RS66502B1 - Bispecifični ili-kapijski himerni antigenski receptor koji reaguje na cd19 i cd20 - Google Patents

Bispecifični ili-kapijski himerni antigenski receptor koji reaguje na cd19 i cd20

Info

Publication number
RS66502B1
RS66502B1 RS20250093A RSP20250093A RS66502B1 RS 66502 B1 RS66502 B1 RS 66502B1 RS 20250093 A RS20250093 A RS 20250093A RS P20250093 A RSP20250093 A RS P20250093A RS 66502 B1 RS66502 B1 RS 66502B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
cell
cells
car
seq
cancer
Prior art date
Application number
RS20250093A
Other languages
English (en)
Inventor
Yvonne Y Chen
Eugenia Zah
Michael C Jensen
Original Assignee
Univ California
Seattle Childrens Hospital Dba Seattle Childrens Research Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univ California, Seattle Childrens Hospital Dba Seattle Childrens Research Institute filed Critical Univ California
Publication of RS66502B1 publication Critical patent/RS66502B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/30—Cellular immunotherapy characterised by the recombinant expression of specific molecules in the cells of the immune system
    • A61K40/31—Chimeric antigen receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K40/421—Immunoglobulin superfamily
    • A61K40/4211—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K40/4221—CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/27—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by targeting or presenting multiple antigens
    • A61K2239/29—Multispecific CARs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/40—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Opis
POZADINA OVOG PRONALASKA
[0001] Himerni antigenski receptori (CAR) su veštački molekuli koji preusmeravaju specifičnost T ćelija na prethodno određene antigene. Ovi receptori se često koriste za kalemljenje specifičnosti monoklonalnog antitela na T ćeliju; sa prenosom njihove kodirajuće sekvence koji je olakšan retrovirusnim ili lentivirusnim vektorima. Korišćenjem adoptivnog prenosa, autologne T ćelije mogu biti genetski modifikovane ex vivo kako bi se eksprimirao CAR specifičan za kancersku ćeliju od značaja. T-ćelije, koje zatim mogu da prepoznaju i ubiju ćelije kancera, se ponovo uvode u pacijenta. I faza kliničkih ispitivanja ovog pristupa je pokazala efikasnost.
[0002] Najčešći oblik CAR su fuzije jednolančanih varijabilnih fragmenata (scFv) izvedenih iz monoklonskih antitela, spojenih sa CD3-zeta signalnim domenom, koji sadrži 3 ITAM. CD3-zeta možda neće obezbediti potpuno kompetentan aktivacioni signal i potrebna je dodatna kostimulaciona signalizacija. Na primer, himerni CD28 i OX40 se mogu koristiti sa CD3-Zeta za prenos proliferativnog/signala preživljavanja, ili se sva tri mogu koristiti zajedno. Takvi molekuli dovode do prenosa zeta signala kao odgovora na prepoznavanje svoje mete od strane scFv.
[0003] Višestruka klinička ispitivanja su prijavila značajnu terapijsku efikasnost anti-CD19 CAR-modifikovanih T ćelija protiv i akutnih i hroničnih maligniteta B-ćelija. Ipak, prijavljeni su višestruki slučajevi pacijenata koji su doživeli recidiv sa pojavom CD19-negativne leukemije ili limfoma (Maude et al. 2014). Ovaj pronalazak se bavi ovim problemom antigenskog izbegavanja, tj., tumorskih ćelija koje izbegavaju tretiranje gubljenjem antigena koji je meta T-ćelijske terapije.
[0004] US 2013/0280220 se odnosi na CAR koji obuhvataju dva ili više neidentičnih domena za prepoznavanje antigena.
KRATAK SADRŽAJ OVOG PRONALASKA
[0005] I CD20 i CD19 su pan-B-ćelijski markeri prisutni na velikoj većini malignih B ćelija. Ili-kapijski CAR kojim je okidač za ubijanje tumora sve dok je prisutan ili CD20 ili CD19 smanjuje verovatnoću bekstva antigena, čime se zahteva da tumorske ćelije izgube oba antigena da bi izbegle ciljanje, događaj koji se dešava sa znatno manjom verovatnoćom nego mutacije pojedinačnih antigena. Stoga, ovaj pronalazak ima snažnu kompetetivnu prednost u poređenju sa konvencionalnom terapijom anti-CD19 CAR T ćelija sa jednim ulazom.
[0006] Obezbeđen je proteinski konstrukt CD19-ILI-CD20 himernog antigenskog receptora (CAR).
Takođe su obezbeđene nukleinske kiseline koje kodiraju CD19-ILI-CD20 CAR. CD19-ILI-CD20 CAR prema ovom pronalasku predstavlja bispecifični CAR koji može da predstavlja okidač za aktivaciju T-ćelija nakon detekcije ili CD19 ili CD20 (ili oba). To je jedan molekul koji ljudskim T ćelijama konstruisanim da stabilno eksprimiraju ovaj CAR daje sposobnost prepoznavanja sa dva ulaza. CD19-ILI-CD20 CAR sadrži sledeće (od N- do C-kraja): signalnu sekvencu SEQ ID NO: 2; anti CD20 scFv koji obuhvata varijabilni region lakog i teškog lanca koji kodira SEQ ID NO: 3; (G4S)4 linker; anti-CD19 scFv koji obuhvata varijabilni region lakog i teškog lanca koji kodira SEQ ID NO: 4; ime domena SEQ ID NO: 5; CD28 transmembranski domen SEQ ID NO: 6; 4-1BB citoplazmatski ko-stimulativni signalni domen u SEQ ID NO: 8; CD3 zeta signali se nalaze u SEQ ID NO: 9.
[0007] U nekom načinu ostvarivanja konstrukt dodatno obuhvata T2A peptid preskakanja ribozoma, koji može da se koristi za povezivanje CAR sa proteinom ili peptidom od značaja, npr. obeležjem epitopa. U nekom načinu ostvarivanja, uključeno je i obeležje koje može da se sortira, npr. skraćeni receptora epidermalnog faktora rasta (EGFRt) ili fluorescentni proteini, koji može da se koristi za razdvajanje T ćelija koje eksprimiraju CAR.
[0008] U nekim načinima ostvarivanja, konstrukt CAR je spakovan u lentivirusni vektor, koji uključuje, bez ograničenja, lentivirusni vektor treće generacije. Primarne humane T ćelije mogu biti lentivirusno transdukovane radi stabilnog integrisanja i eksprimiranja Ili-kapijskog CAR. Ćelije koje eksprimiraju CAR mogu biti obogaćene ćelijskim sortiranjem koje je aktivirano fluorescencijom ili magnetizmom i proširene stimulacijom antigena ili stimulacijom CD3/CD28 antitelima ili mikroperlama obloženim antitelima.
[0009] U nekim načinima ostvarivanja prema ovom pronalasku, obezbeđen je ekspresioni vektor koji kodira CD19-ILI-CD20 CAR, pri čemu taj vektor može biti lentivirusni vektor, retrovirusni vektor, adenovirusni vektor, vektor povezan sa adeno virusom, plazmid, ili RNK.
[0010] U nekim načinima ostvarivanja, efikasna doza terapijske ćelije prema ovom pronalasku, uključujući efektorsku ćeliju, kao što je T ćelija, NK ćelija, NKT ćelija, itd., za upotrebu u postupku tretiranja pojedinca za kancer. Pojedinac može da ima malignitet B-ćelija, koji eksprimira jedan ili oba CD20 i CD19. Bilo koji postupak može dodatno da obuhvata fazu isporuke pojedincu dodatne terapije za kancer, kao što je hirurška intervencija, zračenje, hormonska terapija, hemoterapija, imunoterapija, ili njihova kombinacija, na primer.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0011] Za potpunije razumevanje ovog pronalaska, poziva se na sledeće opise uzete u vezi sa pratećim crtežom.
Fig.1. Šematski prikaz bispecifičnog, CD20-ILI-CD19 CAR. Bispecifični CAR se sastoji od (od N do C kraja): signalna sekvenca koja usmerava lokalizaciju CAR na ćelijsku membranu, CD20 scFv, peptidni linker (npr., (G4S)1, (G4S)3, SEQ ID NO:1 (EAAAK)1, ili SEQ ID NO:1 (EAAAK)3), CD19 scFv, praćen razmaknicom (npr., lgG4 zglobnim domenom), transmembranskim domenom (npr., transmembranskim domenom iz CD28), jednim ili više kostimulatornih domena (npr., citoplazmatskim domenom 4-1BB ili CD28), i citoplazmatskim domenom CD3 ζ lanca. Kako bi se olakšala identifikacija CAR koji eksprimira T ćelije bojenjem antitela, skraćeni epidermalni receptor faktora rasta (EGFRt) može da se poveže sa CAR preko samocepajućeg peptida (npr., T2A).
Fig.2A-2B. Ili-kapijski CAR ali ne sa jednim ulazom CD19 CAR odgovaraju Raji ćelijama limfoma koje su podvrgnute izbegavanju antigena. (A) CD69, CD137, i CD107a površinska ekspresija (u srednjem intenzitetu fluorescencije; MFI) od strane CAR-T ćelija nakon 24-časovne zajedničke inkubacije sa CD19-Raji ćelijama. (B) Proizvodnja IFN-γ, TNF i IL-2 od strane CAR-T ćelija u (A) kao što je mereno citometrijskim testom niza kuglica. Lažne: T ćelije koje su lažno transdukovane i ne eksprimiraju CAR. CD19 kratki: CD19 CAR sa jednim ulazom sa IgG4 zglobom kao razmaknicom. CD20 dugi: CD20 CAR sa jednim ulazom sa IgG4 zglob-CH2-CH3 kao razmaknicom. (G4S)1, (G4S)4, SEQ ID NO:1 (EAAAK)1 i SEQ ID NO:1 (EAAAK)3 ukazuju na sekvencu linkera CD20-ILI-CD19 CAR, od kojih svi sadrže IgG4 zglob kao razmaknicu. Prijavljene vrednosti su srednja vrednost triplikata, sa linijama greške koje ukazuju na jednu standardnu devijaciju. P-vrednosti su izračunate dvostranim Studentovim t testom; *: p < 0,05; **: p < 0,01.
Fig.3. Ćelijska liza jednim ulazom i Ili-kapijski CAR-T ćelijama nakon 4-satne zajedničke inkubacije sa divljim tipom (WT; CD19+/CD20+) ili CD19- Raji (CD19-/CD20+) ćelijama. Prijavljene vrednosti predstavljaju srednje vrednosti triplikata, sa linijama greške koje ukazuju na jednu standardnu devijaciju. Identiteti CAR su opisani na Fig.2.
Fig.4A-4B. Bispecifičnost nije obuhvaćena detekcijom CD19 putem Ili-kapijskih CAR. CAR-T ćelije su bile zajednički inkubirane sa divljim tipom Raji ili CD19+ K562 metama tokom 24 sata. (A) Površinsko eksprimiranje CD69, CD137, i CD107a je kvantifikovano protočnom citometrijom. (B) Proizvodnja IFN-y, TNF-α, i IL-2 je kvantifikovana ispitivanjem niza citometrijskih perli. Prijavljene vrednosti predstavljaju srednje vrednosti triplikata, sa linijama greške koje ukazuju na jednu standardnu devijaciju. Identiteti CAR su opisani na Fig.2.
Fig.5A-5E. Ili-kapijski CAR brišu efekte bežanja antigena in vivo. (A) Napredovanje tumora kod NSG miševa koji nose Raji ksenografte divljeg tipa (WT) ili pomešane (75% divljeg tipa; 25% CD19-). Slikanje bioluminiscencije je izvedeno 6., 18., i 21. dana nakon ubrizgavanja tumora (T ćelije su ubrizgane 7. dana). (B) Preživljavanje miševa koji nose WT ili pomešane Raji tumorske ksenografte i tretiranih T ćelijama koje ne eksprimiraju CAR ili CD19 CAR sa jednim ulazom. Rezultati ukazuju da CD19 CAR sa jednim ulazom može značajno da produži preživljavanje životinja sa kalemom WT Raji
tumora. (C) Preživljavanje miševa koji nose WT Raji ksenografte tumora i tretirane T ćelijama koje eksprimiraju CD19 CAR sa jednim ulazom ili Ili-kapijske CAR. Rezultati ukazuju da su Ili-kapijski CAR podjednako efikasni kao CD19 CAR sa jednim ulazom u ciljanju Raji limfoma divljeg tipa.
(D) Preživljavanje miševa koji nose pomešane ksenografte Raji tumora i tretiranih T ćelijama koje ne eksprimiraju CAR, CD19 CAR sa jednim ulazom, ili Ili-kapijske CAR. Rezultati ukazuju da samo Ili-kapijski CAR mogu značajno da produže preživljavanje životinja koje nose CD19- mutantne
