RU2664458C2 - Рекомбинантный лектин омелы белой и его применение в качестве адьюванта - Google Patents
Рекомбинантный лектин омелы белой и его применение в качестве адьюванта Download PDFInfo
- Publication number
- RU2664458C2 RU2664458C2 RU2014102348A RU2014102348A RU2664458C2 RU 2664458 C2 RU2664458 C2 RU 2664458C2 RU 2014102348 A RU2014102348 A RU 2014102348A RU 2014102348 A RU2014102348 A RU 2014102348A RU 2664458 C2 RU2664458 C2 RU 2664458C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- adjuvant
- vaccine
- mistletoe lectin
- recombinant
- cells
- Prior art date
Links
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title claims abstract description 78
- 235000014066 European mistletoe Nutrition 0.000 title claims abstract description 69
- 235000012300 Rhipsalis cassutha Nutrition 0.000 title claims abstract description 69
- 241000221012 Viscum Species 0.000 title claims abstract description 69
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 title claims abstract description 61
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 title claims abstract description 61
- 239000002523 lectin Substances 0.000 title claims abstract description 60
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 61
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 50
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 50
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 50
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 19
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 101000582927 Photorhabdus laumondii subsp. laumondii (strain DSM 15139 / CIP 105565 / TT01) Lectin A Proteins 0.000 claims description 3
- 108010020221 Phytolacca americana lectin B Proteins 0.000 claims 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 26
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 22
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 22
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 20
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 17
- 230000004044 response Effects 0.000 description 17
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 15
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 14
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 13
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 10
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 9
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 9
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 8
- 108010034143 Inflammasomes Proteins 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 6
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 5
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 4
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 4
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 4
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 3
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 3
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 108700018911 Viscum ribosome inactivating Proteins 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 229950011624 aviscumine Drugs 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 3
- 102100035904 Caspase-1 Human genes 0.000 description 2
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 2
- 229940124884 Engerix-B Drugs 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 2
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000829 Ribosome Inactivating Proteins Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 102000008233 Toll-Like Receptor 4 Human genes 0.000 description 2
- 108010060804 Toll-Like Receptor 4 Proteins 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N brefeldin A Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\[C@@H]2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N 0.000 description 2
- JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N brefeldin-A Natural products CC1CCCC=CC2(C)CC(O)CC2(C)C(O)C=CC(=O)O1 JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 108010022050 mistletoe lectin I Proteins 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010050685 Cytokine storm Diseases 0.000 description 1
- 102000009025 Endorphins Human genes 0.000 description 1
- 108010049140 Endorphins Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 108010089814 Plant Lectins Proteins 0.000 description 1
- 241000221013 Viscum album Species 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008649 adaptation response Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 206010007625 cardiogenic shock Diseases 0.000 description 1
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenphosphate dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 230000003284 homeostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000007898 magnetic cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 239000003726 plant lectin Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000002483 superagonistic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000003970 toll like receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
- A61K39/292—Serum hepatitis virus, hepatitis B virus, e.g. Australia antigen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
- C07K14/42—Lectins, e.g. concanavalin, phytohaemagglutinin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Botany (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к вакцинам, которые содержат антигены и адъювант, что может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем получают и отбирают адъювант из группы рекомбинантных лектинов омелы белой, не имеющей гликозилирования, который используют в вакцине, которую в свою очередь используют в качестве лекарственного средства и композиции. Изобретение позволяет получить эффективную вакцину, содержащую один антиген или более и, по меньшей мере, один адъювант. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 8 ил., 2 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к вакцинам, которые содержат антигены и адъювант, и применению адъюванта, при котором адъювант выделен из рекомбинантного лектина омелы белой.
При многих заболеваниях вакцины эффективны только частично, либо неэффективны вообще. Исследования защитного иммунитета и адъювантов, которые вызывают сильные иммунные ответы, могут помочь разработать эффективные вакцины против патогенных микроорганизмов (McKee AS, MacLeod MKL, KapplerJW et al. 2010 BMC Biology;8: 37–46). Вакцинами являются вакцины, полученные из живых, ослабленных (то есть, со сниженной вирулентностью) или инактивированных патогенных агентов, либо инактивированных (обезвреженных) токсинов или анатоксинов патогенных микроорганизмов, или фрагментов поверхностной структуры патогенных микроорганизмов. В настоящее время формально различают три основных типа вакцин: а) ослабленные живые вакцины, которые содержат вирусы или бактерии, подобные действующему возбудителю заболевания, но при этом являющиеся менее патогенными; б) инактивированные вакцины, которые представляют собой температурно-инактивированные или химически инактивированные частицы патогенных микроорганизмов; или в) субъединичные вакцины, состоящие из компонент патогенных микроорганизмов.
В дополнение к антигену, который является объектом адаптивного иммунного ответа, вакцины обычно содержат также патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (ПАМПы) или другие вещества, которые усиливают эффект адаптивного ответа. Эти вещества описаны как адъюванты (McKee et al 2010 (выше)).
Известный адъювант, имеющий длительную историю применения в вакцинах для людей, – это соли алюминия (которые также называют квасцами). Протеины (антигены) патогенных микроорганизмов адсорбируются солью алюминия, образуя при этом суспензию, которая вводится внутримышечно.
Гепатит В является инфекционным заболеванием печени, вызываемым вирусом гепатита В, который часто сопровождается острым протеканием (90%) и иногда – хроническим протеканием болезни. Приблизительно 350 миллионов людей хронически инфицированы гепатитом В, что делает его одним из самых распространенных в мире вирусных заболеваний. Хроническое воспаление печени может привести к циррозу печени и гепатоцеллюлярной карциноме. Лечение хронического гепатита В является затруднительным, поэтому наиболее важной мерой предотвращения инфекции и уменьшения количества вирусоносителей является вакцинация.
Ряд вакцин против гепатита В выпускается серийно, среди них – Энджерикс-В (Engerix-B) от GlaxoSmithKline. В этой вакцине в качестве адъюванта используется гидроксид алюминия, а HBsAg (поверхностный антиген вируса гепатита В) вырабатывается в дрожжевых клетках (Saccharomyces cerevisiae или пекарские дрожжи) с применением генной инженерии.
При лечении рака путем вакцинации вакцины могут быть терапевтическими либо профилактическими. Адъюванты применяются с целью усиления действия профилактических или терапевтических вакцин, то есть, чтобы вызвать сильный и стойкий иммунный ответ. В частности, существует потребность в субъединичных вакцинах. Субъединичные вакцины состоят из очищенных антигенов, которые специфически распознаются лимфоцитами. И, хотя они более безопасны, чем вакцины, действующие во всем организме, сами по себе они не способны оптимально активизировать иммунную систему, так как лишены собственных ПАМПов (McKee et al 2010 (выше)). Адъюванты могут влиять на баланс антитело- и клеточно-опосредствованного индуцированного иммунитета. Применение подобных веществ, тем самым, делает возможным уменьшение дозы антигена и количества требуемых инъекций (Salk JE, Laurent AM & Bailey ML 1951 Am J Public Health Nations Health 41: 669-77).
