RU2425687C2 - СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ, ШТАММ КАЛЛУСНОЙ КУЛЬТУРЫ Ungernia victoris UV-22-ПРОДУЦЕНТ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО КОМПЛЕКСА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ, И СПОСОБ ЕГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ (ВАРИАНТЫ) - Google Patents
СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ, ШТАММ КАЛЛУСНОЙ КУЛЬТУРЫ Ungernia victoris UV-22-ПРОДУЦЕНТ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО КОМПЛЕКСА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ, И СПОСОБ ЕГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ (ВАРИАНТЫ) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2425687C2 RU2425687C2 RU2009103797/15A RU2009103797A RU2425687C2 RU 2425687 C2 RU2425687 C2 RU 2425687C2 RU 2009103797/15 A RU2009103797/15 A RU 2009103797/15A RU 2009103797 A RU2009103797 A RU 2009103797A RU 2425687 C2 RU2425687 C2 RU 2425687C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mycobacteria
- ungernia
- diseases caused
- acid
- victoris
- Prior art date
Links
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- 241001633600 Ungernia Species 0.000 title claims abstract description 26
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 claims abstract description 4
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 25
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 25
- FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N Kinetin Natural products N=1C=NC=2N=CNC=2C=1N(C)C1=CC=CO1 FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 22
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 22
- QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N kinetin Chemical compound N=1C=NC=2N=CNC=2C=1NCC1=CC=CO1 QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 229960001669 kinetin Drugs 0.000 claims description 22
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims description 21
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims description 21
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims description 21
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 20
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 20
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 20
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 claims description 20
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 claims description 20
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 claims description 20
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 18
- 235000008160 pyridoxine Nutrition 0.000 claims description 18
- 239000011677 pyridoxine Substances 0.000 claims description 18
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 claims description 18
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000005971 1-naphthylacetic acid Substances 0.000 claims description 8
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 7
- 241000234282 Allium Species 0.000 claims description 6
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 claims description 6
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 5
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 4
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims 2
- OZXTVOIUUZLNCG-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2-naphthalen-1-ylacetic acid Chemical class CC(O)=O.C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 OZXTVOIUUZLNCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 39
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 41
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 35
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 30
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 17
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 15
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 14
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 14
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 11
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 11
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 11
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 10
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 8
- MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N thymol Chemical compound CC(C)C1=CC=C(C)C=C1O MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ASUTZQLVASHGKV-JDFRZJQESA-N galanthamine Chemical compound O1C(=C23)C(OC)=CC=C2CN(C)CC[C@]23[C@@H]1C[C@@H](O)C=C2 ASUTZQLVASHGKV-JDFRZJQESA-N 0.000 description 6
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 6
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 6
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 6
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 6
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 6
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 5
- 208000008128 pulmonary tuberculosis Diseases 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 4
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 4
- 239000005844 Thymol Substances 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N isoniazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=NC=C1 QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 229960000790 thymol Drugs 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 3
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 230000031016 anaphase Effects 0.000 description 3
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 3
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 3
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 3
- 229960003980 galantamine Drugs 0.000 description 3
- ASUTZQLVASHGKV-UHFFFAOYSA-N galanthamine hydrochloride Natural products O1C(=C23)C(OC)=CC=C2CN(C)CCC23C1CC(O)C=C2 ASUTZQLVASHGKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- CKAXXGPMLYVWQI-UHFFFAOYSA-N lycorin Chemical compound C1C2=CC=3OCOC=3C=C2C2C(O)C(O)=CC3C2N1CC3 CKAXXGPMLYVWQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000442 meristematic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- -1 6-BAP and 2.4 D Natural products 0.000 description 2
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035126 Facies Diseases 0.000 description 2
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 2
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000003217 anti-cancerogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002558 anti-leprotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002790 anti-mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 2
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 231100000005 chromosome aberration Toxicity 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 229940072185 drug for treatment of tuberculosis Drugs 0.000 description 2
- AEUTYOVWOVBAKS-UWVGGRQHSA-N ethambutol Chemical compound CC[C@@H](CO)NCCN[C@@H](CC)CO AEUTYOVWOVBAKS-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 2
- XGVJWXAYKUHDOO-UHFFFAOYSA-N galanthidine Natural products C1CN2CC3=CC=4OCOC=4C=C3C3C2C1=CC(O)C3O XGVJWXAYKUHDOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 2
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 2
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 2
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 229960003350 isoniazid Drugs 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 2
- 230000036997 mental performance Effects 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 2
- 229940014662 pantothenate Drugs 0.000 description 2
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 description 2
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 230000036314 physical performance Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 229960005206 pyrazinamide Drugs 0.000 description 2
- IPEHBUMCGVEMRF-UHFFFAOYSA-N pyrazinecarboxamide Chemical compound NC(=O)C1=CN=CC=N1 IPEHBUMCGVEMRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004223 radioprotective effect Effects 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 2
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 2
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 2
- 238000011301 standard therapy Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- SEPPVOUBHWNCAW-FNORWQNLSA-N (E)-4-oxonon-2-enal Chemical compound CCCCCC(=O)\C=C\C=O SEPPVOUBHWNCAW-FNORWQNLSA-N 0.000 description 1
- WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 4-aminosalicylic acid Chemical class NC1=CC=C(C(O)=O)C(O)=C1 WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LLBZPESJRQGYMB-UHFFFAOYSA-N 4-one Natural products O1C(C(=O)CC)CC(C)C11C2(C)CCC(C3(C)C(C(C)(CO)C(OC4C(C(O)C(O)C(COC5C(C(O)C(O)CO5)OC5C(C(OC6C(C(O)C(O)C(CO)O6)O)C(O)C(CO)O5)OC5C(C(O)C(O)C(C)O5)O)O4)O)CC3)CC3)=C3C2(C)CC1 LLBZPESJRQGYMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 241001116389 Aloe Species 0.000 description 1
- 244000208874 Althaea officinalis Species 0.000 description 1
- 235000006576 Althaea officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 206010002027 Amyotrophy Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282421 Canidae Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000260524 Chrysanthemum balsamita Species 0.000 description 1
- 235000005633 Chrysanthemum balsamita Nutrition 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- MQJKPEGWNLWLTK-UHFFFAOYSA-N Dapsone Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MQJKPEGWNLWLTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003790 Foot Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 239000005982 Indolylbutyric acid Substances 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 244000208060 Lawsonia inermis Species 0.000 description 1
- 244000207740 Lemna minor Species 0.000 description 1
- 235000006439 Lemna minor Nutrition 0.000 description 1
- 239000009456 Liv 52 Substances 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 201000006836 Miliary Tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 241000186362 Mycobacterium leprae Species 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 240000005319 Sedum acre Species 0.000 description 1
- 235000014327 Sedum acre Nutrition 0.000 description 1
- 240000000022 Silene vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000011312 Silene vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 244000197975 Solidago virgaurea Species 0.000 description 1
- 235000000914 Solidago virgaurea Nutrition 0.000 description 1
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015940 Viomycin Proteins 0.000 description 1
- 244000273928 Zingiber officinale Species 0.000 description 1
- 235000006886 Zingiber officinale Nutrition 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 description 1
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 238000010352 biotechnological method Methods 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- ASARMUCNOOHMLO-WLORSUFZSA-L cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2s)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O ASARMUCNOOHMLO-WLORSUFZSA-L 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003583 cytomorphological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000860 dapsone Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000005786 degenerative changes Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960000285 ethambutol Drugs 0.000 description 1
- 229960002001 ethionamide Drugs 0.000 description 1
- AEOCXXJPGCBFJA-UHFFFAOYSA-N ethionamide Chemical compound CCC1=CC(C(N)=S)=CC=N1 AEOCXXJPGCBFJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 210000003195 fascia Anatomy 0.000 description 1
- 229940124600 folk medicine Drugs 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 235000008397 ginger Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- TWBYWOBDOCUKOW-UHFFFAOYSA-N isonicotinic acid Chemical class OC(=O)C1=CC=NC=C1 TWBYWOBDOCUKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930013397 isoquinoline alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 125000002183 isoquinolinyl group Chemical class C1(=NC=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 235000001035 marshmallow Nutrition 0.000 description 1
- XBCXJKGHPABGSD-UHFFFAOYSA-N methyluracil Natural products CN1C=CC(=O)NC1=O XBCXJKGHPABGSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 description 1
- HYIMSNHJOBLJNT-UHFFFAOYSA-N nifedipine Chemical compound COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C(C(=O)OC)C1C1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O HYIMSNHJOBLJNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 208000008423 pleurisy Diseases 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002488 pyknotic effect Effects 0.000 description 1
- 206010037833 rales Diseases 0.000 description 1
- 239000012492 regenerant Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000260 solasulfone Drugs 0.000 description 1
- WAGUNVVOQBKLDL-UHFFFAOYSA-J solasulfone Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C=1C=C(S(=O)(=O)C=2C=CC(NC(CC(C=3C=CC=CC=3)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=CC=2)C=CC=1NC(S(=O)(=O)[O-])CC(S([O-])(=O)=O)C1=CC=CC=C1 WAGUNVVOQBKLDL-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000011255 standard chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000035900 sweating Effects 0.000 description 1
- UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J tetrasodium;2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl-(carboxylatomethyl)amino]acetate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- GXFAIFRPOKBQRV-GHXCTMGLSA-N viomycin Chemical compound N1C(=O)\C(=C\NC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](N)CCCN)CNC(=O)[C@@H]1[C@@H]1NC(=N)N[C@@H](O)C1 GXFAIFRPOKBQRV-GHXCTMGLSA-N 0.000 description 1
- 229950001272 viomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к средству для профилактики и лечения заболеваний, вызываемых микобактериями. Штамм каллусной культуры Ungernia victoris UV-22, депонированный в Коллекции клеточных культур Института молекулярной биологии и генетики ПАН Украины №13/2008 - продуцент комплекса биологически активных веществ для лечения заболеваний, вызываемых микобактериями. Водно-спиртовый экстракт каллусной ткани Ungernia victoris штамма UV-22, депонированного в Коллекции клеточных культур Института молекулярной биологии и генетики ПАН Украины №13/2008 в качестве средства для лечения заболеваний, вызываемых микобактериями. Способ культивирования каллусной ткани Ungernia victoris штамма UV-22 путем микроклонального размножения (варианты). Вышеописанные средства эффективны для лечения заболеваний, вызываемых микобактериями. 4 н.п. ф-лы, 7 табл.
Description
Изобретение относится к области медицины, точнее к средствам для лечения заболеваний, вызываемых микобактериями, и технологии их получения, в частности новому штамму-продуценту и технологии выращивания клеток растений с помощью микроклонального размножения.
Изобретение относится к области медицины и биотехнологии, а именно к новым лекарственным средствам для лечения таких заболеваний, вызываемых микобактериями (МБ), как лепра (проказа) и туберкулез, а также к способам их получения, в частности, с помощью технологии культивирования клеточной ткани.
Заболевания, вызываемые микобактериями, в частности туберкулез и лепра, относятся к числу наиболее трудноизлечимых. Исследования, проведенные Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ), показали, что проблема туберкулеза (ТБ) стоит чрезвычайно остро, о чем свидетельствует уровень инфицированности населения земного шара, составляющий свыше 1 миллиарда человек, из них 44% болеют наиболее опасной для окружающих легочной формой этого заболевания. Около 8 миллионов человек заболевают туберкулезом и около 2 млн. человек умирает от этого заболевания каждый год. Возбудителем заболевания является Mycobacterium tuberculosis, главным образом человеческого, редко бычьего и в исключительных случаях птичьего типа. (Dye С, Scheele S, Dolin P, Pathania V and Ravinglione M С, 1999, JAMA, 282, 7, 677-686).
Проказа (лепра) вызывается Mycobacterium leprae и характеризуется поражением кожи, нервной системы, костей и глаз и приводит к инвалидизации, слепоте и смерти. (humbio.rn/humbio/infect_har/0032c27b.htm) Она менее распространена, чем туберкулез, однако в современном мире, преимущественно в развивающихся странах, насчитывается около 2 млн. больных. Современная клинико-эпидемиологическая ситуация по лепре в России отличается рядом особенностей. Заболеваемость носит спорадический характер, новые случаи практически не регистрируются, имеющийся контингент больных в основном составляют лица пожилого и преклонного возраста, страдающие от сопутствующей соматической патологии. Около 18 процентов больных имеют осложнения лепрозного процесса (нейротрофические язвы стоп, амиотрофии, мутиляции пальцев), поражения печени и т.п.
Основным направлением при лечении различных форм туберкулеза является химиотерапия препаратами, воздействующими на МБ, подавляя их размножение и уменьшая их вирулентность. К ним относятся, в частности, производные изоникотиновой кислоты, такие препараты, как гидразид изоникотиновой кислоты (изониазид) и его производные соли парааминосалициловой кислоты (ПАСК), антибиотики, а также канамицин, этионамид, протионамидтиоацетозон, флоримицин (Машковский М.Д. Лекарственные средства, ч.2. - М.: Медицина, 1985, с.314-327). Как правило, применяют 2-3 противотуберкулезных препарата в течение длительного срока (9-18 и более месяцев) с учетом их переносимости больным и устойчивости МБ. Общепринятая традиционная антибактериальная терапия предусматривает применение, как правило, тубазида (изониазида), рифампицина и стрептомицина (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - M.: Медицина, 1993, т.2, с.366-367; Урсов И.Г., Боровинский А.И., Федорова Т.А., Фоминцева О.А., Зырянова Т.В. Проблема туберкулеза, 1993, N 2. - М.: Медицина, с.34-36). Было предложено использовать при лечении туберкулеза метилурацил в сочетании с общепринятой комплексной терапией (антибактериальной, дезинтоксикационной) и витаминами. (Козленко Л.С. Проблемы туберкулеза, 1993, N 6, с.52-53). Наиболее эффективным препаратом для лечения туберкулеза является рифампицин, который вводится в организм перорально в виде капсул в суточной дозе 150 мг. Для снижения скорости выведения рифампицина из организма с мочой препарат вводится на фоне приема пиразинамида (Г.Б.Соколова и др. Антибиотики и химиотерапия, 2000, 45, №9, с.30-37).
Недостатками используемой химиотерапии является относительно низкая эффективность и большое число противопоказаний (болезни печени, почек, анемии и т.п.), а также наличие негативных побочных эффектов, таких как слабость, головные боли, поражения, что негативно сказывается на состоянии других систем организма.
Лечение лепры осуществляется также в рамках комплексной терапии путем применения 2-3 противолепрозных препаратов (диафенилсульфона, солюсульфона, диуцифона) в сочетании с общеукрепляющими средствами курсами по 9-18 мес. (Справочник практического врача. - М., Медицина, 1982, с.464; Машковский М.Д. Лекарственные средства, ч.2, М.: Медицина, 1985, с.329-331).
Недостатками используемых препаратов являются относительно невысокая эффективность, большое число противопоказаний (болезни печени, почек, анемии, эпилепсия и т.п.), а также наличие негативных побочных эффектов, таких как слабость, головные боли, поражения печени (Справочник практического врача. - М.: Медицина, 1982, с.120-122).
В народной медицине известно значительное количество средств, рекомендуемых для лечения туберкулеза и проказы. В частности, предлагаются составы и сборы на основе алтея, очитка, золотарника, буквицы, маргаритки многолетней, сосновых почек и др. (А.Аксенов. Энциклопедия знахаря. ACT, Донецк, 1982, 482-484), а также целесообразно использовать для этих целей имбирь, лимон с медом, алоэ с медом и сливочным маслом и другие средства (Полная энциклопедия народной медицины, т.3, Москва, АНС, 1999, 440, 441, 454, 520). Для лечения проказы рекомендуется использование листьев хны (Полная энциклопедия народной медицины, т.3, Москва, АНС, 1999, стр.532). Однако данное использование природного сырья, как правило, недостаточно эффективно и имеет значительное число противопоказаний.
Технической задачей, стоявшей перед авторами, являлось создание эффективного и более безопасного средства для лечения заболеваний, вызываемых микобактериями, и технологии его получения.
Технический результат был достигнут использованием для данных целей водно-спиртового экстракта штамма каллусной ткани растения Унгерния Виктора (Ungernia victoris)UV-22.
Экстракт, содержащий 0.01-0.05% сухого вещества, представляющего собой набор биологически активных веществ (БАВ), применяется для профилактики и лечения заболеваний, как правило, в дозе по 0,1-10 капель экстракта на 20 кг веса тела в качестве добавки в воду или сок после приема пищи 3 раза в день. Конкретная доза и режим приема устанавливают исходя из особенностей, стадии и характера протекания заболевания.
Унгерния Виктора Ungernia victoris (УВ) - эндемическое луковичное растение Памиро-Алая, произрастающее только на Гиссарском хребте и его южных отрогах. Луковицы, корни и листья УВ содержат важные для медицины галантамин, ликорин и другие изохинолиновые алкалоиды, а в каллусной ткани обнаружен комплекс биологически активных веществ, обладающий широким спектром позитивного воздействия на организм. В частности, он обладает радиопротекторным, антимутагенным, гепатозащитным, антиканцерогенным действием, повышает физическую и умственную работоспособность (RU 0010088, 21.10.1998; RU 2147439, 28.10.98; RU 2215762, 28.12.01; RU 0011467, 18.06.99; RU 2221584, 11.04.02; RU 2186577, 02.03.01; RU 2178979, 25.05.00). Вместе с тем, лечебное воздействие на заболевания, связанные с микобактериями, ранее не изучалось, причем предварительные исследования с использованием данного экстракта, выпускаемого под названием «Влаирин» (см. примеры), показали, что такое воздействие недостаточно высоко.
Использование для получения биологически активных веществ клубней Унгернии имеет свои ограничения, т.к. природная сырьевая база данного растения ограничена, а интродукция Унгернии успехом не увенчалась. В этой связи авторы рассматривали альтернативой природного размножения биотехнологические методы, в частности, способ микроклонального размножения в культуре in vitro нативной клеточной ткани. Преимуществами этого способа размножения в сравнении с традиционными методами являются более высокие коэффициенты размножения, миниатюризация процесса, оздоровление посадочного материала от разного вида инфекций.
В настоящее время для многих видов растений известны различные способы микроклонального размножения растительных клеток, включая клетки каллусной ткани (Калинин Ф. Л., Кушнир Г.П., Сарнацкая В.В. Технология микроклонального размножения растений. - К.: Наук. думка, 1992. - 230 с.; RU 2052925; RU 2130709; RU 2171841; RU 2141525). Преимуществами этого вида размножения в сравнении с традиционными методами являются более высокие коэффициенты размножения, миниатюризация процесса, оздоровление посадочного материала от разного вида инфекций.
Основными этапами при микроклональном размножении растений является получение регенерантов из эксплантов, которые выделяют из различных органов и тканей растений, и размножение регенерантов с помощью стимуляций.
Культивирование эксплантов до образования регенерантов и укоренения микрочеренков осуществляют, как правило, на агаризованных питательных средах. За основу сред используют среду Мурасиге-Скуга (Murashige T.,Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Phisiol. Plant. 1962. v.15. N13. p.473-497), которая содержит, мг/100 г:
- макросоли: NH4NO3 1650, KNO3 1900, MgSO4×7H2O 1900, CaCl2×2H2O 440, KH2PO4 170;
- микросоли: MgSO4×4H2O 22.3, Н3ВО3 6.2, ZnSO4×4H2O 8.6, CoCl2×6H2O 0.025, CuSO4×5H2O 0.025, NaMoO4×2H2O 0.025; KI 0.83;
- витамины: тиамин 0.1, миоинозитол 80, пиродоксин 0.5, никотиновая кислота 0.5;
- источник углерода - сахароза - 20000;
- агар - 7000;
- добавки для повышения скорости формирования регенерантов - гиббереловая кислота 2.0, кинетин - 1.0;
- вода - остальное.
На втором этапе в данную среду, как правило, дополнительно вводят β-индолилуксусную кислоту - 0.05 мг/л или b-индолилмасляную кислоту - 0.1 мг/л.
Однако используемые при этом биологически активные вещества (БАВ) способны вызывать генетические изменения в клетках, которые в процессе культивирования накапливаются, что приводит к увеличению количества регенерантов, отличающихся от исходного типа (Леонова Н.С. Сибирский вестник сельскохозяйственных наук, 1986, №3, с.18-23). Кроме того, практически все указанные технологии видоспецифичны, т.е. пригодны для определенной группы растений и без модификации не могут использоваться для культивирования клеток других растений. В частности, для культивирования калуссной ткани Silene vulgaris (RU 2169769) используют агаризованную среду, содержащую макро- и микросоли по Мурасиге-Скуга, гормоны роста, включая 6-БАП и 2,4 Д, фолиевую кислоту, рибофлавин, биотин, Сф-пантотенат и кобаламин; для культивирования калуссной ткани Lemna minor (RU 2171840) используют агаризованную среду, содержащую макро- и микросоли по Мурасиге-Скуга, витамины, гормоны роста, включая 6-БАП и 2,4 Д, фолиевую кислоту, рибофлавин, биотин, Сф-пантотенат и никатинамид.
Однако предложенные для культивирования данных растительных штаммов среды и технологии культивирования при культивировании клеток Унгернии Виктора не позволяют добиться решения поставленных задач без их модификации, т.к. использование для их культивирования таких стандартных питательных сред, как среды Мурасиге-Скуга, Линсмайер-Скуга, Гамборга, В 5, Эриксона, Уайта, оказалось малоэффективным - индукцию регенерации микролуковичек наблюдали у 2-3% эксплантов.
В настоящее время известен используемый для получения биологически активных веществ (БАВ) штамм культивируемых клеток листьев Ungernia victoris - продуцент алкалоидов (галантамина и ликорина) (RU 1806188, 1993). Для культивирования клеток используют модифицированную среду Мурасиге-Скуга, в которую в качестве добавок введены альфа-НУК и тирозин, а в качестве дополнительного источника углерода и азота - гидролизованный казеин. Однако данный штамм используется только для получения алкалоидов группы галантамина и ликорина, что не позволяет использовать продуцируемые им БАВ для профилактики и лечения заболеваний, вызываемых микобактериями.
Наиболее близким к заявляемому новому штамму по технической сущности и достигаемому эффекту является созданный ранее авторами на основе каллусной ткани растения - штамм культивируемых клеток Унгернии Виктора - Ungernia victoris UV-2, являющийся продуцентом БАВ, перспективных для использования в качестве радиопротекторного и антимутагенного препарата (UA №39572, 2001). Водно-спиртовый экстракт БАВ данного штамма, послуживший основой биологически активной добавки (БАД) «Влаирин», как показали проведенные исследования, обладает также гепатозащитным, антиканцерогенным действием, повышает физическую и умственную работоспособность (RU 0010088, 1998; RU 2147439, 198; RU 2215762, 2001; RU 0011467, 1999; RU 2221584, 2002; RU 2186577, 2001; RU №2178979, 2000).
Штамм культивируется в виде каллуса одностадийным способом в питательной среде, имеющей следующий состав, мг/л:
макросоли: NH4NO3 - 400-600; KNO3 - 1000-1200; (NH4)2SO4 - 200-400; MgSO4×7H2O - 400-600; Са(NO3)2×4Н2O - 800-1000; NH4H2PO4 - 500-700; (NH4)2HPO4 - 90-110; KCI - 60-80;
микросоли: MnSO4×5Н2O - 23-25; KI - 0,8-0,9; Na2MoO4×2Н2O - 0,2-0,3; CuSO4×5Н2O - 0,02-0,03; СоСl2×6Н2O - 0,02-0,03; Н3ВО3 - 5-8; ZnSO4×4Н2O - 7-9; FeSO4×7Н2O - 27-28; MnSO4×5Н2O - 23-25;
натриевая соль этилендиаминотетрауксусной кислоты (Na2ЭДТА) - 37-38;
витамины: тиамин 0,8-1,2;
сахароза 40000-60000;
агар 6000-8000;
рН до автоклавирования составлял 5,8-6,2.
Выход сырой биомассы из 1 л на 65-е сутки роста составляет 400-550 г. В перерасчете на сухую биомассу выход составляет 20-35 г/л.
Недостатком данного штамма является длительность времени выращивания (более 60 дней). Недостатком его комплекса БАВ является, как показали проведенные эксперименты, недостаточная эффективность при лечении таких заболеваний, как туберкулез и проказа.
Основой заявляемой группы изобретений являлось создание нового штамма каллусной культуры UNGERNIA VICTORIS UV-22, депонированного в Коллекции клеточных культур при Институте молекулярной биологии и генетики НАН Украины. Коллекционный номер штамма 13/2008.
Генеалогия штамма
Исходным материалом для получения каллусной ткани служила луковица унгернии массой 135 г. Перед введением в культуру in vitro луковицу выдерживали 18 месяцев в покоящемся состоянии при температуре 6-10°С. В качестве эксплантов использовали базальные части внутренних луковичных чешуй.
Стандартные условия выращивания
Штамм культивируется в виде каллуса (на агаризованной питательной среде) или в виде суспензии (в жидкой среде) при температуре 24-26°С, относительной влажности воздуха 70-80% в темноте.
Суспензионную культуру выращивают при постоянном перемешивании на качалках при 80-100 об/мин, для каллусной культуры качалка не используется. Выращивание штамма Унгерния UV-12 осуществляется способом в питательной среде состава, мг/л:
| NH4NO3 | 400-600 |
| KNO3 | 1000-1200 |
| (NH4)2SO4 | 200-400 |
| MgSO4x7H2O | 400-600 |
| Са(NO3)2×4Н2О | 800-1000 |
| NH4H2PO4 | 500-700 |
| (NH4)2HPO4 | 90-110 |
| KCI | 60-80 |
| KJ | 0,8-0,9 |
| Na2MoO4×2H2O | 0,2-0,3 |
| CuSO4×5H2O | 0,02-0,03 |
| CoCl2×6H2O | 0,02-0,03 |
| MnSO4×5H2O | 23-25 |
| Н3ВО3 | 5-8 |
| ZnSO4×4H2O | 7-9 |
| FeSO4×7H2O | 27-28 |
| Nа2ЭДТА | 37-38 |
| Тиамин | 0,8-1,2 |
| Пиридоксин | 0,5-1,0 |
| Никотиновая кислота | 0,5-1,0 |
| Глицин | 1,5-2,5 |
| 1-нафтилуксусная кислота | 1,8-2,2 |
| Кинетин | 0,8-1,2 |
| Гидролизат казеина | 450-500 |
| Мезоинозин | 70-100 |
| Сахароза | 50000-60000 |
| Агар | 6000-8000 |
| рН до автоклавирования | 5,8-6,2. |
Для суспензионной культуры используют аналогичную среду, отличающуюся тем, что из нее исключен агар.
Для выращивания культуры используют стеклянные сосуды (банки, колбы) объемом 250-300 мл, содержащие 50-60 мл среды. Каллусную культуру можно выращивать также в пробирках и чашках Петри разных размеров.
Кратность рассева: 8-12.
Культуральные особенности
Биомасса культивируемых клеток штамма Унгерния UV-12 состоит из клеток и клеточных агрегатов разной плотности. Размер клеточных агрегатов суспензионной культуры составляет около 0,5 см в диаметре. При выращивании на твердой (агаризованной) питательной среде каллусная культура более гетерогенна, она состоит из агрегатов от 0,1 до 0,8 см в диаметре более плотных, чем агрегаты суспензии. Цвет культуры - от светло-серого до светло-желтого.
Продолжительность пассажа и режим пересевов суспензионной культуры - 45-55 суток, каллусной культуры - 55-65 суток.
Каллусная культура не теряет жизнеспособности и заметно не изменяет основных параметров при выращивании в стандартных условиях без пересадки на протяжении 90-95 суток. Масса инокулята составляет 100-120 г живой биомассы в перерасчете на 1 л питательной среды.
Ростовые признаки
Тип роста неорганизованный. Ростовой индекс 3-5 для суспензионной культуры и 4-7 - для каллусной. Кривая роста имеет типичный S-подобный характер с выходом на плато на 45-50-е сутки роста для суспензии и на 55-60-е сутки роста для каллуса. Жизнеспособность клеток составляет 85-90% в стандартных условиях культивирования.
Выход сырой биомассы из 1 л на 65-е сутки роста составляет 400-550 г. В перерасчете на сухую биомассу выход составляет 20-35 г/л.
Кривая митотической активности имеет, как правило, один подъем с максимумом на 8-10-е сутки роста в суспензии и на 10-15-е сутки роста на агаризованной среде. Количество клеток, находящихся в разных стадиях митоза (митотический индекс), в максимуме митотической активности достигает 1,4-2,5%.
Кариологические признаки
Культура является миксоплоидной популяцией. Распределение клеток по числу хромосом имеет границы варьирования от 16 до 92 хромосом. Модальный класс формируют клетки с 22-30 хромосомами, что составляет 50% популяции. Частота аберраций хромосом в анафазе - около 8%.
Цитоморфологические признаки
Как суспензионную, так и каллусную культуру формируют клетки паренхимного и меристематического типа, в основном округлой формы. Они составляют небольшие агрегаты, от 4-8 до 25-35 клеток. Размер клеток меристематического типа колеблется в пределах 25-65 мкм, размеры их ядер - 15-25 мкм. Клетки паренхимного типа имеют размеры 80-300 мкм. Их ядра более гетерогенные по размерам и форме, размер ядер от 12 до 30 мкм. Чаще ядра паренхимных клеток имеют размеры 20-28 мкм, иногда (в 10-15% случаев) такие клетки содержат несколько (как правило, 2-4) ядра. В стареющей культуре (после 30-35 суток роста) возрастает количество элементов клеточной дифференциации. В частности, количество трахеид может достигать на 50-е сутки роста и позже 2,5% и более от всех клеток. Возрастает также полиморфизм ядер: появляются пикнотические, удлиненные, лентообразные, сплющенные, гантелевидные ядра, большие диффузные ядра неправильной формы, ядра с большим количеством (четырьмя-шестью) ядрышек и т.д.
Маркерные признаки
Окраска культуры от светло-серого до светло-желтого цвета, способность к неорганизованному типу роста как на агаризованной, так в жидкой среде с минеральной основой по (UA №10338, 25.12.1996, МПК С 12 N 5/00, С 12 N 5/02) без стимуляторов роста. Прирост биомассы составляет на 65-е сутки роста 400-550 г сырой массы. В перерасчете на сухую биомассу это составляет 20-35 г на 1 л среды. Ростовой индекс 5-8.
На протяжении пассажа (50-60 суток) кривая митотической активности характеризуется одним подъемом митотической активности с пиком на 10-15-е сутки роста. Значение митотического индекса в максимуме - 1,4-2,5%.
Модальный класс формируют клетки с 22-30 хромосомами, частота клеток с этим числом составляет около 50%. Уровень аберраций хромосом в анафазе - около 6%, преобладающее количество среди которых составляют анафазы с мостами без фрагментов.
