RS67759B1 - Prolek derivata pirolidona kao aktivator glukokinaze - Google Patents

Description

[0001] Opis

[0003] OBLAST PRONALASKA

[0005] Ovo otkriće se odnosi na prolekove derivata pirolidona kao aktivatora glukokinaze (GKA), njihove farmaceutske kompozicije i njihovu upotrebu u lečenju dijabetes melitusa i srodnih bolesti. Konkretnije, ovo otkriće se odnosi na derivate HMS5552, farmaceutske kompozicije koje ih sadrže i njihovu upotrebu u proizvodnji lekova za lečenje dijabetes melitusa i srodnih bolesti.

[0007] POZADINA PRONALASKA

[0009] Dijabetes melitus je postao rasprostranjena bolest širom sveta. Prema podacima sa 24. Nacionalne konferencije Kineskog društva za dijabetes (CDS), Kina ima najveću populaciju pacijenata sa dijabetesom u svetu, a oko 129,8 miliona odraslih ima dijabetes. Dijabetes tipa II, tj. insulin-nezavisan dijabetes melitus (NIDDM), koji obuhvata više od 90% pacijenata sa dijabetesom, je hiperglikemijska hronična metabolička disfunkcija koja nastaje usled neravnoteže homeostaze glukoze u krvi u ljudskom telu uzrokovane poremećajem lučenja insulina i insulinskom rezistencijom.

[0010] Glukokinaza (GK) igra centralnu ulogu u stabilizaciji ravnoteže glukoze u krvi u ljudskom telu. GK, koja deluje kao senzor glukoze u homeostazi glukoze u krvi, detektuje promene glukoze u krvi, reguliše lučenje hormona koji kontrolišu glukozu, insulina, glukagona i GLP-1, i predstavlja senzorski sistem za regulaciju homeostaze glukoze u krvi u ljudskom telu. GK se uglavnom distribuira u jetri, gde brzo pretvara glukozu u hepatični glikogen za skladištenje kao odgovor na povišen nivo glukoze u krvi, dok istovremeno snižava nivo glukoze u krvi. Rezerva glukoze tokom unosa glukoze i snabdevanje glukozom tokom posta, kontrolisani hormonima koji kontrolišu glukozu, predstavljaju regulaciju homeostaze glukoze u krvi u ljudskom telu.

[0011] [0004] Oštećena funkcija i ekspresija glukokinaze, kao i disfunkcija glukoznog senzora, dovode do disfunkcije rane faze sekrecije hormona koji kontrolišu glukozu, što utiče na unos i izlučivanje glukoze i rezultira postprandijalnom hiperglikemijom i preprandijalnom hipoglikemijom. Abnormalna signalizacija hormona koji kontrolišu glukozu uzrokuje abnormalne funkcije i ekspresiju ključnih proteina u sistemu izvršenja unosa i izlučivanja glukoze, formirajući abnormalno operativno stanje i dovodeći do dijabetesa tipa II.

[0012] Aktivatori glukokinaze su razvijeni protiv karakteristika GK kao ciljnog mesta, što može poboljšati funkciju sekrecije insulina, glukagona i GLP-1 za regulaciju glukoze povećavanjem osetljivosti α, β i L ćelija na promene koncentracije glukoze.

[0013] WO2009/127546A1 opisuje aktivatore glukokinaze pirolidonske serije, posebno [1-((R)-2,3-dihidroksi-propil)-1H-pirazol-3-il]-amida (S)-2-[4-(2-hloro-fenoksi)-2-okso-2,5-dihidro-pirol-1-il]-4-metil-pentanske kiseline, označen kao Dorzagliatin (ili HMS5552).

[0014] S obzirom na važnu ulogu aktivatora glukokinaze u regulaciji homeostaze glukoze u krvi u ljudskom telu, postoji potražnja za aktivatorima glukokinaze u ovoj oblasti.

[0016] REZIME PRONALASKA

[0018] Pronalazači ovog otkrića razvili su klasu jedinjenja koja su derivati HMS5552, mogu se efikasno pretvoriti (npr. podvrgnuti enzimskoj i/ili hemijskoj transformaciji) u HMS5552 in vivo (posebno u tankom crevu), i stoga se apsorbuju u cirkulatorni sistem kako bi se postigla svrha lečenja ili sprečavanja nekih bolesti metaboličkog sindroma. Alternativno, jedinjenja ovde opisana karakterišu se time što su stabilna u želudačnoj tečnosti i mogu se efikasno pretvoriti u HMS5552 u ćelijama creva i tankog creva. Pored toga, derivati HMS5552 ovde opisani imaju dobru fizičko-hemijsku stabilnost i rastvorljivost.

[0019] U jednom aspektu, pronalazak pruža jedinjenje formule (II-1), (II-2), (II-3) ili (II-4), ili izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:

[0022]

[0023]

[0025] ili

[0028]

[0030] pri čemu:

[0031] R<3>je izabran od C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila, koji je opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4 ili 5 R grupa;

[0032] R je nezavisno izabran od H, -L-halogena, -L-CN, -L-NO<2>, -L-OR<a>, -L-SR<a>, -L-NR<b>R<c>, - L-C(O)OR<a>, -L-C(O)NR<b>R<c>, -L-S(O)<m>OR<a>, -L-S(O)<m>NR<b>R<c>, C<1-6>alkila, C<1-6>haloalkila, C<2-6>alkenila, ili C<2-6>alkinila;

[0033] pri čemu, m je 1 ili 2;

[0034] R<a>je nezavisno izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila;

[0035] R<b>i R<c>su nezavisno izabrani od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila; alternativno, R<b>i R<c>zajedno sa atomom azota formiraju 3- do 7-člani heterociklil; i

[0036] L je izabran od hemijske veze, -C<1-6>alkilen-, -C<2-6>alkenilen-, ili -C<2-6>alkinilen-.

[0037] U sledećem aspektu, pronalazak pruža jedinjenje formule (III-1), (III-2), (III-3) ili (III-4), ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu, jedinjenje je:

[0040]

[0042] ili

[0045]

[0047] pri čemu:

[0048] R<9>je izabran od H, -L-halogena, -L-CN, -L-NO<2>, -L-OR<a>, -L-SR<a>, -L-NR<b>R<c>, -L-C(O)OR<a>, -L-C(O)NR<b>R<c>, -L-S(O)<m>OR<a>, -L-S(O)<m>NR<b>R<c>, C<1-6>alkila, C2-6 alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, 5- do 10-članog heteroarila ili bočnog lanca prirodne aminokiseline;

[0049] pri čemu, m je 1 ili 2;

[0050] R<a>je nezavisno izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila;

[0051] R<b>i R<c>su nezavisno izabrani od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila; alternativno, R<b>i R<c>zajedno sa atomom azota formiraju 3- do 7-člani heterociklil; i

[0052] L je izabran od hemijske veze, -C<1-6>alkilen-, -C<2-6>alkenilen-, ili -C<2-6>alkinilen-.

[0054] U sledećem aspektu, pronalazak pruža farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje pronalaska, ili izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereoizomer ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; i opciono jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.

[0055] U sledećem aspektu, pronalazak pruža jedinjenje pronalaska, ili izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereoizomer ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutsku kompoziciju pronalaska, za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanja jedne ili više bolesti izabranih od dijabetes melitusa tipa I, dijabetes melitusa tipa II, poremećene tolerancije na glukozu, poremećene glukoze u krvi pri gladovanju, hiperglikemije, postprandijalne hiperglikemije, prekomerne težine, gojaznosti, hipertenzije, insulinske rezistencije i metaboličkog sindroma, opciono pri čemu lečenje dijabetesa melitusa tipa I ili dijabetes melitusa tipa II sadrži lečenje dijabetesa, indukovanje remisije ili regresije dijabetesa.

[0057] DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0059] Definicije

[0061] Osim ako nije drugačije naznačeno, svi tehnički i naučni termini koji se ovde koriste imaju ista značenja kao što ih obično razumeju stručnjaci u oblasti kojoj ovo otkriće pripada, ali u slučaju sukoba, definicije u ovoj specifikaciji će imati prednost.

[0062] Kako se koriste u specifikaciji i zahtevima, oblici jednine „a“, „an“ i „the (navedeni)“ uključuju i oblike množine, osim ako nije drugačije naznačeno u kontekstu.

[0063] Sve numeričke vrednosti ili izrazi koji se odnose na količine komponenti korišćene u specifikaciji i zahtevima treba shvatiti kao modifikovane sa „oko“ u svim slučajevima. Termin „oko“ kada se odnosi na količinu ili numerički opseg znači da je količina ili numerički opseg na koji se odnosi približna vrednost u okviru eksperimentalne varijabilnosti (ili u okviru statističke eksperimentalne greške). Stoga, količina ili numerički opseg mogu varirati između, na primer, ±5% od količine ili numeričkog opsega na koji se odnosi.

[0064] Kada je naveden opseg vrednosti, namera je da se obuhvati svaka vrednost i podopseg unutar opsega. Na primer,

alkil" treba da obuhvati C<1>, C<2>, C<3>, C<4>, C<5>, C<6>, C<1-6>, C<1-5>, C<1-4>, C<1-3>, C<1-2>, C<2-6>, C<2-5>, C<2-4>, C<2-3>, C<3-6>, C<3-5>, C<3-4>, C<4-6>, C<4-5>i C<5-6>alkil.

[0065] alkil“ se odnosi na radikal prave ili razgranate, zasićene ugljovodonične grupe koja ima 1 do 6 atoma ugljenika. U nekim primerima izvođenja, C<1-4>alkil je alternativa. Primeri C<1->

[0066] <6>alkil uključuju metil (C<1>), etil (C<2>), n-propil (C<3>), izo-propil (C<3>), n-butil (C<4>), terc-butil (C<4>), sek-butil (C<4>), izo-butil (C<4>), n-pentil (C<5>), 3-pentil (C<5>), pentil (C<5>), neopentil (C<5>), 3-metil-2-butil (C<5>), terc-pentil (C<5>) i n-heksil (C<6>). Termin

alkil“ takođe uključuje heteroalkil, pri čemu su jedan ili više (npr. 1, 2, 3 ili 4) atoma ugljenika supstituisani heteroatomima (npr. kiseonikom, sumporom, azotom, borom, silicijumom, fosforom). Alkil grupe mogu biti opciono supstituisane jednim ili više supstituenata, na primer, sa 1 do 5 supstituenata, 1 do 3 supstituenta ili 1 supstituentom. Konvencionalne skraćenice za alkil uključuju Me (-CH<3>), Et (-CH<2>CH<3>), iPr (-CH(CH<3>)<2>), nPr (-CH<2>CH<2>CH<3>), n-Bu (-CH<2>CH<2>CH<2>CH<3>) ili i-Bu (-CH<2>CH(CH<3>)<2>).

[0067] se odnosi na radikal prave ili razgranate ugljovodonične grupe koja ima 2 do 6 atoma ugljenika i najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik. U nekim primerima izvođenja, C<2-4>alkenil je alternativa. Primeri C<2-6>alkenila uključuju vinil (C<2>), 1-propenil (C<3>), 2-propenil (C<3>), 1-butenil (C<4>), 2-butenil (C<4>), butadienil (C<4>), pentenil (C<5>), pentadienil (C<5>), heksenil (C<6>), itd. Termin

alkenil“ takođe uključuje heteroalkenil, pri čemu su jedan ili više (npr.1, 2, 3 ili 4) atoma ugljenika zamenjeni heteroatomima (npr. kiseonikom, sumporom, azotom, borom, silicijumom, fosforom). Alkenil grupe mogu biti opciono supstituisane jednim ili više supstituenata, na primer, sa 1 do 5 supstituenata, 1 do 3 supstituenta ili 1 supstituentom.

[0068] alkinil“ se odnosi na radikal prave ili razgranate ugljovodonične grupe koja ima 2 do 6 atoma ugljenika, najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik i opciono jednu ili više dvostrukih veza ugljenik-ugljenik. U nekim primerima izvođenja, C<2-4>alkinil je alternativa. Primeri C<2-6>alkinila uključuju, ali nisu ograničeni na, etinil (C<2>), 1-propinil (C<3>), 2-propinil (C<3>), 1-butinil (C<4>), 2-butinil (C<4>), pentinil (C<5>), heksinil (C<6>), itd. Termin „C<2-6>alkinil“ takođe uključuje heteroalkinil, pri čemu su jedan ili više (npr.1, 2, 3 ili 4) atoma ugljenika zamenjeni heteroatomima (npr. kiseonikom, sumporom, azotom, borom, silicijumom, fosforom). Alkinil grupe mogu biti supstituisane jednim ili više supstituenata, na primer, sa 1 do 5 supstituenata, 1 do 3 supstituenta ili 1 supstituentom.

[0069] alkilen, C<2-6>alkenilen ili C<2-6>alkinilen“ se odnosi na dvovalentnu grupu „C<1-6>alkil, C<2-6>alkenil ili C<2-6>alkinil“ kao što su gore definisane.