tumore. (E) Preživljavanje miševa koji nose WT ili pomešane ksenografte Raji tumora i tretirane T ćelijama koje eksprimiraju Ili-kapijske CAR. Rezultati ukazuju da su Ili-kapijski CAR jednako efikasni protiv mutantnih Raji tumora divljeg tipa i CD19, čime se dobijaju T ćelije koje su neosetljive na gubitak antigena od strane ciljanih T ćelija. N = 5 u svim ispitivanim grupama. P-vrednosti se računaju analizom log-rank testa; n.s.: nije značajno (p > 0.1); *: p < 0.1; **: p < 0.05. CAR identiteti su onakvi kako je opisano na Fig.2.
Fig.6. Mapa reprezentativnog plazmida bispecifičnog, CD20-ILI-CD19 CAR.
DETALJAN OPIS NAČINA OSTVARIVANJA
[0012] U skladu sa dugogodišnjom konvencijom u patentnom pravu, reči 'neki' i 'jedan' kada se koriste u ovoj specifikaciji u kombinaciji sa rečima 'koji obuhvataju', uključujući patentne zahteve, označavaju 'jedan ili više.' Neki načini ostvarivanja prema ovom pronalasku mogu se sastojati od ili se u suštini sastojati od jednog ili više elemenata, faza postupka i/ili postupaka prema ovom pronalasku. Smatra se da se bilo koji postupak ili kompozicija opisana ovde može primeniti u odnosu na bilo koji drugi postupak ili kompoziciju opisanu ovde, a primeri koji su izloženi i dalje mogu dati sličan ili isti rezultat bez odstupanja od duha i opsega ovog pronalaska.
[0013] Pojam 'genetska modifikacija' znači bilo koji postupak koji dodaje, briše, menja ili ometa endogenu nukleotidnu sekvencu i uključuje, ali bez ograničenja na, virusno posredovani transfer gena, lipozomski posredovani transfer, transformaciju, transfekciju i transdukciju, npr., virusno posredovani transfer gena kao što je upotreba vektora baziranih na DNK virusima kao što su lentivirus, adenovirus, retrovirusi, adeno-povezani virus i herpes virus.
[0014] "Varijanta" se odnosi na polipeptide koji imaju aminokiselinske sekvence koje se u određenoj meri razlikuju od nativne sekvence polipeptida. Obično, varijante aminokiselinske sekvence će imati najmanje oko 80% identiteta sekvence, a poželjnije je da budu najmanje oko 90% homologni po sekvenci. Varijante aminokiselinske sekvence mogu imati zamene, brisanja i/ili umetanja na određenim položajima unutar referentne aminokiselinske sekvence.
[0015] "Citotoksičnost posredovana ćelijama zavisnim od antitela " i "ADCC" se odnose na ćelijski posredovanu reakciju u kojoj nespecifične citotoksične ćelije koje eksprimiraju Fc receptore, kao što su prirodne ćelije ubice (NK ćelije), neutrofili i makrofagi, prepoznaju vezana antitela na ciljanoj ćeliji i uzrokuju lizu ciljane ćelije. ADCC aktivnost se može proceniti korišćenjem metoda, kao što su one opisane u U.S. Pat. br.5,821,337.
[0016] "Efektorske ćelije" su leukociti koji eksprimiraju jedan ili više receptora konstantnog regiona i izvode efektorske funkcije.
[0017] "Tretirati" bolest ili poremećaj, kao što je kancer, znači preduzeti terapijske ili preventivne mere kako bi se smanjila ili ublažila bolest ili poremećaj. Takvo tretiranje uključuje sprečavanje, ublažavanje simptoma, smanjenje ili stabilizaciju opsega, i/ili remisiju.
[0018] Pojam "terapijski efikasna količina" se odnosi na količinu jedinjenja ili molekula efikasnog za tretiranje bolesti ili poremećaja.
[0019] "Kancer" se odnosi na ćelije koje su podvrgnute nekontrolisanom ćelijskom rastu. Primeri kancera uključuju kolorektalni kancer i kancer glave i vrata. "Hemoterapijski agens" predstavlja hemijsko jedinjenje korisno u tretiranju kancera.
[0020] "Citokin" je protein koji oslobađa jedna od ćelija tako da dejstvuje na drugu ćeliju kao posrednik unutar ćelije.
[0021] "Neimunogeni" se odnosi na materijal koji ne inicira, izaziva ili pojačava imunološki odgovor, gde imunološki odgovor uključuje adaptivni i/ili urođeni imunski odgovor.
[0022] Pojam "gen" označava segment DNK koji učestvuje u proizvodnji polipeptidnog lanca; on uključuje regione koji prethode i koji slede posle kodirajućeg regiona "lider i prikolica", kao i intervenišuće sekvence (introne) između pojedinačnih kodirajućih segmenata (eksone). Neki geni mogu biti razvijeni bez introna, u celosti ili delimično. Neke vodeće sekvence mogu poboljšati translaciju nukleinske kiseline u polipeptide.
[0023] Pojam "izolovan" znači da je materijal uklonjen iz svog izvornog okruženja (npr., prirodnog okruženja ako je prirodnog porekla). Na primer, prirodno prisutna polinukleotidna ili polipeptidna sekvenca u živom organizmu nije izolovana, ali ista polinukleotidna ili polipeptidna sekvenca, odvojena od nekih ili svih koegzistirajućih materijala u prirodnom sistemu, jeste izolovana. Takvi polinukleotidi mogu biti deo vektora i/ili takvi polinukleotidi ili polipeptidi mogu biti deo kompozicije, i dalje biti izolovani u smislu da takav vektor ili kompozicija nije deo svog prirodnog okruženja.
[0024] Kao što se ovde koristi, "vektor" može biti bilo koji agens sposoban da isporuči ili održava nukleinsku kiselinu u ćeliji domaćina, i uključuje virusne vektore (npr. retrovirusni vektori, lentivirusni vektori, adenovirusni vektori, ili adeno-povezani virusni vektori), plazmide, gole nukleinske kiseline, nukleinske kiseline usložnjene sa polipeptidima ili drugim molekulima i nukleinske kiseline imobilisane na čvrstim česticama. Odgovarajuća DNK sekvenca može da se umetne u vektor različitim postupcima. Generalno, DNK sekvenca se umeće u odgovarajuće restrikcione endonukleazna mesta postupcima poznatim u stanju tehnike. Za takve postupke i druge se smatra da su u domenu stručnjaka iz ove oblasti. Transkripcija DNK koja kodira polipeptide ovog pronalaska kod viših eukariota se povećava umetanjem pojačivačke sekvence u vektor. Pojačivači su cis-dejstvujući elementi DNK, obično od 10 do 300 baznih parova koji deluju na promotera kako bi povećali njegovu transkripciju. Primeri uključuju SV40 pojačivač sa kasne strane replikacije od 100 do 270, citomegalovirusni rani pojačivač promotera, pojačivač polioma sa kasne strane replikacije i adenovirusne pojačivače.
[0025] "Receptor" označava polipeptid koji je sposoban za specifično vezivanje za molekul. Dok mnogi receptori obično deluju na površini ćelije, neki receptori mogu vezivati ligande kada se nalaze unutar ćelije (i pre nego što se transportuju na površinu) ili mogu pretežno biti prisutni unutar ćelije i tamo vezivati ligande.
[0026] Pojam "antitelo" uključuje monoklonalna antitela, poliklonalna antitela, dimere, multimere, multispecifična antitela i fragmente antitela koji mogu biti humani, mišji, humanizovani, himerni ili izvedeni iz druge vrste. "Monoklonalno antitelo" je antitelo dobijeno iz populacije koja je suštinski homogena i usmerena protiv specifičnog antigenog mesta.
[0027] "Antitelo ili funkcionalni fragment istog" označava molekul imunoglobulina koji se specifično vezuje za određeni antigen ili epitop, i uključuje kako poliklonalna tako i monoklonalna antitela. Pojam antitelo uključuje genetski modifikovane ili na drugi način izmenjene oblike imunoglobulina, kao što su intratela, peptitela, himerna antitela, potpuno humana antitela, humanizovana antitela i heterokonjugovana antitela (npr., bispecifična antitela, dijatela, trijatela i tetratela). Pojam funkcionalni fragment antitela uključuje fragmente antitela koji se vezuju za antigen, uključujući npr., Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rIgG i scFv fragmente. Pojam scFv se odnosi na jednočlano Fv antitelo u kojem su varijabilne domene teškog lanca i lakog lanca tradicionalnog dvočlanog antitela spojene u jedan lanac.
[0028] Upotreba varijabilnog fragmenta pojedinačnog lanca (scFv) je od posebnog značaja. scFv su rekombinantni molekuli u kojima su varijabilni regioni lakih i teških lanaca imunoglobulina, koji kodiraju domene za vezivanje antigena, projektovani u jedan polipeptidni lanac. Generalno, VH i VL sekvence su spojene putem sekvence linkera. Pogledati, na primer, Ahmad (2012) Clinical and Developmental Immunology Article ID 980250, ovde specifično uključeno putem reference.
[0029] Dužina DNK linkera koji se koristi za povezivanje oba domena je važna za pravilno savijanje. Procenjeno je da peptidni linker mora obuhvatiti 3,5 nm (35Å) između karboksilnog termina varijabilnog domena i aminoterminalnog kraja drugog domena, a da pritom ne utiče na sposobnost domena da se savijaju i formiraju netaknuto mesto vezivanja antigena. Mnogi takvi linkeri su poznati u stanju tehnike, na primer fleksibilni linkeri koji obuhvataju delove sa Gly i Ser ostacima.
[0030] Razmaknica. Region razmaknice povezuje domen koji vezuje antigen za transmembranski domen. Trebalo bi da je dovoljno fleksibilan da omogući domenu koji vezuje antigen da se orijentiše u različitim pravcima radi olakšanja prepoznavanja antigena. Najjednostavniji oblik je zglobni region iz imunoglobulina, npr. zglob iz bilo kojeg od IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgG4, posebno humanih proteinskih sekvenci. Alternative uključuju CH2CH3region imunoglobulina i delove CD3. Za mnoge konstrukte na bazi scFv, IgG zglob je efikasan.
[0031] T2A peptid. T2A peptid se može koristiti za povezivanje CAR prema ovom pronalasku sa oznakom epitopa ili drugim proteinom ili peptidom, uključujući bez ograničenja oznaku koja može da se sortira. T2A-povezani multicistronski vektori se mogu koristiti za ekspresiju više proteina iz jednog otvorenog okvira za čitanje. Male T2A peptidne sekvence, kada se kloniraju između gena, omogućavaju efikasnu, stehiometrijsku proizvodnju diskretnih proteinskih proizvoda unutar jednog vektora kroz novi događaj "cepanja" unutar T2A peptidne sekvence. Različite 2A peptidne sekvence su poznate i koriste se u ovoj oblasti, na primer pogledati Szymczak-Workman et al. (2012) Cold Spring Harb Protoc.2012(2):199-204, ovde specifično uključeno putem reference. One su male (18-22 aminokiseline) i imaju divergentne amino-terminalne sekvence, što šansu za homolognu rekombinaciju svodi na minimum i omogućava korišćenje više, različitih 2A peptidnih sekvenci unutar jednog vektora.
[0032] Kao što se ovde koristi, pojam "tumorsko mikro-okruženje" se odnosi na sve elemente tumorskog miljea koji stvaraju strukturno i/ili funkcionalno okruženje za maligni proces da preživi i/ili se širi i/ili metastazira.
[0033] CD20 je površinski protein ćelija prisutan na većini B-ćelijskih neoplazmi, a odsutan na inače sličnim T-ćelijskim neoplazmama. CD20 pozitivne ćelije se takođe ponekad nalaze u slučajevima Hodžkinove bolesti, mijeloma i timoma. CD20 je meta monoklonalnih antitela (mAb) rituksimab, ofatumumab, okrelizumab, genmab, obinutuzumab, ibritumomab tiuksetan, AME-133v, IMMU-106, TRU-015 i tositumomab, koji su svi aktivni agensi u lečenju svih B-ćelijskih limfoma i leukemija. Za potrebe ovog pronalaska, bilo koje od ovih antitela može biti pretvoreno u scFv i korišćeno u CAR. U nekim načinima ostvarivanja, scFv je izveden iz Leu16 monoklonalnog antitela.
[0034] Kanceri koji se mogu lečiti anti-CD20 reagensima, npr. antitelima i CAR, uključuju bez ograničenja B-ćelijske limfome i leukemije, na primer B-ćelijske ne-Hodžkinove limfome (NHL), npr. folikularni limfom; leukemiju dlakavih ćelija i B-ćelijsku hroničnu limfocitnu leukemiju (CLL). Anti-CD20 reagensi su takođe korisni u lečenju melanoma, npr. ciljanje matičnih ćelija melanoma.
[0035] Eksprimiranje CD19 je jedno od glavnih obeležja B ćelija. CD19 antigen je tip I transmembranski glikoprotein koji pripada imunoglobulinskoj Ig superporodici. CD19 je specifično izražen u normalnim B ćelijama i neoplastičnim B ćelijama. Smatra se pan B-ćelijskim markerom eksprimiranim tokom razvoja B ćelija, ali sa tri puta većom ekspresijom u zrelim ćelijama u poređenju sa nezrelim B ćelijama. Međutim, ekspresija CD19 se gubi u terminalno diferenciranim ćelijama iz plazme. Tokom limfopoeze, CD19 usmerava sudbinu i diferencijaciju B ćelija modulacijom signalizacije B-ćelijskog receptora. Ključan je za uspostavljanje optimalnog imunološkog odgovora kroz svoje uloge u antigen-nezavisnom razvoju kao i imunoglobulinom-indukovanoj aktivaciji B ćelija. Nedostatak CD19 kod ljudi i miševa dovodi do ukupno oslabljenog humoralnog odgovora sa povećanom osetljivošću na infekcije.
[0036] Obrazac eksprimiranja CD19 se održava među B-ćelijskim malignitetima gde je eksprimiran u indolentnim i agresivnim podtipovima B-ćelijskih limfoma i leukemija, uključujući NHL, B-ćelijsku CLL i ne-T akutnu limfoblastnu leukemiju (ALL). CD19 je eksprimiran u liniji B-ćelija u ranijoj fazi u poređenju sa CD20. Ova činjenica samim tim, može da obezbedi prednost lekovima usmerenim na CD19 u odnosu na rituksimab, posebno za rane B-ćelijske neoplazme kao što je akutna limfoblastna leukemija. Pored toga, pokazano je da se CD19 efikasno internalizuje u modelima limfoma sa različitim monoklonalnim antitelima (huB4, hBU12). Različita anti-CD19 antitela mogu biti formatirana za upotrebu u konstrukcijama ovog pronalaska, uključujući bez ograničenja huB4, koje je humanizovano anti-CD19 antitelo. U nekim načinima ostvarivanja prema ovom pronalasku, anti-CD19 scFv je FMC63 antitelo.
[0037] Terapije visoko selektivnim ciljanim T ćelijama se pojavljuju kao efikasne netoksični modaliteti za lečenje kancera. Maligniteti su složene bolesti gde više elemenata doprinosi ukupnoj patogenezi putem različitih i redundantnih mehanizama. Stoga bi istovremeno ciljanje različitih markera specifičnih za kancer moglo imati za rezultat bolju terapijsku efikasnost. Međutim, razvoj dva odvojena ćelijska proizvoda za kliničku upotrebu kao kombinovane terapije je nepraktičan, zbog regulatornih prepreka i troškova. Suprotno tome, davanje pojedinačne bispecifične T ćelije poništava bežanje tumora zbog gubitka antigena.
[0038] U jednom načinu ostvarivanja, bispecifični CAR obuhvata modifikovani endogeni molekul ćelijske površine koji se može koristiti kao neimunogeni selektivni epitop kompatibilan sa imunomagnetskim izborom. Neimunogeni epitopi su oni koji obično ne izazivaju imunološki odgovor kod ljudi i obično su proteini normalno izraženi kod ljudi ili njihovi fragmenti. Takav neimunogeni selekcioni epitop može olakšati imunoterapiju kod pacijenata sa kancerom bez neželjene imunološke reakcije na ćelijske proizvode. Endogeni molekul ćelijske površine može biti modifikovan ili skraćen kako bi zadržao ekstracelularni epitop koji prepoznaje poznato antitelo ili funkcionalni fragment istog, i kako bi se uklonili svi signalni ili transportni domeni i/ili bilo koji ekstracelularni domeni koje poznato antitelo ne prepoznaje. Modifikovani endogeni molekul ćelijske površine koji nema signalni ili transportni domen i/ili bilo koje ekstracelularne domene koje poznato antitelo ne prepoznaje postaje inertan. U nekim načinima ostvarivanja, za ovu svrhu se koristi skraćeni EGFR.
[0039] Modifikovani endogeni molekul ćelijske površine može biti, ali bez ograničenja na, bilo koji neimunogeni receptor povezan sa ćelijskom površinom, glikoprotein, molekul ćelijske adhezije, antigen, integrin ili klaster diferencijacije (CD) koji je modifikovan kao što je ovde opisano. Modifikacija takvih molekula ćelijske površine se postiže zadržavanjem epitopa koji je prepoznat od strane poznatog antitela ili funkcionalnog fragmenta istog; i uklanjanjem svih signalnih ili transportnih domena i/ili bilo kojih ekstracelularnih domena koje poznato antitelo ne prepoznaje. Uklanjanje signalnih ili transportnih domena i/ili bilo kojih ekstracelularnih domena koje poznato antitelo ne prepoznaje čini endogeni molekul ćelijske površine neimunogenim i/ili inertnim.
[0040] Samim tim, načini ostvarivanja prema ovom pronalasku koriste OR kapijski CAR kao veštački molekul koji omogućava imunskim ćelijama (T ćelije) da specifično i različito prepoznaju i napadnu dva ciljana molekula kancera istovremeno, ili da napadnu ćeliju kancera koja je izgubila ekspresiju bilo CD20 ili CD19. CAR je veštački molekul koji se može ugrađivati u T ćelije koristeći tehnologiju genetskog inženjeringa kako bi ih učinio specifičnim za metu od značaja. Ova sposobnost ima značajne terapijske implikacije, s obzirom da je zabeleženo bekstvo od CAR sa jednom aktivnošću.
[0041] CAR arhitektura može biti bilo koja odgovarajuća arhitektura, kako je poznato u ovoj oblasti. U CAR-u prema ovom pronalasku, citoplazmatski signalizirajući domen izveden iz ζ-lanca T ćelijskog receptora se koristi kao barem deo himernog receptora kako bi se proizveli stimulativni signali za proliferaciju T limfocita i efektorsku funkciju nakon vezivanja himernog receptora za ciljni antigen.
Dodatno, 4-1 BB ko-stimulirajući domen se koristi za pojačanje aktivacije, proliferacije i citotoksičnosti T ćelija proizvedenih od strane CAR nakon vezivanja antigena. CAR može biti CAR druge ili treće generacije, u kojem signalizaciju obezbeđuje CD3ζ zajedno sa ko-stimulacijom koju obezbeđuju CD28 i 4-1BB.
[0042] Načini ostvarivanja prema ovom pronalasku uključuju ćelije koje eksprimiraju Ili-kapijski CAR prema ovom pronalasku. Ćelija može biti bilo koje vrste, uključujući imunsku ćeliju sposobnu da eksprimira Ili-kapijski CAR prema ovom pronalasku za terapiju kancera ili ćeliju, kao što je bakterijska ćelija, koja sadrži ekspresioni vektor koji kodira Ili-kapijski CAR prema ovom pronalasku. Kao što se ovde koriste, pojmovi "ćelija," "ćelijska linija" i "ćelijska kultura" mogu se koristiti naizmenično. Svi ovi pojmovi takođe uključuju njihovo potomstvo, što znači sve i sve naredne generacije. Razume se da svo potomstvo možda neće biti identično zbog namernih ili nenamernih mutacija. U kontekstu eksprimiranja heterologne sekvence nukleinske kiseline, "ćelija domaćina" se odnosi na eukariotsku ćeliju koja je sposobna da replicira vektor i/ili eksprimira heterologni gen koji kodira vektor. Ćelija domaćina može, i jeste, korišćena kao primalac za vektore. Ćelija domaćina može biti "transfektovana" ili "transformisana," što se odnosi na proces kojim se egzogena nukleinska kiselina prenosi ili uvodi u ćeliju domaćina. Transformisana ćelija uključuje primarnu predmetnu ćeliju i njeno potomstvo. Kao što se ovde koristi, pojmovi "konstruisana" i "rekombinantne" ćelije ili domaćinske ćelije odnose se na ćelije u koje je uvedena egzogena nukleinska kiselina sekvenca, kao što je, na primer, vektor. Prema tome, rekombinantne ćelije su prepoznatljive od prirodno prisutnih ćelija koje ne sadrže rekombinantno uvedenu nukleinsku kiselinu. U načinima ostvarivanja prema ovom pronalasku, ćelija domaćina je T ćelija, uključujući citotoksičnu T ćeliju (poznatu kao TC, Citotoksični T limfocit, CTL, T-ubica ćelija, citolitička T ćelija, CD8+ T ćelije ili T-ubica ćelija); NK ćelije i NKT ćelije su takođe obuhvaćene ovim pronalaskom.
[0043] Ćelije mogu biti autologne ćelije, singene ćelije, alogene ćelije, pa čak i u nekim slučajevima, ksenogene ćelije. U mnogim situacijama može postojati želja da se modifikovane CTL ćelije unište, kada se želi prekinuti lečenje, ćelije postanu neoplastične, u istraživanju gde je zanimljivo odsustvo ćelija nakon njihovog prisustva, ili neki drugi događaj. Za ovu svrhu može se obezbediti ekspresija određenih
1
genskih proizvoda pomoću kojih se mogu uništiti modifikovane ćelije pod kontrolisanim uslovima, kao što su inducibilni geni za samoubistvo.
[0044] Ilustracije radi, pacijenti oboleli od kancera ili pacijenti koji su podložni kanceru ili za koje se sumnja da imaju kancer mogu biti lečeni na sledeći način. Kanceri uključuju posebno leukemije B-ćelija i limfome. CTL modifikovani kao što je ovde opisano mogu se davati pacijentu i zadržavati tokom dužih vremenskih perioda. Pojedinac može primiti jednu ili više doza ćelija. U nekim slučajevima, genetski modifikovane ćelije se kapsuliraju kako bi se inhibiralo prepoznavanje od strane imunog sistema i postavljaju se na mesto tumora. Ćelije se mogu ubrizgavati na mesto tumora ili ubrizgavati intravenski, na primer.
[0045] U određenim slučajevima pojedincu su obezbeđeni terapijski CTL modifikovani tako da obuhvataju Ili-kapijski CAR prema ovom pronalasku. Ćelije se mogu isporučiti u isto vreme ili u različito vreme kao drugi tip terapije za kancer. Ćelije se mogu isporučiti u istim ili odvojenim formulacijama kao drugi tip terapije za kancer. Ćelije se mogu isporučiti pojedincu različitim putevima isporuke kao drugi tip terapije za kancer. Ćelije se mogu isporučiti injekcijom na mestu tumora, intravenski ili oralno, na primer. Uobičajeni putevi isporuke za takve sastave poznati su u ovoj oblasti.
[0046] Ekspresioni vektori koji kodiraju Ili-kapijski CAR prema ovom pronalasku mogu biti uvedeni kao jedan ili više DNK molekula ili konstrukata, gde može postojati barem jedan marker koji će omogućiti izbor ćelija domaćina koje sadrže konstrukte. Konstrukti se mogu pripremiti na uobičajene načine, gde se geni i regulatorne regije mogu izolovati, prema potrebi, lično klonirati u odgovarajućem klonirajućem domaćinu, analizirati restrikcijom ili sekvenciranjem, ili drugim pogodnim sredstvima. Posebno, korišćenjem PCR, pojedinačni fragmenti, uključujući sve ili delove funkcionalne jedinice, mogu biti izolovani, gde se jedna ili više mutacija mogu uvesti korišćenjem "popravke prajmera," ligacijom, in vitro mutagenezom itd., prema potrebi. Kada su konstrukti završeni i pokazano je da imaju odgovarajuće sekvence, mogu se uvesti u CTL bilo kojim pogodnim sredstvima. Konstrukti se mogu integrisati i pakovati u nereplicirajuće, defektne virusne genome kao što su adenovirus, adeno-povezani virus (AAV) ili herpes simplex virus (HSV) ili drugi, uključujući retrovirusne vektore ili lentivirusne vektore, za infekciju ili transdukciju u ćelije. Konstrukti mogu uključivati virusne sekvence za transfekciju, ako je to poželjno. Alternativno, konstrukt se može uvesti fuzijom, elektroporacijom, biolistikom, transfekcijom, lipofekcijom ili slično. Domaćinske ćelije se mogu uzgajati i proširiti u kulturi pre uvođenja konstrukata, nakon čega sledi odgovarajući tretman za uvođenje i integraciju konstrukata. Ćelije se zatim proširuju i skriniraju zahvaljujući markeru prisutnom u konstruktu. Različiti markeri koji se mogu uspešno koristiti uključuju hprt, rezistenciju na neomicin, timidin kinazu, rezistenciju na higromicin itd.
[0047] U nekim slučajevima, može postojati ciljano mesto za homolognu rekombinaciju, gde je poželjno da konstrukt bude integrisan na određenom lokusu. Na primer, može se izbaciti endogeni gen i zameniti ga (na istom lokusu ili na drugom mestu) genom kodiranim od strane konstrukta koristeći materijale i postupke poznate u ovoj oblasti za homolognu rekombinaciju. Za homolognu rekombinaciju mogu se koristiti omega ili O-vektori. Vektori koji sadrže korisne elemente kao što su bakterijsko ili kvasno poreklo replikacije, selektivne i/ili amplifikativne markere, promotorske/pojačivačke elemente za ekspresiju u prokariotima ili eukariotima itd., mogu se koristiti za pripremu zaliha konstruktne DNK i za izvođenje transfekcija, dobro su poznati u ovoj oblasti, i mnogi su komercijalno dostupni.
[0048] CTL koji su modifikovani konstruktom(ima) se zatim uzgajaju u kulturi pod selektivnim uslovima, a ćelije koje su odabrane kao one koje sadrže konstrukt mogu se zatim proširiti i dodatno analizirati, koristeći, na primer, lančanu reakciju polimeraze za određivanje prisustva konstrukta u domaćinskim ćelijama. Kada su modifikovane ćelije domaćina identifikovane, mogu se koristiti prema planu, npr. proširene u kulturi ili uvedene u organizam domaćina.
[0049] U zavisnosti od prirode ćelija, one se mogu uvesti u organizam domaćina, npr. sisara, uključujući ljude, na različite načine. Ćelije se mogu uvesti na mesto tumora u specifičnim načinima ostvarivanja, iako se u alternativnim slučajevima ćelije usmeravaju ka kanceru ili su modifikovane da se usmeravaju ka kanceru. Broj korišćenih ćelija zavisiće od više okolnosti, svrhe uvođenja, životnog veka ćelija, protokola koji će se koristiti, na primer, broja doza, sposobnosti ćelija da se umnožavaju, stabilnosti rekombinantnog konstrukta i slično. Ćelije se mogu primeniti kao disperzija, obično se ubrizgavajući na ili blizu mesta od interesa. Ćelije mogu biti u fiziološki prihvatljivoj podlozi.
[0050] Ćelije se mogu primenjivati po želji. U zavisnosti od željenog odgovora, načina primene, životnog veka ćelija, broja prisutnih ćelija, može se primeniti različite protokole. Broj doza će zavisiti od faktora opisanih gore, barem delimično.
[0051] U nekim slučajevima AAV, retrovirusni ili lentivirusni vektori se koriste za isporuku Ili-kapijskog CAR prema ovom pronalasku do T-ćelije.
[0052] Adeno-povezani virus (AAV) je atraktivan vektorski sistem za upotrebu u ćelijama ovog pronalaska jer ima visoku frekvenciju integracije i može inficirati ćelije koje se ne dele, što ga čini korisnim za isporuku gena u ćelije sisara, na primer, u tkivnoj kulturi ili in vivo. AAV ima širok opseg domaćina za infektivnost. Detalji o generisanju i upotrebi rAAV vektora opisani su u američkim patentima br.5,139,941 i 4,797,368.
[0053] Retrovirusi su korisni kao vektori za isporuku zbog njihove sposobnosti da integrišu svoje gene u genom domaćina, prenoseći veliku količinu stranog genetskog materijala, pri čemu se inficira širok spektar vrsta i tipova ćelija, i mogu se pakovati u specijalne ćelijske linije.
[0054] Lentivirusi su složeni retrovirusi koji, pored zajedničkih retrovirusnih gena gag, pol i env, sadrže i druge gene sa regulatornim ili strukturnim funkcijama. Lentivirusni vektori su dobro poznati u ovoj oblasti. Neki primeri lentivirusa uključuju viruse ljudske imunodeficijencije: HIV-1, HIV-2 i majmunski virus imunodeficijencije: SIV. Rekombinantni lentivirusni vektori su sposobni da inficiraju ćelije koje se ne dele i mogu se koristiti za in vivo i ex vivo prenos gena i ekspresiju nukleinskih kiselina. U nekim slučajevima, lentivirusni vektor je vektor treće generacije (videti, na primer, Dull et al. (1998) J Virol. 72(11):8463-71). Takvi vektori su komercijalno dostupni. Plazmidi lentivirusnih vektora druge generacije koriste virusni LTR promotor za ekspresiju gena, dok vektori za transfer treće generacije koriste hibridni LTR promotor, vidi, na primer, Addgene za odgovarajuće vektore.
[0055] Bilo koja od kompozicija opisanih ovde može biti uključena u komplet. Na primer, jedna ili više ćelija za upotrebu u ćelijskoj terapiji i/ili reagensi za generisanje jedne ili više ćelija za upotrebu u ćelijskoj terapiji koje sadrže rekombinantne ekspresione vektore mogu biti uključene u komplet.
Komponente kompleta su obezbeđene u odgovarajućim sredstvima za kontejnere. Neke komponente kompleta mogu biti pakovane u vodenoj sredini ili u liofilizovanom obliku. Sredstva za kontejnere kompleta će generalno uključivati barem jednu bočicu, epruvetu, bocu, špric ili drugo sredstvo za kontejnere, u koje se može staviti komponenta, i po mogućstvu, odgovarajuće podeljena u alikvot. Gde postoji više od jedne komponente u kompletu, komplet takođe generalno sadrži drugu, treću ili druge dodatne kontejnere u koje se dodatne komponente mogu zasebno staviti. Međutim, razne kombinacije komponenti mogu biti uključene u bočicu. Komplet ovog pronalaska će takođe obično uključivati sredstvo za zadržavanje komponenti u bliskoj vezi za komercijalnu prodaju. Takvi kontejneri mogu uključivati ubrizgane ili uduvane plastične kontejnere u koje se zadržavaju željene bočice.
[0056] Postupci za kliničke aspekte mogu se kombinovati sa drugim agensima koji su efikasni u lečenju hiperproliferativnih bolesti, kao što su antikancerogeni agensi. Antikancerogeni agens je sposoban da negativno deluje na kancer kod subjekta, na primer, ubijanjem ćelija kancera, indukovanjem apoptoze u ćelijama kancera, smanjenjem stope rasta ćelija kancera, smanjenjem učestalosti ili broja metastaza, smanjenjem veličine tumora, inhibicijom rasta tumora, smanjenjem dotoka krvi u tumor ili ćelije kancera, promovisanjem imunog odgovora protiv ćelija kancera ili tumora, sprečavanjem ili inhibicijom progresije kancera ili povećanjem životnog veka subjekta sa kancerom. Generalno, ove druge kompozicije bi se obezbedile u kombinovanoj količini koja je efikasna za ubijanje ili inhibiciju proliferacije ćelija. Ovaj proces može uključivati kontaktiranje ćelija kancera sa ekspresionim konstruktom i agensom(i) ili višestrukim faktorima u isto vreme. To se može postići kontaktiranjem ćelije sa jednom kompozicijom ili farmakološkom formulacijom koja uključuje oba agensa, ili kontaktiranjem ćelije sa dve odvojene kompozicije ili formulacije, u isto vreme, pri čemu jedna kompozicija uključuje ekspresioni konstrukt, a druga uključuje drugi agens(e).
[0057] Terapije kancera takođe uključuju različite kombinovane terapije sa hemijskim i tretmanima zračenja. Kombinovane hemoterapije uključuju, na primer, abraksan, altretamin, docetaksel, herceptin, metotreksat, novantron, zoladeks, cisplatin (COOP), karboplatin, prokarbazin, mekloretamin, ciklofosfamid, kamptotecin, ifosfamid, melfalan, hlorambucil, busulfan, nitrosurea, daktinomicin, daunorubicin, doksorubicin, bleomicin, plicomicin, mitomicin, etopozid (VP16), tamoksifen, raloksifen, agense za vezivanje estrogenih receptora, taksol, gemcitabin, navelbin, inhibitore farnesil-proteina
1
transferaze, transplantin, 5-fluorouracil, vinkristin, vinblastin i metotreksat, ili bilo koje analoge ili derivate navedenih supstanci, kao i njihove kombinacije.
EKSPERIMENTALNI BISPECIFIČNI CD20-ILI-CD19 CAR
[0058] Bispecifični CAR je konstruisan da ima, od N do C kraja, signalnu sekvencu koja usmerava lokalizaciju CAR na ćelijsku membranu, CD20 scFv, peptidni linker, CD19 scFv, zatim razmaknicu (npr. lgG4 zglobni domen), transmembranski domen (npr. transmembranski domen CD28), nijedan ili jedan ili više kostimulirajućih domena (npr. citoplazmatski domen 4-1BB ili CD28), i citoplazmatski domen CD3 ζ lanca. Da bi se olakšala identifikacija T ćelija koje eksprimiraju CAR pomoću bojenja antitelima, skraćeni receptor epidermalnog faktora rasta (EGFRt) može biti povezan sa CAR-om preko samocepajućeg peptida (npr. T2A).
[0059] Aminokiselinska sekvenca raznih komponenata je sledeća:
GMpCSF signalna sekvenca, (SEQ ID NO:2) METDTLLLWVLLLWVPGSTG
CD20 scFv (SEQ ID NO:3)
IgG4 zglob (SEQ ID NO:5) ESKYGPPCPPCP
CD28 transmembranski domen (SEQ ID NO:6)
MFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28 citoplazmatski domen (SEQ ID NO:7) RSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
4-1BB citoplazmatski domen (SEQ OD NO:8)
KRGRKKLL YI FKQPFM RPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL CD3ζ citoplazmatski domen (SEQ ID NO:9)
T2A samocepajući peptid (SEQ ID NO:10) LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR
IgG4 CH2 (SEQ ID NO:11)
Skraćeni receptor epidermalnog faktora rasta (EGFRt) (SEQ ID NO:13)
[0060] Ili-kapijski CAR, ali ne i CD19 CAR sa jednim ulazom, reaguju na Raji ćelije limfoma koje su podvrgnute bekstvu antigena, kao što je prikazano na Fig.2 ekspresijom CD69, CD137 i CD1-7a na površini T ćelija koje eksprimiraju CAR, i oslobađanje citokina. Kontrole uključuju CD19 kratki sa jednim ulazom CD19 CAR sa IgG4 zglobom kao razmaknicom; i CD20 dugi jednoulazni CD20 CAR sa IgG4 zglobom-CH2-CH3 kao razmaknicom. Testirani su različiti linkeri, uključujući (G4S)1, (G4S)4, (SEQ ID NO:1, EAAAK)1 i (D NO:1, EAAAAK)3.
[0061] Poređenje ćelijske lize jednostrukim i Ili-kapijskim CAR-T ćelijama nakon 4-časovne ko-inkubacije sa ćelijama divljeg tipa (WT; CD19+/CD20+) ili CD19-Raji (CD19-/CD20+) ćelijama je prikazano na Fig.3. Bispecifičnost nije bila ugrožena u Ili-kapijskim CAR. CAR-T ćelije su zajednički inkubirane sa WT Raji ili CD19+ K562 metama tokom 24 sata, a ekspresija relevantnih antigena izazvanih aktivacijom i oslobađanje citokina prikazani su na Fig.4.
[0062] Podaci in vivo, prikazani na Fig.5, pokazuju Ili-kapijski CAR brišu efekte bežanja antigena. Kod preživljavanja miševa koji su nosili WT ili mešovite Raji tumorske ksenotransplantate i tretiranih T ćelijama koje nemaju CAR ili CD19 CAR sa jednim ulazom, rezultati su pokazali da je CD19 CAR sa jednim ulazom bio u stanju da značajno produži preživljavanje životinja sa nakalemljenim WT Raji tumorima, i da su Ili-kapijski CAR efikasni kao CD19 CAR sa jednim ulazom u ciljanju WT Raji limfoma. Međutim, samo Ili-kapijski CAR su bili u stanju da značajno produže preživljavanje životinja koje nose CD19-mutantne tumore. Ili-kapijski CAR su podjednako efikasni protiv WT i CD19- mutantnih Raji tumora, čime se obezbeđuju T ćelije koje su neosetljive na gubitak antigena ciljanim ćelijama.
1

Claims (11)

Patentni zahtevi
1. Polipeptid CD19-ILI-CD20 himernog antigenskog receptora (CAR), koji obuhvata: signalnu sekvencu iz SEQ ID NO: 2; anti CD20 varijabilni fragment pojedinačnog lanca (scFv) koji obuhvata varijabilni region lakog i teškog lanca koji kodira SEQ ID NO: 3; (G4S)4linker; anti-CD19 varijabilni fragment pojedinačnog lanca (scFv) koji obuhvata varijabilni region lakog i teškog lanca koji kodira SEQ ID NO: 4; domen razmaknice iz SEQ ID NO: 5; CD28 transmembranski domen iz SEQ ID NO: 6; 4-1BB citoplazmatski signalizirajući domen iz SEQ ID NO: 8; CD3 zeta signalizirajući domen iz SEQ ID NO: 9.
2. CD19-ILI-CD20 CAR prema zahtevu 1, pri čemu taj CAR dodatno obuhvata obeležje koje može da se sortira.
3. CD19-ILI-CD20 CAR prema zahtevu 2, pri čemu to obeležje koje može da se sortira predstavlja skraćeni EGFR.
4. CD19-ILI-CD20 CAR prema zahtevu 2, pri čemu to obeležje koje može da se sortira predstavlja fluorescentni protein.
5. Nukleinska kiselina koja kodira CD19-ILI-CD20 CAR prema bilo kom od zahteva 1 do 4.
6. Nukleinska kiselina prema zahtevu 5, upakovana u virusni vektor.
7. Nukleinska kiselina prema zahtevu 6, pri čemu taj virusni vektor predstavlja lentivirusni vektor.
8. Ćelija koja obuhvata protein ili konstrukt nukleinske kiseline prema bilo kom od zahteva 1 do 7.
9. Ćelija prema zahtevu 8, pri čemu ta ćelija predstavlja T ćeliju.
10. Efikasna doza ćelije prema zahtevu 9 za upotrebu u postupku tretiranja kancera kod pojedinca, naročito tamo gde kancer predstavlja malignitet B ćelija.
11. Efikasna doza ćelije za upotrebu prema zahtevu 10, pri čemu je taj pojedinac čovek.
RS20250093A 2014-12-15 2015-12-14 Bispecifični ili-kapijski himerni antigenski receptor koji reaguje na cd19 i cd20 RS66502B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462091854P 2014-12-15 2014-12-15
PCT/US2015/065620 WO2016100232A1 (en) 2014-12-15 2015-12-14 Bispecific or-gate chimeric antigen receptor responsive to cd19 and cd20
EP15870818.0A EP3240805B1 (en) 2014-12-15 2015-12-14 Bispecific or-gate chimeric antigen receptor responsive to cd19 and cd20

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS66502B1 true RS66502B1 (sr) 2025-03-31

Family

ID=56127437

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20250093A RS66502B1 (sr) 2014-12-15 2015-12-14 Bispecifični ili-kapijski himerni antigenski receptor koji reaguje na cd19 i cd20

Country Status (15)

Country Link
US (7) US11253546B2 (sr)
EP (3) EP4400516A1 (sr)
CA (1) CA3008162A1 (sr)
DK (1) DK3240805T3 (sr)
ES (1) ES3008782T3 (sr)
FI (1) FI3240805T3 (sr)
HR (1) HRP20250129T1 (sr)
HU (1) HUE070137T2 (sr)
LT (1) LT3240805T (sr)
PL (1) PL3240805T3 (sr)
PT (1) PT3240805T (sr)
RS (1) RS66502B1 (sr)
SI (1) SI3240805T1 (sr)
SM (1) SMT202500043T1 (sr)
WO (1) WO2016100232A1 (sr)

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2934532B1 (en) 2012-12-20 2019-10-23 Purdue Research Foundation Chimeric antigen receptor-expressing t cells as anti-cancer therapeutics
EP3234120B1 (en) 2014-12-15 2025-09-03 The Regents of the University of California Cytotoxic molecules responsive to intracellular ligands for selective t cell mediated killing
EP4400516A1 (en) 2014-12-15 2024-07-17 The Regents of the University of California Bispecific or-gate chimeric antigen receptor responsive to cd19 and cd20
MX2017012939A (es) 2015-04-08 2018-05-22 Novartis Ag Terapias cd20, terapias cd22 y terapias de combinacion con una celula que expresa un receptor quimerico de antigeno (car) de cd19.
DK3368571T5 (da) 2015-10-30 2024-09-30 Univ California Transformerende, vækstfaktor-beta-responsive polypeptider og fremgangsmåder til anvendelse deraf
JP7282521B2 (ja) 2016-04-08 2023-05-29 パーデュー・リサーチ・ファウンデイション Ｃａｒ ｔ細胞療法のための方法および組成物
EP4282969A3 (en) * 2016-09-02 2024-01-31 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with duocars
EP3523331A1 (en) 2016-10-07 2019-08-14 Novartis AG Chimeric antigen receptors for the treatment of cancer
CN108395482B (zh) 2017-02-08 2021-02-05 西比曼生物科技（香港）有限公司 一种靶向cd20抗原嵌合抗原受体的构建及其工程化t细胞的活性鉴定
JP7178355B2 (ja) 2017-02-28 2022-11-25 エンドサイト・インコーポレイテッド Ｃａｒ ｔ細胞療法のための組成物および方法
US10442867B2 (en) 2017-07-31 2019-10-15 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD19/CD20 immunotherapy
CN109423495A (zh) * 2017-08-24 2019-03-05 上海恒润达生生物科技有限公司 一种双靶向嵌合抗原受体及其用途
MA51428A (fr) * 2017-12-22 2020-11-04 Bluebird Bio Inc Récepteur d'antigène chimérique multivalent
US10561686B2 (en) 2018-01-12 2020-02-18 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Modified cell expansion and uses thereof
CN108285486A (zh) * 2018-01-15 2018-07-17 浙江阿思科力生物科技有限公司 以cd20为靶点的特异性抗体、car-nk细胞及其制备和应用
JP7549303B2 (ja) 2018-01-22 2024-09-11 エンドサイト・インコーポレイテッド Ｃａｒ ｔ細胞の使用方法
AU2019219454A1 (en) 2018-02-09 2020-08-27 National University Of Singapore Activating chimeric receptors and uses thereof in natural killer cell immunotherapy
CN112105382A (zh) 2018-02-23 2020-12-18 恩多塞特公司 用于car t细胞疗法的顺序方法
CN112055717B (zh) 2018-04-02 2024-04-26 新加坡国立大学 用在免疫细胞中表达的膜结合抗细胞因子非信号传导粘合剂中和人细胞因子
US10869888B2 (en) 2018-04-17 2020-12-22 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Modified cell expansion and uses thereof
US20210230289A1 (en) * 2018-06-12 2021-07-29 The Regents Of The University Of California Single-chain bispecific chimeric antigen receptors for the treatment of cancer
US12240915B2 (en) 2018-08-30 2025-03-04 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Chimeric antigen receptor cells for treating solid tumor
SG11202104524YA (en) 2018-11-01 2021-05-28 Gracell Biotechnologies Shanghai Co Ltd Compositions and methods for t cell engineering
US10918667B2 (en) 2018-11-20 2021-02-16 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Modified cell expressing therapeutic agent and uses thereof
KR102840400B1 (ko) * 2018-12-12 2025-08-04 카이트 파마 인코포레이티드 키메라 항원 수용체 및 car-t 세포 및 사용 방법
WO2020151752A1 (zh) * 2019-01-22 2020-07-30 亘喜生物科技（上海）有限公司 Cd20组合靶向的工程化免疫细胞
AU2020232691B2 (en) 2019-03-05 2023-06-29 Nkarta, Inc. CD19-directed chimeric antigen receptors and uses thereof in immunotherapy
US12076343B2 (en) 2020-02-19 2024-09-03 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Engineered safety in cell therapy
IL296103A (en) 2020-03-05 2022-11-01 Neotx Therapeutics Ltd Methods and compositions for treating cancer with immune cells
CN113402612A (zh) 2020-03-17 2021-09-17 西比曼生物科技（香港）有限公司 靶向cd19和cd20的联合嵌合抗原受体及其应用
EP4127188A4 (en) * 2020-03-31 2024-08-21 Walking Fish Therapeutics MODIFIED B CELLS AND METHODS OF USE THEREOF
US12043654B2 (en) 2020-06-02 2024-07-23 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Anti-GCC antibody and CAR thereof for treating digestive system cancer
EP4271817A2 (en) 2020-12-30 2023-11-08 Alaunos Therapeutics, Inc. Recombinant vectors comprising polycistronic expression cassettes and methods of use thereof
CA3209218A1 (en) * 2021-01-27 2022-08-04 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute Inc. Bi-specific car t cells for b cell malignancies
IL307544A (en) * 2021-04-08 2023-12-01 Sana Biotechnology Inc Cd8-specific antibody constructs and compositions thereof
EP4384549A1 (en) * 2021-08-12 2024-06-19 Cellogen Therapeutics Pvt. Ltd. Chimeric antigen receptors (car) for b cell malignancies
US20260043004A1 (en) * 2022-08-04 2026-02-12 Immpact-Bio, Ltd. Methods of manufacturing chimeric antigen receptor t cells
CA3278900A1 (en) 2023-03-31 2024-10-03 AbelZeta Inc. BISPECIFIC CHIMERIC ANTIGENIC RECEPTORS TARGETING CD20 AND BCMA
WO2025059162A1 (en) 2023-09-11 2025-03-20 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Car-engager containing il-2 variants to enhance the functionality of car t cells
WO2025076144A1 (en) * 2023-10-03 2025-04-10 Atara Biotherapeutics, Inc. Bispecific cd19/cd20-targeted chimeric antigen receptors and uses thereof
WO2025231185A1 (en) 2024-05-01 2025-11-06 Legend Biotech Ireland Limited Viral glycoprotein variants and uses thereof

Family Cites Families (135)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1864312A (en) * 1927-10-12 1932-06-21 Int Harvester Co Safety device for corn shredders
US4797368A (en) 1985-03-15 1989-01-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector
US5139941A (en) 1985-10-31 1992-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV transduction vectors
US5670373A (en) 1988-01-22 1997-09-23 Kishimoto; Tadamitsu Antibody to human interleukin-6 receptor
ATE194384T1 (de) 1989-09-12 2000-07-15 Hoffmann La Roche Tnf-bindende proteine
US6319494B1 (en) 1990-12-14 2001-11-20 Cell Genesys, Inc. Chimeric chains for receptor-associated signal transduction pathways
EP0628639B1 (en) 1991-04-25 1999-06-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reconstituted human antibody against human interleukin 6 receptor
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
US5637481A (en) 1993-02-01 1997-06-10 Bristol-Myers Squibb Company Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell
US5138941A (en) 1991-06-28 1992-08-18 Strauss Frederick J Wooden crusher for recyclable metal cans
IL104570A0 (en) 1992-03-18 1993-05-13 Yeda Res & Dev Chimeric genes and cells transformed therewith
US7166423B1 (en) 1992-10-21 2007-01-23 Miltenyi Biotec Gmbh Direct selection of cells by secretion product
WO1994012520A1 (en) 1992-11-20 1994-06-09 Enzon, Inc. Linker for linked fusion polypeptides
US6074841A (en) 1996-08-19 2000-06-13 Millennium Biotherapeutics, Inc. Don-1 gene and polypeptides and uses therefor
US5958703A (en) 1996-12-03 1999-09-28 Glaxo Group Limited Use of modified tethers in screening compound libraries
CA2289115A1 (en) 1997-05-07 1998-11-12 Bristol-Myers Squibb Company Recombinant antibody-enzyme fusion proteins
DE69838483T2 (de) 1997-10-14 2008-07-03 Darwin Molecular Corp. Thymidinkinase mutanten und fusionproteine mit thymidinkinase und guanylatekinase aktivitäten
WO2000023573A2 (en) 1998-10-20 2000-04-27 City Of Hope Cd20-specific redirected t cells and their use in cellular immunotherapy of cd20+ malignancies
US6492497B1 (en) 1999-04-30 2002-12-10 Cambridge Antibody Technology Limited Specific binding members for TGFbeta1
AU2001297703B2 (en) 2000-11-07 2006-10-19 City Of Hope CD19-specific redirected immune cells
US7066469B2 (en) 2002-08-06 2006-06-27 University of Kentucky Research Foundation Board of Supervisors of Louisiana State University Seal assembly for machinery housing
US20040043949A1 (en) 2002-08-30 2004-03-04 Christopher Richardson Therapeutic system targeting pathogen proteases and uses thereof
UA80296C2 (en) 2002-09-06 2007-09-10 Biogen Inc Imidazolopyridines and methods of making and using the same
CN101928344B (zh) 2002-10-17 2014-08-13 根马布股份公司 抗cd20的人单克隆抗体
US20050129671A1 (en) 2003-03-11 2005-06-16 City Of Hope Mammalian antigen-presenting T cells and bi-specific T cells
WO2004085611A2 (en) 2003-03-21 2004-10-07 The Research Foundation Of State University Of New York Model for mutually exclusive domain folding molecular switch
KR20060041205A (ko) 2003-07-01 2006-05-11 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드 양특이성 항체들의 다가 담체들
US7754209B2 (en) 2003-07-26 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals Binding constructs and methods for use thereof
SG145712A1 (en) 2003-08-01 2008-09-29 Amgen Inc Crystalline tumor necrosis factor receptor 2 polypeptides
US20050050200A1 (en) 2003-09-02 2005-03-03 Kabushiki Kaisha Toshiba Computer system and cluster system program
US7435596B2 (en) 2004-11-04 2008-10-14 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Modified cell line and method for expansion of NK cell
EP1682890A2 (en) 2003-11-13 2006-07-26 Genentech, Inc. Screening assays and methods of tumor treatment
CN1961003B (zh) 2004-03-31 2013-03-27 健泰科生物技术公司 人源化抗TGF-β抗体
WO2006046661A1 (ja) 2004-10-28 2006-05-04 Osaka University インターロイキン－６阻害剤
WO2006086469A2 (en) 2005-02-08 2006-08-17 Genzyme Corporation Antibodies to tgfbeta
US20090068158A1 (en) 2005-12-09 2009-03-12 Medin Jeffrey A Thymidylate kinase mutants and uses thereof
WO2007070866A2 (en) 2005-12-16 2007-06-21 Alcon, Inc. Control of intraocular pressure using alk5 modulation agents
EP4032552B1 (en) 2008-08-26 2023-10-04 City of Hope Method and compositions for enhanced anti-tumor effector functioning of t cells
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
EP2445530B1 (en) 2009-06-24 2016-09-07 The Feinstein Institute for Medical Research Method for treating chronic lymphocytic leukemia
KR101829073B1 (ko) * 2009-06-26 2018-02-13 아이2 파마슈티컬스, 인크. 대리 경쇄의 발현
ES2686424T5 (es) 2010-05-04 2023-03-27 Yeda Res & Dev Inmunoterapia con células alogénicas redireccionadas
WO2011146862A1 (en) 2010-05-21 2011-11-24 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Methods for inducing selective apoptosis
MY165160A (en) 2010-09-01 2018-02-28 Genzyme Corp TREATMENT OF MYOCARDIAL INFARCTION USING TGF-ß ANTAGONISTS
TWI603738B (zh) 2010-11-08 2017-11-01 建南德克公司 皮下投予抗－ｉｌ－６受體抗體
PH12013501201A1 (en) 2010-12-09 2013-07-29 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
US20130071414A1 (en) 2011-04-27 2013-03-21 Gianpietro Dotti Engineered cd19-specific t lymphocytes that coexpress il-15 and an inducible caspase-9 based suicide gene for the treatment of b-cell malignancies
CN102875678B (zh) 2011-07-13 2014-08-06 无锡天演生物技术有限公司 全人源抗人cd20单抗分子及其应用
LT2794658T (lt) 2011-12-19 2017-05-10 Synimmune Gmbh Bispecifinė antikūno molekulė
JP6850528B2 (ja) 2012-02-13 2021-03-31 シアトル チルドレンズ ホスピタル ドゥーイング ビジネス アズ シアトル チルドレンズ リサーチ インスティテュート 二重特異性キメラ抗原受容体およびその治療的使用
GB201203051D0 (en) 2012-02-22 2012-04-04 Ucb Pharma Sa Biological products
US20130280220A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Nabil Ahmed Chimeric antigen receptor for bispecific activation and targeting of t lymphocytes
KR20150029714A (ko) 2012-07-13 2015-03-18 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 이중특이적 항체의 공-도입에 의한 ｃａｒ 세포의 활성 증강
CA2881981A1 (en) 2012-08-20 2014-02-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Method and compositions for cellular immunotherapy
EP3456734B1 (en) 2012-10-04 2022-01-05 Research Development Foundation Serine protease molecules and therapies
KR101911438B1 (ko) 2012-10-31 2018-10-24 삼성전자주식회사 이중 특이 항원 결합 단백질 복합체 및 이중 특이 항체의 제조 방법
EP2730289A1 (en) 2012-11-07 2014-05-14 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Novel immunoproteases
CN113201073A (zh) 2012-11-21 2021-08-03 詹森生物科技公司 双特异性EGFR/c-Met抗体
CN104271602B (zh) 2012-11-21 2020-08-21 武汉友芝友生物制药有限公司 双特异性抗体
EP4303232A3 (en) 2013-02-15 2024-04-17 The Regents of The University of California Chimeric antigen receptor and methods of use thereof
PT2971048T (pt) 2013-03-11 2019-02-06 Genzyme Corp Anticorpos anti-tgf-beta manipulados e fragmentos de ligação a antigénios
CA2909701C (en) 2013-04-17 2022-12-06 Baylor College Of Medicine Immunosuppressive tgf-.beta. signal converter
WO2015095412A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Zhong Wang Bispecific antibody with two single-domain antigen-binding fragments
US20160333108A1 (en) 2014-01-13 2016-11-17 Stephen J. Forman CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS (CARs) HAVING MUTATIONS IN THE FC SPACER REGION AND METHODS FOR THEIR USE
ES3063961T3 (en) 2014-02-14 2026-04-21 Cellectis Cells for immunotherapy engineered for targeting antigen present both on immune cells and pathological cells
JP6556156B2 (ja) 2014-02-27 2019-08-07 ユーシーエル ビジネス ピーエルシー Ａｐｒｉｌバリアント
CA2945320A1 (en) 2014-04-10 2015-10-15 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Drug regulated transgene expression
KR20160145802A (ko) 2014-04-23 2016-12-20 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 요법에 사용하기 위한 키메라 항원 수용체 (car) 및 이의 제조 방법
US11041021B2 (en) 2014-05-23 2021-06-22 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Car based immunotherapy
JP2017531430A (ja) 2014-10-07 2017-10-26 セレクティスＣｅｌｌｅｃｔｉｓ Ｃａｒによって誘導される免疫細胞の活性を調節するための方法
AU2015343013B2 (en) 2014-11-05 2020-07-16 Board Of Regents, The University Of Texas System Gene modified immune effector cells and engineered cells for expansion of immune effector cells
CA2969456A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods and compositions for adoptive cell therapy
EA036379B1 (ru) 2014-12-12 2020-11-02 Блубёрд Био, Инк. Химерные антигенные рецепторы к bcma
EP3234120B1 (en) 2014-12-15 2025-09-03 The Regents of the University of California Cytotoxic molecules responsive to intracellular ligands for selective t cell mediated killing
EP4400516A1 (en) 2014-12-15 2024-07-17 The Regents of the University of California Bispecific or-gate chimeric antigen receptor responsive to cd19 and cd20
EP3256492A4 (en) 2015-02-09 2018-07-11 University of Florida Research Foundation, Inc. Bi-specific chimeric antigen receptor and uses thereof
MX2017012939A (es) 2015-04-08 2018-05-22 Novartis Ag Terapias cd20, terapias cd22 y terapias de combinacion con una celula que expresa un receptor quimerico de antigeno (car) de cd19.
WO2016168773A2 (en) 2015-04-15 2016-10-20 The California Institute For Biomedical Research Optimized pne-based chimeric receptor t cell switches and uses thereof
WO2016174652A1 (en) 2015-04-30 2016-11-03 Technion Research & Development Foundation Limited Chimeric antigen receptors and methods of their use
WO2017011342A1 (en) 2015-07-10 2017-01-19 Abbvie Inc. Igm-or-ige-modified binding proteins and uses thereof
WO2017027291A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Bispecific car t-cells for solid tumor targeting
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
DK3368571T5 (da) 2015-10-30 2024-09-30 Univ California Transformerende, vækstfaktor-beta-responsive polypeptider og fremgangsmåder til anvendelse deraf
MX2018005618A (es) 2015-11-05 2018-08-01 Juno Therapeutics Inc Receptores quimericos que contienen dominios inductores de traf y composiciones y metodos relacionados.
CN108884140B (zh) 2015-12-03 2022-10-25 朱诺治疗学股份有限公司 修饰的嵌合受体及相关组合物和方法
WO2017172981A2 (en) 2016-03-29 2017-10-05 University Of Southern California Chimeric antigen receptors targeting cancer
PT3436079T (pt) 2016-04-01 2021-10-06 Kite Pharma Inc Recetores de antigénios quiméricos e de células t e métodos de uso
WO2017180993A1 (en) 2016-04-14 2017-10-19 Bluebird Bio, Inc. Salvage chimeric antigen receptor systems
CN105837693A (zh) 2016-05-30 2016-08-10 李斯文 一种基于bcma的抗原嵌合受体及其制备方法和应用
JP7114490B2 (ja) 2016-06-24 2022-08-08 アイセル・ジーン・セラピューティクス・エルエルシー キメラ抗体受容体（ＣＡＲｓ）の構成およびその使用方法
ES3015117T3 (en) 2016-08-29 2025-04-29 Fred Hutchinson Cancer Center Chelating platform for delivery of radionuclides
EP4282969A3 (en) 2016-09-02 2024-01-31 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with duocars
JP2019530440A (ja) 2016-09-02 2019-10-24 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア インターロイキン６受容体α結合単鎖可変断片を含む方法および組成物
EP3523331A1 (en) 2016-10-07 2019-08-14 Novartis AG Chimeric antigen receptors for the treatment of cancer
CN110352068A (zh) 2016-12-02 2019-10-18 南加利福尼亚大学 合成的免疫受体及其使用方法
CN108148863B (zh) 2016-12-05 2019-12-17 上海优卡迪生物医药科技有限公司 一种封闭il6r的用于缓解crs的car-t转基因载体及其构建方法和应用
AU2018275894B2 (en) * 2017-06-02 2025-04-24 Juno Therapeutics, Inc. Articles of manufacture and methods for treatment using adoptive cell therapy
SG11201912010XA (en) * 2017-06-12 2020-01-30 Obsidian Therapeutics Inc Pde5 compositions and methods for immunotherapy
US11325957B2 (en) 2017-06-19 2022-05-10 Cell Design Labs, Inc. Methods and compositions for reducing the immunogenicity of chimeric notch receptors
US10442867B2 (en) 2017-07-31 2019-10-15 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD19/CD20 immunotherapy
MX2020004185A (es) 2017-09-27 2021-01-08 Univ Southern California Nuevas plataformas para coestimulacion, nuevos diseños car y otras mejoras para terapia celular adoptiva.
WO2019099707A1 (en) 2017-11-16 2019-05-23 Kite Pharma, Inc Modified chimeric antigen receptors and methods of use
MA51428A (fr) 2017-12-22 2020-11-04 Bluebird Bio Inc Récepteur d'antigène chimérique multivalent
JP2021508468A (ja) 2017-12-29 2021-03-11 シティ・オブ・ホープＣｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ メディトープ対応ｔ細胞
WO2019134866A1 (en) 2018-01-03 2019-07-11 Molmed Spa Chimeric antigen receptors containing optimal spacer region
SG11202011383VA (en) 2018-05-31 2020-12-30 Univ Washington Chimeric antigen receptor t cells (car-t) for the treatment of cancer
US11123079B2 (en) 2018-06-08 2021-09-21 Boston Scientific Scimed, Inc. Occlusive device with actuatable fixation members
US20210230289A1 (en) 2018-06-12 2021-07-29 The Regents Of The University Of California Single-chain bispecific chimeric antigen receptors for the treatment of cancer
CN119529091A (zh) 2018-06-19 2025-02-28 南京传奇生物科技有限公司 工程化的细胞及其用途
US20210269525A1 (en) 2018-06-29 2021-09-02 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. ANTI-CD3e ANTIBODIES AND USES THEREOF
WO2020010235A1 (en) 2018-07-05 2020-01-09 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute Inc. Car t cells that target b-cell antigens
KR20210074274A (ko) 2018-08-06 2021-06-21 시애틀 칠드런즈 호스피탈 디/비/에이 시애틀 칠드런즈 리서치 인스티튜트 합텐 표지된 세포로의 키메라 항원 수용체 t 세포의 자극을 위한 방법 및 조성물
CN113164576A (zh) 2018-10-05 2021-07-23 圣安娜儿童癌症研究中心 嵌合抗原受体(car)组
CA3112310C (en) 2018-10-05 2025-05-06 Universitat Fur Bodenkultur Wien CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR GROUP (CAR)
EP3876977A1 (en) 2018-11-06 2021-09-15 The Regents Of The University Of California Chimeric antigen receptors for phagocytosis
PL3886894T3 (pl) 2018-11-30 2024-07-01 Juno Therapeutics, Inc. Metody dawkowania i leczenia nowotworów b-komórkowych w adoptywnej terapii komórkowej
KR102840400B1 (ko) 2018-12-12 2025-08-04 카이트 파마 인코포레이티드 키메라 항원 수용체 및 car-t 세포 및 사용 방법
CA3130489A1 (en) 2019-02-18 2020-08-27 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Combinations of multiple chimeric antigen receptors for immunotherapy
US20230348556A1 (en) 2019-02-21 2023-11-02 Arbele Limited Artificial immunosurveillance chimeric antigen receptor and cells expressing the same
CN113924103B (zh) 2019-03-06 2025-02-14 莱蒂恩技术公司 用于用自驱动的嵌合抗原受体来治疗癌症的组合物和方法
EP3959307A4 (en) 2019-04-22 2023-08-23 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Engineered cells and uses thereof
CN114007626A (zh) * 2019-04-26 2022-02-01 艾丽塔生物治疗剂公司 用于治疗癌症的组合物和方法
US20220218752A1 (en) 2019-05-16 2022-07-14 University Of Washington Lockr-mediated recruitment of car t cells
PE20220568A1 (es) 2019-05-21 2022-04-20 Novartis Ag Moleculas de union a cd19 y usos de las mismas
CN112111012B (zh) 2019-06-20 2023-07-04 成都恩沐生物科技有限公司 共价多特异性抗体
KR20220044748A (ko) 2019-07-11 2022-04-11 우한 이지 바이오파마 씨오., 엘티디. 4가 대칭 이중 특이적 항체
CN112390891B (zh) 2019-08-14 2022-06-03 苏州方德门达新药开发有限公司 嵌合抗原受体及其构建方法和应用
WO2021030586A1 (en) 2019-08-15 2021-02-18 City Of Hope Dual bispecific antibody compounds and uses thereof
EP4090674A4 (en) * 2020-01-14 2024-01-24 Synthekine, Inc. Biased il2 muteins methods and compositions
JP2023518049A (ja) * 2020-03-16 2023-04-27 ユニバーシティ オブ サザン カリフォルニア 新規な抗原結合ドメインおよびそれを組み込んだ合成抗原受容体
US20230212255A1 (en) 2020-03-17 2023-07-06 Cellular Biomedicine Group Inc. Combined chimeric antigen receptor targeting cd19 and cd20 and applications thereof
US20230104705A1 (en) 2020-03-17 2023-04-06 Cellular Biomedicine Group Inc. Combined chimeric antigen receptor targeting cd19 and cd20 and application thereof
CA3209218A1 (en) * 2021-01-27 2022-08-04 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute Inc. Bi-specific car t cells for b cell malignancies
JP2024510739A (ja) * 2021-03-11 2024-03-11 バイオセプター （オースト） プロプライエタリー・リミテッド 新規な細胞治療システム
MX2023015028A (es) * 2021-09-01 2024-02-16 Biosceptre Aust Pty Ltd Nuevos aglutinantes del p2x7 disfuncional.