Культура формируется, в основном, небольшими клетками меристематического типа со сравнительно крупными ядрами, собранными в агрегаты. Размер таких клеток 25-65 мкм, их ядра имеют размеры 15-25 мкм. При старении культуры в ней возрастает количество элементов дифференциации, в частности количество трахеидных элементов может превышать 2,5%. В стандартных условиях выращивания культура не способна к органогенезу.
Основной вариант способа культивирования клеток Унгернии Виктора заключается в том, что эксплантаты фрагментов чешуи луковицы помещают на питательную среду следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 400-600 |
| KNO3 | 1000-1200 |
| (NH4)2SO4 | 200-400 |
| MgSO4×7H2O | 400-600 |
| Ca(NO3)2×4H2O | 800-1000 |
| NH4H2PO4 | 500-700 |
| (NH4)2HPO4 | 90-110 |
| KCI | 60-80 |
| KJ | 0,8-0,9 |
| Na2MoO4×2H2O | 0,2-0,3 |
| CuSO4x5H2O | 0,02-0,03 |
| CoCl2×6H2O | 0,02-0,03 |
| MnSO4×5H2O | 23-25 |
| Н3ВО3 | 5-8 |
| ZnSO4×4H2O | 7-9 |
| FeSO4×7H2O | 27-28 |
| Nа2ЭДТА | 37-38 |
| Тиамин | 0,8-1,2 |
| Пиридоксин | 0,5-1,0 |
| Никотиновая кислота | 0,5-1,0 |
| Глицин | 1,5-2,5 |
| Производные уксусной кислоты | 0,5-2,2 |
| Кинетин | 0,8-1,2 |
| Гидролизат казеина | 50-500 |
| Мезоинозин | 20-100 |
| Сахароза | 50000-60000 |
| Агар | 6000-8000 |
| рН до автоклавирования | 5,8-6,2, |
где в качестве производных уксусной кислоты используют 1-нафтилуксусную (НУК) или индолилуксусную (ИУК) кислоту, затем полученные луковички размножают на среде следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 400-600 |
| KNO3 | 1000-1200 |
| (NH4)2SO4 | 200-400 |
| MgSO4×7H2O | 400-600 |
| Ca(NO3)2×4H2O | 800-1000 |
| NH4H2PO4 | 500-700 |
| (NH4)2HPO4 | 90-110 |
| KCI | 60-80 |
| KJ | 0,8-0,9 |
| Na2MoO4×2H2O | 0,2-0,3 |
| CuSO4×5H2O | 0,02-0,03 |
| CoCl2×6H2O | 0,02-0,03 |
| MnSO4×5H2O | 23-25 |
| Н3ВО3 | 5-8 |
| ZnSO4×4H2O | 7-9 |
| FeSO4×7H2O | 27-28 |
| Na2ЭДTA | 37-38 |
| Тиамин | 0,8-1,2 |
| Пиридоксин | 0,5-1,0 |
| Никотиновая кислота | 0,5-1,0 |
| Глицин | 1,5-2,5 |
| Индолилуксусная кислота | 1,8-2,2 |
| Кинетин | 0,01-0,03 |
| Гидролизат казеина | 40-60 |
| Мезоинозин | 15-30 |
| Сахароза | 50000-60000 |
| Агар | 6000-8000. |
Дополнительный вариант, используемый в случае необходимости добиться ускоренного роста микролуковиц, заключается в том, что эксплантаты фрагментов чешуи луковицы помещают на питательную среду следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 400-600 |
| KNO3 | 1000-1200 |
| (NH4)2SO4 | 200-400 |
| MgSO4×7H2O | 400-600 |
| Ca(NO3)2×4H2O | 800-1000 |
| NH4H2PO4 | 500-700 |
| (NH4)2HPO4 | 90-110 |
| KCI | 60-80 |
| KJ | 0,8-0,9 |
| Na2MoO4×2H2O | 0,2-0,3 |
| CuSO4×5H2O | 0,02-0,03 |
| CoCl2×6H2O | 0,02-0,03 |
| MnSO4×5H2O | 23-25 |
| Н3ВО3 | 5-8 |
| ZnSO4×4H2O | 7-9 |
| FeSO4×7H2O | 27-28 |
| Nа2ЭДТА | 37-38 |
| Тиамин | 0,8-1,2 |
| Пиридоксин | 0,5-1,0 |
| Никотиновая кислота | 0,5-1,0 |
| Глицин | 1,5-2,5 |
| Производные уксусной кислоты | 0,5-2,2 |
| Кинетин | 0,8-1,2 |
| Гидролизат казеина | 50-500 |
| Мезоинозин | 20-100 |
| Сахароза | 50000-60000 |
| Агар | 6000-8000 |
| рН до автоклавирования | 5,8-6,2, |
где в качестве производных уксусной кислоты используют 1-нафтилуксусную (НУК) или индолилуксусную (ИУК) кислоту, а полученные микролуковицы выращивают на среде следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 400-600 |
| KNO3 | 1000-1200 |
| (NH4)2SO4 | 200-400 |
| MgSO4×7H2O | 400-600 |
| Ca(NO3)2×4H2O | 800-1000 |
| NH4H2PO4 | 500-700 |
| (NH4)2HPO4 | 90-110 |
| KCI | 60-80 |
| KJ | 0,8-0,9 |
| Na2MoO4×2H2O | 0,2-0,3 |
| CuSO4×5H2O | 0,02-0,03 |
| CoCl2×6H2O | 0,02-0,03 |
| MnSO4×5H2O | 23-25 |
| Н3ВО3 | 5-8 |
| ZnSO4×4H2O | 7-9 |
| FeSO4×7H2O | 27-28 |
| Nа2ЭДТА | 37-38 |
| Тиамин | 0,8-1,2 |
| Пиридоксин | 0,5-1,0 |
| Никотиновая кислота | 0,5-1,0 |
| Глицин | 1,5-2,5 |
| 1-нафтилуксусная кислота | 0,2-0,5 |
| Кинетин | 0.02-0,1 |
| Гидролизат казеина | 40-60 |
| Мезоинозин | 15-25 |
| Сахароза | 50000-60000 |
| Агар | 6000-8000. |
Как показали проведенные эксперименты, от одной луковички за 1,5-2 года удается получить более 1 млн. посадочных микролуковиц, стадия которых соответствует природным луковицам 5-7-летнего возраста, способных продуцировать БАВ, обладающих широким диапазоном биологической активности, в частности перспективных для лечения заболеваний, вызываемых микобактериями.
Сущность заявляемой группы изобретений иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Луковицу Унгернии Виктора, находящуюся в стадии покоя, очищают от внешних сухих чешуи, после чего снимают дополнительно 1-2 слоя внешних живых чешуи, стерилизуют и в стерильных условиях разделяют на отдельные чешуи. Для дальнейшей работы используют базальную часть чешуи, для чего от каждой чешуи отрезают верхнюю треть, которую удаляют. Базальные части чешуи нарезают скальпелем на кусочки (фрагменты, экспланты) размером 0,5-1×0,5-1 см и высаживают на питательную среду. Используют питательную среду следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 500 |
| КНО3 | 1100 |
| (NH4)2SO4 | 300 |
| MgSO4×7H2O | 500 |
| Ca(NO3)2×4H2O | 900 |
| NH4H2PO4 | 600 |
| (NH4)2HPO4 | 100 |
| KCI | 70 |
| KJ | 0,85 |
| Na2MoO4×2H2O | 025 |
| CuSO4×5H2O | 0,024 |
| CoCl2×6H2O | 0,025 |
| MnSO4×5H2O | 24 |
| Н3ВО3 | 6 |
| ZnSO4×4H2O | 8 |
| FeSO4×7H2O | 27,5 |
| Nа2ЭДТА | 37,5 |
| Тиамин | 1,0 |
| Пиридоксин | 0,8 |
| Никотиновая кислота | 0,8 |
| Глицин | 2,0 |
| НУК | 2,0 |
| Кинетин | 1,0 |
| Гидролизат казеина | 480 |
| Мезоинозин | 80 |
| Сахароза | 55000 |
| Агар | 7000 |
| рН до автоклавирования | 6,0. |
Среду разливали в колбы и стерилизуют горячим паром 20 мин при 1 атм.
После высадки эксплантатов колбы помещали в термостатированное помещение при температуре 24-26°С при относительной влажности 79-80%. Через 45 суток из 425 просмотренных луковиц на 127 (30%) стали образовываться в среднем по 3,1 микролуковички.
Полученные регенераты для мультипликации переносят на среду следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 500 |
| KNO3 | 1100 |
| (NH4)2SO4 | 300 |
| MgSO4×7H2O | 500 |
| Са(NO3)2×4H2O | 900 |
| NH4H2PO4 | 600 |
| (NH4)2HPO4 | 100 |
| KCI | 70 |
| KJ | 0,85 |
| Na2MoO4×2H2O | 025 |
| CuSO4×5H2O | 0,024 |
| CoCl2×6H2O | 0,025 |
| MnSO4×5H2O | 24 |
| Н3ВО3 | 6 |
| ZnSO4×4H2O | 8 |
| FeSO4×7H2O | 27,5 |
| Nа2ЭДТА | 37,5 |
| Тиамин | 1,0 |
| Пиридоксин | 0,8 |
| Никотиновая кислота | 0,8 |
| Глицин | 2,0 |
| ИУК | 2,0 |
| Кинетин | 0.02 |
| Гидролизат казеина | 50 |
| Мезоинозин | 20 |
| Сахароза | 55000 |
| Агар | 7000 |
Полученные результаты размножения приведены в таблице 1.
Пример 2. Выращивают экспланты в условиях примера 1 на среде следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 600 |
| KNO3 | 1000 |
| (NH4)2SO4 | 400 |
| MgSO4×7H2O | 400 |
| Са(NO3)2×4H2O | 1000 |
| NH4H2PO4 | 500 |
| (NH4)2HPO4 | 110 |
| KCI | 60 |
| KJ | 0,9 |
| Na2MoO4×2H2O | 0,2 |
| CuSO4×5H2O | 0,03 |
| CoCl2×6H2O | 0,02 |
| MnSO4×5H2O | 25 |
| Н3ВО3 | 5 |
| ZnSO4×4H2O | 9 |
| FeSO4×7H2O | 27 |
| Nа2ЭДТА | 38 |
| Тиамин | 0,8 |
| Пиридоксин | 1,0 |
| Никотиновая кислота | 0,5 |
| Глицин | 2,5 |
| НУК | 2,2 |
| Кинетин | 0,8 |
| Гидролизат казеина | 500 |
| Мезоинозин | 70 |
| Сахароза | 60000 |
| Агар | 6000 |
| рН до автоклавирования | 5,8. |
Среду разливали в колбы и стерилизуют горячим паром 25 мин при 1 атм.
После высадки эксплантатов колбы помещали в термостатированное помещение при температуре 24-26°С при относительной влажности 79-80%. Через 60 суток из 346 просмотренных луковиц на 88 (25%) стали образовываться в среднем по 2,9 микролуковички.
Полученные регенераты для мультипликации переносят на среду следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 600 |
| KNO3 | 1000 |
| (NH4)2SO4 | 400 |
| MgSO4×7H2O | 400 |
| Са(NO3)2×4H2O | 1000 |
| NH4H2PO4 | 500 |
| (NH4)2HPO4 | 110 |
| KCI | 60 |
| KJ | 0,9 |
| Na2MoO4×2H2O | 0,2 |
| CuSO4×5H2O | 0,03 |
| CoCl2×6H2O | 0,02 |
| MnSO4×5H2O | 25 |
| Н3ВО3 | 5 |
| ZnSO4×4H2O | 9 |
| FeSO4×7H2O | 27 |
| Nа2ЭДТА | 38 |
| Тиамин | 0,8 |
| Пиридоксин | 1,0 |
| Никотиновая кислота | 0,5 |
| Глицин | 2,5 |
| ИУК | 2,2 |
| Кинетин | 0.03 |
| Гидролизат казеина | 60 |
| Мезоинозин | 15 |
| Сахароза | 60000 |
| Агар | 6000 |
Полученные результаты размножения приведены в таблице 1.
Пример 3. Выращивают эксплантаты в условиях примера 1 на среде следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 400 |
| KNO3 | 1200 |
| (NH4)2SO4 | 200 |
| MgSO4×7H2O | 600 |
| Са(NO3)2×4H2O | 800 |
| NH4H2PO4 | 700 |
| (NH4)2HPO4 | 90 |
| KCI | 80 |
| KJ | 0,8 |
| Na2MoO4×2H2O | 0,3 |
| CuSO4×5H2O | 0,02 |
| CoCl2×6H2O | 0,03 |
| MnSO4×5H2O | 23 |
| Н3ВО3 | 8 |
| ZnSO4×4H2O | 7 |
| FeSO4×7H2O | 28 |
| Na2ЭДTA | 37 |
| Тиамин | 1,2 |
| Пиридоксин | 0,5 |
| Никотиновая кислота | 1,0 |
| Глицин | 1,5 |
| ИУК | 1,8 |
| Кинетин | 1,2 |
| Гидролизат казеина | 450 |
| Мезоинозин | 100 |
| Сахароза | 50000 |
| Агар | 8000 |
| рН до автоклавирования | 6,2. |
Среду разливали в колбы и стерилизуют горячим паром 30 мин при 1 атм.
После высадки эксплантатов колбы помещали в термостатированное помещение при температуре 24-26°С при относительной влажности 79-80%. Через 60 суток из 450 просмотренных луковиц на 200 (45%) стали образовываться в среднем по 2,0 микролуковички.
Полученные регенераты для мультипликации переносят на среду следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 400 |
| KNO3 | 1200 |
| (NH4)2SO4 | 200 |
| MgSO4×7H2O | 600 |
| Са(NO3)2×4H2O | 800 |
| NH4H2PO4 | 700 |
| (NH4)2HPO4 | 90 |
| KCI | 80 |
| KJ | 0,8 |
| Na2MoO4×2H2O | 0,3 |
| CuSO4×5H2O | 0,02 |
| CoCl2×6H2O | 0,03 |
| MnSO4×5H2O | 23 |
| Н3ВО3 | 8 |
| ZnSO4×4H2O | 7 |
| FeSO4×7H2O | 28 |
| Nа2ЭДТА | 37 |
| Тиамин | 1,2 |
| Пиридоксин | 0,5 |
| Никотиновая кислота | 1,0 |
| Глицин | 1,5 |
| ИУК | 1,8 |
| Кинетин | 0,01 |
| Гидролизат казеина | 40 |
| Мезоинозин | 30 |
| Сахароза | 50000 |
| Агар | 8000 |
Полученные результаты размножения приведены в таблице 1.
Пример 4. Готовили питательную среду по примеру 1, в которой количество 1-нафтилуксусной кислоты уменьшали до 0,5 мг/л, кинетина - до 0,02 мг/л, мезоинозита - до 20 мг/л, гидролизата казеина - до 50 мг/л (среда 5СЗН). При этих же условиях выращивания на изолированных фрагментах чешуи через 60 суток культивирования образуются микролуковички. Для ускоренного развития отдельных луковичек их переносят на среду 5СЗН (состав среды приведен в примере 2), в которой количество НУК уменьшают до 0,2 мг/л. Микролуковицы помещали на среду следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 500 |
| KNO3 | 1100 |
| (NH4)2SO4 | 300 |
| MgSO4×7H2O | 500 |
| Ca(NO3)2×4H2O | 900 |
| NH4H2PO4 | 600 |
| (NH4)2HPO4 | 100 |
| KCI | 70 |
| KJ | 0,85 |
| Na2MoO4×2H2O | 0,25 |
| CuSO4×5H2O | 0,02 |
| CoCl2×6H2O | 0,03 |
| MnSO4×5H2O | 24 |
| Н3ВО3 | 7 |
| ZnSO4×4H2O | 8 |
| FeSO4×7H2O | 27,5 |
| Nа2ЭДТА | 37,5 |
| Тиамин | 1,0 |
| Пиридоксин | 0,8 |
| Никотиновая кислота | 0,8 |
| Глицин | 2,0 |
| 1-нафтилуксусная кислота | 0,4 |
| Кинетин | 0.5 |
| Гидролизат казеина | 50 |
| Мезоинозин | 20 |
| Сахароза | 55000 |
| Агар | 7000. |
Пробирки с высаженными луковичками ставят в термостатированные условия (22-26°С) с 14-16-часовым световым днем и с освещением 1000-2500 люкс. Через 20-40 суток луковички формируют корни и листочки и растут, а через 50-60 суток переходят в состояние покоя, при этом листочек засыхает. При перенесении спящей луковички на свежую среду она снова формирует 1-2 листочка (в зависимости от возраста луковицы) и весь цикл повторяется.
Пример 5. В питательной среде по примеру 4 вместо НУК вносили 2 мг/л индолилуксусной кислоты (среда 5СЗИ). При тех же условиях выращивания через 60 суток культивирования на около 29% эксплантов образуются микролуковички, на каждом из таких эксплантов образуется в среднем по 4 микролуковички.
полученные микролуковицы выращивают на среде следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 600 |
| KNO3 | 1000 |
| (NH4)2SO4 | 400 |
| MgSO4×7H2O | 400 |
| Ca(NO3)2×4H2O | 1000 |
| NH4H2PO4 | 500 |
| (NH4)2HPO4 | 110 |
| KCI | 60 |
| KJ | 0,9 |
| Na2MoO4×2H2O | 0,2 |
| CuSO4×3Н2О | 0,03 |
| CoCl2×6H2O | 0,02 |
| MnSO4×5H2O | 25 |
| Н3ВО3 | 5 |
| ZnSO4×4H2O | 9 |
| FeSO4×7H2O | 27 |
| Nа2ЭДТА | 38 |
| Тиамин | 0,8 |
| Пиридоксин | 1,0 |
| Никотиновая кислота | 0,5 |
| Глицин | 2,5 |
| 1-нафтилуксусная кислота | 0,2 |
| Кинетин | 0,1 |
| Гидролизат казеина | 40 |
| Мезоинозин | 25 |
| Сахароза | 50000 |
| Агар | 8000. |
Пробирки с высаженными луковичками ставят в термостатированные условия (22-26°С) с 14-16-часовым световым днем и с освещением 1000-2500 люкс. Через 30-40 суток луковички формируют корни и листочки и растут, а через 50-60 суток переходят в состояние покоя, при этом листочек засыхает.
Пример 6. Культивирование эксплантов проводилось в условиях примера 5. Затем полученные микролуковицы выращивают на среде следующего состава, мг/л:
| NH4NO3 | 400 |
| KNO3 | 1200 |
| (NH4)2SO4 | 200 |
| MgSO4×7H2O | 600 |
| Ca(NO3)2×4Н2О | 800 |
| NH4H2PO4 | 700 |
| (NH4)2HPO4 | 90 |
| KCI | 80 |
| KJ | 0,8 |
| Na2MoO4×2H2O | 0,3 |
| CuSO4×5H2O | 0,02 |
| CoCl2×6H2O | 0,03 |
| MnSO4×5H2O | 23 |
| Н3ВО3 | 8 |
| ZnSO4×4H2O | 7 |
| FeSO4×7H2O | 28 |
| Nа2ЭДТА | 37 |
| Тиамин | 1,2 |
| Пиридоксин | 0,5 |
| Никотиновая кислота | 1,0 |
| Глицин | 1,5 |
| 1-нафтилуксусная кислота | 0,5 |
| Кинетин | 0.02 |
| Гидролизат казеина | 60 |
| Мезоинозин | 15 |
| Сахароза | 60000 |
| Агар | 6000. |
Пробирки с высаженными луковичками ставят в термостатированные условия (22-26°С) с 14-16-часовым световым днем и с освещением 1000-2500 люкс. Через 30-40 суток луковички формируют корни и листочки и растут, а через 50-55 суток переходят в состояние покоя, при этом листочек засыхает.
Пример 7. Сопоставляли эффективность мультипликации луковичек, полученных по примерам 1-3, и клеточного материала штаммов аналогов на среде, приготовленной по примеру 1.
Для этого каждую луковичку-регенерант отделяли от эксплантата, на котором она образовалась, и переносили на среду 5СЗИ. Полученные результаты приведены в таблице 1.
| Таблица 1 | |||
| Зависимость эффективности культивирования Унгернии Виктора от технологии получения исходного материала | |||
| Исходный материал | Изучено эксплантов, шт. | Экспланты, регенерирующие микролуковицы, % | Среднее количество микролуковиц на регенерирующий |
| Пример 1 UV -22 | 190 | 57,5±4,7 | 5,9 |
| Пример 2 UV -22 | 108 | 47,8±4,3 | 4,8 |
| Пример 3 UV -22 | 127 | 43,1±4,2 | 4,9 |
| Пример 4 UV -22 | 225 | 40,1±2,2 | 4,0 |
| Штамм UV -2 | 175 | 21,2±3,7 | 4,3 |
| Штамм UV -12 | 113 | 37,5±4,7 | 3,9 |
Полученные данные свидетельствуют о том, что заявляемая технология позволяет получать от отдельной луковички через 40 суток 3-6 и больше новых микролуковичек. При необходимости дальнейшего размножения образованный пучок луковичек разделяют на отдельные луковицы и снова переносят на ту же среду. Способность регенерированных луковичек к микроразмножению (мультипликации) сохраняется самое малое на протяжении 5 лет.
Пример 8. Полученный по примерам 1-3 клеточный материал измельчали и экстрагировали 40% водно-спиртовым раствором, после чего проводили испытания биологической активности экстрагированных БАВ.
Оценку эффективности заявляемого средства проводили на 140 белых беспородных мышах-самцах с генерализованным туберкулезом, вызванным введением в боковую хвостовую вену культуры М. Bovis 8 в дозе 0,1 мг в 2 мл физиологического раствора.
Мышей делили на 6 групп по 20 животных:
1 группа - контроль - мыши, не получавших препарат;
2 группа - контроль - мыши, получавшие рифампицин (Рф) перорально в дозе 10 мг/кг;
3 группа - контроль - мыши, получавшие БАД «Влаирин» перорально 3 раза в день в виде раствора в дозе 2 капли на мышь;
4-6 группы - мыши, получавшие заявляемое средство по примерам 1-3,3 раза в день перорально в виде раствора в дозе 2 капли на мышь;
7 группа - мыши, получавшие ежедневно рифампицин перорально в дозе 10 мг/кг, и средство, полученное по примеру 1, перорально в виде раствора в дозе 4 капли на мышь.
Эффективность лечения туберкулезного процесса оценивали по результатам: динамики массы тела мышей; выживаемости животных; индекса поражения легких; высеваемости микобактерий из селезенки. Индекс поражения легких высчитывали в соответствии с количеством и выраженностью очагов специфического воспаления, выявляемых при макроскопическом осмотре. При этом единичные субмилиарные очаги оценивались в 0,5 балла; многочисленные (не более 20) - в 1,5 балла; единичные милиарные - в 1,75 балла; многочисленные сливающиеся субмиллиарные единичные миллиарные - в 2,0 балла, миллиарные - (не более 10) и в 2,25 балла, многочисленные миллиарные сливающиеся - 2,75 балла, наличие мелких казеозных некротических фокусов - 3,0 балла; обширный казеоз - 4,0 балла; сплошное поражение легких - 5,0 баллов. В случаях серозного пропитывания ткани легких к вычисленному индексу поражения прибавлялись от 0,25 до 1,0 балла в зависимости от площади поражения.
Для бактериологического исследования проводился дозированный посев гомогената ткани селезенки на плотную питательную среду Левенштейна-Йенсена. Массивность роста микобактерий туберкулеза (МБТ) оценивали через три недели инкубации посевов селезенки (37°С) и выражали в колониеобразующих единицах - КОЕ. При этом использовалась следующая методика подсчета колоний: при регистрации до 50 колоний - приводили их полное число; при росте на 1/3 пробирки - принимали число колоний за 100 КОЕ; при росте на 2/3 пробирки - за 200 КОЕ; при сплошном росте колоний - за 300 КОЕ.
Статистическую обработку полученных результатов проводили по параметрическому тесту Стьюдента-Фишера и по непараметрическому тесту Вилкинсона-Манна-Уитни с использованием критерия U. Сравнительные данные об эффективности разных препаратов приведены в таблице 2.
| Таблица 2 | ||||||
| Сопоставление эффективности воздействия препаратов на защиту организма от воздействия микобактерий туберкулеза | ||||||
| Группа | Препарат | К-во мышей | Выживаемость, % | Прирост массы тела, % | Индекс поражения легких | Высеваемость МБТ из селезенки, КОЕ |
| 1 | Нет | 20 | 20,0 | -2,4 | 3,1±0.2 | 300 |
| 2 | РФ | 20 | 90,0 | 10,6 | 2,3±0.2 | 46,1±4.2 |
| 3 | Влаирин | 20 | 60,0 | 7,8 | 2,9±0.1 | 100* |
| 4 | Пр.1 | 20 | 75,0** | 10,0* | 2,7±0.1* | 100* |
| 5 | Пр.2 | 20 | 65,0* | 8,7* | 2,9±0.1 | 100* |
| 6 | Пр.3 | 20 | 65,0* | 9,2* | 2,9±0.1 | 100* |
| 7 | РФ+прим.1 | 20 | 100,0 | 33,8** | 1,9±0.1** | 21,9±6.1** |
Результаты исследований свидетельствуют о достаточно высокой эффективности заявляемого средства, сопоставимой с использованием рифампицина, причем более высокие результаты были получены при использовании средства по примеру 1 на фоне стандартной терапии с использованием рифампицина.
Пример 9. Клиническое исследование препарата, полученного по примеру 1 (экстракт УВ), осуществлялось на базе I легочного отделения областного туберкулезного диспансера г.Астрахани.
Было обследовано 20 больных (мужчины в возрасте от 19-50 лет) туберкулезом легких. Среди обследованных - 2 больных диссеминированным, 6 - инфильтративным туберкулезом, 1 - плевритом туберкулезной этиологии, у 1 больного диагностирована туберкулема. Из них 3 являлись бактериовыделителями; у 5 отмечалась деструкция легочной ткани. Сопутствующей патологии у больных не выявлено.
Для оценки эффективности препарата были выделены две группы, идентичные по половозрастному составу, клиническим формам и фазам течения специфического процесса:
1 группа (контроль) - 10 больных, получавших стандартную комплексную терапию;
2 группа - 10 больных, в комплексную терапию которых был включен препарат по примеру 1.
Стандартная комплексная терапия, обусловленная характером специфического процесса, включала противотуберкулезные препараты (изониазид, рифампицин, пиразинамид, этамбутол, стрептомицин), гепатопротекторы (ЛИВ-52), патогенетические мероприятия (тиосульфат натрия, аутогемоновокаиновая терапия, преднизолон, витаминотерапия).
Больным опытной группы на фоне стандартной терапии давали препарат Унгернии по примеру 1 по 1 капле на 20 кг веса тела на 100 мл воды после приема пищи 3 раза в день.
Перед применением препарата и в динамике проводились клинико-рентгенологическое обследование, общий анализ крови, биохимический анализ крови (билирубин, АЛТ, сиаловая и тимоловая пробы, СРБ), определялась иммунограмма, исследовалась сыворотка крови методом клиновидной дегидратации и поляризационной микроскопии с последующим анализом полученных данных. Критериями оценки эффективности являлись показатели клинических, лабораторных и рентгенологических методов исследования, анализируемые до лечения и в динамике (в течение 2,5 месяцев). Результаты исследования представлены в табл.3-6.
| Таблица 3 | ||||||||
| Биохимические показатели больных туберкулезом легких, получивших лечение экстрактом УВ и стандартными способами до начала лечении и в динамике. | ||||||||
| Показатели | Опытная группа (п=10) | Контрольная группа (п=10) | ||||||
| до | +ЛИВ 2 нед. | 1 мес. | 2 мес. | до | 1 мес. | 2 мес. | ||
| Трансамилазы (АЛТ, ACT) | снижено | - | 1 | 3 | 2 | - | 2 | 1 |
| повышено | 4 | 6 | 2 | - | 5 | 7 | 5 | |
| норма | 6 | 3 | 1 | 8 | 5 | 1 | 4 | |
| Тимоловая проба | снижено | - | 1 | - | - | - | 1 | 1 |
| повышено | 4 | 5 | 1 | 1 | 7 | 4 | 3 | |
| норма | 6 | 4 | 9 | 9 | 3 | 5 | 6 | |
| Сиаловая проба | снижено | - | - | 2 | - | - | - | - |
| повышено | 10 | 8 | 3 | 1 | 8 | 6 | 4 | |
| норма | - | 2. | 5 | 9 | 2 | 4 | 6 | |
| «С» реактив | отрицат. | 6 | 8 | 10 | 10 | 5 | 7 | 10 |
| ный | положит. | 4 | 2 | - | - | 5 | 3 | - |
| Таблица 4 | ||||||
| Показатели общего анализа крови больных туберкулезом легких, получивших лечение экстрактом УВ и стандартными способами до начала лечения и в динамике. | ||||||
| Показатели | Опытная группа (п=10) | Контрольная группа (п=10) | ||||
| до | 1 мес. | 2 мес. | до | 1 мес. | 2 мес. | |
| Гемоглобин | норма 6 | 4 | 5 | 5 | 1 | 6 |
| повышено | 3 | 5 | - | 3 | 1 | |
| снижено 4 | 1 | - | 5 | S | 2 | |
| Лейкоциты | повышено 7 | 3 | 6 | 8 | 6 | 4 |
| норма 2 | 2 | - | 2 | 1 | 1 | |
| снижено 1 | 5 | 4 | - | J | 5 | |
| Лимфоциты | норма 6 | 1 | 6 | 6 | :1 | '' |
| повышено | 8 | J | :1 | 6 | 3 | |
| снижено 4 | - | 1 | 1 | 2 | 2 | |
| Моноциты | норма 9 | 9 | 8 | 10 | 7 | 4 |
| повышено 1 | 1 | 2 | - | 3 | 4 | |
| снижено | - | - | - | 4 | 2 | |
| СОЭ | норма 2 | 2 | 3 | 3 | 2 | 1 |
| повышено 8 | - | 1 | 7 | 1 | 3 | |
| снижено | 8 | 6 | - | 7 | 6 | |
| Таблица 5 | |||||||
| Показатели иммунограмм больных туберкулезом легких, получивших лечение экстрактом УВ и стандартными способами до начала лечения и в динамике. | |||||||
| Показатели | Опытная группа (п=10) | Контрольная группа (п=10) | |||||
| до | 1 мес. | 2 мес. | до | 1 мес. | 2 мес. | ||
| Т-лимфоциты отн.% | снижено | 2 | 3 | 2 | 1 | 2 | 2 |
| повышено | 8 | 6 | 7 | 5 | 4 | 3 | |
| норма | - | 1 | 1 | 4 | 4 | 5 | |
| р-лимфоциты отн.% | снижено | 3 | 2 | 1 | 2 | 2 | 1 |
| повышено | 6 | 8 | 2 | 4 | 3 | 4 | |
| норма | 1 | - | 8 | 4 | 5 | 5 | |
| Процент фагоцитоза, % | снижено | 3 | 5 | - | 8 | 6 | 5 |
| повышено | - | 1 | 5 | - | - | - | |
| норма | 7 | 4 | 1 | 2 | 4 | 5 | |
| Фагоцитарное число | снижено | - | 8 | 4 | 3 | 3 | 4 |
| повышено | 3 | 1 | 8 | - | - | 1 | |
| норма | 7 | 1 | 1 | 7 | 7 | 5 | |
| Количество активных фагоцитов | снижено | 2 | 6 | 1 | 4 | 5 | 5 |
| повышено | - | 3 | 6 | 1 | 1 | 2 | |
| норма | 8 | 1 | 3 | 5 | 4 | 3 | |
| IgM | снижено | 4 | 2 | 1 | 6 | 5 | 6 |
| повышено | 1 | 8 | 2 | - | 1 | 2 | |
| норма | 5 | - | 8 | 4 | 4 | 2 | |
| IgG | снижено | 7 | 4 | 2 | 1 | 2 | 2 |
| повышено | 2 | 3 | 4 | 1 | - | 1 | |
| норма | 1 | 3 | 4 | 8 | 8 | 7 | |
| IgA | снижено | 22 | 7 | 5 | 5 | 5 | 4 |
| повышено | 5 | 2 | 2 | 4 | 3 | 4 | |
| норма | 3 | 1 | 3 | 4 | 2 | 2 | |
| Таблица 6 | ||||||||||||
| Показатели структурной организации сыворотки крови больных туберкулезом легких, получивших лечение экстрактом УВ и стандартными способами до начала лечения и в динамике. | ||||||||||||
| Сроки лечения | Группы | Типы фасций | Патологические элементы | |||||||||
| Упоряд | Депрес | Реакт | бл | скл | жг | яз | лис. | сер. | Пиг | 2-ая фац. | ||
| До лечения | Контр. группа | 5 | 4 | 1 | 8 | 5 | 2 | 2 | 1 | - | - | 1 |
| Опыта. группа | 3 | 6 | 1 | 6 | 3 | - | 2 | 2 | 3 | 1 | 3 | |
| 2 недели | Контр. группа | 5 | 4 | 1 | 8 | 6 | 2 | 2 | 1 | 2 | - | 2 |
| Опыта. группа | 4 | 6 | - | 8 | 6 | 2 | 4 | 3 | 2 | 4 | 2 | |
| 4 недели | Контр. группа | 5 | 5 | - | 7 | 5 | 2 | 3 | 1 | 2 | 1 | 2 |
| Опыта. группа | 3 | 7 | - | 9 | 6 | 4 | 2 | 3 | 3 | 3 | 2 | |
| 6 недель | Контр. группа | 4 | 6 | - | 7 | 5 | 1 | 2 | 1 | 2 | - | 1 |
| Опыта. группа | 3 | 7 | - | 7 | 4 | 3 | 2 | 4 | 1 | 4 | 1 | |
| 8 недель | Контр. группа | 4 | 6 | - | 7 | 4 | - | 2 | 2 | 1 | - | 1 |
| Опыта. группа | 4 | 6 | - | 7 | 4 | 1 | - | 4 | 2 | 2 | 2 | |
| 10 недель | Контр. группа | 5 | 5 | - | 6 | 3 | 1 | 2 | 2 | 1 | - | - |
| Опыта. группа | 6 | 4 | - | 5 | 4 | - | - | 4 | 1 | 1 | 1 | |
У больных отмечалась хорошая переносимость препарата, побочных явлений и аллергических реакций на фоне ее применения зарегистрировано не было; у пациентов опытной группы наблюдалась более значимая по сравнению с контролем положительная динамика анализируемых клинических показателей (повышение аппетита, снижение количества влажных и сухих хрипов, исчезновение тяжести в правом подреберье), исчезновение признаков интоксикации (слабость, потливость, субфебрильная температура), прибавление в весе за более короткий срок в среднем на 1,5 кг, а также улучшение показателей лабораторных анализов (нормализация печеночных проб и уровня трансаминаз, снижение СОЭ, повышение уровня гемоглобина и количества лимфоцитов в периферической крови).
По данным иммунограмм, отмечено нормализация абсолютных и относительных показателей В- и Т-лимфоцитов, но снижение показателей процента фагоцитоза, фагоцитарного числа и количества активных фагоцитов, повышение уровня IgM и IgG, снижение IgA.
Изучение структурной организации сыворотки крови методом клиновидной дегидратации показало повышение уровня структурирования и упорядочения основных элементов фации в опытной группе в более ранние сроки по сравнению с контролем.
Пример 10. Во ФГУ НИИ по изучению лепры Росздрава в течение 2006 года проводились клинические исследования по возможности использования экстракта каллусной ткани, полученной по примеру 1, в комплексной терапии больных лепрой. Под наблюдением находилось 20 больных лепрой в возрасте от 46 до 72 лет, из них 12 женщин, 8 мужчин.
Больные были разделены на две группы по 10 человек (опытную и контрольную), сопоставимых по возрасту, полу и клиническим проявлениям. В опытной группе на фоне стандартной комплексной терапии назначался экстракт по примеру 1 по 1 капле на 20 кг веса массы тела в разведении на 100 мл воды после приема пищи три раза в д., в контрольной - "карсил".
Стандартная химиотерапия включала применение комбинированной противолепрозной химиотерапии по схемам ВОЗ, антигистаминных, сосудистых, витаминных препаратов. Терапия проводилась в течение трех месяцев под клинико-лабораторным контролем, включавшим динамическое клиническое наблюдение, исследование гемограммы, печеночных проб, белковых фракций и структурной организации сыворотки крови, УЗИ печени.
За период наблюдения нами была отмечена хорошая переносимость исследуемого препарата, побочных явлений и аллергических реакций на фоне его применения зарегистрировано не было. Отмечено улучшение общего состояния (сна, аппетита, общего тонуса), уменьшение или исчезновение субъективных жалоб на чувство тяжести в правом подреберье, горечи во рту. Отмечено улучшение ряда лабораторных показателей (таблицы 7).
| Таблица 7 | ||
| Динамика показателей гемограммы больных лепрой, получавших экстракт УВ | ||
| Показатели | Опытная группа | |
| До лечения | После лечения | |
| Гемоглобин (г/л) | 121,41±3,62 | 130,82±4,15 |
| Лейкоциты (109/л) | 4,23±0,21 | 6,51±0,34 |
| Лимфоциты (%) | 21,42±3,63 | 31,22±1,91 |
| Моноциты (%) | 2,12±0,34 | 4,44±0,15 |
| Скорость оседания эритроцитов (мм/ч) | 11,45±0,18 | 9,53±0,21 |
| Общий белок (г/л) | 83,02±3,15 | 82,19±2,95 |
| Альбумин (г/л) | 39,91±2,78 | 44,61±3,25 |
| Билирубин общий (мкмоль/л) | 11,16±0,41 | 12,31±0,12 |
| Билирубин конъюгированный (мкмоль/л) | 2,78±0,22 | 2,84±0,61 |
| Креатинин (мкмоль/л) | 83,88±4,17 | 82,11±3,64 |
| Мочевина (ммоль/л) | 6,48±0,31 | 6,56±0,61 |
| Остаточный азот (ммоль/л) | 18,64±1,12 | 17,87±2,11 |
| Тимоловая проба (Ед) | 4,11±0,52 | 3,56±0,45 |
| АсАТ (мкмоль/л) | 0,65±0,01 | 0,51±0,22 |
| АлАТ (мкмоль/л) | 0,45±0,04 | 0,53±0,18 |
Как следует из приведенных таблиц, на фоне применения экстракта УВ происходило достоверное уменьшение СОЭ (р<0,05), тенденция к уменьшению тимоловой пробы, уровня трансаминаз, происходило уменьшение воспалительных явлений, стабилизация дегенеративных изменений.
Изучение структурной организации сыворотки крови методом клиновидной дегидратации показало повышение уровня структурирования и упорядочения основных элементов фации в опытной группе больных, что свидетельствовало об гармонизации адаптивных реакций организма. В контрольной группе больных подобной положительной динамики отмечено не было.
Анализ полученных результатов показал, что экстракт Унгернии Виктора эффективен для использования в курсе лечения заболеваний, вызванных микобактериями. Причем наиболее эффективен экстракт, полученный из каллуса штамма UV-22. Предложенная технология культивирования наряду с продуцированием более эффективных БАВ позволяет существенно сократить сроки культивирования луковиц Унгернии и решить проблемы их размножения.
Claims (4)
1. Штамм каллусной культуры Ungernia victoris UV-22, депонированный в Коллекции клеточных культур Института молекулярной биологии и генетики ПАН Украины №13/2008, - продуцент комплекса биологически активных веществ для лечения заболеваний, вызываемых микобактериями.
2. Водно-спиртовый экстракт каллусной ткани Ungernia victoris штамма UV-22, депонированного в Коллекции клеточных культур Института молекулярной биологии и генетики ПАН Украины №13/2008 в качестве средства для лечения заболеваний, вызываемых микобактериями.
3. Способ культивирования каллусной ткани Ungernia victoris штамма UV-22 путем микроклонального размножения, характеризующийся тем, что культивирование проводят в две стадии, причем сначала эксплантат помещают на среду, содержащую дополнительно пиродоксин, никотиновую кислоту, глицин, производные уксусной кислоты - 1-нафтилуксусная кислота или индолилуксусная кислота, кинетин, гидролизат казеина и мезоинозит при следующем соотношении ингредиентов, мг/л:
NH4NO3 400-600
KNO3 1000-1200
(NH4)2SO4 200-400
MgSO4·7H2O 400-600
Ca(NO3)2·4H2O 800-1000
NH4H2PO4 500-700
(NH4)2HPO4 90-110
KCl 60-80
KJ 0,8-0,9
Na2MoO4·2H2O 0,2-0,3
CuSO4·5H2O 0,02-0,03
CoCl2·6H2O 0,02-0,03
MnSO4·5H2O 23-25
H3BO3 5-8
ZnSO4·4H2O 7-9
FeSO4·7H2O 27-28
Na2ЭДTA 37-38
Тиамин 0,8-1,2
Пиридоксин 0,5-1,0
Никотиновая кислота 0,5-1,0
Глицин 1,5-2,5
Производные уксусной кислоты 0,5-2,2
Кинетин 0,8-1,2
Гидролизат казеина 50-500
Мезоинозин 20-100
Сахароза 50000-60000
Агар 6000-8000
рН до автоклавирования 5,8-6,2,
а затем полученные луковички размножают на среде следующего состава, мг/л:
NH4NO3 400-600
KNO3 1000-1200
(NH4)2SO4 200-400
MgSO4·7H2O 400-600
Ca(NO3)2·4H2O 800-1000
NH4H2PO4 500-700
(NH4)2HPO4 90-110
KCl 60-80
KJ 0,8-0,9
Na2MoO4·2H2O 0,2-0,3
CuSO4·5H2O 0,02-0,03
CoCl2·6H2O 0,02-0,03
MnSO4·5H2O 23-25
H3BO3 5-8
ZnSO4·4H2O 7-9
FeSO4·7H2O 27-28
Na2ЭДТА 37-38
Тиамин 0,8-1,2
Пиридоксин 0,5-1,0
Никотиновая кислота 0,5-1,0
Глицин 1,5-2,5
Индолилуксусная кислота 1,8-2,2
Кинетин 0,01-0,03
Гидролизат казеина 40-60
Мезоинозин 15-30
Сахароза 50000-60000
Агар 6000-8000
а затем полученные луковички размножают на среде следующего состава, мг/л:
4. Способ культивирования каллусной ткани Ungernia victoris штамма UV-22 путем микроклонального размножения, характеризующийся тем, что культивирование проводят в две стадии, причем сначала эксплантат помещают на среду, содержащую дополнительно пиродоксин, никотиновую кислоту, глицин, производные уксусной кислоты - 1-нафтилуксусная кислота или индолилуксусная кислота, кинетин, гидролизат казеина и мезоинозит при следующем соотношении ингредиентов, мг/л:
NH4NO3 400-600
KNO3 1000-1200
(NH4)2SO4 200-400
MgSO4·7H2O 400-600
Ca(NO3)2·4H2O 800-1000
NH4H2PO4 500-700
(NH4)2HPO4 90-110
KCl 60-80
KJ 0,8-0,9
Na2MoO4·2H2O 0,2-0,3
CuSO4·5H2O 0,02-0,03
CoCl2·6H2O 0,02-0,03
MnSO4·5H2O 23-25
H3BO3 5-8
ZnSO4·4H2O 7-9
FeSO4·7H2O 27-28
Na2ЭДТА 37-38
Тиамин 0,8-1,2
Пиридоксин 0,5-1,0
Никотиновая кислота 0,5-1,0
Глицин 1,5-2,5
Производные уксусной кислоты 0,5-2,2
Кинетин 0,8-1,2
Гидролизат казеина 50-500
Мезоинозин 20-100
Сахароза 50000-60000
Агар 6000-8000
рН до автоклавирования 5,8-6,2,
а полученные микролуковицы выращивают на среде следующего состава, мг/л:
NH4NO3 400-600
KNO3 1000-1200
(NH4)2SO4 200-400
MgSO4·7H2O 400-600
Ca(NO3)2·4H2O 800-1000
NH4H2PO4 500-700
(NH4)2HPO4 90-110
KCl 60-80
KJ 0,8-0,9
Na2MoO4·2H2O 0,2-0,3
CuSO4·5H2O 0,02-0,03
CoCl2·6H2O 0,02-0,03
MnSO4·5H2O 23-25
H3BO3 5-8
ZnSO4·4H2O 7-9
FeSO4·7H2O 27-28
Na2ЭДТА 37-38
Тиамин 0,8-1,2
Пиридоксин 0,5-1,0
Никотиновая кислота 0,5-1,0
Глицин 1,5-2,5
1-Нафтилуксусная кислота 0,2-0,5
Кинетин 0,02-0,1
Гидролизат казеина 40-60
Мезоинозин 15-25
Сахароза 50000-60000
Агар 6000-8000
а полученные микролуковицы выращивают на среде следующего состава, мг/л:
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009103797/15A RU2425687C2 (ru) | 2009-02-05 | 2009-02-05 | СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ, ШТАММ КАЛЛУСНОЙ КУЛЬТУРЫ Ungernia victoris UV-22-ПРОДУЦЕНТ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО КОМПЛЕКСА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ, И СПОСОБ ЕГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ (ВАРИАНТЫ) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009103797/15A RU2425687C2 (ru) | 2009-02-05 | 2009-02-05 | СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ, ШТАММ КАЛЛУСНОЙ КУЛЬТУРЫ Ungernia victoris UV-22-ПРОДУЦЕНТ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО КОМПЛЕКСА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ, И СПОСОБ ЕГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ (ВАРИАНТЫ) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2009103797A RU2009103797A (ru) | 2010-08-10 |
| RU2425687C2 true RU2425687C2 (ru) | 2011-08-10 |
Family
ID=42698776
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009103797/15A RU2425687C2 (ru) | 2009-02-05 | 2009-02-05 | СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ, ШТАММ КАЛЛУСНОЙ КУЛЬТУРЫ Ungernia victoris UV-22-ПРОДУЦЕНТ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО КОМПЛЕКСА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ, И СПОСОБ ЕГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ (ВАРИАНТЫ) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2425687C2 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2098114C1 (ru) * | 1995-02-03 | 1997-12-10 | Музыка Владислав Иванович | Препарат, воздействующий на функциональную активность клеток эукариот и прокариот |
| RU2130709C1 (ru) * | 1997-07-25 | 1999-05-27 | Сибирский государственный технологический университет | Способ получения соматических эмбриоидов в культуре in vitro левзеи сафлоровидной |
| RU2141525C1 (ru) * | 1998-07-06 | 1999-11-20 | Биолого-почвенный институт Дальневосточного отделения РАН | Штамм культивируемых клеток растений rubia cordifolia l., продуцент антрахинонов |
| UA39572A (ru) * | 2000-10-19 | 2001-06-15 | Віктор Анатолійович Кунах | Штамм культивированных клеток унгернии виктора ungernia victoris vved. ex artjuschenko - продуцент биологически активных веществ |
-
2009
- 2009-02-05 RU RU2009103797/15A patent/RU2425687C2/ru not_active Application Discontinuation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2098114C1 (ru) * | 1995-02-03 | 1997-12-10 | Музыка Владислав Иванович | Препарат, воздействующий на функциональную активность клеток эукариот и прокариот |
| RU2130709C1 (ru) * | 1997-07-25 | 1999-05-27 | Сибирский государственный технологический университет | Способ получения соматических эмбриоидов в культуре in vitro левзеи сафлоровидной |
| RU2141525C1 (ru) * | 1998-07-06 | 1999-11-20 | Биолого-почвенный институт Дальневосточного отделения РАН | Штамм культивируемых клеток растений rubia cordifolia l., продуцент антрахинонов |
| UA39572A (ru) * | 2000-10-19 | 2001-06-15 | Віктор Анатолійович Кунах | Штамм культивированных клеток унгернии виктора ungernia victoris vved. ex artjuschenko - продуцент биологически активных веществ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2009103797A (ru) | 2010-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2440820C2 (ru) | Противораковая композиция, включающая линию клеток, полученную из камбия и прокамбия стебля тисса (taxus) | |
| EP3546570A2 (en) | Serum-free immune cell-culturing medium-added kit, method for culturing immune cells by using same kit, serum-free immune cell culture obtained by same kit or culturing method, and cosmetic composition comprising same culture | |
| US8617621B2 (en) | Composition for enhancing immunity containing plant stem cell line derived from cambium of Panax ginseng including wild ginseng or ginseng as an active ingredient | |
| US9061053B2 (en) | Composition of cultured grape cells | |
| JP2011520874A (ja) | イチイ属の形成層または前形成層由来植物幹細胞株を有効性分として含有する抗酸化、抗炎症または抗老化用組成物 | |
| CN102170891B (zh) | 有效成分包含来自野山参或人参等人参类形成层的植物干细胞系的组合物在预防或治疗进行获得性免疫缺陷综合症中的用途 | |
| CN114288288B (zh) | 一种gsdmd抑制剂及在制备神经免疫疾病、炎症感染疾病防治药物中的应用 | |
| KR20200002761A (ko) | 지방줄기세포유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 간 섬유증 예방 또는 치료용 조성물 | |
| Hutchins et al. | Atypical mycobacterial infection complicating mineral oil pneumonia | |
| Ghoshal et al. | Potential antiamoebic property of the roots of Piper longum Linn. | |
| US20100317605A1 (en) | The use of epimedium flavones and effective components thereof for the preparation of medicaments of promoting proliferations and differentiations of nerve cells | |
| RU2425687C2 (ru) | СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ, ШТАММ КАЛЛУСНОЙ КУЛЬТУРЫ Ungernia victoris UV-22-ПРОДУЦЕНТ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО КОМПЛЕКСА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ, И СПОСОБ ЕГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ (ВАРИАНТЫ) | |
| CN109745314A (zh) | 铁螯合剂Deferasirox(DFX)在治疗宫颈癌的药物中的应用 | |
| FR2499410A1 (fr) | Vaccin contre l'avortement enzootique chez les brebis et son procede de preparation | |
| LU508074B1 (en) | Use of human plasma exosome in preventing and treating brain injury related to ferroptosis after intracerebral hemorrhage (ich) | |
| CN120189394A (zh) | 靶向治疗帕金森病的间充质干细胞膜仿生纳米酶及其制备方法和应用 | |
| US8586053B2 (en) | Composition and use of phyto-percolate for treatment of disease | |
| CN113679732A (zh) | 女贞苷在制备防治钙化性主动脉瓣疾病药物中的应用 | |
| CN111374977B (zh) | 阿西替尼及其类似物在制备血脑屏障渗透性调控剂中的应用 | |
| CN118726109A (zh) | 一株弯颈霉属真菌在抗肿瘤药物中的应用 | |
| KR100535266B1 (ko) | 항노화 활성이 우수한 현삼 추출물 및 이를 포함하는 조성물 | |
| CN103272216B (zh) | 榆黄菇蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用 | |
| JP2002138047A (ja) | 皮膚賦活用組成物 | |
| JP2004099613A (ja) | 自己免疫疾患治療用ガノデルマルシダム胞子 | |
| KR102755256B1 (ko) | 미생물에 의해 발현이 유도되는 Dbn1 유전자 또는 그 산물을 유효성분으로 포함하는 노화 개선용 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20100815 |
|
| FZ9A | Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal) |
Effective date: 20100928 |