RU2425148C2 - Штамм brucella abortus уф-1 для приготовления биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных - Google Patents
Штамм brucella abortus уф-1 для приготовления биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2425148C2 RU2425148C2 RU2007149381/15A RU2007149381A RU2425148C2 RU 2425148 C2 RU2425148 C2 RU 2425148C2 RU 2007149381/15 A RU2007149381/15 A RU 2007149381/15A RU 2007149381 A RU2007149381 A RU 2007149381A RU 2425148 C2 RU2425148 C2 RU 2425148C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- animals
- brucellosis
- vaccine
- brucella abortus
- Prior art date
Links
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 32
- 241000589567 Brucella abortus Species 0.000 title claims abstract description 12
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 229940056450 brucella abortus Drugs 0.000 title claims abstract description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title abstract 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 35
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000001018 virulence Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 abstract 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 abstract 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 25
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 19
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 18
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 18
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 11
- 244000309466 calf Species 0.000 description 11
- 244000309465 heifer Species 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 5
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 241000322359 Brucella abortus 82 Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 2
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Chemical compound CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 2
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 2
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000006101 laboratory sample Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- VEMLQICWTSVKQH-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;propane-1,2,3-triol Chemical compound OCC(O)CO.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O VEMLQICWTSVKQH-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-aminophenyl)-(4-imino-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]aniline;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(=N)C(C)=CC1=C(C=1C=CC(N)=CC=1)C1=CC=C(N)C=C1 AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 101710137302 Surface antigen S Proteins 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229960001533 brucellosis vaccines Drugs 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960005069 calcium Drugs 0.000 description 1
- 235000001465 calcium Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 1
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000011640 ferrous citrate Substances 0.000 description 1
- 235000019850 ferrous citrate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 1
- APVZWAOKZPNDNR-UHFFFAOYSA-L iron(ii) citrate Chemical compound [Fe+2].OC(=O)CC(O)(C([O-])=O)CC([O-])=O APVZWAOKZPNDNR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001936 parietal effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 206010040872 skin infection Diseases 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии. Вакцинный штамм Brucella abortus УФ-1 используется для приготовления биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных. Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ФГУ «ФЦТРБ» под регистрационным номером 289. Штамм имеет низкую остаточную вирулентность и высокую иммуногенность. 3 табл.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии.
Известен штамм Brucella abortus 82 и 82 ПЧ, используемые при изготовлении сухой живой бруцеллезной вакцины для иммунизации крупного рогатого скота (1).
Недостатками известного штамма Brucella abortus 82 являются высокая остаточная вирулентность и абортогенные свойства при вакцинации.
Целью изобретения является штамм Brucella abortus, не обладающий абортогенными свойствами при использовании его в качестве вакцины для иммунизации тельных коров и обладающий высокой иммуногенностью
Штамм Brucella abortus УФ-1 (чувствительный к эритритолу, получен и шт.19 воздействием ультрафиолетовых лучей и последующим отбором на селективной питательной среде) имеет следующие морфологические и физиологические характеристики. Клетки представляют собой неподвижные овальные коккобактерии размером от 0,3 до 0,5 мкм, спор и капсул не образуют, в мазках располагаются отдельно, попарно или в виде цепочек из 2-3 клеток. Бактерии красятся по Граму отрицательно, по Козловскому - в красный цвет.
Штамм является факультативным аэробом. Хорошо растет на мартеновском агаре с переваром Хоттингера и пептонно-печеночном глюкозо-глицериновом агаре и бульоне. На искусственных питательных средах рост появляется на 2-3 сутки и проявляется в жидких питательных средах в виде мути и иногда с образованием пристеночного кольца и на плотных питательных средах - виде однородных колоний величиной от 1,5 до 2 мкм в диаметре. При визуальном осмотре под малым увеличением микроскопа окрашенные по методу Уайт-Вилсона 3-4-суточные колонии имеют фиолетовую поверхность и фиолетовый ободок. Популяции представлены из SR-колоний.
Дифференциальные среды. Brucella abortus УФ-1 растет на среде с фуксином 1:25000. Растет в синтетической среде следующего состава: фосфатный буфер 1/15М, рН 7,4-1,0 л, сернокислый магний - 0,1 г/л, железо-лимоннокислое закисное 50 мг/л, L-цистерн 50 мг/л, L-глутаминовая кислота - 100 мг/л, DL-лейцин - 100 мг/л, 1-гистидин - 100 мг/л, 1-цистин 50 мг/л, рибофлавин, тиамин, биотин, патентенат кальция по 2 мг/л. В отличие от штамма Brucella abortus 82 не растет на средах с тионином, пенициллином в дозе 5 ед./мл среды и эритритолом в концентрации 1 мг/л.
При росте на пептонно-печеночном агаре образует сероводород, проявляет уреазную активность.
Агглютинирует с монорецепторной М-сывороткой в S- и R-специфических бруцеллезных сыворотках; в 0,9% раствора хлористого натрия рН 7,0 образует гомогенную суспензию.
Дает слабо положительную термоагглютинацию, положительную пробу в растворе трипафлавина.
При подкожном заражении 1-5 млрд взвесью Brucella abortus УФ-1 морские свинки в течение 6 месяцев не имели клинических признаков заболевания. Культура штамма вызывает умеренное обсеменение морских свинок в течение 1-2 мес. Минимальная инфицирующая доза Brucella abortus УФ-1 для морских свинок находится в пределах 10000 микробных клеток.
Элиминируется из организма морских свинок после подкожной инъекции в дозах 1-2 млрд микробных клеток через 2 месяца. Иммуногенность для морских свинок в дозе 2-4 млрд микробных клеток составляет не менее 70%, а у штамма 82 ПЧ - только 50%.
Сыворотки крови, взятые от морских свинок, через месяц после введения препарата в реакции агглютинации со стандартным S-антигеном отрицательны. Лишь некоторые из них дают положительные реакции в титре 10-20 ME, а затем утрачивают эти показатели в короткие сроки. Телята в возрасте 6-8 месяцев, иммунизированные вакциной из штамма Brucella abortus УФ-1, через месяц реагируют отрицательно. Через 5 месяцев все подопытные животные дают отрицательные показатели.
Абортогенные свойства штамма Brucella abortus УФ-1 изучали на 22 коровах, находившихся в различной стадии беременности. В течение 6 месяцев после прививки у опытных животных прошли нормальные отелы. В отличие от штамма Brucella abortus 82 аборты не отмечались.
У морских свинок, привитых штаммом УФ-1 в дозе 2 млрд м.к., формируется длительный и стойкий иммунитет. Через 3 месяца 85% морских свинок устойчивы к контрольному заражению в дозе (10 МИД) вирулентным штаммом 54, а через 5 месяцев 66,6% животных. Штамм Brucella abortus УФ-1 обладает низкой остаточной вирулентностью и лишен абортогенных свойств.
У крупного рогатого скота через два месяца после введения штамма антител в диагностических титрах не обнаруживаются. Через 5 месяцев все подопытные животные дают отрицательные показатели.
Полученный штамм обладает низкой остаточной вирулентностью и лишен абортогенных свойств.
Пример 1. Изготовление вакцины. Для изготовления вакцины против бруцеллеза штамм УФ-1 культивировали на печеночно-пептонном, глюкозо (1%) - глицериновом (2%) агаре (рН 7,2) в течение 72 часов при 37°С. Затем бактериальную массу смывали с поверхности питательного агара со средой высушивания следующего состава: сахароза - 5%, желатин - 1,5%, рН 6,6-7,0, разводили этой средой до конечной концентрации 200 млрд/мл, разливали в ампулы по 5 мл и лиофилизировали в аппарате «Lozanna».
По окончании лиофилизации ампулы с вакциной запаивали под вакуумом. Сохранность бруцелл при этих условиях лиофилизации была 75±5% при остаточной влажности 1,5-2%. Количество живых клеток определяли методом посева на ППГГА до и после лиофилизации препарата.
Пример 2. Имунногенность полученного вакцинного препарата определяли на морских свинках. Для этого лиофилизированную биомассу разводили до конечной концентрации 2 млрд микробных клеток разбавителем сухой живой вакцины (авторское свидетельство №1638855 от 30 октября 1989 г.).
Вакцину вводили подкожно в области внутренней поверхности правого бедра в дозе 1 мл. Контрольной группе морских свинок инициировали физиологический раствор хлористого натрия в той же дозе. Через 3 месяца опытных и контрольных групп морских свинок заражали культурой вирулентного штамма Brucella abortus-54 в дозе 50 (10 минимальных инфицирующих доз микробных клеток). Через месяц после заражения морских свинок усыпляли эфиром и определяли индекс инфицированности и количество иммунных животных. Опыты были повторены 5 раз с использованием 100 морских свинок. Количество иммунных морских свинок составляло 88,3±8,1% при 100%-ном инфицировании контрольных животных с индексом инфицированности 72.
Пример 3. В другой серии опытов определяли иммуногенность вакцины на крупном рогатом скоте.
Опыты проводили на трех группах крупного рогатого скота: 1 группа - 5 голов, привили суспензией бруцелл штамма УФ-1, 2 группа - 3 головы, иммунизировали вакциной из штамма 82, 3 группа - 2 головы, вводили вакцину из штамма 19. Вакцины штамма 19 и 82 использовали согласно Наставления по их применению. Для изготовления вакцины бактериальную массу бруцелл штамма УФ-1 получали из печеночно-пептонном глюкозо (1%) глицериновом (2%) агаре (ППГГА). Бактерии смывали через 2,5 суток культивирования при 37±0,5°С стерильным физиологическим раствором хлористого натрия, рН 7,1. Вакцину готовили в концентрации 20 млрд м.к./см3. Этой суспензией вакцинировали крупный рогатый скот. Доза 5 см3. Все препараты вводили подкожно в область верхней трети шеи.
В первой группе из 5 животных 4 были стельными и одна телка бесплодной, во второй и третьей группах все животные - стельные.
До вакцинации всех животных двукратно с интервалом 7 дней исследовали серологически на бруцеллез.
Через 6 месяцев после вакцинации всех 3 групп и группу непривитых коров заражали конъюктивально вирулентной культурой штамма 54 в дозе 40 МИД. Предварительно культуру вирулентного штамма оттитровали заражением аналогичного поголовья крупного рогатого скота. Через 40 дней после заражения опытных и контрольных животных убивали и исследовали бактериологически. Исследования производили из лимфоузлов (подчелюстные, заглоточные, околоушные, предлопаточные, надвымянные, крестцовые, брыжеечные), печени, селезенки, почек, матки, костного мозга на ППГГА, ППГГБ и эритрит-агар. Посевы инкубировали в термостате в течение 30 дней. По количеству выделенных культур определяли индекс инфицированности (И.И.) и процент иммунных животных по группам.
В первые дни после вакцинации у всех животных наблюдалось повышение температуры на 0,5-2,0°С, учащение пульса на 5-10 ударов/мин и дыхания на 4-8 движения в минуту. Эти показатели приходили к норме на 5-6 день после вакцинации.
На месте инъекции вакцин образовалась упругая, болезненная припухлость, размеры которой достигали максимума на 3-4 день после прививки и составили в среднем 5×6 см. Эта местная реакция полностью угасала через 25-28 дней после вакцинации.
Иммунологическая перестройка организма животных после вакцинации сопровождалась усилением фагоцитарной активности лейкоцитов.
После иммунизации телок вакциной из штамма бруцелл УФ-1 агглютинины в сыворотках крови в РА обнаруживались в титрах 1:40-1:80, а с вакциной из штамма 82 - в титрах 1:160. После иммунизации вакцин из штамма 19 титры антител достигли 1:640 и более. Максимальное содержание агглютининов в сыворотках крови отмечалось к 15 дню после вакцинации, затем их уровень постепенно снижался. Через 120-150 дней у коров, привитых штаммами УФ-1 и 82, агглютинины не обнаруживались, тогда как у коров, вакцинированных штаммом 19, они выделялись в титрах 1:320 даже через 180 дней.
Розбенгал-проба (РБП) и РСК была положительной у большинства привитых SR штаммами (УФ-1, 82) в течение первых 45 дней после вакцинации. У всех животных этих групп РБП стала отрицательной к 60 дню, тогда как у коров, привитых штаммом 19-0, так же как и РСК, она оставалась положительной в течение всего срока наблюдения (6 месяцев), Комплементсвязывающие антитела у коров, привитых штаммом УФ-1 и 82, уже не выделялись через 60 дней после вакцинации.
У всех коров, привитых штаммами УФ-1 и 19, беременность и роды проходили без осложнений. В группе животных, вакцинированных штаммом 82, одна корова №1-абортировала (возраст плода 7,5 мес), а у другой - (№9) после родов было задержание последа. Из абортированного плода коровы №1 и истечений матки были выделены культуры вакцинного штамма 82. У коровы №9 при бактериологических исследованиях выделений матки культуры вакцинного штамма не обнаруживали из-за пророста посторонней микрофлорой. Однако при радиоиммунологическом анализе истечений из матки была получена положительная реакция.
У коров №19, привитой вакциной из штамма 82, стельность протекала без осложнений в течение всего срока наблюдения. Телята, родившиеся от всех вакцинированных коров, развивались нормально.
В результате определения устойчивости животных конъюнктивальному заражению установили, что у непривитых коров происходило интенсивное расселение бруцелл штамма 54. При этом у всех трех животных наблюдалась генерализованная форма бруцеллеза (И.И. - 60,2), тогда как у всех вакцинированных групп животных проявилась более высокая устойчивость. В частности, в группе коров, привитых культурой штамма УФ-1, из 5 животных, иммунными были 3 (60%). В отличие от непривитых животных у вакцинированных коров, заразившихся бруцеллами, генерализация процесса не происходила и бруцеллы выделялись лишь из региональных лимфатических узлов (И.И. - 14,3).
Из трех коров, привитых штаммом 82, заразилась одна (И.И.-7,0). Из двух коров, вакцинированных штаммом 19, у одной отмечался прорыв иммунитета (И.И.-3,4).
Результаты исследований по определению иммуногенности лабораторных образцов вакцин из штамма УФ-1 в зависимости от сроков хранения приведены в таблице 1.
| Таблица 1 | |||||||
| Иммуногенность лабораторных образцов вакцин штамма УФ-1 для морских свинок в зависимости от срока хранения | |||||||
| № п/п | Группа морских свинок, привитых вакциной | сроки хранения (мес) | кол. жив. | из них имм. | выделено культ. | И.И. | |
| гол. | % | ||||||
| 1 | Серия 1.2.87 | 10 | 20 | 15 | 75,0 | 8 | 4,0 |
| 2 | Серия 1.2.87 | 6 | 28 | 22 | 78,6 | 26 | 9,2 |
| 3 | Серия 6.1.88 | 4 | 34 | 28 | 82,4 | 26 | 7,6 |
| 4 | Серия 4.2.88 | 3 | 22 | 18 | 81,6 | 34 | 15,6 |
| 5 | Серия 25.4.88 | 10 дней | 25 | 24 | 96,0 | 2 | 0,8 |
| 6 | Серия 25.4.88 | 12 | 25 | 18 | 72,0 | 16 | 6,4 |
| 7 | Контроль непривитые (зараж. шт. 54,108±7 м.к.) | 10 | 0 | 0 | 64 | 64 | |
Анализируя эти данные, можно отметить, что вакцина 6-12-месячным сроком хранения защищала от инфицирования 72,0-78,6% морских свинок, 3 и 4-месячного хранения 81,6 и 82,4%. При этом у всех непривитых морских свинок наблюдался генерализованный процесс (И.И. - 64). У свежеприготовленных вакцин иммуногенность несколько выше по сравнению с препаратами длительного хранения.
Вакциной серии 1.2.87 был поставлен опыт на трех телятах 4-4,5 месячного возраста. Вакцину, разведенную в специальном разбавителе, вводили подкожно в область верхней трети шеи - в объеме 4 см3 (50 млрд. м.к.). Спустя 4,5 месяца после иммунации вакцинированных и непривитых телят (контрольных) заразили конъюктивально культурой вирулентного штамма 54 в дозе 10 МИД.
Через 33 дня после заражения всех животных убивали и подвергали бактериологическим исследованиям (таблица 2).
Как видно из приведенных данных, все непривитые телята заразились и инфекционный процесс у них имел генерализованную форму (И.И. - 48,1). Все три вакцинированных телят оказались устойчивыми к заражению вирулентным штаммом бруцелл и от них культуры не выделялись.
| Таблица 2 | ||||||
| Результаты бактериологических исследований материала от вакцинированных и непривитых телят после заражения их вирулентным шт.54 | ||||||
| Группы животных | кол-во животн. | из них заразилось | иммун. %% | количество | И.И. | |
| иссл. орг. | выд. | |||||
| 1. Привитые вакциной из штамма УФ-1 | 3 | 0 | 100,0 | 65 | 0 | |
| 2. Непривитые | 3 | 3 | 0 | 76 | 32 | 48,1 |
В другой серии опытов 10 телок 15-16-месячного возраста привили сухой вакциной из штамма УФ-1 в дозе 100 млрд м.к. Для исследования брали пробы пункцией яремной вены до и через 7, 14, 30, 45, 60 дней и через каждый месяц до 300 дней после вакцинации. С сыворотками крови ставили объемную РА со стандартным антигеном (единый бруцеллезный) и гомологичным (приготовлен из штамма УФ-1 в лаборатории биохимии). РСК ставили со стандартным и Р-антигенами, приготовленным в лаборатории по изучению бруцеллеза с.н.с. А.М.Фоминым. Результаты исследований свидетельствуют о слабой агглютиногенности вакцины из штамма УФ-1. Агглютинины у привитых животных на 7-15 дни после вакцинации регистрировались со стандартным антигеном в титрах 1:40-1:80 ME. С 30 дня после прививки титры агглютининов начали снижаться. В РСК со стандартным антигеном две телки реагировали положительно в титре 1:5 на 7 день. У одной из них положительная реакция на этом уровне сохранялась и к 15 дню исследования. Последующие сроки исследования РСК у всех животных была отрицательной. РА с гомологичным антигеном у отдельных животных была несколько выше по сравнению со стандартным. Однако тенденция нарастания и угасания агглютининов с обоими антигенами была сходной.
Все привитые животные реагировали в РСК положительно с R-антигеном, что свидетельствует о приживаемости вакцинного штамма в организме. На 7 сутки титры антител составляли 1:5-1:20, на 14 день - 1:5-1:10. Через месяц началось снижение количества антител и через 45 дней лишь две телки реагировали в титре 1:5. В более поздние сроки антитела с R-антигеном не обнаруживались.
Для определения иммуногенности вакцины телок, привитых в дозе 100 млрд м.к., через 315 дней после вакцинации заразили конъюнктивально оттитрованной культурой вирулентного штамма 54 (10 МИД - 50 млн.м.к.). Одновременно заражали трех аналогичных телок, непривитых против бруцеллеза.
Результаты бактериологических исследований, приведенные в таблице 3, показывают, что иммунизированные вакциной УФ-1 телки проявляли высокую устойчивость (70%) к возбудителю бруцеллеза в дозе 10 МИД через 10,5 месяца после вакцинации. Лишь от трех животных выделялись культуры вирулентного штамма из отдельных региональных лимфатических узлов. У невакцинированных животных развилась генерализованная бруцеллезная инфекция (И.И.- 49,3).
В этих опытах две телки были стельными к моменту вакцинации (срок стельности 1-1,5 месяца). У этих животных беременность протекала без осложнений и завершилась родами. Полученные телята нормально развивались в течение срока наблюдения (до 1 месячного возраста). Кроме того, две телочки были осеменены в период опыта и от них родились телята через 20 и 35 дней после заражения.
У всех 4 телят в сыворотках крови после рождения (до приема молозива) антитела в РА и РСК не обнаруживались. При бактериологических исследованиях их через 10 и 30 дней после рождения культуры бруцелл не выделялись.
| Таблица 3 | ||||||
| Результаты бактериологических исследований крупного рогатого скота после заражения | ||||||
| Группы животных | количество животных | иммунных % | колич. иссл. орг. | выделен. культ. | И.И. | |
| в опыте | из них зараж. | |||||
| 1. Привитые шт. УФ-1 | 10 | 3 | 70 | 248 | 5 | 2,0 |
| 2. Контроль непривитые | 3 | 3 | 0 | 75 | 37 | 49,3 |
В результате проведенных исследований отобран слабоагглютиногенный неабортогенный вакцинный штамм Бруцелла абортус УФ-1, который имеет отличительные генетические маркеры: имеет SR-форму, чувствителен к пенициллину и эритриту.
Claims (1)
- Штамм Brucella abortus УФ-1 для приготовления биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных депонирован в коллекции микроорганизмов ФГУ «ФЦТРБ» под регистрационным номером 289.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007149381/15A RU2425148C2 (ru) | 2007-12-26 | 2007-12-26 | Штамм brucella abortus уф-1 для приготовления биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007149381/15A RU2425148C2 (ru) | 2007-12-26 | 2007-12-26 | Штамм brucella abortus уф-1 для приготовления биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007149381A RU2007149381A (ru) | 2010-03-27 |
| RU2425148C2 true RU2425148C2 (ru) | 2011-07-27 |
Family
ID=42137864
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007149381/15A RU2425148C2 (ru) | 2007-12-26 | 2007-12-26 | Штамм brucella abortus уф-1 для приготовления биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2425148C2 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2539827C1 (ru) * | 2013-08-27 | 2015-01-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии) | Способ получения бруцеллезного l-антигена |
| CN104862242A (zh) * | 2015-03-20 | 2015-08-26 | 中国食品药品检定研究院 | 一种布氏菌疫苗 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN120173793B (zh) * | 2025-03-10 | 2026-01-30 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 粗糙型布鲁氏菌弱毒株及其应用、疫苗、抗原与试剂盒 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1701743A1 (ru) * | 1988-09-20 | 1991-12-30 | Алтайский Научно-Исследовательский Ветеринарная Станция | Штамм бактерий BRUceLLa авоRтUS, используемый дл приготовлени вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота |
| SU1761796A1 (ru) * | 1990-08-21 | 1992-09-15 | Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт | Штамм бактерии BRUceLLa авоRтUS, используемый дл изготовлени вакцин против бруцеллеза |
| RU2130068C1 (ru) * | 1997-11-12 | 1999-05-10 | Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов | Штамм brucella abortus, используемый для изготовления диагностических и профилактических биопрепаратов против бруцеллеза животных |
| RU2149183C1 (ru) * | 1999-08-20 | 2000-05-20 | Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов | Штамм бактерий brucella abortus, используемый для изготовления диагностических и профилактических биопрепаратов против бруцеллеза животных |
-
2007
- 2007-12-26 RU RU2007149381/15A patent/RU2425148C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1701743A1 (ru) * | 1988-09-20 | 1991-12-30 | Алтайский Научно-Исследовательский Ветеринарная Станция | Штамм бактерий BRUceLLa авоRтUS, используемый дл приготовлени вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота |
| SU1761796A1 (ru) * | 1990-08-21 | 1992-09-15 | Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт | Штамм бактерии BRUceLLa авоRтUS, используемый дл изготовлени вакцин против бруцеллеза |
| RU2130068C1 (ru) * | 1997-11-12 | 1999-05-10 | Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов | Штамм brucella abortus, используемый для изготовления диагностических и профилактических биопрепаратов против бруцеллеза животных |
| RU2149183C1 (ru) * | 1999-08-20 | 2000-05-20 | Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов | Штамм бактерий brucella abortus, используемый для изготовления диагностических и профилактических биопрепаратов против бруцеллеза животных |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2539827C1 (ru) * | 2013-08-27 | 2015-01-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии) | Способ получения бруцеллезного l-антигена |
| CN104862242A (zh) * | 2015-03-20 | 2015-08-26 | 中国食品药品检定研究院 | 一种布氏菌疫苗 |
| CN104862242B (zh) * | 2015-03-20 | 2018-03-16 | 中国食品药品检定研究院 | 一种布氏菌疫苗 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2007149381A (ru) | 2010-03-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2224542C2 (ru) | Вакцина против урогенитальных инфекций на основе вагинального суппозитория | |
| CN102949714A (zh) | 猪链球菌病三价灭活疫苗及制备方法 | |
| Adlam et al. | Natural and experimental staphylococcal mastitis in rabbits | |
| RU2425148C2 (ru) | Штамм brucella abortus уф-1 для приготовления биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных | |
| US4472378A (en) | Live vaccine for the prevention of salmonellosis in water fowl, a process for making and applying the same | |
| RU2159127C1 (ru) | Вакцина против псевдомоноза пушных зверей | |
| SU997599A3 (ru) | Способ получени гетеровакцины дл лечени синдрома трихомонада | |
| RU2065749C1 (ru) | Способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота | |
| Cox et al. | An investigation of Encephalitozoon cuniculi in the wild rabbit Oryctolagus cuniculus in Victoria, Australia | |
| Sarma et al. | Brucellosis: A major abortion causing disease of livestock with zoonotic potential | |
| RU2108110C1 (ru) | Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота | |
| CN115887631A (zh) | 一种副猪嗜血杆菌和猪链球菌二联疫苗 | |
| RU2217163C2 (ru) | Вакцина против кандидоза сельскохозяйственных животных | |
| RU2831198C1 (ru) | Средство специфической профилактики против клинических и субклинических маститов коров | |
| RU2099081C1 (ru) | Способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза нутрий | |
| RU2268933C1 (ru) | ШТАММ Haemophilus parasuis СК-1 - ВОЗБУДИТЕЛЬ ГЕМОФИЛЕЗНОГО ПОЛИСЕРОЗИТА СВИНЕЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ | |
| RU2179861C2 (ru) | Вакцина против стрептококкоза крупного рогатого скота | |
| RU2269570C2 (ru) | Штамм haemophilus parasuis ил-1 - возбудитель гемофилезного полисерозита свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
| RU2486916C2 (ru) | Способ получения бруцеллезного l-антигена | |
| RU2099082C1 (ru) | Вакцина против стрептококкоза нутрий | |
| EP4570822A1 (en) | Immunizing and/or medical preparation for use in preventing and/or treating inflammatory conditions of cow udder | |
| RU2149183C1 (ru) | Штамм бактерий brucella abortus, используемый для изготовления диагностических и профилактических биопрепаратов против бруцеллеза животных | |
| RU2026081C1 (ru) | Вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных | |
| RU2252031C1 (ru) | Способ получения иммунной сыворотки к антигенам вирулентного штамма bacillus anthracis | |
| WO2007149012A1 (en) | Live tularemic vaccine nik-sp.f. tularensis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20100617 |
|
| FZ9A | Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal) |
Effective date: 20101224 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20111227 |