RU1781299C - Способ идентификации возбудител брюшного тифа - Google Patents
Способ идентификации возбудител брюшного тифаInfo
- Publication number
- RU1781299C RU1781299C SU904908092A SU4908092A RU1781299C RU 1781299 C RU1781299 C RU 1781299C SU 904908092 A SU904908092 A SU 904908092A SU 4908092 A SU4908092 A SU 4908092A RU 1781299 C RU1781299 C RU 1781299C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lactose
- media
- medium
- cultures
- column
- Prior art date
Links
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 244000052769 pathogen Species 0.000 title 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 title 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims abstract description 28
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 claims abstract description 19
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 8
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- ZPLCXHWYPWVJDL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,3-oxazolidin-2-one Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1CC1NC(=O)OC1 ZPLCXHWYPWVJDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 230000001523 saccharolytic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims description 3
- 230000019086 sulfide ion homeostasis Effects 0.000 claims description 3
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 7
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 abstract description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 abstract description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 abstract description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 abstract description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 108010068101 thiosulfate-dithiol sulfurtransferase Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 abstract 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 abstract 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 abstract 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 53
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 6
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- UZVUSORDFOESJG-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-3-methyl-6-propan-2-ylphenol Chemical compound CC(C)C1=CC=C(C)C(Br)=C1O UZVUSORDFOESJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003616 anti-epidemic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001480 arabinoses Chemical class 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000025938 carbohydrate utilization Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000911 decarboxylating effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000006160 differential media Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000010227 enterocolitis Diseases 0.000 description 1
- 238000013100 final test Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 235000019239 indanthrene blue RS Nutrition 0.000 description 1
- UHOKSCJSTAHBSO-UHFFFAOYSA-N indanthrone blue Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=CC=C4NC5=C6C(=O)C7=CC=CC=C7C(=O)C6=CC=C5NC4=C3C(=O)C2=C1 UHOKSCJSTAHBSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 239000001976 selenite broth Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical class [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 150000003742 xyloses Chemical class 0.000 description 1
- 238000004383 yellowing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: микробиологи , идентификаци энтеробактерий, бактериологическа диагностика. Сущность изобретени : на комбинированных 2 и 3 сахарных средах дополнительно отбирают лактозоположи- тельные. не образующие газ и сероводород культуры. Пересевают их на скошенную со столбиком лактозную среду, содержащую (г/л): агар 8,9; пептон 2-3; углевод 10-15; натри хлорид 4-5; кали дигидрофосфат 0,3-0,4; натри тиосульфат 0,2-0,3, бромти- моловый синий (0,2%-ный водный раствор) 11-12 мл, вода дистиллированна до 1 л, рН 7,2-7,4. Инкубируют посевы 24-72 ч при 37°С, отбирают культуры, дающие лактозо- отрицательную реакцию, пересевают их на дифференцирующий биохимический р д,- определ ют серологические и фаголиза- бельные свойства и индентифицируют культуры по совокупности признаков, характерных дл бактерий брюшного тифа. Способ дает возможность вы вл ть ранее не диагносцируемую известным способом- значительную группу типичных бактерий брюшного тифа с несколько сниженной в пределах естественной вариабельности активностью протеолитических ферментов и фермента тиосульфатредуктазы. 5 табл. (Л С
Description
Изобретение относитс к микробиологии и может быть использовано при идентификации энтеробактерий.
Известен классический способ идентификации возбудител брюшного тифа, вы- бранный нами за прототип (Методические указани по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактери ми .
Способ осуществл етс путем посева исследуемого материала на среды обогащени с последующим пересевом на селектив- ные пластинчатые среды, посевом выросших лактозоотрицательных колоний на 2-или 3-сахарные комбинированные среды и идентификацией культур по совокупности биохимических, серологических и фаго- лизабельных свойств.
Недостатком данного способа вл етс невозможность диагностировать значи- тельную группу типичных бактерий брюшного тифа с несколько сниженной в пределах естественной вариабельности протеолитической активностью фермента тиосульфатредуктазы, дающих на комбинированных средах ложноположительную оценку лактозного признака и ложноотри- цательную - признака продукции сероводорода .