[0070] alkilen“ se odnosi na dvovalentnu grupu formiranu uklanjanjem drugog vodonika iz C<1-6>alkila, i može biti supstituisan ili nesupstituisan. U nekim primerima izvođenja, C<1-4>alkilen je još uvek alternativa. Nesupstituisane alkilenske grupe uključuju, ali nisu ograničene na, metilen (-CH<2>-), etilen (-CH<2>CH<2>-), propilen (-CH<2>CH<2>CH<2>-), butilen (-CH<2>CH<2>CH<2>CH<2>-), pentilen (-CH<2>CH<2>CH<2>CH<2>CH<2>-), heksilen (-CH<2>CH<2>CH<2>CH<2>CH<2>CH<2>-), itd. Primeri supstituisanih alkilenskih grupa, kao što su one supstituisane sa jednom ili više alkil (metil) grupa, uključuju, ali nisu ograničeni na, supstituisani metilen (-CH(CH<3>)-, -C(CH<3>)<2>-), supstituisani etilen (-CH(CH<3>)CH<2>-, -CH<2>CH(CH<3>)-, -C(CH<3>)<2>CH<2>-, -CH<2>C(CH)<3>)<2>-), supstituisani propilen (-CH(CH<3>)CH<2>CH<2>-, -CH<2>CH(CH<3>)CH<2>-, -CH<2>CH<2>CH(CH<3>)-, -C(CH<3>)<2>CH<2>CH<2>-, -CH<2>C(CH)<3>)<2>CH<2>-, -CH<2>CH<2>C(CH)<3>)<2>-), itd.

[0071] alkenilen" se odnosi na C<2-6>alkenil grupu gde je drugi vodonik uklonjen da bi se dobio dvovalentni radikal alkenilena, i koji može biti supstituisan ili nesupstituisan. U nekim primerima izvođenja, C<2-4>alkenilen je još uvek alternativa. Primeri nesupstituisanih alkenilen grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, etenilen (-CH=CH-) i propenilen (npr. - CH=CHCH<2>-, -CH<2>-CH=CH-). Primeri supstituisanih alkenilen grupa, npr. supstituisanih sa jednom ili više alkil (metil) grupa, uključuju, ali nisu ograničeni na, supstituisani etenilen (-C(CH<3>)=CH-, -CH=C(CH<3>)-), supstituisani propenilen (npr. -C(CH<3>)=CHCH<2>-, -CH=C(CH<3>)CH<2>-, -CH=CHCH(CH<3>)-, -CH=CHC(CH<3>)<2>-, -CH(CH<3>)-CH=CH-, -C(CH<3>)<2>-CH=CH-, -CH<2>-C(CH<3>)=CH-, -CH<2>-CH=C(CH<3>)-), i slično.

[0072] alkinilen“ se odnosi na C<2-6>alkinil grupu gde je drugi vodonik uklonjen da bi se dobio dvovalentni radikal alkinilena, i koja može biti supstituisana ili nesupstituisana. U nekim primerima izvođenja, C<2-4>alkinilen je još uvek alternativa. Primeri alkinilen grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, etinilen (-C≡C-), supstituisani ili nesupstituisani propinilen (-C≡CCH<2>-), i slično.

[0073] „Halo“ ili „halogen“ se odnosi na fluor (F), hlor (Cl), brom (Br) i jod (I).

[0074] Dakle,

„haloalkil“ se odnosi na gore navedeni

alkil", koji je supstituisan jednim ili više halogena. U nekim primerima izvođenja, C<1-4>haloalkil je još uvek alternativa, i još uvek alternativno C<1-2>haloalkil. Primeri haloalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -CF<3>, -CH<2>F, -CHF<2>, -CHFCH<2>F, -CH<2>CHF<2>, -CF<2>CF<3>, -CCl<3>, -CH<2>Cl, -CHCl<2>, 2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil i slično. Haloalkil može biti supstituisan na bilo kojoj dostupnoj tački vezivanja, na primer, sa 1 do 5 supstituenata, 1 do 3 supstituenta ili 1 supstituentom.

[0075] [0026] C<3-10>„cikloalkil“ se odnosi na radikal nearomatične ciklične ugljovodonične grupe koja ima od 3 do 10 atoma ugljenika u prstenu i nula heteroatoma. U nekim primerima izvođenja, C<3-7>cikloalkil i C<3-6>cikloalkili su i dalje alternativni, i još uvek alternativno C<5-6>cikloalkil. Cikloalkil takođe uključuje sistem prstena u kome je cikloalkil opisan ovde spojen sa jednom ili više aril ili heteroaril grupa, gde je tačka vezivanja na cikloalkil prstenu, i u tom slučaju, broj atoma ugljenika nastavlja da predstavlja broj atoma ugljenika u cikloalkil sistemu. Primeri cikloalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropil (C<3>), ciklopropenil (C<3>), ciklobutil (C<4>), ciklobutenil (C<4>), ciklopentil (Cs), ciklopentenil (Cs), cikloheksil (C<6>), cikloheksenil (C<6>), cikloheksadienil (C<6>), cikloheptil (C<7>), cikloheptenil (C<7>), cikloheptadienil (C<7>), cikloheptatrienil (C<7>), itd. Cikloalkil može biti supstituisan jednim ili više supstituenata, na primer, sa 1 do 5 supstituenata, 1 do 3 supstituenta ili 1 supstituentom.

[0076] „C<3-10>halocikloalkil" se odnosi na gore navedeni „C<3-10>cikloalkil", koji je supstituisan jednim ili više halogena.

[0077] [0028] „3- do 12-člani heterociklil“ odnosi se na radikal 3- do 12-članog nearomatičnog prstenastog sistema koji ima atome ugljenika u prstenu i 1 do 5 heteroatoma u prstenu, pri čemu je svaki od heteroatoma nezavisno izabran od azota, kiseonika, sumpora, bora, fosfora i silicijuma. U heterociklilu koji sadrži jedan ili više atoma azota, tačka vezivanja može biti atom ugljenika ili azota, sve dok valenca dozvoljava. U nekim primerima izvođenja, alternativa je 4-do 12-člani heterociklil, koji je radikal 4- do 12-članog nearomatičnog prstenastog sistema koji ima atome ugljenika u prstenu i 1 do 5 heteroatoma u prstenu. U nekim primerima izvođenja, alternativa je 3- do 10-člani heterociklil, koji je radikal 3- do 10-članog nearomatičnog prstenastog sistema koji ima atome ugljenika u prstenu i 1 do 5 heteroatoma u prstenu. U nekim primerima izvođenja, alternativa je 3- do 7-člani heterociklil, koji je radikal 3- do 7 članog nearomatičnog prstenastog sistema koji ima atome ugljenika u prstenu i 1 do 4 heteroatoma u prstenu. Alternativno je 3- do 6-člani heterociklil, koji je radikal 3- do 6-članog nearomatičnog prstenastog sistema koji ima atome ugljenika u prstenu i 1 do 3 heteroatoma u prstenu. Alternativno je 4- do 8-člani heterociklil, koji radikal 4- do 8 članog nearomatičnog prstenastog sistema koji ima atome ugljenika u prstenu i 1 do 3 heteroatoma u prstenu. Alternativno je 5-do 6-člani heterociklil, koji je radikal 5- do 6 članog nearomatičnog prstenastog sistema koji ima atome ugljenika u prstenu i 1 do 3 heteroatoma u prstenu. Heterociklil takođe uključuje sistem prstena gde je gore opisani heterociklil kondenzovan sa jednom ili više cikloalkil grupa, gde je tačka vezivanja na cikloalkil prstenu, ili je gore opisani heterociklil kondenzovan sa jednom ili više aril ili heteroaril grupa, gde je tačka vezivanja na heterociklil prstenu; i u takvim slučajevima, broj članova prstena nastavlja da predstavlja broj članova prstena u heterociklil sistemu prstena. Primeri 3-članih heterociklil grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, ali nisu ograničene na, aziridinil, oksiranil i tiorenil. Primeri 4-članih heterociklil grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, ali nisu ograničene na, azetidinil, oksetanil i tietanil. Primeri 5-članih heterociklil grupa koj sadrže jedan heteroatom uključuju, ali nisu ograničeni na, tetrahidrofuranil, dihidrofuranil, tetrahidrotiofenil, dihidrotienil, pirolidinil, dihidropirolil i pirolil-2,5-dion. Primeri 5-članih heterociklil grupa koje sadrže dva heteroatoma uključuju, ali nisu ograničeni na, dioksolanil, oksasulfuranil, disulfuranil i oksazolidin-2-on. Primeri 5-članih heterociklil grupa koje sadrže tri heteroatoma uključuju, ali nisu ograničeni na, triazolinil, oksadiazolinil i tiadiazolinil. Primeri 6-članih heterociklil grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, ali nisu ograničeni na, piperidil, tetrahidropiranil, dihidropiridil i tianil. Primeri 6-članih heterocikličnih grupa koje sadrže dva heteroatoma uključuju, ali nisu ograničene na, piperazinil, morfolinil, ditianil i dioksanil. Primeri 6-članih heterocikličnih grupa koje sadrže tri heteroatoma uključuju, ali nisu ograničene na, triazinanil. Primeri 7-članih heterocikličnih grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, ali nisu ograničene na, azepanil, oksepanil i tiepanil. Primeri 5-članih heterocikličnih grupa kondenzovanih sa C<6>aril (ovde se naziva i 5,6-biciklični heterociklil) uključuju, ali nisu ograničeni na, indolinil, izoindolinil, dihidrobenzofuranil, dihidrobenzotiofenil, benzoksazolinonil, itd. Primeri 6-članih heterocikličnih grupa spojenih sa C<6>arilom (ovde se naziva i 6,6-biciklični heterociklil) uključuju, ali nisu ograničeni na, tetrahidrohinolinil, tetrahidroizohinolinil, itd. Heterociklil može biti supstituisan jednim ili više supstituenata, na primer, sa 1 do 5 supstituenata, 1 do 3 supstituenta ili 1 supstituentom.

[0078] aril“ se odnosi na radikal monocikličnog ili policikličnog (npr. bicikličnog) 4n+2 aromatičnog prstenastog sistema koji ima 6-10 atoma ugljenika u prstenu i nula heteroatoma (npr., sa 6 ili 10 zajedničkih π elektrona u cikličnom nizu). U nekim primerima izvođenja, aril grupa ima šest atoma ugljenika u prstenu

aril"; na primer, fenil). U nekim primerima izvođenja, aril grupa ima deset atoma ugljenika u prstenu („C<10>aril"; na primer, naftil, npr.1-naftil i 2-naftil). Aril grupa takođe uključuje sistem prstena u kome je gore opisani aril prsten spojen sa jednom ili više cikloalkil ili heterociklil grupa, a tačka vezivanja je na aril prstenu, u kom slučaju broj atoma ugljenika nastavlja da predstavlja broj atoma ugljenika u sistemu aril prstena. Aril može biti supstituisan jednim ili više supstituenata, na primer, sa 1 do 5 supstituenata, 1 do 3 supstituenta ili 1 supstituentom.

[0079] „5- do 10-člani heteroaril“ odnosi se na radikal 5- do 10-članog monocikličnog ili bicikličnog 4n+2 aromatičnog prstenastog sistema (npr., sa 6 ili 10 zajedničkih π elektrona u cikličnom nizu) koji ima atome ugljenika u prstenu i 1-4 heteroatoma u prstenu, pri čemu je svaki heteroatom nezavisno izabran iz azota, kiseonika i sumpora. U heteroaril grupi koja sadrži jedan ili više atoma azota, tačka vezivanja može biti atom ugljenika ili azota sve dok valenca dozvoljava. Heteroaril biciklični sistemi mogu da uključuju jedan ili više heteroatoma u jednom ili dva prstena. Heteroaril takođe uključuje prstenaste sisteme gde je heteroarilni prsten opisan gore spojen sa jednom ili više cikloalkil ili heterociklil grupa, a tačka vezivanja je na

[0082] 1

[0083] heteroarilnom prstenu. U tom slučaju, broj atoma ugljenika nastavlja da predstavlja broj atoma ugljenika u heteroarilnom prstenastom sistemu. U nekim primerima izvođenja, alternativa su i 5- do 6-člane heteroaril grupe, koje su radikali 5- do 6-članih monocikličnih ili bicikličnih 4n+2 aromatičnih prstenastih sistema sa atomima ugljenika u prstenu i 1-4 heteroatoma u prstenu. Primeri 5-članih heteroaril grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, ali nisu ograničeni na, pirolil, furil i tienil. Primeri 5-članih heteroaril grupa koje sadrže dva heteroatoma uključuju, ali nisu ograničeni na, imidazolil, pirazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil i izotiazolil. Primeri 5-članih heteroaril grupa koje sadrže tri heteroatoma uključuju, ali nisu ograničeni na, triazolil, oksadiazolil (kao što je 1,2,4-oksadiazolil) i tiadiazolil. Primeri 5-članih heteroaril grupa koje sadrže četiri heteroatoma uključuju, ali nisu ograničeni na, tetrazolil. Primeri 6-članih heteroaril grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, ali nisu ograničeni na, piridil. Primeri 6-članih heteroaril grupa koje sadrže dva heteroatoma uključuju, ali nisu ograničeni na, piridazinil, pirimidinil i pirazinil. Primeri 6-članih heteroaril grupa koje sadrže tri ili četiri heteroatoma uključuju, ali nisu ograničeni na, triazinil i tetrazinil, respektivno. Primeri 7-članih heteroaril grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, ali nisu ograničeni na, azepinil, oksepinil i tiepinil. Primeri 5,6-bicikličnih heteroaril grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, indolil, izoindolil, indazolil, benzotriazolil, benzotiofenil, izobenzotiofenil, benzofuranil, benzoizofuranil, benzimidazolil, benzoksazolil, benzoizooksazolil, benzoksadiazolil, benzotiazolil, benzoizotiazolil, benzotiadiazolil, indolizinil i purinil. Primeri 6,6-bicikličnih heteroaril grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, naftiridinil, pteridinil, hinolil, izohinolil, cinolinil, hinoksalinil, ftalazinil i kinazolinil. Heteroaril može biti supstituisan jednim ili više supstituenata, na primer, sa 1 do 5 supstituenata, 1 do 3 supstituenta ili 1 supstituentom.

