RU2856587C2

RU2856587C2 - Производное сесквитерпена, его фармацевтическая композиция, а также способ их приготовления и применения

Info

Publication number: RU2856587C2
Application number: RU2025106810A
Authority: RU
Inventors: Чэн ЯН; Гуан Ян; Хунган ЧЖОУ
Original assignee: Тяньцзинь Цзикунь Медикал Текнолоджи Ко., Лтд.
Priority date: 2022-05-16
Filing date: 2023-05-10
Publication date: 2026-02-24

Abstract

Изобретение относится к производному сесквитерпена, выбранному из группы соединений 1-3, или его фармацевтически приемлемой соли, выбранной из группы, состоящей из соединений 4-6, которые могут значительно усиливать ответ и терапевтический эффект антител к PD-1 на опухоли, а их совместное применение с антителами к PD-1 проявляет синергетический эффект и демонстрирует сильную противоопухолевую активность. Изобретение относится также к способу приготовления указанного производного сесквитерпена, фармацевтической композиции для лечения опухоли, включающей указанное производное сесквитерпена или его фармацевтически приемлемую соль и антитела к PD-1, и его применению для приготовления лекарственного средства для лечения опухолей. 4 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 табл., 7 пр.

Description

Настоящая заявка испрашивает приоритет заявки на китайский патент, поданной в китайское патентное бюро 16 мая 2022 года, заявка № 202210527640.2, с названием изобретения «Производное сесквитерпена, его фармацевтическая композиция, а также спсоб их приготовления и применения», все содержание которой включено в настоящую заявку посредством ссылки.

Область техники

Настоящее изобретение относится к области фармацевтической химии, а именно к производному сесквитерпена, фармацевтической композиции, способу приготовления и применения.

Уровень техники

Развитие и прогрессия опухолей зависят от множества механизмов, в числе которых очень важен иммунный побег (т.е. избегание распознавания и уничтожения иммунной системой). Иммунная система организма может отслеживать «несамостоятельные» мутантные клетки и целенаправленно удалять их с помощью механизмов клеточного иммунитета для поддержания стабильности внутренней среды организма. Однако под воздействием различных факторов опухоли, оторвавшись от иммунного контроля организма, становятся объектом иммунного побега, и их злокачественное биологическое поведение еще больше ускоряется, способствуя пролиферации, инвазии и метастазированию.

Программируемая клеточная смерть 1 (PD-1) - важный иммуносупрессивный трансмембранный белок, экспрессирующийся на поверхности Т-клеток. В микроокружении опухолей Т-клетки индуцируют высокую экспрессию молекул PD-1, а опухолевые клетки экспрессируют их лиганды PD-L1 или PD-L2. Когда лиганды PD-L1 или PD-L2 соединяются с PD-1, Т-клетки не могут обнаружить опухоль и дать сигнал иммунной системе атаковать ее. Поэтому появились стратегии иммунотерапии моноклональными антителами PD-1, которые блокируют сигнальный путь PD-1/PD-L1 и восстанавливают иммуноубивающую функцию Т-клеток. По статистике, в мире 154 компании занимаются исследованиями и разработками антител к PD-1, в том числе такие известные, как Merck Sharp & Dohme, BMS, Junshi Biosciences, Innovent Biologics, Inc. и Jiangsu Hengrui Medicine. В настоящее время в Китае одобрены и продаются шесть антител к PD-1, которые применяются более чем по десяти показаниям, таким как немелкоклеточный рак легких, рак желудка, рак молочной железы и почечно-клеточный рак.

Однако антитела к PD-1 имеют определенные ограничения в клиническом применении, среди которых наиболее заметной проблемой является низкая частота ответа у пациентов с опухолями. По клинической статистике, антитела к PD-1 лучше всего реагируют на пациентов с меланомой - около 40%, затем на немелкоклеточный рак легких - около 25-30% и на рак печени - около 20%, в то время как на большинство других опухолей ответ обычно составляет менее 15%, и, в частности, они практически не реагируют на рак поджелудочной железы (ответ менее 1%). Причины относительно сложных и неясных механизмов, связанных с низким уровнем ответа на антитела к PD-1 у пациентов с опухолями, до сих пор изучаются.

