RU2464309C1 - Штамм вируса гриппа для производства живой и инактивированной гриппозной вакцины - Google Patents

Штамм вируса гриппа для производства живой и инактивированной гриппозной вакцины Download PDF

Info

Publication number
RU2464309C1
RU2464309C1 RU2011120996/10A RU2011120996A RU2464309C1 RU 2464309 C1 RU2464309 C1 RU 2464309C1 RU 2011120996/10 A RU2011120996/10 A RU 2011120996/10A RU 2011120996 A RU2011120996 A RU 2011120996A RU 2464309 C1 RU2464309 C1 RU 2464309C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
quail
hong kong
vaccine
influenza
Prior art date
Application number
RU2011120996/10A
Other languages
English (en)
Inventor
Юлия Андреевна Дешева (RU)
Юлия Андреевна Дешева
Лариса Георгиевна Руденко (RU)
Лариса Георгиевна Руденко
Галина Ибрагимовна Александрова (RU)
Галина Ибрагимовна Александрова
Татьяна Анатольевна Смолоногина (RU)
Татьяна Анатольевна Смолоногина
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины" СЗО РАМН
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины" СЗО РАМН filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины" СЗО РАМН
Priority to RU2011120996/10A priority Critical patent/RU2464309C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2464309C1 publication Critical patent/RU2464309C1/ru

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается штамма вируса гриппа. Представленный штамм A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2) получен методом генетической реассортации путем скрещивания апатогенного птичьего вируса A/перепел/Гонконг/6/97(H9N2) с холодоадаптированным температурочувствительным штаммом A/Ленинград/134/17/57(H2N2) - донором аттенуации. Полученный штамм депонирован в коллекции вирусов Научно-исследовательского института вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН под №2631 и может быть использован для производства живой интраназальной вакцины или инактивированной гриппозной. 3 табл.

