RU2187111C2 - Способ определения функционального состояния фолликулов млекопитающих - Google Patents
Способ определения функционального состояния фолликулов млекопитающих Download PDFInfo
- Publication number
- RU2187111C2 RU2187111C2 RU99123209A RU99123209A RU2187111C2 RU 2187111 C2 RU2187111 C2 RU 2187111C2 RU 99123209 A RU99123209 A RU 99123209A RU 99123209 A RU99123209 A RU 99123209A RU 2187111 C2 RU2187111 C2 RU 2187111C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- follicles
- follicle
- functional state
- determining
- vitro
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 5
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 abstract description 3
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- BOMUADPKDXMXIH-UHFFFAOYSA-M 1,3-bis(1-methylquinolin-1-ium-6-yl)urea;methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.COS([O-])(=O)=O.C[N+]1=CC=CC2=CC(NC(=O)NC=3C=C4C=CC=[N+](C4=CC=3)C)=CC=C21 BOMUADPKDXMXIH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000006543 gametophyte development Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003969 polarography Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам определения функционального состояния фолликулов, ооциты которых могут быть использованы при эмбриотрансплантации. Сосуд с размещенным в растворе инкубационной среды фолликулом при рН 7,0-7,3 герметизируют, предварительно удалив воздух, и выдерживают при температуре 37,0oC±0,5oС в течение часа, после чего размещают его в газоанализаторе кислотно-основного равновесия, определяют значение дыхательного коэффициента, и если он равен 2,0-4,5%, то используют фолликул для дальнейшего культивирования in vitro. В результате за небольшой промежуток времени получают достоверные данные о практической пригодности фолликулов для культивирования их in vitro.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам определения функционального состояния фолликулов, ооциты из которых используются для эмбриотрансплантации.
Известны способы определения функционального состояния фолликулов, основанные на применении гистологических исследований (Structural changes occuring during atresiainsheep ovarian follecles. Hay M.F., Gran D.C., Moor R.M - Cell and Tiasue Reserch, 1979, 169, p. 515-529), однако данные способы трудоемки, мало информативны и не лишены субъективности. Для изучения процессов фолликуло- и гаметогенеза, происходящих в яичнике в разные фазы полового цикла, подобный метод отбора фолликулов по степени их атрезии мало пригоден, т.к. трудоемок и нет информации о практической пригодности фолликулов для их культивирования.
Наиболее близким из аналогов к предлагаемому способу является полярографический способ, который получил широкое распространение после введения в практику (в 1956 г.) закрытого Кларковского электрода. В настоящее время он широко используется в клинической и исследовательской практике (Определение концентрации кислорода в биологических жидкостях методом полярографии с неподвижным электродом. Островский Д.Н., Гельман Н.С. - Биохимия, 1962, 27, с. 534). При полярографическом способе изучаемый биологический объект помещают в специальную камеру с питательной средой, например ТС-199. С помощью полярографического электрода снимают показания о содержании кислорода в жидкости, окружающей изучаемый биологический объект, в течение 25-30 минут, после чего требуется расшифровка диаграммы.
Существенным недостатком данного способа является его длительность и невысокая степень достоверности получаемых результатов из-за невозможности контролировать рН.
Технической задачей способа является разработка экспресс-способа и получение достоверных данных о практической пригодности фолликулов для культивирования их in vitro.
Для решения технической задачи в способе определения функционального состояния фолликулов млекопитающих, включающем изучения физико-химических свойств раствора инкубационной среды, например TС-199, которая известна из кн. Анджапаридзе О.Г. и др. Культура клетки в вирусологических исследованиях. - М.: Медгиз, 1962, с.28-30, сосуд с размещенным в растворе инкубационной среды фолликулом при рН 7,2-7,3 герметизируют, предварительно удалив воздух, выдерживают его при температуре, равной t=37oС±0,5oC в течение часа, после чего помещают содержимое сосуда в газоанализатор кислотно-основного равновесия, определяют значение дыхательного коэффициента, и если он равен 2,0-4,5%, то фолликул пригоден для культивирования in vitro.
