RU2017496C1 - Способ выделения натриевой соли днк - Google Patents
Способ выделения натриевой соли днк Download PDFInfo
- Publication number
- RU2017496C1 RU2017496C1 SU4910247A RU2017496C1 RU 2017496 C1 RU2017496 C1 RU 2017496C1 SU 4910247 A SU4910247 A SU 4910247A RU 2017496 C1 RU2017496 C1 RU 2017496C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sodium salt
- isolation
- purification
- dna
- target product
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 title abstract description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 claims 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims 1
- NOJNFULGOQGBKB-UHFFFAOYSA-M sodium;3-[3-tert-butylsulfanyl-1-[[4-(6-ethoxypyridin-3-yl)phenyl]methyl]-5-[(5-methylpyridin-2-yl)methoxy]indol-2-yl]-2,2-dimethylpropanoate Chemical compound [Na+].C1=NC(OCC)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1CN1C2=CC=C(OCC=3N=CC(C)=CC=3)C=C2C(SC(C)(C)C)=C1CC(C)(C)C([O-])=O NOJNFULGOQGBKB-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 abstract description 3
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000013060 ultrafiltration and diafiltration Methods 0.000 abstract description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract 3
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 abstract 2
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 abstract 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 241000881711 Acipenser sturio Species 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000011824 nuclear material Substances 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000215 hyperchromic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к получению биологически активных веществ, а именно к способу получения натриевой соли нативной ДНК, которая может найти применение в химико-фармацевтической промышленности. Целью изобретения является увеличение выхода целевого продукта и сокращение потерь в процессе получения натриевой соли нативной ДНК, сокращение количества этилового спирта, используемого при получении целевого продукта. Сущность способа заключается в том, что в процессе получения натриевой соли ДНК путем обработки гомогената исходного сырья детергентом и высококонцентрированным раствором хлористого натрия, отделения в образовавшейся реакционной массе жидкой фазы и последующих очистки и выделения целевого продукта используют обработку реакционной массы ультразвуком с последующим выделением и очисткой нативной ДНК с помощью баромембранных методов - ультрафильтрации и диафильтрации. Преимуществами предлагаемого способа являются отсутствие стадий пересаждения натриевой соли нативной ДНК, связанное с этим уменьшение потерь и увеличение выхода целевого продукта, значительно меньшее количество используемого при получении натриевой соли нативной ДНК этилового спирта. 1 табл.
Description
Изобретение относится к получению биологически активных веществ, а именно к способу получения натриевой соли нативной ДНК из молок осетровых рыб, эритроцитов крови цыплят селезенки свиньи и др., которая может найти применение в химико-фармацевтической промышленности.
Известен способ получения натриевой соли нативной ДНК, в котором гомогенат исходного сырья обрабатывают детергентом (например, додецилсульфатом натрия) и высококонцентрированным раствором NaCl, отделяют жидкую фазу реакционной смеси от осадка фильтрацией или центрифугированием. Из фильтрата или супернатанта, содержащих натриевую соль ДНК, избыточное количество хлористого натрия, цитрата натрия и балластных органических веществ, двойным переосаждением этиловым спиртом выделяют очищенную соль нативной ДНК [1].
Недостатками указанного способа являются: длительность и усложненность процесса, большой расход этанола, низкий выход основного продукта.
Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ получения нативной ДНК [2].
Недостатками известного способа является медленное растворение ДНК, при осуществлении стадий переосаждения, заметно ухудшающее производительность процесса, увеличивающее потери целевого продукта (до 25%), использование больших количеств этилового спирта на очистку и выделение целевого продукта (на 1 кг натриевой соли нативной ДНК расходуется около 3,5 тонн этилового спирта).
Целью изобретения является увеличение выхода целевого продукта за счет обработки ультразвуком реакционной массы, концентрирования ультрафильтрацией и отмыванием целевого продукта диафильтрацией.
Это достигается тем, что в предлагаемом способе выделения натриевой соли ДНК путем обработки гомогената сырья детергентом и высококонцентрированным раствором хлористого натрия, отделения в образовавшейся реакционной массе жидкой фазы и последующих очистки и выделения целевого продукта используют обработку реакционной массы ультразвуком с последующим выделением и очисткой нативной ДНК с помощью баромембранных методов - ультрафильтрации и диафильтрации.
Отличительными особенностями предлагаемого изобретения от способа прототипа являются использование ультразвуковой обработки реакционной массы и осуществление очистки целевого продукта от избытка солей и балластных веществ диафильтрацией, концентрирование целевого продукта методом ультрафильтрации.
П р и м е р 1. 1 кг замороженных молок осетровых рыб измельчают, гомогенизируют в цитратно-солевом растворе (ССЦ), состоящем из 0,15 М хлористого натрия и 0,015 М цитрата натрия, промывают трижды ядерный материал ССЦ. Отмытый ядерный материал помещают в реактор, куда добавляют ССЦ, 6% раствор додецилсульфата натрия в 45% -ном этиловом спирте, нагревают до 60оС, добавляют равный объем 5 М раствора хлористого натрия, перемешивают, охлаждают до 12-16оС, реакционную массу обрабатывают ультразвуком, отделяют выпавший осадок балластных веществ от раствора ДНК фильтрацией реакционной массы через кизельгур на нутч-фильтре. Фильтрат концентрируют на мембране с размером пор 0,45 мкм (потери ДНК при этом до 3%) и затем отмывают концентрат диафильтрацией на той же мембране до отрицательной реакции на белок в пермеате.
Полученная натриевая соль ДНК имеет следующее характеристики: - содержание белка не более 1,5% - молекулярная масса 450 кДальтон - молекулярный эффект 44% - содержание РНК не более 2% - содержание полисахаридов не более 2%.
П р и м е р 2. 1 кг охлажденной крови цыплят гомогенизируют в ССЦ, промывают трижды ядерный материал раствором ССЦ. Далее как в примере 1.
Полученная натриевая соль ДНК имеет следующие характеристики: - содержание белка не более 1,5% - молекулярная масса 420 кДальтон - гиперхромный эффект 44% - содержание РНК не более 2% - содержание полисахаридов не более 2%.
П р и м е р 3. До стадии концентрирования фильтрата обработка сырья как в примере 1, 2. Концентрирование фильтрата производят на мембранах с размером пор 0,8 мкм. Потери ДНК составляют при этом 23%.
П р и м е р 4. До стадии концентрирования фильтрата - как в примерах 1, 2. Концентрирование фильтрата проводят на мембранах с размером пор 0,05 мкм. Скорость процесса фильтрования уменьшилась в 10 раз.
Ниже приводится сводная таблица с результатами примеров.
Таким образом, предложенный способ выделения натриевой соли ДНК из тканей животного происхождения позволяет получить повышенный выход целевого продукта высокой степени очистки с повышением производительности процесса и уменьшением расхода этанола.
Claims (1)
- СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ НАТРИЕВОЙ СОЛИ ДНК из тканей животного происхождения путем гомогенизации исходного сырья в цитратно-солевом растворе, обработки гомогенета додецил-сульфатом и высококонцентрированным раствором хлористого натрия, прогревания реакционной массы при 60oС, ее охлаждения с последующим выделением и очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, реакционную смесь обрабатывают ультразвуком, жидкую фазу отделяют, концентрируют ультрафильтрацией на мембранах с диаметром пор 0,05 - 1 мкм и концентрат, содержащий целевой продукт, отмывают диафильтрацией.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4910247 RU2017496C1 (ru) | 1990-12-28 | 1990-12-28 | Способ выделения натриевой соли днк |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4910247 RU2017496C1 (ru) | 1990-12-28 | 1990-12-28 | Способ выделения натриевой соли днк |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017496C1 true RU2017496C1 (ru) | 1994-08-15 |
Family
ID=21559976
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU4910247 RU2017496C1 (ru) | 1990-12-28 | 1990-12-28 | Способ выделения натриевой соли днк |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2017496C1 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2139068C1 (ru) * | 1997-10-31 | 1999-10-10 | Пермское научно-производственное объединение "Биомед" | Способ выделения натриевой соли днк из тканей животного происхождения |
| EP0818202A4 (en) * | 1994-09-29 | 2000-05-10 | Npp Farmek | DNA-RNA HYBRID AND DNA PREPARATION, PROCESSES FOR OBTAINING THE SAME AND PREPARATION THEREOF FROM STURGEON MILK, AND PHARMACEUTICAL COMPOUND BASED ON THE DNA-RNA HYBRID |
| RU2268730C1 (ru) * | 2004-04-26 | 2006-01-27 | Общество с ограниченной ответственностью "БиоМодуль" | Способ получения натриевой соли гетерогенной дезоксирибонуклеиновой кислоты (днк) |
| RU2309759C1 (ru) * | 2006-11-03 | 2007-11-10 | Элли Николаевна Каплина | Способ получения апирогенного иммуномодулятора |
-
1990
- 1990-12-28 RU SU4910247 patent/RU2017496C1/ru active
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 1. Авторское свидетельство СССР N 780444, кл. C 07D 13/06, 1985. * |
| 2. Авторское свидетельство СССР N 487897, кл. C 07D 7/026, 1975. * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0818202A4 (en) * | 1994-09-29 | 2000-05-10 | Npp Farmek | DNA-RNA HYBRID AND DNA PREPARATION, PROCESSES FOR OBTAINING THE SAME AND PREPARATION THEREOF FROM STURGEON MILK, AND PHARMACEUTICAL COMPOUND BASED ON THE DNA-RNA HYBRID |
| RU2139068C1 (ru) * | 1997-10-31 | 1999-10-10 | Пермское научно-производственное объединение "Биомед" | Способ выделения натриевой соли днк из тканей животного происхождения |
| RU2268730C1 (ru) * | 2004-04-26 | 2006-01-27 | Общество с ограниченной ответственностью "БиоМодуль" | Способ получения натриевой соли гетерогенной дезоксирибонуклеиновой кислоты (днк) |
| RU2309759C1 (ru) * | 2006-11-03 | 2007-11-10 | Элли Николаевна Каплина | Способ получения апирогенного иммуномодулятора |
| WO2008054247A1 (fr) * | 2006-11-03 | 2008-05-08 | Elli Nikolaevna Kaplina | Procédé de production d'un immunomodulateur apyrogénique |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO1990005765A1 (en) | A procedure for the production of astaxanthin and related carotenoids, astaxanthin esters, chitin, proteins and meat from plants, algae, bacteria, krill, shrimps and other crayfish and crustacea | |
| JP2000273102A (ja) | コンドロイチン硫酸の分離精製方法 | |
| CN105601666B (zh) | 一种从鲢鱼鱼头中提取磷脂的方法及其产品 | |
| RU2409291C1 (ru) | Способ получения водорастворимого полипептидного комплекса из печени рыб лососевых пород | |
| SU472491A3 (ru) | Способ получени жира и протеина из растительного материала | |
| CN108203566A (zh) | 一种碱法制备药用明胶的工艺 | |
| RU2005724C1 (ru) | Способ производства натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты из животного сырья и установка для его осуществления | |
| JPH1149972A (ja) | 殻廃棄物からアスタキサンチン及びキトーサンを同時に生成する方法 | |
| KR20230027696A (ko) | 연어과 어류의 살로부터 고순도 디엔에이의 추출 방법 | |
| RU2034028C1 (ru) | Способ получения протеолитического комплекса | |
| RU2305548C1 (ru) | Способ комплексной переработки плоских морских ежей | |
| RU2041885C1 (ru) | Способ получения порошка натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты из молок рыб | |
| RU2189990C1 (ru) | Способ получения высокоочищенного агара и агарозы из красной водоросли анфельции тобучинской | |
| CN111675637B (zh) | 一种高压脉冲电场辅助酶解河蚌肉制取牛磺酸的方法 | |
| RU2488634C1 (ru) | Способ получения днк из молок лососевых рыб | |
| CN110172490A (zh) | 一种除阿胶肽中油脂的方法 | |
| RU2055837C1 (ru) | Способ получения стерильного раствора натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты | |
| RU1417244C (ru) | Способ получения вещества, восстанавливающего функцию предстательной железы | |
| DK166504B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et heparinholdigt raamateriale ud fra heparinholdige animalske organer | |
| RU2457229C1 (ru) | Способ производства желатина | |
| RU2049472C1 (ru) | Способ получения гидролизата мозговой ткани "церебролизат" | |
| RU2139068C1 (ru) | Способ выделения натриевой соли днк из тканей животного происхождения | |
| RU2840531C9 (ru) | Способ получения коллагеназы из гепатопанкреаса краба-стригуна опилио | |
| RU2840531C1 (ru) | Способ получения коллагеназы из гепатопанкреаса краба-опилио | |
| RU2122856C1 (ru) | Способ получения нуклеопротеинового комплекса |