RU2477314C1 - РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pSM-ZsGreen, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛКИ SOX2 И С-MYC ЧЕЛОВЕКА И ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БЕЛОК ZsGreen, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА - Google Patents
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pSM-ZsGreen, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛКИ SOX2 И С-MYC ЧЕЛОВЕКА И ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БЕЛОК ZsGreen, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА Download PDFInfo
- Publication number
- RU2477314C1 RU2477314C1 RU2011149846/10A RU2011149846A RU2477314C1 RU 2477314 C1 RU2477314 C1 RU 2477314C1 RU 2011149846/10 A RU2011149846/10 A RU 2011149846/10A RU 2011149846 A RU2011149846 A RU 2011149846A RU 2477314 C1 RU2477314 C1 RU 2477314C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- zsgreen
- myc
- sox2
- plasmid
- human
- Prior art date
Links
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 101000687905 Homo sapiens Transcription factor SOX-2 Proteins 0.000 title claims abstract description 16
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 title claims abstract description 11
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 8
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 8
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 15
- 102100024270 Transcription factor SOX-2 Human genes 0.000 claims description 8
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 102000009092 Proto-Oncogene Proteins c-myc Human genes 0.000 claims description 4
- 102000047444 human SOX2 Human genes 0.000 claims description 4
- 101001030211 Homo sapiens Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 claims description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 3
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims description 3
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 claims description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 101800001494 Protease 2A Proteins 0.000 description 8
- 101800001066 Protein 2A Proteins 0.000 description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 8
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001139134 Homo sapiens Krueppel-like factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000585703 Homo sapiens Protein L-Myc Proteins 0.000 description 1
- 102100020677 Krueppel-like factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010087705 Proto-Oncogene Proteins c-myc Proteins 0.000 description 1
- 101150037203 Sox2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 108010028263 bacteriophage T3 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области генной инженерии, молекулярной и клеточной биологии и биотехнологии. Предложена рекомбинантная плазмида pSM-ZsGreen, кодирующая белки SOX2 и C-MYC человека и флуоресцентный белок ZsGreen, предназначенная для временной или постоянной экспрессии генов SOX2, C-MYC и ZsGreen в культивируемых клетках человека и обеспечивающая стабильную экспрессию введенного гена. Рекомбинантная плазмида может использоваться в качестве вектора для получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека. 1 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к области генной инженерии, молекулярной и клеточной биологии, биотехнологии и может быть использовано для получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека.
Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) - это тип стволовых клеток, которые могут быть получены из соматических клеток животных и человека в результате повышенной экспрессии набора определенных генов [1-3]. Для получения ИПСК человека и животных успешно используется сверхэкспрессия таких генов как OCT4, SOX2, KLF4 и c-MYC [2].
Известно, что для получения большинства новых линий ИПСК в настоящий момент используют генетические конструкции, полученные на основе ретро- и лентивирусных векторов. Этот метод характеризуется тем, что происходит случайное встраивание ДНК-копий геномов ретро- или лентивирусов в геномы клеток, что в свою очередь может приводить к нарушению функционирования генов [4].
Для полномасштабного применения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток в фундаментальных и прикладных исследованиях, таких как скрининг новых лекарственных веществ, исследования в области токсикологии и регенеративной медицины, необходимо решение ряда проблем. Во-первых, необходима разработка методов получения ИПСК без генетической модификации их геномов. Во-вторых, способ получения ИПСК должен быть достаточно эффективным.
Известно, что плазмидные векторы (плазмиды) могут временно существовать в ядрах клеток, обеспечивая стабильную транскрипцию нуклеотидных последовательностей, находящихся под контролем конститутивных промоторов. Кроме того, известен метод, основанный на использовании специфических последовательностей - 2А-пептидов, позволяющий получать генетические конструкции, обеспечивающие трансляцию нескольких полипептидов (белков) с одной молекулы матричной РНК [5].
Задачей данного изобретения является конструирование полицистронной неинтегрирующейся плазмидной конструкции, кодирующей белки SOX2 и C-MYC человека и флуоресцентный белок ZsGreen, обеспечивающей одновременную трансляцию данных белков и являющейся вектором при получении индуцированных плюрипотентных стволовых клеток. Белки SOX2 и C-MYC необходимы для запуска репрограммирования клеток, а флуоресцентный белок ZsGreen служит маркером трансфекции клеток и последующей элиминации плазмидной ДНК.
Реализация изобретения осуществляется следующим образом.
Конструирование рекомбинантной плазмидной ДНК выполняют на основе плазмиды pIRES (Clontech) и включает следующие стадии:
1. Выделяют РНК из клеток известной линии эмбриональных стволовых клеток человека HUES9 [6], и производят синтез кДНК с помощью олиго-(dT) праймеров. Полученную кДНК используют в качестве матрицы для синтеза фрагментов, кодирующих белки;
2. Синтез фрагмента кДНК гена SOX2 -позиции в мРНК 428-1379- (Homo sapiens SRY (sex determining region Y)-box 2) человека, (регистрационный номер в GeneBank NM_003106.2), размером 1023 пар нуклеотидов, содержащего на 3'-конце последовательность P2A-пептида (SOX2-P2A). Синтез проводят с помощью полимеразной цепной реакции с праймерами: hSOX2 5' XbaI 5'-TTTAGTGTCTAGAATGTACAACATGATGGAGACGGAGCTG-3' (прямой праймер, содержит искусственно введенный сайт эндонуклеазы рестрикции Xba I) и hSOX2 P2A 3'5'-TTCTCTTCGACATCCCCTGCTTGTTTCAACAGGGAGAAGTTAGTGGCTCCGCTTCCGGACATGTGTGAGAGGGGCAGTGTGCCGTTAATG-3' (обратный праймер, содержащий нуклеотидную последовательность кодирующую пептид P2A);
3. Синтез фрагмента кДНК гена c-MYC -позиции в мРНК 571-1891- (Homo sapiens v-myc myelocytomatosis viral oncogene homolog (avian)) (регистрационный номер в GeneBank NM_002467.4) размером 1397 пар нуклеотидов, содержащего на 5'-конце последовательность P2A-пептида (P2A-c-MYC). Синтез проводят с помощью полимеразной цепной реакции с праймерами: hcMYC P2A 5' 5'- GCCACTAACTTCTCCCTGTTGAAACAAGCAGGGGATGTCGAAGAGAATCCCGGGCCAATGCCCCTCAACGTTAGCTTCACCAACAGGAAC-3' (прямой праймер, содержащий нуклеотидную последовательность кодирующую пептид P2A) и hcMYC 3' SalI 5'- TTTAGCAGTGGTACGTCGACTTACGCACAAGAGTTCCGTAGCTGTTC-3' (прямой праймер, содержит искусственно введенный сайт эндонуклеазы рестрикции Sal I);
4. Объединение фрагментов SOX2-P2A и P2A-c-MYC осуществляют методом полимеразной цепной реакции с использованием в качестве матриц перекрывающихся фрагментов SOX2-P2A и P2A-c-MYC, а также праймеров hSOX2 5'XbaI и hcMYC 3' SalI. В результате получают фрагмент SOX2-P2A-c-MYC, размером 2373 пар нуклеотидов;
5. Фрагмент ДНК, кодирующий белок ZsGreen, вырезают из плазмиды pZsGreen (Clontech) эндонуклеазой рестрикции Xba I и клонируют в сайт Xba I, находящийся в полилинкере B плазмиды pIRES (Clontech). В результате получена плазмида pIRES-ZsGreen.
6.Фрагмент ДНК SOX2-P2A-c-MYC клонируют с помощью набора реагентов pGEM-T Easy Vector Systems (Promega) и штамма E.coli XL-10 Gold;
7. Клоны плазмиды pGEM-T Easy со встройками pGEM-SOX2-P2A-c-MYC последовательности выделяют стандартным методом щелочного лизиса (Maniatis, Т., Fritsch, E.F. and Sambrook, J. (1982) Molecular Cloning: a Laboratory Manual, Cold Sping Harbor Laboratory Press);
8. Фрагмент SOX2-P2A-c-MYC вырезают из плазмиды pGEM-SOX2-P2A-c-MYC с помощью эндонуклеаз рестрикции Spe I и EcoR I и лигируют с плазмидой pIRES-ZsGreen, гидролизованной эндонуклеазами рестрикции Nhe I и EcoR I, сайты которых расположены в полилинкере А - эндонуклеазы рестрикции Spe I и Nhe I имеют совместимые липкие концы.
В результате получена плазмида pSM-ZsGreen размером 9204 п.н. (SM= SOX2, c-MYC).
На чертеже изображена карта плазмидной генетической конструкции pSM-ZsGreen. Фрагмент ДНК, кодирующий белки SOX2 и C-MYC, встроен между сайтами Nhe I и EcoR I в полилинкер А плазмиды pIRES, а ДНК, кодирующая ZsGreen, встроена в сайт Xba I полилинкера В плазмиды pIRES.
Описание и позиции в нуклеотидной последовательности (п.н., пара нуклеотидов) функциональных элементов генетической плазмидной конструкции pSM-ZsGreen представлены в таблице 1.
| Таблица 1 | |
| Элемент плазмидной генетической конструкции | Позиции в последовательности конструкции, п.н. |
| p CMV IE - энхансер/промотор цитомегаловируса | 1-750 |
| IVS - интрон | 890-1022 |
| Промотор РНК-полимеразы T7 | 1067-1085 |
| Фрагмент ДНК SOX2-P2A-c-MYC | 1085-3445 |
| IRES - внутренний сайт посадки рибосом | 3474-4055 |
| ZsGreen - кДНК гена ZsGreen | 4078-4822 |
| Промотор РНК-полимеразы T3 | 4968-4890 |
| SV40 poly A - фрагмент, содержащий сигнал полиаденилирования мРНК вируса SV40 | 4967-5189 |
| Ориджин репликации f1 | 5285-5741 |
| p SV40 - энхансер/ранний промотор вируса SV40 | 5806-6224 |
| SV40 ori - ориджин репликации вируса SV40 | 6122-6188 |
| Neo-r - ген устойчивости к неомицину | 6269-7064 |
| Синтетический сигнал полиаденилирования | 7129-7178 |
| Amp-r - ген устойчивости к ампициллину | 7590-8451 |
Полученная плазмидная генетическая конструкция pSM-ZsGreen построена на основе плазмидного вектора pIRES (Clontech), в который помещены фрагменты кДНК генов SOX2 и c-MYC человека, соединенные нуклеотидной последовательностью, кодирующей P2A-пептид и кДНК гена, кодирующего флуоресцентный белок ZsGreen.
Транскрипция единой мРНК SOX2-P2A-c-MYC-IRES-ZsGreen осуществляется с конститутивного промотора p CMV IE, обеспечивающего высокий уровень наработки мРНК. Наличие последовательностей P2A и IRES позволяет одновременно транслировать белки SOX2, C-MYC и ZsGreen с одной молекулы мРНК.
Фрагмент ДНК, кодирующий флуоресцентный белок ZsGreen, является маркером трансфекции клеток и последующей элиминации плазмидной ДНК.
Плазмидная генетическая конструкция pSM-ZsGreen предназначена для временной или постоянной экспрессии генов SOX2, C-MYC и ZsGreen в культивируемых клетках человека и обеспечивает стабильную экспрессию введенного гена.
Рекомбинантная плазмида pSM-ZsGreen может использоваться в качестве вектора для получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека.
Список использованной литературы
1. Takahashi, K. and S. Yamanaka, Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic
and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell, 2006. 126(4): p. 663-76.
2. Takahashi, K., et al., Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by
defined factors. Cell, 2007. 131(5): p. 861-72.
3. Yu, J., et al., Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells. Science, 2007. 318(5858): p. 1917-20.
4. Okita, K., et al., Generation of mouse induced pluripotent stem cells without viral vectors.
Science, 2008. 322(5903): p. 949-53.
5. Szymczak, A.L. and Vignali, D.A., Development of 2A peptide-based strategies in the design of multicistronic vectors. Expert Opin Biol Ther, 2005. 5(5): p. 627-38.
6. Cowan, C.A., et al., Derivation of embryonic stem-cell lines from human blastocysts. N Engl J Med, 2004. 350(13): p. 1353-6.
Claims (3)
1. Рекомбинантная плазмида pSM-ZsGreen, кодирующая белки SOX2 и С-MYC человека и флуоресцентный белок ZsGreen, предназначенная для получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека, представляющая собой генетическую конструкцию на основе плазмиды pIRES, содержащая следующие конструктивные элементы: фрагмент ДНК, кодирующий белки SOX2 и C-MYC человека, включающий последовательность, кодирующую Р2А, расположенную между последовательностями SOX2 и C-MYC, встроен между сайтами рестрикции NheI и EcoRI в полилинкер А плазмиды pIRES, размер встройки 2360 пар нуклеотидов, и фрагмент ДНК, кодирующий флуоресцентный белок ZsGreen, встроенный в сайт Xba I полилинкера В плазмиды pIRES; транскрипция полицистронной мРНК SOX2-P2A-C-MYC-IRES- ZsGreen осуществляется с конструктивного промотора pCMV IE.
2. Рекомбинантная плазмида pSM-ZsGreen по п.1, где разделение последовательностей элементами Р2А и IRES позволяет экспрессировать три белка с одной плазмиды одновременно.
3. Рекомбинантная плазмида pSM-ZsGreen по п.1, где фрагмент ДНК, кодирующий белки SOX2 и C-MYC человека, запускает репрограммирование клеток для получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека, а фрагмент ДНК, кодирующий флуоресцентный белок ZsGreen, является маркером трансфекции клеток и последующей элиминации плазмидной ДНК.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011149846/10A RU2477314C1 (ru) | 2011-12-07 | 2011-12-07 | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pSM-ZsGreen, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛКИ SOX2 И С-MYC ЧЕЛОВЕКА И ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БЕЛОК ZsGreen, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011149846/10A RU2477314C1 (ru) | 2011-12-07 | 2011-12-07 | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pSM-ZsGreen, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛКИ SOX2 И С-MYC ЧЕЛОВЕКА И ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БЕЛОК ZsGreen, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2477314C1 true RU2477314C1 (ru) | 2013-03-10 |
Family
ID=49124208
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011149846/10A RU2477314C1 (ru) | 2011-12-07 | 2011-12-07 | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pSM-ZsGreen, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛКИ SOX2 И С-MYC ЧЕЛОВЕКА И ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БЕЛОК ZsGreen, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2477314C1 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100169986A1 (en) * | 2008-03-05 | 2010-07-01 | Suzanne Porszasz-Reisz | Conditional Mst Overexpressing Construct and Conditional Myostatin Overexpressing Transgenic Mouse |
| RU2010112393A (ru) * | 2007-08-31 | 2011-10-10 | Уайтхэд Инститьют Фор Байомедикал Рисерч (Us) | СТИМУЛЯЦИЯ ПУТИ Wnt ПРИ ПЕРЕПРОГРАММИРОВАНИИ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК |
-
2011
- 2011-12-07 RU RU2011149846/10A patent/RU2477314C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2010112393A (ru) * | 2007-08-31 | 2011-10-10 | Уайтхэд Инститьют Фор Байомедикал Рисерч (Us) | СТИМУЛЯЦИЯ ПУТИ Wnt ПРИ ПЕРЕПРОГРАММИРОВАНИИ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК |
| US20100169986A1 (en) * | 2008-03-05 | 2010-07-01 | Suzanne Porszasz-Reisz | Conditional Mst Overexpressing Construct and Conditional Myostatin Overexpressing Transgenic Mouse |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11634727B2 (en) | Recombinant nucleic acid molecule of transcriptional circular RNA and its application in protein expression | |
| US10729784B2 (en) | Method for cellular RNA expression | |
| KR101871192B1 (ko) | 비-바이러스 접근법을 사용한 ｉＰＳ 세포의 생산 방법 | |
| Quabius et al. | Synthetic mRNAs for manipulating cellular phenotypes: an overview | |
| US11767530B2 (en) | Splice inhibiting oligonucleotides | |
| KR20110053446A (ko) | ｉＰＳ 세포의 생산 방법 | |
| CA2873814A1 (en) | Method for expression of heterologous proteins using a recombinant negative-strand rna virus vector | |
| KR20180105670A (ko) | 벡터-프리 유도만능 줄기세포를 생성시키기 위한 방법 및 벡터 | |
| AU2018333503B2 (en) | RNA replicon for reprogramming somatic cells | |
| AU2017225350B2 (en) | Promoter | |
| CA2973943A1 (en) | Gene expression system using stealthy rna, and gene introduction/expression vector including said rna | |
| WO2018214534A1 (en) | Artificial pou protein, method for preparing the same and use thereof | |
| Kulcenty et al. | Review Molecular mechanisms of induced pluripotency | |
| RU2477314C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pSM-ZsGreen, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛКИ SOX2 И С-MYC ЧЕЛОВЕКА И ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БЕЛОК ZsGreen, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА | |
| EP2917350B1 (en) | Method for cellular rna expression | |
| RU2495124C2 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pSN-ZsGreen, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛКИ SOX2 И NANOG ЧЕЛОВЕКА И ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БЕЛОК ZsGreen, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА | |
| CN106256909A (zh) | 表达鸭rig-i蛋白的转基因鸡培育方法 | |
| RU2495125C2 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pOK-DsRed2, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛКИ ОСТ4 И KLF4 ЧЕЛОВЕКА И ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БЕЛОК DsRed2, ПРЕДНАЗНАЧЕНАЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА | |
| RU2495126C2 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pOL-DsRed2, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛКИ OCT4 И LIN28 ЧЕЛОВЕКА И ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ БЕЛОК DsRed2, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА | |
| JP2026511240A (ja) | 単離ヌクレアーゼ及びその使用 | |
| CA3254576A1 (en) | METHODS FOR EVALUATING MODIFIED RETRONIC ACTIVITY AND THEIR USES | |
| CA2752947A1 (en) | Foxp1 splice variants and methods and uses thereof | |
| RU2495127C2 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pAd-SM, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛКИ SOX2 И C-MYC ЧЕЛОВЕКА, ЯВЛЯЮЩАЯСЯ ОСНОВОЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ВИРУЛЕНТНЫХ АДЕНОВИРУСОВ, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУЦИРОВАННЫХ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА | |
| Abd Hamid et al. | Establishment of Stable and Secretable Tatκ-GFP Recombinant Protein: A Preliminary Report of Promoter Methylation in 293t Cell Line | |
| US9890392B2 (en) | Method for preparing specific cells of human-derived cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191208 |