Also Published As

Publication number Publication date
US11253546B2 (en) 2022-02-22
SMT202500043T1 (it) 2025-03-12
LT3240805T (lt) 2025-03-10
EP3240805B1 (en) 2024-11-27
US12053491B2 (en) 2024-08-06
US20240261334A1 (en) 2024-08-08
US12226435B2 (en) 2025-02-18
US20250144144A1 (en) 2025-05-08
HRP20250129T1 (hr) 2025-04-11
PT3240805T (pt) 2025-01-28
PL3240805T3 (pl) 2025-05-05
EP3240805A1 (en) 2017-11-08
HUE070137T2 (hu) 2025-05-28
US20240293463A1 (en) 2024-09-05
EP3240805A4 (en) 2018-05-09
US20170368098A1 (en) 2017-12-28
US11160833B2 (en) 2021-11-02
US12233090B2 (en) 2025-02-25
CA3008162A1 (en) 2016-06-23
SI3240805T1 (sl) 2025-04-30
EP4400516A1 (en) 2024-07-17
US20220193136A1 (en) 2022-06-23
US20210145880A1 (en) 2021-05-20
EP4729532A2 (en) 2026-04-22
FI3240805T3 (fi) 2025-02-17
WO2016100232A1 (en) 2016-06-23
ES3008782T3 (en) 2025-03-25
DK3240805T3 (da) 2025-02-10
US20240024359A1 (en) 2024-01-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12233090B2 (en) Bispecific or-gate chimeric antigen receptor responsive to CD20 and CD19
ES2968880T3 (es) Receptor de antígeno quimérico (CAR) que se une a BCMA, y usos del mismo
JP6867347B2 (ja) 免疫療法のためのエンゲージャー細胞
US12059436B2 (en) BCMA-CAR-T cells
WO2017165683A1 (en) Cell secreted minibodies and uses thereof
CN110157738B (zh) 靶向cd19和cd22的工程化免疫细胞及其应用
US20230322894A1 (en) Methods and compositions for treating glioblastoma
KR20210021593A (ko) 다양한 구조 최적화를 갖는 t 세포-항원 커플러
WO2023173272A1 (zh) 靶向gprc5d的全人源嵌合抗原受体(car)及其应用
JP2021514188A (ja) Ｆｏｘｐ３標的因子組成物と養子細胞療法のための使用方法
HK40115184A (en) Bispecific or-gate chimeric antigen receptor responsive to cd19 and cd20
JP7820819B2 (ja) がんの処置のためのキメラ抗原受容体ならびに関連した方法および組成物
HK40079124A (en) Chimeric antigen receptors and related methods and compositions for the treatment of cancer
HK40001773A (en) Chimeric antigen receptors targeting fc receptor-like 5 and uses thereof