[0084] Alternativno, specifični primeri heteroaril grupa uključuju: pirolil, imidazolil, pirazolil, 2-piridil, 3-piridil, 4-piridil, pirimidinil, pirazinil, piridazinil, triazolil (4H-1,2,4-triazolil, 1H-1,2,3-triazolil, 2H-1,2,3-triazolil), piranil, 2-furanil, 3-furanil, itd., 2-tienil, 3-tienil, oksazolil, izoksazolil, oksadiazolil (1,2,4-oksazolil, 1,3,4-oksazolil, 1,2,5-oksazolil), tiazolil, tiadiazolil (1,2,4-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil), triazinil ili tetrazinil.

[0085] Termin „prirodna aminokiselina“ je osnovna strukturna jedinica proteina, koja je osnova za kasniju modifikaciju proteina od strane organizama. Ukupno postoji 20 vrsta prirodnih aminokiselina. Pored toga, na osnovu ovih osnovnih aminokiselina, organizmi mogu da sintetišu i neke vrste izvedenih aminokiselina kao što su hidroksiprolin, hidroksilizin i slično. Kod svitaca se može sintetizovati čak i D-oblik aminokiseline. Ove biosintetske aminokiseline se zajednički nazivaju „prirodne aminokiseline“. Prirodne aminokiseline su uglavnom L-oblik.

[0086] 20 najčešćih prirodnih aminokiselina prikazano je u tabeli ispod:

[0087]

[0090] [0033] Kako se koristi u ovoj specifikaciji i u zahtevima, „i/ili“ treba shvatiti kao „jedan ili oba“ od povezanih elemenata, tj. elementi postoje zajedno u nekim slučajevima, a odvojeno u drugim slučajevima. Višestruke elemente navedene sa „i/ili“ treba tumačiti na isti način, tj. „jedan ili više“ povezanih elemenata. Pored elemenata posebno identifikovanih klauzulom „i/ili“, mogu opciono postojati i drugi elementi, bilo da su povezani ili ne sa tim posebno identifikovanim elementima. Stoga, kao neograničavajući primer, referenca na „A i/ili B“, kada se koristi u kombinaciji sa otvorenim jezikom kao što je „koji sadrži“, može se odnositi, u jednom primeru izvođenja, samo na A (opciono uključujući elemente osim B); u sledećem primeru izvođenja, samo na B (opciono uključujući elemente osim A); u još jednom primeru izvođenja, i na A i na B (opciono uključujući druge elemente); itd.

[0091] Skraćenice koje se ovde koriste imaju svoja uobičajena značenja u oblastima hemije, biologije i formulacije.

[0092] Jedinjenja formule (I) ovog otkrića sadrže jedan ili više asimetričnih centara i stoga mogu postojati u različitim stereoizomernim oblicima, npr. enantiomernim i/ili dijastereomernim oblicima. Na primer, jedinjenja ovog otkrića mogu biti pojedinačni enantiomeri, dijastereomeri ili geometrijski izomeri (kao što su cis i trans izomeri), ili mogu biti u obliku smeša stereoizomera koje sadrže racemske smeše i smeše obogaćene jednim ili više stereoizomera. Izomeri se mogu odvojiti iz smeša postupcima poznatim stručnjacima u ovoj oblasti, uključujući hiralnu tečnu hromatografiju visokog pritiska (HPLC) i formiranje i kristalizaciju hiralnih soli; ili se alternativni izomeri mogu pripremiti asimetričnom sintezom.

[0093] Ovo otkriće takođe sadrži jedinjenja koja su obeležena izotopima, koji su ekvivalentni proleku, ali jedan ili više atoma su zamenjeni atomima koji imaju atomsku masu ili maseni broj koji se razlikuju od atoma koji su uobičajeni u prirodi. Primeri izotopa koji se mogu uvesti u jedinjenja ovog otkrića uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, sumpora, fluora i hlora, kao što su<2>H,<3>H,<13>C,<11>C,<14>C,<15>N,<18>O,<17>O,<31>P,<32>P,<35>S,<18>F i<36>Cl, respektivno. Jedinjenja ovog otkrića koja sadrže gore navedene izotope i/ili druge izotope drugih atoma, njihovi prolekovi i farmaceutski prihvatljive soli navedenih jedinjenja ili prolekova su u okviru ovog otkrića. Određena jedinjenja obeležena izotopima ovog otkrića, kao što su ona koja uključuju radioaktivne izotope (npr.,<3>H i<14>C), mogu se koristiti za merenje distribucije leka i/ili supstrata u tkivu. Tricijum, koji je<3>H i ugljenik-14, koji je<14>C izotop, su ipak alternativa, jer se lako pripremaju i detektuju. Pored toga, zamenjeni su težim izotopima, kao što je deuterijum, koji je<2>H, može pružiti terapeutske koristi zbog veće metaboličke stabilnosti, kao što je produženje poluživota in vivo ili smanjenje potrebnih doza, i stoga može biti alternativa u nekim slučajevima. Jedinjenja formule (I) obeležena izotopima ovog otkrića mogu se generalno pripremiti korišćenjem lako dostupnih reagensa obeleženih izotopima za zamenu reagensa koji nisu obeleženi izotopima u sledećim šemama i/ili postupcima opisanim u primerima i primerima pripreme.

[0094] Pod „farmaceutski dostupnim“ ili „farmaceutski prihvatljivim“ podrazumeva se materijal koji nije biološki ili na drugi način nepoželjan, tj. materijal se može primeniti kod

[0097] 1

[0098] individue bez izazivanja bilo kakvih nepoželjnih bioloških efekata ili štetne interakcije sa bilo kojom drugom komponentom kompozicije koja sadrži taj materijal.

[0099] Termin „farmaceutski prihvatljiva so“ odnosi se na so koja ne iritira značajno organizam i zadržava biološku aktivnost i svojstva jedinjenja.

[0100] Termin „farmaceutski prihvatljiv nosač“ odnosi se na neaktivni sastojak koji ne iritira značajno organizam i ne ukida biološku aktivnost i svojstva primenjenog jedinjenja. Kako se ovde koristi, „nosač“ i „pomoćna supstanca“ imaju isto značenje.

[0101] Termin „terapeutski efikasna količina“ odnosi se na količinu sredstva dovoljnu da obezbedi željeni biološki rezultat. Rezultat može biti smanjenje i/ili ublažavanje znaka, simptoma ili uzroka bolesti, ili bilo koja druga željena promena biološkog sistema. Na primer, „terapeutski efikasna količina“ za terapeutsku upotrebu odnosi se na neophodnu količinu kompozicije koja sadrži jedinjenje ovde opisano kao aktivni sastojak za obezbeđivanje klinički značajnog smanjenja bolesti. U svakom pojedinačnom slučaju, odgovarajuću „terapeutski efikasnu količinu“ može odrediti stručnjak u ovoj oblasti korišćenjem rutinskog eksperimentisanja. Dakle, izraz „terapeutski efikasna količina“ generalno se odnosi na količinu aktivne supstance pri kojoj ona ima terapeutski efekat.

[0102] Kako se ovde koristi, termin „lečiti/tretirati“ je sinonim za termine „sprečiti“ i „ublažiti“ i namenjen je da znači odlaganje progresije bolesti, sprečavanje progresije bolesti i/ili smanjenje težine simptoma koji će se razviti ili se očekuje da će se razviti. Dakle, ovi termini uključuju ublažavanje postojećih simptoma bolesti, sprečavanje dodatnih simptoma, ublažavanje ili sprečavanje osnovnih metaboličkih uzroka simptoma, inhibiranje poremećaja ili bolesti, npr. sprečavanje razvoja poremećaja ili bolesti, ublažavanje poremećaja ili bolesti, izazivanje regresije poremećaja ili bolesti, ublažavanje stanja izazvanog bolešću ili poremećajem ili zaustavljanje simptoma bolesti ili poremećaja.

[0103] Kako se ovde koristi, termin „subjekt“ obuhvata sisare i nesisare. Primeri sisara uključuju, ali nisu ograničeni na, bilo kog člana klase sisara: ljude, primate koji nisu ljudi kao što su šimpanze i druge vrste čovekolikih majmuna i majmuna; domaće životinje kao što su goveda, konji, ovce, koze, svinje; domaće životinje kao što su zečevi, psi i mačke; laboratorijske životinje uključujući glodare, kao što su pacovi, miševi i zamorci i slično. Primeri nesisara uključuju, ali nisu ograničeni na, ptice, ribe i slično. U jednom primeru izvođenja ovog otkrića, sisar je čovek. Termin „subjekt“ uključuje potvrđenog pacijenta, ali „subjekt“ ne mora imati nikakav poseban identitet za bolnicu, kliniku ili istraživačku ustanovu (npr. kao potvrđeni pacijent, učesnik studije itd.).

[0104] KRATAK OPIS CRTEŽA

[0106]

[0107] Slika 1 je grafikon koji prikazuje poređenje preostale brzine / brzine generisanja - vremena inkubacije jedinjenja 3 i HMS5552 u veštačkom simuliranom želudačnom soku.

[0108] Slika 2 je grafikon koji prikazuje poređenje preostale brzine / brzine generisanja - vremena inkubacije jedinjenja 7 i HMS5552 u veštačkom simuliranom želudačnom soku.

[0109] Slika 3 je grafikon koji prikazuje poređenje preostale brzine / brzine generisanja - vremena inkubacije jedinjenja 3 i HMS5552 u veštačkom simuliranom želudačnom soku.

[0110] Slika 4 je grafikon koji prikazuje poređenje preostale brzine / brzine generisanja - vremena inkubacije jedinjenja 7 i HMS5552 u veštačkom simuliranom želudačnom soku.

[0111] Slika 5 je grafikon koji prikazuje krivu zavisnosti glukoze u krvi od OGTT u odnosu na vreme i AUC<0-120 min>upoređivanjem HMS5552, jedinjenja 3, jedinjenja 6 i jedinjenja 7 kod C57BL/6J miševa. Na grafikonu, * označava P<0,05 i ** označava P<0,01, u poređenju sa kontrolnom grupom koja je primala nosač; a # označava P<0,05 i ## označava P<0,01, u poređenju sa odgovarajućom grupom koja je primala HMS5552.

[0112] Slika 6 je grafikon koji prikazuje nivoe insulina (0 min i 15 min) upoređujući HMS5552, jedinjenje 3, jedinjenje 6 i jedinjenje 7 kod C57BL/6J miševa. Na grafikonu, * označava P<0,05 i ** označava P<0,01, u poređenju sa kontrolnom grupom koja je primala nosač; a # označava P<0,05 i ## označava P<0,01, u poređenju sa odgovarajućom grupom koja je primala HMS5552.

[0114] DETALJNI PRIMERI IZVOĐENJA

[0116] Ovde je otkriveno jedinjenje formule (I), ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljiva so:

[0119]

[0121] pri čemu

[0122] * označava hiralni centar,

[0125] 1

[0126] R<1>je izabran od H, -C(O)R<6>, -C(O)OR<6>, -C(O)NR<7>R<8>, -S(O)<m>R<6>, -S(O)<m>OR<6>, ili - S(O)<m>NR<7>R<8>; R<2>je izabran od -C(O)R<3>, -C(O)OR<3>, -C(O)NR<4>R<5>, -S(O)<m>R<3>, -S(O)<m>OR<3>, ili -S(O)<m>NR<4>R<5>; ili R<1>i R<2>su povezani tako da formiraju -CHR<d>-, -SiR<d>R<e>-, -C(O)-, -S(O)<1-2>-, -P(O)OR<d>- ili -CR<d>R<e>-CR<d>R<e>-;

[0127] R<3>je nezavisno izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila, koji je opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4 ili 5 R grupa;

[0128] R<4>i R<5>su nezavisno izabrani od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, ili C<1-6>haloalkila; alternativno, R<4>i R<5>zajedno sa atomom azota formiraju 3- do 7-člani heterociklil;

[0129] R<6>je nezavisno izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, ili C<1-6>haloalkila;

[0130] R<7>i R<8>su nezavisno izabrani od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, ili C<1-6>haloalkila; alternativno, R<7>i R<8>zajedno sa atomom azota formiraju 3- do 7-člani heterociklil;

[0131] R je nezavisno izabran od H, -L-halogena, -L-CN, -L-NO<2>, -L-OR<a>, -L-SR<a>, -L-NR<b>R<c>, -L-C(O)OR<a>, -L-C(O)NR<b>R<c>, -L-S(O)<m>OR<a>, -L-S(O)<m>NR<b>R<c>, C<1-6>alkila, C<1-6>haloalkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, 5- do 10-članog heteroarila ili bočnog lanca prirodne aminokiseline;

[0132] pri čemu, m je 1 ili 2;

[0133] R<a>je nezavisno izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila;

[0134] R<b>i R<c>su nezavisno izabrani od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila; alternativno, R<b>i R<c>zajedno sa atomom azota formiraju 3- do 7-člani heterociklil;

[0135] R<d>i R<e>su nezavisno izabrani od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, ili C<1-6>haloalkila; alternativno, R<d>i R<e>zajedno sa atomom C formiraju =O, =S, C<3-7>cikloalkila, ili 3- do 7-članog heterociklila;

[0136] L je izabran od hemijske veze, -C<1-6>alkilen-, -C<2-6>alkenilen-, ili -C<2-6>alkinilen-.