Description

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики гриппа, вызванного пандемически опасными вирусами гриппа птиц. Для производства интраназальной живой гриппозной вакцины (ЖГВ) или инактивированной гриппозной вакцины (ИГВ) предложен реассортантый штамм вируса гриппа A/перепел/Гонконг/97/84(H9N2)(Orthomyxoviridae, рода Influenzavirus A).
Современная эпидемическая ситуация по гриппу характеризуется не только одновременной циркуляцией эпидемических вирусов гриппа A(H1N1), A(H3N2) и B, но и широким распространением вирусов птичьего гриппа подтипов A(H5N1), A(H7N3) и A(H9N2), способных инфицировать людей. Вирусы птичьего гриппа A(H9N2) обладают даже большим сродством к дыхательным путям человека, чем высокопатогенные вирусы подтипа A(H5N1). Необходимость разработки срочных противопандемических мер, в том числе и для борьбы с вирусами птичьего гриппа, отражена в приказе Минздрава РФ [Приказ №40 МЗ РФ РФ от 28.12.2004].
Применяемые в настоящее время для профилактики эпидемического гриппа A вакцины подтипов H1N1 и H3N2 не могут вызывать защитную реакцию в случае широкомасштабной вспышки, вызванной вирусами гриппа подтипа A(H9N2), к которым у подавляющего большинства населения нет иммунитета.
В настоящее время известен реассортантный штамм A/17/утка/Потсдам/86/92(H5N2) [Патент №2318871, опубл. 10.03.2008], предназначенный как для производства живой, так и инактивированной вакцины против птичьего гриппа подтипа Н5. Но он не может дать профилактический эффект в случае распространения вирусов гриппа подтипа A(H9N2).
За рубежом для производства ИГВ подтипа A(H9N2) был использован вирус гриппа A/Гонконг/1073/99(H9N2) антигенной линии G9 [Lancet. - 2003. - Vol. 362. - P.1959-1966]. Однако в процессе производства гриппозных вакцин на основе вирусов птичьего гриппа возникают трудности с накоплением вирусного материала в связи с высокой токсичностью подобных вирусов для куриных эмбрионов. Для создания высокоурожайных вакцинных штаммов применяют генетическую реассортацию с лабораторными штаммами, характеризующимися высокой репродуктивной активностью и безвредностью для человека.
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакцинного штамма новой антигенной разновидности на основе холодоадаптированного донора аттенуации A/Ленинград/134/17/57(H2N2) с использованием в качестве источника поверхностных антигенов апатогенного вируса гриппа птиц A/перепел/Гонконг/6/97(H9N2), принадлежащего к антигенной линии G1.
Вакцинный штамм A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2) получен в развивающихся куриных эмбрионах (КЭ) методом классической генетической реассортации апатогенного птичьего вируса A/перепел/Гонконг/6/97(H9N2) с холодоадаптированным штаммом A/Ленинград/134/17/57(H2N2) с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к донору аттенуации A/Ленинград/134/17/57(H2N2). Донор аттенуации А/Ленинград/134/17/57(H2N2) - холодоадаптированный температурочувствительный штамм вируса гриппа, разрешенный для получения безвредных интраназальных вакцин для взрослых и детей [Александрова Г.И. Новое в эпидемиологии и профилактике вирусных инфекций. Л., 1986. - С.66-83].
Применяемые в настоящее время вакцинные штаммы ЖГВ получают методом реассортации современных эпидемических вирусов с холодоадаптированными (XA) донорскими штаммами, в результате чего образуются реассортанты, имеющие смешанный геном. Гены, кодирующие гемагглютинин (HA) и нейраминидазу (NA), наследуются от антигенно актуального эпидемического штамма, а шесть генов внутренних и неструктурных белков (PB2, PB1, PA, NP, M, NS) - от безвредного XA донора аттенуации. Из полученных реассортантов выбирают вакцинный кандидат с формулой генома 6:2, наиболее отвечающий требованиям антигенной специфичности, характерной для родительского вируса «дикого» типа, а также соответствующий признакам холодовой адаптации по способности к репродукции при пониженной температуре.
Анализ генома созданного вакцинного штамма был выполнен с использованием рестрикционного анализа ДНК-копий сегментов РНК, полученных с помощью обратно-транскриптазной полимеразно-цепной реакции (ОТ-ПЦР) [Klimov A.I. J. Virol. Method. - 1995. - №55. - P.445-446]. Полученные с помощью ОТ-ПЦР ДНК-копии сегментов РВ2, РВ1, PA, NP, M и NS обрабатывали соответственно эндонуклеазами рестрикции Tru9I, HindIII, BamHI, AsnI, EcoRI, PvuI, NciI соответственно. Дополнительно копии сегментов РВ1, PA и M были обработаны рестриктазами BstXI, AsnI и BciVI. Было показано, что сайты рестрикции в положениях нуклеотидной цепи, характерные для донора аттенуации A/Ленинград/134/17/57(H2N2), присутствуют в генах РВ2 (1459), PA (107 и 1045), NP (1066) и M (68 и 969). В то же время было установлено, что утрачены сайты рестрикции в генах РВ1 (819 и 975) и NS (798), что также характерно для донора аттенуации A/Ленинград/134/17/57(H2N2). Таким образом, было установлено, что реассортант A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2) унаследовал 6 генов негликозилированных белков от донора аттенуации A/Ленинград/134/17/57(H2N2) (формула генома 6:2). Принадлежность гемагглютинина родительскому штамму «дикого» типа A/перепел/Гонконг/6/97(H9N2) определяли в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Помимо этого было проведено прямое нуклеотидное секвенирование ДНК-копий генов. Штамм является температурочувствительным (разность титров при 33°C и 39°C-7,5 lg ЭИД50/мл) и холодоадаптированным (разность титров при 33°C и 25°C-2,8 lg ЭИД50/мл).
Таким образом, представленный вакцинный штамм A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму - антигенной специфичностью гемагглютинина вируса «дикого» типа A/перепел/Гонконг/6/97(H9N2), структурой генома, необходимой для реассортантных вакцинных штаммов, температурочувствительностью, адаптацией к пониженной температуре культивирования, что коррелирует с аттенуацией, характерной для аттенуированного донорского штамма.
Штамм депонирован в коллекции Научно-исследовательского института вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН под №2631. Морфология штамма - полиморфная, типичная для вируса гриппа.
ХАРАКТЕРИСТИКА ПОЛУЧЕННОГО ШТАММА.
Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 33°C в течение 48 часов - 7,5 lg ЭИД50/0,2 мл.
Гемагглютинирующая активность - 1:512
Паспорт на вакцинный штамм А/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2) прилагается (стр.5)
ПАСПОРТ ШТАММА
1. Название штамма - A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2)
2. Серия - серия 1.
3. Метод получения - реассортация; характеристика родительских вирусов:
а) апатогенный птичий вирус - A/перепел/Гонконг/6/97(H9N2)
б) донор аттенуации A/Ленинград/134/17/57(H2N2)
4. Количество пассажей - 7 в процессе реассортации
5. Характеристика штамма до лиофилизации:
а) оптимальные условия репродукции - 34°, 28-30 часов;
б) гемагглютинирующая активность 1:512;
в) инфекционная активность 9,3 lg ЭИД50/0,2 мл;
г) чувствительность к ингибиторам: ингибиторорезистентный;
д) разность в показателях инфекционной активности при 34°C и 40°C - 7,8 lg ЭИД50/мл;
е) разность в показателях инфекционной активности при 34°C и 25°C - 2,8 lg ЭИД50/мл;
ж) структура генома реассортанта:
- гены от апатогенного птичьего вируса - HA, NA
- гены от донора аттенуации - PA, РВ1, РВ2, NP, M, NS,
6. Характеристика штамма после лиофилизации:
а) дата лиофилизации: 20.12.2010 г.;
б) объем материала во флаконе: 1 мл;
в) количество доз в серии: 2
г) инфекционная активность - 8,5 lg ЭИД50/0,2 мл
д) гемагглютинируюшая активность - 1:512
7. Рекомендуемое разведение при вакцинации 1:1
8. Антигенная специфичность:
а) гемагглютинина - идентичен вирусу A/перепел/Гонконг/6/97(H9N2) по данным РТГА с крысиной антисывороткой;
б) нейраминидазы - идентична вирусу A/перепел/Гонконг/6/97(H9N2) по данным секвенирования.
9. Безвредность для мышей при подкожном введении - безвреден.
10. Бактериологический контроль лиофилизированного материала: дата проведения - 25 декабря 2010 г. - стерилен.
11. Контроль на отсутствие посторонних вирусов - посторонние вирусы отсутствуют.
Результаты доклинических испытаний заявляемого штамма.
1. Штамм A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2) проявляет свойства температурочувствительности и холодовой адаптации при культивировании в куриных эмбрионах.
Пример. Полученные данные по репродуктивной активности кандидата в вакцинные штаммы в развивающихся куриных эмбрионах свидетельствовали о приобретении вирусом A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2) в результате реассортации ts- и ca-фенотипов, являющихся маркерами аттенуации (Табл. 1).
2. Штамм A/17/перепел/Гонконг/97/84(H91N2) безвреден для мышей при интраназальном и введении.
Пример. При интраназальном введении в дозе 6-7 lg ЕИД50 реассортант был аттенуированным для мышей, репродуцируясь более эффективно в носовых ходах (3,5 lg ЕИД50/мл), чем в легочной ткани (1,8 lg ЕИД50/мл) (Табл.2).
3. Штамм A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2) иммуногенен при введении мышам в виде прототипа ЖГВ интраназально или прототипа ИГВ внутримышечно.
Пример. Оценка гуморального иммунного ответа в сыворотках подопытных животных проводилась через 28 дней после введения препаратов. В иммуноферментном анализе выявлено наличие в сыворотках мышей, иммунизированных реассортантом A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2), специфических иммуноглобулинов классов G и A (IgG и IgA) к вирусам подтипа H9N2 (Табл.3). Выработка локальных антител при интраназальном введении в виде прототипа ЖГВ была значительно выше по сравнению с парентеральным введением инактивированного антигена.
Таким образом, было показано, что реассортантный вакцинный штамм, содержащий HA апатогенного птичьего вируса гриппа A(H9N2), был безвредным и иммуногенным при введении мышам. Заявляемый вакциинный кандидат по результатам испытаний на мышах может быть рекомендован для получения как живой, так и инактивированной гриппозных вакцин, поскольку способен индуцировать иммунный ответ как при интраназальном введении в виде прототипа ЖГВ, так и парентерально в виде прототипа ИГВ. Использование для получения вакцинных штаммов непатогенных вирусов гриппа обеспечивает необходимый уровень безопасности не только при работе с уже готовыми реассортантами, но и в процессе их подготовки.
Таблица 1
Результаты изучения репродукции реассортанта A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2) и родительских вирусов различной температуре культивирования в куриных эмбрионах.
Вирус Характеристика Репродуктивная активность (m±δ) при температуре инкубации:
34°C 25°C 40°C
A/Ленинград/134/17/57(H2N2) XA донорский штамм 9,5±0,3 7,3±0,2 1,5±0,0
A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2) вакцинный кандидат 9,8±0,5 7±0,2 1,8±0,3
A/перепел/Гонконг/6/97(H9N2) апатогенный вирус птичьего гриппа 8,6±0,3 1,5±0,0 9,2±0,2
Таблица 2
Результаты изучения безвредности реассортантного штамма A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2) при интраназальном введении мышам.
Место выделения вируса Титры вируса (lg ЭИД50/0,1 мл, m±δ на 3-й день после интраназального введения:
Лен17/Н9 (106ЭИД50) Лен17/Н9 (107 ЭИД50) Лен 17 (106 ЭИД50) H9N2-дт (106 ЭИД50)
носовые ходы 1,1±0,3 3,8±0,2 2,5±0,3 1,8±0,5
легкие 1,5±0,0 1,5±0,0 2,3±0,5 4,9±0,5
Таблица 3
Выработка сывороточных и локальных антител после иммунизации мышей реассортантным вакцинным штаммом A/17/перепел/Гонконг/97/84(H9N2) в виде ЖГВ или ИГВ.
Препарат Сывороточные антитела Локальные антитела
РТГА (СГТ) Тест
микронейтрализации
(СГТ)
ИФА, log10 (m±δ) ИФА, log10 (m±δ)
lgG lgA lgG lgA
Лен17/Н9-ЖГВ 5,0 9,1 2,7±0,6 2,9±0,2 1,6±0,9 2,6±0,7
Лен17/Н9-ИГВ 11,9 21,8 3,1±0,2 2,3±0,3 1,0±0,5 1,6±0,7
H9N2-дт 6,6 11,9 2,8±0,2 2,9±0,1 1,5±0,5 1,6±0,4
ИГВ+ЖГВ 11,5 13,2 2,6±0,1 2,5±0,4 1,4±0,5 1,5±0,8
ЖГВ+ИГВ 20,0 17,4 3,2±0,3 2,6±0,1 1,2±0,3 1,3±0,4
Контроль 5,0 10,0 2,2±0,6 2,2±0,5 1,0±0,0 1,0±0,0

Claims (1)

  1. Штамм вируса гриппа, депонированный в Государственной коллекции вирусов Научно-исследовательского института вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН под №2631, используемый для производства живой интраназальной и производства инактивированной гриппозной вакцины.
RU2011120996/10A 2011-05-24 2011-05-24 Штамм вируса гриппа для производства живой и инактивированной гриппозной вакцины RU2464309C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011120996/10A RU2464309C1 (ru) 2011-05-24 2011-05-24 Штамм вируса гриппа для производства живой и инактивированной гриппозной вакцины

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011120996/10A RU2464309C1 (ru) 2011-05-24 2011-05-24 Штамм вируса гриппа для производства живой и инактивированной гриппозной вакцины

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2464309C1 true RU2464309C1 (ru) 2012-10-20

Family

ID=47145393

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2011120996/10A RU2464309C1 (ru) 2011-05-24 2011-05-24 Штамм вируса гриппа для производства живой и инактивированной гриппозной вакцины

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2464309C1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2702834C1 (ru) * 2018-12-21 2019-10-11 федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт гриппа имени А.А. Смородинцева" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева" Минздрава России) Штамм вируса гриппа A/UNL/HK/2:6/2017 (H5N8) для получения инактивированных и живых гриппозных вакцин

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2318871C1 (ru) * 2006-04-19 2008-03-10 ГУ "Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины" РАМН /ГУ НИИЭМ РАМН/ Штамм вируса гриппа гкв 2389 для получения живой интраназальной и инактивированной гриппозной вакцины

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2318871C1 (ru) * 2006-04-19 2008-03-10 ГУ "Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины" РАМН /ГУ НИИЭМ РАМН/ Штамм вируса гриппа гкв 2389 для получения живой интраназальной и инактивированной гриппозной вакцины

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
STEPHENSON I et al.. Safety and antigenicity of whole virus and subunit influenza A/Hong Kong/1073/99 (H9N2) vaccine in healthy adults: phase I randomised trial. Lancet, 2003 Dec 13, Vol.362 (9400), p.p.1959-66. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2702834C1 (ru) * 2018-12-21 2019-10-11 федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт гриппа имени А.А. Смородинцева" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева" Минздрава России) Штамм вируса гриппа A/UNL/HK/2:6/2017 (H5N8) для получения инактивированных и живых гриппозных вакцин

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kang et al. Induction of long-term protective immune responses by influenza H5N1 virus-like particles
Desheva et al. Characterization of an influenza A H5N2 reassortant as a candidate for live-attenuated and inactivated vaccines against highly pathogenic H5N1 viruses with pandemic potential
Rodriguez et al. Development of a novel equine influenza virus live-attenuated vaccine
US11065326B2 (en) Live-attenuated vaccine having mutations in viral polymerase for the treatment and prevention of canine influenza virus
Biswas et al. Current challenges: from the path of “original antigenic sin” towards the development of universal flu vaccines: flu vaccine efficacy encounters significant hurdles from pre-existing immunity of the host suggesting assessment of host immunity before vaccination
US20090104228A1 (en) Influenza Virus Vaccine
Chen et al. Evaluation of live attenuated influenza a virus h6 vaccines in mice and ferrets
Crevar et al. Elicitation of protective immune responses using a bivalent H5N1 VLP vaccine
Lu et al. Evaluation of the antigenic relatedness and cross-protective immunity of the neuraminidase between human influenza A (H1N1) virus and highly pathogenic avian influenza A (H5N1) virus
Haque et al. Confronting potential influenza A (H5N1) pandemic with better vaccines
Zeitlin et al. Avian influenza
Kim et al. Cross protection by inactivated recombinant influenza viruses containing chimeric hemagglutinin conjugates with a conserved neuraminidase or M2 ectodomain epitope
Uchida et al. Application of reverse genetics for producing attenuated vaccine strains against highly pathogenic avian influenza viruses
Li et al. A chimeric influenza hemagglutinin delivered by parainfluenza virus 5 vector induces broadly protective immunity against genetically divergent influenza a H1 viruses in swine
Jadhao et al. Development of Eurasian H7N7/PR8 high growth reassortant virus for clinical evaluation as an inactivated pandemic influenza vaccine
Šantak Old and new ways to combat human influenza virus
Do Hwang et al. Protection of pregnant mice, fetuses and neonates from lethality of H5N1 influenza viruses by maternal vaccination
Lin et al. Baculovirus-derived hemagglutinin vaccine protects chickens from lethal homologous virus H5N1 challenge
Nurpeisova et al. Analysis of the efficacy of an adjuvant-based inactivated pandemic H5N1 influenza virus vaccine: A. Nurpeisova et al.
RU2416640C1 (ru) Вакцинный штамм вируса гриппа а/17/брисбен/07/1 (h3n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей
RU2464309C1 (ru) Штамм вируса гриппа для производства живой и инактивированной гриппозной вакцины
Harris et al. Intramuscular immunization of mice with live influenza virus is more immunogenic and offers greater protection than immunization with inactivated virus
Baz et al. A single dose of an avian H3N8 influenza virus vaccine is highly immunogenic and efficacious against a recently emerged seal influenza virus in mice and ferrets
RU2563351C2 (ru) ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А/17/Ануи/2013/61 (H7N9) ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ
Kim et al. Optimal attenuation of a PR8-derived mouse pathogenic H5N1 recombinant virus for testing antigenicity and protective efficacy in mice

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20140525