Уже существуют комбинированные варианты лечения, позволяющие должным образом усилить противоопухолевый эффект антител к PD-1. Например, химиотерапевтический препарат паклитаксел, химиотерапевтические агенты на основе платины и лучевая терапия в сочетании с антителами к PD-1 для лечения опухолей могут значительно увеличить ответ опухолевых поражений пациента на PD-1 и повысить эффективность лечения. Кроме того, целевые препараты, такие как EGFR и VEGFR, в сочетании с терапией антителами к PD-1 также получили лучший терапевтический эффект, что привело к значительным преимуществам для пациентов.

Тем не менее, возможности комбинированной терапии остаются весьма ограниченными и по-прежнему неэффективными в отношении других типов опухолей с низкой реакцией. Поэтому поиск и разработка соединений, способных потенцировать иммунотерапию, имеет большое клиническое значение.

Информация, раскрытая в данном разделе справочного материала, предназначена только для дополнения понимания общего контекста изобретения и не должна восприниматься как признание или каким-либо образом подразумевать, что эта информация представляет собой уровень техники, уже известный специалистам в данной области.

Сущность изобретения

Задача изобретения

Задачей настоящего изобретения является предоставление производного сесквитерпена или его фармацевтически приемлемых солей, способа их приготовления, фармацевтической композиции, содержащей их и антитела к PD-1, и их использование для приготовления препарата для лечения опухолей. Производное сесквитерпена настоящего изобретения или его фармацевтически приемлемые соли значительно усиливают ответ и эффективность антитела к PD-1 против опухолей, а их совместное применение с антителом к PD-1 проявляет значительный синергетический эффект, демонстрируя очень сильную противоопухолевую активность.

Варианты решения

Для достижения задачи настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрены следующие технические решения:

В первом аспекте настоящее изобретение предоставляет производное сесквитерпена или его фармацевтически приемлемые соли, производное сесквитерпена имеет структуру, показанную в формуле (I):

при этом R1 и R2 независимо выбираются из группы: алкил и гидроксиалкил, и R1 и R2 не являются метилом одновременно.

В предпочтительных вариантах осуществления алкил представляет собой C1-C4 алкил, предпочтительно C1-C3 алкил.

В предпочтительных вариантах осуществления гидроксиалкил представляет собой C1-C4 гидроксиалкил, предпочтительно C1-C3 гидроксиалкил.

Далее предпочтительно, производное сесквитерпена представляет собой соединение, выбранное из следующих:

.

В предпочтительных вариантах осуществления фармацевтически приемлемые соли производного сесквитерпена представляют собой соли, образованные производным сесквитерпена с неорганическими или органическими кислотами;

предпочтительно, неорганические кислоты выбираются из группы, состоящей из: фтористоводородной кислоты, соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, гидриодной кислоты, серной кислоты, азотной кислоты, фосфорной кислоты, карбоновой кислоты;

предпочтительно, органические кислоты выбираются из группы, состоящей из: лимонной кислоты, малеиновой кислоты, D-малиновой кислоты, L-малиновой кислоты, DL-малиновой кислоты, D-молочной кислоты, L-молочной кислоты, DL-молочной кислоты, щавелевой кислоты, метансульфоновой кислоты, п-толуиленсульфоновой кислоты, винной кислоты, малоновой кислоты, бутандионовой кислоты, фумаровой кислоты, бензойной кислоты или замещенной бензойной кислоты.

Далее предпочтительно, фармацевтически приемлемые соли производного сесквитерпена представляют собой соли производного сесквитерпена с фумаровой кислотой.

В предпочтительных конкретных вариантах осуществления фармацевтически приемлемые соли производного сесквитерпена выбираются из следующих:

.

Во втором аспекте настоящее изобретение предоставляет способ приготовления производного сесквитерпена или его фармацевтически приемлемых солей, как описано выше в первом аспекте, по следующему синтетическому методу:

при этом Sol. является растворителем, выбранным из одного или нескольких из дихлорметана, трихлорформа, тетрагидрофурана, метанола, этанола, толуола, ацетонитрила, этилацетата, N,N'-диметилформамида, диметилсульфоксида, воды.

В третьем аспекте настоящее изобретение предоставляет фармацевтическую композицию, включающую в себя: производное сесквитерпена или его фармацевтически приемлемые соли, как описано в первом аспекте; антитела к PD-1, предпочтительно моноклональные антитела к PD-1; и фармацевтически приемлемые носители и/или эксципиенты.