Используемая в способе величина рН 7,0-7,3 является оптимальной для поддержания гомеостаза, температура, равная 37oС±0,5oC соответствует температуре тела животного. Сосуд помещают в термостат на 1 час, т.к. экспериментально установлено, что протекающие в течение этого времени реакции наиболее оптимально свидетельствуют о величине парциальных давлений углекислого газа и кислорода, необходимых для определения значения дыхательного коэффициента и постоянной рН среды культивирования. При значениях коэффициента, равных 2,0-4,5%, независимо от диаметра фолликула его определяют как пригодный для культивирования in vitro, т.к. эксперимент показал, что из их числа образуются до 90% яйцеклеток, пригодных для оплодотворения in vitro.
Преимущество заявляемого способа заключается в том, что он позволяет за небольшой промежуток времени 2-2,5 часа получать сведения о функциональном состоянии и степени атрезии большой популяции фолликулов, тогда как у прототипа за этот промежуток времени можно исследовать 5-6 фолликулов. Поддержание рН в оптимальных пределах и контроль с помощью газоанализатора кислотно-основного равновесия позволяет повысить достоверность получаемых данных по ДК.
По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена заявляемая совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне предъявляемого технического решения.
Пример конкретного осуществления способа.
В качестве материала исследований использовали фолликулы коровы. Выделенный из яичника фолликул помещали в разовый шприц (объем 2 мл) и закрывали поршнем. Через штуцер для инъекционной иглы с помощью дозатора вводили 1 мл среды ТС-199 с рН 7,2. Поршнем удалили из шприца имеющийся в нем воздух и шприц герметизировали. Затем с интервалом 2 минуты шприцы помещали в термостат при температуре 37oС. Исследование инкубационной жидкости в сосуде проводили через час, для чего небольшой объем пробы помещали через капиллярное отверстие в измерительную камеру анализатора кислотно-основного равновесия и газов крови (ВМУ 33/ВСА-2, фирмы "Radiometr"). В течение одной минуты определяли парциальное давление кислорода и углекислого газа в пробе.
рСО2=2,28 мм рт.ст.; рО2=104 мм рт.ст.
Значение дыхательного коэффициента определяли отношением рСО2/рО2•100%, ДК=2,2%.
Предлагаемый способ может быть использован в учебной и лабораторной практике для исследования фармакологических препаратов, эмбриотрансплантации, причем данный способ позволяет за небольшой промежуток времени получать сведения о функциональном состоянии и степени атрезии популяции атральных фолликулов, выделенных из одного яичника, и охарактеризовать их обменные процессы по значению дыхательного коэффициента.
Практическая значимость способа обусловлена тем, что он используется при воспроизводстве сельскохозяйственных животных, позволяет увеличить выход оплодотворенных яйцеклеток и тем самым повысить число эмбрионов, пригодных для трансплантации.
Claims (1)
- Способ определения функционального состояния фолликулов млекопитающих, характеризующийся тем, что изучают физико-химические свойства раствора инкубационной среды, например, ТС-199, причем в процессе этого изучения сосуд с размещенным в растворе инкубационной среды фолликулом при рН 7,0-7,3 герметизируют, предварительно удалив воздух, и выдерживают его при температуре, равной 37oС±0,5oС в течение часа, после чего размещают его содержимое в газоанализаторе кислотно-основного равновесия, определяют парциальное давление кислорода и углекислого газа, по показателям которых рассчитывают значение дыхательного коэффициента, и при его значениях, равных 2,0-4,5%, используют фолликул для дальнейшего культивирования in vitro.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99123209A RU2187111C2 (ru) | 1999-11-02 | 1999-11-02 | Способ определения функционального состояния фолликулов млекопитающих |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99123209A RU2187111C2 (ru) | 1999-11-02 | 1999-11-02 | Способ определения функционального состояния фолликулов млекопитающих |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU99123209A RU99123209A (ru) | 2002-01-27 |
| RU2187111C2 true RU2187111C2 (ru) | 2002-08-10 |
Family
ID=20226575
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99123209A RU2187111C2 (ru) | 1999-11-02 | 1999-11-02 | Способ определения функционального состояния фолликулов млекопитающих |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2187111C2 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8265357B2 (en) | 2005-10-14 | 2012-09-11 | Unisense Fertilitech A/S | Determination of a change in a cell population |
| US8633017B2 (en) | 2007-06-29 | 2014-01-21 | Unisense Fertilitech A/S | Device, a system and a method for monitoring and/or cultivation of microscopic objects |
-
1999
- 1999-11-02 RU RU99123209A patent/RU2187111C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| НАУ М.F., GRAN D.C., MOOR R.M. Structural changes occuring during atresiainsheep ovarian follecles. Cell and Tiasue Reserch, 1979, 169, р.515-529. ОСТРОВСКИЙ Д.Н., ГЕЛЬМАН Н.С. Определение концентрации кислорода в биологических жидкостях методом полярографии с неподвижным электродом // Биохимия, 1962, №27, с.534. БИОЛОГИЯ, БОЛЬШОЙ ЭНЦИКЛОПЕДИЧЕСКИЙ СЛОВАРЬ. - М.: Большая Российская энциклопедия, 1998, с.190. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8265357B2 (en) | 2005-10-14 | 2012-09-11 | Unisense Fertilitech A/S | Determination of a change in a cell population |
| US8633017B2 (en) | 2007-06-29 | 2014-01-21 | Unisense Fertilitech A/S | Device, a system and a method for monitoring and/or cultivation of microscopic objects |
| US9588104B2 (en) | 2007-06-29 | 2017-03-07 | Unisense Fertilitech A/S | Device, a system and a method for monitoring and/or culturing of microscopic objects |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20020110905A1 (en) | Perfusion system for cultured cells | |
| Witty et al. | Direct evidence for changes in the resistance of legume root nodules to O2 diffusion | |
| EP2322913B1 (en) | Method and device for measuring multiple physiological properties of cells | |
| US6001643A (en) | Controlled hydrodynamic cell culture environment for three dimensional tissue growth | |
| US4530907A (en) | Perfusion-cultivation of animal cells and equipment therefor | |
| US8709793B2 (en) | Bioreactor device, and method and system for fabricating tissues in the bioreactor device | |
| WO2010062911A2 (en) | Compositions and methods of functionally enhanced in vitro cell culture system | |
| CN113583939A (zh) | 一种腺相关病毒跨越血脑屏障模型的构建方法 | |
| US20190247847A1 (en) | Methods and apparatus for performing metabolic measurements of individual cell types within non-contact co-cultured systems | |
| US20190218492A1 (en) | Self regulating bioreactor apparatus and methods | |
| RU2187111C2 (ru) | Способ определения функционального состояния фолликулов млекопитающих | |
| US20180291325A1 (en) | In vitro pharmacokinetic-pharmacodynamic device | |
| Boutilier et al. | Some response characteristics of CO2 electrodes | |
| Willenborg et al. | Determination of beta-cell function: insulin secretion of isolated islets | |
| Colin | Rapid repetitive microinjection | |
| Rogers et al. | Measuring pericellular oxygen tension for in vitro cell culture | |
| Steward et al. | Effects of prior environmental conditions on the subsequent uptake and release of carbon dioxide in the light | |
| EP4444849A1 (en) | Method and apparatus for sterile and noninvasive measurements of substances in bioreactors and other sterile environments | |
| JPH072000Y2 (ja) | 潅流用器具 | |
| Böttcher et al. | Direct microcalorimetry as a technique in cell cultures | |
| Inada et al. | Fibrin membrane endowed with biological function. III. Fixing living cells in fibrin gel without impairing their functions | |
| Cross | Rabbit blastocoele pH | |
| EP4245839A1 (en) | Method for monitoring at least one substance produced or consumed by a living entity | |
| Maerz et al. | Development of a Pharmacological Test System in a Miniaturized Hollow Fiber Bioreactor | |
| WO2024249958A1 (en) | Long term potency assays for cell and gene-modified cell therapy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20101103 |