Целью изобретени вл етс повышение точности способа.
v| 00
Ю Ю
ю
Цель достигаетс путем дополнительного отбора из комбинированных средах лактозоположительных, не образующих газ и сероводород культур, пересева на скошенную со столбиком лактозную среду, содержащую , г/л:
Агар8-9
Пептон2-3
Углевод10-15
Натри хлорид4-5
Кали дигидрофосфат0 ,3-0,4
Натри тиосульфат0,2-0,3
Бромтимоловый синий (0,2% водный раствор)11-12
Вода дистиллированна до 1 л рН 7,2-7,4. инкубировани посева при 37°С (24-72 ч), пересева культур, учтенных на предлЪжен- ной среде как лактозоотрицательные, на среды биохимического р да, в котором са- харолитические свойства определ ют на скошенных со столбиком моноуглеводных средах (маннит, сахароза, дульцит, араби- ноза и др.), а признак образовани сероводорода на среде типа Клиглера при культивировании при 37°С не менее 4-5 суток с ежедневным контролем, определени серологических и фаголизабельных признаков и идентификации культуры по совокупности признаков, характерных дл Salmonella typhi.
Пример 1. Исследуемый материал засевают в среды накоплени , инкубируют в течение 18-24 часов при 37°С. Пересевают на пластинчатые селективные среды. Культивируют при 37°С в течение 20-24 часов. Выросшие лактозоотрицательные колонии пересевают на 2-х или 3-х сахарные комбинированные среды типа Клиглера. Культивируют при 37°С в течение суток. Отбирают лэктозоположительные, не образующие газ и сероводород культуры и пересевают их на скошенную со столбиком лактозйую питательную среду, содержащую, г/л: Агар8-9
Пептон2-3
Углевод10-15
- Натри хлорид 4-5
Кали дигидрофосфат0 ,3-0,4
Натри тиосульфат 0,2-0,3 Бромтимоловый синий (0,2 %-ный водный раствор)11-12
Вода дистиллированна до 1 л рН7,2-7.4
Посевы инкубируют 24-72 ч при 37°С, отбирают лактозоотрицательные культуры, засевают их на биохимический р д, в котором расщепление маннита, сахарозы,
5 ксилозы, арабинозы, дульцита, сорбита определ ют посевом на скошенные со столбиком моноуглеводные среды, а продукцию сероводорода инкубированием культуры на среде Клиглера с ежедневным контролем не
0 менее 4-5 сут. Определ ют серологические и фаголизабельные признаки и идентифицируют культуру по совокупности всех признаков .
П р и м е р 2. Приготовление моноугле5 водной скошенной со столбиком среды.
Навеску хлорида натри , углевода, пептона и двухзамещенного фосфата кали , гипосульфита предварительно раствор ют в небольшом количестве дистиллированной
0 воды. В оставшейс дистиллированной воде при помешивании и подогревании до закипани раствор ют агар. Затем все ингредиенты соедин ют, перемешивают и добавл ют индикатор. Устанавливают
5 ,2-7,4. Разливают в пробирки по 7-8 мл, стерилизуют при 0,5 избыточной атмосферы при 112°С в течение 20 мин. После стерилизации пробирки оставл ют в слегка наклонном положении дл получени ско0 шейного столбика. В готовом виде среда имеет трав нистый цвет.
Применение среды: Испытуемую культуру засевают штрихом по скосу и уколом в столбик среды. После культивировани при
5 37°С в течение суток производ т учет теста. В зависимости от степени активности определ емого сахаролитического фермента к моменту учета возможны следующие варианты:
0 При высокой степени активности - среда в скосе и в столбике; колонии на скосе окрашиваютс в желтый цвет.
При средней степени активности - в желтый цвет окрашиваютс лишь колонии
5 на скошенной части среды.
При слабой степени активности в случае замедленной ферментации среда сохран ет зеленую окраску и окончательно тест следует учесть через 48-72 часа.
0 Из данных табл. 2 видно, что у некоторых испытуемых культур ферментаци углеводов (лактозы) происходит только в относительно анаэробных услови х столбика среды. В этом случае тест оценивают как
55 положительный при (переходе окраски в столбике среды из зеленой в рко-желтую при одновременном по влении синей окраски в скошенной части. Газообразование учитывают в столбике по по влению пу- зырьков, разрывов среды.
Энтеробактерии, не расщепл ющие соответствующий углевод, окрашивают скос среды в синий цвет за счет образующихс в небольшом количестве щелочных продуктов протеолиза, более интенсивно протека- ющего в аэробных услови х скоса. Сохранение зеленой окраски или слабое неспецифическое пожелтение столбика при одновременном окрашивании скоса среды в синий цвет оценивают как отсутствие со- ответствующего фермента у испытуемых бактерий.
ПримерЗ. Среда с минимальными значени ми ингредиентов.
Среду готов т по примеру 2. Получен- на среда имеет следующий состав, г/л: Агар8
Пептон2
Лактоза10
Натри хлорид4
Натри тиосульфат0,2
Кали дигидрофосфат0,3
Бромтимоловый синий (0,2% водный
раствор)11
Вода дистиллированна До 1 л
рН7,2-7,4
Данные по идентификационным свойствам среды см. в табл. 1.
П р и м е р 4. Среда с оптимальными значени ми ингредиентов.
Среду готов т по примеру 2. Полученна среда имеет следующий состав, г/л: Агар8,5
Пептон2,5
Лактоза12,5
Натри хлорид4,5
Тиосульфат натри 0,25
Кали дигидрофосфат0,35
Бромтимоловый
синий (0,2 %-ный водный раствор)11,5
Вода дистиллированна до 1 л
рН7,2-7,4
Данные по идентификационным свой- ствам среды см. в табл. 1.
П р и м е р 5. Среда с максимальными
значени ми ингредиентов.
Среду готов т по примеру 2. Получен-
на среда имеет следующий состав (г/л): Агар9
Пептон3
Лактоза15
Натри хлорид5
Натри тиосульфат0,3
Кали дигидрофосфат0,4
Бромтимоловый синий12
Вода дистиллированна До 1 л
рН7,2-7,4
Из данных табл.1 видно, что оптимальным вл етс следующий состав среды, г/л: Агар8-9
Пептон .2-3
Углевод10-15
Натри хлорид4-5
Кали дигидрофосфат0,3-0,4
Натри тиосульфат0,2-0,3
Бромтимоловый синий (0,2% водный раствор)11-12
Вода дистиллированна До 1 л
рН7.2-7,4
Уменьшение концентрации ингредиентов неблагопри тно дл жизнеде тельности и вы влени ферментативных способностей микробов. Увеличение концентрации ингредиентов ведет к чрезмерному осмотическому давлению в среде, что также затрудн ет жизнеде тельность и вы вление ферментативной способности микроорганизмов.
Из сравнительных данных табл. 2, 3 на приме е определени расщеплени лактозы на х реде Гисса с лактозой, среде Клигле- ра и предлагаемой скошенной среде с лакто ой видно, что последн обладает на- ибол- шей чувствительностью.
Из данных табл. 3 видно, что дл ферментации углеводов (лактозы) у некоторых энтеробактерий имеет значение степень анаэробности условий. Дл доказательства этого положени испытуемые культуры, учтенные на среде Клиглера как лактозоотри- цательные, пересевают дл оценки лактозного теста на скошенную со столбиком агаризованную среду Гисса с лактозой (г. Махачкала НИИ по производству питательных сред) и скошенную со столбиком лактозовую среду.
П р и м е р 6. Сравнительна оценка ферментации лактозы на средах Клиглера, Гисса и скошенной лактозной среде (табл.2). Пример. Вли ние на метаболизм лактозы аэробных (скос среды) и относительно анаэробных условий (столбик среды ) (табл.3).
Дл сохранени форм скошенный столбик в среду Гисса при приготовлении добавл ют в количестве 8 г/л агар.
Основыва сь на полученных данных, представленных в таблице 2 и 3, можно утверждать, что использование скошенной со столбиком моноуглеводной среды позвол ет более достоверно определить расщепление углеводов при вариабельной активности соответствующего фермента, получить полуколичественную оценку теста и определить ферментативный (в относительно анаэробных услови х столбика) и респираторный (в услови х скошенной части) характер утилизации углеводов.
Более чем семикратна разница в концентрации углевода и пептона позвол ет избежать маскирующего вли ни щелочных продуктов протеолиза и создать преимущественные услови дл образующихс кислых продуктов расщеплени углеводов .
ПримерЗ. Вли ние срока экспозиции на продукцию сероводорода у штаммов S. typhl на среде Клиглера.
П р и м е р 9. Вли ние срока экспозиции на защелачивание скошенной части Клиглера при культивировании S. typhi.
Таким образом срок экспЪзиции культур S. typhi на средах типа Клиглера в 4-5 сут вл етс оптимальным, т.к. он достаточен дл вы влени признака образовани сероводорода. Уменьшение срока ведет к ложноотрицательной оценке признака образовани Сероводорода; увеличение экспозиции может привести к гибели культуры.
