RU2835110C1 - Штамм Clostridium sporogenes B-14642 - продуцент коллагеназы - Google Patents
Штамм Clostridium sporogenes B-14642 - продуцент коллагеназы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2835110C1 RU2835110C1 RU2024120298A RU2024120298A RU2835110C1 RU 2835110 C1 RU2835110 C1 RU 2835110C1 RU 2024120298 A RU2024120298 A RU 2024120298A RU 2024120298 A RU2024120298 A RU 2024120298A RU 2835110 C1 RU2835110 C1 RU 2835110C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- collagenase
- strain
- medium
- biotechnology
- clostridium sporogenes
- Prior art date
Links
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 title claims abstract description 30
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 title claims abstract description 30
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 title claims abstract description 26
- 241000193470 Clostridium sporogenes Species 0.000 title claims abstract description 15
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 4
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims abstract description 4
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract 1
- 241000193159 Hathewaya histolytica Species 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000187389 Streptomyces lavendulae Species 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 210000004883 areola Anatomy 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 240000008213 Brosimum alicastrum Species 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 208000001708 Dupuytren contracture Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 201000000628 Gas Gangrene Diseases 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 108010013295 Microbial collagenase Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 1
- 235000005828 ramon Nutrition 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой штамм Clostridium sporogenes В-14642, обладающий способностью синтезировать секретируемую коллагеназу от 0,85 до 0,93 мг/мл культурального фильтра при культивировании от 12 до 24 часов в анаэробных условиях при 37°С на среде с триптоном и дрожжевым экстрактом. Штамм депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - Оболенск» ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Изобретение обеспечивает расширение арсенала штаммов микроорганизмов, обладающих способностью к продуцированию коллагеназы. 1 ил., 1 табл., 1 пр.
Description
Область техники
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, а именно к получению штамма Clostridium sporogenes номер В-14642 в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - Оболенск» ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, способного продуцировать коллагеназу для использования в клеточных технологиях.
Предшествующий уровень техники
Клостридиальные коллагеназы характеризуются высокой специфичностью действия на коллагеновые волокна и могут быть отнесены к "истинным" коллагеназам. Они широко используются в биотехнологии, медицине, для лабораторных целей. Так коллагеназа используется для профилактики и лечения рубцовых образований, в том числе контрактуры Дюпюитрена (заболевание кисти, связанное с рубцовым перерождением и укорачиванием ладонных сухожилий), а также в диагностических и лабораторных целях, например, для дезинтеграции тканей in vitro. Среди них наиболее изученными являются коллагеназы, синтезируемые бактерией Clostridium histolyticum, которые характеризуются высокой специфичностью действия на коллагеновые волокна. Однако для культивирования Cl. histolyticum и массовой продукции коллагеназы необходимы сложные меры предосторожности, так как эта бактерия является анаэробным патогеном, вызывающим газовую гангрену и продуцирующим токсины. Для оптимального биосинтеза коллагеназ культурой Cl. histolyticum использовалась сложная питательная среда.
Одним из самых перспективных направлений использования коллагеназ являются клеточные технологии, где они применяются для получения стромально-васкулярной фракции клеток жировой ткани, а также для выделения и культивирования чистых первичных клеток.
От продуктивности штамма, затрат на его культивирование, скорости его роста и накопления целевого продукта, а также себестоимости питательных сред зависит эффективность промышленного производства любых продуктов микробного синтеза.
В патенте ЕР 0468411 29.01.1992 «А mutant of bacterium Clostridium histolyticum, a process for the obtaining thereof, and its use in the production of clostripain-free collagenase» описан мутантный штамм Clostridium histolyticum K26 clo 88, полученный путем обработки исходного дикого штамма мутагенным агентом, и способный к синтезу коллагеназы на среде с протеозопептоном, соевым пептоном, неорганическими солями, витаминами. Недостатком использования мутантного штамма в производственном процессе является его нестабильность.
Описан еще один способ получения коллагеназы путем культивирования С.histolyticum (патент WO 2007/089851), где очистка препарата ведется с использованием ультрафильтрации с размером пор 10 кДа, что позволяет отделить только олигопептиды и небольшие белки, кроме того применяется ионообменная хроматография на колонке с Q-Sepharose HP. Это более дорогой способ очистки препарата.
Известен также способ получения микробной коллагеназы из ультрафильтрата культуральной жидкости Streptomyces lavendulae ИНМИ-36-SV (RU 95104309, 1996). Препарат получают из ультраконцентрата культуральной жидкости штамма Streptomyces lavendulae ИНМИ-36-SV с помощью ионнообменной хроматографии на ДЕАЕ-целлюлозе, гельфильтрации на сефадексе G-100 и лиофилизации. Данный препарат имеет более высокую коллагеназную активность, чем препарат из Clostridium histolyticum, однако способ имеет ряд недостатков, в частности многостадийность и относительно невысокий выход.
Наиболее близкими аналогами заявляемого изобретения является штамм Clostridium histolyticum 468 (RU 2180002 27.02.2002 «Способ получения коллагеназы») и штамм Clostridium histolyticum SK В-8362 (RU 2684220 23.03.2018). Штамм Clostridium histolyticum 468 (RU 2180002) синтезирует коллагеназу при культивировании на среде, содержащей гидролизат казеина и соевого шрота, неорганические соли, витамины. Данный штамм растет на сложной питательной среде, компоненты которой требуют предварительной подготовки. Кроме того, время культивирования штамма достаточно продолжительное (72±1 ч). Штамм Clostridium histolyticum SK В-8362 (RU 2684220) растет на стандартизированных питательных средах, однако время культивирования штамма достаточно продолжительное (44 ч).
Таким образом, в уровне техники существует потребность в новых продуцентах коллагеназы с высокой удельной активностью, коротким сроком культивирования для использования в клеточных технологиях и в медицине.
Раскрытие сущности изобретения
Технической задачей предлагаемого изобретения является расширение арсенала продуцентов коллагеназы с целью использования в клеточных технологиях, а также для использования в медицине.
Техническим результатом является штамм Clostridium sporogenes - продуцент коллагеназы, депонированный в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - Оболенск» ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека под центр прикладной микробиологии и биотехнологии» под номером В-14642 от 20 декабря 2023 года, для использования в клеточных технологиях и в медицине. Свидетельство о депонировании №1811 от 20 декабря 2023 года.
Указанный технический результат, достигается тем, что штамм Clostridium sporogenes В-14642 синтезирует коллагеназу от 0,85 до 0,93 мг в миллилитре культурального фильтра при культивировании от 12 до 24 часов в анаэробных условиях при 37°С на среде с триптоном и дрожжевым экстрактом. Также технический результат достигается тем, что предлагаемый штамм является диким штаммом с неизменными свойствами, не относится к IV группе патогенности и адаптирован под лабораторные и промышленные питательные среды и может быть использован в клеточных технологиях и в медицине.
Краткое описание чертежей
На фигуре представлен молекулярный вес коллагеназы из штамма Cl. sporogenes В-14642.
1. культуральный фильтрат;
2. концентрат;
3. маркеры молекулярного веса.
Реализация изобретения
Штамм Clostridium sporogenes В-14642 выделен ООО "Обл-Био" в г. Оболенске 02 сентября 2023 года. Был первично идентифицирован как продуцент коллагеназы на селективной питательной среде, содержащей коллаген.
Морфологические признаки: подвижные палочки, при окраске по Грамму окрашивались как грамположительные. Споры овальные, располагаются субтерминально. Рост на жидкой среде с глюкозой сопровождался помутнением и энергичным газообразованием. На плотной среде штаммы формировали полупрозрачные, с матовой поверхностью колонии диаметром 4-6 мм. Культуральные особенности: рост на жидкой среде с глюкозой сопровождался помутнением и энергичным газообразованием. На плотной среде штаммы формировали полупрозрачные, с матовой поверхностью колонии диаметром 4-6 мм. Штамм оксидазо- и каталазо - отрицательный, лецитиназная и липазная активность отрицательные, индол не образует, однако наблюдается образование газа, гидролизирует желатин. Продукция антигенов, ферментов, токсинов: продукция в среду при культивировании коллагеназы 140 кДа. Токсичность для лабораторных животных: по результатам биопробы, LD50 - отсутствует при подкожном и внутрибрюшинном введении белым беспородным мышам и морским свинкам в дозе от 1 мг до 10 мг. Не патогенен согласно данным на лабораторных животных: LD50 отсутствует при подкожном и внутрибрюшинном введении белым беспородным мышам и морским свинкам в дозе 5×109 КОЕ. Устойчив к антибактериальным препаратам: канамицин от 100 мкг/мл и выше подавляет рост, устойчив к хлорамфениколу. Генетические характеристики Clostridium sporogenes В-14642. При исследовании первичной нуклеотидной последовательности 16S РНК с помощью Web Nucleotide Blast исследуемая культура была идентифицирована как Clostridium sporogenes с высокой степенью достоверности 98,97% (см. табл.1).
Штамм Clostridium sporogenes В-14642 хранят при температуре 6-8°С в разведенном 1/5 бульоне Рамона в смеси с 80% глицерином (соотношение 1:4) в виде споровой суспензии или в лиофильно высушенном виде на защитной среде с добавлением желатина.
Осуществление изобретения подтверждается следующими примерами
Пример 1
Выращивание посевной культуры Clostridium sporogenes В-14642 в колбах. Приготовление инокулята. В стерильную колбу Эрленмейера объемом 750 мл помещали 250 мл среды 2YT с добавлением 0,9% агар-агара, рН 7,4-7,5. Добавляли в колбу 1 мл стока культуры Clostridium sporogenes № В-14642, выращенного на среде 2YT. Выращивали культуру в CO2 инкубаторе статично при температуре 37°С. Время выращивания - в течение 24 часов до оптической плотности ОП прим. 3,7 при 10× разведении, рН 7,2 при 650 нм. Всего объем посевного материала 250 мл. Состав среды 2YT (расчет составлен на 1 литр): Триптон (микробиологический Диаэм) - 20 гр; Дрож. экстракт (Дао-Фуд WY-30) - 12,8 гр; MgCl2 - 100 мг; NaCl - 5 гр; K2HPO4 - 1 гр; Цистеин - 100 мг и рН=7,4-7,5. Среда стерилизовали в автоклаве при 0,5 атм, 20 мин.
Выращивание культуры в реакторе. Процесс выращивания проводили в реакторе БИОР 0,003, с рабочим заполнением 2 л. Реактор перед приготовлением среды обрабатывали дезинфицирующим раствором и тщательно промывали стерильной водой. Ферментер 3 литровый. Объем среды 2 л. Стерилизовали ферментер без среды при 131°С (2,1 бар), 40 мин. 126°С (0,6 бар), 60 мин. Среду стерилизовали в бутыли с отводом при 126°С (0,6 бар), 60 мин. Среда вводится отдельно через колбу с отводом, аэрация над средой СО2. Целевая культура имеет форму палочек с закруглением на конце. Грамположительные. Расположенные одиночно, некоторые стоят в коротких цепях. В процессе культивирования производили титрование рН 1%-ным раствором NH4OH. Каждые 12 часов отбирали стерильно пробы объемом 2 мл. Пробы центрифугировали при 5000 об/мин в течение 15 мин. Соблюдая условия асептики, отбирали надосадочную жидкость в объеме 0,03 мл и закапывали в лунки на заранее приготовленных чашках Петри (агароза+желатин). Чашки помещали в термостат при 37°С с экспозицией 12 часов.
Активность вещества оценивали по диаметру ареала вокруг лунок на чашке Петри. Продолжительность культивирования свыше 12 часов не влияла на активность целевого вещества, диаметр ареола по истечении 12 и 24 часов составил 23 мм, диаметр контрольного образца составил 23 мм. OD600 при 12 часовом культивировании составила 1.48, при 24 часах культивирования - 2,86.
После культивирования была проведена аналитическая оценка синтеза коллагеназы с помощью коллагена, меченого FITC. В качестве контроля была использована коллагеназа Cl. histolyticum (StemCell Inc.). Синтез коллагеназы составил на 12 часов - 0,85 мг/мл и на 24 часа - 0,93 мг/мл культурального фильтрата.
Таким образом, штамм Clostridium sporogenes В-14642 позволяет получить коллагеназу от 0,85 до 0,93 мг в миллилитре культурального фильтра при культивировании от 12 до 24 часов в анаэробных условиях при 37°С на среде с триптоном и дрожжевым экстрактом для использования в клеточных технологиях и в медицине. При этом используются стандартизированные промышленные и лабораторные питательные среды.
--->
<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing
1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">
<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="последовательность
Clostridium sporogenes.xml" softwareName="WIPO Sequence"
softwareVersion="2.1.1" productionDate="2024-07-16">
<ApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText></ApplicationNumberText>
<FilingDate>2024-07-05</FilingDate>
</ApplicationIdentification>
<ApplicantFileReference>1</ApplicantFileReference>
<ApplicantName languageCode="ru">Федеральное государственное
бюджетное научное учреждение "Российский научный центр хирургии
имени академика Б.В. Петровского" </ApplicantName>
<ApplicantNameLatin>Federal State Budgetary Scientific Institution
"Russian Scientific Center of Surgery named after academician
B.V. Petrovsky" </ApplicantNameLatin>
<InventionTitle languageCode="ru">Штамм Clostridium Sporogenes
B-14642 - продуцент коллагеназы</InventionTitle>
<SequenceTotalQuantity>1</SequenceTotalQuantity>
<SequenceData sequenceIDNumber="1">
<INSDSeq>
<INSDSeq_length>1363</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..1363</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q2">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>Clostridium
sporogenes</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>gcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcctcaaagtgggggatag
ccttccgaaaggaagattaataccgcataacataagagaatcgcatgattaacttatcaaagatttattg
ctttgagatggacccgcggcgcattagctagttgctaaggtaacggcttaccaaggcaacgatgcgtagc
cgacctgagagggtgatcggccacattggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtgg
ggaatattgcgcaataggggaaaccctgacgcagcaacgccgcgtgggtgatgaaggtcttcggattgta
aagccctgttttctgggacgataatgacggtaccagaggaggaagccacggctaactacgtgccagcagc
cgcggtaatacgtaggaggcgagcgttgtccggatttactgggcgtaaagggtgcgtaggcggatgttta
agtgggatgtgaaatccccgggcttaacctgggggctgcattccaaactggatatctagagtgcaggaga
ggaaagcggaattcctagtgtagcggtgaaatgcgtagagattaggaagaacaccagtggcgaaggcggc
tttctggtctgtaactgacgctgaggcacgaaagcgtgggtagcaaataggattagataccctggtagtc
cacgccgtaaacgatggatactaggtgtagggggtatcaactccccctgtgccgcagttaacacaataag
tatcccgcctggggagtacggtcgcaagattaaaactcaaaggaattgatgggggcccgcacaagcagcg
gagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttacctggacttgacatcccttgcatagcctaga
gataggtgaagcccttcggggcaaggagacaggtggtgcatgcttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgt
taggttaagtcctgcaacgagcgcaacccttgttataagttgctaccattaagttgagcactctaatgag
actgcctgggtaaccaggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgtccagggctaca
cacgtgctacaatgctaggtacaataagacgcaagaccgtgacgtggagcaaaacttataaaacctatct
cagttcggattgcaggctgcaactcgcctacatgaagcaggagttgctagtaatcgcgaatcagaatgtc
gcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgagagctggtaacacccgaagtc
cgtgaggtaaccgtaaggagccagcggccgaaggtgggattagtgattggggtg</INSDSeq_sequen
ce>
</INSDSeq>
</SequenceData>
</ST26SequenceListing>
<---
Claims (1)
- Штамм Clostridium sporogenes B-14642, обладающий способностью синтезировать секретируемую коллагеназу от 0,85 до 0,93 мг/мл культурального фильтра при культивировании от 12 до 24 часов в анаэробных условиях при 37°С на среде с триптоном и дрожжевым экстрактом и депонированный в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - Оболенск» ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2835110C1 true RU2835110C1 (ru) | 2025-02-21 |
Family
ID=
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69114935T2 (de) * | 1990-07-23 | 1996-05-30 | Pliva Pharm & Chem Works | Mutanter Stamm von Clostridium histolyticum, Verfahren zu dessen Herstellung und Verwendung zur Herstellung von Clostripain-freier Kollagenase. |
| RU2180002C2 (ru) * | 1999-08-16 | 2002-02-27 | Пермское научно-производственное объединение "Биомед" | Способ получения коллагеназы |
| RU2389794C2 (ru) * | 2008-07-02 | 2010-05-20 | Федеральное агентство по образованию Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет леса" | Способ получения иммобилизованной коллагеназы |
| US20120237497A1 (en) * | 2011-03-16 | 2012-09-20 | Biospecifics Technologies Corp. | Compositions and methods for producing clostridial collagenases |
| WO2019052586A1 (en) * | 2017-09-13 | 2019-03-21 | MB PHARMA s.r.o. | BACTERIAL STRAIN CLOSTRIDIUM HISTOLYTICUM AND USE THEREOF |
| RU2684220C1 (ru) * | 2018-03-23 | 2019-04-04 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Штамм clostridium histolyticum - продуцент коллагеназы |
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69114935T2 (de) * | 1990-07-23 | 1996-05-30 | Pliva Pharm & Chem Works | Mutanter Stamm von Clostridium histolyticum, Verfahren zu dessen Herstellung und Verwendung zur Herstellung von Clostripain-freier Kollagenase. |
| RU2180002C2 (ru) * | 1999-08-16 | 2002-02-27 | Пермское научно-производственное объединение "Биомед" | Способ получения коллагеназы |
| RU2389794C2 (ru) * | 2008-07-02 | 2010-05-20 | Федеральное агентство по образованию Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет леса" | Способ получения иммобилизованной коллагеназы |
| US20120237497A1 (en) * | 2011-03-16 | 2012-09-20 | Biospecifics Technologies Corp. | Compositions and methods for producing clostridial collagenases |
| WO2019052586A1 (en) * | 2017-09-13 | 2019-03-21 | MB PHARMA s.r.o. | BACTERIAL STRAIN CLOSTRIDIUM HISTOLYTICUM AND USE THEREOF |
| RU2684220C1 (ru) * | 2018-03-23 | 2019-04-04 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства России (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Штамм clostridium histolyticum - продуцент коллагеназы |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69838383T2 (de) | Kulturmedium mit sojabohnenextrakt als aminosäuren-quelle und ohne proteinkomplexe tierischen ursprungs | |
| US4925792A (en) | Process for producing proteins correlated with the diphtheric toxin | |
| CN110452845B (zh) | 一种产蔗糖磷酸化酶的大肠杆菌 | |
| CN109153966A (zh) | 生产丙烯酰胺的生物技术方法及相关新菌株 | |
| CS227791A3 (en) | Mutant of clostridium histolyticum bacterium, process of its obtaining and its application for the production of collagenase without clostripain | |
| RU2835110C1 (ru) | Штамм Clostridium sporogenes B-14642 - продуцент коллагеназы | |
| Sivakumar et al. | SCREENING OF KERA SCREENING OF KERATINOLYTIC BACTERIA BACILLUS CEREUS US CEREUS US CEREUS FROM THE FEATHER DUMPING SOIL OF SIV THER DUMPING SOIL OF SIV THER DUMPING SOIL OF SIVAKASI | |
| CZ308157B6 (cs) | Kmen bakterie Clostridium histolyticum, kolagenáza připravená s použitím tohoto kmene a její použití | |
| RU2193063C2 (ru) | Бактериолитический комплекс, способ его получения и штамм для осуществления способа | |
| RU2073717C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus schlegelii - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5' - ccnnnnnnn gg-3' | |
| Oriel | Amylase production by Escherichia coli immobilized in silicone foam | |
| US3686072A (en) | L-asparaginase from erwinia | |
| RU2684220C1 (ru) | Штамм clostridium histolyticum - продуцент коллагеназы | |
| JP4643873B2 (ja) | 耐熱性ラッカーゼおよびその製造方法 | |
| RU2053299C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus badius - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-(a/t)ccgg(a/t)-3' | |
| CN115927115B (zh) | 光合固氮红细菌新物种及其应用 | |
| RU2037522C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus species - продуцент эндонуклеазы рестрикции, способной узнавать и расщеплять последовательность нуклеотидов 5`-(a/g) ccgg (t/c)-3` | |
| RU2057806C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus coagulans - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-gatnnnnatc-3' | |
| RU2158302C2 (ru) | Питательная среда для роста бифидо- и лактобактерий | |
| Muharni et al. | Culture optimization for keratinase production by thermophilic bacillus licheniformis AAL3 in keratin waste biodegradation | |
| EP0258038A2 (en) | Use of cellulase preparations in the cultivation and use of cellulose-producing micro-organisms | |
| RU2046142C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus pumilus - продуцент эндонуклеазы рестрикции ври 19 1 | |
| JP2690545B2 (ja) | 細菌アルカリプロテアーゼの製造方法 | |
| RU2040540C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus coagulans - продуцент сайт - специфическойй эндокуклазы, способной узнать и расщеплять последовательность нуклеотидов 5'- ct (a/g) (t/c)ag - 3' | |
| Godheja et al. | Biodegradation of keratin from chicken feathers by Bacterial species as a means of sustainable Development |