[0138] U sledećem primeru, ovo otkriće se odnosi na gore pomenuto jedinjenje ili njegov izotopski obeleženi proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu je jedinjenje ima sledeće strukture:

[0141] 1

[0142]

[0144] ili

[0147]

[0149] pri čemu

[0150] R<1>je izabran od H, -C(O)R<6>, -C(O)OR<6>, ili -C(O)NR<7>R<8>;

[0151] R<2>je izabran od -C(O)R<3>, -C(O)OR<3>, ili -C(O)NR<4>R<5>;

[0152] ili R<1>i R<2>su povezani tako da fomiraju -SiR<d>R<e>-, -C(O)-, -S(O)<1-2>-, -P(O)OR<d>- ili -CR<d>R<e>-CR<d>R<e>-;

[0153] R<3>je nezavisno izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, ili C<1-6>haloalkila;

[0154] R<4>i R<5>su nezavisno izabrani od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, ili C<1-6>haloalkila; alternativno, R<4>i R<5>zajedno sa atomom azota formiraju 3- do 7-člani heterociklil;

[0155] R<6>je nezavisno izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, ili C<1-6>haloalkila;

[0158] 1

[0159] R<7>i R<8>su nezavisno izabrani od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, ili C<1-6>haloalkila; alternativno, R<7>i R<8>zajedno sa atomom azota formiraju 3- do 7-člani heterociklil;

[0160] R<d>i R<e>su nezavisno izabrani od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, ili C<1-6>haloalkila; alternativno, R<d>i R<e>zajedno sa atomom C formiraju =O, =S, C<3-7>cikloalkil ili 3- do 7-člani heterociklil.

[0162] U sledećem primeru, ovo otkriće se odnosi na gore pomenuto jedinjenje ili njegov izotopski obeleženi proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu

[0163] R<1>je izabran od H, -COMe ili -COOEt,

[0164] R<2>je izabran od -COMe, -COOEt ili -CONHMe;

[0165] ili R<1>i R<2>su povezani tako da formiraju -CHMe-, -SiMe<2>-, -C(O)-, -S(O)<1-2>-, ili -P(O)OEt-.

[0167] Pronalazak pruža jedinjenje formule (II-1), (II-2), (II-3) ili (II-4), ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu, jedinjenje je sledećih struktura:

[0170]

[0174] 1

[0175] ili

[0178]

[0180] pri čemu

[0181] R<3>je izabran od C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila, koji je opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4 ili 5 R grupa;

[0182] R je nezavisno izabran od H, -L-halogena, -L-CN, -L-NO<2>, -L-OR<a>, -L-SR<a>, -L-NR<b>R<c>, -L-C(O)OR<a>, -L-C(O)NR<b>R<c>, -L-S(O)<m>OR<a>, -L-S(O)<m>NR<b>R<c>, C<1-6>alkila, C<1-6>haloalkila, C<2-6>alkenila, ili C<2-6>alkinila;

[0183] pri čemu, m je 1 ili 2;

[0184] R<a>je nezavisno izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-člani heteroarila;

[0185] R<b>i R<c>su nezavisno izabrani of H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila; alternativno, R<b>i R<c>zajedno sa atomom azota formiraju 3- do 7-člani heterociklil;

[0186] L je izabran od hemijske veze, -C<1-6>alkilen-, -C<2-6>alkenilen-, ili -C<2-6>alkinilen-.

[0188] U sledećem primeru izvođenja, ovaj pronalazak se odnosi na gore pomenuto jedinjenje ili njegov izotopski obeleženi proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu

[0189] R<3>je izabran od C<6-10>arila ili 5- do 6-članog heteroarila, koji je opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4 ili 5 R grupa;

[0190] R je nezavisno izabran od H, halogena, -CN, -NO<2>, -OH, -SH, -NH<2>, -C(O)OH, -C(O)NH<2>, -S(O)<m>OH, -S(O)<m>NH<2>, C<1-6>alkila, C<1-6>haloalkila, C<2-6>alkenila, ili C<2-6>alkinila;

[0191] pri čemu, m je 1 ili 2.

[0193] U sledećem primeru izvođenja, ovaj pronalazak se odnosi na gore pomenuto jedinjenje ili njegov izotopski obeleženi proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu

[0196] 1

[0197] R<3>je izabran od fenila, naftila, pirolila, furila, tienila, imidazolila, pirazolila, oksazolila, izoksazolila, tiazolila, izotiazolila, triazolila, oksadiazolila, tiadiazolila, tetrazolila, piridila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, triazinila ili tetrazinila, koji je opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4 ili 5 R grupa;

[0198] R je nezavisno izabran od H, halogena, -CN, -NO<2>, -OH, -SH, -NH<2>, -C(O)OH, -C(O)NH<2>, -S(O)<m>OH, ili -S(O)<m>NH<2>;

[0199] pri čemu, m je 1 ili 2.

[0201] U sledećem primeru izvođenja, ovaj pronalazak se odnosi na gore pomenuto jedinjenje ili njegov izotopski obeleženi proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu

[0202] R<3>je izabran od fenila, piridila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, triazinila ili tetrazinila, koji je opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 R grupe;

[0203] R je nezavisno izabran od H, halogena, -CN, -NO<2>, -OH, -SH ili -NH<2>.

[0205] Pronalazak dalje pruža jedinjenje formule (III-1), (III-2), (III-3) ili (III-4), ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu, jedinjenje je sledećih struktura:

[0208]

[0212] 2

[0213]

[0215] ili

[0218]

[0220] pri čemu

[0221] R<9>je izabran od H, -L-halogena, -L-CN, -L-NO<2>, -L-OR<a>, -L-SR<a>, -L-NR<b>R<c>, -L-C(O)OR<a>, -L-C(O)NR<b>R<c>, -L-S(O)<m>OR<a>, -L-S(O)<m>NR<b>R<c>, C<1-6>alkila, C2-6 alkenila, C2-6 alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, 5- do 10-članog heteroarila ili bočnog lanca prirodne aminokiseline;

[0222] pri čemu, m je 1 ili 2;

[0223] R<a>je nezavisno izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila;

[0224] R<b>i R<c>su nezavisno izabrani od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila; alternativno, R<b>i R<c>zajedno sa atomom azota formiraju 3- do 7-člani heterociklil;

[0225] L je izabran od hemijske veze, -C<1-6>alkilen-, -C<2-6>alkenilen-, ili -C<2-6>alkinilen-.

[0227] U sledećem primeru izvođenja, ovaj pronalazak se odnosi na gore pomenuto jedinjenje ili njegov izotopski obeleženi proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu, R<9>je izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, 5- do 10-članog heteroarila ili bočnog lanca prirodne aminokiseline.

[0228] [0053] U sledećem primeru izvođenja, ovaj pronalazak se odnosi na gore pomenuto jedinjenje ili njegov izotopski obeleženi proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu, R<9>je izabran od bočnog lanca sledećih prirodnih aminokiselina: glicina, alanina, valina, leucina, izoleucina, fenilalanina, triptofana, tirozina, asparaginske kiseline, asparagina, glutaminske kiseline, lizina, glutamina, metionina, serina, treonina, cisteina, prolina, histidina i arginina.

[0229] U sledećem primeru izvođenja, ovaj pronalazak se odnosi na gore pomenuto jedinjenje ili njegov izotopski obeleženi proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu, R<9>je bočni lanac alanina (Me) ili bočni lanac valina (iPr).

[0230] Bilo koje tehničko rešenje u bilo kom od gore navedenih specifičnih primera izvođenja ili bilo koja njihova kombinacija može se kombinovati sa bilo kojim tehničkim rešenjem u drugim specifičnim primerima izvođenja ili bilo kojom njihovom kombinacijom. Ovo otkriće ima za cilj da obuhvati sve kombinacije ovih tehničkih rešenja, koja nisu navedena jedno po jedno zbog ograničenja prostora.

[0231] U sledećem primeru izvođenja, ovaj pronalazak se odnosi na gore pomenuto jedinjenje ili njegov izotopski obeleženi proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu, reprezentativno jedinjenje je izabrano od

[0234]

[0235]

[0238] ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0240] Kombinacija lekova i/ili farmaceutska kompozicija

[0242] Jedinjenja ovog otkrića mogu se koristiti sama ili u kombinaciji sa drugim terapeutskim sredstvima za lečenje različitih stanja ili bolesti. Jedinjenja ovog otkrića i druga terapeutska sredstva mogu se primenjivati istovremeno (u istom doznom obliku ili u odvojenim doznim oblicima) ili sekvencijalno.

[0243] U jednom primeru izvođenja, drugo terapeutsko sredstvo u kombinaciji sa lekom ovog otkrića je sredstvo za snižavanje glukoze.

[0244] U sledećem primeru izvođenja, ovde je data farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje ovog pronalaska, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereoizomer ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; i opciono jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.

[0246] Upotreba za lečenje i/ili prevenciju bolesti

[0248] Još jedan primer ovog otkrića odnosi se na upotrebu jedinjenja formule (I) ili njegovog izotopski obeleženog proizvoda, enantiomera, dijastereoizomera ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; ili njegove farmaceutske kompozicije u proizvodnji leka. Konkretno, specifičan primer ovog otkrića odnosi se na upotrebu jedinjenja formule (I) ovog otkrića, ili njegovog izotopski obeleženog proizvoda, enantiomera, dijastereoizomera ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili njegove farmaceutske kompozicije u proizvodnji leka za lečenje i/ili prevenciju sledećih bolesti i medicinskih stanja, posebno jedne ili više bolesti izabranih od dijabetes melitusa tipa I, dijabetes melitusa tipa II, poremećene tolerancije na glukozu, poremećene glukoze u krvi pri gladovanju, hiperglikemije, postprandijalne

[0251] 2

[0252] hiperglikemije, prekomerne težine, gojaznosti, hipertenzije, insulinske rezistencije i metaboličkog sindroma.

[0253] Još jedan primer ovog otkrića odnosi se na upotrebu jedinjenja formule (I) ovog otkrića, ili njegovog izotopski obeleženog proizvoda, enantiomera, dijastereoizomera ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili njegove farmaceutske kompozicije u proizvodnji leka za lečenje dijabetesa, izazivanje remisije ili regresije dijabetesa.

[0255] Postupak za lečenje i/ili prevenciju bolesti

[0257] Pronalazak dalje pruža jedinjenje pronalaska za upotrebu u postupku lečenja i/ili sprečavanja jedne ili više bolesti izabranih od dijabetes melitusa tipa I, dijabetes melitusa tipa II, poremećene tolerancije na glukozu, poremećene glukoze u krvi pri gladovanju, hiperglikemije, postprandijalne hiperglikemije, prekomerne težine, gojaznosti, hipertenzije, insulinske rezistencije i metaboličkog sindroma, pri čemu postupak sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja pronalaska ili njegovog izotopski obeleženog proizvoda, enantiomera, dijastereoizomera ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; ili, primenu na subjekta terapeutski efikasne količine kombinacije lekova ili farmaceutske kompozicije.

[0258] Postupak za lečenje i/ili prevenciju dijabetes melitusa i srodnih bolesti sadrži:

[0260] - sprečavanje, usporavanje progresije, odlaganje ili lečenje metaboličkog poremećaja izabranog iz grupe koja se sastoji od dijabetes melitusa tipa I, dijabetes melitusa tipa II, poremećene tolerancije na glukozu, poremećene glukoze u krvi pri gladovanju, hiperglikemije, postprandijalne hiperglikemije, hipertenzije, prekomerne težine, gojaznosti, insulinske rezistencije i metaboličkog sindroma; ili

[0261] - lečenje dijabetesa, izazivanje remisije ili regresije dijabetesa; ili

[0263] - poboljšanje glikemijske kontrole i/ili za smanjenje glukoze u plazmi pri gladovanju, glukoze u plazmi posle obroka i/ili glikozilovanog hemoglobina HbA1c; ili

[0264] - sprečavanje, usporavanje, odlaganje ili preokretanje progresije od poremećene tolerancije na glukozu, insulinske rezistencije i/ili od metaboličkog sindroma do dijabetes melitusa tipa II; ili

[0265] - sprečavanje, usporavanje progresije, odlaganje ili lečenje stanja ili poremećaja izabranog iz grupe koja se sastoji od komplikacija dijabetes melitusa kao što su katarakta i mikro- i makrovaskularne bolesti, kao što su nefropatija, retinopatija, neuropatija, disfunkcija učenja i pamćenja, neurodegenerativni ili kognitivni poremećaji, kardio- ili cerebrovaskularne bolesti, ishemija tkiva, dijabetičko stopalo ili čir, arterioskleroza, hipertenzija, endotelna disfunkcija, infarkt miokarda, akutni koronarni sindrom, nestabilna angina pektoris, stabilna angina pektoris, moždani udar, okluzivna bolest perifernih arterija, kardiomiopatija, srčana insuficijencija, poremećaji srčanog ritma i vaskularna restenoza; ili - smanjenje telesne težine i/ili telesne masti ili sprečavanje povećanja telesne težine i/ili telesne masti ili olakšavanje smanjenja telesne težine i/ili telesne masti; ili

[0266] - sprečavanje, usporavanje, odlaganje ili lečenje degeneracije beta ćelija pankreasa i/ili smanjenja funkcionalnosti beta ćelija pankreasa i/ili za poboljšanje i/ili obnavljanje ili zaštitu funkcionalnosti beta ćelija pankreasa i/ili obnavljanje funkcionalnosti izlučivanja insulina od strane pankreasa; ili - sprečavanje, usporavanje, odlaganje ili lečenje bolesti ili stanja koja se pripisuju abnormalnom nakupljanju jetre ili ektopične masti; ili - održavanje i/ili poboljšanje osetljivosti na insulin i/ili za lečenje ili sprečavanje hiperinsulinemije i/ili insulinske rezistencije; ili

[0268] - sprečavanje, usporavanje progresije, odlaganje ili lečenje novonastalog dijabetesa nakon transplantacije (NODAT) i/ili posttransplantacionog metaboličkog sindroma (PTMS); ili

[0269] - sprečavanje, odlaganje ili smanjenje komplikacija povezanih sa NODAT i/ili PTMS, uključujući mikro- i makrovaskularne bolesti i događaje, odbacivanje grafta, infekciju i smrt; ili

[0271] - lečenje hiperurikemije i stanja povezanih sa hiperurikemijom.

[0273] U alternativnom primeru izvođenja, bolest sadrži dijabetes melitus tipa I, dijabetes melitus tipa II, poremećenu toleranciju na glukozu, poremećenu glukozu u krvi pri gladovanju, hiperglikemiju, postprandijalnu hiperglikemiju, prekomernu težinu, gojaznost, hipertenziju, insulinsku rezistenciju i metabolički sindrom.

[0276] 2

[0277] Prema sledećem primeru izvođenja, postupak sadrži lečenje dijabetes melitusa tipa II oralnom primenom terapeutski efikasne količine jedinjenja formule (II-1), (II-2), (II-3), (II-4), (III-1), (III-2), (III-3) ili (III-4) ili farmaceutske kompozicije ovog pronalaska na subjekta kome je potrebno lečenje. U jednom primeru izvođenja, subjekt kome je potrebno lečenje je čovek. U sledećem primeru izvođenja, farmaceutska kompozicija je u obliku tablete.

[0278] Prema sledećem primeru izvođenja, postupak sadrži primenu na subjekta jednog ili više drugih kombinovanih tretmana lekovima istovremeno ili sekvencijalno sa tretmanom terapeutski efikasnom količinom jedinjenja formule (II-1), (II-2), (II-3), (II-4), (III-1), (III-2), (III-3) ili (III-4) ili njegovog izotopski obeleženog proizvoda, enantiomera, dijastereoizomera ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili terapeutski efikasne količine farmaceutske kompozicije.

[0279] Jedinjenje formule (II-1), (II-2), (II-3), (II-4), (III-1), (III-2), (III-3) ili (III-4) i farmaceutska kompozicija ovog pronalaska mogu se primenjivati jednom dnevno (QD), dva puta dnevno (BID) ili tri puta dnevno (TID).

[0281] PRIMERI

[0283] Materijali ili reagensi koji se ovde koriste su komercijalno dostupni ili su pripremljeni sintetičkim postupcima koji su opšte poznati u struci.

[0284] Sledeći primeri dalje opisuju i ilustruju primere izvođenja koji su u okviru ovog otkrića. Međutim, ovo otkriće nije ograničeno na primere, i sve modifikacije i zamene napravljene na tehničkoj osnovi ovog otkrića spadaju u zaštitni obim priloženog skupa zahteva. Primeri 1, 2, 5 i 8 su samo u ilustrativne svrhe.

[0285] U sledećim primerima mogu se koristiti značenja skraćenica prikazanih u Tabeli 1.

[0287] Tabela 1. Značenja skraćenica

[0289]

[0293] 2

[0294]

[0297] Sintetička šema

[0299]

[0302]

[0305] Jedinjenje HMS5552 reaguje sa reagensima kao što su anhidrid kiseline, hlorid kiseline, hloroformat, hloroformamid, sulfonil hlorid, kiselina, aminokiselina ili sulfonska kiselina u prisustvu baze i/ili opciono kondenzacionog sredstva, tako da se primarna hidroksilna grupa HMS5552 esterifikuje konvencionalnom reakcijom esterifikacije; opciono, sekundarna hidroksilna grupa HMS5552 može biti esterifikovana daljom reakcijom sa istim ili različitim reagensima kao što su anhidrid kiseline, acil hlorid, hloroformat, hloroformamid, sulfonil hlorid, kiselina, aminokiselina ili sulfonska kiselina. Kada je R<1>isto kao i R<2>, proizvod u kome su i primarne i sekundarne hidroksilne grupe esterifikovane može se dobiti jednostepenom reakcijom povećanjem količine reagensa.

[0307] Primer 1: Priprema jedinjenja 1

[0309]

[0312] 2

[0313]

[0316] Sintetički koraci:

[0318] 6 g (13 mmol, 1,0 ekvivalent) jedinjenja HMS5552 rastvoreno je u 20 ml piridina, a zatim je ukapavanjem dodato 16 ml (168 mmol, 13 ekvivalenta) anhidrida sirćetne kiseline. Reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 18 sati. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode i dva puta ekstrahovana etil acetatom. Organske faze su spojene, isprane redom zasićenim vodenim rastvorom limunske kiseline, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim rastvorom soli, zatim sušene preko anhidrovanog magnezijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan do sušenja da bi se dobilo 6 g Jedinjenje 1 (84.6% prinos, svetlo žuta čvrsta supstanca).

[0319] MS[M+H]<+>: 547,18;<1>H-NMR (d<6>-DMSO, 400 MHz): δ 10,85 (s, 1H), 7,52-7,67 (m, o, 2H), 7,45-7,49 (m, 2H), 7,35-7,39 (m, 1H), 6,46 (d, J=1,48, 1H), 5,25-5,30 (m, 1H), 4,89-4,93 (m, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,59-4,64 (d, J=18,48, 1H), 4,20-4,33 (m, o, 4H), 4,02-4,06 (m, 1H), 2,03 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,74-1,80 (m, 1H), 1,54-1,61 (m, 1H), 1,45-1,58 (m, 1H), 0,90-0,92 (d, J=6,48, 3H), 0,94-0,95 (d, J=6,4, 3H).

[0321] Primer 2: Priprema jedinjenja 2

[0323]

[0326]

[0329] Sintetički koraci:

[0331] 5,0 g (10,8 mmol, 1,0 ekvivalent) jedinjenja HMS5552 rastvoreno je u etil acetatu, i dodato je 6,8 g (86 mmol, 8,0 ekvivalent) piridina i 4,7 g (43,3 mmol, 4,0 ekvivalent) etil

[0334] 2

[0335] hloroformata na 0°C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 sati. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode i proizvod je dva puta ekstrahovan etil acetatom. Organske faze su spojene, isprane zasićenim fiziološkim soli i koncentrovane do sušenja. Ostatak je prečišćen preparativnom hromatografijom da bi se dobilo 4,5 g Jedinjenja 2 (68.6% prinos, beli prah).

[0336] MS[M+H]<+>: 607,18;<1>H-NMR (d<6>-DMSO, 400 MHz): δ 10,87 (s, 1H), 7,60-7,67 (m, 2H), 7,45-7,54 (m, 2H), 7,35-7,39 (m, 1H), 6,47 (s, 1H), 5,15-5,25 (m, 1H), 4,89-4,93 (dd, J1=10,80, J2=4,56, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,59-4,64 (d, J=18,44, 1H), 4,24-4,39 (m, o, 4H), 4,06-4,19 (m, 5H), 1,70-1,82 (m, 1H), 1,52-1,62 (m, 1H), 1,35-1,50 (m, 1H), 1,16-1,23 (o, 6H), 0,94-0,95 (d, J=6,48, 3H), 0,90-0,92 (d, J=6,36, 3H).

[0338] Primer 3: Priprema jedinjenja 3

[0340]

[0343]

[0346] Sintetički koraci:

[0348] 1,73 g (14,1 mmol, 1,3 ekvivalenta) nikotinske kiseline je rastvoreno u DMF, i dodato je 4,19 g (32,4 mmol, 3,0 ekvivalenta) diizopropiletilamina i 5,34 g HATU (14,0 mmol, 1,3 ekvivalenta) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta, a zatim je dodato 5,0 g (10,8 mmol, 1,0 ekvivalenta) jedinjenja HMS5552 u serijama. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 sati. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode i ekstrahovana tri puta etil acetatom. Organske faze su spojene, isprane zasićenim fiziološkim rastvorom, osušene preko anhidrovanog magnezijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan, a ostatak je prečišćen preparativnom hromatografijom da bi se dobilo 3,3 g jedinjenja 3 (prinos 53,7%, roze braon čvrsta supstanca).

[0349] MS[M+H]<+>: 568,11;<1>H-NMR (d<6>-DMSO, 400 MHz): δ 10,81 (s, 1H), 9,16 (s, 1H), 8,82-8,84 (d, J=4,52, 1H), 8,32-8,34 (d, J=8,00, 1H), 7,62-7,66 (t, J=8,78, 2H), 7,57-7,60 (dd, J1=7,88, J2=4,68, 1H), 7,52-7,54 (d, J=8,04, 1H), 7,45-7,49 (t, J=7,72, 1H), 7,35-7,39 (t,

[0352] 2

[0353] J=7,62, 1H), 6,45 (s, 1H), 5,40-5,60 (br, 1H), 4,89-4,92(dd, J1=10,60, J2=4,72, 1H), 4,80(s, 1H), 4,60-4,64 (d, J=18,44, 1H), 4,012-4,29 (m, 6H), 1,68-1,80 (m, 1H), 1,48-1,62 (m, 1H), 1,32-1,50 (m, 1H), 0,94-0,95 (d, J=6,52, 3H), 0,90-0,92 (d, J=6,52, 3H).

[0355] Primer 4: Priprema jedinjenja 4

[0357]

[0360]

[0363] Sintetički koraci:

[0365] 10,0 g (72,4 mmol, 1,0 ekvivalent) 2-hidroksibenzoeve kiseline je rastvoreno u DMF, i dodato je 14,8 g (217,4 mmol, 3,0 ekvivalent) imidazola i 24,0 g (159,2 mmol, 2,2 ekvivalenta) TBSCl, respektivno, na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode i ekstrahovana dva puta sa MTBE. Organske faze su spojene, isprane zasićenim fiziološkim rastvorom, osušene preko anhidrovanog magnezijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan do sušenja da bi se dobilo 27 g tercbutildimetilsilil 2-((terc-butildimetilsilil)oksi)benzoata, prinos sirove supstance 101,7%.

[0366] [0084] 12 g (32,7 mmol, 1,0 ekvivalent) terc-butildimetilsilil 2-((tercbutildimetilsilil)oksi)benzoata je rastvoreno u dihlorometanu, i dodate su četiri kapi DMF.4,8 g (37,8 mmol, 1,2 ekvivalenta) oksalil hlorida je dodato ukapavanjem na 0 °C i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Reakciona smeša je ugašena metanolom, a zatim koncentrovana do sušenja da bi se dobilo 8,2 g 2-((terc-butildimetilsilil)oksi)benzoil hlorida, prinos sirove supstance 92,5%.

[0367] 6,0 g (13,0 mmol, 1,0 ekvivalent) jedinjenja HMS5552 je rastvoreno u etil acetatu, i dodato je 4,1 g (51,8 mmol, 4,0 ekvivalenta) piridina na 0°C, a zatim je ukapavanjem dodato 5,27 g (19,5 mmol, 1,5 ekvivalenta) 2-((terc-butildimetilsilil)oksi)benzoil hlorida. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode i ekstrahovana dva puta etil acetatom. Organske faze su spojene, isprane zasićenim rastvorom soli i koncentrovane do sušenja. Ostatak je prečišćen preparativnom hromatografijom da bi se dobilo 5,5 g (R)-3-(3-((S)-2-(4-(2-hlorofenoksi)-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-4-metilpentanamido)-1H-pirazol-1-il)-2-hidroksipropil 2-((tercbutildimetilsilil)oksi)benzoata, prinos 60,8%.

[0368] 5,5 g (7,89 mmol, 1,0 ekvivalent) (R)-3-(3-((S)-2-(4-(2-hlorofenoksi)-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-4-metilpentanamido)-1H-pirazol-1-il)-2-hidroksipropil 2-((tercbutildimetilsilil)oksi)benzoata je rastvoreno u tetrahidrofuranu, i 9 ml 1M rastvora TBAF (9 mmol, 1,14 ekvivalenta) u tetrahidrofuranu je dodato ukapavanjem na 0°C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 sati. Reakcija je ugašena dodavanjem vode i proizvod je ekstrahovan tri puta etil acetatom. Organske faze su spojene, isprane zasićenim fiziološkim rastvorom i koncentrovane do sušenja. Ostatak je prečišćen preparativnom hromatografijom sa reverznom fazom da bi se dobilo 1,0 g Jedinjenja 4 (21.7% prinos, beli prah).

[0369] MS[M+H]<+>: 583,06;<1>H-NMR (d<6>-DMSO, 400 MHz): δ 10,84 (s, 1H), 10,49 (s, 1H), 7,25-8,05 (m, o, 7H), 6,80-7,15 (m, 2H), 6,30-6,60 (m, 1H), 5,55 (s, 1H), 4,50-5,05 (m, 3H), 3,95-4,65 (m, 6H), 1,30-1,75 (m, 3H), 0,70-0,95 (m, 6H).

[0371] Primer 5: Priprema jedinjenja 5

[0373]

[0376]

[0379] Sintetički koraci:

[0382] 1

[0383] 6,0 g (13,0 mmol, 1,0 ekvivalent) jedinjenja HMS5552 rastvoreno je u smeši od 45 ml THF i 45 ml piridina, i 24,24 g (259 mmol, 20 ekvivalent) N-metilhloroformamida je dodato na -10°C u serijama. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 sati. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode i dva puta ekstrahovana etil acetatom. Organske faze su spojene, isprane zasićenim fiziološkim rastvorom i koncentrovane do sušenja. Ostatak je prečišćen preparativnom hromatografijom da bi se dobilo 2,5 g Jedinjenja 5 (37,1% prinos, beli prah).

[0384] MS[M+H]<+>: 520,12;<1>H-NMR (d<6>-DMSO, 400 MHz): δ 10,82 (s, 1H), 7,65-7,67 (m, 1H), 7,45-7,54 (m, 3H), 7,35-7,37 (m, 1H), 7,04-7,05 (m, 1H), 6,43 (s, 1H), 5,26 (br, 1H), 4,91-4,92 (m, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,60-4,64 (d, J=18,44, 1H), 4,19-4,24 (d, J=18,44, 1H), 3,87-4,07 (m, 4H), 2,51 (s, 3H), 2,08 (s, 1H), 1,73-1,80 (m, 1H), 1,54-1,61 (m, 1H), 1,40-1,49 (m, 1H), 0,94-0,95 (d, J=6,52, 3H), 0,90-0,92 (d, J=6,32, 3H).

[0386] Primer 6: Priprema jedinjenja 6 i njegove citratne soli

[0388]

[0391]

[0394] Sintetički koraci:

[0396] 4 g (21 mmol, 1,4 ekvivalenta) (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)propionske kiseline je rastvoreno u DMF, i dodato je 7,8 g (60,3 mmol, 4,0 ekvivalenta) diizopropiletilamina i 8,1 g (21,3 mmol, 1,4 ekvivalenta) HATU na 0°C. Smeša je mešana 30 minuta, a zatim je dodato 7,0 g (15,1 mmol, 1,0 ekvivalenta) HMS5552 u serijama. Reakciona smeša je mešana na sobnoj

[0399] 2

[0400] temperaturi 20 sati. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode i ekstrahovana tri puta etil acetatom. Organske faze su spojene, isprane zasićenim fiziološkim rastvorom, osušene preko anhidrovanog magnezijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan do sušenja. Ostatak je prečišćen preparativnom hromatografijom da bi se dobilo 5,3 g (R)-3-(3-((S)-2-(4-(2-hlorofenoksi)-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-4-metilpentanamido)-1H-pirazol-1-il)-2-hidroksipropil (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)propionata (prinos 55,3%).

[0401] 5,3 g (8,4 mmol, 1,0 ekvivalent) (R)-3-(3-((S)-2-(4-(2-hlorofenoksi)-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-4-metilpentanamido)-1H-pirazol-1-il)-2-hidroksipropil (S)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)propionata je rastvoreno u dihlorometanu, i dodato je 20 ml trifluorosirćetne kiseline na 0°C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Reakcioni rastvor je koncentrovan do sušenja, a ostatak je podešen na pH vrednost od 8-9 pomoću zasićenog natrijum karbonata. Proizvod je ekstrahovan dihlorometanom i koncentrovan do sušenja da bi se dobilo 4,2 g Jedinjenja 6 (94.1% prinos, beli prah).

[0402] MS[M+H]<+>: 534,11;<1>H-NMR (d<6>-DMSO, 400 MHz): δ 10,81 (s, 1H), 7,65-7,67 (m, 1H), 7,45-7,58 (m, o, 3H), 7,36-7,39 (m, 1H), 6,43 (s, 1H), 5,37 (s, 1H), 4,88-4,92 (m, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,59-4,64 (d, J=18,44, 1H), 4,19-4,24 (d, J=18,44, 1H), 3,90-4,19 (m, 4H), 3,35-3,43 (m, 1H), 1,90-2,10 (m, 1H), 1,73-1,80 (m, 1H), 1,54-1,61 (m, 1H), 1,45-1,46 (m, 1H), 1,17-1,19 (d, J=6,92, 3H), 0,94-0,95 (d, J=6,52, 3H), 0,90-0,92 (d, J=6,40, 3H).

[0404] Citratna so jedinjenja 6

[0406] 4,2 g (7,9 mmol, 1,0 ekvivalent) Jedinjenja 6 je rastvoreno u 50 ml THF i rastvor od 604 mg (3,14 mmol, 0,4 ekvivalenta) limunske kiseline u THF-u (20 ml) je dodat ukapavanjem na 0 °C. Reakcioni rastvor je mešan na 0 °C tokom 1 sata. Reakcioni rastvor je koncentrovan do sušenja, a zatim je dodato 30 ml etil acetata u koncentrat da bi se dobio bistar rastvor. Zatim je polako dodato 60 ml MTBE, i velika količina čvrste supstance je istaložena. Smeša je filtrirana. Čvrsta supstanca je rekristalizovana sa etil acetatom/MTBE da bi se dobilo 3,4 g citratne soli jedinjenja 6 sa čistoćom od 95,0% pomoću HPLC. [MS[M+H]<+>: 534,11]

[0408] Primer 7: Priprema jedinjenja 7 i njegove citratne soli

[0410]

[0411]

[0414] Sintetički koraci:

[0416] 3,7 g (17 mmol, 1,3 ekvivalenta) (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanske kiseline je rastvoreno u DMF, i dodato je 5,0 g (38,7 mmol, 3,0 ekvivalenta) diizopropiletilamina i 6,4 g (16,8 mmol, 1,3 ekvivalenta) HATU na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta, a zatim je dodato 6,0 g (13,0 mmol, 1,0 ekvivalenta) jedinjenja HMS5552 u serijama. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 18 sati. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem vode i ekstrahovana tri puta etil acetatom. Organske faze su spojene, isprane zasićenim fiziološkim rastvorom, osušene preko anhidrovanog magnezijum sulfata i filtrirane. Filtrat je koncentrovan, a ostatak je prečišćen preparativnom hromatografijom da bi se dobilo 3,9 g (R)-3-(3-((S)-2-(4-(2-hlorofenoksi)-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-4-metilpentanamido)-1H-pirazol-1-il)-2-hidroksipropil (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metil butirata (prinos 45,4%).

[0417] 3,9 g (5,9 mmol, 1,0 ekvivalent) (R)-3-(3-((S)-2-(4-(2-hlorofenoksi)-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-4-metilpentanamido)-1H-pirazol-1-il)-2-hidroksipropil (S)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)-3-metil butirata je rastvoreno u dihlorometanu. Dodato je 13 ml trifluorosirćetne kiseline na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Reakcioni rastvor je koncentrovan do sušenja, a ostatak je podešen na pH vrednost od 8-9 pomoću zasićenog natrijum karbonata. Proizvod je ekstrahovan dihlorometanom i koncentrovan do sušenja da bi se dobilo 2,7 g Jedinjenja 7 (prinos 81,6%, beli prah).

[0420] 4

[0421] MS[M+H]<+>: 562,29;<1>H-NMR (d<6>-DMSO, 400 MHz): δ 10,80 (s, 1H), 7,65-7,67 (m, 1H), 7,47-7,57 (m, o, 3H), 7,35-7,35 (m, 1H), 6,43-6,44 (d, J=5,48, 1H), 5,35 (s, 1H), 4,92-4,93 (m, 1H), 4,89 (s, 1H), 4,59-4,64 (d, J=18,48, 1H), 4,19-4,27 (o, 2H), 3,90-4,10 (m, 4H), 3,13-3,14 (d, J=5,32, 1H), 1,45-1,89 (m, o, 6H), 0,77-0,95 (o, 12H).

[0423] Citratna so jedinjenja 7

[0425] 2,3 g (4,1 mmol, 1,0 ekvivalent) Jedinjenja 7 je rastvoreno u 30 ml tetrahidrofurana, i rastvor od 314 mg (1,63 mmol, 0,4 ekvivalenta) limunske kiseline u THF (10 ml) je dodat ukapavanjem na 0 °C. Reakcioni rastvor je mešan na 0 °C tokom 1 sata, a zatim je koncentrovan do sušenja. Koncentratu je dodato 20 ml etil acetata da bi se dobio bistar rastvor. Zatim je polako dodato 40 ml metil terc-butil etra, a proizvod je istaložen. Talog je filtriran i osušen da bi se dobilo 2,1 g citratne soli jedinjenja 7 sa čistoćom od 94,8% pomoću HPLC. [MS[M+H]<+>: 562.29]

[0427] Primer 8: Priprema jedinjenja 8

[0429]

[0432]

[0435] 6,0 g (13,0 mmol, 1,0 ekvivalent) jedinjenja HMS5552 je rastvoreno u dihlorometanu, i dodato je 493 mg (2,9 mmol, 0,22 ekvivalenta) p-toluensulfonske kiseline na 0 °C. Zatim je ukapavanjem dodato 4,6 g (38,9 mmol, 3,0 ekvivalenta) acetaldehid dietil acetala. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 96 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan do sušenja, a sirovi proizvod je prečišćen preparativnom hromatografijom da bi se dobilo 4,0 g Jedinjenja 8 (63.1% prinos, beli prah).

[0436] [0103] MS[M+H]<+>: 489,05;<1>H-NMR (d<6>-DMSO, 400 MHz): δ 10,83 (s, 1H), 7,62-7,67 (m, 2H), 7,45-7,54 (m, 2H), 7,35-7,39 (m, 1H), 6,45-6,46 (d, J=1,88, 1H), 4,90-4,98 (m, 2H), 4,80 (s, 1H), 4,60-4,64 (d, J=18,48, 1H), 4,33-4,35 (m, 1H), 4,24-4,20 (d, J=18,48, 1H), 4,09-4,16 (m, 2H), 3,80-3,84 (m, 2H), 1,73-1,80 (m, 1H), 1,54-1,61 (m, 1H), 1,40-1,49 (m, 1H), 1,22-1,27 (dd, J=13,70, J=4,74, 3H), 0,94-0,95 (d, J=6,52, 3H), 0,90-0,92 (d, J=6,32, 3H)

[0438] Primer 9: Test stabilnosti jedinjenja u simuliranom želudačnom soku (SGF)

[0440] Priprema simuliranog želudačnog soka (SGF): Rastvoriti 0,04 g NaCl i 0,064 g pepsina u 0,14 ml HCl i dodati dovoljno H<2>O da bi se konačna zapremina povećala na 20 mL. pH vrednost test rastvora bila je oko 1,20 ± 0,05.

[0441] Priprema radnih rastvora ispitivanog jedinjenja: Dodati 5 µL osnovnog rastvora test jedinjenja koncentracije 30 mM u 745 µL DMSO da bi se dobio radni rastvor test jedinjenja koncentracije 200 µM.

[0443] 1) Dodati 2 µL radnog rastvora testiranog jedinjenja koncentracije 200 µM u odgovarajuće bunarčiće ploča sa 96 dubokih bunarčića T0, T60, T120, T360 i T1440 (pripremljeni su duplikati, n=2).

[0444] 2) Prebaciti 198 µL rastvora SGF u gore navedene odgovarajuće bunarčiće osim T0 da biste dostigli 2 µM kao konačnu koncentraciju test jedinjenja za svaku vremensku tačku (60, 120, 360 i 1440 minuta). Konačna koncentracija DMSO u inkubacionoj smeši bila je 1%.

[0445] 3) Inkubirati uzorke na 37°C, 600 rpm tokom određenog vremena.

[0446] 4) Uzorci u odgovarajućim vremenskim tačkama (60, 120, 360 i 1440 minuta) su uklonjeni na kraju vremena inkubacije i odmah potpuno pomešani sa 400 µL hladnog acetonitrila koji sadrži 200 ng/ml tolbutamida (interni standard).

[0447] 5) 200 µL supernatanta je uklonjeno i ponovo potpuno pomešano sa 400 µL hladnog acetonitrila koji sadrži 200 ng/ml tolbutamida (interni standard).

[0448] 6) Priprema T0 uzoraka: Prebaciti 198 µL rastvora SGF u odgovarajući bunarčić posle dodavanja 400 µL hladnog acetonitrila koji sadrži 200 ng/ml tolbutamida (interni standard) i dobro promešati. Zatim je pipetirano 200 µL supernatanta i ponovo dobro promešano sa 400 µL hladnog acetonitrila koji sadrži 200 ng/ml tolbutamida (interni standard).

[0449] 7) Svi uzorci su centrifugirani na 4000 rpm, 4°C tokom 20 minuta.

[0450] 8) 60 µL supernatanta je pipetirano i pomešano sa 180 µL ultračiste vode i smeša je potpuno izmešana za LC-MS/MS analizu.

[0451] Koncentracije test jedinjenja i konvertovanog jedinjenja HMS5552 su merene, a preostala/brzina generacije u odnosu na vreme inkubacije je prikazana grafički kako bi se procenila stabilnost test jedinjenja u simuliranom želudačnom soku (SGF).

[0453] LC-MS/MS uslov:

[0454] LC: Shimadzu LC 30-AD,

[0455] MS: QTRAP 6500+,

[0456] Automatski uzorkivač: CTC PAL,

[0457] Mobilna faza: A: 0,1% mravlja kiselina u vodi, B: 0,1% mravlja kiselina u acetonitrilu, Kolona: ACQUITY UPLC Protein BEH C4300Å 2.1 * 50 mm, broj dela 186004495, Ukupan protok: 600 µL/min,

[0458] Tip skeniranja: praćenje višestrukih reakcija (MRM).

[0460] Rezultati su prikazani u Tabeli 2, na Slici 1 i Slici 2.

[0462] Tabela 2 Podaci o stabilnosti test jedinjenja u simuliranom želudačnom soku

[0465]

[0468] Rezultati u Tabeli 2, na Slici 1 i Slici 2 pokazuju da su Jedinjenje 3 i Jedinjenje 7 bili stabilni u SGF tokom 24 sata i da su se oba samo neznatno razgradila u matični lek HMS5552.

[0469] Primer 10: Test stabilnosti jedinjenja u simuliranom crevnom soku (SIF)

[0471] Priprema simuliranog crevnog soka (SIF): Rastvoriti 0,136 g KH<2>PO<4>i 0,2 g pankreatina vodom i dopuniti konačnu zapreminu do 20 ml. pH vrednost test rastvora bila je oko 6,80 ± 0,05.

[0472] Priprema radnog rastvora ispitivanog jedinjenja: Dodati 10 µL osnovnog rastvora test jedinjenja koncentracije 10 mM u 490 µL DMSO da bi se dobio radni rastvor test jedinjenja koncentracije 200 µM.

[0474] 1) Dodati 2 µL radnog rastvora od 200 µM u odgovarajuće bunarčiće T0, T60, T120, T360 i T1440 (pripremljeni su duplikati, n=2) ploča sa 96 dubokih bunarčića.

[0475] 2) Prebaciti 198 µL SIF rastvora u gornje odgovarajuće bunarčiće, osim u T0, da bi se dostiglo 2 µM kao konačna koncentracija test jedinjenja za svaku vremensku tačku (60, 120, 360 i 1440 minuta). Konačna koncentracija DMSO u inkubacionoj smeši bila je 1%.

[0476] 3) Inkubirati uzorke na 37°C, 600 rpm tokom određenog vremena.

[0477] 4) Uzorci u odgovarajućim vremenskim tačkama (60, 120, 360 i 1440 minuta) su uklonjeni na kraju vremena inkubacije i odmah potpuno pomešani sa 400 µL hladnog acetonitrila koji sadrži 200 ng/ml tolbutamida (interni standard).

[0478] 5) 200 µL supernatanta je uklonjeno i ponovo potpuno pomešano sa 400 µL hladnog acetonitrila koji sadrži 200 ng/ml tolbutamida (interni standard).

[0479] 6) Priprema T0 uzoraka: Prebaciti 198 µL SIF rastvora u odgovarajući bunarčić posle dodavanja 400 µL hladnog acetonitrila koji sadrži 200 ng/ml tolbutamida (interni standard) i dobro promešati. Zatim je pipetirano 200 µL supernatanta i ponovo dobro promešano sa 400 µL hladnog acetonitrila koji sadrži 200 ng/ml tolbutamida (interni standard).

[0480] 7) Svi uzorci su centrifugirani na 4000 rpm, 4°C tokom 20 minuta.

[0481] 8) 60 µL supernatanta je pipetirano i pomešano sa 180 µL ultračiste vode, a smeša je potpuno izmešana za LC-MS/MS analizu.

[0483] Koncentracije test jedinjenja i konvertovanog jedinjenja HMS5552 su merene, a preostala/brzina generisanja u odnosu na vreme inkubacije je prikazana grafički kako bi se procenila stabilnost test jedinjenja u simuliranoj crevnoj tečnosti (SIF).

[0484] LC-MS/MS uslov:

[0485] LC: Shimadzu LC 30-AD,

[0486] MS: API4000,

[0487] Automatski uzorkivač: CTC PAL,

[0488] Mobilna faza: A: 0,1% mravlja kiselina u vodi, B: 0,1% mravlja kiselina u acetonitrilu, Kolona: ACQUITY UPLC BEH C18 1,7 µm 2,1 × 50 mm, broj dela 186002350, Tip skeniranja: praćenje višestrukih reakcija (MRM).

[0490] Rezultati su prikazani u Tabeli 3, Slici 3 i Slici 4.

[0492] Tabela 3 Podaci o stabilnosti test jedinjenja u simuliranom crevnom soku

[0495]

[0498] Rezultati u Tabeli 3, Slici 3 i Slici 4 pokazuju da su Jedinjenje 3 i Jedinjenje 7 ekstenzivno razgrađeni u SIF, i da je većina njih pretvorena u HMS5552.

[0500] Primer 11: Simulirani metabolički test jedinjenja u humanom crevu S9

[0502] Priprema fosfatnog pufera (PB): Rastvoriti 73,21 g K<2>HPO<4>•3H<2>O (AR kvalitet) i 10,78 g KH<2>PO<4>(AR kvalitet) u ultra čistoj vodi da bi se konačna zapremina povećala na 4000 mL, a konačna koncentracija na 100 mM. pH vrednost konačnog test rastvora je podešena na pH 7,40±0,10 sa H<3>PO<4>/KOH.

[0503] Priprema radnog rastvora ispitivanog jedinjenja: 5 µL osnovnog rastvora testiranog jedinjenja (10 mM u DMSO) je razblaženo sa 995 µL acetonitrila (ACN) da bi se dobio radni rastvor testiranog jedinjenja (srednja koncentracija rastvora: 50 µM, 99% ACN)

[0504] Glavni materijali testa su prikazani u Tabeli 4, a parametri komponenti za pripremu humanog crevnog S9 (HIS9) rastvora su prikazani u Tabeli 5.

[0506] Tabela 4 Glavni materijali testa

[0509]

[0512] Tabela 5 Parametri komponenti za pripremu humanog crevnog S9 rastvora

[0515]

[0518] Za dodavanje 50 µL/bunarčiću rastvora HIS9 u odgovarajuće bunariće svih reakcionih ploča (slepa proba, T0, T5, T15, T30, T45, T60) korišćena je Apricot automatizovana radna stanica.

[0519] Koristeći Apricot automatizovanu radnu stanicu, 2 µL/bunarčiću radnog rastvora testiranog jedinjenja dodato je u odgovarajuće bunarčiće svih reakcionih ploča sa 96 bunarčića, osim u slepu probu (T0, T5, T15, T30, T45, T60).

[0520] Za dodavanje 48 µL/bunarčiću PB u odgovarajuće bunarčiće svake reakcione ploče (Blank, T0, T5, T15, T30, T45, T60) korišćena je Apricot automatizovana radna stanica da bi se započela reakcija.

[0523] 4

[0524] Reakcione ploče su inkubirane na 37°C, a tajmer je pokrenut. Apricot automatizovana radna stanica je korišćena za dodavanje 300 µL/bunarčiću stop rastvora (hladni acetonitril koji sadrži 200 ng/ml tolbutamida (interni standard)) u odgovarajuće bunarčiće svake reakcione ploče u odgovarajućoj vremenskoj tački završetka kako bi se reakcija prekinula.

[0525] Svaka ploča je zatvorena i mućkana 10 minuta. Nakon mućkanja, svaka ploča je centrifugirana na 4000 rpm i 4°C tokom 20 minuta. Nakon centrifugiranja, 100 µL supernatanta je preneto sa svake reakcione ploče na odgovarajuću bioanalitičku ploču i dobro pomešano sa 300 µL ultračiste vode.

[0526] Svaka ploča za bioanalizu je zapečaćena za LC-MS/MS analizu kako bi se dobila koncentracija test jedinjenja i konvertovanog jedinjenja HMS5552, kako bi se procenila metabolička transformacija test jedinjenja u humanom crevu S9.

[0528] LC-MS/MS uslov:

[0529] LC: Shimadzu LC 30-AD,

[0530] MS: API4000,

[0531] Automatski uzorkovač: CTC PAL,

[0532] Mobilna faza: A: 0,1% mravlja kiselina u vodi, B: 0,1% mravlja kiselina u acetonitrilu, Kolona: ACQUITY UPLC BEH C18 1,7 µm 2,1 × 50 mm, broj dela 186002350,

[0534] Rezultati su prikazani u Tabeli 6.

[0536] Tabela 6 Rezultati simulacije test jedinjenja u humanom crevu S9

[0539]

[0540]

[0543] Rezultati simulacije humanog creva S9 u Tabeli 6 pokazuju da su Jedinjenje 3 i Jedinjenje 7 dobro metabolisani u humanom crevu S9 i da su skoro svi konvertovani u matični lek HMS5552 u roku od 60 minuta. Jedinjenje 3 je potpuno metabolisano i konvertovano u matični lek HMS5552 u roku od 5 minuta.

[0545] Primer 12: Testiranje korišćenjem Caco-2 ćelija za dvosmernu procenu propustljivosti jedinjenja 3

[0547] Kultura ćelija Caco-2: Ćelije Caco-2 (kupljene od Američke kolekcije tipovih kultura, ATCC) inokulirane su na polietilensku foliju (PET) ploče sa 96 bunarčića u koncentraciji od 1x10<5>ćelija/cm<2>. Medijum za kultivaciju je menjan svaka 4 dana do ćelijske konfluencije da bi se formirao ćelijski monosloj 21. ili 28. dana.

[0548] Test transporta: Transportni pufer korišćen u testu bio je Hanksov ravnotežni rastvor soli (HBSS) koji sadrži 10 mM 2-[4-(2-hidroksietil)-1-piperazinil]etansulfonsku kiselinu (HEPES) pri pH vrednosti od 7,40 ± 0,05. Studije permeabilnosti in vitro sprovedene su sa nadololom, metoprololom i digoksinom kao modelnim permeantima. Testirano jedinjenje 3 je procenjeno dvosmerno sa test koncentracijama od 2,00, 10,0 i 30,0 µM (n=2), respektivno. Digoksin je procenjen dvosmerno sa test koncentracijom od 10,0 µM (n=2). Nadolol i metoprolol su procenjeni jednosmerno sa test koncentracijom od 2,00 µM (n=2). Konačna koncentracija DMSO u inkubacionom sistemu je podešena na <1%.

[0549] Konkretni koraci:

[0551] 1) Ploča je inkubirana 2 sata u CO<2>inkubatoru na 37±1°C, sa 5% CO<2>pri zasićenoj vlažnosti bez mućkanja.

[0552] 2) Na kraju inkubacije, svi uzorci su pomešani sa acetonitrilom koji sadrži interni standard i centrifugirani na 3200 g tokom 10 minuta.

[0553] 3) Za jedinjenje 3 u grupama 10,0 µM i 30,0 µM, uzorak T0 i uzorak sa donorske strane su razblaženi 10 puta supernatantom praznog uzorka.

[0554] 4) Za Nadolol i Metoprolol, 200 µL supernatanta je razblaženo sa 600 µL ultračiste vode za LC-MS/MS analizu.

[0555] 5) Za digoksin i testirano jedinjenje, 200 µL supernatanta je razblaženo sa 200 µL ultračiste vode za LC-MS/MS analizu.

[0556] 6) Koncentracija Jedinjenja 3, matičnog leka HMS5552 i kontrolnog jedinjenja u početnom rastvoru, rastvoru donorske strane i rastvoru prijemne strane je kvantitativno određena odnosom površine pika testirane supstance prema internom standardu pomoću LC-MS/MS.

[0558] Rezultati testa propustljivosti jedinjenja prikazani su u Tabeli 7.

[0560] Tabela 7 Rezultati testa propustljivosti jedinjenja 3

[0563]

[0566] Rezultati u Tabeli 7 pokazuju da je propustljivost Jedinjenja 3 od A do B niska, dok je od B do A visoka, što sugeriše da je Jedinjenje 3 verovatno supstrat za efluks transportere.

[0568] Primer 13: Farmakokinetička ispitivanja

[0570] Osamnaest mužjaka SD pacova je podeljeno u tri grupe prema telesnoj težini (HMS5552 grupa, grupa sa jedinjenjem 3 i grupa sa jedinjenjem 7). Svaka grupa je podeljena u 2 podgrupe (intravenska bolus grupa (IV) i grupa za gavažu (PO)). Intravenska bolus grupa (IV) je primala 10 mg/kg HMS5552, 10 mg/kg Jedinjenja 3 ili 10 mg/kg Jedinjenja 7 jednom intravenskom bolus injekcijom. Grupa za gavažu (PO) je primala 30 mg/kg HMS5552, 30 mg/kg Jedinjenja 3 ili 30 mg/kg Jedinjenja 7 jednom gavažom.

[0571] Uzorci pune krvi (oko 0,2 mL po vremenskoj tački) su sakupljeni pre doze (0), 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12 i 24 sata posle doze punkcijom jugularne vene. Svi uzorci krvi su odmah

[0574] 4

[0575] prebačeni u obeležene, prethodno ohlađene komercijalne mikrocentrifugalne epruvete koje sadrže 4 µL 0,5M EDTA-K<2>i 10 µL stabilizatora za koktel. Uzorci su stavljeni na vlažni led do centrifugiranja (u roku od 30 minuta). Uzorci plazme su zatim pripremljeni centrifugiranjem uzoraka krvi na približno 4°C, 3200×g tokom 10 minuta. Supernatant plazme je pipetiran, zatim brzo zamrznut preko suvog leda i čuvan na -60°C ili nižoj temperaturi do LC-MS/MS analize.

[0576] Stabilizator za koktel je pripremljen prema sledećoj Tabeli 8:

[0578] Tabela 8 Formula stabilizatora koktela

[0581]

[0584] Koncentracije u plazmi su podvrgnute nekomplementarnoj farmakokinetičkoj analizi korišćenjem WinNonlin<™>softverskog programa (verzija 6.3). Linearno/logaritamsko trapezoidno pravilo je primenjeno za dobijanje PK parametara, a rezultati su prikazani u Tabeli 9.

[0586] Tabela 9 Farmakokinetički rezultati

[0588]

[0589]

[0591] Rezultati u Tabeli 9 pokazuju da se Jedinjenje 3 i Jedinjenje 7 veoma brzo metabolišu kod pacova intravenskom injekcijom. Kada se primenjuju oralno, izloženost (Cmax, odnos Cmax, AUC, odnos AUC) Jedinjenja 3 i Jedinjenja 7 bila je uporediva sa matičnim lekom

[0593] 4

[0594] HMS5552. Gore navedeni rezultati studije pokazuju da se Jedinjenje 3 i Jedinjenje 7 metabolišu u gastrointestinalnom traktu i enterocitima do HMS5552, koji se apsorbuje, a zatim ulazi u cirkulatorni sistem.

[0596] Primer 14: Farmakodinamička studija

[0598] Da bi se proučio efekat HMS5552, jedinjenja 3, jedinjenja 6 i jedinjenja 7 na snižavanje glukoze kod C57BL/6J miševa.

[0600] Postupak

[0602] 104 miša C57BL/6J su nasumično podeljeni u 13 grupa prema telesnoj težini, 8 miševa po grupi. Prvoj grupi je dat rastvor (5 mL/kg, PO) kao kontrolnoj grupi, drugim grupama je data odgovarajuća koncentracija test jedinjenja (5 mL/kg, PO). Grupe sa niskim, srednjim i visokim dozama Jedinjenja 3, Jedinjenja 6 i Jedinjenja 7 su ekvivalentne (ekvimolarne) grupama sa 5, 15 i 40 mg/kg HMS5552. Oralni test tolerancije na glukozu (OGTT) je izvršen 1 sat nakon primene test jedinjenja. Glukoza u krvi (BG) je merena na -60 minuta (pre doze), 0 minuta (pre glukoze), 15 minuta, 30 minuta, 60 minuta i 120 minuta nakon tretmana glukozom. Uzorci krvi (40 µl) su prikupljeni iz repnih vena na 0 minuta (pre glukoze) i 15 minuta (posle glukoze) da bi se odvojila plazma za detekciju insulina.

[0604] Obrada i analiza podataka

[0606] Svi podaci su preneti u Excel tabelu. Glukoza u krvi je izražena u mg/dl. Sve vrednosti su izražene kao srednja vrednost ± SEM. Značajnost razlika između grupa je procenjena jednofaktorskom ANOVA ili dvofaktorskom ANOVA, nakon čega je usledio Dunnett-ov test višestrukih poređenja ili Tukey-ev test višestrukih poređenja korišćenjem GraphPad Prism 8. p vrednost manja od 0,05 se smatra statistički značajnom.

[0608] Rezultati

[0610] Telesna težina (TT): Tokom eksperimenta, vrednosti TT svih grupa su slične, nisu pronađene značajne razlike između grupa.

[0613] 4

[0614] Rezultat OGTT testa je prikazan na slici 5. Slika 5 pokazuje da su vrednosti GK svih grupa nakon -60 minuta (pre doze) slične, nisu pronađene značajne razlike između grupa.

[0615] Nakon tretmana sa HMS5552, Jedinjenjem 3, Jedinjenjem 6 i Jedinjenjem 7, vrednosti šećera u krvi svih tretiranih grupa u 0. minutu (pre glukoze) bile su ukupno niže nego kod kontrolne grupe koja je primala nosač, sa zavisnošću od doze i odgovora.

[0616] Nakon tretmana glukozom, vrednosti šećera u krvi u svakoj grupi su značajno povećane. Vrednosti šećera u krvi u grupi sa HMS5552-40 mg/kg bile su značajno niže od kontrolne grupe koja je primala nosač posle 30 min, 60 min i 120 min. Vrednosti šećera u krvi u grupi sa Jedinjenjem 3-49,1 mg/kg bile su značajno niže od kontrolne grupe koja je primala nosač posle 15 min, 30 min, 60 min i 120 min, i bile su značajno niže od grupe sa HMS5552-40 mg/kg nakon 30 min, 60 min i 120 min. Vrednosti šećera u krvi u grupi sa Jedinjenjem 6-46,1 mg/kg i Jedinjenjem 7-48,6 mg/kg bile su značajno niže od grupe sa HMS5552-40 mg/kg posle 15 min, 30 min, 60 min i 120 min.

[0617] AUC<0-120 min>svih grupa sa niskim, srednjim i visokim dozama HMS5552, jedinjenja 3, jedinjenja 6 i jedinjenja 7 bile su značajno niže nego kod kontrolne grupe koja je primala nosač, sa odnosom doza-odgovor. AUC<0-120 min>u grupama tretiranim Jedinjenjem 3, Jedinjenjem 6 i Jedinjenjem 7 pri srednjim i visokim nivoima doze bile su značajno niže nego u odgovarajućim grupama HMS5552 (P<0,01).

[0618] Rezultati OGTT pokazuju da su sva test jedinjenja pokazala dobar efekat snižavanja glukoze kod miševa.

[0619] Rezultat testa insulina je prikazan na slici 6. Slika 6 pokazuje da su nivoi insulina u kontrolnoj grupi koja je primala nosač bili 0,13±0,02 (µg/L) u 0 min i 0,50±0,05 (µg/L) u 15 min. Nivoi insulina u grupama sa HMS5552 bili su nešto viši nego u kontrolnoj grupi koja je primala nosač u 0 min i 15 min, bez značajne razlike. Nivoi insulina u grupama sa Jedinjenjem 3-49,1 mg/kg, Jedinjenjem 6-46,1 mg/kg i Jedinjenjem 7-48,6 mg/kg bili su značajno viši nego u kontrolnoj grupi koja je primala nosač i HMS5552-40 mg/kg u 0 min. Nivoi insulina u grupi sa Jedinjenjem 3-18,4 mg/kg, grupi sa Jedinjenjem 3-49,1 mg/kg, grupi sa Jedinjenjem 6-46,1 mg/kg, grupi sa Jedinjenjem 7-18,2 mg/kg i grupi sa Jedinjenjem 7-48,6 mg/kg bili su značajno viši nego u kontrolnoj grupi sa nosačem nakon 15 minuta. Nivoi insulina u grupi sa Jedinjenjem 3-18,4 mg/kg, grupi sa Jedinjenjem 6-46,1 mg/kg i grupi sa Jedinjenjem 7-48,6 mg/kg bili su značajno viši nego u odgovarajućim grupama sa HMS5552 posle 15 minuta.

[0620] Ova studija pokazuje da sva test jedinjenja ovog pronalaska imaju dobar efekat snižavanja glukoze kod C57BL/6J miševa. Jedinjenje 3, jedinjenje 6 i jedinjenje 7 dovode do povećane sekrecije insulina i većeg efekta snižavanja glukoze u poređenju sa HMS5552.

[0623] 4

Claims (15)

1. Patentni zahtevi

1. Jedinjenje formule (II-1), (II-2), (II-3) ili (II-4), ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:

ili

pri čemu:

R<3>je izabran od C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila, koji je opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4 ili 5 R grupa;

4

R je nezavisno izabran od H, -L-halogena, -L-CN, -L-NO<2>, -L-OR<a>, -L-SR<a>, -L-NR<b>R<c>, -L-C(O)OR<a>, -L-C(O)NR<b>Rc, -L-S(O)<m>OR<a>, -L-S(O)<m>NR<b>R<c>, C<1-6>alkila, C<1-6>haloalkila, C<2-6>alkenila, ili C<2-6>alkinila;

pri čemu, m je 1 ili 2;

R<a>je nezavisno izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila;

R<b>i R<c>su nezavisno izabrani od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila; alternativno, R<b>i R<c>zajedno sa atomom azota formiraju 3- do 7-člani heterociklil; i

L je izabran od hemijske veze, -C<1-6>alkilen-, -C<2-6>alkenilen-, ili -C<2-6>alkinilen-.

2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu

R<3>je izabran od C<6-10>arila ili 5- do 6-članog heteroarila, koji je opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4 ili 5 R grupa;

R je nezavisno izabran od H, halogena, -CN, -NO<2>, -OH, -SH, -NH<2>, -C(O)OH, -C(O)NH<2>, -S(O)<m>OH, -S(O)<m>NH<2>, C<1-6>alkila, C<1-6>haloalkila, C<2-6>alkenila, ili C<2-6>alkinila; i

pri čemu, m je 1 ili 2.

3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu

R<3>je izabran od fenila, naftila, pirolila, furila, tienila, imidazolila, pirazolila, oksazolila, izoksazolila, tiazolila, izotiazolila, triazolila, oksadiazolila, tiadiazolila, tetrazolila, piridila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, triazinila ili tetrazinila, koji je opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4 ili 5 R grupa;

R je nezavisno izabran od H, halogena, -CN, -NO<2>, -OH, -SH, -NH<2>, -C(O)OH, -C(O)NH<2>, -S(O)<m>OH, ili -S(O)<m>NH<2>; i

pri čemu, m je 1 ili 2.

4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu

R<3>je izabran od fenila, piridila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, triazinila ili tetrazinila, koji je opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 R grupe; i

R je nezavisno izabran od H, halogena, -CN, -NO<2>, -OH, -SH ili -NH<2>.

4

5. Jedinjenje formule (III-1), (III-2), (III-3) ili (III-4), ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je:

ili

pri čemu:

R<9>je izabran od H, -L-halogena, -L-CN, -L-NO<2>, -L-OR<a>, -L-SR<a>, -L-NR<b>R<c>, -L-C(O)OR<a>, -L-C(O)NR<b>Rc, -L-S(O)<m>OR<a>, -L-S(O)<m>NR<b>R<c>, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, 5- do 10-članog heteroarila ili bočnog lanca prirodne aminokiseline;

pri čemu, m je 1 ili 2;

R<a>je nezavisno izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila; R<b>i R<c>su nezavisno izabrani od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, ili 5- do 10-članog heteroarila; alternativno, R<b>i R<c>zajedno sa atomom azota formiraju 3- do 7-člani heterociklil; i

L je izabran od hemijske veze, -C<1-6>alkilen-, -C<2-6>alkenilen-, ili -C<2-6>alkinilen-.

6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<9>je izabran od H, C<1-6>alkila, C<2-6>alkenila, C<2-6>alkinila, C<1-6>haloalkila, C<3-7>cikloalkila, 3- do 7-članog heterociklila, C<6-10>arila, 5- do 10-članog heteroarila ili bočnog lanca prirodne aminokiseline.

7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<9>je bočni lanac prirodnih aminokiselina izabranih iz grupe koja se sastoji od glicina, alanina, valina, leucina, izoleucina, fenilalanina, triptofana, tirozina, asparaginske kiseline, asparagina, glutaminske kiseline, lizina, glutamina, metionina, serina, treonina, cisteina, histidina i arginina.

8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, R<9>je bočni lanac alanina (Me) ili bočni lanac valina (iPr).

9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je:

,

10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je:

1

11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je:

12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, jedinjenje je:

13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili 12, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu, farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja je:

,

2

14. Farmaceutska kompozicija, koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-13, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereoizomer ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; i opciono jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.

15. Jedinjenje kako je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 1-13, ili njegov izotopski obeležen proizvod, enantiomer, dijastereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija kako je definisana u patentnom zahtevu 14, za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanja jedne ili više bolesti izabranih od dijabetes melitusa tipa I, dijabetes melitusa tipa II, poremećene tolerancije na glukozu, poremećene glukoze u krvi pri gladovanju, hiperglikemije, postprandijalne hiperglikemije, prekomerne težine, gojaznosti, hipertenzije, insulinske rezistencije i metaboličkog sindroma, opciono pri čemu lečenje dijabetesa melitusa tipa I ili dijabetes melitusa tipa II sadrži lečenje dijabetesa, indukovanje remisije ili regresije dijabetesa.