Примерю. У больного В., у которого при оперативном вмешательстве установлена перфораци кишечника с подозрением на брюшнотифозную этиологию, была вз та проба крови в количестве 12 мл. Произведен посев в 150 мл желчного бульона. Через 48 часов инкубации при 37°С был произведен высев из желчного бульона на-среду Эндо. Через 18 чёсов инкубировани при 37°С на среде Эндо выросли мелкие бесцветные колонии , которые были пересе ны на комбинированную дифференциальную среду Олькельницкого. Через 24 часа инкубировани при 37°С на скосе среды выросли мелкие изолированные колонии. Скос и столбик среды изменили розовую окраску на желтую , газообразование и продукци сероводорода отсутствовали. Культуры были оценены как ферментирующие глюкозу, лактозу, не продуцирующие газ и сероводород и не подлежащие дальнейшему исследованию согласно общеприн той схеме классического способа.
Культуры были пересе ны на скошенную со столбиком лактозную среду, см. пример 1. Через 24 ч инкубировани при 37 С культура была оценена как лактозоотрица- тельна (см. пример 2) и пересе на на среду Олькельницкого и среды биохимического дифференцирующего р да, в котором оценка теста расщеплени углеводов производилась на скошенных со столбиком углеводных средах с соответствующими углеводами (ман- нит, сахароза, дульцит, ксилоза, арабиноза, сорбит, рамноза).
Через 72 ч инкубировани культуры на среде Олькельницкого отмечалось защелачивание скошенной части среды и продуцирование сероводорода.
После оценки тестов на средах дифференцирующего р да культуры были оценены
как неферментирующие лактозу, сахарозу, дульцит, рамнозу, ферментирующие глюкозу , ксилозу, арабинозу, маннит, сорбит, де- карбоксилирующие лизин, не образующие индол, не утилизирующие цитрат и малонат
натри , продуцирующие сероводород, подвижные грамотрицательные палочки, агглютинирующиес сальмонеллезной сывороткой 09 и VI, Hd, лизирующиес брюшнотифозным бактериофагом.
По совокупности этих признаков они были идентифицированы как бактерии брюшного тифа, что нашло подтверждение после повторной идентификации в Ростов- ской-на-Дону областной баклаборатории,
где выделенна культура была отнесена к фаговару Е I, второму ферментативному типу .
Указанный пример иллюстрирует веро тность диагностической ошибки при использовании комбинированных сред и повышение точности исследовани при применении предложенного способа.
П р и м е р 11. Проба мочи в количестве 50 мл доставлена в лабораторию при обследовании Н, общавшегос с больным В.
Был произведен пр мой посев на среду Плоскирева, Эндо. Через 20 ч на этих средах выросли мелкие бесцветные колонии, которые были пересе ны на среду Клиглера, инкубировались при 37°С. Через 24 ч сн тые культуры были оценены как лактозоположи- тельные, не образующие газ и сероводород. Культуры были пересе ны на лактозную скошенную со столбиком среду и культивировались при 37°С в течение 24 ч и были оценены как лактозоотрицательные. Культуры были вновь пересе ны на среду типа Клиглера (предпри тие центрального НИИВС им. И. И. Мечникова) и среды биохимического дифференцирующего р да. Через 48 часов инкубировани на среде Клиглера отмечалось защелачивание скоса среды и продукци сероводорода .
По результатам испытани на средах
дифференцирующего р да, включа скошенные со столбиком моноуглеводные среды, культуры по совокупности биохимических, серологических и фаголизабельных признаков были оценены как брюшнотифозные. После
повторной идентификации в Ростовской- на-Дону областной баклаборатории культура была отнесена к фаговару Е, второму ферментному типу.
П р и м е р 12. Проба испражнений
больного энтероколитом в количестве 1 г
была засе на в селенитовый бульон на чашки со средой Плоскирева и Эндо. Через 20 часов инкубации при 37°С на среде Эндо и Плоскирева выросли мелкие бесцветные колонии , которые были пересе ны на среду типа Клиглера. Культуры культивировались при 37°С 24 ч и были учтены как лактозопо- ложительные, не образующие газ и сероводород , и пересе ны на скошенную со столбиком лактозную среду. Через 24 ч куль- тивировани при 37°С культура была учтена как лактозоположительна и не подлежаща дальнейшей идентификации на бактерии брюшного тифа.
Этот пример иллюстрирует, что в дан- ном случае оценка лактозного теста на среде Клиглера была достоверной.
Таким образом, использование предлагаемого способа дает возможность вы вл ть путем дополнительного отбора на 2-й 3-сахарном агаре лактозоположительных, не образующих газ и сероводород культур, и пересева их на лактозную скошенную со столбиком питательную среду, ранее не диагносцируемую значительную группу бактерий брюшного тифа и назначить соответствующее этиотропное лечение и провести своевременно необходимые противоэпидемические меропри ти .
Claims (1)
- Формула изобретениСпособ идентификации возбудител брюшного тифа путем посева исследуемогоматериала на среды обогащени с последующим пересевом на селективные пластинчатые среды, пересевом выросших лактозоотрицательных колоний на двух-или трехсахарные среды и идентификацией культур по совокупности биохимических, серологических и фаголизабельных свойств, отличающийс тем, что, с целью повышени точности способа, дополнительно отбирают на комбинированных средах первичной идентификации лактозоположи- тельные, не образующие газ и сероводород культуры, пересевают на скошенную со столбиком лактозную среду, содержащую, г/л:Агар8-9Пептон2-3Углевод10-15Натри хлорид4-5Кали дигидрофосфат0,3-0,4Натри тиосульфат0,2-0,3Бромтимоловый синий 0,2-ный водный раствор11-12Вода дистиллированна до 1 лрН7,2-7,4,инкубируют в течение 24-72 ч, отбирают лактозоотрицательные культуры, определ ют сахаролитические свойства на скошенных со столбиком моноуглеводных средах, а продукцию сероводорода - на средах типа Клиглера в течение 24-120 ч.Данные по идентификационным свойствам средыТаблица 1Таблица 2Проодолжение табл.2Таблица 3Таблица 4Таблица 5
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU904908092A RU1781299C (ru) | 1990-11-27 | 1990-11-27 | Способ идентификации возбудител брюшного тифа |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU904908092A RU1781299C (ru) | 1990-11-27 | 1990-11-27 | Способ идентификации возбудител брюшного тифа |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU1781299C true RU1781299C (ru) | 1992-12-15 |
Family
ID=21558756
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU904908092A RU1781299C (ru) | 1990-11-27 | 1990-11-27 | Способ идентификации возбудител брюшного тифа |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU1781299C (ru) |
-
1990
- 1990-11-27 RU SU904908092A patent/RU1781299C/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Методические указани по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактери ми, М., 1984, с. 24-35. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wesley Catlin | Nutritional profiles of Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, and Neisseria lactamica in chemically defined media and the use of growth requirements for gonococcal typing | |
| US6046021A (en) | Comparative phenotype analysis of two or more microorganisms using a plurality of substrates within a multiwell testing device | |
| Busse | Media for salmonella | |
| Difco Laboratories | Difco manual of dehydrated culture media and reagents for microbiological and clinical laboratory procedures | |
| Ewing | Enterobacteriaceae: Biochemical methods for group differentiation | |
| Ewing et al. | Media and tests for differentiation of Enterobacteriaceae | |
| Winslow et al. | Studies on the classification of the colon-typhoid group of bacteria with special reference to their fermentative reactions | |
| Seleen et al. | Some characteristics of green-fluorescent pigment-producing bacteria | |
| Ayers et al. | The Streptococci of the Bovine Udder: IV. Studies of the Streptococci | |
| Gaby | Study of Dissociative Behavior of Pseudomonas aeruginos | |
| US5882882A (en) | Gel matrix with redox purple for testing and characterizing microorganisms | |
| Rosan et al. | Hyaluronidase production by oral enterococci | |
| Clarke | A simplified plate method for detecting gelatine-liquefying bacteria | |
| Gunn et al. | Comparison of methods for identifying Staphylococcus and Micrococcus spp | |
| Stillman et al. | Biological study of the hemophilic bacilli | |
| RU1781299C (ru) | Способ идентификации возбудител брюшного тифа | |
| RU2734940C1 (ru) | Способ дифференциации бактерий Vibrio cholerae от бактерий представителей рода Aeromonas | |
| Moench et al. | Analysis of the Fecal Flora in Thirty-Three Cases of Pernicious Anemia: With Particular Reference to B. welchii | |
| RU2268932C2 (ru) | Питательная среда для первичной дифференциации условно-патогенных энтеробактерий | |
| McIver et al. | Assessment of conventional and commercial methods for identification of clinical isolates of cysteine-requiring strains of Escherichia coli and Klebsiella species | |
| Horrocks | The Bacillus coli communis; considered as an indication of sewage contamination of water supplies | |
| RU2077576C1 (ru) | Питательная среда для выделения и культивирования гонококка | |
| BROADHURST et al. | Thirty-second annual meeting of the society of american bacteriologists | |
| Brown et al. | Rapid identification of enterococci | |
| Rappaport et al. | UMAGIS Medium—A Medium for Single-Tube Differentiation of Enteric Bacteria |