RU2723091C2 - Олигонуклеотидные последовательности, нацеленные на транскрипционный фактор tsc22d4, для лечения резистентности к инсулину - Google Patents
Олигонуклеотидные последовательности, нацеленные на транскрипционный фактор tsc22d4, для лечения резистентности к инсулину Download PDFInfo
- Publication number
- RU2723091C2 RU2723091C2 RU2017131900A RU2017131900A RU2723091C2 RU 2723091 C2 RU2723091 C2 RU 2723091C2 RU 2017131900 A RU2017131900 A RU 2017131900A RU 2017131900 A RU2017131900 A RU 2017131900A RU 2723091 C2 RU2723091 C2 RU 2723091C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tsc22d4
- insulin resistance
- inhibitor
- disease
- recombinant
- Prior art date
Links
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 title claims abstract description 57
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 title claims abstract description 50
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims description 39
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 title description 6
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 title description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 33
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 claims abstract description 33
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 28
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 15
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 9
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 101000640735 Homo sapiens TSC22 domain family protein 4 Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 102100033848 TSC22 domain family protein 4 Human genes 0.000 claims abstract 4
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims abstract 3
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 47
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 45
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 33
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 31
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 208000031773 Insulin resistance syndrome Diseases 0.000 claims description 8
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 7
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 7
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000037213 diet Effects 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 2
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 claims description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 2
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 claims description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract 1
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 19
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 18
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 18
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 17
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 16
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 16
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 16
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 11
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 7
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 108091008010 PERKs Proteins 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 235000020938 metabolic status Nutrition 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102100034174 Eukaryotic translation initiation factor 2-alpha kinase 3 Human genes 0.000 description 4
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 description 4
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 description 4
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- 101150030350 TSC22D4 gene Proteins 0.000 description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000004155 insulin signaling pathway Effects 0.000 description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 4
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000988834 Homo sapiens Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 101000600434 Homo sapiens Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Proteins 0.000 description 3
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 102100037401 Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Human genes 0.000 description 3
- 102100038246 Retinol-binding protein 4 Human genes 0.000 description 3
- 101710137011 Retinol-binding protein 4 Proteins 0.000 description 3
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 3
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 3
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 3
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 3
- 102000056629 human TSC22D4 Human genes 0.000 description 3
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 3
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 3
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004657 Calcium-Calmodulin-Dependent Protein Kinase Type 2 Human genes 0.000 description 2
- 108010003721 Calcium-Calmodulin-Dependent Protein Kinase Type 2 Proteins 0.000 description 2
- 238000001353 Chip-sequencing Methods 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000019058 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Human genes 0.000 description 2
- 108010051975 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Proteins 0.000 description 2
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 2
- 101000777270 Homo sapiens Calcineurin B homologous protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 101000896557 Homo sapiens Eukaryotic translation initiation factor 3 subunit B Proteins 0.000 description 2
- 206010060378 Hyperinsulinaemia Diseases 0.000 description 2
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 2
- 102000019298 Lipocalin Human genes 0.000 description 2
- 108050006654 Lipocalin Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 2
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 2
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 2
- 108010047909 Resistin Proteins 0.000 description 2
- 102000007156 Resistin Human genes 0.000 description 2
- YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N Rosiglitazone Chemical compound C=1C=CC=NC=1N(C)CCOC(C=C1)=CC=C1CC1SC(=O)NC1=O YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 2
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 210000000593 adipose tissue white Anatomy 0.000 description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 230000003451 hyperinsulinaemic effect Effects 0.000 description 2
- 201000008980 hyperinsulinism Diseases 0.000 description 2
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000000859 incretin Substances 0.000 description 2
- MGXWVYUBJRZYPE-YUGYIWNOSA-N incretin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 MGXWVYUBJRZYPE-YUGYIWNOSA-N 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- -1 nucleic acid compound Chemical class 0.000 description 2
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolane-2,4-diol Chemical compound COCCO[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N 0.000 description 1
- STGXGJRRAJKJRG-JDJSBBGDSA-N (3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-methoxyoxolane-2,4-diol Chemical compound CO[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O STGXGJRRAJKJRG-JDJSBBGDSA-N 0.000 description 1
- OGYGFUAIIOPWQD-UHFFFAOYSA-N 1,3-thiazolidine Chemical compound C1CSCN1 OGYGFUAIIOPWQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZOBPZXTWZATXDG-UHFFFAOYSA-N 1,3-thiazolidine-2,4-dione Chemical compound O=C1CSC(=O)N1 ZOBPZXTWZATXDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 2-(2-azaniumylethylamino)acetate Chemical group NCCNCC(O)=O PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- 125000004200 2-methoxyethyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 4-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C1C(C(O)=O)N(C(=O)OC(C)(C)C)CC1NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 UPXRTVAIJMUAQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TYJOQICPGZGYDT-UHFFFAOYSA-N 4-methylsulfonylbenzenesulfonyl chloride Chemical compound CS(=O)(=O)C1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 TYJOQICPGZGYDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940077274 Alpha glucosidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- 125000006374 C2-C10 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 101001059929 Caenorhabditis elegans Forkhead box protein O Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 108010045171 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Proteins 0.000 description 1
- 102000005636 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Human genes 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 1
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 description 1
- 229940124213 Dipeptidyl peptidase 4 (DPP IV) inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 102000007513 Hemoglobin A Human genes 0.000 description 1
- 108010085682 Hemoglobin A Proteins 0.000 description 1
- 101001065832 Homo sapiens Low-density lipoprotein receptor class A domain-containing protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001121920 Homo sapiens Odorant-binding protein 2a Proteins 0.000 description 1
- 101000605630 Homo sapiens Phosphatidylinositol 3-kinase catalytic subunit type 3 Proteins 0.000 description 1
- 206010052341 Impaired insulin secretion Diseases 0.000 description 1
- 229940122355 Insulin sensitizer Drugs 0.000 description 1
- 102100032094 Low-density lipoprotein receptor class A domain-containing protein 4 Human genes 0.000 description 1
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical group C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000640734 Mus musculus TSC22 domain family protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 102100027196 Odorant-binding protein 2a Human genes 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 1
- 108010016731 PPAR gamma Proteins 0.000 description 1
- 102100038825 Peroxisome proliferator-activated receptor gamma Human genes 0.000 description 1
- 102100038329 Phosphatidylinositol 3-kinase catalytic subunit type 3 Human genes 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102000014450 RNA Polymerase III Human genes 0.000 description 1
- 108010078067 RNA Polymerase III Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102100022501 Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 108090000829 Ribosome Inactivating Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 1
- 108091027568 Single-stranded nucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229940100389 Sulfonylurea Drugs 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 229940123464 Thiazolidinedione Drugs 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010066901 Treatment failure Diseases 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000000579 abdominal fat Anatomy 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 101150084233 ago2 gene Proteins 0.000 description 1
- 125000005083 alkoxyalkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003888 alpha glucosidase inhibitor Substances 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005122 aminoalkylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000012867 bioactive agent Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000005860 defense response to virus Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003603 dipeptidyl peptidase IV inhibitor Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 235000005686 eating Nutrition 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- CHNUOJQWGUIOLD-NFZZJPOKSA-N epalrestat Chemical compound C=1C=CC=CC=1\C=C(/C)\C=C1/SC(=S)N(CC(O)=O)C1=O CHNUOJQWGUIOLD-NFZZJPOKSA-N 0.000 description 1
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 101150046266 foxo gene Proteins 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 230000009229 glucose formation Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 125000004366 heterocycloalkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 229960004184 ketamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000006372 lipid accumulation Effects 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000003520 lipogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000003818 metabolic dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N metformin Chemical compound CN(C)C(=N)NC(N)=N XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003105 metformin Drugs 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000011369 optimal treatment Methods 0.000 description 1
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003950 pathogenic mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 238000003068 pathway analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical group 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000030558 renal glucose absorption Effects 0.000 description 1
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004586 rosiglitazone Drugs 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000001073 sample cooling Methods 0.000 description 1
- 230000036186 satiety Effects 0.000 description 1
- 235000019627 satiety Nutrition 0.000 description 1
- 235000021003 saturated fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 229940099456 transforming growth factor beta 1 Drugs 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 229960004175 xylazine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/318—Chemical structure of the backbone where the PO2 is completely replaced, e.g. MMI or formacetal
- C12N2310/3181—Peptide nucleic acid, PNA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
- C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
- C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая ингибитор экспрессии TSC22D4, рекомбинантный вектор экспрессии, рекомбинантную клетку, фармацевтическую композицию, применение вышеуказанного ингибитора, вектора, клетки или композиции для профилактики, регуляции и/или лечения заболевания, выбранного из резистентности к инсулину, гипертонии, дислипидемии, заболевания коронарной артерии, метаболического синдрома и/или сахарного диабета 1 или 2 типа и/или для улучшения чувствительности к инсулину и терапевтический набор для профилактики, регуляции и/или лечения вышеуказанных заболеваний. В одном из вариантов ингибитор экспрессии TSC22D4 представляет собой интерферирующую рибонуклеиновую кислоту, белковую нуклеиновую кислоту или закрытую нуклеиновую кислоту и содержит по меньшей мере одну из следующих последовательностей:
5'-GGACGUGUGUGGAUGUUUAdTdT-3';
5'-GGAUGUUUACGAGAGAGAUdTdT-3';
5'-AGUCCCACCUCAUGUUUGCdTdT-3'.
Изобретение расширяет арсенал средств для ингибирования экспрессии TSC22D4. 6 н. и 7 з.п. ф-лы, 3 ил., 6 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к олигонуклеотидным ингибиторам активности или экспрессии TSC22D4 и их применению для профилактики, лечения и/или регуляции резистентности к инсулину, метаболического синдрома и/или сахарного диабета и/или для усиления чувствительности к инсулину у млекопитающего.
Уровень техники
У людей комбинация избыточного накопления липидов и уменьшения удаления приводит к избыточному весу и связанным с ним сопутствующим заболеваниям, включающим в себя резистентность к инсулину, сердечно-сосудистые осложнения и дислипидемию (Langin D. In and out: adipose tissue lipid turnover in obesity and dyslipidemia. Cell Metab. 2011 Nov 2; 14(5):569-70), которые в настоящее время затрагивают более 1,5 миллиарда человек во всем мире (Finucane MM, et al. National, regional, and global trends in body-mass index since 1980: systematic analysis of health examination surveys and epidemiological studies with 960 country-years and 91 million participants. Lancet. 2011 Feb 12; 377(9765):557-67). Действительно, резистентность к инсулину представляет собой основной компонент так называемого метаболического синдрома, который в конечном итоге приводит к развитию метаболической дисфункции, такой как непереносимость глюкозы, панкреатическая бета-клеточная недостаточность и, в конечном счете, сахарный диабет 2 типа.
Нарушенная секреция инсулина (бета-клетка), увеличенное производство глюкозы в печени (печень) и сниженное периферическое использование глюкозы (мышца) составляют традиционные первичные дефекты, ответственные за развитие и прогрессирование сахарного диабета 2 типа. В настоящее время известно, что бета-клеточная недостаточность, в конечном счете приводящая к уменьшению секреции инсулина, происходит намного раньше в естественном анамнезе сахарного диабета 2 типа, чем предполагалось первоначально. Кроме того, лучшее понимание патофизиологии сахарного диабета 2 типа выявляет другие этиологические механизмы за пределами классической триады, теперь называемой зловещим октетом. В дополнение к бета-клетке, печени и мышцам другие патогенные механизмы включают в себя резистентность адипоцитов к инсулину (повышенный липолиз), сниженную секрецию/чувствительность к инкретину (желудочно-кишечный тракт), повышенную секрецию глюкагона (альфа-клетка), усиленную реабсорбцию глюкозы (почка) и инсулинорезистентность центральной нервной системы, возникающую в результате дисфункции нейромедиатора (мозг). В настоящее время управление сахарным диабетом 2 типа сосредоточено на контроле глюкозы путем снижения содержания глюкозы в крови (при голодании и после приема пищи) и гемоглобина А(1с). Однако цель терапии должна заключаться в том, чтобы задержать прогрессирование заболевания и возможную неэффективность лечения. Лечение должно быть нацелено на известные патогенные нарушения заболевания (т.е. снижение ухудшения функции бета-клеток и повышение чувствительности к инсулину). В последние годы стратегии лечения были сфокусированы на разработке новых терапевтических вариантов, которые влияют на многие из дефектов, способствующих сахарному диабету 2 типа, и которые обеспечивают прочный контроль глюкозы посредством притупления прогрессирования заболевания. Оптимальное лечение сахарного диабета 2 типа должно предусматривать раннее начало терапии с использованием комбинации нескольких лекарственных средств с различными механизмами действия (DeFronzo RA. (Current issues in the treatment of type 2 diabetes. Overview of newer agents: where treatment is going. Am J Med. 2010 Mar; 123(3 Suppl):S38-48).
Особенно нечувствительность основных метаболических органов к действию инсулина, включая в себя печень, скелетную мышцу и жировую ткань, существенно способствует прогрессированию заболевания и конечной потребности в фармакологическом вмешательстве для предотвращения диабетических поздних осложнений. Таким образом, эффективная и безопасная сенсибилизация к инсулину остается привлекательной целью и направлена на противодиабетическую терапию.
Транскрипционные кофакторные комплексы были идентифицированы как важные контрольные точки в координации метаболических программ в различных тканях, включая в себя печень и белую жировую ткань (WAT) (для обзора смотрите Sommerfeld A, Krones-Herzig A, Herzig S. Transcriptional co-factors and hepatic energy metabolism. Mol Cell Endocrinol. 2011 Jan 30; 332(1-2):21-31).
Kester HA, et al. (в: Transforming growth factor-beta-stimulated clone-22 is a member of a family of leucine zipper proteins that can homo- and heterodimerize and has transcriptional repressor activity. J Biol Chem. 1999 Sep 24; 274(39):27439-47) описывают, что стимулированный TGF-бета клон-22 (TSC-22) кодирует содержащий лейциновую «молнию» белок, который представляет собой высококонсервативный во время эволюции.
Кроме того, Jones et al. (в Jones, A., et al., Transforming growth factor-betal Stimulated Clone-22 D4 is a molecular output of hepatic wasting metabolism. EMBO Mol Med. 2013 Feb; 5(2):294-308) описывают это как путь выхода молекулярной кахексии, причем содержание в печени стимулированного трансформирующим фактором роста бета-1 клона транскрипционного фактора (TSC) 22 D4 было увеличено при раковой кахексии. Подражание высоким деградационным уровням TSC22D4 в здоровой печени приводило к ингибированию печеночного высвобождения VLDL и липогенным генам и снижению системных уровней VLDL как в нормальных условиях, так и при диете с высоким содержанием жира. Таким образом, печеночная активность TSC22D4 может представлять собой молекулярное обоснование депривации периферической энергии у пациентов с заболеваниями метаболического истощения, включая в себя раковую кахексию.
Kulozik, Ph., et al. (Hepatic deficiency in transcriptional co-factor TBLI promotes liver steatosis and hypertriglyceridemia. 2011 Cell Metab. 13: 389-400) описывают, что нарушенная печеночная экспрессия транскрипционного кофактора трансдуцин бета-подобного (TBL) 1 белка представляет собой общую черту моно- и мультигенньгх мышиных моделей с жировым перерождением печени. Специфическая для печени абляция экспрессии гена TBL1 у здоровых мышей способствовала гипертриглицеридемии и стеатозу печени при нормальных условиях и диете с большим содержанием жиров. Поскольку было обнаружено, что уровни экспрессии TBL1 также обратно коррелировали с содержанием жира в печени у пациентов-людей, отсутствие активности кофактора TBL1/TBLR1 печени может представлять собой молекулярное обоснование стеатоза печени у субъектов с ожирением и метаболическим синдромом.
Berriel Diaz, М., et al. (Nuclear receptor co-factor RIP140 controls lipid metabolism during wasting in mice. 2008. Hepatology 48: 782-791) описывают, что посредством предотвращения мобилизации печеночных хранилищ TG, индукция RIP 140 в печени обеспечивает молекулярное обоснование стеатоза печени при голодании, сепсисе или истощении при злокачественной опухоли. Таким образом, ингибирование печеночной транскрипционной активности RIP 140 может обеспечить привлекательную вспомогательную схему при лечении этих состояний.
Farese et al. (in: The problem of establishing relationships between hepatic steatosis and hepatic insulin resistance. Cell Metab. 2012 May 2; 15(5):570-3) описывают, что чрезмерное отложение жира в печени (печеночный стеатоз) часто сопровождается печеночной резистентностью к инсулину.
Основные классы противодиабетических и/или сенсибилизирующих к инсулину лекарственных средств включают в себя сульфонилмочевины, метформин, тиазолидиновые дионы, ингибиторы альфа-глюкозидазы, инкретиновые миметики и ингибиторы дипептидилпептидазы 4, все из которых связаны с серьезными ограничениями (для обзора смотрите Moller, Metabolic disease drug discovery- "hitting the target" is easier said than done. Cell Metab. 2012 Jan 4; 15(1): 19-24).
Несмотря на ключевую роль инсулинорезистентности в патогенезе сахарного диабета 2 типа, эффективных и безопасных сенсибилизаторов к инсулину все еще не хватает. Действительно, применяемые в настоящее время лекарственные средства семейства тиазолидиндионов проявляют умеренный профиль эффективности и сопровождаются существенными побочными эффектами, включающими в себя увеличение массы, повышенный риск сердечной недостаточности, возможный повышенный риск развития злокачественной опухоли мочевого пузыря и повышенный риск инфаркта миокарда, например, что привело к недавнему выводу с рынка росиглитазона.
В публикации международной заявки WO 2013/076501 раскрыт способ скрининга для идентификации средств, применимых при лечении и/или профилактике заболевания, связанного с резистентностью к инсулину и/или непереносимостью глюкозы, который предусматривает стадию исследования способности тестируемого средства ингибировать сигнальный путь Vps34 и/или сигнальный путь Rholota3Kappa-02beta. Аналогично, в публикации международной заявки WO 2005/059564 раскрыт способ сканирования молекул, которые модулируют активность ретинол-связывающего белка 4 (RBP4), а также описано их применение для лечения резистентности к инсулину. Также описаны способы диагностики резистентности к инсулину и связанные с ней состояния путем обнаружения модуляции активности RBP4.
Публикация международной заявки WO 2012/158123 относится к способу лечения или предотвращения синдрома резистентности к инсулину в организме животного путем введения ингибитора гена подобной РНК-зависимой проитеникинзе киназы эндоплазматического ретикулума (PERK) или его функционального варианта, или ингибитора белка PERK или его функционального варианта, или способу снижения активности транскрипционных факторов семейства FOXO (Foxo 1, 3а, 4 и 6) путем введения ингибитора гена подобной РНК-зависимой проитеникинзе киназы эндоплазматического ретикулума (PERK) или его функционального варианта или ингибитора белка PERK или его функционального варианта.
Публикация международной заявки WO 2014/202602, как правило, относится к модуляторам, в частности ингибиторам, активности или экспрессии TSC22D4 и их применению для профилактики, лечения и/или регуляции резистентности к инсулину, метаболического синдрома и/или сахарного диабета и/или для усиления чувствительности к инсулину у млекопитающего. Публикация международной заявки WO 2014/202602 относится также к способам скрининга для идентификации этих модуляторов.
Было доказано, что экспериментальный нокдаун с помощью вирусной доставки направленных на TSC22D4 конструкций кшРНК или миРНК, эффективно улучшает метаболический статус диабетических животных, конструкции миРНК, подходящие для эффективного и специфического нокдауна TSC22D4 у разных видов при доставке различными технологиями, еще не идентифицированы.
Принимая во внимание вышеописанные недостатки предшествующего уровня техники, цель настоящего изобретения заключается в предоставлении новой терапевтической стратегии для предотвращения, лечения и/или регулирования резистентности к инсулину, метаболического синдрома и/или сахарного диабета и/или для усиления чувствительности к инсулину.
Согласно первому аспекту настоящего изобретения вышеуказанная цель решается путем обеспечения ингибитора экспрессии и/или биологической активности TSC22D4, выбранного из олигонуклеотида, который представляет собой интерферирующую рибонуклеиновую кислоту, PNA (белковая нуклеиновая кислота) или LNA (закрытая нуклеиновая кислота), содержащую по меньшей мере одну из следующих последовательность: 5'-GGACGUGUGUGGAUGUUUAdTdT-3' (SEQ ID No. 1); 5'-GGAUGUUUACGAGAGAGAUdTdT-3' (SEQ ID No. 2); 5'-AGUCCCACCUCAUGUUUGCdTdT-3' (SEQ ID No. 3); их антисмысловую последовательность или их функциональные варианты.
mhD4-siRNAl: (NM_ 030935.3_ миРНК_ 1024; открытая рамка считывания)
Смысловая: 5'- GGACGUGUGUGGAUGUUUAdTdT-3' (SEQ ID No. 1);
Антисмысловая: 5'- UAAACAUCCACACACGUCCdTdT-3' (SEQ ID No. 4);
GC: 47% (без TT-липкого конца)
Недавно исследователи показали, что стимулированный трансформирующим фактором роста бета1 клон транскрипционного регулятора 22 D4 (TSC22D4), контролирует печеночную и системную чувствительность к инсулину. Специфическая для печени потеря TSC22D4 значительно улучшала толерантность к глюкозе и чувствительность к инсулину и противодействовала гиперинсулинемии у мышей дикого типа. Анализ ChlP-Seq цистрона TSC22D4 в сочетании с высокопроизводительными исследованиями транскриптома TSC22D4 у здоровых животных показал, что основные узлы пути передачи сигналов инсулина были прямо или косвенно нацелены на TSC22D4, в первую очередь на липокалин 13.
Действительно, понижающая регуляция или сверхэкспрессия TSC22D4 в первичных мышиных гепатоцитах, а также у мышей дикого типа приводила к активации или деактиванции пути сигнализации инсулина, как определено фосфорилированием киназы Akt/PKB на Ser473 и GSK3beta в Ser9, в ответ на острое воздействие инсулина, соответственно. Интригующе, инактивация в печени TSC22D4 у мышей db/db с сахарным диабетом улучшала непереносимость глюкозы и резистентность к инсулину у этих животных и нормализовала содержание глюкозы в крови до почти здорового уровня. В сопоставлении с общим улучшением метаболического статуса у диабетических животных циркулирующие уровни провоспалительных цитокинов и резистина были значительно ниже у мышей со специфическим для печени дефицитом TSC22D4.
Хотя было доказано, что экспериментальный нокдаун с помощью вирусной доставки направленных на TSC22D4 конструкций кшРНК или миРНК эффективно улучшает метаболический статус диабетических животных, конструкции миРНК, подходящие для эффективного и специфического нокдауна TSC22D4 у разных видов при доставке различными технологиями еще не идентифицированы.
Инактивация TSC22D4 в клетках гепатомы не увеличивала клеточный рост, а скорее уменьшала пролиферацию, указывая на то, что функция сенсибилизации к инсулину TSC22D4 не приводит к повышенной восприимчивости к злокачественной опухоли в пораженных клетках/органах. Кроме того, инактивация в печени TSC22D4 также не вызывала гипогликемии.
«Ингибитор» представляет собой вещество, которое может снижать эффективность катализатора в катализируемой реакции (либо небиологического катализатора, либо фермента). Указанный в настоящем документе ингибитор может снижать эффективность активности фермента; также указанный в настоящем документе ингибитор может снижать эффективность экспрессии фермента. В контексте настоящего изобретения предпочтительный ингибитор представляет собой олигонуклеотид.
Термин «олигонуклеотид», как правило, относится к интерферирующей рибонуклеиновой кислоте (иРНК) или белковой нуклеиновой кислоте (PNA), или к закрытой нуклеиновой кислоте (LNA). Термин «олигонуклеотид», как правило, относится к одноцепочечному нуклеотидному полимеру, состоящему более чем из 19 нуклеотидных субъединиц, ковалентно соединенных вместе. Предпочтительно присутствуют от 19 до 100 нуклеотидных единиц, наиболее предпочтительно от 19 до 50 единиц нуклеотидов соединены вместе, как также объясняется дополнительно ниже.
Сахарные группы нуклеотидных субъединиц могут представлять собой рибозу, дезоксирибозу или модифицированные производные, такие как 2'-O-метилрибоза. Нуклеотидные субъединицы олигонуклеотида могут быть соединены фосфодиэфирными связями, фосфоротиоатными связями, метилфосфонатными связями или другими редкими или неприродными связями, которые не препятствуют гибридизации олигонуклеотида. Кроме того, олигонуклеотид может содержать редкие нуклеотиды или ненуклеотидные фрагменты.
Термин «олигонуклеотид» также может относиться, в контексте спецификации, к аналогу известных в настоящей области техники нуклеиновых кислот, например, закрытой нуклеиновой кислоте (LNA), или их смеси. Термин «олигонуклеотид» включает в себя олигонуклеотиды, состоящие из встречающихся в природе нуклеотидных оснований, сахаров и межнуклеозидных (остовных) связей, а также олигонуклеотидов, содержащих не встречающиеся в природе участки, которые функционируют аналогично или с определенными улучшенными функциями. Полностью или частично модифицированный или замещенный олигонуклеотид часто предпочтителен по сравнению с природными формами из-за нескольких желательных свойств таких олигонуклеотидов, таких как, например, способность проникать в клеточную мембрану, хорошая устойчивость к вне- и внутриклеточным нуклеазам, высокая аффинность и специфичность к мишени нуклеиновой кислоты. Способы модификации олигонуклеотидов, таким образом, известны в настоящей области техники.
В некоторых олигонуклеотидах, иногда называемых олигонуклеотидными миметиками, как сахара, так и межнуклеозидная связь, то есть остов, нуклеотидных единиц заменяются новыми группами. Единицы оснований поддерживаются для гибридизации с соответствующим соединением-мишенью нуклеиновой кислоты. Одно такое олигомерное соединение, олигонуклеотидный миметик, который, как было показано, обладает превосходными свойствами гибридизации, упоминается как белковая нуклеиновая кислота (PNA). В соединениях PNA сахарный остов олигонуклеотида заменяют амидосодержащим остовом, в частности аминоэтилглициновым остовом. Нуклеотидные основания сохраняются и непосредственно или косвенно связываются с атомами азота амидной части остова.
Дополнительная модификация включает в себя закрытые нуклеиновые кислоты (LNA), в которых 2'-гидроксильная группа связана с 3' или 4' атомом углерода сахарного кольца, тем самым образуя бициклический сахарный фрагмент. Связывание представляет собой предпочтительно метиленовую (-СН2-)n-группу, соединяющую 2' атом кислорода и 4' атом углерода, где n равно 1 или 2. Термин «LNA», как правило, относится к нуклеотиду, содержащему один бициклический нуклеозидный аналог, также называемый мономером LNA, или олигонуклеотиду, содержащему один или несколько бициклических нуклеозидных аналогов.
Предпочтительным является ингибитор в соответствии с настоящим изобретением, где интерферирующая рибонуклеиновая кислота представляет собой малую интерферирующую рибонуклеиновую кислоту (миРНК) или короткую шпилечную рибонуклеиновую кислоту (кшРНК) или микрорибонуклеиновую кислоту (микроРНК) или их комбинации.
Кроме того, предпочтительным является ингибитор в соответствии с настоящим изобретением, причем миРНК составляет в длину от 19 до 30 нуклеотидов.
Согласно одному аспекту биоактивное средство использует «РНК-интерференцию (RNAi)». RNAi представляет собой процесс специфического к последовательности посттранскрипционного сайленсинга гена, инициированного двухцепочечной РНК (дцРНК) или миРНК. RNAi наблюдается у ряда организмов, таких как дрозофила, нематоды, грибы и растения и, как полагают, участвует в противовирусной защите, модуляции активности транспонов и регуляции экспрессии генов. Во время RNAi дцРНК или миРНК индуцирует деградирование мРНК-мишени с последующим специфическим к последовательности ингибированием экспрессии гена. Используемый в настоящем документе термин «малая интерферирующая РНК» (миРНК) представляет собой РНК-дуплекс нуклеотидов, который нацелен на ген TSC22D4. «РНК-дуплекс» относится к структуре, образованной комплементарным спариванием между двумя областями молекулы РНК. миРНК «нацеливается» на ген в том плане, что нуклеотидная последовательность дуплексной части миРНК комплементарна нуклеотидной последовательности гена-мишени. Согласно некоторым вариантам осуществления длина дуплекса миРНК составляет менее 30 нуклеотидов. Согласно некоторым вариантам осуществления дуплекс может составлять в длину 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 или 10 нуклеотидов. Согласно некоторым вариантам осуществления длина дуплекса составляет 19-25 нуклеотидов. РНК-дуплексная часть миРНК может быть частью структуры шпильки. В дополнение к дуплексной части структура шпильки может содержать петлевую часть, расположенную между двумя последовательностями, которые образуют дуплекс. Петля может варьировать по длине. Согласно некоторым вариантам осуществления петля составляет в длину 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 нуклеотидов. Структура шпильки также может содержать 3' и/или 5' липкие концы. Согласно некоторым вариантам осуществления липкий конец представляют собой 3' и/или 5' липкий конец длиной 0, 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидов. миРНК может кодироваться последовательностью нуклеиновой кислоты, а последовательность нуклеиновой кислоты может также включать в себя промотор. Последовательность нуклеиновой кислоты может также включать в себя сигнал полиаденилирования. Согласно некоторым вариантам осуществления сигнал полиаденилирования представляет собой синтетический минимальный сигнал полиаденилирования.
Используемый в настоящем документе термин «миРНК» относится к рибонуклеиновой кислоте (РНК) или аналогу РНК, содержащему от приблизительно 19 до 50 нуклеотидов (или нуклеотидных аналогов), способных направлять или опосредовать путь интерференции РНК. Эти молекулы могут варьировать по длине и могут содержать разные степени комплементарности к их целевой информационной РНК (мРНК) в антисмысловой цепи. Термин «миРНК» включает в себя дуплексы двух отдельных цепей, то есть двухцепочечную РНК, а также отдельные цепи, которые могут образовывать структуры шпильки, состоящие из дуплексной области. миРНК может составлять в длину от приблизительно 19 до 50 нуклеотидов или от приблизительно 25 до 50 нуклеотидов, или от приблизительно 30 до 50 нуклеотидов, или от приблизительно 35 до 50 нуклеотидов, или от приблизительно 40 до 50 нуклеотидов. Согласно одному варианту осуществления миРНК составляет в длину от 19 до 30 нуклеотидов.
Применение миРНК для снижения активности своей целевой мРНК известно в настоящей области техники. Согласно некоторым вариантам осуществления деградация мРНК происходит, когда антисмысловая цепь или направляющая цепь миРНК направляет индуцированный РНК комплекс сайленсинга (RISC), который содержит РНК-эндонуклеазу Ago2, чтобы расщепить свою мРНК-мишень, несущую комплементарную последовательность. Соответственно, миРНК может быть комплементарной любой части разной длины на гене PERK. миРНК также может быть комплементарной смысловой цепи и/или антисмысловой цепи гена TSC22D4. Соответственно, обработка миРНК может быть использована для сайленсинга гена TSC22D4, тем самым истощая белок TSC22D4 на последующих стадиях.
Используемый в настоящем документе термин «кшРНК» относится к мономолекулярной РНК, которая способна к выполнению RNAi, и которая содержит «сопровождающую» цепь, петлю и направляющую цепь. Сопровождающая и направляющая цепи могут быть по существу комплементарны друг другу. Термин «кшРНК» может также включать в себя нуклеиновые кислоты, которые содержат фрагменты, отличные от рибонуклеотидных фрагментов, включая в себя, без ограничения, модифицированные нуклеотиды, модифицированные межнуклеотидные связи, ненуклеотиды, дезоксинуклеотиды и аналоги нуклеотидов.
миРНК снижают активность их целевых мРНК. Термин «миРНК», как правило, относится к одноцепочечной молекуле, но согласно конкретным вариантам осуществления может также охватывать область или дополнительную цепь, которая частично (от 10% до 50% комплементарной по длине цепи), по существу (более 50%, но менее 100% комплементарной по длине цепи) или полностью комплементарна другой области одной и той же одноцепочечной молекулы или другой нуклеиновой кислоты. Таким образом, нуклеиновые кислоты могут охватывать молекулу, которая содержит одну или несколько комплементарных или самокомплементарных цепей или «комплементов» определенной последовательности, содержащей молекулу. Например, миРНК-предшественник может содержать самокомплементарную область, которая комплементарна до 100%. Зонды миРНК или нуклеиновые кислоты по настоящему изобретению могут включать в себя или могут быть комплементарны полностью или по меньшей мере на 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% по отношению к своей мишени.
Наиболее предпочтительным является ингибитор в соответствии с настоящим изобретением, в котором миРНК состоит из последовательности: в соответствии с ее антисмысловой последовательностью SEQ ID No. 1-3.
Также предпочтительным является ингибитор в соответствии с настоящим изобретением, причем его функциональный вариант содержит по меньшей мере один модифицированный или замещенный нуклеотид. Термин «функциональный вариант» также включает в себя фрагмент, вариант, основанный на коде дегенеративной нуклеиновой кислоты или химическом производном. Функциональный вариант может содержать консервативные изменения, причем замещенная нуклеиновая кислота характеризуется сходными структурными или химическими свойствами с замещенной нуклеиновой кислотой. Функциональный вариант может также содержать делецию и/или вставку одной или нескольких нуклеиновых кислот. Понятно, что функциональный вариант по меньшей мере частично сохраняет свою биологическую активность, например, функции гена TSC22D4, или даже проявляет улучшенную биологическую активность.
Примеры модифицированных олигонуклеотидов включают в себя, без ограничения, олигонуклеотиды с фосфоротиоатными остовами (смотрите выше) и олигонуклеозиды с гетероатомными остовами и, в частности, CH2-NH-O-CH2-, -CH2-N(CH3)-O-CH2-, -CH2-O-N(CH3)-CH2-, -CH2-N(CH3)-N(CH3)-CH2- и -O-N(CH3)-CH2-СН2- [причем нативный фосфодиэфирный остов представлен в виде -О-Р-О-СН2-]. Также применимы олигонуклеотиды, содержащие морфолиновые остовные структуры. Модифицированные олигонуклеотиды, используемые в качестве интерферирующих рибонуклеиновых кислот, также могут содержать один или несколько замещенных фрагментов сахара. Предпочтительные олигонуклеотиды содержат одно из следующего в положении 2': ОН; F; О-, S- или N-алкил; О-, S- или N-алкенил; О-, S- или N-алкинил; или О-алкил-О-алкил, где алкил, алкенил и алкинил могут быть замещенными или незамещенными C1-С10-алкилом или С2-С10-алкенилом и алкинилом. Конкретные примеры включают в себя, без ограничения, O[(СН2)nO]mCH3, O(СН2)nOCH3, O(CH2)nNH2, O(СН2)nCH3, O(CH2)nONH2 и O(CH2)nON[(CH2)nCH3)]2, где n и m составляют от 1 до 10. Другие иллюстративные олигонуклеотиды содержат одно из следующего в положении 2': C1-С10 низший алкил, замещенный низший алкил, алкенил, алкинил, алкарил, аралкил, О-алкарил или О-аралкил, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, гетероциклоалкенил, гетероциклоалкарил, аминоалкиламино, полиалкиламино, замещенный силил, расщеплющую РНК группу, репортерную группу, интеркалатор, группу для улучшения фармакокинетических свойств олигонуклеотида или группу для улучшения фармакодинамических свойств олигонуклеотида и других заместителей, характеризующихся сходными свойствами. Одна иллюстративная модификация включает в себя 2'-метоксиэтокси (2'-O-СН2СН2ОСН3, также известный как 2'-O-(2-метоксиэтил) или 2'-МОЕ), то есть алкоксиалкоксигруппу.
Другой аспект затем относится к рекомбинантному вектору, содержащему олигонуклеотид в соответствии с настоящим изобретением. Как правило, олигонуклеотид вводят в вектор экспрессии, такой как плазмида, для экспрессии. Если необходимо, олигонуклеотид может быть связан с соответствующими транскрипционными и трансляционными регуляторными контрольными нуклеотидными последовательностями, распознаваемыми желаемым хозяином, хотя такие контроли, как правило, доступны в векторе экспрессии. Затем вектор вводится в хозяина посредством стандартных техник.
Векторы, которые экспрессируют миРНК в клетках млекопитающих, как правило, используют промотор РНК-полимеразы III, чтобы управлять экспрессией короткой шпилечной РНК, которая имитирует структуру миРНК. Вставка, которая кодирует эту шпильку, предназначена для двух инвертированных повторов, разделенных короткой спейсерной последовательностью. Один инвертированный повтор комплементарен мРНК, на которую нацелена миРНК. Строка тимидинов, добавленных к 3'-концу, служит в качестве сайта терминации транскрипции pol III. Сразу внутри клетки вектор конститутивно экспрессирует РНК шпильки, которая индуцирует сайленсинг гена-мишени.
Другие подходящие векторы включают в себя вирусные векторы, такие как аденовирусные, ретровирусные и лентивирусные векторы или соответствующие системы экспрессии (смотрите, например, Catanotto, D. et al. (2002) Functional siRNA expression from transfected PCR products. RNA 8, 1454-1460; Barton, G.M. et al. (2002) Retroviral delivery of small interfering RNA into primary cells. Proc Natl Acad Sci USA. 99(23): 14943-5. Abbas-Terki, T. et al.(2002) Lentiviral-mediated RNA interference. Hum.Gene Ther. 13, 2197-2201, and Xia, H. et al. (2002) siRNA-mediate gene silencing in vitro and in vivo. Nat. Biotechnol. 20, 1006-1010).
Как правило, не все хозяева будут преобразованы вектором. Следовательно, необходимо будет выбрать трансформированные клетки-хозяева. Одна техника выбора предусматривает включение в вектор экспрессии последовательности ДНК с любыми необходимыми контрольными элементами, которая кодирует селективный признак в трансформированной клетке, такой как устойчивость к антибиотикам. Альтернативно, ген для такого селективного признака может быть на другом векторе, который используется для совместной трансформации желаемой клетки-хозяина. Затем клетки-хозяева, которые были трансформированы олигонуклеотидом по настоящему изобретению, культивируют в течение достаточного времени и в подходящих условиях, известных специалистам в настоящей области техники, с учетом раскрытых в настоящем документе принципов, позволяющих экспрессию полипептида, который затем может быть восстановлен.
Другие примеры можно найти в литературе, например, в публикации Yang J. et al. (Design, preparation and application of nucleic acid delivery carriers." Biotechnol Adv. 2014 Jul-Aug; 32(4):804-17).
Каждый из классов нуклеиновых кислот, как описано в настоящем документе (например, олигонуклеотиды и/или векторы), может быть введен в клетки несколькими способами. При опосредованной липидом трансфекции клетки захватывают нековалентные комплексы между нуклеиновой кислотой и липидным или полимерным реагентом посредством эндоцитоза. Электропорация использует короткий электрический импульс, чтобы вызвать разрушения или отверстия в плазматической мембране клеток, через которые поступает нуклеиновая кислота. Оба этих способа успешно доставляют любую из нуклеиновых кислот RNAi, кроме вирусных векторов. Доставка вирусных векторов происходит только путем заражения клеток соответствующим вирусом, как правило, использующим вспомогательные вирусы. Инфекция нужной клеточной линии вирусом вводит миРНК или кшРНК и производит нокдаун генной экспрессии.
Другой аспект настоящего изобретения затем относится к рекомбинантной клетке, предпочтительно к рекомбинантной гепатоцитарной клетке, содержащей олигонуклеотид в соответствии с настоящим изобретением или рекомбинантный вектор в соответствии с настоящим изобретением. «Клетка» согласно настоящему изобретению может представлять собой прокариотическую или эукариотическую клетку. «Клетку» согласно настоящему изобретению предпочтительно и без ограничения выбирают из клеток печени. Клетки млекопитающих могут быть предпочтительно выбраны из клеток человека, кролика, мыши или крысы. Предпочтительно клетка представляет собой клетку человека, например, гепатоцитарную клетку. Термин «клетка» также включает в себя клетки животной модели. Кроме того, клетка может представлять собой часть тканевой культуры.
Задача настоящего изобретения также решается с помощью способа получения фармацевтической композиции, содержащей стадии составления указанного по меньшей мере одного ингибитора в соответствии с настоящим изобретением по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом. Носитель и/или вспомогательное вещество фармацевтической композиции должны быть «приемлемыми» в том смысле, что они должны быть совместимы с другими ингредиентами состава и не быть вредными для реципиента.
Другой аспект настоящего изобретения затем относится к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере один из ингибиторов в соответствии с настоящим изобретением, рекомбинантный вектор в соответствии с настоящим изобретением и рекомбинантную клетку в соответствии с настоящим изобретением вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Предпочтительной является фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением, причем указанная фармацевтическая композиция предназначена для введения пероральным, ректальным, трансмукозальным, трансдермальным, внутрикишечным, парентеральным, внутримышечным, интратекальным, прямо интравентрикулярным, внутривенным, внутрибрюшинным, интраназальным, внутриглазным или подкожным способом.
Другой аспект настоящего изобретения затем относится к ингибитору в соответствии с настоящим изобретением, вектору экспрессии в соответствии с настоящим изобретением, рекомбинантной клетке в соответствии с настоящим изобретением или фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением для применения при профилактике, регуляции и/или лечения заболеваний.
Синдром резистентности к инсулину составляет широкий клинический спектр и определяется как любые аномалии, связанные с резистентностью к инсулину. Нарушения, такие как резистентность к инсулину, сахарный диабет, гипертония, дислипидемия и сердечно-сосудистые заболевания, представляют собой синдром инсулинорезистентности.
Синдром инсулинорезистентности может представлять собой индуцированную диетой инсулинорезистентность и/или индуцированную ожирением инсулинорезистентность. Индуцированная диетой инсулинорезистентность означает, что резистентность к инсулину индуцируется диетой с высоким содержанием насыщенных жиров и углеводов. Индуцированная ожирением инсулинорезистентность означает, что резистентность к инсулину индуцируется генетической предрасположенностью к ожирению или ожирением, которое обусловлено диетическими привычками.
Таким образом, другой аспект настоящего изобретения относится к ингибитору в соответствии с настоящим изобретением, вектору экспрессии в соответствии с настоящим изобретением, рекомбинантной клетке в соответствии с настоящим изобретением или фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением для применения в профилактике, регуляции и/или лечении заболевания, которое выбрано из резистентности к инсулину, гипертонии, дислипидемии, заболевания коронарной артерии, метаболического синдрома и/или сахарного диабета 1 или 2 типа и/или для улучшения чувствительности к инсулину, такого как, например, чувствительность к инсулину в контексте опухолевого заболевания. Предпочтительно синдром инсулинорезистентности представляет собой индуцированную диетой инсулинорезистентность и/или индуцированную ожирением инсулинорезистентность.
Объект дополнительно решается с помощью способа лечения и/или профилактики заболевания, выбранного из резистентности к инсулину, метаболического синдрома и/или сахарного диабета у нуждающегося в этом субъекта, предусматривающего стадию введения эффективного количества ингибитора в соответствии с настоящим изобретением или фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением нуждающемуся в этом пациенту.
Раскрытые способы могут быть использованы для лечения любого из следующих состояний, которые вызваны синдромом инсулинорезистентности: резистентность к инсулину, гипертония, дислипидемия, сахарный диабет 2 типа или заболевание коронарной артерии.
Термин «профилактика» в контексте настоящего изобретения следует понимать как медицинское вмешательство, целью которого является предотвращение возникновения негативного события, которое, скорее всего, приведет к ухудшению состояния пациента, характеризующегося наличием заболевания, или к травме или смерти здорового и/или больного субъекта. «Нуждающийся в этом пациент» может представлять собой, без ограничения, любое животное или человека, страдающего от заболевания, связанного с синдромом инсулинорезистентности, особенно резистентности к инсулину, гипертонии, дислипидемии, сахарного диабета 2 типа или ишемической болезни сердца. Предпочтительно, нуждающийся в этом пациент представляет собой человека.
Объект дополнительно решается терапевтическим набором, содержащим ингибитор в соответствии с настоящим изобретением, рекомбинантный вектор в соответствии с настоящим изобретением, рекомбинантную клетку в соответствии с настоящим изобретением или фармацевтическую композицию в соответствии с настоящим изобретением, необязательно вместе с подходящими буферами и вспомогательными веществами, а также инструкции по использованию.
Объект дополнительно решается терапевтическим набором в соответствии с настоящим изобретением для применения в профилактике, регуляции и/или лечении заболевания, причем указанное заболевание выбрано из резистентности к инсулину, гипертонии, дислипидемии, заболевания коронарной артерии, метаболического синдрома и/или сахарного диабета 1 или 2 типа и/или для улучшения чувствительности к инсулину, например, чувствительности к инсулину в контексте опухолевого заболевания.
Недавно исследователи показали, что стимулированный трансформирующим фактором роста бета 1 клон транскрипционного регулятора 22 D4 (TSC22D4) контролирует печеночную и системную чувствительность к инсулину. Специфическая потеря в печени TSC22D4 значительно улучшала толерантность к глюкозе и чувствительность к инсулину и противодействовала гиперинсулинемии у мышей дикого типа. Анализ ChlP-Seq цистрона TSC22D4 в сочетании с исследованиями транскриптома-мишени TSC22D4 с высокой пропускной способностью у здоровых животных показал, что основные узлы пути сигнализации инсулина были прямо или косвенно нацелены на TSC22D4, в первую очередь на липокалин 13. Действительно, понижающая регуляция или сверхэкспрессия TSC22D4 в первичных мышиных гепатоцитах, а также у мышей дикого типа приводили к активации или инактивации внутриклеточного пути сигнализации инсулина, как определено фосфорилированием киназы Akt/PKB в Ser473 и GSK3beta в Ser9, в ответ на острое воздействие инсулином, соответственно.
Интригующе, инактивация в печени TSC22D4 у мышей db/db с сахарным диабетом улучшала интолерантность к глюкозе и резистентность к инсулину у этих животных и нормализовала содержание глюкозы в крови до почти здорового уровня. В сопоставлении с общим улучшением метаболического статуса у диабетических животных циркулирующие уровни провоспалительных цитокинов и резистина были значительно ниже у мышей со специфичным для печени дефицитом TSC22D4.
Инактивация TSC22D4 в клетках гепатомы не увеличивала клеточный рост, а скорее уменьшала пролиферацию, указывая на то, что функция сенсибилизации TSC22D4 к инсулину не приводит к повышенной восприимчивости к злокачественной опухоли в пораженных клетках. Кроме того, инактивация в печени TSC22D4 также не вызывала гипогликемии.
Хотя было доказано, что экспериментальный нокдаун с помощью вирусной доставки направленных TSC22D4 конструкций кшРНК или миРНК эффективно улучшает метаболический статус диабетических животных, конструкции миРНК, подходящие для эффективного и специфического нокдауна TSC22D4 у разных видов при доставке различными технологиями еще не определены. Чтобы преодолеть эту проблему, исследователи идентифицировали, функционально исследовали и проверяли различные миРНК, направленные против последовательности мРНК TSC22D4, в исследованиях нокдауна in vitro с использованием мышиных Нера1.6, а также человеческих клеток гепатомы Huh7, как описано в настоящем документе.
Следующие фигуры, последовательности и примеры служат просто для иллюстрации настоящего изобретения и не должны толковаться как ограничивающие объем настоящего изобретения конкретными вариантами осуществления настоящего изобретения, описанными в примерах. Для целей настоящего изобретения все приведенные в тексте ссылки полностью включены в настоящий документ.
На фиг. 1 показана эффективность нокдауна выбранных направленных на TSC22D4 миРНК с цветовой индикацией в клетках мышиной гепатомы. Показано относительное содержание мРНК. Все остальные исследуемые последовательности миРНК не показали значительного нокдауна TSC22D4 в этих экспериментах (не показаны).
На фиг. 2 показана эффективность нокдауна mhD4-siRNA1 при трансфекции в мышиные клетки гепатомы Нера1-6 в отношении мышиного TSC22D4. Показано относительное содержание мРНК.
На фиг. 3 показана эффективность нокдауна mhD4-siRNA1 при трансфекции в клетки гепатомы человека Huh7 по отношению к человеческому TSC22D4. Показано относительное содержание мРНК.
Последовательности с ID NO: 1-6 показывают олигонуклеотидные последовательности в соответствии с настоящим изобретением.
ПРИМЕРЫ
Рекомбинантные вирусы
Аденовирусы, экспрессирующие TSC22D4 или неспецифическую кшРНК под контролем промотора U6, или кДНК TSC22D4 под контролем промотора CMV клонировали с использованием экспрессионной системы RNAi Adenoviral BLOCK-iT (Invitrogen, Karlsruhe, Германия). Вирусы очищали способом с помощью хлорида цезия и диализовали против забуференного фосфатом солевого буфера, содержащего 10% глицерин перед инъекцией животным, как описано ранее (Herzig S, Hedrick S, Morantte I, Koo SH, Galimi F, Montminy M. CREB controls hepatic lipid metabolism through nuclear hormone receptor PPAR-gamma. Nature. 2003; 426: 190-193. Herzig S, Long F, Jhala US, Hedrick S, Quinn R, Bauer A, Rudolph D, Yoon C, Puigserver P, Spiegelman B, et al. CREB regulates hepatic gluconeogenesis through the coactivator PGC-1. Nature. 2001; 413: 179-183). Кодирующий AAV контроль или специфические к TSC22D4 миРНК под контролем специфического для гепатоцитов промотора устанавливали, как описано ранее (Rose AJ, Frosig С, Kiens В, Wojtaszewski JF, Richter EA. Effect of endurance exercise training on Ca2+ calmodulin-dependent protein kinase II expression and signaling in skeletal muscle of humans. J Physiol. 2007; 583: 785-795).
Эксперименты на животных
Самцов мышей С57В1/6 в возрасте 8-12 недель и мышей db/db в возрасте 10 недель получали из лабораторий Charles River (Брюссель, Бельгия) и содержали в условиях с 12 часовым циклом день-ночь с регулярным неограниченным питанием. До проведения исследований на толерантность к инсулину и глюкозе животных не кормили в течение 4 часов. В противном случае животных кормили ad libitum и они имели свободный доступ к воде. Для инъекций аденовируса 1-2×109 бляшкообразующих единиц (pfu) на рекомбинантный вирус вводили путем инъекции в хвостовую вену. Для экспериментов AAV через хвостовую вену вводили 5×1011 вирусов. В каждом эксперименте 6-12 животных получали идентичное воздействие и их анализировали в условиях голодания (голодание в течение 18 ч), случайного питания или условиях сытости (голодание в течение 18 ч, затем повторное питание в течение 6 ч), как указано. Органы, включая в себя печень, эпидидимальные и брюшные жировые подушечки и икроножные мышцы, собирали через определенные периоды времени, взвешивали, замораживали и использовали для дальнейшего анализа. Общее содержание жира в организме определяли с помощью анализатора состава тела Echo MRI (Echo Medical Systems, Хьюстон, США). Содержание животных и эксперименты проводились в соответствии с руководящими принципами NIH и утверждались местными властями.
Для исследований на толерантность к инсулину готовили исходный раствор 1 Ед инсулина/мл с использованием 0,9% хлорида натрия. Мыши голодали в течение 4 часов до эксперимента. Определяли массу тела всех животных и измеряли содержание глюкозы в крови путем отрезания кончика хвоста лезвием бритвы. Каплю крови помещали на полоску глюкометра и измеряли. 1 Ед инсулина/кг массы тела инъецировали мышам С57В1/6, а 1,5 Ед инсулина/кг массы тела инъецировали мышам db/db внутрибрюшинно. Содержание глюкозы в крови контролировали через 20, 40, 60, 80 и 120 мин.
Для исследования толерантности к глюкозе готовили раствор 20% глюкозы с использованием 0,9% хлорида натрия. Мыши голодали в течение 4 часов до эксперимента. Определяли массу тела всех животных и измеряли содержание глюкозы в крови путем отрезания кончика хвоста лезвием бритвы. Каплю крови помещали на полоску глюкометра и измеряли. 5 мкл на грамм 20% раствора глюкозы вводили мышам С57В1/6 и db/db внутрибрюшинно. Содержание глюкозы в крови контролировали через 20, 40, 60, 80 и 120 мин.
Количественная ОТ-ПЦР Taqman
Общую РНК экстрагировали из гомогенизированной мышиной печени или клеточных лизатов с использованием реагента Qiazol (Qiagen, Хильден, Германия). кДНК получали путем обратной транскрипции с использованием фермента M-MuLV и праймера dT Oligo (Fermentas, Санкт-Леон-Рот, Германия). кДНК амплифицировали с использованием наборов для запрашиваемого анализа и детектора последовательности ABIPRISM 7700 (Applied Biosystems, Дармштадт, Германия). Данные экспрессии РНК нормировали до уровней РНК связывающего ТАТА-box белка (ТВР).
Экспрессию мРНК TSC22D4 человека измеряли с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени в флуоресцентном температурном циклере с использованием анализа TaqMan, а флуоресценцию обнаруживали на детекторе последовательностей ABI PRISM 7000 (Applied Biosystems, Дармштадт, Германия). Общую РНК выделяли с использованием TRIzol (Life technologies, Гранд-Айленд, Нью-Йорк), и 1 мкг РНК обратно транскрибировали посредством стандартных реагентов (Life Technologies, Гранд-Айленд, Нью-Йорк). Из каждой ОТ-ПЦР 2 мкл амплифицировали в 26 мкл ПЦР-реакции с использованием набора реагентов Brilliant SYBR green QPCR Core из Stratagene (La Jolla, CA) в соответствии с инструкциями производителя. Образцы инкубировали в детекторе последовательностей ABI PRISM 7000 для начальной денатурации при 95°С в течение 10 минут с последующими 40 циклами ПЦР, каждый цикл предусматривал температуру 95°С в течение 15 с, 60°С в течение 1 мин и 72°С для 1 мин. Экспрессию мРНК человеческих TSC22D4 и Obp2a (LCN13) (определяемые по Hs00229526_m1 и Hs01062934_g1, соответственно) (Applied Biosystems, Дармштадт, Германия) рассчитывали относительно экспрессии мРНК гипоксантинфосфорибозилтрансферазы 1 (HPRT1), определяемой посредством предварительным запрашиваемого анализа для HPRT1 (Hs01003267_m1) (Applied Biosystems, Дармштадт, Германия). Амплификацию специфических транскриптов подтверждали профилями кривой плавления (охлаждение образца до 68°С и медленное нагревание до 95°С с измерением флуоресценции) в конце каждой ПЦР. Специфичность ПЦР дополнительно подтверждали, подвергая продукты амплификации электрофорезу в агарозном геле.
Анализ белка
Белок экстрагировали из замороженных образцов органов или культивируемых гепатоцитов в буфере для лизиса клеток (Rose AJ, Frosig С, Kiens В, Wojtaszewski JF, Richter EA. Effect of endurance exercise training on Ca2+ calmodulin-dependent protein kinase II expression and signaling in skeletal muscle of humans. J Physiol. 2007; 583: 785-795), и 20 мкг белка загружали на 4-12% ДСН-полиакриламидные гели и промокали на нитроцеллюлозные мембраны. Вестерн-блот-анализ проводили, как описано (Herzig et al., 2001) с использованием антител, специфичных к TSC22D4 (Abeam, Кембридж, Великобритания или Sigma, Мюнхен, Германия), АКТ, р-АКТ, GSK, p-GSK (Cell signaling, Данверс, США) или VCP (Abcam).
Плазмиды и РНК-интерференция
Для экспериментов с кшРНК олигонуклеотиды, нацеленные на мышь и TSC22D4 (SEQ ID No. 1-3), клонировали в вектор кшРНК pENTR/U6 (Invitrogen).
Клеточная культура и анализы временной трансфекции
Первичные мышиные гепатоциты выделяли и культивировали, как описано (Klingmuller U, Bauer A, Bohl S, Nickel PJ, Breitkopf K, Dooley S, Zellmer S, Kern C, Merfort I, Sparna T, et al. Primary mouse hepatocytes for systems biology approaches: a standardized in vitro system for modelling of signal transduction pathways. IEE Proc Syst Biol. 2006; 153: 433-447). Вкратце, 8-12-недельным самцам мышей С57 В1/6 для анестезии вводили внутрибрюшинно инъекцию 100 мг/кг массы тела кетамина гидрохлорида и 5 мг/кг массы тела ксилазина гидрохлорида. После вскрытия брюшной полости печень перфузировали при 37°С с помощью HANKS I (8 г NaCl, 0,4 г KCl, 3,57 г Hepes, 0,06 г Na2HPO4 × 2 H2O, 0,06 г KH2PO4 в 1 л дистиллированной H2O, 2,5 мМ EGTA, 0,1% глюкозы, доводили до рН 7,4) через портальную вену в течение 5 мин, а затем с помощью HANKS II (8 г NaCl, 0,4 г KCl, 3,57 г Hepes, 0,06 г Na2HPO4 × 2 H2O, 0,06 г КН2РО4 в 1 л дистиллированной H2O, 0,1% глюкозы, 3 мг/мл коллагеназы CLSII, 5 мМ CaCl2, доводили до рН 7,4) в течение 5-7 минут до тех пор, пока не наблюдалась дезинтеграция структуры печени. Капсулу печени удаляли и клеточную суспензию фильтровали через сетку размером 100 мкм. Клетки промывали и затем жизнеспособность клеток определяли окрашиванием трипановым синим. 1000000 живых клеток/лунку высевали на 6-луночные планшеты с покрытием коллагеном I. Через 24 ч клетки инфицировали рекомбинантными аденовирусами с множественностью заражения 100. Для экспериментов на стимуляцию первичные гепатоциты обрабатывали PBS (контрольная среда) или инсулином в концентрации 100 нМ/6 лунок в течение 10 минут. Клетки собирали через 48 часов после инфицирования.
Цистроновый анализ TSC22D4 печени
Анализ KEGG-Pathway результатов чип-секвенирования сортировали по значимости. Установлено, что сигнальный путь инсулина значительно регулируется (р=0,00005). Чип-секвенирование проводили в экстрактах печени от инъецированных аденовирусной кДНК мышей Flag-TSC22D4 самцов мышей С57В1/6 через 7 дней после инъекции.
Результаты
Последовательности работали очень эффективно как для мышиных, так и для человеческих TSC, как показано в 4 независимых экспериментах (смотрите фигуры). Существует неспецифический липкий конец dTdT, прикрепленный к каждой последовательности. Последовательности соответствовали как мышиным, так и человеческим TSC до 100%.
Исходя из этих результатов, последовательности в соответствии с настоящим изобретением (SEQ ID №1-3) выбирали в качестве первичных кандидатов для применения в терапевтических целях, поскольку они демонстрируют превосходную эффективность нокдауна в отношении TSC22D4 и нацеливании на различные виды, включая в себя мышь, нечеловекообразных приматов и людей. Последовательности идентифицировали, функционально исследовали и проверяли различные миРНК, направленные против последовательности мРНК TSC22D4, в исследованиях нокдауна in vitro с использованием мышиного Нера1.6, а также клеток гепатомы Huh7 человека. В частности, mhD4-siRNA1 показала превосходную эффективность нокдауна в отношении TSC22D4 и нацеленно воздействует на множество видов, включая в себя мышь, нечеловекообразных приматов и людей.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ДОЙЧЕС КРЕБСФОРШУНГСЦЕНТРУМ ШТИФТУНГ ДЕС ЭФФЕНТЛИХЕН РЕХТС
<120> ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ, НАЦЕЛЕННЫЕ НА ТРАНСКРИПЦИОННЫЙ ФАКТОР TSC22D4, ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ИНСУЛИНУ
<130> D31385WO
<150> 15160259.6
<151> 03-23-2015
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> RNA
<213> Mus musculus
<400> 1
ggacgugugu ggauguuua 19
<210> 2
<211> 19
<212> RNA
<213> mus musculus
<400> 2
uaaacaucca cacacgucc 19
<210> 3
<211> 19
<212> RNA
<213> mus musculus
<400> 3
ggauguuuac gagagagau 19
<210> 4
<211> 19
<212> RNA
<213> mus musculus
<400> 4
aucucucucg uaaacaucc 19
<210> 5
<211> 19
<212> RNA
<213> homo sapiens
<400> 5
agucccaccu cauguuugc 19
<210> 6
<211> 19
<212> RNA
<213> homo sapiens
<400> 6
gcaaacauga ggugggacu 19
<---
Claims (17)
1. Ингибитор экспрессии TSC22D4, выбранный из олигонуклеотида, который представляет собой интерферирующую рибонуклеиновую кислоту, PNA (белковую нуклеиновую кислоту) или LNA (закрытую нуклеиновую кислоту), содержащий по меньшей мере одну из следующих последовательностей:
5'-GGACGUGUGUGGAUGUUUAdTdT-3';
5'-GGAUGUUUACGAGAGAGAUdTdT-3';
5'-AGUCCCACCUCAUGUUUGCdTdT-3';
их антисмысловой последовательности.
2. Ингибитор по п. 1, в котором интерферирующая рибонуклеиновая кислота представляет собой малую интерферирующую рибонуклеиновую кислоту (миРНК) или короткую шпилечную рибонуклеиновую кислоту (кшРНК) или микрорибонуклеиновую кислоту (микроРНК) или их комбинации.
3. Ингибитор по п. 1 или 2, в котором миРНК составляет в длину от 19 до 30 нуклеотидов.
4. Ингибитор по любому из пп. 1-3, в котором миРНК состоит из последовательности: в соответствии с SEQ ID No. 1-3.
5. Рекомбинантный вектор экспрессии, содержащий олигонуклеотидный ингибитор по любому из пп. 1-4.
6. Рекомбинантная клетка, предпочтительно рекомбинантная гепатоцитарная клетка, для экспрессии олигонуклеотидного ингибитора экспрессии TSC22D4, содержащая олигонуклеотидный ингибитор по любому из пп. 1-4 или рекомбинантный вектор по п. 5.
7. Фармацевтическая композиция для профилактики, регуляции и/или лечения заболевания, которое выбрано из резистентности к инсулину, гипертонии, дислипидемии, заболевания коронарной артерии, метаболического синдрома и/или сахарного диабета 1 или 2 типа и/или для улучшения чувствительности к инсулину, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного из ингибитора по любому из пп. 1-4, рекомбинантного вектора экспрессии по п. 5 и рекомбинантной клетки по п. 6, вместе с фармацевтически приемлемым носителем.
8. Фармацевтическая композиция по п. 7, причем указанная фармацевтическая композиция предназначена для введения пероральным, ректальным, трансмукозальным, трансдермальным, внутрикишечным, парентеральным, внутримышечным, интратекальным, прямо интравентрикулярным, внутривенным, внутрибрюшинным, интраназальным, внутриглазным или подкожным путем.
9. Применение ингибитора по любому из пп. 1-4, рекомбинантного вектора по п. 5, рекомбинантной клетки по п. 6 или фармацевтической композиции по п. 7 или 8, для профилактики, регуляции и/или лечения заболевания, выбранного из резистентности к инсулину, гипертонии, дислипидемии, заболевания коронарной артерии, метаболического синдрома и/или сахарного диабета 1 или 2 типа и/или для улучшения чувствительности к инсулину.
10. Применение по п. 9, причем резистентность к инсулину вызвана синдромом инсулинорезистентности, который представляет собой индуцированную диетой инсулинорезистентность и/или индуцированную ожирением инсулинорезистентность.
11. Применение по п. 9, где чувствительность к инсулину представляет собой чувствительность к инсулину в контексте опухолевого заболевания.
12. Терапевтический набор для профилактики, регуляции и/или лечения заболевания, которое выбрано из резистентности к инсулину, гипертонии, дислипидемии, заболевания коронарной артерии, метаболического синдрома и/или сахарного диабета 1 или 2 типа и/или для улучшения чувствительности к инсулину, содержащий ингибитор по любому из пп. 1-4, рекомбинантный вектор по п. 5, рекомбинантную клетку по п. 6 или фармацевтическую композицию по п. 7 или 8, необязательно вместе с подходящими буферами и вспомогательными веществами, и инструкции по использованию.
13. Терапевтический набор по п. 12, где чувствительность к инсулину представляет собой чувствительность к инсулину в контексте опухолевого заболевания.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP15160259.6 | 2015-03-23 | ||
| EP15160259.6A EP3072969A1 (en) | 2015-03-23 | 2015-03-23 | Oligonucleotide sequences targeting transcription factor TSC22D4 for the treatment of insulin resistance |
| PCT/EP2016/053050 WO2016150618A1 (en) | 2015-03-23 | 2016-02-12 | Oligonucleotide sequences targeting transcription factor tsc22d4 for the treatment of insulin resistance |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017131900A RU2017131900A (ru) | 2019-04-23 |
| RU2017131900A3 RU2017131900A3 (ru) | 2019-06-10 |
| RU2723091C2 true RU2723091C2 (ru) | 2020-06-08 |
Family
ID=52784935
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017131900A RU2723091C2 (ru) | 2015-03-23 | 2016-02-12 | Олигонуклеотидные последовательности, нацеленные на транскрипционный фактор tsc22d4, для лечения резистентности к инсулину |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10676739B2 (ru) |
| EP (2) | EP3072969A1 (ru) |
| JP (1) | JP2018513841A (ru) |
| KR (1) | KR20170128348A (ru) |
| CN (1) | CN107278229A (ru) |
| BR (1) | BR112017016021A2 (ru) |
| DK (1) | DK3274455T3 (ru) |
| ES (1) | ES2837085T3 (ru) |
| MX (1) | MX384193B (ru) |
| RU (1) | RU2723091C2 (ru) |
| WO (1) | WO2016150618A1 (ru) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7289510B2 (ja) * | 2019-05-08 | 2023-06-12 | 国立大学法人高知大学 | 認知症治療薬のスクリーニング方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000074634A2 (en) * | 1999-06-03 | 2000-12-14 | Au Jessie L S | Methods and compositions for modulating cell proliferation and cell death |
| US7943306B2 (en) * | 2005-01-12 | 2011-05-17 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Gene expression signature for prediction of human cancer progression |
| WO2014202602A1 (en) * | 2013-06-17 | 2014-12-24 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Treatment of insulin resistance through inhibitors of transcription factor tsc22d4 |
| RU2573450C1 (ru) * | 2014-08-11 | 2016-01-20 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) | Способ выявления генов-мишеней для диагностики и терапии лейкозов человека |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2003295600A1 (en) * | 2002-11-14 | 2004-06-15 | Dharmacon, Inc. | Functional and hyperfunctional sirna |
| US7553631B2 (en) | 2003-12-11 | 2009-06-30 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | RBP4 in insulin sensitivity/resistance, diabetes, and obesity |
| WO2005116204A1 (ja) * | 2004-05-11 | 2005-12-08 | Rnai Co., Ltd. | Ｒｎａ干渉を生じさせるポリヌクレオチド、および、これを用いた遺伝子発現抑制方法 |
| US20140227289A1 (en) | 2011-05-13 | 2014-08-14 | Stephen Michael Cohen | Compounds and methods for treating insulin resistance syndrome |
| GB201120317D0 (en) | 2011-11-24 | 2012-01-04 | Queen Mary & Westfield College | Screening method |
-
2015
- 2015-03-23 EP EP15160259.6A patent/EP3072969A1/en not_active Withdrawn
-
2016
- 2016-02-12 MX MX2017012231A patent/MX384193B/es unknown
- 2016-02-12 KR KR1020177026584A patent/KR20170128348A/ko not_active Ceased
- 2016-02-12 WO PCT/EP2016/053050 patent/WO2016150618A1/en not_active Ceased
- 2016-02-12 US US15/545,104 patent/US10676739B2/en active Active
- 2016-02-12 RU RU2017131900A patent/RU2723091C2/ru active
- 2016-02-12 ES ES16704222T patent/ES2837085T3/es active Active
- 2016-02-12 DK DK16704222.5T patent/DK3274455T3/da active
- 2016-02-12 BR BR112017016021-8A patent/BR112017016021A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2016-02-12 JP JP2017546667A patent/JP2018513841A/ja active Pending
- 2016-02-12 CN CN201680012500.4A patent/CN107278229A/zh active Pending
- 2016-02-12 EP EP16704222.5A patent/EP3274455B1/en active Active
-
2020
- 2020-04-30 US US16/862,930 patent/US11053499B2/en active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000074634A2 (en) * | 1999-06-03 | 2000-12-14 | Au Jessie L S | Methods and compositions for modulating cell proliferation and cell death |
| US7943306B2 (en) * | 2005-01-12 | 2011-05-17 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Gene expression signature for prediction of human cancer progression |
| WO2014202602A1 (en) * | 2013-06-17 | 2014-12-24 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Treatment of insulin resistance through inhibitors of transcription factor tsc22d4 |
| RU2573450C1 (ru) * | 2014-08-11 | 2016-01-20 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) | Способ выявления генов-мишеней для диагностики и терапии лейкозов человека |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| /emmm.201201869. * |
| Allan Jones et al. "TSC22D4 is a molecular output of hepatic wasting metabolism" EMBO Mol Med (2013) 5, 294-308 * |
| Allan Jones et al. "TSC22D4 is a molecular output of hepatic wasting metabolism" EMBO Mol Med (2013) 5, 294-308 DOI 10.1002/emmm.201201869. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2016150618A1 (en) | 2016-09-29 |
| US20180023078A1 (en) | 2018-01-25 |
| CA2979115A1 (en) | 2016-09-29 |
| KR20170128348A (ko) | 2017-11-22 |
| EP3274455B1 (en) | 2020-10-14 |
| ES2837085T3 (es) | 2021-06-29 |
| US20200255834A1 (en) | 2020-08-13 |
| RU2017131900A3 (ru) | 2019-06-10 |
| BR112017016021A2 (pt) | 2018-03-20 |
| MX2017012231A (es) | 2018-01-30 |
| US11053499B2 (en) | 2021-07-06 |
| EP3274455A1 (en) | 2018-01-31 |
| MX384193B (es) | 2025-03-12 |
| EP3072969A1 (en) | 2016-09-28 |
| JP2018513841A (ja) | 2018-05-31 |
| RU2017131900A (ru) | 2019-04-23 |
| US10676739B2 (en) | 2020-06-09 |
| CN107278229A (zh) | 2017-10-20 |
| DK3274455T3 (da) | 2020-12-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK2217704T3 (en) | Method to promote angionesis, vascularization or vascular repair or to inhibit tumor angionesis | |
| KR102321426B1 (ko) | 남성형 탈모 표적 유전자의 발현을 억제하는 비대칭 siRNA | |
| EP2283846A1 (en) | miRNA compounds for treatment of prostate carcinoma | |
| JP5887413B2 (ja) | 非小細胞肺癌におけるｔｍ４ｓｆ４の発現または活性を調節することによって癌細胞の放射線耐性ならびに増殖、転移および浸潤を低減させる方法 | |
| JP2006500916A (ja) | ｈｎＲＮＰＡ１およびＡ２核酸分子と関連がある新形成を治療するための方法および組成物 | |
| JP2006519009A (ja) | 細胞増殖を阻害する組成物および方法 | |
| US11053499B2 (en) | Oligonucleotide sequences targeting transcription factor TSC22D4 for the treatment of insulin resistance | |
| JP2007530431A (ja) | 膵臓癌を治療するための組成物および方法 | |
| JP6479780B2 (ja) | 転写因子ｔｓｃ２２ｄ４の阻害剤によるインスリン耐性の治療 | |
| EP1652917A1 (en) | Rna capable of inhibiting expression of klf5 gene | |
| CA2979115C (en) | Oligonucleotide sequences targeting transcription factor tsc22d4 for the treatment of insulin resistance | |
| KR20230127007A (ko) | Ednra 억제제를 유효성분으로 포함하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
| KR100930282B1 (ko) | ＮＩＫ 유전자에 대한 ｓｉＲＮＡ 및 이를 포함하는 간질환치료제 | |
| KR102707587B1 (ko) | miR-4487를 유효성분으로 함유하는 항암제 민감성 증진용 조성물 | |
| CN106554962A (zh) | 过表达gpr160的癌症的预防、诊断和治疗 |