RU2013107765A - Производство активной высокофосфорилированной n-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы человека и ее применение - Google Patents
Производство активной высокофосфорилированной n-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы человека и ее применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2013107765A RU2013107765A RU2013107765/10A RU2013107765A RU2013107765A RU 2013107765 A RU2013107765 A RU 2013107765A RU 2013107765/10 A RU2013107765/10 A RU 2013107765/10A RU 2013107765 A RU2013107765 A RU 2013107765A RU 2013107765 A RU2013107765 A RU 2013107765A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- column
- galns
- enzyme
- galns enzyme
- composition
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title 1
- 101001066305 Homo sapiens N-acetylgalactosamine-6-sulfatase Proteins 0.000 claims abstract 61
- 102100031688 N-acetylgalactosamine-6-sulfatase Human genes 0.000 claims abstract 52
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract 22
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 16
- XMTCKNXTTXDPJX-UHFFFAOYSA-N 3-oxoalanine Chemical compound O=CC(N)C(O)=O XMTCKNXTTXDPJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract 14
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract 12
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract 11
- 102000049489 human GALNS Human genes 0.000 claims abstract 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims abstract 9
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims abstract 9
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract 9
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 claims abstract 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract 8
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims abstract 8
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims abstract 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract 7
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims abstract 7
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims abstract 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims abstract 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract 6
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 claims abstract 5
- 102000005262 Sulfatase Human genes 0.000 claims abstract 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims abstract 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims abstract 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims abstract 3
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 claims abstract 3
- 238000001818 capillary gel electrophoresis Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims abstract 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 40
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims 10
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims 10
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims 8
- 238000005498 polishing Methods 0.000 claims 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 7
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims 7
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 claims 7
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 7
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 7
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 claims 7
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims 6
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 claims 6
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims 5
- GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methoxyethoxy)benzohydrazide Chemical compound COCCOC1=CC=CC(C(=O)NN)=C1 GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 claims 4
- 239000013522 chelant Substances 0.000 claims 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims 4
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims 2
- 108010031792 IGF Type 2 Receptor Proteins 0.000 claims 2
- 102000019218 Mannose-6-phosphate receptors Human genes 0.000 claims 2
- 208000025797 Mucopolysaccharidosis type 4A Diseases 0.000 claims 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims 2
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 claims 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims 2
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 claims 2
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 claims 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims 2
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 claims 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 1
- 101710099863 N-acetylgalactosamine-6-sulfatase Proteins 0.000 claims 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims 1
- -1 amino acid salts Chemical class 0.000 claims 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 claims 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 claims 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/06—Sulfuric ester hydrolases (3.1.6)
- C12Y301/06004—N-Acetylgalactosamine-6-sulfatase (3.1.6.4)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
1. Способ очистки рекомбинантного фермента N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом указанный фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и:(i) имеет чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,(ii) имеет по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в C-формилглицин (FGly), и(iii) необязательно имеет от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,и при этом по меньшей мере 97% указанного фермента GALNS представлен в форме предшественника, как это определено SDS-капиллярным гель-электрофорезом (SDS-CGE), включающий:а) фильтрацию питательной среды, содержащей фермент GALNS, секретируемый из линии клеток млекопитающего, экспрессирующей фактор модификации сульфатазы человека 1 (SUMF1) и рекомбинантный фермент GALNS человека, ультрафильтрацию/диафильтрацию профильтрованной питательной среды, и фильтрацию через активированный уголь питательной среды, прошедшей ультрафильтрацию/диафильтрацию;б) загрузку питательной среды, прошедшей фильтрацию активированным углем, ультрафильтрацию/диафильтрацию, из этапа а) в улавливающую колонку, промывание улавливающей колонки в условиях, при которых фермент GALNS удерживается в улавливающей колонке, и элюирование фермента GALNS из удерживающей колонки;в) необязательно, фильтрацию элюата из улавливающей колонки из этапа б) через фильтр для удаления вирусов;г) корректирование уровня рН элюата из улавливающей колонки из этапа б) или фильтрата �
Claims (46)
1. Способ очистки рекомбинантного фермента N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом указанный фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и:
(i) имеет чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,
(ii) имеет по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в Cα-формилглицин (FGly), и
(iii) необязательно имеет от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,
и при этом по меньшей мере 97% указанного фермента GALNS представлен в форме предшественника, как это определено SDS-капиллярным гель-электрофорезом (SDS-CGE), включающий:
а) фильтрацию питательной среды, содержащей фермент GALNS, секретируемый из линии клеток млекопитающего, экспрессирующей фактор модификации сульфатазы человека 1 (SUMF1) и рекомбинантный фермент GALNS человека, ультрафильтрацию/диафильтрацию профильтрованной питательной среды, и фильтрацию через активированный уголь питательной среды, прошедшей ультрафильтрацию/диафильтрацию;
б) загрузку питательной среды, прошедшей фильтрацию активированным углем, ультрафильтрацию/диафильтрацию, из этапа а) в улавливающую колонку, промывание улавливающей колонки в условиях, при которых фермент GALNS удерживается в улавливающей колонке, и элюирование фермента GALNS из удерживающей колонки;
в) необязательно, фильтрацию элюата из улавливающей колонки из этапа б) через фильтр для удаления вирусов;
г) корректирование уровня рН элюата из улавливающей колонки из этапа б) или фильтрата из этапа в) к кислому значению рН, и фильтрацию элюата с кислым скорректированным рН из улавливающей колонки или фильтрата со скорректированным кислым рН;
д) загрузку элюата с кислым скорректированным рН из улавливающей колонки или фильтрата Q с кислым скорректированным рН из этапа г) в промежуточную колонку, промывание промежуточной колонки в условиях, при которых фермент GALNS остается в промежуточной колонке, и элюирование фермента GALNS из промежуточной колонки;
е) корректировку рН элюата из промежуточной колонки из этапа д) к более низкому для вирусной инактивации; и
ж) загрузку элюата с низким рН для вирусной инактивации из этапа е) в полирующую колонку, промывание полирующей колонки в условиях, при которых фермент GALNS удерживается в полирующей колонке, и элюирование фермента GALNS из полирующей колонки.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что питательная среда сконцентрирована примерно в 20 раз на этапе а).
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что фильтр из активированного угля из этапа а) является фильтром с активированным углем Zeta Plus R55.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что улавливающая колонка из этапа б) является колонкой для Zn-иммобилизированной аффинной хроматографии с металлом (Zn-IMAC).
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что колонка Zn-IMAC является Zn-хелатной колонкой с сефарозой FF.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выполняют этап в), фильтр является фильтром Mustang Q.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что значение рН элюата из улавливающей колонки из этапа б) или фильтрата из этапа в) скорректировано на этапе г) до примерно 4,5±0,1.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что промежуточная колонка из этапа д) является катионообменной колонкой.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что катионообменная колонка является колонкой Fractogel EMD SE HiCap.
10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что кислое значение рН для вирусной инактивации корректируют на этапе е) до примерно 3,5±0,1.
11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что полирующая колонка из этапа ж) является хроматографической колонкой с гидрофобным взаимодействием (ХГВ).
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что колонка ХГВ является колонкой ToyoPearl Butyl 650M.
13. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дополнительно включает:
з) буфер-обмен элюата из полирующей колонки из этапа ж) в композицию;
и) удаление любого остаточного вируса и ДНК путем фильтрации подвергнутой буфер-обмену композиции из этапа з) вирусным фильтром и фильтром ДНК; и
к) добавление неоинного сурфактанта к композиции из этапа и).
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что композиция из этапа з) включает 20 мМ NaOAc/HOAc, 50 мМ NaH2PO4, 30 мМ аргинина HCl, 2% (в/о) сорбитол, pH 5,4.
15. Способ по п. 13, отличающийся тем, что фермент GALNS в композиции из этапа з) скорректирован до примерно 3 мг/мл.
16. Способ по п. 13, отличающийся тем, что вирусный фильтр из этапа и) является фильтром DV20 и фильтр ДНК из этапа и) является фильтром Mustang Q.
17. Способ по п. 13, отличающийся тем, что неоионный сурфактант из этапа к) является полисорбатом 20 (ПС20), при этом концентрация ПС20 в финальной композиции составляет 0,01% (в/о).
18. Способ очистки рекомбинантного фермента N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом такой фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27 - 522 последовательности SEQ ID NO:4, и
(i) имеет чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,
(ii) имеет по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в Cα-формилглицин (FGly), и
(iii) необязательно, имеет от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,
и при этом по меньшей мере 97% указанного фермента GALNS представлен в форме предшественника, как это определено путем SDS-CGE, включающий:
а) фильтрацию питательной среды, содержащей фермент GALNS, секретируемый из линии клеток млекопитающего, экспрессирующих фактор модификации сульфатазы человека 1 (SUMF1) и рекомбинантный фермент GALNS человека, ультрафильтрацию/диафильтрацию профильтрованной питательной среды, при этом питательная среда, прошедшая ультрафильтрацию/диафильтрацию, сконцентрирована примерно в 20 раз, и фильтрацию через активированный уголь питательной среды, прошедшей ультрафильтрацию/диафильтрацию и сконцентрированной в 20 раз;
б) загрузку питательной среды, сконцентрированной до 20 раз и прошедшей ультрафильтрацию/диафильтрацию и фильтрацию активированным углем, из этапа а) в Zn-хелатную улавливающую колонку с сефарозой FF, промывание колонки в условиях, при которых фермент GALNS удерживается в колонке, и элюирование фермента GALNS из колонки;
в) необязательно, фильтрацию элюата из Zn-хелатной улавливающей колонки с сефарозой FF из этапа б) через фильтр для удаления вирусов;
г) корректировку рН элюата из Zn-хелатной улавливающей колонки с сефарозой FF из этапа б) или фильтрата из этапа в) до примерно рН 4,5±0,1, и фильтрацию элюата с корректированным рН до 4,5 из Zn-хелатной улавливающей колонки с сефарозой FF или фильтрата;
д) загрузку элюата с скорректированным рН до 4,5 из Zn-хелатной улавливающей колонки FF или фильтрата из этапа г) в катионообменную колонку Fractogel EMD SE Hi-Cap, промывание колонки в условиях, при которых фермент GALNS остается в колонке, и элюирование фермента GALNS из колонки;
е) корректировку рН элюата из катионообменной колонки Fractogel EMD SE Hi-Cap из этапа д) до примерно рН 3,5±0,1 для вирусной инактивации;
ж) загрузку элюата с инактивированными вирусами и рН 3,5 из этапа е) в полирующую колонку ToyoPearl Butyl 650 M, промывание колонки в условиях, при которых фермент GALNS удерживается в колонке, и элюирование фермента GALNS из колонки;
з) буфер-обмен элюата из полирующей колонки ToyoPearl Butyl 650 M из этапа ж) в композицию, включающую 20 мМ NaOAc/HOAc, 50 мМ NaH2PO4, 30 мМ аргинин HCl, 2% (в/о) сорбитол, pH 5,4, и корректировку концентрации фермента GALNS в композиции до примерно 3 мг/мл;
и) удаление любого остаточного вируса и/или ДНК фильтрацией подвергнутой буфер-обмену композиции из этапа з) с фильтром DV20 и фильтром Mustang Q; и
к) добавление полисорбата 20 (ПС20) к композиции из этапа и) до финальной концентрации 0,01% (в/о).
19. Композиция, очищенная способом по п.1 или 18, отличающаяся тем, что включает рекомбинантный фермент N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом указанный фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и:
(i) имеет чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,
(ii) имеет по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в Cα-формилглицин (FGly), и
(iii) необязательно имеет от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,
и при этом по меньшей мере 98% указанного фермента GALNS представлено в форме предшественника, как это определено путем SDS-CGE.
20. Способ лечения субъекта, страдающего мукополисахаридозом типа IVa (МПС IVa) или синдромом Моркио типа А, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества композиции, очищенной по п. 1 или 18 и включающей очищенный рекомбинантный фермент N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом указанный фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и:
(i) имеет чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,
(ii) обладает по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в Cα-формилглицин (FGly), и
(iii) необязательно, имеет от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,
и при этом по меньшей мере 98% указанного фермента GALNS представлен в форме предшественника, как это определено путем SDS-CGE.
21. Композиция, включающая
(а) рекомбинантный фермент N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, включающий аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и
(i) имеющая чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,
(ii) имеющая по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в Cα-формилглицин (FGly), и
(iii) необязательно имеющая от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,
и при этом по меньшей мере 97% указанного фермента GALNS представлено в форме предшественника, как это определено путем SDS-CGE, и
(б) один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ, включающих:
(i) количество фосфатного буфера, эффективного для снижения дефосфорилирования указанного фермента GALNS; и
(ii) стабилизирующее количество одного или более стабилизаторов, выбранных из группы, состоящей из солей аминокислот, буферов аминокислот, сурфактантов и полиолов;
при этом указанная композиция имеет значение рН примерно 5,0-5,8.
22. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что фосфатный буфер в композиции представлен в концентрации между примерно 25 мМ и 75 мМ.
23. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что композиция дополнительно включает второй буфер, необязательно ацетатный буфер.
24. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что стабилизатор является буфером или солью аргинина или гистидина, необязательно аргинина гидрохлоридом.
25. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что стабилизатор является полисорбатом, необязательно полисорбатом 20.
26. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что стабилизатор является трехатомным или высшим сахароспиртом, необязательно сорбитолом.
27. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что включает буфер или соль аргинина, полисорбат и полиол.
28. Способ предотвращения дефосфорилирования рекомбинантного фермента GALNS человека, включающий смешивание фермента GALNS и фосфатного буфера до финальной концентрации фосфатного буфера между примерно 25 мМ и 75 мМ.
29. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что чистота фермента GALNS составляет по меньшей мере 95%, как это определено ОФ-ВЭЖХ.
30. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что от 50% до 80% фермента GALNS связывается с рецептором маннозо-6-фосфата в колонке.
31. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что фермент GALNS обнаруживает захват (K-захват) фибробластами в количестве примерно 1-5 нМ.
32. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что фермент GALNS обнаруживает специфический захват (K-захват) фибробластами в количестве примерно 1-3,5 нМ.
33. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что концентрация фермента GALNS составляет от примерно 0,5 до 1,5 мг/мл.
34. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что буферные агенты являются NaOAc/HOAc и NaH2PO4.
35. Композиция по п. 34, отличающаяся тем, что концентрация NaOAc/HOAc составляет от примерно 10 до 30 мМ, и концентрация NaH2PO4 составляет от примерно 25 до 75 мМ.
36. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что стабилизаторы являются аргинином HCl, Твин-20 и сорбитолом.
37. Композиция по п. 36, отличающаяся тем, что концентрация аргинина HCl составляет от примерно 10 до 50 мМ, концентрация Твин-20 составляет от примерно 0,005% до 0,015% (в/о), а концентрация сорбитола составляет от примерно 1,0% до 3,0% (в/о).
38. Композиция, включающая
(а) рекомбинантный фермент N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом указанный фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и
(i) имеющая чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,
(ii) обладающая по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в Cα-формилглицин (FGly), и
(iii) имеющая от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,
при этом по меньшей мере 97% указанного фермента GALNS представлено в форме предшественника, как это определено окрашиванием Кумасси-синим при проведении анализа SDS-PAGE в восстанавливающих условиях, и
(б) один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ, включающих:
(i) NaOAc/HOAc и NaH2PO4 в качестве буферных агентов;
(ii) аргинин HCl, Твин-20 и сорбитол в качестве стабилизаторов; и
(iii) pH примерно 5,4±0,4.
39. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что чистота фермента GALNS составляет по меньшей мере 95%, как это определено ОФ-ВЭЖХ.
40. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что от 50% до 80% фермента GALNS связывается в колонке с рецептором маннозо-6-фосфата.
41. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что фермент GALNS обнаруживает специфический захват (K-захват) фибробластами в количестве примерно 1-5 нМ.
42. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что фермент GALNS обнаруживает специфический захват (K-захват) фибробластами в количестве примерно 1-3,5 нМ.
43. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что концентрация фермента GALNS составляет примерно 1,0±0,5 мг/мл.
44. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что концентрация NaOAc/HOAc составляет примерно 20±10 мМ, и концентрация NaH2PO4 составляет примерно 50±25 мМ.
45. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что концентрация аргинина HCl составляет примерно 30±20 мМ, концентрация Твин-20 составляет примерно 0,01%±0,005% (в/о), а концентрация сорбитола составляет примерно 2,0%±1,0% (в/о).
46. Композиция по п. 45, отличающаяся тем, что концентрация NaOAc/HOAc составляет примерно 20±10 мМ, а концентрация NaH2PO4 составляет примерно 50±25 мМ.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US36671410P | 2010-07-22 | 2010-07-22 | |
| US61/366,714 | 2010-07-22 | ||
| PCT/US2011/045011 WO2012012718A2 (en) | 2010-07-22 | 2011-07-22 | Manufacture of active highly phosphorylated human n-acetylgalactosamine-6-sulfatase and uses thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013107765A true RU2013107765A (ru) | 2014-08-27 |
| RU2607376C2 RU2607376C2 (ru) | 2017-01-10 |
Family
ID=44543776
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013107765A RU2607376C2 (ru) | 2010-07-22 | 2011-07-22 | Производство активной высокофосфорилированной n-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы человека и ее применение |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US8765437B2 (ru) |
| EP (1) | EP2595650B1 (ru) |
| JP (2) | JP6030553B2 (ru) |
| KR (2) | KR101598897B1 (ru) |
| CN (1) | CN103037895B (ru) |
| AR (2) | AR082319A1 (ru) |
| AU (1) | AU2011280937B2 (ru) |
| BR (1) | BR112013001558B1 (ru) |
| CA (2) | CA3146151A1 (ru) |
| CL (2) | CL2013000219A1 (ru) |
| CY (1) | CY1118934T1 (ru) |
| DK (1) | DK2595650T3 (ru) |
| ES (1) | ES2616263T3 (ru) |
| HR (1) | HRP20170245T1 (ru) |
| HU (1) | HUE033163T2 (ru) |
| IL (2) | IL224125B (ru) |
| LT (1) | LT2595650T (ru) |
| MX (1) | MX341838B (ru) |
| PE (3) | PE20171798A1 (ru) |
| PL (1) | PL2595650T3 (ru) |
| PT (1) | PT2595650T (ru) |
| RS (1) | RS55669B1 (ru) |
| RU (1) | RU2607376C2 (ru) |
| SG (1) | SG187580A1 (ru) |
| SI (1) | SI2595650T1 (ru) |
| SM (2) | SMT201700106T1 (ru) |
| WO (1) | WO2012012718A2 (ru) |
| ZA (1) | ZA201300286B (ru) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2711590C (en) * | 2008-01-18 | 2021-03-23 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Manufacture of active highly phosphorylated human lysosomal sulfatase enzymes and uses thereof |
| US8956859B1 (en) | 2010-08-13 | 2015-02-17 | Aviex Technologies Llc | Compositions and methods for determining successful immunization by one or more vaccines |
| US20130202633A1 (en) * | 2012-02-07 | 2013-08-08 | Saint Louis University, A Non-Profit Organization | Determination of immunogenic peptides in lysosomal enzymes and induction of oral tolerance |
| KR101380740B1 (ko) | 2012-06-29 | 2014-04-11 | 쉐어 휴먼 제네텍 세러피스, 인코포레이티드 | 이듀로네이트-2-설파타제의 정제 |
| US11529397B2 (en) | 2018-01-22 | 2022-12-20 | Saint Louis University | Method of treating mucopolysaccharidosis type IVA |
| DK2968494T3 (en) * | 2013-03-13 | 2019-03-04 | Seattle Genetics Inc | ACTIVATED CARBON FILTERING FOR CLEANING BENZODIAZEPINE ADCs |
| JP2016518113A (ja) * | 2013-03-13 | 2016-06-23 | シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド | リソソーム系酵素の特性評価の方法 |
| CN115120746A (zh) | 2013-05-15 | 2022-09-30 | 明尼苏达大学董事会 | 腺相关病毒介导的基因向中枢神经系统转移 |
| WO2014201220A1 (en) * | 2013-06-12 | 2014-12-18 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Methods for detecting prostate cancer |
| US9910041B2 (en) | 2013-07-12 | 2018-03-06 | Emd Millipore Corporation | Method of determining virus removal from a sample containing a target protein using activated carbon |
| EP3166626B1 (en) * | 2014-07-11 | 2021-04-28 | Biostrategies LC | Materials and methods for treating disorders associated with sulfatase enzymes |
| US10472615B2 (en) | 2016-01-21 | 2019-11-12 | Saint Louis University | Reduced immunogenic proteins for lysosomal storage disorders |
| JP2019515677A (ja) | 2016-04-26 | 2019-06-13 | アール．ピー．シェーラー テクノロジーズ エルエルシー | 抗体複合体ならびにそれを作製および使用する方法 |
| EP3676375A4 (en) * | 2017-08-31 | 2021-04-07 | Green Cross Corporation | PROCESS FOR PURIFYING A SULFATASE PROTEIN |
| MX2020012911A (es) * | 2018-05-30 | 2021-02-26 | Esteve Pharmaceuticals Sa | Vectores de virus adenoasociados para el tratamiento de mucopolisacaridosis tipo iv a. |
| RU2763990C2 (ru) * | 2020-02-19 | 2022-01-12 | Акционерное общество "ГЕНЕРИУМ" | Клетка, продуцирующая с высокой эффективностью активный белок арилсульфатазу в, и способ получения этой клетки |
| US20230193205A1 (en) * | 2020-04-19 | 2023-06-22 | Figene, Llc | Gene modified fibroblasts for therapeutic applications |
| WO2023150387A1 (en) * | 2022-02-07 | 2023-08-10 | M6P Therapeutics, Inc. | Compositions comprising acid alpha glucosidase and methods of use thereof |
| TW202403043A (zh) * | 2022-03-18 | 2024-01-16 | 美商健臻公司 | 重組人類酸性鞘磷脂酶醫藥組合物及方法 |
Family Cites Families (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| US4394448A (en) | 1978-02-24 | 1983-07-19 | Szoka Jr Francis C | Method of inserting DNA into living cells |
| US4391904A (en) | 1979-12-26 | 1983-07-05 | Syva Company | Test strip kits in immunoassays and compositions therein |
| US4554101A (en) | 1981-01-09 | 1985-11-19 | New York Blood Center, Inc. | Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity |
| US5186941A (en) | 1983-05-06 | 1993-02-16 | Vestar, Inc. | Vesicle formulation for the controlled release of therapeutic agents |
| JPS62122588A (ja) | 1985-11-22 | 1987-06-03 | Taiyo Fishery Co Ltd | 純コンドロイチナ−ゼの製造法 |
| US6048729A (en) | 1987-05-01 | 2000-04-11 | Transkaryotic Therapies, Inc. | In vivo protein production and delivery system for gene therapy |
| PT101031B (pt) | 1991-11-05 | 2002-07-31 | Transkaryotic Therapies Inc | Processo para o fornecimento de proteinas por terapia genetica |
| US5824784A (en) | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
| TW492882B (en) | 1997-11-28 | 2002-07-01 | Caleb Pharmaceuticals Inc | Cholinergic antagonist plaster composition |
| US6689600B1 (en) * | 1998-11-16 | 2004-02-10 | Introgen Therapeutics, Inc. | Formulation of adenovirus for gene therapy |
| US7083793B2 (en) | 1999-02-26 | 2006-08-01 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Tango 243 polypeptides and uses thereof |
| US6534300B1 (en) | 1999-09-14 | 2003-03-18 | Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. | Methods for producing highly phosphorylated lysosomal hydrolases |
| US6261595B1 (en) | 2000-02-29 | 2001-07-17 | Zars, Inc. | Transdermal drug patch with attached pocket for controlled heating device |
| RU2195492C2 (ru) * | 2000-09-04 | 2002-12-27 | Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения РАН | Способ получения пектолитического ферментного препарата |
| DK1395669T3 (da) | 2001-01-26 | 2009-11-16 | Selexis Sa | Matriks bindingsregioner og fremgangsmåder til anvendelse af disse |
| US7332304B2 (en) * | 2002-07-01 | 2008-02-19 | Arkion Life Sciences Llc | Process and materials for production of glucosamine and N-acetylglucosamine |
| CA2515708A1 (en) | 2003-02-11 | 2004-08-26 | Transkaryotic Therapies, Inc. | Diagnosis and treatment of multiple sulfatase deficiency and other sulfatase deficiencies |
| JP2007277094A (ja) * | 2004-06-29 | 2007-10-25 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 改変ダニ主要アレルゲン含有医薬組成物 |
| EP1836316A4 (en) * | 2004-12-22 | 2009-07-22 | Ambrx Inc | PROCESS FOR EXPRESSION AND CLEANING OF RECOMBINANT HUMAN GROWTH HORMONE |
| AU2007240732B2 (en) * | 2006-04-21 | 2013-07-04 | Amgen, Inc. | Buffering agents for biopharmaceutical formulations |
| US20080231439A1 (en) | 2007-03-22 | 2008-09-25 | Inventec Corporation | Activity Detection Circuit for a Storage Device |
| US8420081B2 (en) * | 2007-11-30 | 2013-04-16 | Abbvie, Inc. | Antibody formulations and methods of making same |
| US7722865B2 (en) * | 2008-01-18 | 2010-05-25 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Manufacture of active highly phosphorylated human lysosomal sulfatase enzymes and uses thereof |
| CA2711590C (en) * | 2008-01-18 | 2021-03-23 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Manufacture of active highly phosphorylated human lysosomal sulfatase enzymes and uses thereof |
| EP2196476A1 (en) * | 2008-12-10 | 2010-06-16 | Novartis Ag | Antibody formulation |
-
2011
- 2011-07-21 AR ARP110102649A patent/AR082319A1/es not_active Application Discontinuation
- 2011-07-22 CA CA3146151A patent/CA3146151A1/en active Pending
- 2011-07-22 PE PE2017001625A patent/PE20171798A1/es unknown
- 2011-07-22 WO PCT/US2011/045011 patent/WO2012012718A2/en not_active Ceased
- 2011-07-22 HU HUE11751689A patent/HUE033163T2/en unknown
- 2011-07-22 PE PE2013000110A patent/PE20131140A1/es not_active Application Discontinuation
- 2011-07-22 SG SG2013004841A patent/SG187580A1/en unknown
- 2011-07-22 LT LTEP11751689.8T patent/LT2595650T/lt unknown
- 2011-07-22 AU AU2011280937A patent/AU2011280937B2/en active Active
- 2011-07-22 EP EP11751689.8A patent/EP2595650B1/en active Active
- 2011-07-22 SM SM20170106T patent/SMT201700106T1/it unknown
- 2011-07-22 PE PE2017001626A patent/PE20171799A1/es unknown
- 2011-07-22 PL PL11751689T patent/PL2595650T3/pl unknown
- 2011-07-22 KR KR1020137004487A patent/KR101598897B1/ko active Active
- 2011-07-22 MX MX2013000908A patent/MX341838B/es active IP Right Grant
- 2011-07-22 BR BR112013001558-6A patent/BR112013001558B1/pt active IP Right Grant
- 2011-07-22 DK DK11751689.8T patent/DK2595650T3/en active
- 2011-07-22 RS RS20170165A patent/RS55669B1/sr unknown
- 2011-07-22 KR KR1020157007141A patent/KR101949906B1/ko active Active
- 2011-07-22 CN CN201180035900.4A patent/CN103037895B/zh active Active
- 2011-07-22 PT PT117516898T patent/PT2595650T/pt unknown
- 2011-07-22 JP JP2013520881A patent/JP6030553B2/ja active Active
- 2011-07-22 HR HRP20170245TT patent/HRP20170245T1/hr unknown
- 2011-07-22 CA CA2805673A patent/CA2805673C/en active Active
- 2011-07-22 RU RU2013107765A patent/RU2607376C2/ru active
- 2011-07-22 SI SI201131104A patent/SI2595650T1/sl unknown
- 2011-07-22 ES ES11751689.8T patent/ES2616263T3/es active Active
- 2011-07-22 US US13/188,907 patent/US8765437B2/en active Active
-
2013
- 2013-01-07 IL IL224125A patent/IL224125B/en active IP Right Grant
- 2013-01-11 ZA ZA2013/00286A patent/ZA201300286B/en unknown
- 2013-01-22 CL CL2013000219A patent/CL2013000219A1/es unknown
-
2014
- 2014-05-19 US US14/281,538 patent/US8940513B2/en active Active
- 2014-12-17 US US14/573,907 patent/US9567572B2/en active Active
-
2016
- 2016-07-15 JP JP2016140213A patent/JP2016178950A/ja not_active Withdrawn
-
2017
- 2017-02-15 CY CY20171100207T patent/CY1118934T1/el unknown
- 2017-02-16 SM SM201700106T patent/SMT201700106B/it unknown
- 2017-03-02 CL CL2017000498A patent/CL2017000498A1/es unknown
-
2018
- 2018-06-26 IL IL260282A patent/IL260282B/en active IP Right Grant
-
2020
- 2020-07-31 AR ARP200102165A patent/AR119552A2/es unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2013107765A (ru) | Производство активной высокофосфорилированной n-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы человека и ее применение | |
| JP2013532986A5 (ru) | ||
| KR101380740B1 (ko) | 이듀로네이트-2-설파타제의 정제 | |
| CN112048491B (zh) | 碱性磷酸酶的下游处理 | |
| ES2774408T3 (es) | Método de purificación de proteína | |
| JP2018171067A (ja) | アリールスルファターゼａの精製方法 | |
| KR102382662B1 (ko) | 방법 | |
| CA2959947A1 (fr) | Procede de purification d'un anticorps monoclonal | |
| JP2009273427A (ja) | 組換え体ヒトｆｓｈの製造方法 | |
| CN116425860B (zh) | 因子xa衍生物的制备 | |
| KR20060070543A (ko) | 알파-１-항트립신 용액의 제조 방법 | |
| TWI885179B (zh) | 用於生產水痘帶狀皰疹病毒之表面蛋白抗原的方法 | |
| CA2566731A1 (en) | Methods of purifying chondroitinase and stable formulations thereof | |
| AU645794B2 (en) | Process for purifying polypeptide | |
| US11584777B2 (en) | Method for purifying a sulfatase protein | |
| EP2501401A1 (fr) | Procede de purification de facteur b | |
| US20260092264A1 (en) | Novel process for purifying heparan-n-sulfatase | |
| CN113121638B (zh) | 一种纯化重组蛋白的方法 | |
| JP4651536B2 (ja) | 組換えアンチトロンビンの製造方法 |