RU2420587C2 - ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА И Fab, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С АНТИГЕНОМ F1 ИЗ Yersinia pestis, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ - Google Patents
ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА И Fab, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С АНТИГЕНОМ F1 ИЗ Yersinia pestis, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ Download PDFInfo
- Publication number
- RU2420587C2 RU2420587C2 RU2009124226/10A RU2009124226A RU2420587C2 RU 2420587 C2 RU2420587 C2 RU 2420587C2 RU 2009124226/10 A RU2009124226/10 A RU 2009124226/10A RU 2009124226 A RU2009124226 A RU 2009124226A RU 2420587 C2 RU2420587 C2 RU 2420587C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antigen
- fab
- antibody
- domain
- yeast
- Prior art date
Links
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 84
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 84
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 83
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 title claims abstract description 50
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 title claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 33
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 32
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 22
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 22
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 21
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 9
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 claims description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 4
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 21
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 21
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 12
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 8
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- -1 for example Proteins 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 102100036826 Aldehyde oxidase Human genes 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 230000007018 DNA scission Effects 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000928314 Homo sapiens Aldehyde oxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241001506991 Komagataella phaffii GS115 Species 0.000 description 1
- JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCS(O)(=O)=O JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 239000008049 TAE buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007994 TES buffer Substances 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108010084455 Zeocin Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HGEVZDLYZYVYHD-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O HGEVZDLYZYVYHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- XKNKHVGWJDPIRJ-UHFFFAOYSA-N arsanilic acid Chemical compound NC1=CC=C([As](O)(O)=O)C=C1 XKNKHVGWJDPIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950002705 arsanilic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940112129 campath Drugs 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Описаны гуманизированное антитело, селективно связывающее антиген F1 из Yersinia pestis и его антигенсвязывающий фрагмент (Fab). Предложена клетка дрожжей, продуцирующая описанный антигенсвязывающий фрагмент. Представлен способ получения описанного антигенсвязывающего фрагмента. Изобретение предоставляет реагент для детекции Yersinia pestis и лечения чумы. 6 н. и 2 з.п. ф-лы, 6 ил.
Description
Область техники
Изобретение относится к антителам, в частности к гуманизированным антителам, связывающимся с белком F1 из Yersinia pestis, способу получения указанных антител с использованием дрожжей.
Предшествующий уровень техники
Антитела обычно состоят из двух тяжелых цепей, связанных между собой дисульфидными связями, и легких цепей, ассоциированными с N-концом каждой из тяжелых цепей. Каждая тяжелая цепь содержит на N-конце вариабельный домен с константным доменом на другом конце. Каждая легкая цепь также содержит на N-конце вариабельный домен с константным доменом. Вариабельные домены каждой пары легкой и тяжелой цепей образуют антигенсвязывающий участок. Вариабельные домены легкой и тяжелой цепей обладают похожей общей структурой, и каждый домен включает каркас из четырех участков, последовательности которых являются относительно консервативными, связанных посредством трех участков, определяющих комплементарность (complementarity determining regions, CDRs). Четыре каркасных участка формируют конформацию типа бета-складчатого слоя, а CDRs образуют петли, связывающие конструкцию из бета-складчатого слоя. Участки CDRs расположены в близком соседстве друг с другом благодаря каркасным участкам и вносят вклад в образование антигенсвязывающего участка. Участки CDRs и каркасные участки антител могут быть определены путем ссылки на нумерационную систему Кабата (Kabat numbering system, Kabat et al., (1987) "Sequences of Proteins of Immunological Interest", US Dept. of Health and Human Services, US Government Printing Office) в сочетании in conjunction with x-ray crystallography, as set forth in WO 91/09967.
Для получения антитела, которое может связываться с каким-либо специфическим антигеном, обычно используют методику Kohler и Milstein (Kohler et al., (1976) Nature 256:495-497). Она включает в себя главным образом иммунизацию мыши антигеном, слияние клеток селезенки из иммунизированной мыши с клетками миеломы мыши и селекцию среди полученных таким образом гибридом одной или нескольких гибридом, которые секретируют моноклональное антитело, специфическое для целевого антигена.
Капсульный антиген F1 является основным иммунохимическим компонентом антигена, расположенного на поверхности Y. pestis. Антиген F1 присоединен к внешней мембране микроба Y. pestis в виде олигомерного белка, образующего гранулярный слой и постепенно диффундирующего в окружающую среду. Капсульный полимер состоит из множества похожих субъединиц гидрофобного белка, агрегированных при физиологических условиях. Субъединица F1 антигена изначально синтезируется из 170 аминокислот и обладает молекулярной массой 17.6 кДа, затем, после удаления сигнального пептида в ходе секреции на поверхность, формируется белок с молекулярной массой 15.6 кДа и изоэлектрической точкой 4.1 (Karlyshev et al., FEBS Lett. 1992 Feb 3; 297(1-2):77-80).
Для снижения неблагоприятных реакций пациентов при использовании антител в терапии указанные антитела или их части должны быть гуманизированы для того, чтобы быть менее иммуногенными, чем их мышиные прототипы. Так, авторы настоящего изобретения на основе каркасных участков антител человека сконструировали антитела, содержащие антигенсвязывающие участки, специфичные для антигена F1 из Yersinia pestis.
Краткое описание изобретения
Целью настоящего изобретения было получение реагента, в частности гуманизированного антитела или антигенсвязывающего участка (fragment antigen binding, Fab), для детекции Yersinia pestis и лечения чумы.
