RU2003103779A

RU2003103779A - Экспрессионная система

Info

Publication number: RU2003103779A
Application number: RU2003103779/13A
Authority: RU
Inventors: Этел Дайан УИЛЛЬЯМСОН; Джули МИЛЛЕР; Никола Джейн УОЛКЕР; Лесли Вилльям Джеймс БЭЙЛЛИ; Паула Томсон ХОЛДЕН; Хелен Клэйр ФЛИК-СМИТ; Хелен Лайза БАЛЛИФЕНТ; Ричард Вилльям ТИТБОЛЛ; Эндрю Вилльям ТОППИНГ
Original assignee: Дзе Секретэри Оф Стейт Фор Дефенс Дстл
Priority date: 2000-07-08
Filing date: 2001-07-06
Publication date: 2004-08-20

Claims

1. Иммуногенный реагент, который вызывает иммунный ответ, который является защитным от Bacillus anthracis, отличающийся тем, что указанный реагент содержит один или более полипептидов, которые вместе представляют до трех доменов или их варианты полноразмерного защитного антигена (РА) B.anthracis, и по меньшей мере один из указанных доменов включает в себя домен 1 или домен 4 РА или его вариант.

2. Иммуногенный реагент по п.1, который включает в себя домен 4 РА из B.anthracis.

3. Иммуногенный реагент по п.1 или 2, который включает в себя комбинацию доменов 1 и 4 или их защитные участки.

4. Иммуногенный реагент по п.3, который включает в себя последовательность домена 1 или домена 4 из РА дикого типа.

5. Иммуногенный реагент по п.4, где указанные домены представлены в виде слитого полипептида.

6. Иммуногенный реагент по п.5, который включает в себя домен 1, слитый с доменом 2 из указанной РА-последовательности.

7. Иммуногенный реагент по п.6, который слит с доменом 3 указанной РА-последовательности.

8. Иммуногенный реагент по п.4, который содержит смесь полипептидов, один из которых включает в себя домен 1 и один из которых включает в себя домен 4 указанной РА-последовательности.

9. Иммуногенный реагент по любому из предшествующих пунктов, где полипептид слит еще с одним полипептидом.

10. Иммуногенный реагент по п.9, где указанный еще один полипептид представляет собой глутатион-S-трансферазу (GST).

11. Нуклеиновая кислота, которая кодирует полипептид из иммуногенного реагента по любому из предшествующих пунктов.

12. Экспрессирующий вектор, включающий в себя нуклеиновую кислоту по п.11.

13. Клетка, трансформированная вектором по п.12.

14. Способ получения иммуногенного полипептида, который вызывает иммунный ответ, который является защитным от B.anthracis, отличающийся тем, что указанный способ включает себя трансформирование E.coli-хозяина нуклеиновой кислотой, которая кодирует либо (а) защитный антиген (РА) из Bacillus anthracis или его вариант, который может вызывать защитный иммунный ответ, либо (b) защитный домен защитного антигена (РА) из Bacillus anthracis или его вариант, который может вызывать защитный иммунный ответ, культивирование трансформированного хозяина и извлечение иммуногенного полипептида из него, при условии, что в тех случаях, когда полипептид представляет собой защитный антиген (РА) из Bacillus anthracis или его вариант, который может вызывать защитный иммунный ответ, процентная доля остатков гуанидина и цитозина в вышеуказанной нуклеиновой кислоте превышает 35%.

15. Способ по п.14, где указанная нуклеиновая кислота кодирует защитный антиген (РА) из Bacillus anthracis или его вариант, который может вызывать защитный иммунный ответ.

16. Способ по п.15, где процентная доля остатков гуанидина и цитозина в вышеуказанной нуклеиновой кислоте превышает 45%.

17. Способ по п.16, где процентная доля остатков гуанидина и цитозина в указанной нуклеиновой кислоте составляет от 50-52%.

18. Способ по п.14, где указанная нуклеиновая кислота кодирует защитный домен защитного антигена (РА) из Bacillus anthracis или его вариант, который может вызывать защитный иммунный ответ.

19. Способ по п.18, где указанный домен представляет собой домен 1 и/или домен 4 из РА B.anthracis.

20. Рекомбинантная клетка Escherichia coli, которая была трансформирована нуклеиновой кислотой, которая кодирует указанный защитный антиген (РА) из Bacillus anthracis или его вариант, который может вызывать защитный иммунный ответ, и отличающаяся тем, что процентная доля остатков гуанидина и цитозина в нуклеиновой кислоте превышает 35%.

21. Рекомбинантная клетка Escherichia coli по п.20, отличающаяся тем, что процентная доля остатков гуанидина и цитозина в указанной нуклеиновой кислоте превышает 45%.

22. Рекомбинантная клетка Escherichia coli по п.21, отличающаяся тем, что процентная доля остатков гуанидина и цитозина в указанной нуклеиновой кислоте превышает 50-52%.

23. Рекомбинантная клетка E. coli по п.20, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота представляет собой SEQ ID NO 1, которая приведена на фигуре 2, или ее модифицированную форму.

24. Рекомбинантная клетка E.coli по п.23, где указанная нуклеиновая кислота представляет собой SEQ ID NO 1.

25. Рекомбинантная клетка Escherichia coli, которая трансформирована нуклеиновой кислотой, которая кодирует защитный домен указанного защитного антигена (РА) из Bacillus anthracis или его вариант, который может вызывать защитный иммунный ответ.

26. Рекомбинантная клетка по п.25, где нуклеиновая кислота кодирует домен 1 или домен 4 РА из B.anthracis.

27. Способ получения полипептида, который вызывает иммунный ответ, который является защитным от B.anthracis, отличающийся тем, что указанный способ включает в себя культивирование клетки по любому из пп.20-26 и извлечение защитного полипептида из данной культуры.

28. Вектор, трансформирующий E. coli, включающий в себя нуклеиновую кислоту, которая кодирует защитный антиген (РА) из Bacillus anthracis или его вариант, который может вызывать защитный иммунный ответ, и отличающийся тем, что процентная доля остатков гуанидина и цитозина в указанной нуклеиновой кислоте превышает 35%.

29. Вектор, трансформирующий E.coli, включающий в себя нуклеиновую кислоту, которая кодирует защитный домен защитного антигена (РА) из Bacillus anthracis или его вариант, который может вызывать защитный иммунный ответ.

30. Нуклеиновая кислота SEQ ID NO 1 или ее модифицированная форма, которая кодирует РА или его вариант, который вызывает защитный иммунный ответ, и которая имеет по меньшей мере 35%-ное содержание GC.

31. Нуклеиновая кислота по п.30, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO 1.

32. Нуклеиновая кислота по п.31, которая содержит SEQ ID NO 1.

33. Способ предупреждения или лечения инфекции, вызванной B.anthracis, отличающийся тем, что указанный способ включает в себя введение млекопитающему в случае необходимости достаточного количества иммуногенного реагента по любому из пп.1-10.

34. Иммуногенный реагент по любому из пп.1-10 в качестве активного ингредиента при получении лекарственного средства для профилактики или лечения инфекции B.anthracis.