В вышеописанных фармацевтических композициях производное сесквитерпена или их фармацевтически приемлемые соли используются в качестве первого активного компонента, а антитела к PD-1 - в качестве второго активного компонента; в предпочтительных вариантах осуществления производное сесквитерпена или его фармацевтически приемлемые соли в той же рецептуре, что и антитела к PD-1, или в другой рецептуре.

Кроме того, предпочтительно массовое соотношение производного сесквитерпена или его фармацевтически приемлемых солей к антителам к PD-1 составляет: (1~20):1, еще более предпочтительно 10: 1.

В четвертом аспекте настоящее изобретение предоставляет возможность применения производного сесквитерпена или его фармацевтически приемлемых солей, как в первом аспекте, или фармацевтической композиции, как в третьем аспекте, для получения лекарственного средства для лечения опухолей.

В конкретных вариантах осуществления опухоли выбраны из группы, состоящей из: меланомы, рака легкого, рака поджелудочной железы, рака печени, колоректального рака, рака желудка и глиомы головного мозга.

Полезные эффекты:

Производное сесквитерпена настоящего изобретения или их фармацевтически приемлемые соли могут значительно усиливать ответ и терапевтический эффект антител к PD-1 на опухоли, а их совместное применение с антителами к PD-1 проявляет очевидный синергетический эффект и демонстрирует очень сильную противоопухолевую активность, обеспечивая новый путь для клинического лечения опухолей, имеющий потенциальную клиническую ценность и широкие перспективы клинического применения.

Вариант осуществления изобретения

Для того чтобы сделать задачи, технические решения и преимущества вариантов осуществления настоящего изобретения более понятными, ниже будут ясно и полно описаны технические решения в вариантах осуществления настоящего изобретения, и очевидно, что описанные варианты осуществления являются частью вариантов осуществления настоящего изобретения, а не всеми вариантами осуществления. На основе вариантов осуществления настоящего изобретения все другие варианты осуществления, полученные специалистом в данной области без творческого труда, попадают в объем охраны настоящего изобретения.

Кроме того, множество конкретных деталей приведено в конкретных вариантах осуществления, описанных ниже, чтобы лучше проиллюстрировать изобретение. Специалисты в данной области должны понимать, что изобретение может быть реализовано и без некоторых конкретных деталей. В некоторых вариантах осуществления изобретения ингредиенты, компоненты, методы, средства и т.п., хорошо известные специалистам в данной области, не описываются подробно для того, чтобы подчеркнуть основную идею настоящего изобретения.

Во всей спецификации и формуле изобретения термин «включающий» или его вариации, такие как «содержащий» или «включающий в себя» и т.д., понимаются как включающие указанные элементы или компоненты и не исключающие другие элементы или другие компоненты, если иное явно не указано.

Экспериментальные методы, используемые в следующих вариантах осуществления изобретения, являются обычными, если не указано иное.

Материалы, реагенты и т.д., используемые в следующих вариантах осуществления изобретения, являются коммерчески доступными, если не указано иное.

Пример осуществления 1: приготовление соединения 1

Соединение 1 имеет следующую структуру:

Процесс приготовления заключается в следующем:

Диоксид селена (2,86 г, 25,8 ммоль) растворяли в дихлорметане (250 мл) при 0 °C, добавляли пероксид трет-бутанола (15,5 мл) и перемешивали в течение 30 мин, после этого к указанной системе медленно добавили раствор изоалантолактона (30 г, 0,129 моль) в дихлорметане (250 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 8 часов, затем реакцию гасили насыщенным водным тиосульфатом натрия (500 мл), после разделения водная фаза экстрагировалась дихлорметаном (300 мл x 3), органические фазы объединялись, сушились, концентрировались и перекристаллизовывались из смешанного растворителя петролейный эфир/этилацетат с получением промежуточного соединения 1 (белое твердое вещество, 19,5 г, выход 61%), который затем использовался непосредственно на следующей стадии.