Указанная цель была достигнута путем конструирования гуманизированного антитела и антигенсвязывающего участка (Fab) на основе ранее изолированного авторами настоящего изобретения мышиного антитела, обладающего способностью к связыванию антигена F1 из Yersinia pestis, и демонстрации высокой специфичности указанного антитела в связывании антигена F1 из Yersinia pestis. Также указанная цель была достигнута путем создания способа получения указанных функциональных антител с использованием клеток дрожжей.
Также настоящее изобретение предоставляет новое гуманизированное антитело, содержащее последовательность аминокислот SEQ ID NO:1 в качестве вариабельного участка тяжелой цепи (VH) указанного антитела, последовательность аминокислот SEQ ID NO:2 в качестве вариабельного участка легкой цепи (VL) указанного антитела и консервативные участки обеих цепей, необходимых для функционирования указанного антитела. Такое новое моноклональное мышиное антитело селективно связывается с антигеном F1 из Yersinia pestis.
Также настоящее изобретение предоставляет изолированный фрагмент ДНК, кодирующий описанное выше антитело.
Также настоящее изобретение предоставляет гуманизированный антигенсвязывающий участок (Fab), который селективно связывается с антигеном F1 из Yersinia pestis и включает в себя вариабельный участок тяжелой цепи (VH) с последовательностью аминокислот SEQ ID NO:1, соединенный с доменом CH1 иммуноглобулина человека, и вариабельный участок легкой цепи (VL) с последовательностью аминокислот SEQ ID NO:2, соединенный с доменом CL иммуноглобулина человека.
Также настоящее изобретение предоставляет гуманизированный антигенсвязывающий участок (Fab), описанный выше, в котором домен CH1 является доменом CH1 иммуноглобулина человека IgG1, а домен CL является доменом CL иммуноглобулина человека каппа.
Также настоящее изобретение предоставляет изолированный фрагмент ДНК, кодирующий антигенсвязывающий участок (Fab), описанный выше.
Также настоящее изобретение предоставляет клетку дрожжей, трансформированную фрагментом ДНК, описанным выше, и обладающую способностью к продукции указанного Fab.
Также настоящее изобретение предоставляет клетку дрожжей, описанную выше, где указанной клеткой дрожжей является Pichia pastoris.
Также настоящее изобретение предоставляет способ получения Fab, описанного выше, включающий выращивание указанных дрожжей в питательной среде и выделение указанного Fab из культуральной жидкости.
Краткое описание чертежей
На Фиг.1 показано конструирование и последовательность гуманизированного фрагмента VH Fab против антигена F1 из Y. pestis. Каркасные участки подчеркнуты.
На Фиг.2 показано конструирование и последовательность гуманизированного фрагмента VL Fab против антигена F1 из Y. pestis. Каркасные участки подчеркнуты.
На Фиг.3 показана последовательность гуманизированного фрагмента VH Fab против антигена F1 из Y. pestis, соединенного с доменом CH1 иммуноглобулина человека IgG1, содержащего сайты рестрикции XhoI и XbaI на концах. Каркасные участки подчеркнуты, гипервариабельные петли (CDR) выделены курсивом.
На Фиг.4 показана последовательность гуманизированного фрагмента VL Fab против антигена F1 из Y. pestis, соединенного с доменом CL иммуноглобулина человека каппа, содержащего сайты рестрикции XhoI и XbaI на концах. Каркасные участки подчеркнуты, гипервариабельные петли (CDR) выделены курсивом.
На Фиг.5 показана карта плазмид pPICZαA-F1-hybrid-H (А) и pPICZαA-F1-hybrid-L (В).
На Фиг.6 показана схематическая карта плазмиды pPICZαA-F1-hybrid-H-L.
Подробное описание настоящего изобретения
Антитела, полученные против определенных белков или мимотопов, могут обладать некоторыми преимуществами, поскольку такие антитела не сильно загрязнены антителами против других соединений, что могло бы, в противном случае, повлиять на точность диагностического метода. Способы получения таких антител известны из предшествующего уровня техники и подробно описаны Harlow и др, (Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Labs Press, 1988), и включают в себя иммунизацию животных с целью получения препаратов антител, которые выделяют из, например, плазмы или асцитной жидкости и очищают способами, известными из уровня техники, с получением препаратов, дающих реакцию с антигеном. Множество видов имеют белки с близкими последовательностями и поэтому могут возникнуть сложности в ходе использования стандартных протоколов иммунизации при получении антител, которые узнают белок только одного вида. Поэтому также стоит рассмотреть модификации стандартных методов получения антител, таких как, например, разностные (вычитательные) гибридизационные методики. Такие модификации могут быть известны специалисту в данной области техники, также они описаны в настоящем описании. В других методах антитела, которые могут быть использованы в рамках настоящего изобретения, получают с использованием рекомбинантных методов, описанных Sambrook и др. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Labs Press, 1989)).
Вкратце, моноклональные антитела получают путем слияния клеток селезенки из иммунизированного животного и клеток миеломы с получением гибридомы. Гибридомы могут быть проверены на способность к продукции нужного антитела, затем гибридомы могут быть выращены, из них могут быть выделены указанные антитела. Термин "выращенные клетки", использованный здесь, означает гибридомы или другие линии клеток, которые производят антитела. Методы получения и проверки таких выращенных клеток описаны Harlow и др., (см. выше). Получение материала, использующегося в качестве антигена, для инъекций животных включают в себя методики, хорошо известные из уровня техники, например, использование полноразмерного белка, использование пептида, выбранного из иммуногенных участков белка, модифицирование антигена такими способами, как, например, связывание с динитрофенолом, связывание с арсаниловой кислотой, денатурация антигена, связывание антигена с белком-переносчиком, таким как, например, keyhole limpet hemacyanin, с пептидами, содержащими участки связывания с рецепторами Т-клеток класса II, с бусинами, а также любыми другими методами, известными из уровня техники. Смотри Harlow и др. (см. выше).