Адъюванты также подразделяются на две категории: системы-носители и “иммуностимуляторы”, то есть, иммуномодуляторы (Pashine A, Valiante NM & Ulmer JB 2005 Nature medicine 11: 63-68, Pichichero ME 2008 Human vaccines 4(4): 262270). Основанные на носителях адъюванты (алюминий) увеличивают взаимодействие между компонентами вакцины и ключевыми клетками иммунной системы.
Иммуномодуляторы напрямую активируют антиген-презентирующие клетки (АПК) и естественный иммунный ответ, используя специфические рецепторы (например, Толл-подобные рецепторы (ТПР)) (Pashine et al. (supra), O’Hagan DT & Valiante NM 2003 Nature reviews 2: 727-735).
Несколько типов адъювантов для вакцин известны начиная с 1970-х, но на сегодня лишь некоторые из них были разрешены для применения к человеку (O’Hagan DT & De Gregorio E 2009 Drug Discov Today 14(11–12): 541–551).
В последнее время новые адъюванты такие, как агонисты Толл-подобных рецепторов (ТПР) и новые, крупнодисперсные системы-носители такие, как вакцины на основе пептидов, предоставляют возможности для современной иммунотерапии.
Тем не менее, все еще необходимы новые адъюванты, которые должны обладать следующими свойствами (Brunner R, Jensen-Jarolim E & Pali-Schöll I 2010 Immunol Lett 128(1): 29-35):
а) укрепление Тх17 (Т-хелперов 17). Адъюванты характеризуются выработкой ИЛ-17 (интерлейкина-17). Они являются важными модуляторами памяти воспалительных и CD4+ Т-клеток.
б) индуцирование стойких клеточных ответов, включающих клетки Т-хелперов (Tx) 1 и цитотоксических T-лимфоцитов (ЦТЛ) в дополнение к антителам (Guy B 2007 Nat Rev Microbiol 5: 505–517).
В целом, механизмы действия адъювантов могут быть различными (фиг. 1). Неспецифические адъюванты (например, гидроксид алюминия) усиливают презентацию антигенов через активацию метаболизма инфламмасом, для которого характерна секреция ИЛ-1β (Lamine Mbow M, De Gregorio E, Valianteal NM et al. 2010 Current Opinion in lmmunology 2010, 22: 411-416). В месте инъекции алюминий образует депо, что приводит к высокой локальной концентрации антигена и, таким образом, улучшает поглощение антигенпрезентирующими клетками (АПК) (HogenEsch H 2002 Vaccine 20 (Suppl 3): 34–39). Более того, распознавание антигена может быть ускорено путем прямой стимуляции иммунных клеток (Gupta RK, Rost BE, Relyveld E et al 1995 Pharm Biotechnol 6: 229–248). Эти, так называемые адъюванты В-типа, взаимодействуют с АПК и антигенами неспецифическим образом, и, вследствие этого, их эффект основан на усилении антигенпрезентирующих молекул ГКГ (главного комплекса гистосовместимости).
В противоположность адъювантам В-типа, адъюванты А-типа имеют специфический механизм действия. Большинство недавно разработанных адъювантов А-типа таких, как монофосфорил-липид А (МФЛ), являются специфическими агонистами ТПР. Они действуют в первую очередь на ТПР и действуют опосредованно путем активации АПК и усиления секреции цитокинов таких, как ИЛ-12. Дополнительно, агонисты ТПР могут действовать на ГКГ-рецепторы путем эффективной презентации применяемых антигенов (Guy B 2007 (выше)).
Более того, существует описание адъювантов С-типа. Их действие основано на усилении ГКГ-рецепторов вследствие взаимодействия ко-стимулирующих клеток с АПК. Предпринимаются усилия для того, чтобы найти клиническое применение для адъювантов С-типа. Один из известных примеров – TGN1412 – новое, суперагонистическое анти-CD28 моноклональное антитело, которое стимулирует непосредственно Т-клетки, однако, при одном исследовании из-за цитокиновой бури наблюдались кардиогенный шок и острая легочная недостаточность (Suntharalingam G, Perry MR, Ward S et al. 2006 N Engl J Med 355: 1018-1028).
В прототипе существует острая потребность в новых соответствующих требованиям адъювантах.
Растительные экстракты, выделенные из омелы белой, применялись в терапевтических целях на протяжении столетий. Средства на основе омелы белой применялись, с разной степенью успешности, в частности, в лечении рака (Bocci V 1993 J Biol Regulators and Homeostatic Agents 7(1): 1-6; Gabius H-J, Gabius S, Joshi S S et al. 1993 Planta Med 60: 2-7; Gabius H-J & Gabius S 1994 PZ 139: 9-16; Ganguly C & Das S 1994 Chemotherapy 40: 272-278, Hajto T, Hostanska K, Gabius H_J 1989 Cancer Res 49: 4803-4808, Hajto T, Hostanska K, Frei K et al. 1990 Cancer Res. 50: 3322-3326). Было показано, что терапевтический эффект оказывается, в частности, так называемыми лектинами омелы белой (вискумин, агглютинин Viscum album, VAA). Лектины омелы белой имеют цитотоксическое действие и вызывают неспецифическую иммуномодуляцию, положительные эффекты которой применяются для лечения опухолевых больных. Различные исследования лектинов омелы белой in vitro (Hajto et al., 1990 (выше); Männel D N, Becker H, Gundt A et al. 1991 Cancer Immunol Immunother 33: 177-182; Beuth J, Ko K L, Tunggal L et al. 1993 Drug Res 43: 166-169) и in vivo (Hajto T 1986 Oncology 43 suppl 1: 51-65; Hajto et al., 1989 (supra), Beuth J, Ko H L, Gabius H-J et al. 1991 In Vivo 5: 29-32; Beuth J, Ko H L, Gabius H-J et al. 1992 J Clin Invest 70: 658-661), а также клинические исследования (Beuth et al., 1992 (выше)) показали усиленное выделение воспалительных цитокинов (TNF-alpha (фактор-альфа некроза опухоли), интерлейкин-1 (ИЛ-1), интерлейкин-6 (ИЛ-6)) и активацию клеточных компонентов иммунной системы (Тх-клетки, натуральные клетки-киллеры (NK-клетки)).
На сегодняшний день анализ экстракта омелы белой сводится к идентификации трех лектинов омелы белой (ML-I, ML-II и ML-III), которые имеют различные молекулярный вес и специфику связывания сахаров. Было показано, что иммуностимулирующее действие экстракта омелы белой оказывается ML-I. Лектин ML-I состоит из двух А- и двух В-цепей (MLA и MLB, соответственно), каждая из которых является гликозилированной. А-цепь ответственна за ферментативную инактивацию рибосом (Endo Y, Tsurugi K & Franz H 1988 FEBS Lett 231: 378–380), а В-цепь участвует в связывании углеводов. Обе цепи связаны между собой дисульфидным мостиком. Полученные в результате мономеры лектина омелы белой могут ассоциировать в димеры с образованием нековалентных связей.
Также существует возможность получать биологически активный лектин омелы белой с помощью рекомбинантной технологии. В EP 0751221 описано выделение полипептидов лектина омелы белой в виде структурно гомогенного вещества, при котором, исходя из генетической последовательности лектина омелы белой, воспроизводятся рекомбинантные одиночные цепи (А-цепи, В-цепи) высокой чистоты, которые могут быть реассоциированы in vitro и тем самым образовывать рекомбинантный лектин омелы белой – голопротеин, который преимущественно является протеин-химически, ферментативно и структурно гомогенным, так называемым авискумином (Aviscumine). Согласно EP 0751221, полипептид рекомбинантного лектина омелы белой подходит для терапевтического применения как голопротеин, подцепь и в форме субфрагментов, и рассматривается согласно данному изобретению. Биологически активный лектин омелы белой, который можно получить путем рекомбинантной технологии в E. coli, называют не только авискумином (Aviscumine), но также и “rViscumin” или “rML” (recombinant mistletoe lectin) (Eck J, Langer, M, Möckel, B et al 1999; Eur J Biochem 264: 775-784).
Хотя в EP 0751221 упоминается о возможности применения рекомбинантного лектина омелы белой для лечения инфекционных заболеваний, никакой информации относительно применения рекомбинантного лектина омелы белой в качестве адъюванта в вакцине не предоставляется.
Кроме того, Lavelle et al (Lavelle EC, Grant G, Pusztal A et al. 2002. Immunology 107:268-274) описывают использование выделенных из растений лектинов как адъювантов, которые вводятся мукозно путем ингаляции по 1000 нг. Lavelle также обнаружил, что доза в 1000 нг/мышь оказывает негативный эффект на вес животных и влияет на их выживание, то есть, является токсичной.
Song et al (Song SK, Moldoveanu Z, Nguyen HN et al. 2007 Vaccine 25: 6359-6366) показали возможность применения лектина корейской омелы в качестве адъювантов, применяемых мукозно.
Как бы то ни было, выделенные из растений лектины омелы белой негомогенны (Soler MH, Stoeva S, Schwamborn C et al. 1996 FEBS Letter 399: 153-157, Soler HS, Stoeva S, Voelter W 1998 Biochem Biophys Res Comm 246: 596-601) и разнородны или отличны друг от друга в плане действия (EP 1051495 B1), а также не являются эффективными per se как адъюванты или иммуномодуляторы. В связи с этим, хотя лектин корейской омелы, к примеру, относится к RIP II протеинам (протеинам-инактиваторам рибосом), он имеет существенные отличия в структуре и конформации по сравнению с рекомбинантным лектином омелы белой, который обсуждается здесь (Kang TB, Song SK, Yoon TJ et al. 2007 J Biochem Mol Biol 40(6): 959-965). Недостатком является невозможность точно определить дозировку и то, что выделенные из растений лектины содержат примеси. К тому же, выделенные из растений лектины омелы белой имеют отличия в гликозилировании, что может влиять на их эффективность как адъювантов (в частности, на кинетику и т.д.).
Согласно изобретению лектины рекомбинантной омелы белой преимущественно не имеют такого гликолизирования.
Желательным является увеличение иммуногенности антигенов путем применения адъювантов с целью получить эффективный и улучшенный иммунный ответ у носителя или больного. Также существует большая потребность в безопасных и действенных адъювантах, которые увеличивают эффективность вакцин и просты в применении.
Задача, которую рассматривает данное изобретение, - создание вакцины или адъюванта, с которыми иммунный ответ носителя или больного на антигены мог бы быть усилен.
Эта задача решается созданием вакцины или адъюванта, которые содержат рекомбинантный лектин омелы белой.
Неожиданно было обнаружено что рекомбинантный лектин омелы белой может быть применен как потенциальный адъювант вместе с антигеном.
Таким образом, изобретение относится к адъюванту, содержащему как минимум один рекомбинантный лектин омелы белой (называемый далее адъювантом согласно изобретению).
Также изобретение относится к вакцине, содержащей антиген вместе с адъювантом согласно изобретению (называемой далее вакциной согласно изобретению).
Вследствие этого, изобретение также относится к лекарству или композиции, содержащим вакцину согласно изобретению и, в некоторых случаях, дополнительные вещества и добавки и/или фармацевтически приемлемый носитель или фармацевтически приемлемый растворитель.
Задача решается путем создания адъюванта или вакцины, которые содержат рекомбинантные лектины омелы белой, а рекомбинантные лектины омелы белой состоят из следующих аминокислотных последовательностей:
Лекарственное средство согласно изобретению предпочтительно содержит А-цепь лектина омелы белой (MLA) и В-цепь лектина омелы белой (MLB), как отдельно так и в комбинации для обоих случаев, а также в форме димеров (см., к примеру, EP 0751221 или EP 1051495).
Полипептид рекомбинантного лектина омелы белой А-цепи лектина омелы белой содержит следующие последовательности: SEQ ID No. 1–3, включая их изоформы или функциональные фрагменты.
Полипептид рекомбинантного лектина омелы белой В-цепи лектина омелы белой содержит следующие последовательности: SEQ ID No. 4–12, включая их изоформы или функциональные фрагменты.
(Полностью именуемые в дальнейшем и выше как “рекомбинантные лектины омелы белой”)
В дальнейшем предпочтение отдается рекомбинантному лектину омелы белой согласно изобретению – гетеродимеру, содержащему последовательности SEQ ID No. 1 и SEQ ID No. 4; см., например, EP 0751221, про так называемый авискумин (см. примеры).
В контексте настоящего изобретения, выражение “функциональный фрагмент” означает фрагменты заявленных полипептидов, которые имеют аналогичную биологическую функцию, что и представленные выше полипептиды, содержащие определенную последовательность аминокислот.
В этом контексте выражение “аналогичная биологическая функция” означает, к примеру, что фрагменты или производные полипептидов вызывают в клетках те же сигналы, что и заявленные полипептиды. Примерами фрагментов служат пептидные домены, обладающие определенными функциями. Выражение “аналогичная биологическая функция” также включает цитотоксичность, иммуностимуляцию (врожденной и адаптивной иммунных систем), стимуляцию выделения цитокина, антигенность, индуцирование экспрессии или активации поверхностных маркеров, индуцирование апоптоза или стимуляцию эндорфина.
В этом случае выражение “биологическая активность рекомбинантного лектина омелы белой” относится к любой биологической активности из спектра совокупности биологических активностей рекомбинантного лектина омелы белой. Функцией такого типа является фармакологический эффект рекомбинантного лектина омелы белой, например, его пригодность в качестве адъюванта в комбинации с антигеном (вакцина).
При исследовании мономеров ML-I обнаружено 25 изоформ, которые обусловлены различными комбинациями А- и В-цепей и различными уровнями гликолизирования цепей.
В отношении данного изобретения также рассматриваются полипептид лектина омелы белой или его фрагмент, содержащие разнообразные последовательности MLA и MLB цепей согласно изобретению, для последовательностей SEQ ID No. 1–12.
Лекарственное средство согласно изобретению предпочтительно содержит как минимум один полипептид рекомбинантного лектина омелы белой, включающий последовательности SEQ ID No. 1–12 либо их функциональный фрагмент, или любую их комбинацию.
К примеру, усиленный иммунный ответ наблюдался при применении вакцины согласно изобретению, содержащей поверхностный антиген гепатита В HBsAg (Hepatitis B surface antigen) и овальбумин в качестве “слабого модельного антигена” (см. примеры). Более того, неожиданно было обнаружено, что активация клеток рекомбинантными лектинами омелы белой происходит путем действенной и исключительно эффективной активации инфламмасом, сравнимым с механизмом действия алюминия (гидроксида алюминия).
В дальнейшем успешном осуществлении изобретения доза рекомбинантных лектинов омелы белой, приходящаяся на пациента (человека или млекопитающего) и, предпочтительно, вводимая подкожно, составляет от 5 до 600 нг/мл, в частности, от 250 до 450 нг/мл, 350 нг/мл или от 5 до 600 нг/пациент, в частности, от 250 до 450 нг/пациент, 350 нг/пациент.
Как показано в примерах, в диапазоне от 5 до 50 нг/животное (или от 50 до 500 нг/мл) или пациента оптимальное выделение интерлейкина-1β (ИЛ-1β) происходит в узком диапазоне дозировок 280–420 нг/пациент (280–420 нг/мл), в частности, после подкожного введения. При более высоких дозах интерлейкин не выделяется; наоборот, более вероятно возникновение цитотоксических эффектов в здоровых тканях. ИЛ-1β является прямым показателем активации инфламмасомы, которая особенно важна в плане пригодности адъюванта.
Особым преимуществом является то, что гомогенные рекомбинантные лектины омелы белой могут, таким образом, вызывать оптимальную активацию инфламмасомы. Благодаря гомогенности рекомбинантного лектина омелы белой становится возможным определение эффективной точной дозировки в узком диапазоне.
Это также приводит к улучшенной переносимости применения и, следовательно, для успешной вакцинации требуется меньшее количество применений. Согласно Lavelle (выше) для успешной вакцинации требуется четыре применения по причине недостаточной активации инфламмасомы. Согласно примеру 2, в качестве целесообразного аналога можно привести достижение успешной вакцинации всего после двух применений.
Рекомбинантные лектины омелы белой должны быть отнесены к такой категории адъювантов как “иммуностимуляторы” (иммуномодуляторы (выше)) благодаря наблюдаемому механизму действия.
АПК активируются следующим образом:
1. Активация фагоцитов (дендритные клетки и моноциты/макрофаги) вследствие фагоцитоза авискумина с последующими
а. Презентацией антигена,
б. Инициацией откликов Т-клеток и
в. Секрецией цитокина,
и
2. Индуцирование апоптоза (например, моноциты/макрофаги) с последующими
а. Активацией соседних фагоцитов путем поглощения мертвых клеток (например, апоптозных телец) апоптоза и
б. Секрецией цитокина.
Более того, показана эффективная активация инфламмасомы в моноцитах с помощью рекомбинантных лектинов омелы белой согласно изобретению путем стимуляции каспазы-1 и секреции ИЛ-1β и ИЛ-18. Совокупность механизмов генерации сильных иммунных ответов, таким образом, характеризует рекомбинантные лектины омелы белой как сильные и уникальные адъюванты.
В частности, рекомбинантные лектины омелы белой согласно изобретению обеспечивают специфическую и существенную активацию инфламмасомы, которая, согласно изобретению, считается необходимой в плане пригодности адъюванта.
Следовательно, изобретение также относится к применению рекомбинантных лектинов омелы белой в качестве адъювантов в вакцинах для усиления иммунного ответа носителя (животного, млекопитающего или человека) на один антиген или более.
Согласно изобретению созданы вакцины, содержащие как минимум один рекомбинантный лектин омелы белой в качестве адъюванта и антиген, например, антиген HBsAg, полученный из дрожжевых клеток и, в некоторых случаях, фармацевтически приемлемый носитель или фармацевтически приемлемый растворитель, и, в некоторых случаях, другие компоненты такие, как хлорид натрия, дигидрат двунатриевого фосфата, первичный кислый фосфат натрия.
Вакцины согласно изобретению преимущественно соединяются с буферным физиологическим раствором и производятся в виде стерильной суспензии для инъекций в ампулах или наполненных шприцах и вызывают иммунологический ответ у носителя (животного, млекопитающего или человека) или донора/пациента. Вакцины согласно изобретению индуцируют образование специфических Т-клеток и образование гуморальных антител к HBsAg.
Вакцины согласно изобретению применяются, например, для активной иммунизации против вируса гепатита В, который у неиммунных людей всех возрастов вызван вирусами всех известных подтипов. Группа людей, подлежащая иммунизации, определяется официальными рекомендациями к вакцинации (Постоянный комитет по вакцинации при институте Роберта Коха).
Для основной иммунизации может быть применена следующая программа вакцинации с использованием вакцины согласно изобретению:
1. Программа вакцинации, предусматривающая вакцинацию на 0, 1 и 6 месяцах, обеспечивает высокую концентрацию антител и, как правило, оптимальную защиту на 7 месяце.
2. Ускоренная программа вакцинации, предусматривающая вакцинацию после 0, 1 и 2 месяцев, делает возможным быстрое наращивание защиты за счет инокуляции. После 12 месяцев следует применять четвертую дозу для обеспечения долговременной защиты.
Эти программы вакцинации, приведенные в качестве примеров, могут корректироваться согласно национальным рекомендациям к вакцинации (Постоянный комитет по вакцинации при институте Роберта Коха).
Вакцины согласно изобретению вводятся преимущественно подкожно или внутримышечно.
Количество одного или более антигенов и рекомбинантного лектина омелы белой в вакцине согласно изобретению, а также применяемые дозы, могут быть определены способами, известными специалисту в данной области медицины. Тип дозировки определяется лечащим врачом в соответствии с клиническими предпосылками. Специалист в данной области знает, что тип дозировки зависит от многих факторов таких, как рост, вес, площадь поверхности тела, возраст, пол или общее состояние здоровья пациента, а также от конкретного применяемого средства, длительности и типа применения, и от других лекарств, которые могут приниматься параллельно.
Предпочтительно, чтобы адъювант рекомбинантного лектина омелы белой в вакцинах согласно изобретению вводился в виде водного или физиологического раствора, а антиген, в зависимости от единиц, обычно находился в порядке величины: от нанограммов, микрограммов и до миллиграммов (см. примеры, приведенные ниже).
Адъювант рекомбинантного лектина омелы белой согласно изобретению может быть использован с любым подходящим антигеном, и, таким образом, создается вакцина согласно изобретению.
Подходящими антигенами являются преимущественно те, которые применяются как потенциальные вакцины, и не могут быть исключительно такими, как, например, HBsAg (выше), антигены против вирусов гриппа H1N1 и других подвидов, пептидные антигены направленные против иммуногенных опухолей, например, PAX пептиды (Rodeberg DA, Nuss RA, Elsawa SF et al. 2006 Int J Cancer 119: 126-132, Yan M, Himoudi N, Pule M et al. 2008 Cancer Res 68(19): 8058-8065), и многие другие.
Стандартная дозировка адъюванта согласно изобретению отвечает концентрации 5 нг и выше.
Вакцины согласно изобретению создаются в удобном виде - как жидкие средства или композиции, которые могут быть приведены к определенному уровню pH (выше).
Выбор подходящих носителей и других добавок зависит от желаемого способа применения и от типа лекарственной формы.
С целью увеличить срок годности вакцин может быть использован фармацевтически приемлемый консервант.
Вакцины согласно изобретению приготавливаются путем смешивания компонент согласно общеустановленным методам или по собственному усмотрению.
Следующие примеры служат для иллюстрации изобретения, но без ограничения изобретения этими примерами.
Примеры
Пример 1: Активация инфламмасомы авискумином
МКПК, изолированные с помощью градиентной очистки фиколлом от человеческой донорской крови, высеивали на титровальных планшетах и выдерживали вместе с авискумином на протяжении от 8 до 24 часов, с или без стимуляции липополисахаридом (ЛПС). ЛПС активирует про-ИЛ-1β и про-ИЛ-18 посредством Толл-подобного рецептора-4 (ТПР4), а без этого последующая активация каспазы-1 приводит к выделению цитокинов одним ЛПС.
В совместной культуре авискумина и ЛПС цитокины ИЛ-1β и ИЛ-18 выделяются путем, зависящим от концентрации. Секреция ИЛ-6 и ФНО-альфа (фактор некроза опухолей) не индуцируется (9-часовой эксперимент). Авискумин и ЛПС, находясь по отдельности в клеточной культуре, не вызывают выделение цитокинов ИЛ-1β. Авискумин, взятый отдельно, способен вызывать выделение ИЛ-18, и этот эффект усиливается ЛПС. В случае, когда МКПК освобождены от моноцитов магнитной сортировкой клеток (анти-CD14 МАКС гранулы, Miltenyi), ни ИЛ-1β ни ИЛ-18 не могут выделяться в оставшихся МКПК при выдерживании с авискумином и ЛПС. Цитокины ИЛ-1β и клетки ИЛ-18, следовательно, выделяются из моноцитов. Индуцирование ИЛ-1β и ИЛ-18 путем выдерживания МКПК вместе с авискумином и ЛПС свидетельствует об активации инфламмасомного комплекса.
In vitro, оптимальное выделение ИЛ-1β из мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) наблюдали в узком диапазоне концентраций при оптимальной концентрации 33 нг/мл, в зависимости от времени выдерживания с авискумином в отсутствие ЛПС. Этот эффект сопровождается конусовидной зависимостью “концентрация-эффект” (фиг. 8).
а) Иммунизации
Были осуществлены две иммунизации мышей определенной инбредной линии (белые мыши), при которых применяли в совокупности авискумин в качестве адъюванта и поверхностный антиген гепатита В (HBsAg), а также – в дальнейших экспериментах – овальбумин как антиген. Иммунизации осуществляли с интервалом в 3 недели. Композиции антиген-авискумин вводили подкожно на 1 и 21 дни, а иммунизированных животных умерщвляли через 14 дней после последней иммунизации.
С целью определения иммуногенности проводили окрашивание внутриклеточного цитокина антиген-специфических Т-клеток CD8 и CD4 и определение антиген-специфических антител. Подобная постановка эксперимента дает возможность регистрировать усиленный иммунный ответ, вызванный авискумином, на клеточном и гуморальном уровнях.
Пример 2. Иммунизация поверхностным антигеном гепатита В (HBsAg)
Антиген HBsAg является липопротеиновой частицей размером 20 нм. Такая вирусоподобная частица способна вызывать гуморальный иммунный ответ, часто даже в отсутствие адъюванта. Мягкий ответ Т-клеток CD8 на HBsAg может стимулироваться в белых мышах одним только антигеном.
Данная комбинация антигена и мышиного штамма дает возможность проанализировать способность авискумина усиливать мягкие гуморальные и клеточные ответы. В этом случае для позитивного контроля использовали AbISCO®-100 (ISCONOVA, Уппсала, Швеция), так как известно, что данный адъювант усиливает иммунный ответ в этой модели.
Штамм мышей: белые мыши;
2 подкожные иммунизации (1, 21 дни);
5 животных на группу (3 животных для контрольных групп 2 и 3); всего 31 животное.
| Таблица1 | |||
| Группа | HBsAg (доза/животное) |
Адъювант (доза/животное) |
Комментарий |
| 1/А | 5 мкг | адъювант AbISCO | положительный контроль |
| 2/Б | - | - | физраствор – отрицательный контроль |
| 3/В | - | 50 нг авискумина | адъювант контроль |
| 4/Г | 5 мкг | - | антиген контроль |
| 5/Д | 5 мкг | 0,5 нг авискумина | низкая доза |
| 6/Е | 5 мкг | 5 нг авискумина | средняя доза |
| 7/Ж | 5 мкг | 50 нг авискумина | высокая доза |
Свежие композиции вакцины готовили перед каждой иммунизацией. Авискумин растворяли в физрастворе с добавлением 0,01% Твин 80.
Реагенты
В качестве антигена для композиций (объем 100 мкл на дозу/животное) применяли по 5 мкг рекомбинантного HBsAg (Rhein Biotech GmbH, Дюссельдорф, Германия) на животное.
В качестве контрольного теста использовали адъювант AbISCO-100 (Isconova, Уппсала, Швеция) в количестве 12 мкг на дозу. AbISCO-100 является адъювантом, оптимизированным для использования на мышах.
Для повторной стимуляции CD8+ клеток у белых мышей использовали следующие синтетические полипептиды: HBsAg28-39 IPQSLDSWWTSL как (Ld)-рестриктированные, HBsAg-специфические пептиды ГКГ класса I. Малярийные CSP280-289 SYVPSAEQI как (Kd)-рестриктированные, нерелевантные контрольные пептиды ГКГ класса I.
Специфические CD4+ Т-клетки активировали с помощью антигенов HBsAg (применяемых как и в композиции вакцины).
Исследования
а) Определение HBsAg-специфических IFNγ-образующих CD8+ Т-клеток селезенки
На 14 день после второй иммунизации суспензию, состоящую из одиночных клеток селезенки, активировали ex vivo на протяжении 4 часов с помощью соответствующих антиген-специфических пептидов. Брефелдин А добавляли, чтобы поддерживать внутриклеточную выработку цитокинов. Поверхности клеточных мембран окрашивали для CD8, фиксировали и делали проницаемыми для последующего внутриклеточного окрашивания IFN-γ. Окрашенные клетки анализировали с помощью проточного цитометра Beckmann Coulter (FC 500) с применением программного обеспечения CXP. Проанализировали 60000 положительных CD8 клеток. Определили количество CD8+IFN-γ+ Т-клеток на 105 CD8+ Т-клеток.
б) Определение HBsAg-специфических IFNγ-образующих CD4+ Т-клеток селезенки
На 14 день после второй иммунизации суспензию, состоящую из одиночных клеток селезенки, активировали ex vivo на протяжении ночи с помощью 1 мкг/мл рекомбинантного HBsAg. Среду для активации использовали в качестве отрицательного контроля. После обработки брефелдином А на протяжении 4 часов поверхности клеточных мембран окрашивали для CD4, фиксировали и делали проницаемыми для последующего внутриклеточного окрашивания IFN-γ. Клетки анализировали с помощью проточного цитометра Beckmann Coulter (FC 500) с применением программного обеспечения CXP. Проанализировали 60000 положительных клеток CD4. Определили количество CD4+IFN-γ+ Т-клеток на 105 CD4+ Т-клеток.
в) Определение количества специфических поверхностных антител вируса гепатита В в мышиной сыворотке
С целью определения количества антител использовали оборудование IMx AUSAB (ELISA - энзим связанный иммуносорбентный метод исследования) с IMx Reader (Диагностика Эбботта). Тестирование проводили в соответствии с рекомендациями производителя.
г) Определение профиля Т-хелперов (Тх) иммунного ответа
Антиген-специфические титры IgG1 и IgG2b определяли с помощью ELISA, а отношение IgG1/IgG2b использовали для определения Тх профиля.
Статистика
Для проведения статистического анализа разницы между двумя группами использовали t-тест (программное обеспечение GraphPad Prism 5).
Результаты
HBsAg-специфический ответ Т-клеток
После 2 иммунизаций наблюдали усиленный HBsAg-специфический ответ CD8+ Т-клеток в группах, к которым применяли по 50 нг и 5 нг авискумина (см. фиг. 4).
Группа, к которой применяли HBsAg с 0,5 нг авискумина, не продемонстрировала усиленного ответа CD8+ по сравнению с группой, к которой применяли один HBsAg (на который у белых мышей наблюдали определенный ответ CD8+). Как и ожидалось, положительный контроль AbISCO продемонстрировал эффективный ответ CD8+. В буферной и адъювантной контрольных группах теневой фенотип не наблюдали (см. фиг. 4).
HBsAg-специфический ответ CD4 Т-клеток наблюдали в группе, получившей HBsAg + 50 нг авискумина (см. фиг. 5).
Эффективность данного CD4+ ответа сравнима с той, что получили с AbISCO. Более низкие дозы авискумина, равно как и буферный и адъювантный контроль, не вызывали HBsAg-специфического ответа CD4 (см. фиг. 5).
Анти-HBsAg гуморальный ответ
Слабый анти-HB гуморальный ответ наблюдали через 2 недели после второй иммунизации в группе, к которой применяли 50 нг авискумина (см. фиг. 6).
Слабый анти-HB гуморальный ответ наблюдали у мышей даже при повторной иммунизации одним HBsAg.
Как и ожидалось, положительный контроль AbISCO вызывает сильный гуморальный ответ, в то время как буферный и адъювантный контроли являются отрицательными.
Профиль Т-хелперов не определили для животных иммунизированных HBsAg по причине слабых или негативных анти-HB титров.
Пример 3. Иммунизация овальбумином (ОВА)
Овальбумин (ОВА) является растворимым мономерным протеином, который может вызывать выработку анти-ОВА антител только в комбинации с адъювантами. Для позитивного контроля использовали AbISCO®-100 (Isconova, Уппсала, Швеция), так как известно, что данный адъювант увеличивает иммунный отклик в этой модели.
Штамм мышей: C57BL/6 (инбредные черные мыши);
2 подкожные иммунизации (1, 21 дни);
5 животных на группу (3 животных для контрольных групп 9 и 10); всего 31 животное.
| Таблица2 | |||
| Группа | ОВА (доза/животное) |
Адъювант (доза/животное) |
Комментарий |
| 8/З | 10 мкг | адъювант AbISCO | положительный контроль |
| 9/И | - | - | физраствор – отрицательный контроль |
| 10/К | - | 50 нг авискумина | адъювант контроль |
| 11/Л | 10 мкг | - | антиген контроль |
| 12/М | 10 мкг | 0,5 нг авискумина | низкая доза |
| 13/Н | 10 мкг | 5 нг авискумина | средняя доза |
| 14/О | 10 мкг | 50 нг авискумина | высокая доза |
Свежие композиции вакцины готовили перед каждой иммунизацией. Авискумин растворяли в физрастворе с добавлением 0,01% Твин 80.
Реагенты
В качестве антигена для композиций (объем 100 мкл на дозу/животное) применяли по 10 мкг обедненного эндотоксинами овальбумина (Hyglos GmbH, Регенсбург, Германия) на животное.
В качестве контрольного теста использовали адъювант AbISCO-100 (Isconova, Уппсала, Швеция) в количестве 12 мкг на дозу. AbISCO-100 является адъювантом, оптимизированным для использования на мышах.
Исследования
а) Определение количества специфических антител ОВА в мышиной сыворотке Alpha Diagnostics International.
Для определения количества анти-ОВА антител у мышей применяли метод ELISA от Alpha Diagnostics International. Тестирование проводили в соответствии с рекомендациями производителя.
б) Определение профиля Т-хелперов (Тх) иммунного ответа
Антиген-специфические титры IgG1 и IgG2b определяли с помощью ELISA, а отношение IgG1/IgG2b использовали для определения Тх профиля.
Статистика
Для проведения статистического анализа разницы между двумя группами использовали t-тест (программное обеспечение GraphPad Prism 5).
Результаты
Анти-ОВА антитела
ОВА-специфический гуморальный ответ наблюдали в группе, к которой применяли 50 нг авискумина (см. фиг. 7). Буферная и адъювантная контрольные группы оказались отрицательными. Контрольная группа AbISCO была положительной (см. фиг. 7).
Определение ОВА-специфических изотипов IgG1 и IgG2b в группах с наибольшим применением авискумина (50 нг) показало, что анти-ОВА антитела подавлялись IgG1. Это служит показателем профиля Тх2 иммунного ответа.
Общие замечания
После первой и второй иммунизации никаких нежелательных явлений у животных не наблюдали.
Вывод
Исследования авискумина с антигенами HBsAg и ОВА показали наличие эффекта от применения адъюванта у мышей после подкожных иммунизаций (на 1 и 21 дни) при более высоких применяемых дозах (5 нг (50 нг/мл) и 50 нг (500 нг/мл)).
Т-клеточный ответ
Ответ CD4+ и CD8+ на HBsAg наблюдали в случае их применения вместе с авискумином (в дозировках 50 нг (500 нг/мл) и 5 нг (50 нг/мл)). В частности, ответу CD4+ Т-клетки в большой мере способствует авискумин.
Так как HBsAg отдельно вызывает определенный ответ CD8+ у белых мышей, как это известно, эффект авискумина как адъюванта усиливает этот исходный уровень.
Эти результаты показывают, что авискумин обладает свойствами адъюванта, в частности в отношении ответа CD4+ Т-хелперов.
Гуморальный иммунный ответ
Анти-HBsAg ответ был отрицательным, исключение составлял случай с одним животным из пяти. Известно, что антитела анти-HBsAg характеризуются медленной кинетикой. В таком случае, животные, у которых не обнаружили антител анти-HBsAg, с течением времени проявили бы положительный эффект. В идеальном варианте антитела определяются через 4 недели после иммунизации. Однако исследования были сфокусированы на ответе Т-клеток и поэтому животные умерщвлялись через 14 дней после иммунизации.
Анти-ОВА гуморальный иммунный ответ наблюдали на момент умерщвления животных, то есть, через 14 дней после иммунизации.
Определение изотипов анти-ОВА антител характеризует профайл Тх2 иммунного ответа. Это согласуется с наблюдаемым индуцированием CD4 Т-клеток.
Обобщающие результаты
Дозы авискумина в 50 нг (500 нг/мл) и 5 нг (50 нг/мл) на животное усиливают специфические ответы CD8 Т-клеток и, в особенности, CD4 Т-клеток на HBsAg, который является сложным липопротеиновым антигеном. Были определены специфические антитела к ОВА, имеющие Тх2 профиль.
Эти данные показывают, что авискумин оказывает эффект адъюванта с усиленным ответом CD4 Т-хелперов.
Дозы авискумина, при которых проявлялся усиленный иммунный ответ на HBsAg, были низкими.
Эффект авискумина как адъюванта, возможно, может быть усиленным изменением дозировок, или бустер-иммунизации, или базовой композиции с целью достижения определенных концентраций антител в каждом случае.
Описание фигур
Фиг. 1 описывает механизм действия неспецифических адъювантов (фигура из Lamine Mbow M et al. 2010 (выше)).
На Фиг. 2 показана секреция ИЛ-1β (пг/мл) из человеческих МКПК авискумином и ЛПС.
На Фиг. 3 показана секреция ИЛ-18 (пг/мл) из человеческих МКПК авискумином и ЛПС.
На Фиг. 4 показаны результаты исследования HBsAg-специфического ответа Т-клеток, при котором измеряли ответ CD8 Т-клеток белых мышей. Повторная стимуляция происходила с участием поверхностного эпитопа ГВ 28-39.
На Фиг. 5 показаны результаты исследования HBsAg-специфического ответа Т-клеток, при котором измеряли ответ CD4 Т-клеток белых мышей. Повторная стимуляция происходила с участием HBsAg.
На Фиг. 6 показаны результаты исследования анти-HBs гуморального иммунного ответа у белых мышей.
На Фиг. 7 показаны результаты исследования анти-ОВА гуморального иммунного ответа у черных мышей штамма C57BL/6.
На Фиг. 8 показана индуцированная авискумином секреция ИЛ-1β (пг/мл) из мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) добровольных доноров после выдерживания на протяжении 24 часов в присутствии ЛПС.
Claims (13)
1. Вакцина, содержащая один антиген или более и, по меньшей мере, один адъювант, отобранный из группы рекомбинантных лектинов омелы белой с аминокислотными последовательностями SEQ ID No. 1 и SEQ ID No. 4, где рекомбинантный лектин омелы белой не имеет какого-либо гликозилирования.
2. Вакцина по п. 1, которая вводится подкожно или внутримышечно.
3. Вакцина по п. 1, в которой полипептид рекомбинантного лектина омелы белой представляет собой А-цепь лектина омелы белой, отобранную из группы аминокислотных последовательностей SEQ ID No. 1.
4. Вакцина по п. 1, в которой полипептид рекомбинантного лектина омелы белой представляет собой В-цепь лектина омелы белой, отобранную из группы аминокислотных последовательностей SEQ ID No. 4.
5. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что вакцина дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель или фармацевтически приемлемый растворитель, в некоторых случаях - вспомогательные вещества и добавки.
6. Лекарственное средство, содержащее вакцину по п. 1, где адъювант присутствует в концентрации от 5 до 600 нг/мл, в частности от 250 до 450 нг/мл, 350 нг/мл, или от 5 до 600 нг/пациент, в частности от 250 до 450 нг/пациент, 350 нг/пациент.
7. Лекарственное средство по п. 6, которое вводится подкожно или внутримышечно.
8. Лекарственное средство по п. 6, в котором полипептид рекомбинантного лектина омелы белой представляет собой А-цепь лектина омелы белой, отобранную из группы аминокислотных последовательностей SEQ ID No. 1.
9. Лекарственное средство по п. 6, в котором полипептид рекомбинантного лектина омелы белой представляет собой В-цепь лектина омелы белой, отобранную из группы аминокислотных последовательностей SEQ ID No. 4.
10. Лекарственное средство по п. 6, отличающееся тем, что вакцина дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель или фармацевтически приемлемый растворитель, в некоторых случаях - вспомогательные вещества и добавки.
11. Композиция для применения в качестве вакцины, содержащая вакцину по п. 1, где адъювант присутствует в концентрации от 5 до 600 нг/мл, в частности от 250 до 450 нг/мл, 350 нг/мл, или от 5 до 600 нг/пациент, в частности от 250 до 450 нг/пациент, 350 нг/пациент.
12. Лекарственное средство для применения в качестве вакцины, содержащее вакцину по п. 1.
13. Композиция для применения в качестве вакцины, содержащая вакцину по п. 1.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE102011118023.4 | 2011-06-27 | ||
| DE102011118023 | 2011-06-27 | ||
| PCT/EP2012/062521 WO2013000980A1 (de) | 2011-06-27 | 2012-06-27 | Rekombinantes mistellektin und dessen verwendung als adjuvans |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2014102348A RU2014102348A (ru) | 2015-08-10 |
| RU2664458C2 true RU2664458C2 (ru) | 2018-08-17 |
Family
ID=46598467
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014102348A RU2664458C2 (ru) | 2011-06-27 | 2012-06-27 | Рекомбинантный лектин омелы белой и его применение в качестве адьюванта |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20140220076A1 (ru) |
| EP (1) | EP2723374B1 (ru) |
| CA (1) | CA2840335C (ru) |
| DK (1) | DK2723374T3 (ru) |
| ES (1) | ES2647447T3 (ru) |
| NO (1) | NO2723374T3 (ru) |
| PL (1) | PL2723374T3 (ru) |
| RU (1) | RU2664458C2 (ru) |
| UA (1) | UA116762C2 (ru) |
| WO (1) | WO2013000980A1 (ru) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117982635B (zh) * | 2024-01-19 | 2025-08-22 | 广东医科大学 | 一种增强树突状细胞疫苗效能的佐剂及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6271368B1 (en) * | 1995-06-26 | 2001-08-07 | Madus Ag Köln | Recombinant mistletoe lectin (rML) |
| US6927207B1 (en) * | 1998-02-03 | 2005-08-09 | Biosyn Arzneimittel Gmbh | Recombinant mistletoe lectines |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20010011330A (ko) * | 1999-07-27 | 2001-02-15 | 김종배 | 한국산 겨우살이 추출물과 이로부터 분리한 단백질 및 상기 단백질에서 분리한 렉틴 |
| JP5072159B2 (ja) * | 1999-10-26 | 2012-11-14 | ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド | 粘膜アジュバントとしての植物レクチン |
-
2012
- 2012-06-27 ES ES12740908.4T patent/ES2647447T3/es active Active
- 2012-06-27 NO NO12740908A patent/NO2723374T3/no unknown
- 2012-06-27 CA CA2840335A patent/CA2840335C/en not_active Expired - Fee Related
- 2012-06-27 EP EP12740908.4A patent/EP2723374B1/de not_active Not-in-force
- 2012-06-27 UA UAA201400711A patent/UA116762C2/uk unknown
- 2012-06-27 PL PL12740908T patent/PL2723374T3/pl unknown
- 2012-06-27 WO PCT/EP2012/062521 patent/WO2013000980A1/de not_active Ceased
- 2012-06-27 US US14/129,441 patent/US20140220076A1/en not_active Abandoned
- 2012-06-27 DK DK12740908.4T patent/DK2723374T3/da active
- 2012-06-27 RU RU2014102348A patent/RU2664458C2/ru not_active Application Discontinuation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6271368B1 (en) * | 1995-06-26 | 2001-08-07 | Madus Ag Köln | Recombinant mistletoe lectin (rML) |
| RU2241750C2 (ru) * | 1995-06-26 | 2004-12-10 | Вискум Аг | Рекомбинантный лектин омелы белой (rml) |
| US6927207B1 (en) * | 1998-02-03 | 2005-08-09 | Biosyn Arzneimittel Gmbh | Recombinant mistletoe lectines |
| US7265217B2 (en) * | 1998-02-03 | 2007-09-04 | Biosyn Arzeimittel Gmbh | Recombinant mistletoe lectin |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| E. C. LAVELLE et al. Mistletoe lectins enhance immune responses to intranasally co-administered herpes simplex virus glycoprotein D2, Immunology 2002, Vol. 107, pp. 268-274. * |
| E. C. LAVELLE et al. The identification of plant lectins with mucosal adjuvant activity, Immunology 2001, Vol.102, pp. 77-86. * |
| E. C. LAVELLE et al. The identification of plant lectins with mucosal adjuvant activity, Immunology 2001, Vol.102, pp. 77-86. E. C. LAVELLE et al. Mistletoe lectins enhance immune responses to intranasally co-administered herpes simplex virus glycoprotein D2, Immunology 2002, Vol. 107, pp. 268-274. SEONG KYU SONG et al. Intranasal immunization with influenza virus and Korean mistletoe lectin C (KML-C) induces heterosubtypic immunity in mice, Vaccine 2007, Vol.25, pp. 6359-6366. * |
| SEONG KYU SONG et al. Intranasal immunization with influenza virus and Korean mistletoe lectin C (KML-C) induces heterosubtypic immunity in mice, Vaccine 2007, Vol.25, pp. 6359-6366. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO2723374T3 (ru) | 2018-02-03 |
| CA2840335A1 (en) | 2013-01-03 |
| ES2647447T3 (es) | 2017-12-21 |
| WO2013000980A1 (de) | 2013-01-03 |
| US20140220076A1 (en) | 2014-08-07 |
| PL2723374T3 (pl) | 2018-02-28 |
| CA2840335C (en) | 2021-02-16 |
| RU2014102348A (ru) | 2015-08-10 |
| UA116762C2 (uk) | 2018-05-10 |
| EP2723374A1 (de) | 2014-04-30 |
| EP2723374B1 (de) | 2017-09-06 |
| DK2723374T3 (da) | 2017-11-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10329338B2 (en) | Nucleic acid construct encoding an agonistic anti-CD40 antibody and a type I interferon | |
| Heffernan et al. | In vivo efficacy of a chitosan/IL-12 adjuvant system for protein-based vaccines | |
| CN116023510B (zh) | 双佐剂重组带状疱疹疫苗 | |
| CN110612118A (zh) | 用于引起针对hbv的免疫应答的病毒样粒子 | |
| US20230143215A1 (en) | Immunization against sars-cov-related diseases | |
| Liu et al. | Rabies virus lipopeptide conjugated to a TLR7 agonist improves the magnitude and quality of the Th1-biased humoral immune response in mice | |
| Chiang et al. | Induction of robust immunity by the emulsification of recombinant lipidated dengue-1 envelope protein domain III | |
| RU2664458C2 (ru) | Рекомбинантный лектин омелы белой и его применение в качестве адьюванта | |
| US20220257752A1 (en) | New use of cyclic dinucleotides | |
| WO2024114650A1 (zh) | 一种重组带状疱疹疫苗及其制备与应用 | |
| CN107693788B (zh) | 一种用于预防或治疗乙型肝炎的药物组合物及其用途 | |
| ES2644824T3 (es) | Método para tratar afecciones relacionadas con IFNalfa | |
| AU2012229234B2 (en) | Vaccine formulation of mannose coated peptide particles | |
| US20220054631A1 (en) | MHC Class I Associated Hepatitis B Peptides | |
| WO2023240278A2 (en) | Uses of glycolipids as a vaccine adjuvant and methods thereof | |
| AU2021306572A1 (en) | CD1 peptide-epitope for use in the treatment of a disease caused by an intracellular pathogen | |
| HK1170669B (en) | Alpha thymosin peptides as vaccine enhancers | |
| HK1170669A1 (zh) | 作为疫苗增强剂的α胸腺素肽 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20170419 |
|
| FZ9A | Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal) |
Effective date: 20171116 |
|
| HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant |