuje nivoe IgG-a u plazmi kod 4 Cynomolgus majmuna nakon 2 IV doze od 20 mg/kg 1519.g57 Fab'PEG ;Slika 16 pokazuje nivoe IgG u plazmi kod 4 Cynomolgus majmuna koji su primili 10 IV doza od 20 mg/kg 1519.g57 Fab'PEG, jedan na svaka 3 dana ;Slika 17 pokazuje efekat dve IV doze od 30mg/kg 1519g57 IgG4P na endogeni IgG u plazmi kod Cynomolgus majmuna ;Slika 18 pokazuje efekat na IgG u plazmi kod Cynomolgus majmuna prilikom primene 30 mg/kg, ukoliko je je sledila 41 dnevna doza od 5 mg/kg 1519 g57 IgG4P ;Slika 19 prikazuje rezultate dnevne primene doze sa nosačem, na IgG plazme kod Cynomolgus majmuna ;Slika 20 pokazuje povećani klirens za IV hIgG iz plazme hFcRn transgenih miševa tretiranih sa CA170_01519.g57 Fab'PEG ili PBS-om, IV ;Slika 21 pokazuje povećani klirens za IV hIgG iz plazme hFcRn transgenih miševa tretiranih sa CA170_01519.g57 IgG1 ili IgG4 ili PBS-om, IV ;Slika 22 pokazuje povećani klirens za IV hIgG iz plazme hFcRn transgenih miševa tretiranih sa CA170_01519.g57 Fab'-humanim serumskim albuminom ili PBS-om, IV ;Slika 23 pokazuje povećani klirens za IV hIgG iz plazme hFcRn transgenih miševa tretiranih sa CA170_01519.g57 FabFv ili PBS-om, IV ;Slika 24 pokazuje povećani klirens IV hIgG iz plazme hFcRn transgenih miševa tretiranih sa CA170_01519.g57 Fab ili Fab'PEG ili PBS-om, IV ;Slika 25 prikazuje fuzioni protein bispecifičnog antitela predmetnog pronalaska, označenog kao FabdsFv. ;;PRIMERI ;;[0281] Imunizacije koje slede su izvedene u cilјu generisanja materijala za kulturu B ćelija i skrining antitela: ;Pacovi Sprague-Dawley soja su imunizovani sa tri injekcije NIH3T3 mišijih fibroblasta koji su koeksprimirali mutirani humani FcRn (L320A; L321A) (Ober i saradnici, 2001 Int. Immunol.13, 1551-1559) i mišiji β2M, i sa četvrtom finalnom injekcijom za pojačanje ekspresije vanćelijskog domena humanog FcRn. ;[0282] Serumi su analizirani i na vezivanje za mutirani FcRn na HEK-293 ćelijama i za njihovu sposobnost da spreče vezivanje humanog IgG-a koji je bilo obeležen sa fluoroforom Aleksafluor 488. Oba postupka su urađena protočnom citometrijom. Za vezivanje su upotreblјeni specifični anti-mišiji ili pacovski sekundarni reagensi obeleženi fikoeritrinom (PE), da bi se dobila količina vezivanja IgG-a u serumu. ;[0283] B ćelijske kulture su pripremlјene upotrebom postupka sličnog onom koji je opisan od strane Zubler-a i saradnika (1985). Ukratko, B ćelije gustine od približno 5000 ćelija po bunariću, su gajene u pločama za kulturu tkiva sa 96 bunarića i bar kodom, u 200 µl/bunariću RPMI 1640 medijuma (Gibco BRL) u koji su bili dodati 10% FCS (PAA laboratories ltd), 2% HEPES (Sigma Aldrich), 1% L-glutamin (Gibco BRL), 1% rastvor penicilina/streptomicina (Gibco BRL), 0,1% β-merkaptoetanol (Gibco BRL), 2-5% supernatanta kulture aktiviranih splenocita zeca, kao i mišije EL-4-B5 timoma ćelije koje su bile ozračene gama zracima (5x10<4>/bunariću), tokom sedam dana na 37°C u atmosferi sa 5% CO2. ;[0284] Prisustvo antitela specifičnih za FcRn u supernatantima B ćelijske kulture je određeno upotrebom testa za vezivanje koji se zasniva na homogenoj fluorescenci, upotrebom HEK-293 ćelija koje su bile tranzijentno transfektovane sa mutiranim FcRn (površinski stabilizovanim) kao izvorom cilјnog antigena. Po 10 ul supernatanta je prebačeno iz ploča za kulturu tkiva sa 96 bunarića i bar kodom, u ploče crnih zidova za testiranje sa 384 bunarića koje su sadržavale po 5000 transfektovanih HEK-293 ćelija po bunariću, upotrebom platforme za rukovanje tečnošću tipa Matrix Platemate. ;Vezivanje je utvrđeno upotrebom kozijeg anti-pacovskog ili mišjeg IgG-a koji je bio specifičan za Fcγ i konjugovan sa Cy-5 (Jackson). Ploče su očitane na sistemu za ćelijsku detekciju tipa Applied Biosystems 8200. Od 3800 ploča za kulturu sa 96 bunarića na kojima je analizirnao 38 različitih imunizovanih životinja, identifikovano je 9800 molekula koji su vezivali humani FcRn. Procenjeno je da navedeno predstavlјa skrining sa približno 2,5 milijarde B ćelija. ;[0285] Nakon primarnog skrininga, pozitivni supernatanti su spojeni u tzv. master ploče sa 96 bunarića i bar kodom, upotrebom robota Aviso Onyx hit-picking, nakon čega su B ćelije u pločama za kulturu ćelija zamrznute na -80°C. Master ploče su zatim skrinovane Biacore analizom, da bi se identifikovali bunarići koji sadrže antitela visokog afiniteta i ona koje su inhibirala vezivanje humanog IgG-a za FcRn (pogledati u nastavku teksta). ;[0286] Analiza interakcija biomolekula, upotrebom tehnologije površinske plazmonske rezonance (SPR), urađena je upotrebom BIAcore T200 sistema (GE Healthcare). Koziji anti-pacovski IgG, Fc gama (Chemicon International Inc.) u puferu sa 10 mM NaAc, pH 5, je imobilisan na senzorskom čipu CM5 putem aminskog kuplovanja, da bi nivo zadržavanja iznosio pribl. 19500 jedinica odgovora (RU), upotrebom HBS-EP<+>kao mobilnog pufera. Kao mobilni pufer prilikom izvođenje testa afiniteta i blokiranja je korišćen 50 mM fosfat, pH 6 150 mM NaCl. Supernatanti B ćelijske kulture su razblaženi 1 prema 5, u 200 mM fosfatu, pH6 150 mM NaCl. Razblažen B-ćelijskog supernatant je injeciran tokom 600s, uz protok od 5 µl/min, da bi se omogućilo vezivanje za anti-pacovski IgG, Fc. Humani FcRn koncentracije 100 nM je injeciran preko zadržanih molekula supernatanta B ćelijske kulture tokom 180s, uz 30 µl/min, nakon čega je sledila disocijacija u trajanju od 360s. Humani IgG (Jackson ImmunoResearch) je injeciran tokom 60s, nakon čega je sledila disocijacijom od 180s, uz protok od 30 µl/min. ;[0287] Podaci su analizirani upotrebom T200 kompjuterskog programa za analizu (verzija 1.0) da bi se odredile konstante afiniteta (KD) antitela i da bi se utvrdila ona antitela koja su blokirala vezivanje IgG-a. ;[0288] U alternativnoj analizi, supernatanti iz master ploče su takođe pregledani skriningom u testu blokiranja IgG-a zasnovanom na ćelijama. Po 25 ul supernatanta B ćelijske kulture iz master ploča je preneto u polipropilensku ploču sa 96 bunarića oblog dna. Mutirane HEK-293 ćelije koje su bile transfektovane sa hFcRn (50,000 ćelija po bunariću, u 25 ul PBS pH6/1% FCS) su zatim dodate u svaki bunarić i inkubirane su 1 sat na 4°C. Ćelije su isprane dva puta sa 150 ul PBS medijuma. Zatim su ćelije resuspendovane u 50 ul/bunariću PBS/FCS medijuma koji je sadržavao humani IgG obeležen sa Alexafluor 488 ili 649 u koncentraciji od 7,5ug/ml, pa je nastavljena inkubacija još 1 sat na 4°C. Ćelije su dalje isprane dva puta sa 150 ul medijuma i ponovo resuspendovane u 35 ul/ bunariću PBS/FCS medijuma koji je sadržavao 1% formaldehid kao fiksativ. Ploče su konačno očitane na FACS Canto 2 protočnom citometru. Primeri podataka su dati na Slici 11. ;[0289] Da bi se omogućilo dobijanje gena varijabilnog regiona antitela iz selekcije bunarića od interesa, trebalo je izvršiti korak dekonvolucije, kako bi se omogućila identifikacija B ćelija specifičnih za antigen u datom bunariću koji je sadržavao heterogenu populaciju B ćelija. Navedeno je postignuto primenom tzv. postupka fluorescentog hala. Ukratko, B ćelije koje izlučuju imunoglobuline iz bunarića koji su pozitivno reagovali, pomešane su sa zrnima streptavidina (New England Biolabs) obloženim sa biotiniziranim humanim FcRn u konačnom razblaženju od 1:1200 kozjeg anti-pacovskog ili mišjeg antitela specifičnog za Fcγ fragment koje je bio konjugovano sa FITC (Jackson). Nakon statične inkubacije na 37°C tokom 1 sata, antigen-specifične B ćelije su mogle biti identifikovane zbog prisustva fluorescentnog hala koji je okruživao B-ćeliju. Ovakve pojedinačne B ćelije, identifikovane upotrebom Olimpusovog mikroskopa, su zatim prikupljene mikromanipulatorom firme Eppendorf i deponovane u PCR epruvete. Fokusi fluorescence su generisani u 268 odabranih bunarića. ;[0290] Geni varijabilnog regiona antitela su dobijeni iz pojedinačnih ćelija, reverznom transkripcijom i lančanom reakcijom polimeraze, (RT)-PCR-om, upotrebom proba koje su bile specifične za varijabilne regione teških i lakih lanaca. Urađene su dve ture PCR-a, upotrebom robota za rukovanje tečnostima Aviso Onyx, sa ugnježdenim 2° PCR-om koji je uključivao restrikciona mesta na 3 'i 5' krajevima, a što je omogućilo kloniranje varijabilnih regiona u mišiji γ1 IgG (VH) ili mišiji kapa (VL) sisarski ekspresioni vektor. Upareni konstrukti teškog i lakog lanca su istovremeno transfektovani u HEK-293 ćelije upotrebom Fectin-a 293 (Invitrogen) i njihovim gajenjem u kulturi, u pločama sa 48 bunarića, u zapremini od 1 ml. Nakon 5-7 dana ekspresije, prikuplјeni su supernatanti i antitelo je podvrgnuto dalјem skriningu. ;[0291] PCR-om su uspešno dobijeni srodni parovi teških i lakih lanaca iz pojedinačnih B ćelija u okviru 156 odabranih bunarića. Analiza sekvenci DNK kloniranih gena varijabilnih regiona je identifikovala brojne jedinstvene familije rekombinantnih antitela. Nakon ekspresije, tranzientni supernatanti su ispitivani kako u testu FACS blokiranja humanog IgG-a (opisano prethodno), tako i u testovima recikliranja IgG-a. U pojedinim slučajevima, proizveden je prečišćeni mišiji γ1 IgG koji je dalje ispitan (podaci su odgovarajuće obeleženi). ;[0292] U testu recikliranja su upotrebljene MDCK II ćelije (klon 34, kao što je opisano u Primerima 4 i 5 u dalјem tekstu) koje su prekomerno eksprimirale humani FcRn i beta2 mikroglobulin i koje su zasejane u gustini od 25,000 ćelija po bunariću, u ploče sa 96 bunarića. Ćelije su inkubirane preko noći na 37°C, 5% CO2, pa su isprane sa HBSS+ Ca/Mg pH 7,2 1% BSA, nakon čega su inkubirane sa po 50 µl različitih koncentracija tranzijentnih supernatanata HEK-293 ćelija ili sa prešićenim antitelom, tokom 1 sata na 37°C, 5% CO2. Supernatant je zatim uklonjen i u ćelije je dodato 500 ng/ml biotinizovanog humanog IgG (Jackson) u 50 µl HBSS+ Ca/Mg pH 5,9 1% BSA, nakon čega su ćelije dodatno inkubirane tokom 1 sata na 37°C, 5% CO2. Ćelije su potom isprane tri puta u HBSS+ Ca/Mg pH 5,9, pa je u ćelije dodato 100 µl HBSS+ Ca/Mg pH 7,2 i ćelije su dodanto inkubirane na 37°C, 5% CO2 tokom 2 sata. Potom je supernatant uklonjen sa ćelija i analiziran na ukupni IgG, upotrebom MSD testa sa anti-humanim IgG antitelom za hvatanje (Jackson) i streptavidinskim antitelom za detekciju obeleženim sa SulfoTagom (MSD). Kriva inhibicije je analizirana nelinearnom regresijom da bi se odredile IC50 vrednosti. ;[0293] Na osnovu rezultata u ovim testovima, izabrana je familija antitela koja je sadržavala šest CDR-ova navedenih u SEQ ID NOs 1 do 6. Antitelo CA170_01519 je imalo najbolјu aktivnost i izabrano je za humanizaciju. ;;Primer 1 Postupak humanizacije antitela ;;[0294] Antitelo CA170_01519 je humanizovano ugradnjom CDR sekvenci iz V-regiona antitela pacova, u uokvirujuću sekvencu V-regiona antitela humane germinativne linije. Da bi se ostvarila aktivnost antitela, u humanizovanoj sekvenci je takođe zadržan određen broj ostataka iz uokvirujućeg segmenta V-regiona pacova. Ovi ostaci su izabrani upotrebom protokola koji su opisali Adair i saradnici (1991) (Humanised antibodies WO91/09967). Poravnavanje sekvenci V-regiona antitela pacova (donora) sa sekvencama V-regiona iz humane terminativne linije (akceptorima) je prikazano na Slikama 2A i 2B, zajedno sa naznačenim humanizovanim sekvencama. CDR sekvence koji su prebačene iz donorske u akceptorsku sekvencu su definisane od strane Kabat-a (Kabat i saradnici, 1987), sa izuzetkom CDR-H1 gde je upotrebljena kombinovana Čotija/Kabat definicija (pogledati Adair i saradnici, 1991 Humanised antibodies. WO91/09967). Humani V-region VK1 2-1-(1) A30 plus JK2 J-region (V BASE, http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/) je izabran kao akceptor za CDR sekvence lakog lanca. Human V-region VH3 1-3 3-07 plus JH4 J-region (V BASE, http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/) je izabran kao akceptor kao CDR sekvence teškog lanca. ;[0295] Dizajnirani su geni koji kodiraju niz varijanti sekvenci V-regiona teškog i lakog lanca i oni su konstruisani upotrebom pristupa automatske sinteze firme Entelechon GmbH. Dodatne varijante V-regiona i teškog i lakog lanca su kreirane modifikacijama VH i VK gena sa mutagenezom usmerenom oligonukleotidima. Ovi geni su klonirani u veliki broj vektora, da bi se omogućila ekspresija humanizovanog 1519 Fab’ u ćelijama sisara i E. coli. Dalje su za varijante lanaca i njihove kombinacije ispitana njihova ekspresija u E. coli, njihova potencija u odnosu na matično antitelo, njihova biofizička svojstva i pogodnost za nishodnu obradu, što je dovelo do izbora grafta lakog lanca gL20 i grafta teškog lanca gH20. Konačne odabrane gL20 i gH20 graft sekvence su prikazane na Slikama 2A i 2B, tim redom. Navedeno uparivanje V-regiona je nazvano kao 1519.g57. ;[0296] Svi ostaci uokvirujućeg regiona lakog lanca u graftu gL20 su bili iz gena humane germinativne linije, sa izuzetkom ostataka 36, 37 i 58 (Kabatova numeracija) koji su kao donorski ostaci leucina (L36), fenilalanina (F37) i izoleucina (158) bili zadržani, tim redom. Zadržavanje ova tri ostatka je bilo neophodno za punu potentnost humanizovanog Fab’. Svi ostaci uokvirujućeg regiona teškog lanca u graftu gH20 su bili iz gena humane germinativne linije, sa izuzetkom ostataka 3, 24, 76, 93 i 94 (Kabatova numeracija) koji su zadržani kao donorski ostaci prolina (P3), valina (V24), serina (S76), treonina (T93) i treonina (T94). Zadržavanje ovih pet ostataka je bilo važno za punu potentnost humanizovanog Fab’. ;[0297] Za ekspresiju u E. coli, geni humanizovanog V-regiona teškog i lakog lanca su klonirani u UCB ekspresioni vektor pTTOD, koji je sadržavao DNK koja je kodirala humani C-kapa konstantni region (K1m3 alotip) i humani gama-1 CH1-zglobni region (G1m17 alotip). Gen E.coli FkpA je takođe uveden u ekspresioni plazmid, pošto je utvrđeno da koekspresija ovog šaperonskog proteina pobolјšava prinos humanizovanog Fab’ u E. coli soju MXE016 (opisanom u WO2011/086136) tokom fermentacije u zatvorenom sistemu, dok je IPTG upotrebljen za indukciju Fab’ ekspresije. Svi 1519 Fab’ laki i teški lanci i FkpA polipeptid su eksprimirani sa jednog multi-cistrona pod kontrolom IPTG-inducibilnog tac promotora. ;[0298] Za ekspresiju u ćelijama sisara, geni humanizovanog V-regiona lakog lanca su klonirani u UCB-Celltech humani ekspresioni vektor za humane lake lance, pMhCK, koji je sadržavao DNK koja je kodirala konstantni region humanog kapa lanca (Km3 alotip). Geni humanizovanog V-regiona teškog lanca su klonirani u ekspresioni vektor pMhg4P FL za ekspresiju humanog gama-4 teškog lanca firme UCB-Celltech, koji je sadržavao DNK koja je kodirala konstantni region humanog gama-4 teškog lanca sa stabilišućom mutacijom S241P u zglobnom regionu (Angal i saradnici, Mol Immunol.1993, 30(1): 105-8). Kotransfekcija vektora sa lakim i teškim lancem u HEK293 ćelijskoj suspenziji je postignuta upotrebom 293 Fectina-a (12347-019 Invitrogen) i rezultovala je ekspresijom humanizovanih, rekombinantnih 1519 antitela. ;;Primer 1A Priprema konjugata 1519.g57 Fab'-PEG ;;[0299] Fab’ koji je bio eksprimiran u periplazmi E.coli je izdvojen iz ćelija toplotnom ekstrakcijom. Fab’ je zatim prečišćen proteinskim G afinitetnim prečišćavanjem sa kiselim eluiranjem. Fab’ je potom redukovan i PEGilovan sa PEG od 40kDa (SUNBRIGHT GL2-400MA3). PEG je zapravo kovalentno vezan na jednu ili više tiolnih grupa u fragmentu antitela preko maleimidne grupe. Efikasnost PEGilacije je potvrđena sa SE-HPLC. Fab'PEG je odvojen od ne-PEGilovanog Fab’ i diFab', hromatografijom sa kationskom izmenom. Frakcije su analizirane upotrebom SE-HPLC i SDS-PAGE postupaka. ;Objedinjavanje je sprovedeno kako bi se smanjili nivoi nečistoća. Konačni uzorak je koncentrovan i dijafiltriran u želјeni pufer. ;;Primer 1B Priprema 1519.g57 Fab’ (anti humani FcRn) konjugovanog sa humanim serumskim albuminom ;;[0300] Anti humani FcRn Fab’ 1519g57 je hemijski konjugovan sa humanim serumskim albuminom (rekombinantni derivat) koji je zatim korišćen za studije na životinjama. ;;● Humani serumski albumin: Recombumin od firme Novozyme (kat. br. 200-010) koji je dobijen u vidu rastvora od 20% w/v i rekombinantno je proizveden u Saccharomices cerevisiae. ;● 1519.g57Fab’: 30mg/ml u 0,1M natrijum fosfatu, 2mM EDTA, pH 6,0 (redukcioni pufer) ;● 1,6-Bismaleimidoheksan (BMH) firme Thermo Fisher (kat. br.22330) ;;Redukcija albumina: ;;[0301] Albumin je redukovan upotrebom sveže pripremlјenog cisteamin hidrohlorida (Sigma, kat br. ;30078) koji je pripremlјen u redukcionom puferu. U rastvor albumina je dodat cisteamin hidrohlorid u 10-strukom molarnom višku, nakon čega je inkubiran u vodenom kupatilu na 37°C tokom 30 minuta. Nakon redukcije, rastvor je desalinisan upotrebom PD10 kolona (GE Healthcare, kat.br.17-0851-01) da bi se uklonio višak redukcionog agensa. ;;Dodavanje BMH linkera: ;;[0302] Osnovni rastvor 1,6-bismaleimidoheksana je pripremlјen u staklenoj bočici upotrebom dimetilformamida. Rastvor je vorteksovan da bi se obezbedilo potpuno rastvaranje BMH. ;Rastvor BMH je dodat u rastvor redukovanog albumina bez soli, u 10-strukom molarnom višku u odnosu na koncentraciju albumina. Rastvor je zatim inkubiran na 37°C tokom 30 minuta, a zatim je preko noći inkubiran i na sobnoj temperature, na mešalici sa valjcima, da bi se obezbedilo pravilno mešanje. Mogao se uočiti beli talog koji je potom spušten centrifugiranjem u stonoj centrifugi. ;Po završetku reakcije, rastvor je desalinisan upotrebom PD10 kolona. ;;Redukcija 1519.g57 Fab’ ;;[0303] 1519.g57 Fab’ je redukovan upotrebom sveže pripremlјenog cisteamin hidrohlorida (Sigma kat. br. 30078) koji je pripremlјen u redukcionom puferu. U rastvor 1519.g57 Fab’ je dodat cisteamin hidrohlorid u 10-strukom molarnom višku i zatim je rastvor inkubiran u vodenom kupatilu na 37°C tokom 30 minuta. Nakon redukcije, rastvor je desalinisan upotrebom PD10 kolona (GE Healthcare, kat.br.17-0851-01) da bi se uklonio sav višak redukcionog sredstva. ;;Mešanje redukovanog Fab i albumin-BMH konjugata ;;[0304] Jednake količine (u molovima) redukovanog Fab’ i kompleksa albumin-linker su pomešane i inkubirane na sobnoj temperaturi preko noći na mešalici sa valјcima. ;;Afinitetno prečišćavanje: ;;[0305] Prethodna smeša je dalje afinitetno prečišćena upotrebom plave sefaroze koja vezuje albumin-Fab konjugat i slobodni albumin. Prečišćavanje je urađeno prema uputstvu proizvođača i koje je ovde ukratko opisano: ;Plava sefaroza je rekonstituisana u DPBS pH 7,4 i isprana tri puta sa PBS-om. Nakon ispiranja, dodata je smeša Fab i albumina povezanog sa linkerom i sve je inkubirano na sobnoj temperaturi tokom 1 sata na mešalici sa valјcima. Nakon inkubacije, matriks je ponovo ispran sa PBS-om da bi se uklonili svi nevezani materijali i zatim je urađena elucija sa PBS-om 7,4 koji je sadržavao 2M KCl. ;;Prečišćavanje ekskluzijom po veličini: ;;[0306] Materijal za afinitetno prečišćavanje je sadržavao albumin konjugovan sa Fab zajedno sa nekim neizreagovanim HSA. Ovo je zahtevalo dalјe prečišćavanje i to je postignuto upotrebom ekskluzione hromatografije po veličini (S20016X60, GE Healthcare). Konačne objedinjene frakcije su rastvorene u DPBS pH 7,4. ;[0307] Konačan 1519g57Fab-HSA konjugat je koncentrovan do 20 mg/ml u DPBS pH 7,4 i analiziran analitičkom ekskluzionom hromatografijom po veličini (Agilent Zorbax GF250 i GF450 u tandemu), pri čemu je utvrđeno da predstavlja pretežno monomerni konjugat. Test na endotoksine je takođe urađen i utvrđeno je da je uzorak ispod specifične donje granice sadržaja endotoksina. ;;Primer 2 Skrining Fab’ i Fab'PEG molekula kandidata u testu recikliranja IgG-a ;;[0308] Da bi se odredila sposobnost Fab'PEG molekula kandidata da blokiraju aktivnost FcRn u funkcionalnom testu na ćelijama, molekuli su analizirani u širokom opsegu (skrining) u testu recikliranja IgG-a (detalјnije opisanom u Primeru 5). Ukratko, MDCK II ćelije klona 34 su prethodno inkubirane sa Fab’ ili Fab'PEG kandidatom, pre dodavanja biotiniziranog humanog IgG-a u kiselom puferu. Ćelije su zatim isprane da bi se uklonio sav višak IgG-a i dalje su inkubirane u puferu neutralnog pH da se olakšalo oslobađanje IgG-a u supernatant. Količina IgG-a koja se oslobodila u supernatant je izmerena upotrebom MSD testa, pa su izračunate EC50 vrednosti. EC50 vrednosti humanizovanih Fab’ i Fab'PEG molekula kandidata koje inhibiraju recikliranje IgG-a su prikazane u tabeli ispod. Nakon PEGilacije, utvrđen je gubitak potentnosti za sva antitela kandidate, međutim, stepen potentnosti varira u zavisnosti od kandidata koji je testiran. ;Tabela 1 ;;; ;;; Srednje EC50vrednosti za Fab’ i Fab'PEG molekule u testu recikliranja IgG-a ;;[0309] MDCK II ćelije klona 34 koje su bile stabilno transfektovane sa humanim FcRn i beta 2 mikroglobulinom su zasađene u gustini od 25,000 ćelija po bunariću na ploču sa 96 bunarića i inkubirane su preko noći na 37°C, 5% CO2. Ćelije su zatim inkubirane sa Fab’ ili Fab'PEG kandidatom u HBSS+ (Ca/Mg) pH 5,9 1% BSA tokom 1 sata na 37°C, 5% CO2, pre dodavanja 500 ng/ml biotiniziranog humanog IgG-a (Jackson) i inkubacije tokom još 1 sata. Ćelije su dalje isprane sa HBSS+ pH 5,9 i inkubirane na 37°C, 5% CO2 u toku 2 sata u HBSS<+>, pH 7,2. Potom je supernatant uklonjen sa ćelija i analiziran je na ukupni IgG, upotrebom MSD testa (koristeći anti-humano IgG antitelo za hvatanje (Jackson) i detektujuće streptavidinsko antitela obeleženog SulfoTagom (MSD)). Kriva inhibicije je analizirana nelinearnom regresijom (Graphpad Prism®) da bi se odredile EC50. Tabela 1 prikazuje kombinovane podatke iz od 2 do 7 eksperimenata. ;;Primer 3 Afinitet za vezivanje hFcRn ;;[0310] Analiza interakcija biomolekula upotrebom tehnologije površinske plazmonske rezonancije (SPR) je urađena na Biacore T200 sistemu (GE Healthcare) čime je utvrđen opbim vezivanja za vanćelijski domen humanog FcRn. Vanćelijski domen humanog FcRn je obezbeđen kao nekovalentni kompleks između vanćelijskog domena alfa lanca humanog FcRn (SEQ ID NO: 94) i β2 mikroglobulina (β2M) (SEQ ID NO: 95). Afinitativno, prečišćen F(ab’)2 fragment kozijeg anti-humanog IgG-a, specifičan F(ab’)2 fragment (za Fab'-PEG hvatanje) ili specifičan Fc fragment (za hvatanje IgG1 ili IgG4) (Jackson ImmunoResearch Lab, Inc.) u 10 mM NaAc puferu, pH 5, su imobilisani na senzorskom čipu CM5, aminskim kuplovanjem do nivoa zadržavanja od između 4000 - 5000 jedinica odgovora (RU), upotrebom HBS-EP+ (GE Healthcare) kao mobilnog pufera. ;[0311] Kao mobilni pufer za test afiniteta je upotrebljen 50 mM fosfat, pH 6 150 mM NaCl 0,05% P20 ili HBS-P, pH 7,4 (GE Healthcare). Relevantno antitelo, bilo anti-hFcRn Fab'-PEG, IgG1 ili IgG4P, je razblaženo do 5 µg/ml (Fab'-PEG), 0,3 µg/ml (IgG1) ili 4 µg/ml (IgG4) u mobilnom puferu. Injeciranje Fab'-PEG ili IgG1 ili IgG4 trajanja 60', uz protok od 10 µl/min, je upotrebljeno za vezivanje za imobilizovan anti-humani IgG, F(ab’)2. Vanćelijski domen humanog FcRn je titriran od 20nM do 1,25nM preko imobilisanog anti-FcRn antitela (Fab'-PEG, IgG1 ili IgG4) tokom 300s, uz protok od 30 µl/min, što je pratila disocijacija trajanja 1200s. Površina je regenerisana sa 2 x 60s 50 mM HCl uz protok od 10 µl/min. ;[0312] Podaci su analizirani upotrebom T200 kompjuterskog programa za analizu (verzija 1.0). ;;Tabela 2 Podaci o afinitetu za anti-hFcRn 1519g57 Fab'-PEG na pH 6 ;;; ;; Tabela 3 Podaci o afinitetu za anti-hFcRn 1519g57 Fab'-PEG na pH 7,4 ;;; ;; [0313] U ovim eksperimentima Fab'PEG je bio sa prosečnim afinitetom od oko 42 pM na pH 6 i oko 56 pM na pH 7,4. ;;pH7,4 ;;[0314] ;Tabela 3A Podaci afiniteta za anti-hFcRn 1519g57 u vidu IgG1 i IgG4P pri pH 7,4 ;(prosek tri eksperimenta) ;;; ;; pH6 ;;[0315] ;;Tabela 3B Podaci afiniteta za anti-hFcRn 1519.g57 u vidu IgG1 i IgG4P pri pH 6 ;(prosek tri eksperimenta) ;;; ;; [0316] Tabele 3A i 3B pokazuju da je afinitet antitela pune dužine konzistentan sa onim koji je uočen za Fab'-PEG i pri pH6 i pH7,4. ;;Primer 4 Potencija u sistemu sa ćelijama ;;[0317] Analize zasnovane na ćelijama su izvršene upotrebom Madin-Darby ćelija bubrega psa (MDCK) tipa II koje su bile stabilno transfektovane humanim FcRn i humanim B2M genskim vektorom sa Geneticinskim selekcionim markerom. Odabran je stabilan ćelijski klon koji je bio u stanju da reciklira i transcitozom preuzme humani IgG i to je upotrebljeno za sve naredne studije. Klon će dalje biti označen kao MDCK II, klon 34. ;;Afinitet CA170_01519.g57 Fab'PEG za humani FcRn u sistemu sa ćelijama ;;[0318] Eksperimenti kvantitativne protočne citometrije su izvedeni upotrebom MDCK II ćelija klona 34, kao i CA170_01519g57 Fab’ ili CA170_01519g57 Fab'PEG obeleženih sa AlexaFluor 488. Za određivanje KDje korišćeno specifično vezivanje antitela za FcRn u opsegu koncentracija antitela. Analize su rađene sa neutralnim i kiselim puferima da bi se odredilo da li pH sredine, uporediv sa onim koji se nalazi u krvnoj plazmi (pH 7,4) ili endozomima (pH6), ima bilo kakav efekat na vezivanje antitela. ;[0319] Slika 3 prikazuje reprezentativne krive vezivanja za CA170_01519.g57 Fab’ (Slika 3A) i Fab'PEG (Slika 3B). Srednje vrednosti KD(n = 2 ili 3) su bile 1,66nM i 6,5nM u neutralnom puferu, i 1,59nM i 5,42nM u kiselom puferu, tim redom (pogledati Tabelu 4). ;;Tabela 4 - Srednje vrednosti KD(nM) za CA170_01519.g57 Fab’ i Fab'PEG u MDCK II ćelijama klona 34. ;;; ;; [0320] Slika 3 prikazuje vezivanje CA170_01519.g57 Fab’ (A) i CA170_01519.g57 Fab'PEG (B) za MDCK II ćelije klona 34 u kiselom i neutralnom pH. ;[0321] MDCK II ćelije klona 34 su inkubirane u Facs puferu (PBS sa 0,2% w/v BSA, 0,09% w/v NaN3), 30 minuta pre dodavanja CA170_01519.g57 Fab’ ili Fab'PEG obeleženog sa Alexa-fluor-om 488 tokom 1 sata u Facs puferui bilo pH 7,4 ili pH 6. Konačna koncentracija antitela je bila opsega od 931 nM do 0,002 nM. Ćelije su isprane u ledeno hladnom Facs puferu, a zatim su analizirane protočnom citometrijom, upotrebom Guava protočnog citometra (Millipore, UK). Skupovi podataka za titraciju su takođe dobijeni za izotipska kontrolna antitela i za svaki format antitela, da bi se odredilo nespecifično vezivanje. Broj molova vezanog antitela je izračunat upotrebom interpolisanih vrednosti sa standardne krive koja generisane upotrebom zrna koje su sadržavala različite količine fluorescentne boje. Geometrijska srednja vrednost je fluorescencije određena analizom ćelija i zrnaca protočnom citometrijom. Nespecifično vezivanje je oduzeto od vrednosti dobijenih za anti-FcRn antitela i dobijena kriva specifičnog vezivanja je analizirana nelinearnom regresijom, upotrebom jednačine vezivanja na jednom mestu (Graphpad Prism®), a da bi se odredio KD. Podaci su reprezentativni za 2 ili 3 eksperimenta. ;[0322] CA170_01519.g57 Fab'PEG može da veže humani FcRn koji je eksprimiran na ćelijama i pri kiselom i na neutralnom pH, a utvrđene KD vrednosti su bile približno 3,5 do 4 puta ispod vrednosti utvrđenih za ekvivalentni Fab’ molekul. ;;Primer 5 Funkcionalne analize zasnovane na ćelijama ;;CA170_01519.g57 Fab'PEG inhibira recikliranje humanog IgG-a ;;[0323] Ekspresija FcRn je pre svega unutarćelijska (Borvak J i saradnici, 1998, Int. Immunol., 10 (9), 1289-98 i Cauza K i saradnici, 2005, J. Invest. Dermatol., 124 (1), 132-139) i povezana je sa endozomskim i lizozomskim membranama. Fc deo IgG-a se vezuje za FcRn pri kiselom pH (<6.5), ali ne i pri neutralnom fiziološkom pH (7,4) (Rhagavan M i saradnici, 1995), a ova zavisnost od pH olakšava recikliranje IgG-a. ;[0324] Jednom kada se unese pinocitozom i kada uđe u kiseli endozom, IgG vezan za FcRn će biti recikliran zajedno sa FcRn na površinu ćelije, dok će se na fiziološki neutralnom pH IgG osloboditi. (Ober RJ i saradnici, 2004, The Journal of Immunology, 172, 2021-2029). Bilo koji IgG koji nije vezan za FcRn ulazi u lizozomski put degradacije. ;[0325] Uspostavljena je in vitro analiza da bi se ispitala sposobnost CA170_01519.g57 Fab'PEG ili Fab’ da inhibira sposobnost FcRn da reciklira IgG. Ukratko, MDCK II ćelije klona 34 su inkubirane u prisustvu ili odsustvu CA170_01519.g57 Fab’ ili CA170_01519.g57 Fab'PEG, pre dodavanja biotiniziranog humanog IgG-a u kiselom puferu (pH 5,9), da bi se omogućilo vezivanje za FcRn. Svo suvišno antitelo je uklonjeno i ćelije su inkubirane u neutralnom pH puferu (pH 7,2) koji omogućava oslobađanje površinski izloženog, vezanog IgG-a u supernatant. Inhibicija FcRn je praćena upotrebom MSD testa za detekciju količine recikliranog IgG-a i na taj način oslobođenog u supernatant. ;[0326] Slika 4 pokazuje da CA170_01519.g57 inhibira recikliranje IgG-a u MDCK II ćelijama klona 34. MDCK II ćelije klona 34 su zasejane u gustini od 25,000 ćelija po bunariću, na ploču sa 96 bunarića i inkubirane su preko noći na 37°C, 5% CO2. Ćelije su zatim inkubirane sa CA170_01519g57 Fab’ ili Fab'PEG u HBSS<+>(Ca/Mg) pH 5,9 1% BSA tokom 1 sata na 37°C, 5% CO2, pre dodavanja 500 ng/ml biotiniziranog humanog IgG (Jackson) i inkubacije od još 1 sata. Ćelije su dalje isprane sa HBSS+ pH 5,9 i inkubirane na 37°C, 5% CO2, tokom 2 sata u HBSS<+>pH 7,2. Supernatant je zatim uklonjen sa ćelija i analiziran za ukupni IgG upotrebom MSD testa (koristeći anti-humano IgG antitelo za hvatanje (Jackson) i detektujuće streptavidinsko antitelo obeleženo SulfoTagom (MSD)). Kriva inhibicije je analizirana nelinearnom regresijom (Graphpad Prism®) da bi se odredile EC50. Grafik predstavlјa kombinovane podatke iz 6 ili 7 eksperimenata. ;[0327] Kao što je prikazano na Slici.4, CA170_01519.g57 Fab’ i CA170_01519.g57 Fab'PEG inhibiraju recikliranje IgG-a na način koji zavisi od koncentracije, sa srednjim vrijednostima EC50 (n = 6 ili 7) od 1,937nM, i 6,034nM, tim redom. Prema tome, CA170_01519.g57 Fab'PEG je približno 3 puta manje potentan nego CA170_01519.g57 Fab’ u inhibiranju recikliranja IgG-a. ;;CA170_01519.g57 Fab'PEG inhibira transcitozu humanog IgG-a ;;[0328] FcRn može prenositi IgG preko polarizovanih slojeva epitelnih ćelija, kako u apikalnobazolateralnom tako i u bazolateralno-apikalnom pravcu, čime ima važnu ulogu u omogućavanju kretanja IgG-a između cirkulacije i lumena mukoznih barijera (Claypool i saradnici, 2004, Mol Biol Cell 15(4): 1746-59). ;[0329] Uspostavljen je in vitro test da bi se ispitala sposobnost CA170_01519.g57 Fab'PEG da inhibira transcitozu IgG-a koja je zavisna od FcRn. Ukratko, MDCK II ćelije klona 34 su zasejane u ploče sa 24 bunarića i sa membranom na dnu, i ostavlјene su da obrazuju monoslojeve tokom 3 dana. Ćelije su zatim najpre inkubirane sa CA170_01519.g57 Fab'PEG na apikalnoj površini, pre dodavanja biotiniziranog humanog IgG-a u kiselom puferu koji olakšava vezivanje za FcRn. Humani IgG se transportuje transcitozom kroz ćelije od apikalne ka bazolateralnoj strani i oslobađa se u neutralni pufer u donjoj komori. Nivoi IgG-a na bazolateralnoj strani su zatim izmereni upotrebom MSD testa. ;[0330] Slika 5 prikazuje da CA170_01519.g57 Fab'PEG inhibira transcitozu IgG-a u apikalnobazolateralnom pravcu u MDCK II ćelijama klona 34. ;[0331] MDCK II ćelije klona 34 su zasejane u gustini od 500.000 ćelija po bunariću, na ploču sa 24 bunarića i sa membranom na dnu, i inkubirane su 3 dana na 37°C, 5% CO2dok se nisu obrazovali monoslojevi. pH apikalnog dela je podešen na 5,9, a bazolateralna strana je bila pH 7,2 u HBSS<+>(Ca/Mg) puferu 1% BSA. Ćelije na apikalnom delu su prethodno bile inkubirane 1 sat sa CA170_01519.g57 Fab'PEG, pre dodavanja 2,5 µg/ml biotiniziranog humanog IgG (Jackson) u naznačenim koncentracijama, tokom 4 sata na 37°C, 5% CO2. Bazolateralni medijum je zatim pokuplјen i izmeren je ukupni IgG upotrebom MSD testa (upotrebom anti-humanog IgG antitela za hvatanje (Jackson) i detekcionog streptavidinskog antitela obeleženog SulfoTagom (MSD)). Kriva inhibicije je analizirana nelinearnom regresijom (Graphpad Prism®) da bi se odredile EC50. Grafik predstavlјa kombinovane podatke iz 3 eksperimenta. ;[0332] Ukratko, Slika 5 pokazuje da CA170_01519.g57 Fab'PEG može inhibirati transcitozu u apikalnobazolateralnom pravcu za humani IgG, na način koji zavisi od koncentracije, sa EC50 vrednostima od 25,5 nM (n = 3). ;;Sažetak in vitro efekata CA170_01519.g57 Fab'PEG ;;[0333] CA170_01519.g57 Fab'PEG inhibira i recikliranje i transcitozu IgG-a. EC50od 6nM koja je postignuta u testu recikliranja IgG-a je uporediva sa podacima afiniteta vezivanja u ćelijama u kojima su dobijene vrednosti KD od 6,5nM u neutralnom puferu i 5,42nM u kiselom puferu. CA170_01519.g57 Fab'PEG pokazuje blago smanjenje potencije u poređenju sa samim Fab’, ali u poređenju sa mnogim drugim ispitivanim molekulima je pokazao najniži pad potencije između dva formata (pogledati prethodno). U testu transcitoze IgG-a, dobijen je EC50od 25,5 nM. ;[0334] Podaci u ovom odelјku su jasno pokazali da CA170_01519.g57 Fab'PEG može inhibirati funkciju humanog FcRn. ;Primer 6 Unakrsna reaktivnost CA170_01519.g57 Fab'PEG sa FcRn iz primata različitih od čoveka. ;;[0335] Da bi se potvrdila upotreba CA170_01519.g57 Fab'PEG kod primata različitih od čoveka, urađena je PK/PD studija i predklinička toksikologija, a utvrđeni su i njegov relativan afinitet i funkcionalna potentnost u odnosu na FcRn Cynomolgus makaka majmuna. MDCK II ćelije koje su stabilno transfektovane sa FcRn i B2M (MDCKII(cm)) iz Cynomolgus makaka su korišćeni za studije koje slede, zajedno sa prethodno opisanim MDCK II ćelijama koje su bile stabilno transfektovane sa humanim FcRn i B2M (MDCK II, klon 34). ;;Afinitet CA170_01519.g57 Fab'PEG za FcRn Cynomolgus majmuna baziran na ćelijama ;;[0336] Da bi se odredio afinitet vezivanja CA170_01519g57 Fab'PEG za FcRn Cynomolgus majmuna u sistemu ćelija, urađeni su eksperimenti kvantitativne protočne citometrije upotrebom MDCK II (cm) ćelija i CA170_01519.g57 Fab’ ili Fab'PEG obeleženog sa AlexaFluor 488. Za određivanje KDje korišćeno specifično vezivanje antitela za FcRn Cynomolgus makaka, u širokom opsegu koncentracija. Vezivanje antitela je ispitano kako u neutralnom tako i u kiselom pH, da bi se odredio efekat vezivanja FcRn u neutralnoj krvnoj plazmi ili kiselim endozomima i da bi se na taj način odredio bilo koji efekat koji pH može imati na vezivanje CA170_01519.g57 Cynomolgus makaka majmuna za FcRn. ;[0337] Slika 6- prikazuje vezivanje CA170_01519.g57 Fab’ (A) i CA170_01519.g57 Fab'PEG (B) za MDCK II (cm) ćelije pri kiselom i neutralnom pH. ;[0338] MDCK II (cm) ćelije su inkubirane u Facs puferu (PBS sa 0,2% w/v BSA, 0,09% w/v NaN3), 30 minuta pre dodavanja CA170_01519.g57 Fab’ ili Fab'PEG obeleženog sa Alexa-fluor 488, tokom 1 sata u Facs puferu bilo pH 7,4 ili pH 6. Konačna koncentracija antitela je bila opsega od 931 nM do 0,002 nM. Ćelije su isprane u ledeno hladnom Facs puferu, a zatim su analizirane protočnom citometrijom, upotrebom Guava protočnog citometra (Millipore, UK). Setovi podataka za titraciju su takođe dobijeni za izotipska kontrolna antitela i za svaki format antitela, da bi se odredilo nespecifično vezivanje. Broj molova vezanog antitela je izračunat upotrebom interpoliranih vrednosti dobijenih sa standardne krive koja je generisana upotrebom zrna sa različitim količinama fluorescentne boje. Geometrijska srednja vrednost fluorescencije je određena analizama protočne citometrije ćelija i kuglica. Nespecifično vezivanje je oduzeto od vrednosti dobijene za anti-FcRn antitela, a dobijena kriva specifičnog vezivanja je analizirana nelinearnom regresijom, upotrebom jednačine vezivanja na jednom mestu (Graphpad Prism®) da bi se odredio KD. Podaci su reprezentativni za 2 do 3 eksperimenta. ;Tabela 5 Srednje KDvrednosti (nM) za CA170_0151 PEG na MDCK II (cm) ćelijama. ;;; ;; [0339] Slika 6 prikazuje reprezentativne krive vezivanja za CA17001519.g57 Fab’ (Slika 6A) i Fab'PEG (Slika 6B) za FcRn Cynomolgus makaka majmuna. Srednje vrednosti KDdobijene za CA17001519.g57 Fab’ i Fab'PEG su prikazane u Tabeli 5. Ove vrednosti su uporedive sa KDvrednostima dobijenim za vezivanje CA170_01519.g57 Fab’ i Fab'PEG za humani FcRn (pogledati tabelu 4) ;;CA170_01519.g57 Fab'PEG inhibira recikliranje IgG-a kod Cynomolgus majmuna ;;[0340] Da bi se utvrdilo da li je CA170_01519.g57 Fab'PEG funkcionalno aktivan u blokiranju FcRn Cynomolgus majmuna, korišćene su MDCK II (cm) ćelije da bi se ispitala sposobnost CA170_01519.g57 Fab'PEG da inhibira recikliranje IgG-a Cynomolgus makaka, kao što je prethodno opisano za test sa humanim FcRn. Test je izveden uporedo sa reprezentativnim humanim testovima, da bi se omogućilo poređenje između ova dva. ;[0341] Ukratko, MDCK II ćelije (klon 34 ili cm) su prethodno inkubirane sa CA170_01519.g57 Fab'PEG, pre dodavanja biotiniziranog IgG-a čoveka (h) ili Cynomolgus makaka (c) u kiselom puferu, da bi se omogućilo vezivanje za FcRn. Sav suvišan CA170_01519.g57 Fab'PEG i biotiniziran IgG su zatim uklonjeni i ćelije su inkubirane u neutralnom pH puferu da bi se omogućilo oslobađanje IgG u supernatant. Inhibicija FcRn je procenjena detektovanjem količine IgG koja je bila prisutna u supernatantu, upotrebom MSD testa, pa je izračunat procenat inhibicije. ;[0342] Kao što je prikazano na Slici 7, CA170_01519.g57 Fab'PEG može inhibirati recikliranje i humanog i IgG-a Cynomolgus makaka na način koji je zavisan od koncentracije, sa EC50vrijednostima od 8,448nM i 5,988nM, tim redom. Inhibicija FcRn upotrebom CA170_01519.g57 Fab'PEG u humanim i testovima za Cynomolgus makaka je uporediv, mada deluje da je FcRn potentniji kod Cynomolgus majmuna. ;Tabela 6 ;;; ;;; [0343] Slika 7 prikazuje da CA170_01519.g57 inhibira recikliranje IgG-a u MDCK II ćelijama klona 34 i MDCK II (cm) ćelijama. ;[0344] MDCK II klon 34 i MDCK II (cm) ćelije su zasejane u gustini od 25,000 ćelija po bunariću na ploču sa 96 bunarića i inkubirane su preko noći na 37°C, 5% CO2. Ćelije su prethodno inkubirane sa CA170_01519.g57 Fab’ ili Fab'PEG u HBSS<+>(Ca/Mg) pH 5,9 1% BSA, tokom 1 sata na 37°C, 5% CO2, a pre dodavanja 500 ng/ml biotiniziranog humanog ili cyno IgG-a i inkubicije od još 1 sata. Ćelije su zatim isprane sa HBSS<+>pH 5,9 i inkubirane na 37°C, 5% CO2, tokom 2 sata, u HBSS<+>pH 7,2. Supernatant je uklonjen sa ćelija i analiziran na ukupni IgG, upotrebom MSD testa (koristeći anti-humano IgG antitelo za hvatanje (Jackson) i detektujuće streptavidinsko antitelo obeleženo SulfoTagom (MSD)). Kriva inhibicije je analizirana nelinearnom regresijom (Graphpad Prism®), da bi se odredile EC50. Grafik predstavlјa kombinovane podatke iz 2 eksperimenta. ;;Primer 7 Efekat 01519g Fab PEG kod Cynomolgus majmuna ;;[0345] Ovo je bila studija efekta primene 01519g Fab PEG kod Cynomolgus majmuna, sa jednokratnim, intermitentnim ili ponovlјenim režimima doziranja. 01519g Fab PEG je primenjen intravenskom infuzijom, kao jednokratna doza ili u ponovlјenim dozama, grupama od po četiri Cynomolgus majmuna, kao što je naznačeno u Tabeli 7. IgG u plazmi i farmakokinetika 01519g Fab PEG su praćeni imunoesejem (pogledati tabelu 7A za imunoesejske postupke) i sa LC-MS/MS. Test za albumin u plazmi je urađen na aparaturi firme Covance. ;;Tabela 7 Dozne grupe u studiji NCD2241. Doze su primenjene intravenskom infuzijom. Ponovljena doza je bila ista kao prva doza u svakom slučaju. Ponovlјene doze (njih 4) su davane nedelјno. ;;; ;;; Tabela 7A Postupci imunoanalize za IgG u plazmi, PK i ADA ;;; ; ;;; Efekat na koncentraciju IgGa- u plazmi ;;[0346] Podaci imuno i LC-MS/MS analiza IgG-a u plazmi su bili u skladu. IgG u plazmi je bio smanjen primenom Fab PEG (pogledati Sliku 12 i Sliku 14). Za obe dozne grupe Faze I, jednokratna doza Fab PEG je smanjila IgG u plazmi za približno 70-80%, dostižući nadir na približno 7 dana i vraćajući se na nivoe pre primene doze do 63. dana. Ponavljanje doze 67. dana je postiglo slične rezultate. ;[0347] Za obe dozne grupe Faze II, 4 nedelјne doze Fab PEG su smanjile IgG u plazmi za približno 70-80%, dostižući ponovo nadir oko 7 dana nakon prve doze. Rezultati su prikazani na Slici 13. ;;Primer 8 Efekat CA170_01519.g57 Fab'PEG i CA170_01519.g57 IgG4P kod Cynomolgus majmuna ;[0348] Efekti CA170_01519g.57 Fab'PEG i CA170_01519g.57 IgG4P na endogeni IgG u plazmi su određeni kod Cynomolgus majmuna. Životinjama su primenjen doze kao što je prikazano u Tabeli 8, kod 4 životinje po tretiranoj grupi. IgG u plazmi i farmakokinetika anti-FcRn entiteta su praćeni imunoanalizom (pogledati Tabelu 8A za postupke imunoanalize) i sa LC-MS/MS. ;;Tabela 8 Režimi tretmana kod Cynomolgus majmuna. ;;; ; Tabela 8A IgG u plazmi i postupci PK imunoanalize ;;; ;;; Efekat na koncentraciju IgG-a u plazmi. ;;[0349] Podaci imuno i LC-MS/MS analiza IgG-a u plazmi su bili u skladu. IgG u plazmi je bio smanjen primenom anti-FcRn Fab'PEG ili anti-FcRn IgG4P (pogledati Slike 15 i 16 i Slike 17 i 18, tim redom; pogledati Sliku 19 za kontrolu). Za oba anti-FcRn entiteta, jednokratna doza je smanjila IgG plazme za približno 70-80%, dostigavši nadir na približno 7 dana i vraćajući se na nivoe pre primene doze do 62. dana. Ponavljanje doze 63. i 65. dana, kao što je opisano, postiglo je slične rezultate. ;[0350] Ponovlјena primena doze anti-FcRn Fab'PEG ili IgG4P je smanjila IgG u plazmi za približno 60-80% i održavan je nivo IgG-a tokom doznog perioda. Ponovo, dostignut je nadir na oko 7 dana nakon prve doze. Rezultati su prikazani na Slici 16 i 18. ;;Primer 9 Efekat CA170_01519.g57 Fab'PEG, CA170_01519.g57 IgG1, CA170_01519.g57 IgG4P, CA170_01519.g57 Fab'HSA, CA170_01519.g57 FabFv i CA170_01519.g57 Fab u hFcRn transgenim miševima ;;[0351] Efekat različitih različitih formata antitela CA170_01519.g57 na klirens humanog IVIG je određen u miševima transgenim za humanim FcRn. Ispitivani formati su bili CA170_01519.g57 Fab'PEG, CA170_01519.g57 IgG1, CA170_01519.g57 IgG4P, CA170_01519.g57 Fab'HSA, CA170_01519.g57 FabFv i CA170_01519.g57 Fab i rezultati i su prikazani na Slikama 20, 21, 22, 23 i 24, tim redom. Jednokratne doze aktivnog jedinjenja su bile kao što je prikazano na Slikama. Da bi se detektovali njihovi efekti na klirens humanog IgG (IVIG), miševima je injecirano 500 mg/kg humanog IVIG-a koji je kvantifikovan upotrebom LCMSMS u serijskim uzorcima plazme koji su skupljani iz repova miševa u intervalima. Blokiranje hFcRn svakim od ispitivanih različitih formata antitela je rezultovalo ubrzanim klirensom hIVIG-a i uočene su niže koncentracije ukupnog IgG-a u poređenju sa kontrolnim miševima. ;;Anti-FcRn tretman povećava klirens hIgG-a u hFcRn transgenim miševima ;;[0352] Humanizovani FcRn transgeni miševi (B6.Cg-Fcgrt<tm1Dcr>Tg(FCGRT)32Dcr/DcrJ, JAX miševi) su intravenskom infuzijom tretirani sa 500 mg/kg humanog IgG-a (humani IgI 10% Gamunex-c, Talecris Biotherapeutics). Nakon 24 sata, životinjama su intravenski, jednokratno primenjeni kontrola sa nosačem (PBS) ili anti-FcRn. Uzorci krvi iz repa su uzimani na -24, 8, 24, 48, 72, 144 i 192 sata u odnosu na tretman sa anti-FcRn. Serumski nivoi humanog IgG-a u hFcRn miševima i farmakokinetika FcRn inhibitora su određivani upotrebom LC-MS/MS. Podaci predstavlјeni na Slikama od 20 do 24 predstavljaju srednju vrednost ± SEM za 3-6 miševa po tretiranoj grupi. ;;Kvantifikacija humanog IgG-a, endogenog IgG-a Cynomolgus majmuna i inhibitora FcRn sa LC-MS/MS ;;[0353] Humani IgG, IgG Cynomolgus majmuna i FcRn inhibitori (1519g57 Fab'PEG, 1519.g57 IgG4P, 1519.g57 IgG1, 1519.g57 FabFv, 1519g57 Fab i 1519g57 Fab'HAS) su kvantifikovani upotrebom tečne hromatografske analize udružene sa masenom spektormetrijom (LC-MS/MS) nakon digestije tripsinom. ;[0354] Kvantifikacija je postignuta upoređivanjem sa autentičnim standardnim spajkovanim materijalom u poznatim koncentracijama u praznom matriksu, dok je spajkovan mioglobin konja korišćen kao interni standard. Odabrani su jedinstveni ("proteotipski") peptidi za sve ispitivane analite od interesa i oba uzorka i kalibracioni uzorci su izloženi digestiji tripsinom kao što je opisano u nastavku teksta. ;[0355] Ukratko, digestija tripsinom za uzorak seruma od 5 µl je urađena preko noći, upotrebom modifikovanog tripsina sa stepenom čistoće za sekvenciranje (Promega, Southampton, UK) nakon denaturacije sa acetonitrilom/tris (2-karboksietil) fosfinom i karbamidometilacije sa jodoacetamidom (sve od firme Sigma-Aldrich, Poole, UK). ;[0356] Analiti su razdvojeni upotrebom Onyx monolitične C18 kolone (100x4,6 mm, Phenomenex, Macclesfield, UK) uz gradijent od 2 do 95% (v/v) smeše voda/acetonitril (0,1% mravlјa kiselina) pri brzini protoka od 1,5 mL/min tokom 6 minuta. ;[0357] Zapremina injeciranja je bila 10 µL; sav eluent je uveden u izvor masenog spektrometra. ;[0358] Temperatura izvora masenog spektrometra je održavana na 600°C, a drugi parametri izvora (npr. energija sudara, potencijal deklasteriranja, pritisak gasa itd.) su optimizovani tako da se postigne maksimalna osetlјivost za svaki od peptida od interesa. Praćeni su selektivni prelazi za svaki od proteotipskih peptida od interesa. ;;Primer 10: Kristalografija i vezujući epitop. ;;[0359] Određena je kristalna struktura 1519g57 Fab’ i deglikozilovanog vanćelijskog domena humanog FcRn (vanćelijski domen alfa lanca (SEQ ID NO: 94) u asocijaciji sa beta2 mikroglobulinom SEQ ID NO: 95), pri čemu je FcRn oligsaharid isklјučen da bi se olakšala kristalizacija.1519.g57 Fab’ je reagovao sa 10-strukim molarnim viškom N-etil maleimida da bi se sprečilo formiranje diFab' i bilo koji postojeći diFab’ je uklonjen sa SEC (S200 na Akta FPLC). Vanćelijski domen humanog FcRn je tretiran sa PNGazomF da bi se uklonili N-vezani šećeri. Za ovu svrhu, koncentracija FcRn uzorka je podešena upotrebom PBS (pH 7,4) do 5 mg/ml i do ukupnog volumena od 1 ml. Ovakvom rastvoru humanog FcRn je dodato 200 jedinica PNGazeF (Roche). Smeša je inkubirana na 37°C tokom ~18 sati, nakon čega je obim deglikozilacije proveravan upotrebom SDS PAGE analize. Po završetku reakcije, deglikozilovani FcRn je prebačen u 50 mM natrijum acetat, 125 mM NaCl, pH 6,0. ;[0360] Kompleks je obrazovan inkubacijom smeše reagensa (Fab’:FcRn::1,2:1, w/w) na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta, i zatim je prečišćen upotrebom SEC (S200 upotrebom Akta FPLC). Skrining je urađen upotrebom različitih stanja koja su bila dostupna od firme Qiagen (približno 2000 uslova). Inkubacija i snimanja su urađeni upotrebom Formulatrix Rock Imager-a 1000 (za ukupan period inkubacije od 21 dana). Rezultat skrininga su prikazani u Tabelama 9, 10 i 11. ;Tabela 9 Rezultati kristalizacionog skriniga, pokazuju kristale upotrebljene za rendgenografsku analizu ;; ;; Tabela 10. Uslovi za prikupljanje i obradu podataka rendgenografske analize. ;; ; ;; Napomena: brojevi u zagradama se odnose na spoljni rezolucioni omotač ;;Tabela 11 Određivanje i fino podešavanje strukture. ;;; ;;; [0361] Nije bilo očigledne promene u FcRn strukturi nakon vezivanja 1519g57 Fab’ (poređenje ovog kompleksa sa publikovanim strukturama FcRn). Iz kristalne strukture je izračunato da je sadržaj sekundarne strukture: α-heliks 9,4%; β-ploča 45,2%; 3-10 okret 2,5%. ;[0362] Svi ostaci koji interaguju sa 1519g57 Fab’ su u α lancu FcRn (ne β2M) i označeni su ispod podeblјanim slovima. Ostaci koji su tako razmatrani obuhvataju sve osim 1 ostataka koji je kritičan za vezivanje Fc.1519g57 u regionu koji se preklapa sa regionom vezivanja Fc, što sugeriše da je blokada FcRn sa 1519g57 Fab’ jednostavna kompeticija, pri čemu je anti-FcRn efektivan zbog svog superiornog afiniteta. ;[0363] U α lancu FcRn sekvence su takođe istaknuti ostaci koji su uklјučeni u interakciju sa 1519g57 Fab’ (podebljana slova) i ostaci koji su kritični za interakciju sa Fc IgG (podvučeno). Svi osim jednog od njih su uklјučeni u prvonavedeno. ;SEQUENCE LISTING ;<110> UCB Biopharma SPRL ;<120> Anti-FcRn Antibodies ;<130> N412749EP-A ;<150> GB1208370.5 ;<151> 2012-05-14 ;<160> 95 ;<170> PatentIn version 3.5 ;<210> 1 ;<211> 10 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> CA170_1519 CDRH1 ;<400> 1 ;Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Met Val ;1 5 10 ;;<210> 2 ;<211> 17 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> CA170_1519 CDRH2 ;<400> 2 ;Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 ;;Gly ;;<210> 3 ;<211> 8 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> CA170_1519 CDRH3 ;Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr ;1 5 ;;<210> 4 ;<211> 16 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> CA170_1519 CDRL1 ;<400> 4 ;Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Gly Ala Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 ;;<210> 5 ;<211> 7 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> CA170_1519 CDRL2 ;<400> 5 ;Leu Val Ser Thr Leu Asp Ser ;1 5 ;;<210> 6 ;<211> 9 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> CA170_1519 CDRL3 ;<400> 6 ;Leu Gln Gly Thr His Phe Pro His Thr ;1 5 ;;<210> 7 ;<211> 112 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1519 VL region ;Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ala Leu Gly 1 5 10 15 ;Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Gly Ala ;20 25 30 ;Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln Arg Ser Gly Gln Ser 35 40 45 ;Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Ile Pro ;50 55 60 ;Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Glu Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 ;Arg Arg Val Glu Ala Asp Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly 85 90 95 ;Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 ;<210> 8 ;<211> 336 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1519 VL region ;<400> 8 ;gatgttgtga tgacccagac tccactgtct ttgtcggttg cccttggaca accagcctcc 60 atctcttgca agtcaagtca gagcctcgta ggtgctagtg gaaagacata tttgtattgg 120 ttatttcaga ggtccggcca gtctccaaag cgactaatct atctggtgtc cacactggac 180 tctggaattc ctgataggtt cagtggcagt ggagcagaga cagattttac tcttaaaatc 240 cgcagagtgg aagccgatga tttgggagtt tattactgct tgcaaggtac acattttcct 300 cacacgtttg gagctgggac caagctggaa ttgaaa 336 ;<210> 9 ;<211> 132 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1519 VL region with signal sequence ;<400> 9 ;Met Met Ser Pro Ala Gln Phe Leu Phe Leu Leu Met Leu Trp Ile Gln 1 5 10 15 ;Gly Thr Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser 20 25 30 ;Val Ala Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser 35 40 45 ;Leu Val Gly Ala Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln Arg 50 55 60 ;Ser Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp 65 70 75 80 ;Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Glu Thr Asp Phe 85 90 95 ;Thr Leu Lys Ile Arg Arg Val Glu Ala Asp Asp Leu Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 ;Cys Leu Gln Gly Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys 115 120 125 ;Leu Glu Leu Lys ;130 ;<210> 10 ;<211> 396 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1519 VL region with signal sequence ;<400> 10 ;atgatgagtc ctgcccagtt cctgtttctg ctgatgctct ggattcaggg aaccagtggt 60 gatgttgtga tgacccagac tccactgtct ttgtcggttg cccttggaca accagcctcc 120 atctcttgca agtcaagtca gagcctcgta ggtgctagtg gaaagacata tttgtattgg 180 ttatttcaga ggtccggcca gtctccaaag cgactaatct atctggtgtc cacactggac 240 tctggaattc ctgataggtt cagtggcagt ggagcagaga cagattttac tcttaaaatc 300 cgcagagtgg aagccgatga tttgggagtt tattactgct tgcaaggtac acattttcct 360 cacacgtttg gagctgggac caagctggaa ttgaaa 396 ;<210> 11 ;<211> 116 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1519 VH region ;<400> 11 ;Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 ;Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 ;Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 ;Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 ;Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ;Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 ;Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 ;Val Thr Val Ser ;115 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1519 VH region ;<400> 12 ;gaggtgccgc tggtggagtc tgggggcggc tcagtgcagc ctgggaggtc catgaaactc 60 tcctgtgtag tctcaggatt cactttcagt aattatggca tggtctgggt ccgccaggct 120 ccaaagaagg gtctggagtg ggtcgcatat attgattctg atggtgataa tacttactac 180 cgagattccg tgaagggccg attcactatc tccagaaata atgcaaaaag caccctatat 240 ttgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtac aacagggatt 300 gtccggccct ttctctattg gggccaagga accacggtca ccgtctcg 348 ;;<210> 13 ;<211> 135 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1519 VH region with signal sequence ;<400> 13 ;Met Asp Ile Ser Leu Ser Leu Ala Phe Leu Val Leu Phe Ile Lys Gly ;1 5 10 15 ;;Val Arg Cys Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln ;20 25 30 ;;Pro Gly Arg Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe ;35 40 45 ;;Ser Asn Tyr Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Lys Gly Leu ;50 55 60 ;;Glu Trp Val Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg ;65 70 75 80 ;;Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ala Lys Ser ;85 90 95 ;Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr 100 105 110 ;;Tyr Tyr Cys Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln ;115 120 125 ;;Gly Thr Thr Val Thr Val Ser ;130 135 ;;<210> 14 ;<211> 405 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1519 VH region with signal sequence ;<400> 14 ;atggacatca gtctcagctt ggctttcctt gtccttttca taaaaggtgt ccggtgtgag 60 gtgccgctgg tggagtctgg gggcggctca gtgcagcctg ggaggtccat gaaactctcc 120 tgtgtagtct caggattcac tttcagtaat tatggcatgg tctgggtccg ccaggctcca 180 aagaagggtc tggagtgggt cgcatatatt gattctgatg gtgataatac ttactaccga 240 gattccgtga agggccgatt cactatctcc agaaataatg caaaaagcac cctatatttg 300 caaatggaca gtctgaggtc tgaggacacg gccacttatt actgtacaac agggattgtc 360 cggccctttc tctattgggg ccaaggaacc acggtcaccg tctcg 405 ;;<210> 15 ;<211> 112 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 V-region ;<400> 15 ;Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly ;1 5 10 15 ;;Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Gly Ala ;20 25 30 ;Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln Lys Pro Gly Lys Ala ;35 40 45 ;;Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Ile Pro ;50 55 60 ;;Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile ;65 70 75 80 ;;Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly 85 90 95 ;;Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys ;100 105 110 ;;<210> 16 ;<211> 336 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 V-region (E. coli expression) ;<400> 16 ;gatatccaga tgacccagag tccaagcagt ctctccgcca gcgtaggcga tcgtgtgact 60 attacctgta aaagctccca gtccctggtg ggtgcaagcg gcaaaaccta cctgtactgg 120 ctcttccaga aaccgggcaa agctccgaaa cgcctgatct atctggtgtc taccctggat 180 agcggtattc cgtctcgttt ctccggtagc ggtagcggta ccgaattcac gctgaccatt 240 agctccctcc agccggagga ctttgctacc tattactgcc tccagggcac tcattttccg 300 cacactttcg gccagggtac caaactggaa atcaaa 336 ;;<210> 17 ;<211> 336 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 V-region (mammalian expression) ;<400> 17 ;gatatccaga tgacccagag cccatctagc ttatccgctt ccgttggtga tcgcgtgaca 60 attacgtgta agagctccca atctctcgtg ggtgcaagtg gcaagaccta tctgtactgg 120 ctctttcaga agcctggcaa ggcaccaaaa cggctgatct atctggtgtc tacccttgac 180 tctgggatac cgtcacgatt ttccggatct gggagcggaa ctgagttcac actcacgatt 240 tcatcgctgc aacccgagga ctttgctacc tactactgcc tgcaaggcac tcatttccct 300 cacactttcg gccaggggac aaaactcgaa atcaaa 336 ;;<210> 18 ;<211> 133 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 V-region with signal sequence (E. coli expression) <400> 18 ;Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala ;1 5 10 15 ;;Thr Val Ala Gln Ala Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu ;20 25 30 ;;Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln ;35 40 45 ;;Ser Leu Val Gly Ala Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln 50 55 60 ;;Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu ;65 70 75 80 ;;Asp Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu ;85 90 95 ;;Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 100 105 110 ;;Tyr Cys Leu Gln Gly Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr 115 120 125 ;;Lys Leu Glu Ile Lys ;130 ;<211> 399 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 V-region with signal sequence (E. coli expression) <400> 19 ;atgaaaaaga cagctatcgc aattgcagtg gccttggctg gtttcgctac cgtagcgcaa 60 gctgatatcc agatgaccca gagtccaagc agtctctccg ccagcgtagg cgatcgtgtg 120 actattacct gtaaaagctc ccagtccctg gtgggtgcaa gcggcaaaac ctacctgtac 180 tggctcttcc agaaaccggg caaagctccg aaacgcctga tctatctggt gtctaccctg 240 gatagcggta ttccgtctcg tttctccggt agcggtagcg gtaccgaatt cacgctgacc 300 attagctccc tccagccgga ggactttgct acctattact gcctccaggg cactcatttt 360 ccgcacactt tcggccaggg taccaaactg gaaatcaaa 399 ;;<210> 20 ;<211> 132 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 V-region with signal sequence (mammalian expression) <400> 20 ;Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 ;;Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser ;20 25 30 ;;Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser ;35 40 45 ;;Leu Val Gly Ala Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln Lys ;50 55 60 ;;Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp ;65 70 75 80 ;;Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe ;Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr 100 105 110 ;;Cys Leu Gln Gly Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys 115 120 125 ;;Leu Glu Ile Lys ;130 ;;<210> 21 ;<211> 396 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 V-region with signal sequence (mammalian expression) <400> 21 ;atgtctgtcc ccacccaagt cctcggactc ctgctactct ggcttacaga tgccagatgc 60 gatatccaga tgacccagag cccatctagc ttatccgctt ccgttggtga tcgcgtgaca 120 attacgtgta agagctccca atctctcgtg ggtgcaagtg gcaagaccta tctgtactgg 180 ctctttcaga agcctggcaa ggcaccaaaa cggctgatct atctggtgtc tacccttgac 240 tctgggatac cgtcacgatt ttccggatct gggagcggaa ctgagttcac actcacgatt 300 tcatcgctgc aacccgagga ctttgctacc tactactgcc tgcaaggcac tcatttccct 360 cacactttcg gccaggggac aaaactcgaa atcaaa 396 ;;<210> 22 ;<211> 219 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 light chain (V constant) ;<400> 22 ;Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly ;1 5 10 15 ;;Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Gly Ala ;20 25 30 ;Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 ;Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Ile Pro 50 55 60 ;Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 ;Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly 85 90 95 ;Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 ;Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 ;Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 ;Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 ;Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 ;Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 ;Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 ;Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys ;210 215 ;<210> 23 ;<211> 657 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<223> 1519 gL20 light chain (V constant, E. coli expression) ;<400> 23 ;gatatccaga tgacccagag tccaagcagt ctctccgcca gcgtaggcga tcgtgtgact 60 attacctgta aaagctccca gtccctggtg ggtgcaagcg gcaaaaccta cctgtactgg 120 ctcttccaga aaccgggcaa agctccgaaa cgcctgatct atctggtgtc taccctggat 180 agcggtattc cgtctcgttt ctccggtagc ggtagcggta ccgaattcac gctgaccatt 240 agctccctcc agccggagga ctttgctacc tattactgcc tccagggcac tcattttccg 300 cacactttcg gccagggtac caaactggaa atcaaacgta cggtagcggc cccatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcaccagta acaaaaagtt ttaatagagg ggagtgt 657 ;;<210> 24 ;<211> 657 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 light chain (V constant, mammalian expression) <400> 24 ;gatatccaga tgacccagag tccaagcagt ctctccgcca gcgtaggcga tcgtgtgact 60 attacctgta aaagctccca gtccctggtg ggtgcaagcg gcaaaaccta cctgtactgg 120 ctcttccaga aaccgggcaa agctccgaaa cgcctgatct atctggtgtc taccctggat 180 agcggtattc cgtctcgttt ctccggtagc ggtagcggta ccgaattcac gctgaccatt 240 agctccctcc agccggagga ctttgctacc tattactgcc tccagggcac tcattttccg 300 cacactttcg gccagggtac caaactggaa atcaaacgta cggtagcggc cccatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657 ;<210> 25 ;<211> 240 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 light chain with signal sequence (E. coli expression) <400> 25 ;Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala ;1 5 10 15 ;Thr Val Ala Gln Ala Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu ;20 25 30 ;Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln ;35 40 45 ;Ser Leu Val Gly Ala Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln ;50 55 60 ;Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu ;65 70 75 80 ;Asp Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu ;85 90 95 ;Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr ;100 105 110 ;Tyr Cys Leu Gln Gly Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr ;115 120 125 ;Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe ;130 135 140 ;Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys ;145 150 155 160 ;Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln 180 185 190 ;;Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser ;195 200 205 ;;Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His ;210 215 220 ;;Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys ;225 230 235 240 ;;<210> 26 ;<211> 720 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 light chain with signal sequence (E. coli expression) <400> 26 ;atgaaaaaga cagctatcgc aattgcagtg gccttggctg gtttcgctac cgtagcgcaa 60 gctgatatcc agatgaccca gagtccaagc agtctctccg ccagcgtagg cgatcgtgtg 120 actattacct gtaaaagctc ccagtccctg gtgggtgcaa gcggcaaaac ctacctgtac 180 tggctcttcc agaaaccggg caaagctccg aaacgcctga tctatctggt gtctaccctg 240 gatagcggta ttccgtctcg tttctccggt agcggtagcg gtaccgaatt cacgctgacc 300 attagctccc tccagccgga ggactttgct acctattact gcctccaggg cactcatttt 360 ccgcacactt tcggccaggg taccaaactg gaaatcaaac gtacggtagc ggccccatct 420 gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 480 ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 540 caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 600 ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 660 gaagtcaccc atcagggcct gagctcacca gtaacaaaaa gttttaatag aggggagtgt 720 ;;<210> 27 ;<211> 239 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 light chain with signal sequence (mammalian expression) <400> 27 ;Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr ;1 5 10 15 ;Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser ;20 25 30 ;Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser ;35 40 45 ;Leu Val Gly Ala Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln Lys ;50 55 60 ;Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp ;65 70 75 80 ;Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe ;85 90 95 ;Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr ;100 105 110 ;Cys Leu Gln Gly Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys ;115 120 125 ;Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro ;130 135 140 ;Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu ;145 150 155 160 ;Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp ;165 170 175 ;Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp ;180 185 190 ;Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 ;;Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln ;210 215 220 ;;Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys ;225 230 235 ;;<210> 28 ;<211> 717 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 light chain with signal sequence (mammalian expression) <400> 28 ;atgtctgtcc ccacccaagt cctcggactc ctgctactct ggcttacaga tgccagatgc 60 gatatccaga tgacccagag cccatctagc ttatccgctt ccgttggtga tcgcgtgaca 120 attacgtgta agagctccca atctctcgtg ggtgcaagtg gcaagaccta tctgtactgg 180 ctctttcaga agcctggcaa ggcaccaaaa cggctgatct atctggtgtc tacccttgac 240 tctgggatac cgtcacgatt ttccggatct gggagcggaa ctgagttcac actcacgatt 300 tcatcgctgc aacccgagga ctttgctacc tactactgcc tgcaaggcac tcatttccct 360 cacactttcg gccaggggac aaaactcgaa atcaaacgta cggtagcggc cccatctgtc 420 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 480 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 540 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 600 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 660 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 717 ;;<210> 29 ;<211> 116 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gH20 V-region ;Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly ;1 5 10 15 ;Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 ;Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val ;35 40 45 ;Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val ;50 55 60 ;Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr ;65 70 75 80 ;Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys ;85 90 95 ;Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu ;100 105 110 ;Val Thr Val Ser ;115 ;<210> 30 ;<211> 348 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gH20 V-region (E. coli expression) ;<400> 30 ;gaggttccgc tggtcgagtc tggaggcggg cttgtccagc ctggagggag cctgcgtctc 60 tcttgtgcag tatctggctt cacgttctcc aactacggta tggtgtgggt tcgtcaggct 120 ccaggtaaag gtctggaatg ggtggcgtat attgactccg acggcgacaa cacctactat 180 cgcgactctg tgaaaggtcg cttcaccatt tcccgcgata acgccaaatc cagcctgtac 240 ctgcagatga acagcctgcg tgctgaagat actgcggtgt actattgcac cactggcatc 300 gtgcgtccgt ttctgtattg gggtcagggt accctcgtta ctgtctcg 348 <212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gH20 V-region (mammalian expression) ;<400> 31 ;gaggtaccac ttgtggaaag cggaggaggt cttgtgcagc ctggaggaag tttacgtctc 60 tcttgtgctg tgtctggctt caccttctcc aattacggaa tggtctgggt cagacaagca 120 cctggaaagg gtcttgaatg ggtggcctat attgactctg acggggacaa cacctactat 180 cgggattccg tgaaaggacg cttcacaatc tcccgagata acgccaagag ctcactgtac 240 ctgcagatga atagcctgag agccgaggat actgccgtgt actattgcac aacgggaatc 300 gttaggcctt ttctgtactg gggacagggc accttggtta ctgtctcg 348 ;;<210> 32 ;<211> 137 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gH20 V-region (E. coli expression) ;<400> 32 ;Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala ;1 5 10 15 ;;Thr Val Ala Gln Ala Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu ;20 25 30 ;;Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe ;35 40 45 ;;Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys ;50 55 60 ;;Gly Leu Glu Trp Val Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr ;65 70 75 80 ;;Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala ;85 90 95 ;Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 100 105 110 ;;Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp ;115 120 125 ;;Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser ;130 135 ;;<210> 33 ;<211> 411 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gH20 V-region (E. coli expression) ;<400> 33 ;atgaagaaga ctgctatagc aattgcagtg gcgctagctg gtttcgccac cgtggcgcaa 60 gctgaggttc cgctggtcga gtctggaggc gggcttgtcc agcctggagg gagcctgcgt 120 ctctcttgtg cagtatctgg cttcacgttc tccaactacg gtatggtgtg ggttcgtcag 180 gctccaggta aaggtctgga atgggtggcg tatattgact ccgacggcga caacacctac 240 tatcgcgact ctgtgaaagg tcgcttcacc atttcccgcg ataacgccaa atccagcctg 300 tacctgcaga tgaacagcct gcgtgctgaa gatactgcgg tgtactattg caccactggc 360 atcgtgcgtc cgtttctgta ttggggtcag ggtaccctcg ttactgtctc g 411 ;;<210> 34 ;<211> 135 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gH20 V-region (mammalian expression) ;<400> 34 ;Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly ;1 5 10 15 ;;Val His Ser Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln ;20 25 30 ;Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe ;35 40 45 ;Ser Asn Tyr Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu ;50 55 60 ;Glu Trp Val Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg ;65 70 75 80 ;Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser ;85 90 95 ;Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 ;Tyr Tyr Cys Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln ;115 120 125 ;Gly Thr Leu Val Thr Val Ser ;130 135 ;<210> 35 ;<211> 405 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gH20 V-region with signal sequence (mammalian expression) <400> 35 ;atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggagt ccattctgag 60 gtaccacttg tggaaagcgg aggaggtctt gtgcagcctg gaggaagttt acgtctctct 120 tgtgctgtgt ctggcttcac cttctccaat tacggaatgg tctgggtcag acaagcacct 180 ggaaagggtc ttgaatgggt ggcctatatt gactctgacg gggacaacac ctactatcgg 240 gattccgtga aaggacgctt cacaatctcc cgagataacg ccaagagctc actgtacctg 300 cagatgaata gcctgagagc cgaggatact gccgtgtact attgcacaac gggaatcgtt 360 aggccttttc tgtactgggg acagggcacc ttggttactg tctcg 405 ;<210> 36 ;<211> 228 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 Fab’ heavy chain (V human gamma-1 CH1 hinge) <400> 36 ;Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 ;Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 ;Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 ;Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 ;Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr 65 70 75 80 ;Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 ;Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 ;Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 ;Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 ;Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 ;Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 ;Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 ;Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn ;195 200 205 ;;Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His ;210 215 220 ;;Thr Cys Ala Ala ;225 ;;<210> 37 ;<211> 684 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 Fab’ heavy chain (V human gamma-1 CH1 hinge, E.coli expression) ;<400> 37 ;gaggttccgc tggtcgagtc tggaggcggg cttgtccagc ctggagggag cctgcgtctc 60 tcttgtgcag tatctggctt cacgttctcc aactacggta tggtgtgggt tcgtcaggct 120 ccaggtaaag gtctggaatg ggtggcgtat attgactccg acggcgacaa cacctactat 180 cgcgactctg tgaaaggtcg cttcaccatt tcccgcgata acgccaaatc cagcctgtac 240 ctgcagatga acagcctgcg tgctgaagat actgcggtgt actattgcac cactggcatc 300 gtgcgtccgt ttctgtattg gggtcagggt accctcgtta ctgtctcgag cgcttctaca 360 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtcgacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660 gacaaaactc acacatgcgc cgcg 684 ;;<210> 38 ;<211> 684 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 Fab’ heavy chain (V human gamma-1 CH1 hinge, mammalian expression) ;<400> 38 ;gaggtaccac ttgtggaaag cggaggaggt cttgtgcagc ctggaggaag tttacgtctc 60 tcttgtgctg tgtctggctt caccttctcc aattacggaa tggtctgggt cagacaagca 120 cctggaaagg gtcttgaatg ggtggcctat attgactctg acggggacaa cacctactat 180 cgggattccg tgaaaggacg cttcacaatc tcccgagata acgccaagag ctcactgtac 240 ctgcagatga atagcctgag agccgaggat actgccgtgt actattgcac aacgggaatc 300 gttaggcctt ttctgtactg gggacagggc accttggtta ctgtctcgag cgcttctaca 360 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtcgacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660 gacaaaactc acacatgcgc cgcg 684 ;;<210> 39 ;<211> 249 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gH20 Fab’ heavy chain with signal sequence (E. coli expression) ;<400> 39 ;Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala ;1 5 10 15 ;;Thr Val Ala Gln Ala Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu ;20 25 30 ;;Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe ;35 40 45 ;;Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys ;50 55 60 ;Gly Leu Glu Trp Val Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr 65 70 75 80 ;Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala 85 90 95 ;Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 100 105 110 ;Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp 115 120 125 ;Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 ;Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160 ;Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175 ;Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 ;Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205 ;Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 210 215 220 ;His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 225 230 235 240 ;Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Ala Ala ;245 ;<210> 40 ;<211> 747 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gH20 Fab’ heavy chain with signal sequence (E. coli expression) ;<400> 40 ;atgaagaaga ctgctatagc aattgcagtg gcgctagctg gtttcgccac cgtggcgcaa 60 gctgaggttc cgctggtcga gtctggaggc gggcttgtcc agcctggagg gagcctgcgt 120 ctctcttgtg cagtatctgg cttcacgttc tccaactacg gtatggtgtg ggttcgtcag 180 gctccaggta aaggtctgga atgggtggcg tatattgact ccgacggcga caacacctac 240 tatcgcgact ctgtgaaagg tcgcttcacc atttcccgcg ataacgccaa atccagcctg 300 tacctgcaga tgaacagcct gcgtgctgaa gatactgcgg tgtactattg caccactggc 360 atcgtgcgtc cgtttctgta ttggggtcag ggtaccctcg ttactgtctc gagcgcttct 420 acaaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540 tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600 tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 660 tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtcgaca agaaagttga gcccaaatct 720 tgtgacaaaa ctcacacatg cgccgcg 747 ;;<210> 41 ;<211> 247 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gH20 Fab’ heavy chain with signal sequence (mammalian expression) ;<400> 41 ;Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly ;1 5 10 15 ;;Val His Ser Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln ;20 25 30 ;;Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe ;35 40 45 ;;Ser Asn Tyr Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu ;50 55 60 ;Glu Trp Val Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg 65 70 75 80 ;Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser 85 90 95 ;Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 ;Tyr Tyr Cys Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln 115 120 125 ;Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 130 135 140 ;Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 145 150 155 160 ;Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 165 170 175 ;Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 180 185 190 ;Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 195 200 205 ;Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 210 215 220 ;Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 225 230 235 240 ;Lys Thr His Thr Cys Ala Ala ;245 ;<210> 42 ;<211> 741 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<223> 1519 gH20 Fab’ heavy chain with signal sequence (mammalian expression) ;<400> 42 ;atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggagt ccattctgag 60 gtaccacttg tggaaagcgg aggaggtctt gtgcagcctg gaggaagttt acgtctctct 120 tgtgctgtgt ctggcttcac cttctccaat tacggaatgg tctgggtcag acaagcacct 180 ggaaagggtc ttgaatgggt ggcctatatt gactctgacg gggacaacac ctactatcgg 240 gattccgtga aaggacgctt cacaatctcc cgagataacg ccaagagctc actgtacctg 300 cagatgaata gcctgagagc cgaggatact gccgtgtact attgcacaac gggaatcgtt 360 aggccttttc tgtactgggg acagggcacc ttggttactg tctcgagcgc ttctacaaag 420 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 480 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 540 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 600 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 660 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtc gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 720 aaaactcaca catgcgccgc g 741 ;;<210> 43 ;<211> 444 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 IgG4 heavy chain (V human gamma-4P constant) <400> 43 ;Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly ;1 5 10 15 ;;Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr ;20 25 30 ;;Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val ;35 40 45 ;;Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val ;Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr 65 70 75 80 ;Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 ;Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 ;Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 ;Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 ;Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 ;Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 ;Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 ;Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 ;Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro 210 215 220 ;Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240 ;Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255 ;Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe 260 265 270 ;Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro ;275 280 285 ;Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300 ;Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 305 310 315 320 ;Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala ;325 330 335 ;Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln ;340 345 350 ;Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 355 360 365 ;Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro ;370 375 380 ;Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 385 390 395 400 ;Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu 405 410 415 ;Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 420 425 430 ;Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys ;435 440 ;<210> 44 ;<211> 1939 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 IgG4 heavy chain (V human gamma-4P constant with exons) ;<400> 44 ;gaggtaccac ttgtggaaag cggaggaggt cttgtgcagc ctggaggaag tttacgtctc 60 tcttgtgctg tgtctggctt caccttctcc aattacggaa tggtctgggt cagacaagca 120 cctggaaagg gtcttgaatg ggtggcctat attgactctg acggggacaa cacctactat 180 cgggattccg tgaaaggacg cttcacaatc tcccgagata acgccaagag ctcactgtac 240 ctgcagatga atagcctgag agccgaggat actgccgtgt actattgcac aacgggaatc 300 gttaggcctt ttctgtactg gggacagggc accttggtta ctgtctcgag cgcttctaca 360 aagggcccat ccgtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcc 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacgaagac ctacacctgc 600 aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttggtga gaggccagca 660 cagggaggga gggtgtctgc tggaagccag gctcagccct cctgcctgga cgcaccccgg 720 ctgtgcagcc ccagcccagg gcagcaaggc atgccccatc tgtctcctca cccggaggcc 780 tctgaccacc ccactcatgc ccagggagag ggtcttctgg atttttccac caggctccgg 840 gcagccacag gctggatgcc cctaccccag gccctgcgca tacaggggca ggtgctgcgc 900 tcagacctgc caagagccat atccgggagg accctgcccc tgacctaagc ccaccccaaa 960 ggccaaactc tccactccct cagctcagac accttctctc ctcccagatc tgagtaactc 1020 ccaatcttct ctctgcagag tccaaatatg gtcccccatg cccaccatgc ccaggtaagc 1080 caacccaggc ctcgccctcc agctcaaggc gggacaggtg ccctagagta gcctgcatcc 1140 agggacaggc cccagccggg tgctgacgca tccacctcca tctcttcctc agcacctgag 1200 ttcctggggg gaccatcagt cttcctgttc cccccaaaac ccaaggacac tctcatgatc 1260 tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg gtggacgtga gccaggaaga ccccgaggtc 1320 cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 1380 gagcagttca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 1440 ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag gcctcccgtc ctccatcgag 1500 aaaaccatct ccaaagccaa aggtgggacc cacggggtgc gagggccaca tggacagagg 1560 tcagctcggc ccaccctctg ccctgggagt gaccgctgtg ccaacctctg tccctacagg 1620 gcagccccga gagccacagg tgtacaccct gcccccatcc caggaggaga tgaccaagaa 1680 ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg 1740 ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga 1800 cggctccttc ttcctctaca gcaggctaac cgtggacaag agcaggtggc aggaggggaa 1860 tgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacac agaagagcct 1920 ctccctgtct ctgggtaaa 1939 ;;<210> 45 ;<211> 1996 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 IgG4 heavy chain (V human gamma-4P constant) with signal sequence ;<400> 45 ;atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggagt ccattctgag 60 gtaccacttg tggaaagcgg aggaggtctt gtgcagcctg gaggaagttt acgtctctct 120 tgtgctgtgt ctggcttcac cttctccaat tacggaatgg tctgggtcag acaagcacct 180 ggaaagggtc ttgaatgggt ggcctatatt gactctgacg gggacaacac ctactatcgg 240 gattccgtga aaggacgctt cacaatctcc cgagataacg ccaagagctc actgtacctg 300 cagatgaata gcctgagagc cgaggatact gccgtgtact attgcacaac gggaatcgtt 360 aggccttttc tgtactgggg acagggcacc ttggttactg tctcgagcgc ttctacaaag 420 ggcccatccg tcttccccct ggcgccctgc tccaggagca cctccgagag cacagccgcc 480 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 540 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 600 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cgaagaccta cacctgcaac 660 gtagatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagagag ttggtgagag gccagcacag 720 ggagggaggg tgtctgctgg aagccaggct cagccctcct gcctggacgc accccggctg 780 tgcagcccca gcccagggca gcaaggcatg ccccatctgt ctcctcaccc ggaggcctct 840 gaccacccca ctcatgccca gggagagggt cttctggatt tttccaccag gctccgggca 900 gccacaggct ggatgcccct accccaggcc ctgcgcatac aggggcaggt gctgcgctca 960 gacctgccaa gagccatatc cgggaggacc ctgcccctga cctaagccca ccccaaaggc 1020 caaactctcc actccctcag ctcagacacc ttctctcctc ccagatctga gtaactccca 1080 atcttctctc tgcagagtcc aaatatggtc ccccatgccc accatgccca ggtaagccaa 1140 cccaggcctc gccctccagc tcaaggcggg acaggtgccc tagagtagcc tgcatccagg 1200 gacaggcccc agccgggtgc tgacgcatcc acctccatct cttcctcagc acctgagttc 1260 ctggggggac catcagtctt cctgttcccc ccaaaaccca aggacactct catgatctcc 1320 cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg gacgtgagcc aggaagaccc cgaggtccag 1380 ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 1440 cagttcaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 1500 aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaaggcc tcccgtcctc catcgagaaa 1560 accatctcca aagccaaagg tgggacccac ggggtgcgag ggccacatgg acagaggtca 1620 gctcggccca ccctctgccc tgggagtgac cgctgtgcca acctctgtcc ctacagggca 1680 gccccgagag ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag gaggagatga ccaagaacca 1740 ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga 1800 gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg 1860 ctccttcttc ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc aggtggcagg aggggaatgt 1920 cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacacaga agagcctctc 1980 cctgtctctg ggtaaa 1996 ;;<210> 46 ;<211> 347 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gL20 FabFv light chain ;<400> 46 ;Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly ;1 5 10 15 ;;Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Gly Ala ;20 25 30 ;;Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln Lys Pro Gly Lys Ala ;35 40 45 ;Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Ile Pro 50 55 60 ;Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 ;Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly 85 90 95 ;Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 ;Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 ;Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 ;Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 ;Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 ;Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 ;Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 ;Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Ser Gly Gly Gly Gly 210 215 220 ;Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr 225 230 235 240 ;Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 245 250 255 ;Thr Cys Gln Ser Ser Pro Ser Val Trp Ser Asn Phe Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Ala Ser 275 280 285 ;;Lys Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly ;290 295 300 ;;Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala ;305 310 315 320 ;;Thr Tyr Tyr Cys Gly Gly Gly Tyr Ser Ser Ile Ser Asp Thr Thr Phe ;325 330 335 ;;Gly Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr ;340 345 ;;<210> 47 ;<211> 1041 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gL20 FabFv light chain ;<400> 47 ;gatatccaga tgacccagag cccatctagc ttatccgctt ccgttggtga tcgcgtgaca 60 attacgtgta agagctccca atctctcgtg ggtgcaagtg gcaagaccta tctgtactgg 120 ctctttcaga agcctggcaa ggcaccaaaa cggctgatct atctggtgtc tacccttgac 180 tctgggatac cgtcacgatt ttccggatct gggagcggaa ctgagttcac actcacgatt 240 tcatcgctgc aacccgagga ctttgctacc tactactgcc tgcaaggcac tcatttccct 300 cacactttcg gccaggggac aaaactcgaa atcaaacgta cggtagcggc cccatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctg 540 agcagcaccc tgacgctgtc taaagcagac tacgagaaac acaaagtgta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcaccagta acaaaaagtt ttaatagagg ggagtgtagc 660 ggtggcggtg gcagtggtgg gggaggctcc ggaggtggcg gttcagacat acaaatgacc 720 cagagtcctt catcggtatc cgcgtccgtt ggcgataggg tgactattac atgtcaaagc 780 tctcctagcg tctggagcaa ttttctatcc tggtatcaac agaaaccggg gaaggctcca 840 aaacttctga tttatgaagc ctcgaaactc accagtggag ttccgtcaag attcagtggc 900 tctggatcag ggacagactt cacgttgaca atcagttcgc tgcaaccaga ggactttgcg 960 acctactatt gtggtggagg ttacagtagc ataagtgata cgacatttgg gtgcggtact 1020 aaggtggaaa tcaaacgtac c 1041 ;<210> 48 ;<211> 367 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gL20 FabFv light chain with signal sequence ;<400> 48 ;Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 ;Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser ;20 25 30 ;Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser ;35 40 45 ;Leu Val Gly Ala Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln Lys ;50 55 60 ;Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp ;65 70 75 80 ;Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe ;85 90 95 ;Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr ;100 105 110 ;Cys Leu Gln Gly Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys 115 120 125 ;Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 130 135 140 ;Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160 ;Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 165 170 175 ;Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 180 185 190 ;Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 ;Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 210 215 220 ;Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Ser 225 230 235 240 ;Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp 245 250 255 ;Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp 260 265 270 ;Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Pro Ser Val Trp Ser Asn Phe 275 280 285 ;Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 290 295 300 ;Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 305 310 315 320 ;Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 325 330 335 ;Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gly Gly Tyr Ser Ser Ile Ser 340 345 350 ;Asp Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 355 360 365 ;;<210> 49 ;<211> 1101 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gL20 FabFv light chain with signal sequence ;<400> 49 ;atgtctgtcc ccacccaagt cctcggactc ctgctactct ggcttacaga tgccagatgc 60 gatatccaga tgacccagag cccatctagc ttatccgctt ccgttggtga tcgcgtgaca 120 attacgtgta agagctccca atctctcgtg ggtgcaagtg gcaagaccta tctgtactgg 180 ctctttcaga agcctggcaa ggcaccaaaa cggctgatct atctggtgtc tacccttgac 240 tctgggatac cgtcacgatt ttccggatct gggagcggaa ctgagttcac actcacgatt 300 tcatcgctgc aacccgagga ctttgctacc tactactgcc tgcaaggcac tcatttccct 360 cacactttcg gccaggggac aaaactcgaa atcaaacgta cggtagcggc cccatctgtc 420 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 480 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 540 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctg 600 agcagcaccc tgacgctgtc taaagcagac tacgagaaac acaaagtgta cgcctgcgaa 660 gtcacccatc agggcctgag ctcaccagta acaaaaagtt ttaatagagg ggagtgtagc 720 ggtggcggtg gcagtggtgg gggaggctcc ggaggtggcg gttcagacat acaaatgacc 780 cagagtcctt catcggtatc cgcgtccgtt ggcgataggg tgactattac atgtcaaagc 840 tctcctagcg tctggagcaa ttttctatcc tggtatcaac agaaaccggg gaaggctcca 900 aaacttctga tttatgaagc ctcgaaactc accagtggag ttccgtcaag attcagtggc 960 tctggatcag ggacagactt cacgttgaca atcagttcgc tgcaaccaga ggactttgcg 1020 acctactatt gtggtggagg ttacagtagc ataagtgata cgacatttgg gtgcggtact 1080 aaggtggaaa tcaaacgtac c 1101 ;;<210> 50 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 FabFv heavy chain ;<400> 50 ;Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 ;Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 ;Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 ;Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 ;Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr 65 70 75 80 ;Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 ;Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 ;Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 ;Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 ;Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 ;Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 ;Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 ;Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 ;;Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Ser Gly Gly Gly 210 215 220 ;;Gly Ser Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu 225 230 235 240 ;;Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu 245 250 255 ;;Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn Tyr Ala Ile Asn Trp 260 265 270 ;;Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly Ile Ile Trp 275 280 285 ;;Ala Ser Gly Thr Thr Phe Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr 290 295 300 ;;Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser 305 310 315 320 ;;Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Val Pro 325 330 335 ;;Gly Tyr Ser Thr Ala Pro Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu 340 345 350 ;;Val Thr Val Ser Ser ;355 ;;<210> 51 ;<211> 1071 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;;<220> ;<223> 1519gH20 FabFv heavy chain ;;<400> 51 ;gaggtaccac ttgtggaaag cggaggaggt cttgtgcagc ctggaggaag tttacgtctc 60 tcttgtgctg tgtctggctt caccttctcc aattacggaa tggtctgggt cagacaagca 120 cctggaaagg gtcttgaatg ggtggcctat attgactctg acggggacaa cacctactat 180 cgggattccg tgaaaggacg cttcacaatc tcccgagata acgccaagag ctcactgtac 240 ctgcagatga atagcctgag agccgaggat actgccgtgt actattgcac aacgggaatc 300 gttaggcctt ttctgtactg gggacagggc accttggtta ctgtctcgag cgcgtccaca 360 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccag tgacggtgtc gtggaactca 480 ggtgccctga ccagcggcgt tcacaccttc ccggctgtcc tacagtcttc aggactctac 540 tccctgagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtcgataaga aagttgagcc caaatcttgt 660 agtggaggtg ggggctcagg tggaggcggg accggtggag gtggcagcga ggttcaactg 720 cttgagtctg gaggaggcct agtccagcct ggagggagcc tgcgtctctc ttgtgcagta 780 agcggcatcg acctgagcaa ttacgccatc aactgggtga gacaagctcc ggggaagtgt 840 ttagaatgga tcggtataat atgggccagt gggacgacct tttatgctac atgggcgaaa 900 ggaaggttta caattagccg ggacaatagc aaaaacaccg tgtatctcca aatgaactcc 960 ttgcgagcag aggacacggc ggtgtactat tgtgctcgca ctgtcccagg ttatagcact 1020 gcaccctact tcgatctgtg gggacaaggg accctggtga ctgtttcaag t 1071 ;;<210> 52 ;<211> 376 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 FabFv heavy chain with signal sequence ;<400> 52 ;Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly ;1 5 10 15 ;;Val His Ser Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln ;20 25 30 ;Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 ;Ser Asn Tyr Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 ;Glu Trp Val Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg 65 70 75 80 ;Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser 85 90 95 ;Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 ;Tyr Tyr Cys Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln 115 120 125 ;Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 130 135 140 ;Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 145 150 155 160 ;Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 165 170 175 ;Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 180 185 190 ;Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 195 200 205 ;Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 210 215 220 ;Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Ser 225 230 235 240 ;Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Gly Ser Glu 245 250 255 ;Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser ;260 265 270 ;Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn Tyr Ala ;275 280 285 ;Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly ;290 295 300 ;Ile Ile Trp Ala Ser Gly Thr Thr Phe Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly ;305 310 315 320 ;Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln ;325 330 335 ;Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg ;340 345 350 ;Thr Val Pro Gly Tyr Ser Thr Ala Pro Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln ;355 360 365 ;Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser ;370 375 ;<210> 53 ;<211> 1128 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 FabFv heavy chain with signal sequence ;<400> 53 ;atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggagt ccattctgag 60 gtaccacttg tggaaagcgg aggaggtctt gtgcagcctg gaggaagttt acgtctctct 120 tgtgctgtgt ctggcttcac cttctccaat tacggaatgg tctgggtcag acaagcacct 180 ggaaagggtc ttgaatgggt ggcctatatt gactctgacg gggacaacac ctactatcgg 240 gattccgtga aaggacgctt cacaatctcc cgagataacg ccaagagctc actgtacctg 300 cagatgaata gcctgagagc cgaggatact gccgtgtact attgcacaac gggaatcgtt 360 aggccttttc tgtactgggg acagggcacc ttggttactg tctcgagcgc gtccacaaag 420 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 480 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccagtga cggtgtcgtg gaactcaggt 540 gccctgacca gcggcgttca caccttcccg gctgtcctac agtcttcagg actctactcc 600 ctgagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 660 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtc gataagaaag ttgagcccaa atcttgtagt 720 ggaggtgggg gctcaggtgg aggcgggacc ggtggaggtg gcagcgaggt tcaactgctt 780 gagtctggag gaggcctagt ccagcctgga gggagcctgc gtctctcttg tgcagtaagc 840 ggcatcgacc tgagcaatta cgccatcaac tgggtgagac aagctccggg gaagtgttta 900 gaatggatcg gtataatatg ggccagtggg acgacctttt atgctacatg ggcgaaagga 960 aggtttacaa ttagccggga caatagcaaa aacaccgtgt atctccaaat gaactccttg 1020 cgagcagagg acacggcggt gtactattgt gctcgcactg tcccaggtta tagcactgca 1080 ccctacttcg atctgtgggg acaagggacc ctggtgactg tttcaagt 1128 ;;<210> 54 ;<211> 107 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Human VK12-1-(1) A30 JK2 acceptor framework ;<400> 54 ;Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly ;1 5 10 15 ;;Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp ;20 25 30 ;;Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile ;35 40 45 ;;Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly ;50 55 60 ;;Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro ;65 70 75 80 ;Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Tyr ;85 90 95 ;;Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys ;100 105 ;;<210> 55 ;<211> 321 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Human VK12-1-(1) A30 JK2 acceptor framework ;<400> 55 ;gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt acccttacac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321 ;;<210> 56 ;<211> 112 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Human VH31-33-07 JH4 acceptor framework ;<400> 56 ;Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly ;1 5 10 15 ;;Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr ;20 25 30 ;;Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val ;35 40 45 ;;Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val ;50 55 60 ;Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr ;65 70 75 80 ;Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys ;85 90 95 ;Ala Arg Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser ;100 105 110 ;<210> 57 ;<211> 336 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Human VH31-33-07 JH4 acceptor framework ;<400> 57 ;gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt agctattgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtggccaac ataaagcaag atggaagtga gaaatactat 180 gtggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagatacttt 300 gactactggg gccagggaac cctggtcacc gtctcc 336 ;<210> 58 ;<211> 112 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1548 VL region ;<400> 58 ;Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ala Leu Gly ;1 5 10 15 ;Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Gly Ala ;20 25 30 ;Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln Arg Ser Gly Gln Ser ;Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Ile Pro ;50 55 60 ;;Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Glu Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 ;;Arg Arg Val Glu Ala Asp Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly 85 90 95 ;;Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 ;;<210> 59 ;<211> 336 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1548 VL region ;<400> 59 ;gatgttgtga tgacccagac tccactgtct ttgtcggttg cccttggaca accagcctcc 60 atctcttgca agtcaagtca gagcctcgta ggtgctagtg gaaagacata tttgtattgg 120 ttatttcaga ggtccggcca gtctccaaag cgactaatct atctggtgtc cacactggac 180 tctggaattc ctgataggtt cagtggcagt ggagcagaga cagattttac tcttaaaatc 240 cgcagagtgg aagccgatga tttgggagtt tattactgct tgcaaggtac acattttcct 300 cacacgtttg gagctgggac caagctggaa ataaaa 336 ;;<210> 60 ;<211> 116 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1548 VH region ;<400> 60 ;Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 ;Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 ;;Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val ;35 40 45 ;;Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val ;50 55 60 ;;Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr ;65 70 75 80 ;;Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys ;85 90 95 ;;Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met ;100 105 110 ;;Val Thr Val Ser ;115 ;;<210> 61 ;<211> 348 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1548 VH region ;<400> 61 ;gaggtgccgc tggtggagtc tgggggcggc tcagtgcagc ctgggaggtc catgaaactc 60 tcctgtgtag tctcaggatt cactttcagt aattatggca tggtctgggt ccgccaggct 120 ccaaagaagg gtctggagtg ggtcgcatat attgattctg atggtgataa tacttactac 180 cgagattccg tgaagggccg attcactatc tccagaaata atgcaaaaag caccctatat 240 ttgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtac aacagggatt 300 gtccggccct ttctctattg gggccaagga gtcatggtca cagtctcg 348 ;;<210> 62 ;<211> 112 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<223> Rat Ab 1644 VL region ;<400> 62 ;Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ala Ile Gly ;1 5 10 15 ;Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Gly Ala ;20 25 30 ;Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln Arg Ser Gly Gln Ser 35 40 45 ;Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Ile Pro ;50 55 60 ;Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Glu Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 ;Arg Arg Val Glu Ala Asp Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly 85 90 95 ;Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 ;<210> 63 ;<211> 336 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1644 VL region ;<400> 63 ;gatgttgtga tgacccagac tccactgtct ttgtcggttg ccattggaca accagcctcc 60 atctcttgca agtcaagtca gagcctcgta ggtgctagtg gaaagacata tttgtattgg 120 ttatttcaga ggtccggcca gtctccaaag cgactaatct atctggtgtc cacactggac 180 tctggaattc ctgataggtt cagtggcagt ggagcagaga cagattttac tcttaaaatc 240 cgcagagtgg aagccgatga tttgggagtt tattactgct tgcaaggtac acattttcct 300 cacacgtttg gagctgggac caagctggaa ctgaaa 336 <212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1644 VH region ;<400> 64 ;Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Arg ;1 5 10 15 ;Ser Thr Lys Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr ;20 25 30 ;Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val ;35 40 45 ;Ala Tyr Ile Gly Ser Asp Gly Asp Asn Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val ;50 55 60 ;Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr ;65 70 75 80 ;Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys ;85 90 95 ;Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr ;100 105 110 ;Val Thr Val Ser ;115 ;<210> 65 ;<211> 348 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1644 VH region ;<400> 65 ;gaggtgccgc tggtggagtc tgggggcggc tcagtgcagc ctgggaggtc cacgaaactc 60 tcctgtgtag tctcaggatt cactttcagt aactatggca tggtctgggt ccgccaggct 120 ccaaagaagg gtctggagtg ggtcgcatat attggttctg atggtgataa tatttactac 180 cgagattccg tgaagggtcg attcactatc tccagaaata atgcaaaaag caccctatat 240 ttgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtac aacagggatt 300 gtccggccct ttctctactg gggccaagga accacggtca ccgtctcg 348 ;<210> 66 ;<211> 112 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1496 VK region ;<400> 66 ;Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ala Leu Gly ;1 5 10 15 ;Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Gly Ala ;20 25 30 ;Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln Arg Ser Gly Gln Ser ;35 40 45 ;Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Ile Pro ;50 55 60 ;Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Glu Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile ;65 70 75 80 ;Arg Arg Val Glu Ala Asp Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly ;85 90 95 ;Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 ;<210> 67 ;<211> 336 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1496 VK region ;gatgttgtga tgacccagac tccactgtct ttgtcggttg cccttggaca accagcctcc 60 atctcttgca agtcaagtca gagcctcgta ggtgctagtg gaaagacata tttgtattgg 120 ttatttcaga ggtccggcca gtctccaaag cgactaatct atctggtgtc cacactggac 180 tctggaattc ctgataggtt cagtggcagt ggagcagaga cagattttac tcttaaaatc 240 cgcagagtgg aagccgatga tttgggagtt tattactgct tgcaaggtac acattttcct 300 cacacgtttg gagctgggac caagctggaa ctgaaa 336 ;;<210> 68 ;<211> 116 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1496 VH region ;<400> 68 ;Glu Val Leu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 ;;Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 ;;Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 ;;Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 ;;Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ;;Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 ;;Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met 100 105 110 ;;Val Thr Val Ser ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1496 VH region ;<400> 69 ;gaggtgctgc tggtggagtc tgggggcggc tcagtgcagc ctgggaggtc catgaaactc 60 tcctgtgtag tctcaggatt cactttcagt aattatggca tggtctgggt ccgccaggct 120 ccaaagaagg gtctggagtg ggtcgcatat attgattctg atggtgataa tacttactac 180 cgagattccg tgaagggccg attcactatc tccagaaata atgcaaaaag caccctatat 240 ttgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtac aacagggatt 300 gtccggccct ttctctattg gggccaagga accatggtca ccgtctcg 348 ;;<210> 70 ;<211> 14 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> framework ;<400> 70 ;Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser ;1 5 10 ;;<210> 71 ;<211> 12 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> framework ;<400> 71 ;Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys ;1 5 10 ;;<210> 72 ;<211> 447 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<223> 1519gH20 IgG1 heavy chain (V human gamma-1 constant) <400> 72 ;Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 ;Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 ;Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 ;Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 ;Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr 65 70 75 80 ;Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 ;Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 ;Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 ;Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 ;Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 ;Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 ;Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 ;Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 ;Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 ;Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 ;Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 ;Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 ;Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 ;Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 ;Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 ;Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 ;Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 ;Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 ;Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 ;Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 ;Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 ;;His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys ;435 440 445 ;;<210> 73 ;<211> 1947 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 IgG1 heavy chain (V human gamma-1 constant with exons) <400> 73 ;gaggtaccac ttgtggaaag cggaggaggt cttgtgcagc ctggaggaag tttacgtctc 60 tcttgtgctg tgtctggctt caccttctcc aattacggaa tggtctgggt cagacaagca 120 cctggaaagg gtcttgaatg ggtggcctat attgactctg acggggacaa cacctactat 180 cgggattccg tgaaaggacg cttcacaatc tcccgagata acgccaagag ctcactgtac 240 ctgcagatga atagcctgag agccgaggat actgccgtgt actattgcac aacgggaatc 300 gttaggcctt ttctgtactg gggacagggc accttggtta ctgtctcgag cgcttctaca 360 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtcgacaaga aagttggtga gaggccagca 660 cagggaggga gggtgtctgc tggaagccag gctcagcgct cctgcctgga cgcatcccgg 720 ctatgcagcc ccagtccagg gcagcaaggc aggccccgtc tgcctcttca cccggaggcc 780 tctgcccgcc ccactcatgc tcagggagag ggtcttctgg ctttttcccc aggctctggg 840 caggcacagg ctaggtgccc ctaacccagg ccctgcacac aaaggggcag gtgctgggct 900 cagacctgcc aagagccata tccgggagga ccctgcccct gacctaagcc caccccaaag 960 gccaaactct ccactccctc agctcggaca ccttctctcc tcccagatct gagtaactcc 1020 caatcttctc tctgcagagc ccaaatcttg tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc 1080 aggtaagcca gcccaggcct cgccctccag ctcaaggcgg gacaggtgcc ctagagtagc 1140 ctgcatccag ggacaggccc cagccgggtg ctgacacgtc cacctccatc tcttcctcag 1200 cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc 1260 tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc 1320 ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc 1380 cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc 1440 aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc 1500 ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag gtgggacccg tggggtgcga gggccacatg 1560 gacagaggcc ggctcggccc accctctgcc ctgagagtga ccgctgtacc aacctctgtc 1620 cctacagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1680 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1740 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1800 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1860 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1920 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1947 ;;<210> 74 ;<211> 2004 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 IgG1 heavy chain (V human gamma-1 constant) with signal sequence ;<400> 74 ;atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggagt ccattctgag 60 gtaccacttg tggaaagcgg aggaggtctt gtgcagcctg gaggaagttt acgtctctct 120 tgtgctgtgt ctggcttcac cttctccaat tacggaatgg tctgggtcag acaagcacct 180 ggaaagggtc ttgaatgggt ggcctatatt gactctgacg gggacaacac ctactatcgg 240 gattccgtga aaggacgctt cacaatctcc cgagataacg ccaagagctc actgtacctg 300 cagatgaata gcctgagagc cgaggatact gccgtgtact attgcacaac gggaatcgtt 360 aggccttttc tgtactgggg acagggcacc ttggttactg tctcgagcgc ttctacaaag 420 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 480 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 540 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 600 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 660 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtc gacaagaaag ttggtgagag gccagcacag 720 ggagggaggg tgtctgctgg aagccaggct cagcgctcct gcctggacgc atcccggcta 780 tgcagcccca gtccagggca gcaaggcagg ccccgtctgc ctcttcaccc ggaggcctct 840 gcccgcccca ctcatgctca gggagagggt cttctggctt tttccccagg ctctgggcag 900 gcacaggcta ggtgccccta acccaggccc tgcacacaaa ggggcaggtg ctgggctcag 960 acctgccaag agccatatcc gggaggaccc tgcccctgac ctaagcccac cccaaaggcc 1020 aaactctcca ctccctcagc tcggacacct tctctcctcc cagatctgag taactcccaa 1080 tcttctctct gcagagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagg 1140 taagccagcc caggcctcgc cctccagctc aaggcgggac aggtgcccta gagtagcctg 1200 catccaggga caggccccag ccgggtgctg acacgtccac ctccatctct tcctcagcac 1260 ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca 1320 tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg 1380 aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc 1440 gggaggagca gtacaacagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg 1500 actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca 1560 tcgagaaaac catctccaaa gccaaaggtg ggacccgtgg ggtgcgaggg ccacatggac 1620 agaggccggc tcggcccacc ctctgccctg agagtgaccg ctgtaccaac ctctgtccct 1680 acagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1740 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1800 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1860 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1920 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1980 agcctctccc tgtctccggg taaa 2004 ;;<210> 75 ;<211> 657 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 light chain (V constant, mammalian expression alternative) ;<400> 75 ;gatatccaga tgacccagag cccatctagc ttatccgctt ccgttggtga tcgcgtgaca 60 attacgtgta agagctccca atctctcgtg ggtgcaagtg gcaagaccta tctgtactgg 120 ctctttcaga agcctggcaa ggcaccaaaa cggctgatct atctggtgtc tacccttgac 180 tctgggatac cgtcacgatt ttccggatct gggagcggaa ctgagttcac actcacgatt 240 tcatcgctgc aacccgagga ctttgctacc tactactgcc tgcaaggcac tcatttccct 300 cacactttcg gccaggggac aaaactcgaa atcaaacgta cggtagcggc cccatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657 ;;<210> 76 ;<211> 684 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 Fab’ heavy chain (V human gamma-1 CH1 hinge, mammalian expression one base change from SEQ ID NO: 38) <400> 76 ;gaggtaccac ttgtggaaag cggaggaggt cttgtgcagc ctggaggaag tttacgtctc 60 tcttgtgctg tgtctggctt caccttctcc aattacggaa tggtctgggt cagacaagca 120 cctggaaagg gtcttgaatg ggtggcctat attgactctg acggggacaa cacctactat 180 cgggattccg tgaaaggacg cttcacaatc tcccgagata acgccaagag ctcactgtac 240 ctgcagatga atagcctgag agccgaggat actgccgtgt actattgcac aacgggaatc 300 gttaggcctt ttctgtactg gggacagggc accttggtta ctgtctcgag cgcttctaca 360 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660 gacaaaactc acacatgcgc cgcg 684 ;;<210> 77 ;<211> 741 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gH20 Fab’ heavy chain with signal sequence (mammalian expression one base changed from SEQ ID NO: 42) ;<400> 77 ;atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggagt ccattctgag 60 gtaccacttg tggaaagcgg aggaggtctt gtgcagcctg gaggaagttt acgtctctct 120 tgtgctgtgt ctggcttcac cttctccaat tacggaatgg tctgggtcag acaagcacct 180 ggaaagggtc ttgaatgggt ggcctatatt gactctgacg gggacaacac ctactatcgg 240 gattccgtga aaggacgctt cacaatctcc cgagataacg ccaagagctc actgtacctg 300 cagatgaata gcctgagagc cgaggatact gccgtgtact attgcacaac gggaatcgtt 360 aggccttttc tgtactgggg acagggcacc ttggttactg tctcgagcgc ttctacaaag 420 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 480 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 540 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 600 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 660 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 720 aaaactcaca catgcgccgc g 741 ;;<210> 78 ;<211> 346 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gL20 FabFv light chain (alternative sequence to SEQ ID NO: Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 ;Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Gly Ala 20 25 30 ;Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Phe Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 ;Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Ile Pro 50 55 60 ;Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 ;Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly 85 90 95 ;Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 ;Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 ;Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 ;Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 ;Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 ;Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 ;Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 ;Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser ;210 215 220 ;Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln ;225 230 235 240 ;Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr ;245 250 255 ;Cys Gln Ser Ser Pro Ser Val Trp Ser Asn Phe Leu Ser Trp Tyr Gln ;260 265 270 ;Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Ala Ser Lys ;275 280 285 ;Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr ;290 295 300 ;Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr 305 310 315 320 ;Tyr Tyr Cys Gly Gly Gly Tyr Ser Ser Ile Ser Asp Thr Thr Phe Gly ;325 330 335 ;Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr ;340 345 ;<210> 79 ;<211> 1038 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gL20 FabFv light chain (alternative sequence to SEQ ID NO: ;47) ;<400> 79 ;gacatccaga tgacccagtc cccctccagc ctgtccgcct ccgtgggcga cagagtgacc 60 atcacatgca agtcctccca gtccctggtc ggagcctccg gcaagaccta cctgtactgg 120 ctgttccaga agcccggcaa ggcccccaag cggctgatct acctggtgtc taccctggac 180 tccggcatcc cctcccggtt ctccggctct ggctctggca ccgagttcac cctgaccatc 240 tccagcctgc agcccgagga cttcgccacc tactactgtc tgcaaggcac ccacttcccc 300 cacaccttcg gccagggcac caagctggaa atcaagcgga ccgtagcggc cccatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgtggt 660 ggaggtggct ctggcggtgg tggctccgga ggcggaggaa gcgacatcca gatgacccag 720 agcccttcct ctgtaagcgc cagtgtcgga gacagagtga ctattacctg ccaaagctcc 780 ccttcagtct ggtccaattt tctatcctgg tatcagcaaa agcccggaaa ggctcctaaa 840 ttgctgatct acgaagcaag caaactcacc agcggcgtgc ccagcaggtt cagcggcagt 900 gggtctggaa ctgactttac cctgacaatc tcctcactcc agcccgagga cttcgccacc 960 tattactgcg gtggaggtta cagtagcata agtgatacga catttggatg cggcactaaa 1020 gtggaaatca agcgtacc 1038 ;;<210> 80 ;<211> 1071 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 FabFv heavy chain (alternative sequence to SEQ ID NO: ;51) ;<400> 80 ;gaggtgcccc tggtggaatc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc cctgagactg 60 tcttgcgccg tgtccggctt caccttctcc aactacggca tggtctgggt ccgacaggct 120 cctggcaagg gactggaatg ggtggcctac atcgactccg acggcgacaa cacctactac 180 cgggactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgggaca acgccaagtc ctccctgtac 240 ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcac caccggcatc 300 gtgcggccct ttctgtactg gggccagggc accctggtca ccgtgtcctc tgcttctaca 360 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc tggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660 tccggaggtg gcggttccgg aggtggcggt acaggtggcg gtgggtccga agtccagctg 720 cttgaatccg gaggcggact cgtgcagccc ggaggcagtc ttcgcttgtc ctgcgctgta 780 tctggaatcg acctgagcaa ttacgccatc aactgggtga gacaggcacc tgggaaatgc 840 ctcgaatgga tcggcattat atgggctagt gggacgacct tttatgctac atgggcgaag 900 ggtagattca caatctcacg ggataatagt aagaacacag tgtacctgca gatgaactcc 960 ctgcgagcag aggataccgc cgtttactat tgtgctcgca ctgtcccagg ttatagcact 1020 gcaccctact ttgatctgtg ggggcagggc actctggtca ccgtctcgtc c 1071 ;;<210> 81 ;<211> 112 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1548 VL region (alternative sequence to SEQ ID NO: 58) <400> 81 ;Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ala Ile Gly ;1 5 10 15 ;;Gln Pro Ala Ser Ile Ser Ser Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Gly Ala ;20 25 30 ;;Gly Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Leu Gln Arg Ser Gly Gln Ser ;35 40 45 ;;Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Ile Pro ;50 55 60 ;;Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Glu Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile ;65 70 75 80 ;;Arg Arg Val Glu Ala Asp Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly ;85 90 95 ;Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys 100 105 110 ;;<210> 82 ;<211> 336 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1548 VL region (alternative sequence to SEQ ID NO: 59) <400> 82 ;gatgttgtga tgacccagac tccactgtct ttgtcggttg ccattggaca accagcctcc 60 atctcttcta agtcaagtca gagcctcgta ggtgctggtg gaaagacata tttgtattgg 120 ttattacaga ggtccggcca gtctccaaag cgactaatct atctggtgtc cacactggac 180 tctggaattc ctgataggtt cagtggcagt ggagcagaga cagattttac tcttaaaatc 240 cgcagagtgg aagccgatga tttgggagtt tattactgct tgcaaggtac acattttcct 300 cacacgtttg gagctgggac caacctggaa ataaaa 336 ;;<210> 83 ;<211> 116 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1548 VH region (alternative sequence to SEQ ID NO: 60) <400> 83 ;Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Arg ;1 5 10 15 ;;Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 ;;Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val ;35 40 45 ;;Ala Tyr Ile Gly Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 ;;Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ;Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys ;85 90 95 ;;Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met ;100 105 110 ;;Val Thr Val Ser ;115 ;;<210> 84 ;<211> 348 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> Rat Ab 1548 VH region (alternative sequence to SEQ IS NO: 61) <400> 84 ;gaggtgccgc tggtggagtc tgggggcggc tcagtgcagc ctgggaggtc catgaaactc 60 tcctgtgtag tctcaggatt cactttcagt aactatggca tggtctgggt ccgccaggct 120 ccaaagaagg gtctggagtg ggtcgcatat attggttctg atggtgataa tacttactac 180 cgagattccg tgaagggccg attcactatc tccagaaata atgcaaaaag caccctatat 240 ttgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtac aacagggatt 300 gtccggccct ttctctactg gggccaagga gtcatggtca cagtctcg 348 ;;<210> 85 ;<211> 1947 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 IgG1 heavy chain (V human gamma-1 constant with exons one base change to SEQ ID NO: 71) ;<400> 85 ;gaggtaccac ttgtggaaag cggaggaggt cttgtgcagc ctggaggaag tttacgtctc 60 tcttgtgctg tgtctggctt caccttctcc aattacggaa tggtctgggt cagacaagca 120 cctggaaagg gtcttgaatg ggtggcctat attgactctg acggggacaa cacctactat 180 cgggattccg tgaaaggacg cttcacaatc tcccgagata acgccaagag ctcactgtac 240 ctgcagatga atagcctgag agccgaggat actgccgtgt actattgcac aacgggaatc 300 gttaggcctt ttctgtactg gggacagggc accttggtta ctgtctcgag cgcttctaca 360 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttggtga gaggccagca 660 cagggaggga gggtgtctgc tggaagccag gctcagcgct cctgcctgga cgcatcccgg 720 ctatgcagcc ccagtccagg gcagcaaggc aggccccgtc tgcctcttca cccggaggcc 780 tctgcccgcc ccactcatgc tcagggagag ggtcttctgg ctttttcccc aggctctggg 840 caggcacagg ctaggtgccc ctaacccagg ccctgcacac aaaggggcag gtgctgggct 900 cagacctgcc aagagccata tccgggagga ccctgcccct gacctaagcc caccccaaag 960 gccaaactct ccactccctc agctcggaca ccttctctcc tcccagatct gagtaactcc 1020 caatcttctc tctgcagagc ccaaatcttg tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc 1080 aggtaagcca gcccaggcct cgccctccag ctcaaggcgg gacaggtgcc ctagagtagc 1140 ctgcatccag ggacaggccc cagccgggtg ctgacacgtc cacctccatc tcttcctcag 1200 cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc 1260 tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc 1320 ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc 1380 cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc 1440 aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc 1500 ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag gtgggacccg tggggtgcga gggccacatg 1560 gacagaggcc ggctcggccc accctctgcc ctgagagtga ccgctgtacc aacctctgtc 1620 cctacagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1680 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1740 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1800 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1860 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1920 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1947 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 IgG1 heavy chain (V human gamma-1 constant) with signal sequence (one base change from SEQ ID NO:72) ;<400> 86 ;atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggagt ccattctgag 60 gtaccacttg tggaaagcgg aggaggtctt gtgcagcctg gaggaagttt acgtctctct 120 tgtgctgtgt ctggcttcac cttctccaat tacggaatgg tctgggtcag acaagcacct 180 ggaaagggtc ttgaatgggt ggcctatatt gactctgacg gggacaacac ctactatcgg 240 gattccgtga aaggacgctt cacaatctcc cgagataacg ccaagagctc actgtacctg 300 cagatgaata gcctgagagc cgaggatact gccgtgtact attgcacaac gggaatcgtt 360 aggccttttc tgtactgggg acagggcacc ttggttactg tctcgagcgc ttctacaaag 420 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 480 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 540 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 600 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 660 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttggtgagag gccagcacag 720 ggagggaggg tgtctgctgg aagccaggct cagcgctcct gcctggacgc atcccggcta 780 tgcagcccca gtccagggca gcaaggcagg ccccgtctgc ctcttcaccc ggaggcctct 840 gcccgcccca ctcatgctca gggagagggt cttctggctt tttccccagg ctctgggcag 900 gcacaggcta ggtgccccta acccaggccc tgcacacaaa ggggcaggtg ctgggctcag 960 acctgccaag agccatatcc gggaggaccc tgcccctgac ctaagcccac cccaaaggcc 1020 aaactctcca ctccctcagc tcggacacct tctctcctcc cagatctgag taactcccaa 1080 tcttctctct gcagagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagg 1140 taagccagcc caggcctcgc cctccagctc aaggcgggac aggtgcccta gagtagcctg 1200 catccaggga caggccccag ccgggtgctg acacgtccac ctccatctct tcctcagcac 1260 ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca 1320 tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg 1380 aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc 1440 gggaggagca gtacaacagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg 1500 actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca 1560 tcgagaaaac catctccaaa gccaaaggtg ggacccgtgg ggtgcgaggg ccacatggac 1620 agaggccggc tcggcccacc ctctgccctg agagtgaccg ctgtaccaac ctctgtccct 1680 acagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1740 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1800 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1860 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1920 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1980 agcctctccc tgtctccggg taaa 2004 ;;<210> 87 ;<211> 444 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 IgG4 heavy chain (V human gamma-4 constant no P mutations) ;<400> 87 ;Glu Val Pro Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly ;1 5 10 15 ;;Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr ;20 25 30 ;;Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val ;35 40 45 ;;Ala Tyr Ile Asp Ser Asp Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val ;50 55 60 ;;Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr ;65 70 75 80 ;Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 ;Thr Thr Gly Ile Val Arg Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 ;Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 ;Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 ;Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 ;Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 ;Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 ;Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 ;Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro 210 215 220 ;Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240 ;Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255 ;Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe 260 265 270 ;Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 275 280 285 ;Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val ;305 310 315 320 ;Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala ;325 330 335 ;Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln ;340 345 350 ;Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly ;355 360 365 ;Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro ;370 375 380 ;Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser ;385 390 395 400 ;Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu ;405 410 415 ;Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His ;420 425 430 ;Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys ;435 440 ;<210> 88 ;<211> 1939 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 IgG4 heavy chain (V human gamma-4 constant with exons no P mutations) ;<400> 88 ;gaggtaccac ttgtggaaag cggaggaggt cttgtgcagc ctggaggaag tttacgtctc 60 tcttgtgctg tgtctggctt caccttctcc aattacggaa tggtctgggt cagacaagca 120 cctggaaagg gtcttgaatg ggtggcctat attgactctg acggggacaa cacctactat 180 cgggattccg tgaaaggacg cttcacaatc tcccgagata acgccaagag ctcactgtac 240 ctgcagatga atagcctgag agccgaggat actgccgtgt actattgcac aacgggaatc 300 gttaggcctt ttctgtactg gggacagggc accttggtta ctgtctcgag cgcttctaca 360 aagggcccat ccgtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcc 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacgaagac ctacacctgc 600 aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttggtga gaggccagca 660 cagggaggga gggtgtctgc tggaagccag gctcagccct cctgcctgga cgcaccccgg 720 ctgtgcagcc ccagcccagg gcagcaaggc atgccccatc tgtctcctca cccggaggcc 780 tctgaccacc ccactcatgc ccagggagag ggtcttctgg atttttccac caggctccgg 840 gcagccacag gctggatgcc cctaccccag gccctgcgca tacaggggca ggtgctgcgc 900 tcagacctgc caagagccat atccgggagg accctgcccc tgacctaagc ccaccccaaa 960 ggccaaactc tccactccct cagctcagac accttctctc ctcccagatc tgagtaactc 1020 ccaatcttct ctctgcagag tccaaatatg gtcccccatg cccatcatgc ccaggtaagc 1080 caacccaggc ctcgccctcc agctcaaggc gggacaggtg ccctagagta gcctgcatcc 1140 agggacaggc cccagccggg tgctgacgca tccacctcca tctcttcctc agcacctgag 1200 ttcctggggg gaccatcagt cttcctgttc cccccaaaac ccaaggacac tctcatgatc 1260 tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg gtggacgtga gccaggaaga ccccgaggtc 1320 cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 1380 gagcagttca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 1440 ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag gcctcccgtc ctccatcgag 1500 aaaaccatct ccaaagccaa aggtgggacc cacggggtgc gagggccaca tggacagagg 1560 tcagctcggc ccaccctctg ccctgggagt gaccgctgtg ccaacctctg tccctacagg 1620 gcagccccga gagccacagg tgtacaccct gcccccatcc caggaggaga tgaccaagaa 1680 ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg 1740 ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga 1800 cggctccttc ttcctctaca gcaggctaac cgtggacaag agcaggtggc aggaggggaa 1860 tgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacac agaagagcct 1920 ctccctgtct ctgggtaaa 1939 ;;<210> 89 ;<211> 1996 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 IgG4 heavy chain (V human gamma-4 constant) with signal sequence - no P mutation ;<400> 89 ;atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggagt ccattctgag 60 gtaccacttg tggaaagcgg aggaggtctt gtgcagcctg gaggaagttt acgtctctct 120 tgtgctgtgt ctggcttcac cttctccaat tacggaatgg tctgggtcag acaagcacct 180 ggaaagggtc ttgaatgggt ggcctatatt gactctgacg gggacaacac ctactatcgg 240 gattccgtga aaggacgctt cacaatctcc cgagataacg ccaagagctc actgtacctg 300 cagatgaata gcctgagagc cgaggatact gccgtgtact attgcacaac gggaatcgtt 360 aggccttttc tgtactgggg acagggcacc ttggttactg tctcgagcgc ttctacaaag 420 ggcccatccg tcttccccct ggcgccctgc tccaggagca cctccgagag cacagccgcc 480 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 540 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 600 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cgaagaccta cacctgcaac 660 gtagatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagagag ttggtgagag gccagcacag 720 ggagggaggg tgtctgctgg aagccaggct cagccctcct gcctggacgc accccggctg 780 tgcagcccca gcccagggca gcaaggcatg ccccatctgt ctcctcaccc ggaggcctct 840 gaccacccca ctcatgccca gggagagggt cttctggatt tttccaccag gctccgggca 900 gccacaggct ggatgcccct accccaggcc ctgcgcatac aggggcaggt gctgcgctca 960 gacctgccaa gagccatatc cgggaggacc ctgcccctga cctaagccca ccccaaaggc 1020 caaactctcc actccctcag ctcagacacc ttctctcctc ccagatctga gtaactccca 1080 atcttctctc tgcagagtcc aaatatggtc ccccatgccc atcatgccca ggtaagccaa 1140 cccaggcctc gccctccagc tcaaggcggg acaggtgccc tagagtagcc tgcatccagg 1200 gacaggcccc agccgggtgc tgacgcatcc acctccatct cttcctcagc acctgagttc 1260 ctggggggac catcagtctt cctgttcccc ccaaaaccca aggacactct catgatctcc 1320 cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg gacgtgagcc aggaagaccc cgaggtccag 1380 ttcaactggt acgtggatgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 1440 cagttcaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 1500 aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaaggcc tcccgtcctc catcgagaaa 1560 accatctcca aagccaaagg tgggacccac ggggtgcgag ggccacatgg acagaggtca 1620 gctcggccca ccctctgccc tgggagtgac cgctgtgcca acctctgtcc ctacagggca 1680 gccccgagag ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag gaggagatga ccaagaacca 1740 ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga 1800 gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg 1860 ctccttcttc ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc aggtggcagg aggggaatgt 1920 cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacacaga agagcctctc 1980 cctgtctctg ggtaaa 1996 ;;<210> 90 ;<211> 336 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 V-region (mammalian expression alternative to SEQ ID NO: 17) ;<400> 90 ;gacatccaga tgacccagtc cccctccagc ctgtccgcct ccgtgggcga cagagtgacc 60 atcacatgca agtcctccca gtccctggtc ggagcctccg gcaagaccta cctgtactgg 120 ctgttccaga agcccggcaa ggcccccaag cggctgatct acctggtgtc taccctggac 180 tccggcatcc cctcccggtt ctccggctct ggctctggca ccgagttcac cctgaccatc 240 tccagcctgc agcccgagga cttcgccacc tactactgtc tgcaaggcac ccacttcccc 300 cacaccttcg gccagggcac caagctggaa atcaag 336 ;;<210> 91 ;<211> 657 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gL20 light chain (V constant, mammalian expression) alternative to SEQ ID NO: 24) ;<400> 91 ;gacatccaga tgacccagtc cccctccagc ctgtccgcct ccgtgggcga cagagtgacc 60 atcacatgca agtcctccca gtccctggtc ggagcctccg gcaagaccta cctgtactgg 120 ctgttccaga agcccggcaa ggcccccaag cggctgatct acctggtgtc taccctggac 180 tccggcatcc cctcccggtt ctccggctct ggctctggca ccgagttcac cctgaccatc 240 tccagcctgc agcccgagga cttcgccacc tactactgtc tgcaaggcac ccacttcccc 300 cacaccttcg gccagggcac caagctggaa atcaagcgga ccgtggccgc tccctccgtg 360 ttcatcttcc caccctccga cgagcagctg aagtccggca ccgcctccgt cgtgtgcctg 420 ctgaacaact tctacccccg cgaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480 tccggcaact cccaggaatc cgtcaccgag caggactcca aggacagcac ctactccctg 540 tcctccaccc tgaccctgtc caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgaa 600 gtgacccacc agggcctgtc cagccccgtg accaagtcct tcaaccgggg cgagtgc 657 ;;<210> 92 ;<211> 348 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519 gH20 V-region (mammalian expression alternative to SEQ ID NO: 31) ;<400> 92 ;gaggtgcccc tggtggaatc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc cctgagactg 60 tcttgcgccg tgtccggctt caccttctcc aactacggca tggtctgggt ccgacaggct 120 cctggcaagg gactggaatg ggtggcctac atcgactccg acggcgacaa cacctactac 180 cgggactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgggaca acgccaagtc ctccctgtac 240 ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcac caccggcatc 300 gtgcggccct ttctgtactg gggccagggc accctggtca ccgtgtcc 348 ;;<210> 93 ;<212> DNA ;<213> Artificial ;<220> ;<223> 1519gH20 IgG4 heavy chain (V human gamma-4P constant alternative to SEQ ID NO: 44) ;<400> 93 ;gaggtgcccc tggtggaatc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc cctgagactg 60 tcttgcgccg tgtccggctt caccttctcc aactacggca tggtctgggt ccgacaggct 120 cctggcaagg gactggaatg ggtggcctac atcgactccg acggcgacaa cacctactac 180 cgggactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgggaca acgccaagtc ctccctgtac 240 ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcac caccggcatc 300 gtgcggccct ttctgtactg gggccagggc accctggtca ccgtgtcctc tgcctccacc 360 aagggcccct ccgtgttccc tctggcccct tgctcccggt ccacctccga gtctaccgcc 420 gctctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgagcccg tgacagtgtc ctggaactct 480 ggcgccctga cctccggcgt gcacaccttc cctgccgtgc tgcagtcctc cggcctgtac 540 tccctgtcct ccgtcgtgac cgtgccctcc tccagcctgg gcaccaagac ctacacctgt 600 aacgtggacc acaagccctc caacaccaag gtggacaagc gggtggaatc taagtacggc 660 cctccctgcc ccccctgccc tgcccctgaa tttctgggcg gaccttccgt gttcctgttc 720 cccccaaagc ccaaggacac cctgatgatc tcccggaccc ccgaagtgac ctgcgtggtg 780 gtggacgtgt cccaggaaga tcccgaggtc cagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa 840 gtgcacaatg ccaagaccaa gcccagagag gaacagttca actccaccta ccgggtggtg 900 tccgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg 960 tccaacaagg gcctgccctc cagcatcgaa aagaccatct ccaaggccaa gggccagccc 1020 cgcgagcccc aggtgtacac cctgccccct agccaggaag agatgaccaa gaaccaggtg 1080 tccctgacct gtctggtcaa gggcttctac ccctccgaca ttgccgtgga atgggagtcc 1140 aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc accccccctg tgctggacag cgacggctcc 1200 ttcttcctgt actctcggct gaccgtggac aagtcccggt ggcaggaagg caacgtcttc 1260 tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgtccctg 1320 agcctgggca ag 1332 ;<211> 274 ;<212> PRT ;<213> Artificial ;<220> ;<223> FcRn alpha chain extracellular sequence ;<400> 94 ;Ala Glu Ser His Leu Ser Leu Leu Tyr His Leu Thr Ala Val Ser Ser 1 5 10 15 ;Pro Ala Pro Gly Thr Pro Ala Phe Trp Val Ser Gly Trp Leu Gly Pro 20 25 30 ;Gln Gln Tyr Leu Ser Tyr Asn Ser Leu Arg Gly Glu Ala Glu Pro Cys 35 40 45 ;Gly Ala Trp Val Trp Glu Asn Gln Val Ser Trp Tyr Trp Glu Lys Glu 50 55 60 ;Thr Thr Asp Leu Arg Ile Lys Glu Lys Leu Phe Leu Glu Ala Phe Lys 65 70 75 80 ;Ala Leu Gly Gly Lys Gly Pro Tyr Thr Leu Gln Gly Leu Leu Gly Cys 85 90 95 ;Glu Leu Gly Pro Asp Asn Thr Ser Val Pro Thr Ala Lys Phe Ala Leu 100 105 110 ;Asn Gly Glu Glu Phe Met Asn Phe Asp Leu Lys Gln Gly Thr Trp Gly 115 120 125 ;Gly Asp Trp Pro Glu Ala Leu Ala Ile Ser Gln Arg Trp Gln Gln Gln 130 135 140 ;Asp Lys Ala Ala Asn Lys Glu Leu Thr Phe Leu Leu Phe Ser Cys Pro 145 150 155 160 ;His Arg Leu Arg Glu His Leu Glu Arg Gly Arg Gly Asn Leu Glu Trp 165 170 175 ;Lys Glu Pro Pro Ser Met Arg Leu Lys Ala Arg Pro Ser Ser Pro Gly 180 185 190 ;Phe Ser Val Leu Thr Cys Ser Ala Phe Ser Phe Tyr Pro Pro Glu Leu 195 200 205 ;Gln Leu Arg Phe Leu Arg Asn Gly Leu Ala Ala Gly Thr Gly Gln Gly 210 215 220 ;Asp Phe Gly Pro Asn Ser Asp Gly Ser Phe His Ala Ser Ser Ser Leu 225 230 235 240 ;Thr Val Lys Ser Gly Asp Glu His His Tyr Cys Cys Ile Val Gln His 245 250 255 ;Ala Gly Leu Ala Gln Pro Leu Arg Val Glu Leu Glu Ser Pro Ala Lys 260 265 270 ;Ser Ser ;;<210> 95 ;<211> 99 ;<212> PRT ;<213> Homo sapiens ;<400> 95 ;Ile Gln Lys Thr Pro Gln Ile Gln Val Tyr Ser Arg His Pro Pro Glu ;1 5 10 15 ;Asn Gly Lys Pro Asn Phe Leu Asn Cys Tyr Val Ser Gln Phe His Pro 20 25 30 ;Pro Gln Ile Glu Ile Glu Leu Leu Lys Asn Gly Lys Lys Ile Pro Asn 35 40 45 ;Ile Glu Met Ser Asp Leu Ser Phe Ser Lys Asp Trp Ser Phe Tyr Ile 50 55 60 ;Leu Ala His Thr Glu Phe Thr Pro Thr Glu Thr Asp Val Tyr Ala Cys 65 70 75 80 ;Arg Val Lys His Val Thr Leu Lys Glu Pro Lys Thr Val Thr Trp Asp 85 90 95 ;Arg Asp Met *

Claims (15)

Patentni zahtevi
1. Anti-FcRn antitelo ili njegov fragment koji vezuje FcRn, koji sadrži teški lanac ili fragment teškog lanca koji ima varjabilan region, gde pomenuti varjabilni region sadrži tri CDR-a gde CDR H1 sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 1, CDR H2 sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 2 i CDR H3 sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 3, i gde antitelo ili njegov fragment koji vezuje FcRn dalje sadrži laki lanac ili fragment lakog lanca koji ima varjabilan region, gde pomenuti varjabilni region sadrži tri CDR-a, gde CDR L1 ima sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 4, CDR L2 sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 5 i CDR L3 sadrži sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 6.
2. Anti-FcRn antitelo ili njegov fragment koji vezuje FcRn prema patentnom zahtevu 1, koje je humanizovano.
3. Anti-FcRn antitelo ili njegov fragment koji vezuje FcRn prema patentnom zahtevu 1 ili 2 koje ima afinitet vezivanja za humani FcRn od 100 pM ili manje kada je meren na pH 6 i na pH 7,4.
4. Anti-FcRn antitelo ili njegov fragment koji vezuje FcRn prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, gde je antitelo ili vezujući fragment konjugovan za polimer.
5. Anti-FcRn antitelo ili njegov fragment koji vezuje FcRn prema patentnom zahtevu 4, gde je polimer izabran od skroba, albumina i polietilen glikola (PEG).
6. Anti-FcRn antitelo ili njegov fragment koji vezuje FcRn prema patentnom zahtevu 5, gde je polimer PEG sa molekulskom masom u opsegu 5 do 50kDa.
7. Anti-FcRn antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, gde je antitelo antitelo pune dužine; opciono gde antitelo pune dužine je izabrano iz grupe koju čine IgG1, IgG4 i IgG4P.
8. Izolovani DNK molekul ili molekuli koji kodiraju teški i laki lanac anti-FcRn antitela ili njegovog fragmenta koji vezuje FcRn prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3 i 7.
9. Vektor za kloniranje ili ekspresiju koji kodira teški lanac i laki lanac i anti-FcRn antitela ili njegovog fragmenta koji vezuje FcRn prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3 i 7.
10. Ćelija domaćina koja sadrži jedan ili više vektora za kloniranje ili ekspresiju prema patentnom zahtevu 9.
11. Postupak za proizvodnju anti-FcRn antitela ili njegovog fragmenta koji vezuje FcRn, koji obuhvata kultivisanje ćelije domaćina iz patentnog zahteva 10 i izolovanje anti-FcRn antitela ili fragmenta koji vezuje FcRn.
12. Farmaceutska kompozicija koja sadrži anti-FcRn antitelo ili njegov fragment koji vezuje FcRn prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7 u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata, razblaživača ili nosača; opciono gde farmaceutska kompozicija dodatno sadrži druge aktivne sastojke.
13. Antitelo ili njegov vezujući fragment kako je definisano prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7 ili kompozicija kako je definisano u patentnom zahtevu 12 za upotrebu u terapiji.
14. Antitelo ili njegov vezujući fragment kako je definisano prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7 ili kompozicija kako je definisano u patentnom zahtevu 12 za upotrebu u lečenju autoimune bolesti kao što je mijastenija gravis, pefigus vulgaris, neuromijelitis optika, Gilen Bareov sindrom, lupus i trombocitična trombocitopenična purpura.
15. Antitelo ili njegov vezujući fragment kako je definisano prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7, ili kompozicija kako je definisano u patentnom zahtevu 12, za upotrebu u lečenju u lečenju CIDP, para-proteinemične polineuropatije, refraktorne epilepsije, ITP/TTP, hemolitičke anemije, Gudpastureovog sindroma, neusklađenost ABO antigena, lupusnog nefritisa, renalnog vaskulitisa, skleroderme, fibroznog alveolitisa, dilatacione kardiomiopatije, Graveove bolesti, dijabetesa tipa 1, autoimunog dijabetesa, pemfigusa, ANCA vaskulitisa, dermato-miozitisa, Sjogrenove bolesti i reumatoidnog artritisa.
RS20250136A 2012-05-14 2013-05-13 Anti-fcrn antitela RS66491B1 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB201208370A GB201208370D0 (en) 2012-05-14 2012-05-14 Antibodies
EP19165269.2A EP3527588B1 (en) 2012-05-14 2013-05-13 Anti-fcrn antibodies

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS66491B1 true RS66491B1 (sr) 2025-03-31

Family

ID=46458733

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190939A RS59072B1 (sr) 2012-05-14 2013-05-13 Anti-fcrn antitela
RS20250136A RS66491B1 (sr) 2012-05-14 2013-05-13 Anti-fcrn antitela

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190939A RS59072B1 (sr) 2012-05-14 2013-05-13 Anti-fcrn antitela

Country Status (44)

Country Link
US (4) US10233243B2 (sr)
EP (3) EP2850101B1 (sr)
JP (4) JP6517140B2 (sr)
KR (2) KR102253090B1 (sr)
CN (1) CN104364265B (sr)
AP (1) AP2014008102A0 (sr)
AR (2) AR091036A1 (sr)
AU (4) AU2013298924B2 (sr)
BR (2) BR112014028457B1 (sr)
CA (2) CA2872326C (sr)
CL (1) CL2014003110A1 (sr)
CO (1) CO7151521A2 (sr)
CY (2) CY1121934T1 (sr)
DK (2) DK3527588T3 (sr)
EA (1) EA032770B1 (sr)
EC (1) ECSP14030789A (sr)
ES (2) ES2732081T3 (sr)
FI (2) FI3527588T3 (sr)
FR (1) FR24C1019I2 (sr)
GB (1) GB201208370D0 (sr)
HR (2) HRP20191334T1 (sr)
HU (3) HUE070274T2 (sr)
IL (1) IL235042B (sr)
LT (3) LT3527588T (sr)
LU (1) LUC00339I2 (sr)
MA (1) MA37619B1 (sr)
ME (1) ME03415B (sr)
MX (1) MX365861B (sr)
NL (1) NL301268I2 (sr)
NZ (1) NZ702457A (sr)
PE (2) PE20190229A1 (sr)
PH (1) PH12014502274A1 (sr)
PL (2) PL3527588T3 (sr)
PT (2) PT2850101T (sr)
RS (2) RS59072B1 (sr)
SG (1) SG11201406625XA (sr)
SI (2) SI2850101T1 (sr)
SM (2) SMT202500037T1 (sr)
TN (1) TN2014000438A1 (sr)
TR (1) TR201910103T4 (sr)
TW (1) TWI598362B (sr)
UA (1) UA118954C2 (sr)
WO (1) WO2014019727A1 (sr)
ZA (1) ZA201407509B (sr)

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201208370D0 (en) 2012-05-14 2012-06-27 Ucb Pharma Sa Antibodies
KR20210094669A (ko) 2013-04-29 2021-07-29 에프. 호프만-라 로슈 아게 인간 fcrn-결합 변형된 항체 및 사용 방법
GB201320066D0 (en) * 2013-11-13 2013-12-25 Ucb Pharma Sa Biological products
CN112142843B (zh) 2013-12-24 2024-10-18 阿尔金克斯有限公司 FcRn拮抗剂及使用方法
RU2698969C2 (ru) 2014-01-15 2019-09-02 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Варианты fc-области с улучшенной способностью связываться с белком а
FI3137504T3 (fi) 2014-04-30 2023-08-07 Hanall Biopharma Co Ltd Fcrn:ään sitoutuva vasta-aine autoimmuunisairauksien hoitamista varten
US10336825B2 (en) 2014-04-30 2019-07-02 Hanall Biopharma Co., Ltd. Antibody binding to FcRn for treating autoimmune diseases
KR20250052465A (ko) 2015-01-30 2025-04-18 모멘타 파머슈티컬스 인코포레이티드 ＦｃＲｎ 항체 및 이의 사용 방법
GB201506869D0 (en) 2015-04-22 2015-06-03 Ucb Biopharma Sprl Method
GB201506870D0 (en) 2015-04-22 2015-06-03 Ucb Biopharma Sprl Method
ES2956662T3 (es) 2015-05-12 2023-12-26 Syntimmune Inc Anticuerpos anti-FcRn humanizados con afinidad madurada
GB201508180D0 (en) * 2015-05-13 2015-06-24 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
CN106957364B (zh) * 2016-01-11 2021-03-16 上海交通大学 一种单克隆抗体FnAb12及其应用
CN106957365B (zh) 2016-01-11 2021-03-16 上海交通大学 一种单克隆抗体FnAb8及其应用
ES2864211T3 (es) * 2016-04-25 2021-10-13 Syntimmune Inc Anticuerpos anti-FcRn humanizados con maduración de la afinidad
GB201608323D0 (en) * 2016-05-12 2016-06-29 Ucb Biopharma Sprl Pharmaceutical compositions
CN116041514A (zh) * 2016-06-06 2023-05-02 希望之城 Baff-r抗体及其用途
CA3032415A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Fcrn antibodies and methods of use thereof
GB201618424D0 (en) * 2016-11-01 2016-12-14 Argenix Bvba Treatment of antibody mediated disease
WO2018119142A1 (en) 2016-12-21 2018-06-28 Amgen Inc. Anti-tnf alpha antibody formulations
GB201708655D0 (en) * 2017-05-31 2017-07-12 Ucb Biopharma Sprl Cell culture methods
SG11201911832PA (en) * 2017-06-15 2020-01-30 UCB Biopharma SRL Method for the treatment of immune thrombocytopenia
US12240875B2 (en) 2017-12-08 2025-03-04 argenx BV Use of FCRN antagonists for treatment of generalized myasthenia gravis
KR102904658B1 (ko) 2017-12-13 2025-12-29 모멘타 파머슈티컬스 인코포레이티드 FcRn 항체 및 이의 사용 방법
CA3101462A1 (en) 2018-06-08 2019-12-12 Argenx Bvba Compositions and methods for treating immune thrombocytopenia
KR102921210B1 (ko) 2018-07-20 2026-01-30 모멘타 파머슈티컬스 인코포레이티드 Fcrn 항체 조성물
MA53903A (fr) 2018-10-16 2021-08-25 UCB Biopharma SRL Méthode de traitement de la myasthénie grave
US20220002402A1 (en) * 2018-11-06 2022-01-06 Immunovant Sciences Gmbh Methods of treating graves' ophthalmopathy using anti-fcrn antibodies
CN114126647A (zh) 2019-06-07 2022-03-01 阿尔金克斯有限公司 适用于皮下施用的FcRn抑制剂的药物制剂
EP4007605A4 (en) * 2019-08-01 2023-08-16 Momenta Pharmaceuticals, Inc. ANTI-FCRN ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
BR112021023542A2 (pt) 2019-08-02 2022-03-22 UCB Biopharma SRL Métodos para purificar anticorpos
BR112022013554A2 (pt) 2020-01-08 2022-09-06 argenx BV Métodos para tratar distúrbios do pênfigo
CN115190803A (zh) * 2020-01-10 2022-10-14 共免疫公司 治疗肿瘤的方法
CN114341184B (zh) * 2020-02-10 2023-04-04 北京拓界生物医药科技有限公司 抗FcRn抗体、其抗原结合片段及其医药用途
KR20220001482A (ko) * 2020-06-29 2022-01-05 한올바이오파마주식회사 항-FcRn 항체에 대한 제형
JP2023550596A (ja) 2020-11-02 2023-12-04 ユーシービー バイオファルマ エスアールエル 運動ニューロン神経変性障害の治療のための抗ｔｒｅｍ１中和抗体の使用
JPWO2023013618A1 (sr) * 2021-08-02 2023-02-09
CN113484526B (zh) * 2021-08-11 2024-08-23 上海迈晋生物医药科技有限公司 一种抗FcRn抗体或其抗原结合片段生物学活性的检测方法
US20250136699A1 (en) * 2021-08-13 2025-05-01 Jiangsu Biojetay Biotechnology Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing fcrn and uses thereof
CN113912730B (zh) * 2021-12-14 2022-03-04 北京科诺信诚科技有限公司 缓释的抗FcRn抗体或抗原结合片段及其应用
AU2023281650A1 (en) 2022-05-30 2024-10-17 Hanall Biopharma Co., Ltd. Anti-fcrn antibody or antigen binding fragment thereof with improved stability
CA3258000A1 (en) 2022-06-15 2023-12-21 argenx BV FCRN/ANTIGEN BINDING MOLECULES AND METHODS OF USE
WO2024163894A1 (en) 2023-02-04 2024-08-08 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating hemolytic disease of the fetus and newborn
AR133188A1 (es) 2023-07-05 2025-09-03 Ablynx Nv ANTAGONISTAS DE FcRn MEJORADOS PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES Y TRASTORNOS RELACIONADOS CON IgG
TW202527982A (zh) 2023-09-11 2025-07-16 美商默門塔醫藥公司 Fcrn抗體之醫藥組成物
WO2025099576A1 (en) 2023-11-06 2025-05-15 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating rheumatoid arthritis
WO2025163617A1 (en) 2024-02-04 2025-08-07 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating sjögren's disease
WO2025186787A1 (en) 2024-03-08 2025-09-12 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating fetal and neonatal alloimmune thrombocytopenia
WO2025248017A1 (en) 2024-05-31 2025-12-04 UCB Biopharma SRL Method of purifying recombinant proteins

Family Cites Families (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2063975C3 (de) 1970-12-28 1973-09-27 Deutsche Vergaser Gmbh & Co Kg, 4040 Neuss Brennstoffzumeßduse mit temperatur abhangig veränderbarem Austrittsquer schnitt fur Vergaser insbesondere Gleich druckvergaser, fur Brennkraftmaschinen
US4741900A (en) 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
DK336987D0 (da) 1987-07-01 1987-07-01 Novo Industri As Immobiliseringsmetode
GB8719042D0 (en) 1987-08-12 1987-09-16 Parker D Conjugate compounds
GB8720833D0 (en) 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
GB8907617D0 (en) 1989-04-05 1989-05-17 Celltech Ltd Drug delivery system
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
EP0542810A1 (en) 1990-08-02 1993-05-26 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
GB9112536D0 (en) 1991-06-11 1991-07-31 Celltech Ltd Chemical compounds
GB9113120D0 (en) 1991-06-18 1991-08-07 Kodak Ltd Photographic processing apparatus
GB9120467D0 (en) 1991-09-26 1991-11-06 Celltech Ltd Anti-hmfg antibodies and process for their production
FR2716640B1 (fr) 1994-02-28 1996-05-03 Procedes Machines Speciales Dispositif de centrage et de blocage d'une pièce en vue de son rodage à l'aide d'un rodoir à expansion.
JP4046354B2 (ja) * 1996-03-18 2008-02-13 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 増大した半減期を有する免疫グロブリン様ドメイン
US5980898A (en) 1996-11-14 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command Adjuvant for transcutaneous immunization
GB9625640D0 (en) 1996-12-10 1997-01-29 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
GB9812545D0 (en) 1998-06-10 1998-08-05 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
US6992234B2 (en) * 2000-11-06 2006-01-31 The Jackson Laboratory FcRn-based therapeutics for the treatment of auto-immune disorders
PT1355919E (pt) 2000-12-12 2011-03-02 Medimmune Llc Moléculas com semivida longa, composições que as contêm e suas utilizações
US6908963B2 (en) 2001-10-09 2005-06-21 Nektar Therapeutics Al, Corporation Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith
GB0129105D0 (en) 2001-12-05 2002-01-23 Celltech R&D Ltd Expression control using variable intergenic sequences
MXPA05003500A (es) * 2002-10-04 2005-06-03 Lancer Partnership Ltd Distribuidor de bebida helada de multiples marcas comerciales.
US7993864B2 (en) 2002-12-03 2011-08-09 Ucb Pharma S.A. Assay for identifying antibody producing cells
GB0312481D0 (en) 2003-05-30 2003-07-09 Celltech R&D Ltd Antibodies
GB0315450D0 (en) 2003-07-01 2003-08-06 Celltech R&D Ltd Biological products
ES2551439T5 (es) 2003-07-01 2018-11-08 Ucb Biopharma Sprl Fragmentos Fab de anticuerpos modificados
GB0315457D0 (en) 2003-07-01 2003-08-06 Celltech R&D Ltd Biological products
US7662928B2 (en) * 2003-08-08 2010-02-16 The Research Foundation Of State University Of New York Anti-FcRn antibodies for treatment of auto/allo immune conditions
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
JP2007501847A (ja) * 2003-08-08 2007-02-01 ザ リサーチ ファウンデイション オブ ステイト ユニバーシティー オブ ニューヨーク 自己／同種免疫状態の治療用抗ＦｃＲｎ抗体
GB0411186D0 (en) 2004-05-19 2004-06-23 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0412181D0 (en) 2004-06-01 2004-06-30 Celltech R&D Ltd Biological products
WO2006040153A2 (en) 2004-10-13 2006-04-20 Ablynx N.V. Single domain camelide anti -amyloid beta antibodies and polypeptides comprising the same for the treatment and diagnosis of degenarative neural diseases such as alzheimer's disease
GB0506912D0 (en) * 2005-04-05 2005-05-11 Celltech R&D Ltd Biological products
CA2606378A1 (en) 2005-04-29 2006-11-09 The Jackson Laboratory Fcrn antibodies and uses thereof
WO2006130834A2 (en) 2005-05-31 2006-12-07 Board Of Regents, The University Of Texas System IGGl ANTIBODIES WITH MUTATED FC PORTION FOR INCREASED BINDING TO FCRN RECEPTOR AND USES THEREOF
ZA200801154B (en) * 2005-07-21 2009-07-29 Genmab As Potency assays for antibody drug substance binding to an FC receptor
KR20130108481A (ko) 2005-08-19 2013-10-02 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
ZA200804337B (en) * 2005-11-28 2009-11-25 Genmab As Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof
JP2009524664A (ja) * 2006-01-25 2009-07-02 ザ リサーチ ファウンデイション オブ ステイト ユニバーシティー オブ ニューヨーク 自己／アロ免疫疾患の治療のための抗−ｆｃｒｎ抗体
TW200745163A (en) 2006-02-17 2007-12-16 Syntonix Pharmaceuticals Inc Peptides that block the binding of IgG to FcRn
GB0619291D0 (en) 2006-09-29 2006-11-08 Ucb Sa Altered antibodies
US20100034194A1 (en) 2006-10-11 2010-02-11 Siemens Communications Inc. Eliminating unreachable subscribers in voice-over-ip networks
MX2010001363A (es) 2007-08-09 2010-03-09 Syntonix Pharmaceuticals Inc Peptidos inmunomoduladores.
WO2009040562A1 (en) 2007-09-26 2009-04-02 Ucb Pharma S.A. Dual specificity antibody fusions
WO2009080764A2 (en) 2007-12-20 2009-07-02 Abylnx N.V. Oral or nasal administration of compounds comprising amino acid sequences
BRPI0910622A2 (pt) * 2008-04-25 2020-03-10 Dyax Corp. ANTICORPOS CONTRA FcRn E USOS DOS MESMOS
WO2010014909A1 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunomodulatory peptides
HRP20170374T1 (hr) 2008-09-26 2017-05-05 Ucb Biopharma Sprl Biološki proizvodi
US20120283415A1 (en) 2009-09-10 2012-11-08 Ucb Pharma S.A. Multivalent Antibodies
GB0920127D0 (en) 2009-11-17 2009-12-30 Ucb Pharma Sa Antibodies
GB201000467D0 (en) 2010-01-12 2010-02-24 Ucb Pharma Sa Antibodies
GB201000587D0 (en) 2010-01-14 2010-03-03 Ucb Pharma Sa Bacterial hoist strain
KR102014554B1 (ko) 2011-06-02 2019-08-26 다이액스 코포레이션 Fc 수용체 결합 단백질
AU2012335496B2 (en) 2011-11-11 2017-05-11 Ucb Biopharma Sprl Albumin binding antibodies and binding fragments thereof
KR20130071961A (ko) 2011-12-21 2013-07-01 한올바이오파마주식회사 ＦｃＲｎ 특이적 인간 항체 및 이를 포함하는 자가면역 질환 치료용 조성물
GB201208370D0 (en) 2012-05-14 2012-06-27 Ucb Pharma Sa Antibodies
KR101815265B1 (ko) 2013-06-20 2018-01-04 한올바이오파마주식회사 FcRn 특이적 인간 항체 및 이를 포함하는 자가면역 질환 치료용 조성물
GB201320066D0 (en) 2013-11-13 2013-12-25 Ucb Pharma Sa Biological products

Also Published As

Publication number Publication date
LT2850101T (lt) 2019-08-12
MA37619B1 (fr) 2017-07-31
JP7050115B2 (ja) 2022-04-07
ES2732081T3 (es) 2019-11-20
FR24C1019I1 (fr) 2024-07-19
WO2014019727A1 (en) 2014-02-06
HRP20250195T1 (hr) 2025-04-11
CO7151521A2 (es) 2014-12-29
MA37619A1 (fr) 2016-01-29
US11384148B2 (en) 2022-07-12
US20150118240A1 (en) 2015-04-30
TW201350505A (zh) 2013-12-16
PT3527588T (pt) 2025-01-24
SI3527588T1 (sl) 2025-04-30
EP2850101B1 (en) 2019-05-01
CY2024011I1 (el) 2024-12-13
AU2018205057B9 (en) 2020-10-22
FI3527588T3 (fi) 2025-03-05
MX2014012890A (es) 2014-11-14
JP2015525204A (ja) 2015-09-03
US20190248890A1 (en) 2019-08-15
KR20150005987A (ko) 2015-01-15
US20230074381A1 (en) 2023-03-09
LTPA2024515I1 (sr) 2024-06-10
EP4509189A3 (en) 2025-05-21
LTC2850101I2 (sr) 2025-11-10
UA118954C2 (uk) 2019-04-10
FR24C1019I2 (fr) 2025-03-28
NZ702457A (en) 2016-09-30
US12338285B2 (en) 2025-06-24
ECSP14030789A (es) 2015-09-30
HRP20191334T1 (hr) 2019-10-18
HUE070274T2 (hu) 2025-05-28
BR112014028457B1 (pt) 2023-04-04
SMT202500037T1 (it) 2025-03-12
TN2014000438A1 (en) 2016-03-30
DK2850101T3 (da) 2019-07-15
CA3089517C (en) 2022-10-04
CY1121934T1 (el) 2020-10-14
JP6517140B2 (ja) 2019-05-22
IL235042B (en) 2019-05-30
ZA201407509B (en) 2016-02-24
AU2018205057B2 (en) 2020-05-21
CA2872326A1 (en) 2014-02-06
AU2024202395A1 (en) 2024-05-16
LUC00339I2 (sr) 2026-03-04
PL3527588T3 (pl) 2025-04-07
CA3089517A1 (en) 2014-02-06
KR20210014761A (ko) 2021-02-09
SMT201900425T1 (it) 2019-11-13
ME03415B (me) 2020-01-20
AU2020217370A1 (en) 2020-09-03
CN104364265B (zh) 2019-07-16
EP3527588B1 (en) 2025-01-15
BR112014028457A2 (pt) 2017-06-27
AP2014008102A0 (en) 2014-12-31
EP2850101A1 (en) 2015-03-25
SI2850101T1 (sl) 2019-08-30
EP4509189A2 (en) 2025-02-19
BR122020023791B1 (pt) 2023-04-04
TR201910103T4 (tr) 2019-08-21
KR102253090B1 (ko) 2021-05-18
NL301268I2 (nl) 2024-05-15
SG11201406625XA (en) 2014-12-30
HUE045012T2 (hu) 2019-11-28
HUS2400016I1 (hu) 2024-06-28
JP2022104938A (ja) 2022-07-12
EA201492101A1 (ru) 2015-04-30
FIC20240017I1 (fi) 2024-06-03
JP2020168003A (ja) 2020-10-15
PT2850101T (pt) 2019-07-23
EP3527588A1 (en) 2019-08-21
AR132144A2 (es) 2025-05-28
US10233243B2 (en) 2019-03-19
US20250346672A1 (en) 2025-11-13
TWI598362B (zh) 2017-09-11
PE20190229A1 (es) 2019-02-13
MX365861B (es) 2019-06-18
HK1204627A1 (en) 2015-11-27
PH12014502274B1 (en) 2014-12-10
KR102344901B1 (ko) 2021-12-28
CL2014003110A1 (es) 2015-06-19
PE20150002A1 (es) 2015-01-28
CA2872326C (en) 2020-10-13
JP2018183151A (ja) 2018-11-22
AU2013298924A1 (en) 2015-01-15
PL2850101T3 (pl) 2019-10-31
EA032770B1 (ru) 2019-07-31
ES3004282T3 (en) 2025-03-12
CN104364265A (zh) 2015-02-18
RS59072B1 (sr) 2019-09-30
AR091036A1 (es) 2014-12-30
AU2018205057A1 (en) 2018-07-26
GB201208370D0 (en) 2012-06-27
DK3527588T3 (da) 2025-02-10
JP7221000B2 (ja) 2023-02-13
PH12014502274A1 (en) 2014-12-10
AU2013298924B2 (en) 2018-05-10
CY2024011I2 (el) 2024-12-13
JP7485712B2 (ja) 2024-05-16
IL235042A0 (en) 2014-12-31
LT3527588T (lt) 2025-02-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018205057B2 (en) Anti-FcRn antibodies
US11220547B2 (en) Antibodies specific to FCRN
KR102916165B1 (ko) 중증근무력증의 치료 방법
KR20200018643A (ko) 면역 혈소판감소증의 치료 방법