Подходящий способ для выделения антител, эффективных для использования в рамках настоящего изобретения, включает (а) назначение животному эффективного количества белка, пептида или его мимотопа с целью получения антител, (b) выделение указанных антител, (с) определение последовательности антител и конструирование гуманизированных антител.
Ранее авторы настоящего изобретения получили моноклональное мышиное антитело, обладающее способностью эффективно связывать антиген F1 из Yersinia pestis (Y. pestis), и определили последовательность Fab указанного антитела. Такое антитело содержит последовательность аминокислот SEQ ID NO:5 в качестве вариабельного участка тяжелой цепи (VH) антитела, последовательность аминокислот SEQ ID NO:6 в качестве вариабельного участка легкой цепи (VL) антитела и консервативные участки обеих цепей, необходимые для функционирования антитела. Полученное моноклональное мышиное антитело продемонстрировало высокую специфичность и эффективность связывания антигена F1 из Y. pestis.
Затем авторы настоящего изобретения сконструировали каркасные участки с использованием аминокислот, которые наиболее часто встречаются в человеческих гомологах указанного мышиного антитела против антигена F1 из Y. pestis. С использованием базы данных недегенеративных последовательностей белков PubMed и программного обеспечения BlastP было найдено 100 наиболее близких человеческих гомологов для каждого каркасного участка каждой цепи антитела. На основе наиболее часто встречающихся аминокислот были составлены последовательности консенсусных каркасных участков. Окончательные последовательности гуманизированных вариабельных доменов антитела против антигена F1 из Y. pestis были составлены из последовательностей консенсусных каркасных участков и последовательностей мышиных CDR (Фиг.1 и 2). Термин "CDR" или "участок, определяющий комплементарность" относится к тем частям тяжелой и легкой цепи антитела, которые расположены в непосредственной близости друг от друга в трехмерном пространстве и формируют связывающую поверхность антитела.
Так было выполнено настоящее изобретение.
В частности, антителом согласно настоящему изобретению является гуманизированное антитело, обладающее способностью к связыванию антигена F1 из Yersinia pestis (Y. pestis).
Таким антителом является антитело, содержащее последовательность аминокислот SEQ ID NO:1 в качестве вариабельного участка тяжелой цепи (VH) указанного антитела, последовательность аминокислот SEQ ID NO:2 в качестве вариабельного участка легкой цепи (VL) указанного антитела и консервативные участки обеих цепей, необходимых для функционирования указанного антитела. Такое новое гуманизированное антитело селективно связывается с антигеном F1 из Yersinia pestis. Консервативные участки тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина IgG, IgM, IgA, IgD или IgE могут быть использованы в качестве консервативных участков для тяжелой цепи антитела согласно настоящему изобретению. Консервативные участки легкой цепи человеческого иммуноглобулина каппа или лямбда могут быть использованы в качестве консервативных участков для легкой цепи антитела согласно настоящему изобретению.
Также антигенсвязывающим фрагментом (Fab) согласно настоящему изобретению является изолированный Fab, который селективно связывается с антигеном F1 из Yersinia pestis и который включает в себя вариабельный участок тяжелой цепи (VH) с последовательностью аминокислот SEQ ID NO:1, соединенный с доменом CH1 иммуноглобулина человека, и вариабельный участок легкой цепи (VL) с последовательностью аминокислот SEQ ID NO:2, соединенный с доменом CL иммуноглобулина человека. Домен CH1 тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина IgG, IgM, IgA, IgD или IgE может быть использован в качестве домена CH1 тяжелой цепи Fab согласно настоящему изобретению. Домен CL легкой цепи человеческого иммуноглобулина каппа или лямбда может быть использован в качестве домена CL легкой цепи Fab согласно настоящему изобретению. Такой Fab согласно настоящему изобретению представлен, но не ограничивается Fab, содержащим последовательности аминокислот SEQ ID NO:7 (тяжелая цепь) и SEQ ID NO:8 (легкая цепь) (Фиг.3 и 4).
В настоящем изобретении термин "антитело" использован для описания иммуноглобулинов или их фрагментов, мономеров или димеров легкой цепи или тяжелой цепи, одноцепочечных антител, таких как одноцепочечные антитела Fvs, в которых вариабельные домены тяжелой и легкой цепей соединены пептидным линкером, а также как природных, так и полученных методами рекомбинантных ДНК или другим образом, при условии, что антитело содержит по крайней мере один антигенсвязывающий участок. Остальная часть антитела не должна обязательно включать только последовательность, производную от иммуноглобулина. Например, может быть сконструирован ген, в котором последовательность ДНК, кодирующая часть цепи человеческого иммуноглобулина, соединена с последовательностью ДНК, кодирующей последовательность аминокислот полпептида эффектора или молекулы-репортера.
Термин "гуманизированное антитело" используется для описания антитела, содержащего по крайней мере один, а предпочтительно два или три, участка CDR в одном или обоих вариабельных участках, полученных из антитела из первого вида животного, это понимается как то, что он может содержать определенный выбранный каркасный участок из аминокислот, соединенный с определенной гипервариабельной последовательностью аминокислот. Оставшиеся части антитела, полученные из иммуноглобулина Ig, получают из одного или нескольких различных антител. Вариабельные домены могут быть получены с использованием техники рекомбинантных ДНК или пептидным синтезом.
Гуманизированные антитела или их связывающие белки согласно настоящему изобретению содержат последовательности аминокислот, включающие в себя все или части CDR, полученные главным образом из моноклонального антитела, обладающего специфичностью к антигену F1 из Yersinia pestis. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения таким моноклональным антителом является мышиное по происхождению антитело. Аминокислотные последовательности каркасных участков вариабельных доменов антитела или их части являются главным образом человеческими по происхождению в наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения и следовательно "гуманизированными антителами". Эта "гуманизация" считается полезной в снижении иммуногенности указанного антитела при терапевтическом назначении пациентам. Определенные выбранные остатки в каркасных участках остаются мышиными, а не человеческими. Считается, что это необходимо для достижения нужной трехмерной структуры молекулы, и таким образом для повышения связывающей специфичности и аффинности к антигену F1 из Yersinia pestis.
Любая часть гуманизированных антител (и следовательно, в широком смысле определения термина антитела), полученная в соответствии с настоящим описанием, не выходит за рамки настоящего изобретения, при условии, что специфичность связывания и аффинность к антигену F1 из Yersinia pestis сохраняется. Таким образом, связывающие белки, полученные из указанных антител, без сомнений в рамках настоящего изобретения, как и другие фрагменты, которые способствуют проявлению из способности, по крайней мере в степени необходимой для терапевтического использования, как описано ниже.
В настоящем изобретении фраза "антитело или Fab, обладающий способностью к связыванию с антигеном F1 из Yersinia pestis" означает молекулу, которая связывается с антигеном F1 и образует стабильный комплекс. Стабильным комплексом является комплекс, в котором связывание между партнерами происходит на период времени, достаточный для того, чтобы произвести детектирование указанного комплекса с использованием описанных здесь методов. Термин "селективно связывает антиген F1 из Yersinia pestis" означает способность указанной молекулы предпочтительно связываться с антигеном F1 в отличие от связывания с белками, не имеющими отношения к антигену F1, или связывания с небелковыми компонентами, присутствующими в образце. Антителом или Fab, которое предпочтительно связывается с антигеном F1, является антитело или Fab, которое связывается с антигеном F1, но не связывается в существенной степени с другими молекулами или компонентами, которые могут присутствовать в образце. Существенное связывание предполагает, например, связывание антитела, связывающегося с антигеном F1, с молекулой, не являющейся антигеном F1, с аффиностью или силой, достаточной для того, чтобы помешать способности антитела, связывающегося с антигеном F1, определить уровень антигена F1 из Y. pestis в образце. Примерами таких молекул и компонентов, которые могут присутствовать в образце, являются, но не ограничиваются ими, белки, не являющиеся антигеном F1, липиды и углеводы.
Способность антитела или Fab к связыванию с антигеном может быть определена специалистом в данной области с использованием методов, включающих, но не ограничивающихся методом ELISA и равновесным диализом. Методы определения аффинности и силы связывания хорошо известны специалисту в данной области техники, подробно описаны Janeway и др. (Immunobiology: The Immune System in Health and Disease (Garland Publishing Company, 1996)).
Fab, пригодный для осуществления настоящего изобретения, - это Fab, обладающий способностью к связыванию антигена F1 из Y. pestis, когда концентрация антигена F1 составляет от около 10 нг/мл и около 10 пг/мл. В частности, пригодные в рамках настоящего изобретения антитела связывают антиген F1 из Y. pestis, когда концентрация антигена F1 составляет 10 нг/мл, около 1 нг/мл или менее, предпочтительно 100 пг/мл. Такие антитела и Fab описаны в сопутствующих Примерах.
Изолированным фрагментом ДНК, кодирующим антитело согласно настоящему изобретению, является экспрессирующийся фрагмент ДНК, содержащий промотор, сигнальную последовательность, последовательность нуклеотидов, кодирующую структурные части тяжелой и легкой цепей антитела, участок терминации транскрипции.
В частности, нуклеотидные последовательности, кодирующие структурные части тяжелой и легкой цепей антитела согласно настоящему изобретению, содержат фрагмент ДНК, кодирующий вариабельный участок тяжелой цепи (VH) (SEQ ID NO:3) и вариабельный участок легкой цепи (VL) (SEQ ID NO:4), связанный с фрагментом ДНК, кодирующим консервативные участки обеих цепей, необходимые для функционирования указанного антитела. Нуклеотидные последовательности, кодирующие Fab согласно настоящему изобретению, представлены, но не ограничиваются нуклеотидными последовательностями с 31 по 693 нуклеотид в SEQ ID NO:9 (тяжелая цепь) и с 31 по 669 нуклеотид в SEQ ID NO:10 (легкая цепь) (Фиг.3 и 4). Фрагмент ДНК, кодирующий Fab согласно настоящему изобретению, может быть получен любым методом, известным специалисту в данной области техники, включая ПЦР с использованием набора перекрывающихся праймеров, синтез по технологии Slonogene™ (Sloning Biotechnology GmbH), химическим способом и т.д.
Также, нуклеотидные последовательности, кодирующие Fab согласно настоящему изобретению, содержат фрагмент ДНК, кодирующий вариабельный участок тяжелой цепи (VH) (SEQ ID NO:3) и вариабельный участок легкой цепи (VL) (SEQ ID NO:4).
Ввиду вырожденности трансляционного кода могут быть различия в последовательности ДНК. Фрагменты ДНК согласно настоящему изобретению не ограничены фрагментами, показанными в SEQ ID NO:3 или 4 при условии, что они кодируют участки цепей антитела с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID NO:1 или 2.
Клетками дрожжей согласно настоящему изобретению являются клетки дрожжей, трансформированные фрагментом ДНК, описанным выше, и обладающие способностью к продукции Fab против антигена F1 из Y. pestis.
Фраза «клетки дрожжей, трансформированные фрагментом ДНК» означает, что желаемый фрагмент ДНК был введен в клетку дрожжей с использованием методов, известных специалисту в данной области техники. Трансформация клетки дрожжей фрагментом ДНК приводит к увеличению экспрессии фрагмента ДНК, кодирующего антитело согласно настоящему изобретению. Присутствие сигнальной последовательности α-фактора приводит к секреции произведенного антитела в культуральную жидкость. Методы трансформации клеток дрожжей включают в себя все известные методы, например модифицированная версия процедуры, описанной для S. cerevisiae (Gietz and Schiestl, 1996).
Способом согласно настоящему изобретению является способ получения Fab против антигена F1 из Y. pestis, включающий выращивание дрожжей в питательной среде и выделение полученного Fab из культуральной жидкости.
Примером клетки дрожжей, пригодных для продукции Fab согласно настоящему изобретению, являются, но не ограничивается ими, клетки дрожжей Pichia pastoris. Фраза "дрожжи Pichia pastoris" означает, что указанные дрожжи классифицируют как Pichia pastoris (Р. pastoris) в соответствии с классификацией, известной специалисту в данной области микробиологии. Примерами дрожжей Р. pastoris, применимых в рамках настоящего изобретения, являются, но не ограничиваются ими, дрожжи Р. pastoris GS115 (Invitrogen).
В настоящем изобретении выращивание, накопление и очистка Fab из культуральной жидкости и других жидкостей может быть осуществлена методом, сходным с традиционными методами ферментации, когда некий белок производится с использованием микроорганизма.
Питательная среда для выращивания может быть как синтетической, так и натуральной при условии, что указанная среда содержит источник углерода, источник азота, минералы и, если это необходимо, подходящее количество питательных веществ, в которых нуждаются дрожжи для их роста. К источникам углерода относятся углеводы, такие как глюкоза и сахароза, и различные органические кислоты. В зависимости от способа ассимиляции у указанного микроорганизма может быть использован спирт, включая метанол, этанол, глицерин. В качестве источника азота могут быть использованы различные соли аммония, такие как аммиак и сульфат аммония, другие соединения азота, такие как амины, источники природного азота, такие как пептон, гидролизат соевых бобов, расщепленные ферментированные микроорганизмы. В качестве источника минералов могут быть использованы монофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат железа, сульфат марганца, хлорид кальция и подобные им соединения. В качестве витаминов могут быть использованы тиамин, дрожжевой экстракт и подобные им соединения.
Выращивание предпочтительно осуществляют в аэробных условиях, таких как культивирование с перемешиванием, взбалтывание с аэрацией, при температуре от 20 до 40°С, предпочтительно от 28 до 30°С. рН среды обычно поддерживают в диапазоне от 2 до 9, предпочтительно в диапазоне от 6 до 7.5. рН среды может быть скорректирован с помощью аммиака, карбоната кальция, различных оснований и буферов. Обычно выращивание в течение от 1 до 7 дней приводит к накоплению Fab в культуральной жидкости.
После выращивания твердые компоненты, такие как клетки, могут быть удалены из культуральной жидкости методом центрифугирования или фильтрации с использованием мембраны, а затем антитела или Fab могут быть выделены и очищены методом осаждения с солями, с использованием сульфата натрия или сульфата аммония, аффинной хроматографии, ионообменной хроматографии и т.п.
Для терапии, применяемой к людям, необходимо использовать человеческие изотипы для того, чтобы минимизировать антиглобулинный ответ а в течение этой терапии. Последовательности ДНК человеческих константных доменов, предпочтительно в сочетании с каркасными участками вариабельных доменов могут быть получены в соответствии с хорошо известными методиками. Примером такой методики является методика CAMPATH 1H, доступная у компании Burroughs Wellcome Ltd.
Антитело, обладающее способностью к связыванию антигена F1 из Y. pestis, использованное в настоящем изобретении, может содержаться в составе медицинской рецептуры. Например, антитело может быть объединено с буфером, в котором указанное антитело растворено, и/или с неким носителем. Буферы и носители, пригодные для этого, известны специалистам в данной области техники. Примерами таких буферов являются буферы, в которых указанное антитело может функционировать, селективно связывая антиген F1, такие как, но не ограничивающиеся солевым фосфатным буфером, водой, салином, фосфатным буфером, буфером HEPES (солевой буфер N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-этансульфоновой кислоты), буфером TES (солевым буфером Трис-ЭДТА), буфером Трис и буфером ТАЕ (Трис-ацетат-ЭДТА). Примерами носителей являются, но не ограничены полимерными матрицами, токсоидами, сывороточными альбуминами, такие как бычий сывороточный альбумин. Носители могут быть комбинированы с антителами и конъюгированными (то есть, присоединенными) антителами так, что они несущественно влияют на способность антитела к селективному связыванию антигена F1.
Методы получения плазмидной ДНК, расщепления и лигирования ДНК, трансформации, подбора олигонуклеотидов в качестве праймеров и подобные методы могут быть стандартными методами, хорошо известными специалисту в данной области техники. Эти методы описаны, например в Sambrook, J., Fritsch, E.F., and Maniatis, Т., ("Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition", Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989).
Последующие примеры приведены для целей объяснения и не ограничивают каким-либо образом рамки настоящего изобретения.
Пример 1. Конструирование генов, кодирующих фрагмент Fab гуманизированного антитела против антигена F1 из Y. pestis
С использованием базы данных последовательностей не дегенеративных белков PubMed с применением программного обеспечения BlastP было найдено 100 наиболее близких человеческих гомологов для каждого каркасного участка каждой цепи антитела. Консенсусные участки были составлены на основе наиболее часто встречающихся аминокислот. Окончательная последовательность гуманизированных вариабельных доменов антитела против антигена F1 из Y. pestis была составлена из консенсусных последовательностей каркасных участков и последовательностей мышиных CDR (Фиг.1 и 2, SEQ OD NO:1 и 2).
Пример 2. Конструирование экспрессионной системы для получения фрагмента Fab гуманизированного антитела против антигена F1 из Y. pestis и получение указанного фрагмента Fab с использованием дрожжей.
Фрагмент ДНК (SEQ ID NO:9), содержащий ген, кодирующий фрагмент VH Fab против антигена F1 из Y. pestis, соединенный с доменом CH1 иммуноглобулина человека IgG1, содержащий сайты рестрикции XhoI и XbaI на концах, необходимые для клонирования в экспрессионный вектор, был составлен с помощью набора перекрывающихся синтетических праймеров и клонирован в вектор pPICZalpha A (Invitrogen).
Фрагмент ДНК (SEQ ID NO:10), содержащий ген, кодирующий фрагмент VL Fab против антигена F1 из Y. pestis, соединенный с доменом CL иммуноглобулина человека каппа, содержащий сайты рестрикции XhoI и XbaI на концах, необходимые для клонирования в экспрессионный вектор, был составлен с помощью набора перекрывающихся синтетических праймеров и клонирован в вектор pPICZalpha A ΔMssI.
Вектор pPICZalpha A ΔMssI получали из вектора pPICZalpha A (Invitrogen) путем замены сайта рестрикции MssI (PmeI) на сайт рестрикции KspAI. Для этой цели в ходе ПЦР использовали 4 праймера (SEQ ID NO:11-14), плазмиду pPICZalpha А использовали в качестве матрицы. Полученный фрагмент ПЦР расщепляли с использованием рестриктаз SacI и Mph1103I и лигировали в вектор pPICZalpha А, предварительно обработанный теми же рестриктазами. Таким образом были получены плазмиды pPICZalpha-F1-humanized-H и pPICZalphaΔMssI-F1-humanized-L.
Сборку обоих генов, кодирующих цепи фрагмента Fab, на одной плазмиде осуществляли лигированием фрагмента BglII-BamHI из вектора, содержащего легкую цепь, в сайт рестрикции BamHI вектора, содержащего тяжелую цепь.
Так была сконструирована экспрессионная плазмида pPICZαA-F1-humanized-H-L, содержащая последовательность, кодирующую обе цепи фрагмента Fab гуманизированного антитела против антигена F1 из Y. pestis, каждый из которых был непосредственно соединен в одной рамке считывания с сигнальной последовательностью α-фактора из Saccharomyces cerevisiae под контролем промотора АОХ1.
Пример 3. Получение трансформантов дрожжей и анализ продукции фрагмента Fab
Экспрессионную плазмиду pPICZαA-F1-humanized-H-L, линеаризованную с помощью рестриктазы PmeI, вводили в клетки GS115 в соответствии с протоколом производителя INVITROGEN с помощью методики, использующей LiCl. Трансформанты отбирали на питательной среде YPDS (Invitrogen), содержащей глюкозу и Zeocin (100 мкг/мл). Интеграция линеаризованной плазмиды в хромосому подтверждали методом ПЦР с использованием ген-специфичных праймеров (SEQ ID NO:15 и 16 для тяжелой цепи и SEQ ID NO:17 и 18 для легкой цепи) и геномной ДНК трансформантов в качестве матрицы.
Отобранные трансформанты переносили на питательную среду BMMY (Invitrogen), содержащую метанол, для индукции экспрессии генов, кодирующих фрагмент Fab против антигена F1 из Y. pestis. Клоны штамма GS115/pPICZαA-F1-humanized-H-L выращивали в пробирках (V=4 мл) в течение 45 часов при 30°С и рН 6.0 (конечная оптическая плотность - OD 40). Измерение количества фрагментов Fab в культуральной жидкости осуществляли методом ELISA. В соответствии с результатами анализа был выбран штамм, продуцирующий до 5 мг/л фрагмента Fab гуманизированного антитела против антигена F1 из Y. pestis.
Анализ ELISA для фрагмента Fab в культуральной жидкости:
- Сорбция антитела 2А11, разбавленного 1/1000 в 20 мМ Na2HPO4 (рН 7.2), 100 мкл на лунку, 2 часа при комнатной температуре. Антитела 2А11 связываются константные домены фрагмента Fab человеческого IgG1.
- Промывка лунок три раза буфером PBSt (0.1% Tween).
- Блокировка 0.5% БСА в PBSt (200 мкл на лунку) в течение 30 минут.
- Добавление образцов питательной среды (СМ), 100 мкл на лунку (20 мкл CM + 80 мкл человеческого IgG1, 25 нг/мл в 0.05% БСА), 2 часа при комнатной температуре. Образцы фрагмента Fab человеческого IgG1, 20 нг/мл в 0.05% БСА, использовали в качестве стандарта.
- Промывка лунок три раза буфером PBSt (0.1% Tween).
- Добавление меченных пероксидазой хрена анти-Fc антител, разбавленных 1/7000 в 0.05% БСА в PBS, 100 мкл на лунку, и инкубирование 90 минут при комнатной температуре.
- Промывка лунок шесть раз буфером PBSt (0.1% Tween).
- Добавление о-фенилендиамина 100 мкл (4 мг/10 мл) с H2O2 в буфере рН 5.0.
- Остановка реакции добавлением 100 мкл 10% H2SO4.
Пример 4. Характеристика аффинности фрагмента Fab гуманизированного антитела против антигена F1 из Y. pestis, произведенного дрожжами.
Определение констант диссоциации рекомбинантных и природных фрагментов Fab
Константы диссоциации (Kd) определяли в ходе двухступенчатого метода ELISA, как описано в Примере 3. Было установлено, что Kd для гуманизированного фрагмента Fab против антигена F1 из Y. pestis составляет 8×10-8 М.
Хотя настоящее изобретение было подробно описано со ссылкой на предпочтительные варианты его осуществления, для специалиста в данной области техники ясно, что могут быть сделаны различные замены и применены эквиваленты, которые не выходят за рамки настоящего изобретения. Все процитированные здесь документы являются частью настоящей заявки, включенные путем ссылки.
Claims (8)
1. Гуманизированное антитело, селективно связывающее антиген F1 из Yersinia pestis, отличающееся тем, что вариабельный участок тяжелой цепи (VH) указанного антитела содержит последовательность аминокислот SEQ ID NO:1, а вариабельный участок легкой цепи (VL) указанного антитела содержит последовательность аминокислот SEQ ID NO:2.
2. Изолированный фрагмент ДНК, кодирующий антитело по п.1.
3. Гуманизированный антигенсвязывающий фрагмент (Fab), селективно связывающий антиген F1 из Yersinia pestis, который содержит вариабельный участок тяжелой цепи (VH) с последовательностью аминокислот SEQ ID NO:1, соединенной с доменом CH1 человеческого иммуноглобулина, и вариабельный участок легкой цепи (VL) с последовательностью аминокислот SEQ ID NO:2, соединенной с доменом CL человеческого иммуноглобулина.
4. Гуманизированный антигенсвязывающий фрагмент (Fab) по п.3, отличающийся тем, что доменом CH1 является домен CH1 domain человеческого иммуноглобулина IgG1, а доменом CL является домен CL человеческого иммуноглобулина каппа.
5. Изолированный фрагмент ДНК, кодирующий антигенсвязывающий фрагмент (Fab) по п.3.
6. Клетка дрожжей, трансформированная фрагментом ДНК по п.5, обладающая способностью к продукции Fab по п.3.
7. Клетка дрожжей по п.6, отличающаяся тем, что указанными дрожжами являются дрожжи Pichia pastoris.
8. Способ получения Fab по п.3, включающий стадии выращивания клеток дрожжей по п.6 в питательной среде и выделения указанного Fab из культуральной жидкости.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009124226/10A RU2420587C2 (ru) | 2009-06-25 | 2009-06-25 | ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА И Fab, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С АНТИГЕНОМ F1 ИЗ Yersinia pestis, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009124226/10A RU2420587C2 (ru) | 2009-06-25 | 2009-06-25 | ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА И Fab, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С АНТИГЕНОМ F1 ИЗ Yersinia pestis, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2009124226A RU2009124226A (ru) | 2010-12-27 |
| RU2420587C2 true RU2420587C2 (ru) | 2011-06-10 |
Family
ID=44055464
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009124226/10A RU2420587C2 (ru) | 2009-06-25 | 2009-06-25 | ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА И Fab, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С АНТИГЕНОМ F1 ИЗ Yersinia pestis, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2420587C2 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2460788C1 (ru) * | 2011-07-28 | 2012-09-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus 13f8 - продуцент моноклональных антител, специфичных к капсульному f1 антигену yersinia pestis |
| RU2478704C1 (ru) * | 2011-12-20 | 2013-04-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus 2B8 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К V АНТИГЕНУ Yersinia pestis |
| WO2017079115A1 (en) * | 2015-11-03 | 2017-05-11 | Janssen Biotech, Inc. | Antibodies specifically binding tim-3 and their uses |
| US12398209B2 (en) | 2018-01-22 | 2025-08-26 | Janssen Biotech, Inc. | Methods of treating cancers with antagonistic anti-PD-1 antibodies |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117756933A (zh) * | 2023-12-13 | 2024-03-26 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 抗鼠疫耶尔森氏菌的重链抗体或其抗原结合片段及其相关生物材料与应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2031938C1 (ru) * | 1991-12-03 | 1995-03-27 | Мартиневский Иван Лукьянович | Штамм бактерий yersinia pestis - продуцент фракции i чумного микроба |
-
2009
- 2009-06-25 RU RU2009124226/10A patent/RU2420587C2/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2031938C1 (ru) * | 1991-12-03 | 1995-03-27 | Мартиневский Иван Лукьянович | Штамм бактерий yersinia pestis - продуцент фракции i чумного микроба |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| РЫБАЛЬСКИЙ Н.Г., СЕРОВА М.А., ИГНАТЬЕВА Г.А., СТАРЧЕУС А.П. Моноклональные антитела и гибридомы. - М.: ВАСХНИЛ, 1989. * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2460788C1 (ru) * | 2011-07-28 | 2012-09-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus 13f8 - продуцент моноклональных антител, специфичных к капсульному f1 антигену yersinia pestis |
| RU2478704C1 (ru) * | 2011-12-20 | 2013-04-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus 2B8 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К V АНТИГЕНУ Yersinia pestis |
| WO2017079115A1 (en) * | 2015-11-03 | 2017-05-11 | Janssen Biotech, Inc. | Antibodies specifically binding tim-3 and their uses |
| WO2017079116A3 (en) * | 2015-11-03 | 2017-07-20 | Janssen Biotech, Inc. | Antibodies specifically binding pd-1 and tim-3 and their uses |
| US10894830B2 (en) | 2015-11-03 | 2021-01-19 | Janssen Biotech, Inc. | Antibodies specifically binding PD-1, TIM-3 or PD-1 and TIM-3 and their uses |
| US12173064B2 (en) | 2015-11-03 | 2024-12-24 | Janssen Biotech, Inc. | Antibodies specifically binding PD-1, TIM-3 or PD-1 and TIM-3 and their uses |
| US12398209B2 (en) | 2018-01-22 | 2025-08-26 | Janssen Biotech, Inc. | Methods of treating cancers with antagonistic anti-PD-1 antibodies |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2009124226A (ru) | 2010-12-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106188282B (zh) | 抗诺如病毒gi.1型鼠源单克隆抗体的制备和应用 | |
| RU2420587C2 (ru) | ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА И Fab, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С АНТИГЕНОМ F1 ИЗ Yersinia pestis, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ | |
| CN117417455A (zh) | 一种特异性结合25-羟基维生素d3的抗原结合蛋白 | |
| CN103459427A (zh) | 针对人IgG抗体的CH1结构域中表位的抗原结合蛋白 | |
| US20260116955A1 (en) | Anti-respiratory syncytial virus antibody and related use thereof | |
| RU2420588C2 (ru) | МЫШИНЫЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С АНТИГЕНОМ F1 ИЗ Yersinia pestis, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ, СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ Yersinia pestis | |
| US20180072803A1 (en) | Monoclonal anti-gpc-1 antibodies and uses thereof | |
| CN119569884B (zh) | 一种用于检测和中和抗d抗体的抗独特型抗体及其用途 | |
| CN119176879B (zh) | 一种中和抗d抗体的抗独特型抗体及其应用 | |
| CN113621059B (zh) | 一种β2-微球蛋白检测试剂盒及其临床应用 | |
| CN114249828B (zh) | 一种DNase I的单克隆抗体及其制备方法 | |
| CN114213541B (zh) | 一种全能核酸酶的单克隆抗体及其制备方法 | |
| CN119176880A (zh) | 中和抗d抗体的抗独特型抗体及其用途 | |
| CN114127110A (zh) | 抗cgrp抗体及其应用 | |
| RU2539752C2 (ru) | ГУМАНИЗИРОВАННОЕ АНТИТЕЛО И АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ФРАГМЕНТ (Fab), СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С ИНТЕРФЕРОНОМ- γ ЧЕЛОВЕКА, ФРАГМЕНТЫ ДНК, КОДИРУЮЩИЕ УКАЗАННОЕ АНТИТЕЛО И АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ФРАГМЕНТ, КЛЕТКА, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ ФРАГМЕНТОМ ДНК, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УКАЗАННОГО АНТИТЕЛА И АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩЕГО ФРАГМЕНТА | |
| CN117069850B (zh) | 一种vce的单克隆抗体及其制备方法 | |
| CN115825415B (zh) | 阻断剂和体外免疫诊断产品、应用 | |
| CN119462949B (zh) | 一种抗β-内酰胺酶的抗体或其抗原结合片段、生物产品及其应用 | |
| CN121293342B (zh) | 一种抗毒素蛋白的结合分子及其试剂盒 | |
| CN118852443B (zh) | 抗Taq DNA聚合酶抗体和热启动Taq DNA聚合酶及其应用 | |
| RU2440412C2 (ru) | ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ ФРАГМЕНТЫ (Fab) ПРОТИВ ВИРУСА БЕШЕНСТВА, ИЗОЛИРОВАННЫЙ ФРАГМЕНТ ДНК, КОДИРУЮЩИЙ Fab ПРОТИВ ВИРУСА БЕШЕНСТВА, КЛЕТКА ДРОЖЖЕЙ, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ ФРАГМЕНТОМ ДНК, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Fab ПРОТИВ ВИРУСА БЕШЕНСТВА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ | |
| CN114249829B (zh) | 一种RNase抑制剂的单克隆抗体及其制备方法 | |
| RU2737466C1 (ru) | Гуманизированное нейтрализующее антитело к интерферону-бета человека | |
| RU2728696C2 (ru) | Моноклональное антитело к интерферону бета-1а человека | |
| RU2623157C1 (ru) | УЧАСТОК СВЯЗЫВАНИЯ АНТИГЕНА (Fab), В ТОМ ЧИСЛЕ ГУМАНИЗИРОВАННЫЙ Fab, ПРОТИВ БОТУЛИНИЧЕСКОГО НЕЙРОТОКСИНА С (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Fab С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ, СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ БОТУЛИНИЧЕСКОГО НЕЙРОТОКСИНА С |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner |