RU2455352C1 - ШТАММ Bacillus amyloliquefaciens - ПРОДУЦЕНТ АЛЬФА-АМИЛАЗЫ Bacillus amyloliquefaciens - Google Patents
ШТАММ Bacillus amyloliquefaciens - ПРОДУЦЕНТ АЛЬФА-АМИЛАЗЫ Bacillus amyloliquefaciens Download PDFInfo
- Publication number
- RU2455352C1 RU2455352C1 RU2010153387/10A RU2010153387A RU2455352C1 RU 2455352 C1 RU2455352 C1 RU 2455352C1 RU 2010153387/10 A RU2010153387/10 A RU 2010153387/10A RU 2010153387 A RU2010153387 A RU 2010153387A RU 2455352 C1 RU2455352 C1 RU 2455352C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- bacillus amyloliquefaciens
- vkpm
- alpha
- alpha amylase
- Prior art date
Links
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 title claims abstract description 24
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 title abstract description 18
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 title abstract description 18
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 title abstract description 13
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 101000775727 Bacillus amyloliquefaciens Alpha-amylase Proteins 0.000 claims 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 12
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 abstract description 5
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 abstract description 5
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 abstract description 4
- 238000005187 foaming Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 abstract 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 13
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 13
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 13
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 12
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 3
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 3
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 3
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O ammonium group Chemical group [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 239000013530 defoamer Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009655 industrial fermentation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Штамм Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10291 получен многоступенчатой селекцией на среде, содержащей рифампицин, и последующим отбором наиболее продуктивных клонов, устойчивых к рифампицину. Штамм продуцирует альфа-амилазу с активностью 900 едГОСТ/мл. Штамм обладает пониженным уровнем пенообразования, что позволяет снизить количество использованного при ферментации пеногасителя более чем в 3 раза. 3 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в микробиологической промышленности при производстве альфа-амилазы, применяемой в различных областях промышленности и сельского хозяйства для осахаривания (гидролиза) крахмалосодержащего сырья, а именно в хлебопечении, спиртовой, пивоваренной, кондитерской и крахмалопаточной промышленности (выработка паток, сиропов, глюкозы), в текстильной, бумажной промышленности, при производстве моющих средств. Очищенные амилазы применяются для аналитических целей, для получения циклодекстринов и в медицине. Альфа-амилазы различного происхождения входят в состав практически всех известных ферментных препаратов для заместительной терапии.
Амилазы - это ферменты класса гидролаз, катализирующие гидролиз крахмала, гликогена и родственных соединений. Альфа-амилаза (α-1,4-D-глюкан-глюканогидролаза) относится к эндоамилазам и катализирует гидролиз внутренних α-1,4-глюкозидных связей.
Для получения альфа-амилаз преимущественно используют три вида бацилл - Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens и Bacillus stearothermophilus, амилазы этих штаммов объединены в группу так называемых "Термамил-подобные альфа-амилазы" Ряд таких вариантов альфа-амилаз, известны, например, из WO 90/11352, WO 95/10603, WO 95/26397, WO 96/23873, WO 96/23874, WO 97/41213, US 7713723, US 20090317864, US 20100022433.
Ближайшим аналогом является штамм Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-5144 [RU 2003689], который используется в настоящее время для промышленных целей. Этот штамм секретирует альфа-амилазу, с активностью до 780 ед/мл.
Задача настоящего изобретения - расширить арсенал бактериальных штаммов-продуцентов альфа-амилазы.
Задача решена путем получения штамма Bacillus amyloliquefaciens 19 RifR -продуцента альфа-амилазы, депонированного во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под номером ВКПМ В-10291. Этот штамм получен многоступенчатой селекцией на среде, содержащей рифампицин, и последующим отбором наиболее продуктивных клонов, устойчивых к этому антибиотику и является мутантом штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-5144 (RU 2003689).
Штамм Bacillus amyloliquefaciens В-10291, характеризуется следующими признаками:
Морфологические признаки.
Клетки прямые, палочковидные, размером 2,5-4,0×0,5-0,8 мкм, подвижные, грамположительные, спорообразующие. Размер спор 1,0-1,2×0,6-0,7 мкм. Культуральные признаки.
Клетки хорошо растут на простых питательных средах. При росте на мясопептонном агаре, агаре Хоттингера - колонии шероховатые, круглые, матовые, желтовато-серые, край неровный, лопастной. При росте в жидких средах: мясопептонном бульоне, LB-бульоне без аэрации образуют сухую пленку без помутнения среды, а при аэрации - интенсивную мутность.
Физиолого-биохимические признаки.
Клетки растут при температуре от 20 до 45°С при оптимуме рН от 6,8 до 7,5.
В качестве источника углерода используют многие углеводы, спирты, органические кислоты, в частности D-глюкозу, D-фруктозу, лактозу. Не усваивают ацетат.
В качестве источника азота используют как минеральные соли в аммонийной форме, так и в органической форме, в виде пептона, аминокислот.
Желатину разжижают.
Индол не образуют.
Уреазную активность не обнаруживает.
Штамм проявляет устойчивость к эритромицину (10 мкг/мл), что обусловлено наличием на плазмиде рВА1418 гена устойчивости к эритромицину. Штамм устойчив к рифампицину (100 мкг/мл).
Штамм устойчив к вирулентным фагам Е10, Е25, Е26, выделенным из промышленных фаголизатов и препаратов субтилизина ГХЗ.
Штамм способен продуцировать альфа-амилазу с активностью 900 едГОСТ/мл.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Культивирование штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10291 в колбах на среде Лурия - Бертани (LB).
Штаммы Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10291 и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-5144, используемый в качестве контроля, культивируют на питательной среде LB с осахаренным крахмалом, приготовленной на деминерализованной воде и содержащей, мас.%: картофельный крахмал, осахаренный альфа-амилазой - 10, триптон - 1, дрожжевой экстракт - 0,5, хлористый натрий - 0,5, вода - остальное, рН 7,2. Выращивание осуществляют в колбах Эрленмейера объемом 750 мл, содержащих 100 мл среды, на качалке с интенсивной аэрацией (280 об/мин) при температуре 37°С в течение 72 часов.
Амилолитическую активность культуральной жидкости в ходе ферментации определяют по гидролизу 1%-ного растворимого крахмала в 10 мМ Na-K-фосфатном буфере рН 6,0, 0,3 мМ СаС12 и 33 мМ NaCl [ГОСТ 20264.4-89].
К 10 мл 1%-ного растворимого крахмала, растворенного в 15 мМ Na-K-фосфатном буфере рН 6,0, добавляют 5 мл исследуемого образца - культуральной жидкости (разведенного в 2 мМ ацетатном буфере, рН 6,0, 0,3 мМ СаС12 и 100 мМ NaCl). Контроль вместо исследуемого образца содержит 5 мл буфера для разведения фермента. Пробы инкубируют при 30°С 10 мин. Реакцию останавливают добавлением к 1 мл реакционной смеси 10 мл 0,1 М раствора НСl. Из полученной смеси отбирают 1 мл и переносят в 10 мл раствора йода, содержащего 0,0025% I и 0,025% KI. Реакционную смесь выдерживают при 20°С 20 мин и измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 656 нм. Контрольным раствором при калориметрировании является дистиллированная вода. Количество прогидролизованного крахмала определяют по формуле:
где D1 - оптическая плотность контрольного раствора;
D2 - оптическая плотность опытного раствора;
0,1 - количество крахмала, взятое для испытания в качестве субстрата, г.
Если количество прогидролизованного крахмала меньше 0,02 г или больше 0,06 г, то испытание повторяют с большими или меньшими разведениями растворов препарата альфа-амилазы.
Определение амилолитической активности (АС) осуществляется по формуле:
где С - количество прогидролизованного крахмала, г;
n - величина разведения раствора культуральной жидкости;
5,885; 0,001671 - коэффициенты расчетного уравнения, полученные при математической обработке экспериментальных данных зависимости количества прогидролизованного крахмала от количества фермента, взятого для испытания.
За единицу активности амилолитических ферментов (АС) принимают такое количество фермента, под действием которого в принятых условиях (в нашем случае реакцию проводят при температуре 30°С и рН 6,0) за 1 час происходит гидролиз 1 г крахмала до декстринов различной молекулярной массы, составляющих 30% от крахмала, введенного в реакцию.
Данные по накоплению альфа-амилазы В. amyloliquefaciens в культуральной жидкости во время ферментации в колбах суммированы в табл.1. На 65-й час ферментации амилолитическая активность культуральной жидкости штамма Bacillus amyloliquefaciens В-10291 составила 180 едГОСТ/мл, что на 91% превышает амилолитическую активность культуральной жидкости контрольного штамма, в качестве которого использовали штамм Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-5144 (94 ед/мл).
| Таблица 1 | ||
| Время ферментации, ч | Амилолитическая активность, едГОСТ/мл | |
| ВКПМ В-5144 (контрольный штамм) |
ВКПМ В-10291 (заявляемый штамм) |
|
| 0 | 0,05 | 0,05 |
| 5 | 0,7 | 2,1 |
| 9 | 8,5 | 6,8 |
| 15 | 14,7 | 9,4 |
| 21 | 24,9 | 11,7 |
| 24 | 31,7 | 15,2 |
| 29 | 32,4 | 25,2 |
| 36 | 43,7 | 55,8 |
| 48 | 80 | 144 |
| 53 | 88,7 | 183 |
| 65 | 94 | 180 |
Пример 2. Культивирование штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10291 в ферментере.
Накопление альфа-амилазы в культуральной жидкости штаммов Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10291 - заявляемый штамм и в культуральной жидкости В. amyloliquefaciens ВКПМ В-5144 - контрольный штамм оценивают при культивировании их в промышленных ферментационных средах, приготовленных на деминерализованной воде и содержащих, мас.%: картофельный крахмал, осахаренный альфа-амилазой, - 10, кукурузный экстракт - 2,4, белково-витаминный концентрат или пивные дрожжи - 0,3, лактоза - 0,28, (NH4)2SO4 - 0,8, K2SO4 - 0,3, MgSO4 × 7Н2O - 0,014, CuSO4 - 0,00038, NaCl - 0,03, вода - остальное, рН 7,2. Штамм Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ-10291 выращивают на среде без антибиотика, как и контрольный штамм. Инокуляты штаммов (жидкую посевную культуру) выращивают в 750-мл колбах, содержащих 100 мл питательной среды следующего состава, мас.%: триптон - 1, дрожжевой экстракт - 1, хлористый натрий - 0,25, глюкоза - 1, деминерализованная вода - остальное, рН 7,2. Колбы инкубируют на качалке (280 об/мин) при 37°С в течение 8 часов. Выращенную культуру в количестве 5% от объема среды в ферментере стерильно засевают в лабораторный ферментер Marubishi MDL 100 объемом 1 л. Процесс ферментации ведут при 37°С при интенсивном перемешивании (800 об/мин), рН поддерживают в пределах 7.0-7.4 с помощью 12.5% NH4OH и 6% H2SO4. Амилолитическую активность культуральной жидкости в ходе ферментации определяют по методу, описанному в примере 1. Данные по амилолитической активности культуральной жидкости во время ферментации суммированы в таблице 2.
| Таблица 2 | |||
| Штамм | Амилолитическая активность, едГОСТ/мл | ||
| 17 ч | 48 ч | 64 ч | |
| Заявляемый штамм: ВКПМ В-10291 | 215 | 839 | 900 |
| Контрольный штамм: ВКПМ В-5144 | 198 | 710 | 780 |
На 64-й час ферментации амилолитическая активность культуральной жидкости штамма Bacillus amyloliquefaciens В-10291 составила 900 едГОСТ/мл, что на 15% превышает амилолитическую активность контрольного штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-5144 (780 едГОСТ/мл).
Пример 3. Расход пеногасителя в процессе культивирования штамма Bacillus amyloliquefaciens В-10291 в ферментере.
Процесс ферментации осуществляют как в примере 2. В процессе культивирования штамма Bacillus amyloliquefaciens В-10291 наблюдали меньшее пенообразование, чем у контрольного штамма, что позволило снизить расход пеногасителя в процессе ферментации в 3,8 раз (таблица 3).
| Таблица 3 | |
| штамм | Суммарный расход пеногасителя в процессе культивирования |
| Заявляемый штамм: ВКПМ В-10291 | 1,3 мл |
| Контрольный штамм: ВКПМ В-5144 | 5 мл |
Таким образом, получен штамм Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10291, продуцирующий альфа-амилазу с активностью 900 едГОСТ/мл. Штамм устойчив к эритромицину и рифампицину, а также обладает пониженным пенообразованием в процессе культивирования, что позволяет уменьшить расход пеногасителя в процессе ферментации более чем в 3 раза, что облегчает выделение фермента из культуральной жидкости.
Claims (1)
- Штамм бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10291 - продуцент альфа-амилазы Bacillus amyloliquefaciens.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010153387/10A RU2455352C1 (ru) | 2010-12-27 | 2010-12-27 | ШТАММ Bacillus amyloliquefaciens - ПРОДУЦЕНТ АЛЬФА-АМИЛАЗЫ Bacillus amyloliquefaciens |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010153387/10A RU2455352C1 (ru) | 2010-12-27 | 2010-12-27 | ШТАММ Bacillus amyloliquefaciens - ПРОДУЦЕНТ АЛЬФА-АМИЛАЗЫ Bacillus amyloliquefaciens |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2455352C1 true RU2455352C1 (ru) | 2012-07-10 |
Family
ID=46848547
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010153387/10A RU2455352C1 (ru) | 2010-12-27 | 2010-12-27 | ШТАММ Bacillus amyloliquefaciens - ПРОДУЦЕНТ АЛЬФА-АМИЛАЗЫ Bacillus amyloliquefaciens |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2455352C1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2528058C1 (ru) * | 2013-06-04 | 2014-09-10 | Федеральное государственное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") | Штамм бактерий bacillus amyloliquefaciens, обладающий фунгицидным и бактерицидным действием, и биологический препарат на его основе для защиты зерновых растений от заболеваний, вызываемых фитопатогенными грибами |
| US20210030818A1 (en) * | 2018-03-09 | 2021-02-04 | Biohm Health Llc | Compositions for use in balancing microbiome |
| CN120648590A (zh) * | 2025-05-26 | 2025-09-16 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种高产1-脱氧野尻霉素的解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2003689C1 (ru) * | 1992-03-30 | 1993-11-30 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Рекомбинантна плазмидна ДНК рВА1418, кодирующа альфа-амилазу BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS и штамм-бактерий BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS - продуцент альфа-амилазы BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS |
| WO1996023874A1 (en) * | 1995-02-03 | 1996-08-08 | Novo Nordisk A/S | A method of designing alpha-amylase mutants with predetermined properties |
-
2010
- 2010-12-27 RU RU2010153387/10A patent/RU2455352C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2003689C1 (ru) * | 1992-03-30 | 1993-11-30 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Рекомбинантна плазмидна ДНК рВА1418, кодирующа альфа-амилазу BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS и штамм-бактерий BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS - продуцент альфа-амилазы BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS |
| WO1996023874A1 (en) * | 1995-02-03 | 1996-08-08 | Novo Nordisk A/S | A method of designing alpha-amylase mutants with predetermined properties |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2528058C1 (ru) * | 2013-06-04 | 2014-09-10 | Федеральное государственное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") | Штамм бактерий bacillus amyloliquefaciens, обладающий фунгицидным и бактерицидным действием, и биологический препарат на его основе для защиты зерновых растений от заболеваний, вызываемых фитопатогенными грибами |
| US20210030818A1 (en) * | 2018-03-09 | 2021-02-04 | Biohm Health Llc | Compositions for use in balancing microbiome |
| CN120648590A (zh) * | 2025-05-26 | 2025-09-16 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种高产1-脱氧野尻霉素的解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2455352C1 (ru) | ШТАММ Bacillus amyloliquefaciens - ПРОДУЦЕНТ АЛЬФА-АМИЛАЗЫ Bacillus amyloliquefaciens | |
| RU2381270C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Clostridium acetobutylicum - ПРОДУЦЕНТ БУТАНОЛА, АЦЕТОНА И ЭТАНОЛА | |
| RU2288263C2 (ru) | Штамм bacillus coagulans sim-7 dsm 14043 для получения l(+)-лактата и способ получения l(+)-лактата | |
| CN102676437B (zh) | 一种产胞外普鲁兰酶的方法及其专用微生物 | |
| CN102220244B (zh) | 一种哈茨木霉菌株及其用该菌株制备右旋糖酐酶的方法 | |
| CN118480461A (zh) | 高产淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶的蜡状芽胞杆菌及其应用 | |
| US9127261B2 (en) | Enzyme-based fed-batch technique in liquid cultures | |
| KR101240429B1 (ko) | 엔테로박터 속 ｓｄ 255 균주 및 이로부터 세포외다당류를 생산하는 방법 | |
| WO2008062558A1 (en) | Thermotolerant ethanol-producing yeast and ethanol production method utilizing the same | |
| CN110343626A (zh) | 一株耐热嗜盐单胞菌及其应用 | |
| CN110643552B (zh) | 一种利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的菌株及其应用 | |
| RU2560584C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИИ Bacillus stratosphericus, ОБЛАДАЮЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ ПРОДУЦИРОВАТЬ ЭТАНОЛ ИЗ ЛИГНОЦЕЛЛЮЛОЗНОЙ БИОМАССЫ | |
| Lovdina et al. | Geobacillus kastophilus as a source of thermostable amylase | |
| RU2784717C1 (ru) | Питательная минеральная среда на основе арабиногалактана для культивирования микроорганизмов и способ культивирования штаммов микроорганизмов, синтезирующих фермент для гидролиза арабиногалактана | |
| RU2312135C2 (ru) | Штамм бактерий paenibacillus campinasensis - продуцент циклодекстринглюканотрансферазы | |
| Niharika et al. | Analysing the biocatalytic aspect of amylase from plant and microbial sources for industrial application | |
| CN116024126B (zh) | 一株产环糊精葡萄糖基转移酶的产酸克雷伯氏菌 | |
| KUMAR et al. | Immobilization of amylase producing bacteria (Bacillus subtilis) from soil of Western Himalayan Region Solan, Himachal Pradesh, India | |
| CN117903999B (zh) | 一种藤黄色单胞菌及其应用 | |
| RU2560585C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus stratosphericus, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭТАНОЛА ИЗ ЛИГНОЦЕЛЛЮЛОЗНОЙ БИОМАССЫ | |
| Sankari et al. | Comparative analysis of amylase production by Proteus sp from different soil habitat | |
| SU1738852A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS Sp.-продуцент @ -циклодекстринтрансферазы | |
| RU2404247C2 (ru) | Способ получения бутанола | |
| SU1705347A1 (ru) | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI, предназначенный дл получени 2Ъ-дезоксиаденозина | |
| RU2500812C1 (ru) | Рекомбинантный штамм бактерий bacillus licheniformis - продуцент термостабильной липазы |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20170327 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner |