RU2201960C2 - Штамм перевиваемых клеток почки поросенка sus scrofa рк-15/а11, используемый для вирусологических исследований - Google Patents
Штамм перевиваемых клеток почки поросенка sus scrofa рк-15/а11, используемый для вирусологических исследований Download PDFInfo
- Publication number
- RU2201960C2 RU2201960C2 RU2001116519A RU2001116519A RU2201960C2 RU 2201960 C2 RU2201960 C2 RU 2201960C2 RU 2001116519 A RU2001116519 A RU 2001116519A RU 2001116519 A RU2001116519 A RU 2001116519A RU 2201960 C2 RU2201960 C2 RU 2201960C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- cells
- piglet
- virology
- transplantable
- Prior art date
Links
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 title claims abstract description 8
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 title abstract description 4
- 238000011835 investigation Methods 0.000 title 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 5
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 claims 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 claims 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 claims 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 7
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 abstract description 4
- 244000309466 calf Species 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 abstract description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 abstract description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 abstract description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 abstract description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 abstract description 2
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 abstract 3
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 abstract 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000001726 Classical Swine Fever Diseases 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108010051152 Carboxylesterase Proteins 0.000 description 1
- 102000013392 Carboxylesterase Human genes 0.000 description 1
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000006149 azo coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- VGKONPUVOVVNSU-UHFFFAOYSA-N naphthalen-1-yl acetate Chemical compound C1=CC=C2C(OC(=O)C)=CC=CC2=C1 VGKONPUVOVVNSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к вирусологии, в частности к области культивирования клеток и тканей для наработки и изучения вирусов. Штамм клеток РК-15/А11 получают путем клонирования линии клеток почки поросенка РК-15 методом предельных разведений и пассирования в среде Игла МЕМ с 5% фетальной сыворотки крови телят или новорожденных телят и дальнейшей трофической адаптацией в течение 5 пассажей к культивированию в среде Игла МЕМ с 5% сыворотки крови крупного рогатого скота, обработанной ПЭГ. Кариотип стабилен на протяжении 50 пассажей. Модальный класс представлен клетками, содержащими 31 хромосому (58%). Культура клеток РК-15/А11 чувствительна к различным штаммам вируса классической чумы свиней и является производственным штаммом для изготовления вакцины против классической чумы свиней. Изобретение позволяет получить штамм перевиваемых клеток почки поросенка, стабильный по биологическим характеристикам, в производстве вакцин против КЧС. 1 табл.
Description
Изобретение относится к вирусологии, в частности к культивированию клеток и тканей с целью наработки и изучения вирусов.
Известна перевиваемая линия клеток почки поросенка РК-15, изолированная в 1957 году М. Harris из культуры клеток РК-2а почки взрослой свиньи Sus scrofa (АТСС, CCL 33) [1, 2].
Штамм перевиваемых клеток РК-15 из-за того, что его культивировали в лабораториях мира при нестандартных режимах и в различных по составу питательных средах, стал нестабильным по культуральным, морфологическим, цитогенетическим характеристикам и чувствительности к вирусу классической чумы свиней.
Биотехнологическое использование линии клеток РК-15 лимитирует необходимость включения в состав ростовой среды фетальной сыворотки крови или сыворотки крови новорожденных телят, что неприемлемо по экономическим соображениям в биотехнологии производства вакцинных препаратов.
Целью изобретения является получение штамма перевиваемых клеток почки поросенка РК-15/А11, стабильного по биотехнологическим характеристикам, обеспечивающего высокий уровень репродукции вируса классической чумы свиней, пригодного для научно-исследовательской работы и производства вакцин против КЧС.
Штамм клеток РК-15/А11 получен из перевиваемой линии клеток почки поросенка РК-15, клонированной методом предельных разведений в питательной среде Игла MEM, содержащей 20% фетальной сыворотки крови телят с отбором и селекцией высокочувствительного к вирусу классической чумы свиней и генетически однородного клона клеток, и дальнейшей трофической адаптацией клеток в течение 5 пассажей к культивированию в среде Игла MEM с 5% сыворотки крови крупного рогатого скота, обработанной полиэтиленгликолем.
Штамм РК-15/А11 характеризуется следующими признаками.
Культуральные свойства. Жизненный цикл штамма, при котором сохраняются основные биологические показатели клеток, составляет 50±5 пассажей. При посевной дозе 80-110 тыс. клеток/мл монослой формируется на 2-3 сутки культивирования и сохраняется без смены среды в течение 10-12 дней. В литровом матрасе накапливается 75-80 млн. клеток. Коэффициент пересева -1:3-1:5
Штамм РК-15/А11 культивируют в монослойных культурах в среде Игла MEM с 5% сыворотки крови крупного рогатого скота, обработанной полиэтиленгликолем с молекулярной массой 6000, в конечной концентрации 7-10% от объема сыворотки. Для диспергирования клеточного пласта при пересевах используют смесь 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 3:1 при температуре 37oС.
Штамм РК-15/А11 культивируют в монослойных культурах в среде Игла MEM с 5% сыворотки крови крупного рогатого скота, обработанной полиэтиленгликолем с молекулярной массой 6000, в конечной концентрации 7-10% от объема сыворотки. Для диспергирования клеточного пласта при пересевах используют смесь 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 3:1 при температуре 37oС.
Для криоконсервирования при -196oС применяют смесь, состоящую из 85% среды Игла MEM, 5% сыворотки крови крупного рогатого скота, обработанной ПЭГ и 10% диметилсульфоксида, при концентрации клеток 8-12•106 в мл. Жизнеспособность клеток по тесту витального окрашивания трипановой синью после хранения в жидком азоте составляет 80-90%. Клетки восстанавливают исходные ростовые и морфологические свойства в течение 2-3 пассажей.
Создан банк рабочих клеток изготовителя (БРКИ) в количестве 300 млн. клеток. Клетки криоконсервированы в жидком азоте на уровне 11, 15, и 16 пассажах во ВНИИВВиМ (регистрационный 2.11).
Морфологические признаки. Культура клеток представлена мелкими эпителиоподобными клетками с умеренно зернистой цитоплазмой и четко очерченными границами. Ядро округлой формы с 1-2 ядрышками.
Кариологическая характеристика. Популяция гетероплоидная. Варьирование хромосомных наборов от 28 до 50. Модальный класс (58%) составляют клетки, содержащие 31 хромосому.
Гистохимическим методом азосочетания (с использованием в качестве субстрата α-нафтилацетата) установлена высокая активность неспецифических эстераз.
Видовая идентичность подтверждена кариологическими методами.
Прививаемость изогенным животным отсутствует.
Контроль штамма РК-15/А11 на посторонние контаминанты. При обследовании клеток штамма РК-15/А11 на стерильность (наличие бактерий, грибов, микоплазм) получены отрицательные результаты.
Чувствительность к вирусам. Клетки штамма РК-15/А11 чувствительны к различным штаммам вируса классической чумы свиней (таблица)
Штамм перевиваемых клеток РК-15/A11 предназначен для использования в производстве вакцинных препаратов против классической чумы свиней.
Штамм перевиваемых клеток РК-15/A11 предназначен для использования в производстве вакцинных препаратов против классической чумы свиней.
Штамм перевиваемых клеток почки поросенка Sus scrofa PK-15/A11 депонирован в Специализированной коллекции перевиваемых соматических культур клеток сельскохозяйственных и промысловых животных Российской коллекции культур клеток при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии (СХЖ РАСХН) под 54.
Источники информации
1. Pirtle EC and Woods LK. Cytogenetic alterations in swine kidney cells persistenty infected with hog cholera virus and propagated with and without antiserum in the medium // Am. J. Vet. Res., 1968, 29, 153-164;
2. Armstrong JA et al. C-type virus particles in pig kidney cell lines // J. Genet. Virol., 1971, 10, 195-198.
1. Pirtle EC and Woods LK. Cytogenetic alterations in swine kidney cells persistenty infected with hog cholera virus and propagated with and without antiserum in the medium // Am. J. Vet. Res., 1968, 29, 153-164;
2. Armstrong JA et al. C-type virus particles in pig kidney cell lines // J. Genet. Virol., 1971, 10, 195-198.
Claims (1)
- Штамм перевиваемых клеток почки поросенка Sus scrofa РК-15/А11 депонирован в Специализированной коллекции перевиваемых соматических культур клеток сельскохозяйственных и промысловых животных Российской коллекции культур клеток при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии (СХЖ РАСХН) под 54, используемый для вирусологических исследований.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001116519A RU2201960C2 (ru) | 2001-06-19 | 2001-06-19 | Штамм перевиваемых клеток почки поросенка sus scrofa рк-15/а11, используемый для вирусологических исследований |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001116519A RU2201960C2 (ru) | 2001-06-19 | 2001-06-19 | Штамм перевиваемых клеток почки поросенка sus scrofa рк-15/а11, используемый для вирусологических исследований |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2201960C2 true RU2201960C2 (ru) | 2003-04-10 |
Family
ID=20250799
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001116519A RU2201960C2 (ru) | 2001-06-19 | 2001-06-19 | Штамм перевиваемых клеток почки поросенка sus scrofa рк-15/а11, используемый для вирусологических исследований |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2201960C2 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2155246A4 (en) * | 2007-05-11 | 2010-07-14 | Temasek Life Sciences Lab Ltd | PREPARATION OF A HOMOGENEOUS CELL LINE HIGHLY RECOMMENDED FOR AN INFECTION WITH PIG CIRCOVIRUS TYPE 2 (PCV2) |
| CN114703122A (zh) * | 2022-04-02 | 2022-07-05 | 华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司 | 一种使pk-15细胞形成团块和传代培养的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1430403A1 (ru) * | 1986-07-11 | 1988-10-15 | Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Молекулярной Биологии | Штамм культивируемых клеток почки мини-свиньи,используемый в качестве тест-системы дл репродукции и изучени вируса гриппа |
| SU1613487A1 (ru) * | 1988-06-01 | 1990-12-15 | Свердловский научно-исследовательский институт вирусных инфекций | Штамм перевиваемых клеток почки новорожденного кролика дл производства и контрол медицинских вирусных препаратов |
| RU2140451C1 (ru) * | 1998-06-22 | 1999-10-27 | Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Штамм культивируемых клеток почки suis domestica l. для культивирования вирусов животных |
-
2001
- 2001-06-19 RU RU2001116519A patent/RU2201960C2/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1430403A1 (ru) * | 1986-07-11 | 1988-10-15 | Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Молекулярной Биологии | Штамм культивируемых клеток почки мини-свиньи,используемый в качестве тест-системы дл репродукции и изучени вируса гриппа |
| SU1613487A1 (ru) * | 1988-06-01 | 1990-12-15 | Свердловский научно-исследовательский институт вирусных инфекций | Штамм перевиваемых клеток почки новорожденного кролика дл производства и контрол медицинских вирусных препаратов |
| RU2140451C1 (ru) * | 1998-06-22 | 1999-10-27 | Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Штамм культивируемых клеток почки suis domestica l. для культивирования вирусов животных |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| PIRTLE E.C. et al. Cytogenetic alteration in swine kidney cells persistenty infected with hog cholera virus and propagated and without antiserum in the medium, Am. J. Vet. Res., 1968, v.29, p.153-164. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2155246A4 (en) * | 2007-05-11 | 2010-07-14 | Temasek Life Sciences Lab Ltd | PREPARATION OF A HOMOGENEOUS CELL LINE HIGHLY RECOMMENDED FOR AN INFECTION WITH PIG CIRCOVIRUS TYPE 2 (PCV2) |
| US8518696B2 (en) | 2007-05-11 | 2013-08-27 | Temasek Life Sciences Laboratory Limited | Production of homogeneous cell line highly permissive to porcine circovirus type 2 (PCV2) infection |
| CN114703122A (zh) * | 2022-04-02 | 2022-07-05 | 华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司 | 一种使pk-15细胞形成团块和传代培养的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103275925A (zh) | 鳜鱼脑细胞系的构建方法 | |
| CN116790604B (zh) | 一种sgRNA、CRISPR/Cas9载体及其构建方法和用途 | |
| RU2201960C2 (ru) | Штамм перевиваемых клеток почки поросенка sus scrofa рк-15/а11, используемый для вирусологических исследований | |
| CN109294974A (zh) | 一种异育银鲫脊髓组织细胞系及其构建方法与其应用 | |
| CN104818241A (zh) | 鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系及其构建方法 | |
| RU2201959C2 (ru) | Штамм перевиваемых клеток почки поросенка sus scrofa pk-15/b5, используемый для вирусологических исследований | |
| RU2488631C1 (ru) | ЛИНИЯ КЛЕТОК ПОЧКИ ТЕЛЕНКА Bos taurus RBT (Rene Bos Taurus) ДЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСОВ ЖИВОТНЫХ | |
| RU2348689C1 (ru) | Постоянная линия клеток sso-2 пула паренхиматозных органов сибирского осетра acipenser baeri | |
| RU2353650C1 (ru) | Линия клеток ico яичников неполовозрелого карпа (cyprinus carpio) для вирусологических исследований | |
| RU2506310C1 (ru) | ШТАММ ДИПЛОИДНЫХ КЛЕТОК СИНОВИАЛЬНОЙ МЕМБРАНЫ ПОРОСЕНКА Sus scrofa, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ | |
| CN109402068A (zh) | 一种制备无血清残留的猪伪狂犬病毒的方法 | |
| RU2827170C1 (ru) | Способ культивирования клеток гортани плодов свиньи для вирусологии | |
| RU2335537C2 (ru) | ЛИНИЯ КЛЕТОК ЯИЧНИКОВ КОЗЫ ДОМАШНЕЙ Capra hircus L. ЯДК-04 ДЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСОВ ЖИВОТНЫХ | |
| RU2614074C1 (ru) | ВНК-21/13-02-перевиваемая монослойно-суспензионная сублиния клеток почки новорожденного сирийского хомячка, предназначенная для репродукции вируса ящура и вируса бешенства | |
| RU2560569C2 (ru) | Штамм "алексеевский" вируса оспы свиней для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов | |
| RU2061753C1 (ru) | Штамм культивируемых клеток гонад capra hircus l-продуцент вирусов животных | |
| RU2082758C1 (ru) | Штамм внутривидовых гибридных клеток suis domesfice, используемый для выделения и культивирования вируса классической чумы свиней | |
| Манин et al. | Biological, cytomorphological and karyological heterogeneity of transformed cell lines derived from domestic pig (Sus scrofa L.) organs | |
| RU2832870C1 (ru) | Штамм клеток почки крупного рогатого скота (Bos Taurus renibus) для репродукции вирусов | |
| RU2065496C1 (ru) | Штамм культивируемых клеток почки oryctolagus cuniculus l для культивирования вирусов животных | |
| RU2140451C1 (ru) | Штамм культивируемых клеток почки suis domestica l. для культивирования вирусов животных | |
| RU2339693C1 (ru) | ШТАММ КЛОНАЛЬНОЙ ПЕРЕВИВАЕМОЙ ЛИНИИ КЛЕТОК ПОЧКИ САЙГИ Saiga tatarica ПС/с4, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ | |
| RU2837911C1 (ru) | Питательная бессывороточная среда для культивирования перевиваемых клеток животного происхождения и накопления вирусов млекопитающих | |
| RU2348688C1 (ru) | Постоянная линия клеток sso-3 пула паренхиматозных органов сибирского осетра acipenser baeri | |
| RU2163265C2 (ru) | Способ культивирования микроорганизмов |