RU2012148903A

RU2012148903A - Обогащенные фосфолипидами везикулы, несущие тканевой фактор, обладающие гемостатической активностью, и их применения

Info

Publication number: RU2012148903A
Application number: RU2012148903/10A
Authority: RU
Inventors: МОРЕНО Хесус МУРАТ; ФЕРНАНДЕС-АЛЬБА Хуан Рамон РОДРИГЕС
Original assignee: Тромботаргетс Юроп, С.Л.
Priority date: 2010-04-19
Filing date: 2011-04-19
Publication date: 2014-05-27
Also published as: PT2560991E; CN102892781B; CN102892781A; EP2560991B1; CA2796266A1; JP2013525326A; KR101884954B1; KR20130093508A; PL2560991T3; CA2796266C; BR112012026907A2; CY1116940T1; US20130059782A1; MX2012012135A; DK2560991T3; HRP20151145T1; US8735351B2; EP2380905A1; SI2560991T1; HUE025837T2

Abstract

1. Способ получения несущей TF микровезикулы, обладающей прокоагулянтной активностью, включающий:(i) экспрессию TF или его варианта, обладающего прокоагулянтной активностью, в эукариотической клетке,(ii) выделение несущих TF микровезикул из клеток со стадии (i), и(iii) приведение в контакт везикул, полученных на стадии (ii), с отрицательно заряженным фосфолипидом в условиях, подходящих для включения указанного фосфолипида в указанные везикулы,где указанные микровезикулы образованы липидными мембранами или их фрагментами из указанной эукариотической клетки.2. Способ получения несущей TF микровезикулы, обладающей прокоагулянтной активностью, включающий:(i) предоставление липидных микровезикул, полученных из эукариотической клетки,(ii) приведение в контакт TF или его варианта, обладающего прокоагулянтной активностью, с липидными микровезикулами, как определено в (i), в условиях, подходящих для включения указанного белка TF или его варианта в указанные микровезикулы, и(iii) приведение в контакт везикул, полученных на стадии (ii), с отрицательно заряженным фосфолипидом в условиях, подходящих для включения указанных фосфолипидов в указанную везикулу,где стадии (ii) и (iii) могут быть проведены в любом порядке, и указанные микровезикулы образованы липидными мембранами или их фрагментами из указанной эукариотической клетки.3. Способ по п. 1 или 2, в котором эукариотической клеткой является дрожжевая клетка.4. Способ по п. 1 или 2, в котором стадию приведения в контакт проводят, используя 0,05 мкмоль отрицательно заряженных фосфолипидов, когда содержание белка в микровезикулах ниже 50 мкг, и 0,1 мкмоль отрицательно заряженных фосфолипидов, ко

Claims

1. Способ получения несущей TF микровезикулы, обладающей прокоагулянтной активностью, включающий:

(i) экспрессию TF или его варианта, обладающего прокоагулянтной активностью, в эукариотической клетке,

(ii) выделение несущих TF микровезикул из клеток со стадии (i), и

(iii) приведение в контакт везикул, полученных на стадии (ii), с отрицательно заряженным фосфолипидом в условиях, подходящих для включения указанного фосфолипида в указанные везикулы,

где указанные микровезикулы образованы липидными мембранами или их фрагментами из указанной эукариотической клетки.

2. Способ получения несущей TF микровезикулы, обладающей прокоагулянтной активностью, включающий:

(i) предоставление липидных микровезикул, полученных из эукариотической клетки,

(ii) приведение в контакт TF или его варианта, обладающего прокоагулянтной активностью, с липидными микровезикулами, как определено в (i), в условиях, подходящих для включения указанного белка TF или его варианта в указанные микровезикулы, и

(iii) приведение в контакт везикул, полученных на стадии (ii), с отрицательно заряженным фосфолипидом в условиях, подходящих для включения указанных фосфолипидов в указанную везикулу,

где стадии (ii) и (iii) могут быть проведены в любом порядке, и указанные микровезикулы образованы липидными мембранами или их фрагментами из указанной эукариотической клетки.

3. Способ по п. 1 или 2, в котором эукариотической клеткой является дрожжевая клетка.

4. Способ по п. 1 или 2, в котором стадию приведения в контакт проводят, используя 0,05 мкмоль отрицательно заряженных фосфолипидов, когда содержание белка в микровезикулах ниже 50 мкг, и 0,1 мкмоль отрицательно заряженных фосфолипидов, когда содержание белка в микровезикулах выше 50 мкг.

5. Способ по п. 1 или 2, в котором отрицательно заряженный фосфолипид выбран из группы сфингозинсодержащего фосфолипида или глицеринсодержащего фосфолипида.

6. Способ по п. 5, в котором глицеринсодержащим фосфолипидом является фосфатидилсерин.

7. Способ по п. 1 или 2, в котором указанный TF или его вариант, обладающий прокоагулянтной активностью, гликозилирован.

8. Способ по п. 1 или 2, в котором TF является зрелым белком TF, предпочтительно, зрелым белком TF человека.

9. Способ по п. 8, в котором TF несет мутацию N124A и гексагистидиновый tag на С-конце.

10. Несущая TF микровезикула, полученная с использованием способа по п. 1 или 2.

11. Фармацевтическая композиция, содержащая несущую TF микровезикулу по п. 10 и фармацевтически приемлемый наполнитель.

12. Фармацевтическая композиция по п. 11, дополнительно содержащая по меньшей мере стимулятор коагуляции.

13. Фармацевтическая композиция по п. 11, где композиция является лиофилизированной.

14. Способ определения протромбинового времени в образце с использованием несущей TF микровезикулы по п. 10.

15. Набор для определения протромбинового времени, содержащий микровезикулу по п. 10.

16. Способ лечения кровоизлияния, стимуляции заживления ран или лечения связанного с ангиогенезом заболевания путем введения несущей TF микровезикулы по п. 10 нуждающемуся в этом субъекту.

17. Способ по п. 16, в котором лечение кровоизлияния проводят у субъекта, выбранного из группы, включающей здорового субъекта и субъекта с геморрагическим диатезом, где указанный геморрагический диатез выбран из группы коагулопатии, патологии тромбоцитов и их комбинации.

18. Способ по п. 17, в котором несущую TF микровезикулу вводят местно.