Промежуточное соединение 1 (19,5 г, 78,5 ммоль) растворяли в дихлорметане (100 мл) при 0 °C, раствор м-хлорпероксибензойной кислоты (16,3 г, 94,2 ммоль) в дихлорметане (300 мл) медленно добавляли по каплям к указанной системе, и реакцию проводили при комнатной температуре в течение 2 часов, затем реакцию гасили насыщенным тиосульфатом натрия (300 мл), водную фазу экстрагировали этилацетатом (3 x 200 мл), органическую фазу один раз промывали насыщенным раствором NaHCO₃ (100 мл), затем сушили безводным Na₂SO₄, твердое вещество удаляли фильтрованием, а маточный раствор концентрировали с получением соединения CP0105 в сыром виде; полученное соединение CP0105 в сыром виде перекристаллизовывали из этилацетата/петролейного эфира с получением соединения CP0105 (16,8 г, выход 81%).

Соединение CP0105 (1,00 г, 3,78 ммоль) растворили в тетрагидрофуране (16 мл), добавили N-метиламиноэтанол (1,42 г, 18,9 ммоль) и перемешивали при 25 °C в течение 4 часов, по окончании реакции тетрагидрофуран сконцентрировали и удалили тетрагидрофуран под пониженным давлением с получением сырого продукта соединения 1; затем сырой продукт был очищен быстрой колоночной хроматографией на силикагеле (дихлорметан: метанол = 20:1) с получением соединения 1 (белое твердое вещество, 1,13 г, выход 88%).

Соединение 1 было исследовано, и его данные NMR приведены ниже:

¹H NMR(400MHz, DMSO)δ4.76(d, J=4.3Hz, 1H), 3.90(t, J=5.2Hz, 1H), 3.75(t, J=6.3Hz, 2H), 3.46(d, J=2.9Hz, 1H), 3.38(dt, J=10.4, 5.4Hz, 1H), 3.22(t, J=5.2Hz, 1H), 3.02(d, J=4.5Hz, 1H), 2.89–2.72(m, 7H), 2.67(dt, J=12.7, 6.4Hz, 2H), 2.36(dd, J=13.0, 2.3Hz, 1H), 2.30–2.15(m, 1H), 2.07–1.93(m, 1H), 1.92–1.69(m, 3H), 1.60(ddd, J=13.7, 5.9, 2.5Hz, 1H), 1.52–1.39(m, 1H), 1.11(s, 3H), 0.91(q, J=12.9Hz, 1H). ¹³C NMR(100MHz, DMSO)δ177.5, 77.5, 71.1, 60.8, 59.3, 58.6, 56.4, 52.5, 50.4, 48.0, 44.4, 42.2, 38.4, 36.8, 34.2, 27.7, 17.9, 15.5. HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₈H₂₉NO₅Na⁺ [M+Na]⁺ 362.1938, found 362.1933.

Пример осуществления 2: соли с фумаровой кислотой соединения 1 - приготовление соединения 4

Соединение 4 имеет следующую структуру:

Соединение 1 (1,08 г, 3,19 ммоль), приготовленное в примере осуществления 1, растворили в тетрагидрофуране (20 мл), перемешали, затем добавили фумаровую кислоту (352 мг, 3,03 ммоль) и перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре, по окончании реакции тетрагидрофуран был удален путем концентрирования под пониженным давлением, затем к реакционной системе был добавлен этилацетат (100 мл) для получения суспензии, которую отбирали и фильтровали для получения соединения 4 (белое твердое вещество, 1,26 г, выход 83%).

Соединение 4 было исследовано, и его данные NMR приведены ниже:

¹H NMR(400MHz, DMSO)δ6.80(s, 2H), 4.76(d, J=4.3Hz, 1H), 3.90(t, J=5.2Hz, 1H), 3.75(t, J=6.3Hz, 2H), 3.46(d, J=2.9Hz, 1H), 3.38(dt, J=10.4, 5.4Hz, 1H), 3.22(t, J=5.2Hz, 1H), 3.02(d, J=4.5Hz, 1H), 2.89–2.72(m, 7H), 2.67(dt, J=12.7, 6.4Hz, 2H), 2.36(dd, J=13.0, 2.3Hz, 1H), 2.30–2.15(m, 1H), 2.07–1.93(m, 1H), 1.92–1.69(m, 3H), 1.60(ddd, J=13.7, 5.9, 2.5Hz, 1H), 1.52–1.39(m, 1H), 1.11(s, 3H), 0.91(q, J=12.9Hz, 1H). ¹³C NMR(100MHz, DMSO)δ177.5, 167.4, 134.8, 77.5, 71.1, 60.8, 59.3, 58.6, 56.4, 52.5, 50.4, 48.0, 44.4, 42.2, 38.4, 36.8, 34.2, 27.7, 17.9, 15.5. HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₈H₂₉NO₅Na⁺ [M+Na]⁺ 362.1938, found 362.1933.

Пример осуществления 3: приготовление соединения 2

Соединение 2 имеет следующую структуру:

Используя амин этиленгликоля (1,99 г, 18,9 ммоль), следуя процессу синтеза соединения 1 в примере осуществления 1, получили целевое соединение 2 (белое твердое вещество, 879 мг, выход 63%).

Соединение 2 было исследовано, и его данные NMR приведены ниже:

¹H NMR(400 MHz, DMSO) δ 4.48 (s, 1H), 3.47 (q, J=5.3, 4.8 Hz, 3H), 3.18 (s, 1H), 3.13–3.04 (m, 1H), 2.86–2.53 (m, 9H), 2.49–2.34 (m, 4H), 2.08 (d, J=12.7 Hz, 1H), 1.95 (d, J=15.3 Hz, 1H), 1.82–1.67 (m, 1H), 1.64–1.45 (m, 3H), 1.34 (dd, J=14.0, 5.2 Hz, 1H), 1.20 (d, J=12.5 Hz, 1H), 0.83 (s, 3H), 0.63 (q, J=12.7 Hz, 1H). ¹³C NMR (100 MHz, DMSO) δ 177.6, 77.4, 71.1, 60.8, 58.8, 58.6, 56.3, 50.0, 48.0, 41.3, 38.4, 36.8, 34.7, 34.2, 27.7, 17.9, 15.5. HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₉H₃₁NO₆Na⁺ [M+Na]⁺ 392.2044, found 392.2039.

Пример осуществления 4: соли с фумаровой кислотой соединения 2 - приготовление соединения 5

Соединение 5 имеет следующую структуру:

Используя соединение 2 (878 мг, 2,38 ммоль) и фумаровую кислоту (262 мг, 2,26 ммоль), приготовленную в примере осуществления 3, получили целевое соединение 5 (белое твердое вещество, 674 мг, выход 58%) в соответствии с процессом синтеза соединения 4 в примере осуществления 2.

Соединение 5 было исследовано, и его данные NMR приведены ниже:

¹H NMR(400MHz, DMSO)δ6.61(d, J=3.2Hz, 2H), 4.48(s, 1H), 3.47(q, J=5.3, 4.8Hz, 3H), 3.18(s, 1H), 3.13–3.04(m, 1H), 2.86–2.53(m, 9H), 2.49–2.34(m, 4H), 2.08(d, J=12.7Hz, 1H), 1.95(d, J=15.3Hz, 1H), 1.82–1.67(m, 1H), 1.64–1.45(m, 3H), 1.34(dd, J=14.0, 5.2Hz, 1H), 1.20(d, J=12.5Hz, 1H), 0.83(s, 3H), 0.63(q, J=12.7Hz, 1H). ¹³C NMR(100MHz, DMSO)δ177.6, 166.2, 134.1, 77.4, 71.1, 60.8, 58.8, 58.6, 56.3, 50.0, 48.0, 41.3, 38.4, 36.8, 34.7, 34.2, 27.7, 17.9, 15.5. HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₉H₃₁NO₆Na⁺ [M+Na]⁺ 392.2044, found 392.2039.

Пример осуществления 5: приготовление соединения 3

Соединение 3 имеет следующую структуру:

Используя N-метиламинопропанол (1,65 г, 18,9 ммоль), целевое соединение 3 (белое твердое вещество, 1,32 г, выход 99%) было получено в соответствии с процессом синтеза соединения 1 в примере осуществления 1.

Соединение 3 было исследовано, и его данные NMR приведены ниже:

¹H NMR(400MHz, DMSO)δ5.11–4.48(m, 1H), 3.67(q, J=6.2, 5.3Hz, 2H), 3.50–3.31(m, 3H), 3.21–2.96(m, 2H), 2.96–2.69(m, 7H), 2.67(q, J=6.1, 5.6Hz, 2H), 2.39–2.28(m, 1H), 2.26–2.14(m, 1H), 2.07–1.69(m, 6H), 1.62–1.51(m, 1H), 1.44(qt, J=10.6, 7.2, 6.4Hz, 1H), 1.07(s, 3H), 0.88(q, J=12.8Hz, 1H). ¹³C NMR(100MHz, DMSO)δ177.3, 77.6, 71.1, 60.9, 59.1, 54.1, 52.0, 48.1, 44.1, 41.5, 41.3, 38.5, 36.8, 34.7, 34.3, 29.2, 27.7, 18.0, 15.6. HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₉H₃₁NO₅Na⁺ [M+Na]⁺ 376.2094, found 376.2093.

Пример осуществления 6: соли с фумаровой кислотой соединения 3 - приготовление соединения 6

Соединение 6 имеет следующую структуру:

Используя соединение 3 (1,32 г, 3,74 ммоль) и фумаровую кислоту (412 мг, 3,56 ммоль), приготовленную в примере осуществления 5, получили целевое соединение 6 (белое твердое вещество, 1,42 г, выход 81%) в соответствии с процессом синтеза соединения 4 в примере осуществления 2.

Соединение 6 было исследовано, и его данные NMR приведены ниже:

¹H NMR(400MHz, DMSO)δ6.82(s, 2H), 5.11–4.48(m, 1H), 3.67(q, J=6.2, 5.3Hz, 2H), 3.50–3.31(m, 3H), 3.21–2.96(m, 2H), 2.96–2.69(m, 7H), 2.67(q, J=6.1, 5.6Hz, 2H), 2.39–2.28(m, 1H), 2.26–2.14(m, 1H), 2.07–1.69(m, 6H), 1.62–1.51(m, 1H), 1.44(qt, J=10.6, 7.2, 6.4Hz, 1H), 1.07(s, 3H), 0.88(q, J=12.8Hz, 1H). ¹³C NMR(100MHz, DMSO)δ177.3, 166.6, 134.4, 77.6, 71.1, 60.9, 59.1, 54.1, 52.0, 48.1, 44.1, 41.5, 41.3, 38.5, 36.8, 34.7, 34.3, 29.2, 27.7, 18.0, 15.6. HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₉H₃₁NO₅Na⁺ [M+Na]⁺ 376.2094, found 376.2093.

Пример сравнения: приготовление контрольного соединения 7

Соединение 7 имеет следующую структуру:

Соединение CP0105 (1,00 г, 3,78 ммоль, которое можно приготовить по соответствующей методе, описанной в примере осуществления 1) растворяли в тетрагидрофуране (16 мл), к которому добавляли диметиламин (2M в THF, 9,46 мл, 18,9 ммоль), и реакционную систему перемешивали в течение 4 часов при 25 °C, по окончании реакции проводили ротационное выпаривание для удаления растворителя, полученный продукт концентрировали и снова растворяли в тетрагидрофуране (20 мл), после хорошего перемешивания добавляли фумаровую кислоту (346 мг, 2,98 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов, по окончании реакции тетрагидрофуран удаляли концентрированием при пониженном давлении, добавляли этилацетат (100 мл) для получения суспензии, которую отбирали и фильтровали для получения соединения 7 (белое твердое вещество, 951 мг, выход 52%).

Соединение 7 было исследовано, и его данные NMR приведены ниже:

¹H NMR(400MHz, CDCl₃)δ6.58(s, 2H), 4.50(q, J=2.8, 2.0Hz, 1H), 3.24–3.05(m, 2H), 2.75(d, J=4.5Hz, 1H), 2.62(dd, J=12.8, 10.4Hz, 1H), 2.50–2.45(m, 3H), 2.44–2.37(m, 1H), 2.26(s, 6H), 2.08(dd, J=13.0, 2.4Hz, 1H), 1.96(dd, J=15.4, 2.0Hz, 1H), 1.74(tt, J=15.3, 3.6Hz, 1H), 1.63–1.46(m, 3H), 1.30(ddd, J=13.6, 5.8, 2.4Hz, 1H), 1.25–1.14(m, 1H), 0.83(s, 3H), 0.64(q, J=12.9Hz, 1H). ¹³C NMR(100MHz, CDCl₃)δ177.6, 167.0, 134.8, 78.0, 71.5, 61.3, 54.1, 48.5, 45.1, 44.7, 41.7, 38.9, 37.2, 35.2, 34.7, 28.2, 18.4, 16.0. HRMS(ESI):m/z calcd for C₁₇H₂₇NO₄Na⁺ [M+Na]⁺ 332.1832, found 332.1838.

Пример осуществления 7: противоопухолевые эффекты соединений настоящего изобретения в комбинированной терапии с моноклональными антителами к PD-1

Опухолевые клетки B16F10, LLC, PAN02, H22, CT26, MFC и GL261 с хорошим ростовым статусом были собраны, (приобретены в Biological Industries) промыты дважды с 1×PBS, соответственно, и общее количество клеток было подсчитано с помощью счетчика клеток, а цитозоль был разведен в клеточной суспензии 1×10⁷ клеток/мл с 1×PBS.

Мыши, использованные в данном эксперименте, были приобретены в лаборатории Vital River (Пекин, Китай). Различные типы опухолевых клеток, упомянутые выше, были привиты различным типам мышей для получения соответствующих опухоленосных мышей следующим образом:

B16F10 был выбран из 6-8 недельных самок мышей C57BL/6, LLC был выбран из 6-8 недельных самок мышей Balb/c, PAN02 был выбран из 6-8 недельных самок мышей C57BL/6J, H22 был выбран из 6-8 недельных самок мышей C57BL/6, CT26 был выбран из 6-8 недельных самок мышей Balb/c, MFC был выбран из 6-8 недельных самок мышей BALB/c-nu/nu, GL261 был выбран из 6-8 недельных самок мышей C57BL/6.

Вышеописанную суспензию клеток инокулировали в подмышечные впадины передних конечностей мышей из расчета 1×10⁶ опухолевых клеток на мышь (т.е. 100 мкл суспензии клеток на мышь); когда средний объем опухолей превышал 100 см³ (разница в объеме опухолей между особями не превышала 10%), мышей случайным образом делили на следующие группы (по 8 мышей на группу):

группа малых молекулярных препаратов: соединения 4, 5, 6 и 7 (из которых соединение 7 было контрольным) вводились ежедневно перорально в дозе 150 мг/кг веса тела;

группа моноклональных антител к PD-1: моноклональные антитела к PD-1, внутрибрюшинная инъекция 10 мг/кг массы тела каждые три дня;

группа совместного введения: малые молекулярные препараты совместно с моноклональными антителами к PD-1 вводили мышам в соответствии с вышеописанными методами введения и дозировкой.

В конце эксперимента мышей умерщвляли путем эвтаназии, а опухолевые ткани собирали, определяли их объем и вес, чтобы рассчитать коэффициент ингибирования опухолей.

Коэффициент ингибирования опухолей = (1 - вес опухолей в группе лечения/вес опухолей в группе сравнения)*100%

Результаты эксперимента приведены в таблице 1 ниже.

Таблица 1. Коэффициент ингибирования ряда опухолей каждой тестируемой группы

Группа введения	Коэффициент ингибирования опухолей / %
Группа введения	B16F10	LLC	PAN02	H22	CT26	MFC	GL261
Моноклональные антитела к PD-1	18	11	0	41	8	12	1
Соединение 4	23	24	22	26	31	27	23
Соединение 5	24	26	19	31	52	44	19
Соединение 6	31	29	31	39	41	52	29
Контрольное соединение 7	41	44	43	52	60	38	39
Соединение 4+PD-1	87	90	88	83	84	85	80
Соединение 5+PD-1	87	69	75	86	84	85	80
Соединение 6+PD-1	87	90	89	88	87	91	89
Соединение 7+PD-1	67	52	66	49	65	45	46

Как видно из Таблицы 1, совместное применение соединений 4, 5 и 6 с моноклональными антителами к PD-1 привело к тому, что опухолевые клетки мышей B16F10, LLC, PAN02, H22, CT26, MFC и GL261, которые изначально не реагировали или слабо реагировали на моноклональные антитела к PD-1, значительно ответили на иммунотерапию моноклональными антителами к PD-1, и, в частности, это привело к тому, что клетки PAN02, изначально совершенно не реагировавшие на моноклональные антитела к PD-1, или клетки GL261, крайне не реагировавшие на моноклональные антитела к PD-1, стали ингибировать опухоли на 89% (группа совместного применения соединения 6), и даже для других опухолевых клеток коэффициент ингибирования опухолей увеличился примерно в 9 раз по сравнению с группой моноклональных антител к PD-1; более того, коэффициент ингибирования опухолей соединениями 4, 5 и 6, совместно принимаемыми с моноклональными антителами к PD-1, был увеличен примерно в 4 раза по сравнению с группой, принимавшей одно соединение; кроме того, коэффициент ингибирования опухолей соединениями 4, 5 и 6, совместно принимаемыми с моноклональными антителами к PD-1, также был значительно выше, чем у контрольного соединения 7, совместно принимаемого с моноклональными антителами к PD-1; все это указывает на то, что совместное применение соединений настоящего изобретения с моноклональными антителами к PD-1 значительно усиливает ответ опухолевых клеток на моноклональные антитела к PD-1, а также значительно повышает ингибирующие опухоли эффекты по сравнению с группой соединений по отдельности, т.е. комбинированная терапия проявляет значительный синергетический эффект и демонстрирует очень сильную противоопухолевую активность.

Наконец, следует отметить, что вышеописанные варианты осуществления используются только для иллюстрации технических решений настоящего изобретения и не являются их ограничением; хотя изобретение подробно описано со ссылкой на вышеописанные варианты осуществления, оно должно быть понятно специалистам в данной области: можно модифицировать технические решения, описанные в вышеописанных вариантах, или сделать эквивалентную замену некоторых технических признаков; и эти модификации или замены не выводят сущность соответствующих технических решений из духа и объема технических решений настоящего изобретения.

Claims

1. Производное сесквитерпена или его фармацевтически приемлемая соль, отличающиеся тем, что производное сесквитерпена выбрано из группы соединений:

и

где фармацевтически приемлемая соль производного сесквитерпена представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из:

и

2. Способ приготовления производного сесквитерпена формул 1-3 или его фармацевтически приемлемой соли, включающий синтез производного сесквитерпена следующим образом:

при этом Sol. является растворителем;

TBHP представляет собой трет-бутилгидропероксид;

mCPBA представляет собой м-хлорпероксибензойную кислоту;

NHR₁R₂ выбран из группы, состоящей из N-метиламиноэтанола, этиленгликольамина и N-метиламинопропанола; и

1-3 представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из:

и

3. Способ приготовления по п. 2, отличающийся тем, что соли производного сесквитерпена с фумаровой кислотой синтезируют по следующему методу:

при этом Sol. является растворителем и

4-6 представляет собой соединение, выбранное из группы:

и

4. Способ по п. 2 или 3, отличающийся тем, что Sol. выбирается из одного или нескольких из дихлорметана, трихлорформа, тетрагидрофурана, метанола, этанола, толуола, ацетонитрила, этилацетата, N,N'-диметилформамида, диметилсульфоксида, воды.

5. Фармацевтическая композиция для лечения опухоли, включающая в себя производное сесквитерпена или его фармацевтически приемлемую соль по п. 1; антитела к PD-1; и фармацевтически приемлемые носители и/или эксципиенты.

6. Фармацевтическая композиция для лечения опухоли по п. 5, отличающаяся тем, что антитела к PD-1 представляют собой моноклональные антитела к PD-1.

7. Фармацевтическая композиция для лечения опухоли по п. 5 или 6, отличающаяся тем, что массовое соотношение производного сесквитерпена или его фармацевтически приемлемых солей к антителам к PD-1 составляет (1~20):1.

8. Фармацевтическая композиция для лечения опухоли по п. 7, отличающаяся тем, что массовое соотношение производного сесквитерпена или его фармацевтически приемлемых солей к антителам к PD-1 составляет 10:1.

9. Фармацевтическая композиция для лечения опухоли по п. 7 или 8, отличающаяся тем, что производное сесквитерпена или его фармацевтически приемлемые соли в той же рецептуре, что и антитела к PD-1, или в другой рецептуре.

10. Применение производного сесквитерпена или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 или фармацевтической композиции для лечения опухоли по любому из пп. 5-9 для приготовления лекарственного средства для лечения опухолей.

11. Применение по п. 10, отличающееся тем, что опухоли выбраны из меланомы, рака легкого, рака поджелудочной железы, рака печени, колоректального рака, рака желудка и глиомы головного мозга.