SA92120430B1 - طعم خال من الخلايا مضاد لفيروس مرض مارك - Google Patents

Abstract

يتعلق هذا الاختراع بطعم vaccine لوقاية الدواجن من مرض مارك Marek's Disease . يسهل الطعم الخالي من الخلايا cell free وفقا لهذا الاختراع من تناوله ويخفض من احتمالات سوء الاستخدام physical abuse .كما يتعلق الاختراع بطعوم مزدوجة التكافؤ bivalent أو عديدة التكافؤ polyvalent نتضمن كذلك فيروسات أخرى تتبع مجموعة فيروس مرض ماريك Marek's Disease virus group أي '' HVT"

Description

‎Y —_‏ — طعم خال من الخلايا مضاد لفيروس مرض ماريك الوصف الكامل ‏خلفية الاختراع : ‏يتعلق هذا الاختراع بطعم واق للدجاج من مرض ماريك ‎Marek’s Disease‏ « وبطريقة ‏تحضيره . ‏ويعتبر مرض ماريك ‎(MD)‏ مرضا خيثا ‎malignant‏ يسري في اللجهاز الليمفاوي ‎lymphoproliferative ٠ !‏ في الدجحاج ‎LA)‏ حيث يتسبب في حدوثه فيروس هربس ‎virus‏ 560068: فيروس مرض ماريك (0077. ومرض ماريك متواجد في جميع المناطق الي ‏تنتج الدواجن في كافة أرجاء العالم. ‎aly‏ تربية الدجاج تحت أنظمة الإنتاج المكثفة على ‏أسابيع وتزداد الإصابة بين عمر ‎VY‏ أسبوع و ‎YE‏ أسبوع. ‎classical ‏وقدتم التعرف على ثلاثة أنماط من مرض ماريك وهي: مرض ماريك التقليدي‎ ٠ ‏ويتميز مرض ماريك التقليدي‎ transient paralysis ‏والشلل المؤقت‎ acute MD ‏والحاد‎ MD ‏بسبب الارتشاح الليمفاوي‎ peripheral nerve enlargement ‏بتضخم الاعصاب الخارجية‎ ‏هر‎ paralysis ‏ويعتبر الثلل‎ cdemyelination ‏وانتزاع طبقة الميلين‎ lymphoid infiltration

Jove - ٠١ ‏العرض السائد اكلينيكيا. وتختلف نسبة الوفيات ولكنها في العادة تبلغ‎ ‎multiple and diffuse ‏الملرض الحاد يلاحظ وجود أورام ليمفاوية متعددة ومنتشرة‎ 3 Vo ‏وتزيد نسبة الوفيات 3 ذلك‎ visceral organs ‏ف الأعضاء الباطنية‎ lymphomatous tumours ‏بين الفراريج غير المحصنة كما قد‎ Te - ٠١ ‏النمط عن المرض التقليدي. وعادة ما تبلغ‎ ‏وتتشابه الأعراض الممرضة‎ outbreaks ‏من الدواجن في الحالة الوبائية‎ / ٠ ‏من‎ ST ‏تصاب‎ ‏الخلايا الليمفاوية‎ infiltration ‏في كل من النمطين من المرض» حيث تتضمن تكاثر وارتشاح‎ ‎Ye‏ الأم ‎T‏ المتحورة سرطانيا ‎malignantly transformed 1 - lympohblasts‏ يي الأنسجة الطبيعية؛ 3 الأعصاب الخارجية ‎peripheral nerves‏ في حالة المرض التقليدي والأعضاء الباطنية في

حالة المرض الحاد. وقد تبين أيضا ‎OF‏ فيروس مرض ماريك هو المسئول عن الالتهاب المي ‎encephalitis‏ قٍِ الفراريج الصغيرة والذي يتميز بالشلل المفاجئ ‎.sudden paralysis‏ وتنقسم فيروسات مرض ماريك من الوجهة الصلية ‎serological classification‏ إلى ثلاثة أنواع مصلية 56:01785:

-- ‏من فيروس مرض ماريك لها قدرة بمرضة‎ virulent strains ‏النوع الأول: سلالات فتاكة‎ ٠ ‏تتسبب في حدوث‎ Ul ‏كما‎ (naturally occurring ‏وهي موجودة في الطبيعة‎ pathogenic ‏بالدجاج» وسلالات ضعيفة غير ممرضة مشتق من تلك السلالات.‎ tumorigenic ‏الأورام‎ ‏من فيروس مرض ماريك موجودة في‎ nonpathogenic ‏النوع الثاني: سلالات غير ممرضة‎ ‏الطبيعة.‎

‎Ve‏ النوع الثالث: فيروس هربس ‎herpes virus‏ الخاص بالدجاج الرومي ‎(HVT) turkeys‏ وهو غير نمرض للدجاج. وهناك عدة أنواع من طعم مرض ماريك تستخدم عمليا في الوقت الحاضر. وهي تتضمن الطعوم المشحتقة من النوع المصلي الأول من سلالات فيروس مرض ماريك. وقد وججد أن المرور التسلسلي ‎serial passage‏ لتلك السلالات يؤدي إلى فقدان القدرة الممرضة

‎. ‏لها‎ immunogenicity ‏بينما لا تتأثر القدرة المناعية‎ oncogenicity ‏تعندتعمطتهم والمسرطنة‎ ١ ٠ ‏النمط‎ (HPRS - 16 ‏وقد رُحص بحاريا باستخدام الفيروسات المضعفة المشتقة من سلالات‎ (Churchill, A.E. etal ., J.

Gen.

Virol. 4 , 557, 1969) ‏لطعم مرض ماريك‎ prototype ‏الأولي‎ ‎live serotype 1 MD vaccine ‏الأول الحي‎

‎serotype 2100© Ld} ‏وفي العادة تكون فيروسات مرض ماريك من النوع المصلي‎ Ye ‏وهكذا فهي لا تتسبب في حدوث الأورام 3 الفراريج‎ cnon-oncogenic ‏غير مسرطنة‎ viruses ‏المحصنة. وبناء عليه فإن تلك الفيروسات لا تتطلب أية عمليات إضعاف صناعية بالتمرير‎ ‏تتواجد في حالتها الطبيعية‎ WY ‏ونظرا‎ ¢serial passaging artificial attenuation ‏التسلسلي‎

فإنما لا تنقلب إلى حالتها الفتاكة ‎virulent form‏ ولقد اتضح أن سلالة ‎HN-1‏ قد نحت في التحصين؛ بالإضافة إلى السلالة 1 - 83 ( البراءة الأمريكية رقم 417660074 ) حيث )23 باستخدامها في الولايات المتحدة منذ ‎pV AAT‏ وإلى الآن يتم تناول النوعان المصليان الأول ‎ally‏ من الطعوم على هيئة مستحضرات محتوية على خلايا - ‎cell‏ ‏٠ه ‎Powell, P. ©. , World’s Poultry Science Journal 42 , 205, 1986; ) associated preparations‏ ‎Witter, R.L. et al., Avian Diseases 31 , 829, 1987; Witter, R.L. et al., Avian Diseases 34‏ ‎Schat,K.

A., Internews 3, 13, 1989.‏ ;1990 ,944 , وفي المزاولة العملية فإن ذلك يعي أن تخزين ونقل الطعوم المذكورة يستوجب حفظها في النيتروجين السائل ‎liquid nitrogen‏ عند حوالي - ‎Van‏ م وتؤدي أية أخطاء في تخحزين ‎٠‏ تداول الطعم إلى نقصان فاعلية فيروسات مرض ماريك مما يؤدي إلى فشل التحصين ‎CL‏ ‏يصف طلب براءة ‎PCT‏ رقم 84/007778 ‎WO‏ لقاح ثنائي التكافؤ فعال في مقاومة الاصابة بفيروس مرض ماريك. يتم تخزين هذا اللقاح ( الطعم ) في شكل مثلج ( متجمد ‎(Frozen‏ ويتضمن فيروس النوع المصلي الثاني ‎2MD‏ سلالة 1 - 88. بالإضافة إلى سلالة 70-126 من ‎HVT‏ ‏م وعلى وجه الخصوص ففي الأقطار الي يستحيل عملياً التخزين فيها تحت النيتروجين فإنه لا يمكن استخدام طعوم مرض ماريك المحتوية على خلايا. علاوة على ذلك » ‎Obs‏ ‏الجزيغات ‎particles‏ 4:2 % على ‎MDV‏ المعلقة ‎suspended‏ 3 راسب الطعم المحتوي على خلايا ‎cell — associated vaccine precipitate‏ ¢ تتطلب خلطاً لتجانس المعلق ‎homogenization of the suspension‏ قبل تناوله. وقد يؤدي الخلط غير الكاني ‎J! inadequate‏ ‎٠‏ احتمال ‎dot]‏ جرعة غير صحيحة من الطعم مما يتسبب في فشل التحصين. علاوة على ذلك ‎OL‏ الطبيعة الخلوية الصارمة ‎strictly cell - associated‏ لتلك الطعوم تتسبب في احتمال سوء استخدامها ‎physical abuse‏ ويتسبب تحطم ‎damage‏ الخلايا المصابة ‎(infected cells‏ نتيجة للظروف الأدن ملائمة من الحصاد ‎harvesting‏ وطرق التجميد ‎freezing procedures‏ و كذلك ا

م تذويب الامبولات ‎thawing of the ampoules‏ ومناولة الطعم ‎handling‏ في مواضع الفقس ‎hatcheries‏ في تلف الخلايا وموثّها وبالتالي فقدان عيارية الطعم ‎.vaccine titres‏ وفي الوقت الحالي يستخدم طعم ‎MD‏ مشتق من 1177 الذي فصل من الديكة الرومية ‎E> turkeys‏ لا يسبب مرضاً ‎apathogenic‏ لتلك الديكة أو للدواجن العادية ‎fowls‏ ‎o‏ ويتصل مناعياً ‎antigenically‏ بالفيروسات ‎MD‏ من النلوعين المصلين الأول والثايٍ. ويستخدم ‎HVT‏ كثيراً كطعم واق من ‎MD‏ حيث تستخدم السلالة 170126 على نطاق واسع. وغالباً ما يستخدم ‎HVT‏ على هيثة مستحضر يحتوي على ‎Ws‏ ولكن نظراً لإمكانية : استخلاص كميات فعلية من الفيروس ‎(JU‏ فإن من الممكن استخدامه على هيئة طعم ‎Cais‏ بالتجميد ‎Iyophilized‏ خال من الخلايا . وبسبب الضغط المستمر لخفض نسبة الفاقد ‎٠‏ الاقتصادي من ‎MD‏ إلى أدن مستوى فإن الحاجة تدعو إلى تحسين قدرة ‎efficacy‏ طعوم ‎MD‏ ‏«باستمرار. وقد حدثت في زماننا هذا بوجه خاص» خسائر متزايدة في صناعة الدواجن نتيجة لوجود سلالات فتاكة من فيروس مرض ماريك سواء في الولايات المتحدة أو في أوروبا. ولهذا لم يعد التحصين بفيروس هربس الخاص بالديكة الرومية ‎HVT‏ كافياً للحصول على وقاية تامة من تلك السلالات المعزولة ‎isolates‏ حي لو أستجمل بجرعات كبيرة أو بعد فترات ‎١‏ طويلة تتوسط التحصين والتعرض للإصابة. كما أن التحصين الغير كاقي نسبياً بطعم ‎HVT‏ ‏بمفرده قد يساعد على انتشار السلالات الفتاكة من فيروسات ‎MD‏ ‏| وهناك طريقة نافعة تستخدم حالياً للسيطرة على ذلك المرض الذي تحدثه الفيروسات الفتاكة ‎MD‏ وهي تتمثل 3( استخدام طعوم مزدوجة ‎bivalent‏ أو متعددة التكافؤ ‎polyvalent‏ ‏تحتوي على مخاليط ‎mixtures‏ من الطعوم الفيروسية التابعة لمختلف الأنواع المصلية ‎serotypes‏ ‏.© مجموعة فيروس 200. ولقد وجد أن الطعم المزدوج الذي يتكون من 11177و 1- 80 أو ض فيروس آخر من النوع المصلي الثاني من ‎MD‏ يحدث وقاية أفضل عن أي فيروس مكون آخر ‎Les an‏ وقد سبميت تلك الظاهرة "بالتآزر الوقائي" ‎protective synergy‏ تبعاً لآلية ‎mechanism‏ التحصين الناجم عن زيادة القدرة الوقائية لفيروس ‎MD‏ واحد بعد إضافة ‎rb‏ ‏فيروس ‎ou‏ إليه ‎(Witter, R.L.

Avian Pathology 11 , 49 , 1982 ; Witter , R.L. and Lee, L.F.‏ ا

, Avian Pathology 13 , 75 , 1984 ; Witter , R.L. , Avian Diseases 31 , 752, 1987 ; Schat , ‎.K. A. etal ., Avian Pathology 11 , 593, 1982)‏ ومن مساوئ تلك الطريقة أن الاستفادة من ذلك التآزر تتطلب تحضير الطعم على ‎da‏ مستحضر خلوي ‎cell — associated preparation‏ حيث لا يتوافر حى الآن طعم فيروس ‎. ‏الخال من الخلايا‎ MD ad ‏من النوع المصلي‎ o

Maternal Derived Antibodies , MDA ‏تتواجد الأجسام المضادة السلائفية التوليد‎ ‏الفراريج المتوفرة تجاريا‎ AMD ‏ية )4 يرورس‎ lal ١ ‏لخاصة لكا فة الأ نواع‎ ‏و/أو تحصينها بالفيروسات من‎ MD ‏بسبب تعرضها الطبيعي في أماكن التربية إلى فيروسات‎ homologous MDA ‏التجانس‎ MDA ‏الأنواع المصلية الثلاثة. وعموما فإن التأثير الضار ل‎

HVT ‏تتعارض مع الطعم‎ MDA J ‏على عملية التحصين هو أمر معروف . فالأجسام المضادة‎ ١ ‏الخالي من الخلايا ) على مستوى منخفض فقط. وهكذا فإن من المفيد التوصل إلى تحصين‎ ( ‏بغرض الحصول‎ HVT ‏تحتوي على‎ MD ‏بطعوم فيروس‎ breeder flocks ‏الدواجن في المزارع‎ alternate generation ‏والتطعيم المسمى بالجيل البديل‎ HVT ‏ضد‎ BY ‏على وقاية أفضل‎ ‏مزدوجة أو‎ HVT ‏هذا يتميز بفاعليته حي ولو طعمت بطعوم محتوية على‎ vaccination : ‏ومع ذلك فإن استخدام هذه الاستراتيجية التطعيمية يتطلب توافر طعم حال من‎ ٠ ‏معتمدة‎ ٠

Witter, ‏سن‎ and Lee, L.F. , Avian Pathology 13 , 75 , 1984 . ‏بدرجة مقنعة‎ 1 ‏من الخلايا من النوع المصلي الثاني + مثشل‎ Js MD ‏كما أن توافر طعم يحتوي على فيروس‎ ‏سوف يكون نافعا جدا في ذلك التطعيم المسمى بالجيل البديل.‎ 8-1 ‏وصف عام للاختراع‎ ‏يتميز بكونه يحتوي على‎ (MD ‏أ وفقا لهذا الاختراع» يتوفر طعم لحماية الدواجن ضد‎ ‏الخالية من الخلايا إضافة إلى حامل مقبول صيدلانيا.‎ ou! ‏من النوع المصلي‎ MD ‏فيروسات‎ ‏أن كمية‎ uh ‏من النوعين المصليين الأول‎ MD ‏وقد أوضح الاستخدام السابق لفيروسات‎ ٍ primary plaque ‏الفيروس الخالية من الخلايا ( مقاسة بالوحدات المكونة للرقائق الأولية‎ ‘vy

‎Vv —‏ _ ‎forming units : pfu‏ كانت غير كافية التركيز مما 4 يجعلها صالحة لأغراض التطعيم ( البراءة الأمريكية رقم مل اخنمفا ف ‎Witter, R.L. et al. , Avian Diseases 31 , 829, 1987; Powell,‏ ‎P.

C., World’s Poultry Science Journal 42 , 205, 1986; Schat , K.

A. , Internews 3 , 13,‏ . 1989 وقد اتضح خاصة أن فيروس 1 - ‎SB‏ لم ينتج كمية جوهرية ‎significant‏ من الفيروس الخالي من الخلايا. شرح مختصر للرسومات شكل ‎١‏ : هو رسم ‎le‏ نسجي لعدد الطيور النافقة في مختلف المراحل الي تلي حقنها ‎ole A‏ المنشطة والعدد الذي وجد ‎JUL‏ مصابا ممرض ماريك ‎(MD)‏ بعد الوفاة أو \ بالفحص المجهري.

‏شكل ؟ : حدوث مرض ماريك بعد الحقن المنشط في الفراريج المحصنة وغير المحصنة. الوصف التفصيلي

‏لقد وجد حاليا أن التمرير الإضافي ‎further passaging‏ لفيروسات ‎MD‏ من اللو 2 المصلي الثاني يؤدي إلى زيادة عظيمة في كمية الفيروسات الخالية من الخلايا وأن تلك

‎١٠ :‏ الفيروسات ‎WW‏ من الخلايا تظل محتفظة بخصائصها الوقائية ‎.protective properties‏

‏وتلك النتيجة هي الأكثر إدهاشا نظرا لما وضحه ‎Witter‏ في ,31 ‎(Avian Diseases‏ .)1987 , 752 بجلاء عن التأثير ‎Ghd‏ للتمرير الملتسلسل ‎serial passage‏ على القدرة الوقائية ‎protective efficacy‏ لفيروسات ‎MD‏ من النوع المصلي الثاني المصاحب للخلايا . كما أوضح ‎Witter‏ (الجلة ‎AAV » B15‏ ١م)‏ أن التآزر قد نقص كلما زاد عدد مرات التمرير : فلم يساعد

‎FC ‏من النوع المصلي الثاني المصاحب للخلايا على زيادة كفاءة السلالة‎ MD ‏تمرير فيروسات‎ ٠ ‏من النوع المصلي الثاني ذات العدد‎ MD ‏مقارنة بفيروسات‎ » HVT ‏من فيروسات‎ 6 .low passage number ‏التمريري المتنخفض‎

‎A —_—‏ __ ومن المدهش أنه قد وجد أن حجم الوقاية الناجمة عن ‎HVT‏ الخالي من الخلايا يزداد وبالإمكان الحصول على الطعم وفقا لهذا الاختراع أولا بالتمرير التسلسلي لفيروسات ‎MD‏ من النوع المصلي الثاني ذي العدد التمريري المنخفض» أي من فيروسات ‎MD °‏ من النوع المصلى الثاني الذي ا ينتج كمية كافية من الفيروسات الخالية من ‎Lod‏ ‏بحيث تصير مفيدة في أغراض التطعيم عندما تزرع في مزرعة خلوية ‎cell culture‏ ملائمة؛ ثم زراعة الفيروسات الى يحصل عليها هكذا ثم ‎WU‏ تحضير الفيروسات الخالية من الخلايا المحصول عليها من المزرعة القلوية على هيغة مستحضر له خحخصائص مناعية ‎immunizing‏ ‎properties‏ . ‎Vs‏ وبالإمكان اشتقاق الطعم الخالي من الخلايا وفقا لهذا الاختراع من سلالة من فيروسات ‎MD‏ من النوع المصلي الثاني» مثل سلالة ‎HPRS B-24‏ وسلالة 1 - ‎Schat et ) SB‏ .له » البراءة الأمريكية 44 ؛ متوافرة تحاريا من شركة ‎(Intervet Inc.‏ و سلالة - ‎HN‏ ‎Cho, B.R. and Kenzy, 5. 6. Appl.

Microbiol. 24 , 299 , 1972. 1‏ أو المعرولات ‎isolates‏ ‏الى وصفها ‎Witter‏ مثل سلالة 30/8/1 ( البراءة الأمريكية رقم 9718ف 84 ‎Avian‏ ‎Diseases 31 752,1987 ٠‏ وسلالة 53-1 هي السلالة المفضلة غالبا. وللتمرير المتسلسل للفيروسات ‎MD‏ من النوع المصلي الثان؛ يمكن الاستفادة من الطرق المعروفة في ذلك الجال. وباختصار» تنمي الفيروسات في مزرعة خلوية مناسبة ثم يتم حصدها منها وتطعم ‎inoculated‏ في وسط يحتوي على مزرعة خلوية طازجة. تعرض فيروسات من النوع المصلي الثاني إل عدة تمريرات متسلسلة في مزرعة خلوية يحصل على © كمية يمكن استخدامها من الفيروس الخالي من الخلايا ومن ثم تحضيره على شكل طعم. ومن ‎zu‏ المزارع الخلوية المناسبة للتمرير الملتسلسل مزرعة كل ‎inter alia‏ من كلية الفروج ّ ‎chick kidney (CK)‏ والخلايا الليفية الأم من جنين الفروج ‎chicken embryo fibroblast (CEF)‏ والخلايا الليفية الأم من جنين البط ‎duck embryo fibroblast (DEF‏ .

وبنحو ‎jal‏ يمكن زراعة فيروسات ‎MD‏ من النوع المصلي الثاني فوق طبقات مفردة ‎monolayers‏ من مزارع ‎CK‏ و ‎CEF‏ و ‎DEF‏ لمدة 4 ساعة إلى ‎tA‏ ساعة ثم الاحتفاظ بها عند ‎YY‏ م لعدة أيام مع تغيير وسط التنمية على فترات. ومحتويات ‎by‏ ‏التتمية هى على سبيل المثال ما يلى: ° وسط النور القاعدي ‎Eagles basal medium (BME)‏ وشوربة فوسفات ‎Js A‏ ‎Tryptose phosphate broth‏ وبيكربونات الصوديوم ‎sodium bicarbonate‏ ومصل جنين البقر ‎Bovine fetal serum‏ والمضادات الحيوية ‎.antibiotics‏ ‏| تعتبر الخلايا ممررة ‎passaged‏ عندما يصاب ‎ST‏ من 9675 من خلايا الطبقة المنفردة ‎monolayer :‏ بالفيروس. وعند ثماية فترة التحضين ‎cincubation period‏ تغسل كتلة الخلايا ‎٠‏ بأكملها بمحلول ملح فوسفات منظم ‎phosphate-buffered saline‏ ثم تعلق مع ‎trypsin‏ ويعاد . تعليقها في كمية صغيرة من وسط الزراعة ثم تعاد تنميتها على ‎den‏ طبقة منفردة كما سبق وصفه. يعتمد عدد التمريرات المتتالية على كمية الفيروس الخالي الي ‎Fat‏ ‏عليها من المزرعة وعلى الاحتفاظ بالخصائص المناعية والمعدية ‎immunogenic and infectious‏ ‎properties‏ للفيروس العابر. وبالإمكان غسل خحلايا العبور الأخير ثم تعليقها في الترريسين و وطردها مركزيا ‎centrifuged‏ 5 تعليقها 3 كمية صغيرة من وسط التتمية المححوي على ‎.dimethyl sulfoxide (DMSO)‏ ويمعكر, تحميد ذلك المستحضر ببطء حئ يصل إلى درجات حرارة النيتروجين السائل )= ‎(eV‏ لكي يستخدم كفيروس استزراعي ‎.seed virus culture‏ وبمكن الحصول على مستحضرات حالية من الخلايا بشكل ‎ii all Las STI‏ »+ السالف وصسفهاء حيث تبلغ 5 ‎pfu ٠١ = ٠١ TITRE W158‏ / مل. ‎J‏ نر إن عدد التمريرات اللازمة للحصول على فيروسات ‎MD‏ من النوع المصلي الثاني الي يمكنها إنتاج كميات كافية من الفيروس الخالي من الخلايا؛ يعتمد كليا على سلالة الفيروس ‎MD‏ من التنوع المصلي الثاني والكمية المرغوبة أو تركيز الفيروس الخالي من الخلايا.

- ١. ‏من النوع المصلى الثاني الي‎ MD ‏يتراوح عدد التمريرات النموذجية من فيروسات‎

Yop YA ‏و 40 يفضل بين‎ Yo ‏تلزم لتحضير طعم وفقاً لهذا الاختراع بين‎ ‏من النوع المصلي‎ MD ‏من فيروس‎ roller cultures ‏تنمى مزارع دورية‎ «Ud ‏وتبعاً‎ ‏وذلك بتطعيمها بفيروس معه خلايا أو خال من الخلاياء يتم‎ (CEF ‏الثاني المزروع في خلايا‎ ‏ساعة من التحضين.‎ YE ‏الحصول عليه كما سلف وصفه؛ بعد‎ ٠ dst 5 ‏ثم‎ supernatant ‏وبعد فترة تحضين تبلغ عدة أيام أخرى يلقى الوسط الرائق‎

SS ‏وبعدئذ يمكن ترسيب الخلايا بالطرد المر‎ versene ‏المخلوط مع‎ trypsin ‏الخلايا‎ ‎| ‏يلقى الرائق.‎ (deposited cells iw A ‏ولتحضير مستحضر حال من الخلايا يتم تعليق الخلايا‎ ‏أو‎ «phosphate — buffered saline (PBS) ‏مثل ملح الفوسفات - المنظم‎ buffer ‏محلول منظم‎ ٠

Bovamik et al, J. SPGA ‏وهي‎ Stabilizer ize ‏يفضل في وسط يحتوي على مادة‎ ‏الى تعتبر أكثر المواد المثبتة تفضيلا.‎ Bacteriology 59, 509 1950 ‏فوق‎ olor sll ‏بعدة طرق مثل استخدام‎ cell disruption ‏وبالإمكان تمزيق الخلايا‎ ‏ويمكن تقييم الخلايا السليمة‎ freeze-thaw ‏كزري مع التجميد‎ As kl ‏أو‎ sonication ‏الصوتية‎ ‏ويمكن تعبفة‎ hemocytometer ‏المتواجدة بفحصها في جهاز عد خلايا دموية‎ intact cells ٠ ‏ض المستحضر الناتج من الموجات فوق الصوتية أو المجمد والمطرود مركزياً؛ في قنينات ملم ثم‎ ‏وقبل التجفيف‎ EDTA ‏إذا رغب في ذلك في وجود‎ freeze — drying ‏تجفيفه بالتجميد‎ .centrifugation ‏أو بالطرد المر كزي‎ filtration ‏تنتزرع البقايا الخلوية اختيارياً بالترشيح‎ ‏من النوع المصلي الثاني الي حصل عليها بالطريقة‎ MD ‏وبالإمكان خلط الفيروسات‎ ‏أو فيروسات غير منشطة‎ live viruses ‏السالف وصفها مع طعوم على هيئة فيروسات حية‎ ٠ .inactivated viruses ‏وبالإمكان تحضير الطعوم المحتوية على فيروسات حية وتسويقها على هيفة معلق‎ ‏ويفضل احتواء الطعوم المجغفة‎ lyophilized ‏أو مسحوق بحفف بالتجميد‎ suspension

‎11١1 -‏ - ا بالتحميد على مادة مثبتة أو اكثر. والمواد المثبتة الملائمة هي على سبل ‎SPGA JL:‏ ‎(Bovarnik et al., J.

Bacteriology 59, 509 , 1950)‏ والكر بوهيدرات 05ت د ( مفل ‎sorbitol‏ و ‎mannitol‏ والنشا ‎sucrose 3 starch‏ و ‎dextran‏ و ‎(glucose‏ والبروتينات ‎proteins‏ ل( مثل ‎albumin‏ و ‎(casein‏ أو نواتج تحطيمها ‎degradation products‏ أو م المنظمات الي تحتوي على بروتينات ‎ty‏ فوسفات المعادن القلوية ‎(alkali metal phosphates‏ . وإذا ‎ty‏ في ذلك يمكن إضافة مركب له فاعلية إضافية مساندة ‎adjuvant activity‏ أو أكثر . والمركبات الملائمة لهذا الغرض هي على سبيل المثال خحلات فيتامين »— ‎vitamin — E acetate‏ على شكل مستحلب زيت / ماء و ‎aluminium‏ ‎hydroxide |‏ والفوسفات ‎phosphate‏ أو الاكسيد ‎oxide‏ والزيت المعدي ‎J—=+ ) mineral oil‏ ‎0٠‏ ل ‎Bayol‏ و )52% ‎Marcol‏ * 52 والسابونينات ‎.saponins‏ ‎Ud) ً‏ من تعطيل نشاط فيروسات ‎MD‏ هو القضاء على تكاثرها. وعموماً بمكن التوصل إلى ذلك بالوسائل الكيميائية أو الفيزيائية. ويمكن إجراء تعطيل النشاط الكيميائي ‎idles, |ّ‏ الفيروسات بالخمائر ‎enzymes‏ على ‎Jw‏ امال أو ب ‎formaldehyde‏ أو ‎propiolactone‏ - 8 و ‎ethylene - imine‏ أو مشتقاتهاء أو يعذيب عضوي ( مثل ‎halogenated‏ ‏م ‎hydrocarbon‏ ( و/أو بالمنظفات ‎detergents‏ ( مل " ألم ن 11 ‎sodium «Triton‏ ‎sulphobetain <desoxy-cholate‏ أو ‎(cetyl trimethylammonium salts‏ وعند الضرورة ‎SA‏ ‏معادلة المادة المعُطلة للنشاط فيما بعدء فالمادة المعُطلة ( المتعطلة ) ب ‎Me formaldehyde‏ ض يمكن معادلتها ‎WS. thiosulphate‏ يمكن إجراء تعطيل النشاط فيزيائيا بشكل مفضل؛ بتعريض الفيروسات إلى إشعاعات غنية بالطاقة ‎energy-rich radiation‏ مثل الأشعة فوق البنفسجية ‎UV light ٠‏ وأشعة اكس ‎X - radiation‏ أو أشعة جاما ‎radiation‏ - 58. وعندما يرغب في ذلك يمكن إرجاع الأس الهيدروجيي ‎PH)‏ إلى قيمة تناهز حوالي 7 بعد المعالجة. وعادة ما يضاف عامل مساعد ‎adjuvant‏ ( مثل الذي سبق ذكره ) كما تضاف عوامل استحلاب ‎emulsifiers‏ أو ‎asi‏ عندما يرغعب 3 ذلك ‎Tween™ Jie‏ 3 ‎Span®‏ ¢ إلى المادة الفيروسية المعُطلة النشاط. ا

‎١7 - :‏ - يتم تعاطي الطعم بجرعة فعالة ‎effective dosage‏ من العامل الفيروسي ‎viral agent‏ (أي الكمية المناعية من مادة الفيروس الخالي من ‎ly (WH‏ ُحدث المناعة ‎immunity‏ في الفروج ضد أية عدوى بالفيروس ‎MD‏ الفتاك. تعرف المناعة ‎Bly‏ حدوث مستوى عال جوهرياً من الوقاية ‎protection‏ 3( مزرعة الدواجن بعد تحصينها » مقارنة ممجموعة أخرى غير ‎des oo‏ وبالنسبة للطعوم الحية ‎OB‏ معدل الجرعة لكل فروج ‎dose rate per chick‏ قد يتراوح بين ‎١‏ - 1 لوغاريتم ‎.1to 6 logs pfu‏ وبشكل نموذجي؛ يتم إعطاء الطعم الحي ‎Wy‏ لهذا الاختراع بجرعة قدرها ‎YY‏ ‏لوغاريتم ‎pli‏ من الفيروس الخالي من الخلاياء ويفضل بجرعة قدرها 3,7 لوغاريتم ‎pli‏ من ‎٠‏ الفيروس الخالي من الخلاياء والأكثر تفضيلاً ‎de‏ قدرها 7.7 لوغاريتم ‎pfu‏ وقي حالة الإعطاء بالطريق الطبيعي ( الرش والتنقيط في العين والأذن ‎spray, eye and nose‏ ‎(drop‏ قد تُستَخدم جرعة قدرها ‎[pf "٠١ - ١٠١‏ فروج. وقد تحتوي الطعوم المعُطّلة النشاط على مكافئ من مولدات الأجسام الملضادة ‎antigenic equivalent‏ يتراوح بين ‎١‏ و ‎V‏ لوغاريتمات ‎pfu‏ لكل جرعة فروج؛ ويفضل أن ‎١‏ يتراوح بين 4 و + لوغاريتمات :8م لكل جرعة فروج» ويفضل أن يتراوح بين ؛ و أ لوغاريتمات ‎.pfu‏ ‏ويمكن إعطاء أو مناولة الطعوم وفقاً لهذا الاختراع بالرش ‎spray‏ باستخدام مركزات عالية ‎high titre‏ أو بالتنقيط في العين ‎eye drop‏ أو الأنف ‎nose drop‏ أو بطريق الم ‎orally‏ ‏)3 ماء الشرب ‎Sew‏ أو بواسطة الحقن العضلي ‎intramuscular injection‏ أو تحت الجلد ‎subcutaneous ٠‏ أو في المبيض ‎in ovo‏ عند أي عمرء بعد إن يكتسب الفروج قدرة على تكوين المناعة ‎.immunocompetence‏ وفي العادة يعطي الطعم للفروج بعد 4 7 - ‎YA‏ ساعة من الفقس ‎.hatching‏ ‏ويتمثل جانب آخر من هذا الاختراع في اتحاد ‎combination‏ فيروسات ‎MD‏ الخالية من الخلايا من النوع المصلي الثاني ‎cell - free MD serotype‏ مع فيروسات ‎HVT‏ الخالية من

‎١ ْ‏ الخلايا ‎cell - free HVT‏ على شكل طعم مزدوج ‎bivalent vaccine $I)‏ ومن المدهمش أنه قد وجد أن الفيروسات ‎MD‏ الخالية من الخلايا من النوع المصلي ‎gl)‏ قد احتفظت ‎yd;‏ ‏على مساعدة كفاءة ‎efficacy‏ فيروسات ‎HVT‏ وذلك بالرغم من زيادة مرحلة التمرير ‎stage‏ ‎.of passaging

SB ‏الثاني الخالية من الخلايا من سلاله ا‎ shal! ‏من النوع‎ MD ‏وتستخدم فيروسات‎ I) . ES ‏من‎ FRIES HVT ‏بنبحو خاص متحدة مع الفيروسات‎ ‏الذي يخلط في الطعم وفقا لهذا الاختراع» من أية سلالة‎ HVT ‏وقد يكون فيروس‎ ‏ويتضمن فيروس‎ (Intervet Inc ‏المتوافرة تحاريا من‎ ( THV 231 ‏أو‎ FC 126 ‏متوافرة مثل‎ : antigen ‏مولدا للأجسام الضسادة‎ encoding ‏تشفر‎ foreign gene ‏اختياريا مورثة غريبة‎ HVT ‏في جسم‎ insertion ‏وذلك بإقحامها‎ poultry pathogen ‏مكونات ممرضة للدواجن‎ wlll ٠ .polyvalent $I} ‏التابع فيتكون بذلك طعم عديد‎ viral genome ‏الفيروس‎ ‏الخالي من‎ MD ‏طعم‎ J] ‏كما يتضمن الاختراع طعوما متحدة تتضمن بالإضافة‎ ‏الخلايا من النوع المصلي الثاني طعوما من مادة فيروسات مشتقة من مولدات مكونات ممرضة‎ ‏من النوع المصلي الثاني‎ MD ‏أخرى للدواجن. كما يمكن إعطاء أو مناولة فيروس‎ pathogen

Newcastle ‏تتضمن فيروس مرض‎ 48 gest ‏الخالي من الخلايا متحدا مع طعم فيروس يختار من‎ ١

Infectious Bronchitis virus (IBV) ‏وفيروس التهاب الشعب المعدي‎ Disease Virus (NDV) .Infectious Bursal Disease virus (IBDV) ‏وفيروس مرض الحوصلة المعدي‎ ١ ‏مثال‎ ‎B-24 ‏من النوع المصلي الثاني 88-1 و‎ MD ‏تمرير فيروسات‎ 1 ‏ساعة‎ Y¢ ‏عمر‎ SPF ‏يطعم فيروس 1 - 53 أو 3-4 المصاحب للخلايا فوق مزارع‎ ٠

X ‏قطرها 1 سم ( ,ا‎ Falcon Petri ‏حنين فروج منماة في أطباق‎ Lod ‏مل من الطعم المحتوي عا‎ ١,١ ‏يطعم‎ . ) 087 / dish ‏خلية جنينية / طبق‎ ٠ ‏مل )ل‎ © ) tissue culture medium ‏على الأقل 3 وسط زرعَ أنسجة‎ pfu ٠٠٠ vy ‏ض‎

‎Vt — |‏ — أطباق ثم يستقر الفيروس المصاحب للخلايا على الطبقات المنفردة ‎monolayer‏ من الخلايا فيصيبها. وبعد مرور © أيام من التحضين عند ‎YA‏ م في جو من 36 اكسيد

‏الكربون ‎(CO)‏ 75 تنتزع الخلايا من الأطباق كما يلي: ‎١‏ سكب ‎da lf‏ ° ". إضافة ‎trypsin versen‏ في محلول ‎PBS‏ لفك الخلايا الملتصقة بطبق ‎Petri‏ ‏؟. إلقاء مخلوط ‎trypsin versen PBS‏ قبل تفكك الخلايا ‎cells detach‏ من طبق ‎«Petri‏ ‏؛. غسل ‎LL‏ من الأطباق بواسطة التنمية ‎.growth medium‏ يستخدم معلق الخلايا الصاحبة للفيروسات الي حصل عليها من الخطوة ؛ كطعم للتمرير ‎Ju‏ 3 حلايا ‎.CEF‏ تمرر الفيروسات 5 مرات بعد ‎law)‏ كما سبق وصفه. ومن العبور ‎٠‏ السادس ( بالإضافة إلى التمريرات السالفة ) تم ضبط فترة الحضانة فقدرت بأربعة أيام. النتائج : 83-1 ٍ تم تمرير فيروس 1 - 88 الذي حصل عليه من جامعة ‎(Comell‏ عشرة مرات بالفعل على المستقبل ( لا مرات تمرير في مزارع أنسجة في خلايا 08# و ‎(CK‏ متبوعة بتمريرتين في . ‎vo‏ فراريج 807 ثم تمريرة أخرى في خلايا 087 ). عندما عولحت الخلايا المصابة بشدة ‎heavily infected cells‏ (مستوى التمرير العاشر) في طبق ‎Petri‏ بغرض الحصول على فيروس خالي من الخلايا ثم أعيد تعليقها في ‎٠‏ مل من 0ص لم يلاحظ أي فيروس حي خالي من الخلايا في تخفيف ‎٠١‏ ' عند المعايرة. ‎Ley‏ ‏مررت 88-1 ‎YY‏ مرة بعد ‎lass)‏ من جامعة ‎cd ye 5 «Cornell‏ بالطريقة ‎L&13‏ حصل على تركيز قدره ‎pfu TTY‏ / مل من الفيروس الحي الخالي من الخلايا. وقد أنتجت فيروسات 1- 88 الى مررت ‎YU‏ مرة تركيزا يصل إلى ‎[pfu Ve‏ مل من الفيروس الحي الخالي من ‎٠ LY‏ وقد احتة حتفظت تلك الفيروسات 1 - ‎SB‏ الخالية مم الخلايا بقدرما على عدوى الفراريج وإحداث ‎Low gpd‏ الدم ‎viraemia‏ والانتشار 3 الطيور ‎Soy .‏

‎vo -‏ - الموجودة برفقة الطيور المصابة كما كانت قادرة على إحداث استجابة مناعية وقائية ‎.protective immune response‏ 3-4 عندما عولحت الخلايا المصابة بشدة من التمرير التاسع ل 24 - 3 للحصول على 0 فيروس خالي من الخلايا كما سبق وصفه؛ كان التركيز أقل من ‎٠١‏ :8م / مل. وعخدما أختبرت الخلايا المصابة بشدة من التمرير ‎Fo‏ كان التركيز المحصول عليه هو ‎[pf "٠١‏ مل. ب . تحضير طعم ‎MD‏ من فيروسات 1 - 83 الخالية من الخلايا من النوع المصلي الثانٍ طعمت مزرعتان دوريتان ‎roller culteres‏ 1790 سما ) من خلايا ‎XY ++ CEF‏ ‎٠١ ٠‏ في الوسط مع ‎١‏ مل من الفيروس المعدي المصاحب للخلايا 1 - ‎SB‏ الذي حصل عليه بالطريقة السالفة الذكر» بتركيز ‎[pfu ٠١ gh‏ مل بعد ‎YE‏ ساعة من التحضين. وبعد فترة تحضين إضافية بلغت © ‎oll‏ القي الوسط الرائق ‎supernatant medium‏ ثم أحذت الخلايا مخلوط ‎trypsin versene‏ رسبت الخلايا بالطرد المركزي ثم القي المحلول الراشق وخلطت الخلايا مع ‎١8‏ مل من المثبت 8068 ثم عرضت للموجات فوق الصوتية لمدة ‎١‏ 3 ثانية. عبئ ‎١‏ المستحضر المعالج بالموجات فوق الصوتية في قنينات سعة كل منها ‎١‏ مل ثم جفف بالتجميد ‎freeze dried |‏ التركيز قبل ‎Titre pre‏ التجفيف بالتجميد ‎[pfu ٠‏ مل. التر كيز بعد ‎Titre post‏ التجفيف بالتجميد ‎pfu"‏ / مل. ‎Y.‏ ‏مثال ؟ كفاءة طعم ‎MD‏ من النوع المصلي الثاني الخالي من الخلايا. ‎١١ 0‏

‎١١ -‏ - طعمت ثلاثة مجموعات من الفراريج القابلة للعدوى بالفيروسات ‎MDA‏ من الأنواع المصلية الثلاثة 3 ‎serotype 1, 2 and‏ بجرعات مختلفة من فيروس 1 - 83 الخالي من الخلايا عند عمر يوم واحد ( بالحقن بالعضل :1/0 ). وقد كاتنت الجرعات المستخدمة هي ‎pa ١76‏ / فروج و ‎pfu tle‏ فروج و ‎pfu ٠١7١‏ فروج. ° اختبرت كفاءة الطعوم بتحديد نسبة الفيروسات في الدم ‎.viraemia‏ ونظراً لثبوت انتشار العدوى بين الفراريج غير المطعمة عندما تخالط فراريج محصنة ب 1 - ‎SB‏ ‏ض (تمرير مرتفع ‎(high passage‏ وذلك بنسبة ‎١‏ إلى 7 من الطيور المتعايشة في عمر أسبوعين بعد : التطعيم ‎postinoculation‏ حيث كانت جرعة الطعم ‎Vaccination‏ هي ‎pfu ٠‏ من الفيروس الصاحب للخلايا ‎ccell - associated virus‏ وذلك من التجارب السابقة » فقد قررنا ألا نختبر ‎٠‏ انتشار الفيروس بالدم بعد أسبوعين. أحذت مساحات جلدية بعد مرور فترة أسبوع وأسبوعين من التطعيم ¢ احتيرت بالطرق القياسية فوق خلايا ‎CEF‏ لوجود فيروس 1 - ‎SB‏ خضعت المزارع لمدة أسبوع قبل أن ‎(Ls‏ وقد دونت النتائج في جدول ‎١‏ حيث تبين أن معدل الأخذ في الفراريج الي أعطيت ‎pfu ١796‏ / فروج كان 700 على الأقل,» بينما أصبحت كافة الفراريج حاملة ‎vo‏ للفيروسات في دمائها بعد التطعيم بجرعة 4760 ‎[pfu‏ فروج أو ‎١57١‏ :8م / فروج. جدول ‎١‏ ‏0 ‎Vaccine dose‏ عشر من التطعيم ‎post vaccination (p . v)‏ : ‎a/e pfu Y V3‏ ‎٠١٠ pfu ٠‏ ‎oY.‏ لتقم ل / 7

‎~\Y -‏ مثال ؟ مقارنة المناعة الناجمة عن طعم ‎HVT‏ الخالي من الخلايا مع المناعة الناجمة عن الطعم / ‎HVT‏ ‏88-1 في الفراري يج موجبة ال ‎MAD‏ ‏الفيروسات- كانت سلالات الفيروسات المستخدمة كما يلى: ‎٠‏ ]117 - وهي عبارة عن سلالة ‎PVITHV‏ من شركة ‎Intervet‏ ‏53-1 - مررت تلك السلالة حي أصبح الفيروس سريع النمو ‎rapidly growing‏ وأطلق فيروسات خالية من الخلايا. : حضرت المستحضرات الخالية من الخلايا بتعريض الخلايا الملصابة ‎CBF‏ للموجات فوق الصوتية في مثبت ‎.SPGA‏ 0" قسمت فراريج عمرها ؟ - ؟ أياء وتحمل أجساما مضادة بالوراثنة ‎maternally‏ ‎derived antibody (MDA)‏ إلى ‎ole gest BDU‏ كما يلي: المجموعة أ بحت فروج 4 تجل + . المجموعة ب ‎EY‏ فروج طعمت ب ‎[pfu ٠٠٠١‏ فروج من الطعم ‎HVT‏ ‎dese‏ 47 فروج طعمت ب ‎[pfu ٠٠٠١‏ فروج من الطعم ‎HVT‏ ‎Vo‏ ومعه ‎pfu You‏ / من فيروس ‎SB-1‏ ‏وعند عمر 9 أيام أعطيت كافة المجموعات الفيروس الفتاك ‎\RBIB‏ خلال 55 التحربة كانت بعض الفراريج تذبح بين الفترة والأخرى في كل مجموعة بغرض تخفيف التزاحم في الأقفاص. فحصت كافة الفراريج الي ماتت أو ذبحت بالعين المجردة ‎macroscopic‏ ‏وبالمجهرة ‎microscopic‏ لتقييم الإصابة يمرض ماريك ‎(MD)‏ وبعد مناولة الفيروس الفتاك مات 3 أحد الفراريج في اليوم الرابع من كل مجموعة ‎ag‏ كما مات 0 فراريج بين اليوم الخامس . واليوم التا سع من المجموعات غير المحصنة . وقد اتضح من الفحص المجهري النلسيجي ‎histological examination‏ ضمور ليمفاوي ‎lymphoid depletion‏ خاصة في الكيس الزلالي

- ١- ‏أن الوفيات‎ GB ‏أيضا. تبين تلك الملاحظات مع توقيت‎ thymus ‏والغدة الثيموسية‎ bursa

MD ‏بسبب‎ cytolytic effects ‏نتجت عن تأثيرات التحلل الخلوي‎ ‏عدد الطيور الي ذبحت في كل مرة بعد‎ ١ ‏يوضح الرسم البياني النسيجي في شكل‎ ‏تعرضها للفيروس الفتاك» عدد الطيور الي أصيبت بعدئذ بمرض ماريك بالفحص المجهري‎ ‏قبل أو بعد الموت.‎ histological examination ‏النسيجي‎ 0 ‏النسيجي في شكل ؟ حدوث مرض ماريك بعد تعرض‎ GL ‏ويوضح الرسم‎ ‏الفراريج المحصنة وغير المحصنة للفيروس الفتاك.‎ ‏وقد لوحظ أن مرض ماريك قد حدث في المجموعة الغير محصنة بدرجة كبيرة‎ ‏في © فراريج من بين السبعة الي‎ MD tumours ‏شكلا ١و 7 ). وقد شوهدت الأورام‎ ( ‏بعد التعرض للفيروس الممرض. وقد بدأت الوفيات بسبب مرض ماريك‎ ١١ ‏قتلت في اليوم‎ ٠ ‏فراريج‎ A ‏بعد التعرض ذبحت‎ YA ‏بعد التعرض للفيروس الممرض. وفي اليوم‎ ١١ ‏في اليوم‎ ‏بعد التعريض ذبحت كافة الطيور الثمانية المتبقية حيث أن اثنين متها‎ TY ‏مريضة»؛ وفي اليوم‎ ‏من أورام‎ ales ‏ض كانت تبدو مريضة بشكل حاد. وقد تبين أن تلك الستة عشر طيراً كانت‎ ‏طائر اتضاح أن خمسة‎ YY ‏مرض ماريك في الكبد والكلية وأعضاء أخرى. ومن بين بجموع‎ ‏قد أصيبت‎ YV Oly cytolytic MD ‏منها قد ماتت بسبب "مرض ماريك المحلل للخلايا‎ ١ ‏نفسه. ذبحت الفراريج الأربعة الي لم تظهر عليها‎ MD ‏بأورام مرض ماريك أو ماتت بسبب‎ ‏من التعرض» وذلك لإعطائها فرص لظهور مرض ماريك عليها.‎ ١١ ‏أية أعراض بعد اليوم‎ .nonspecific causes ‏مات أحدها لأسباب غير نوعية‎ macroscopic ‏مرئية بالعين‎ MD ‏ظهرت أورام‎ (HVT ‏المجموعة الي أعطيت طعم‎ 3) ‏من الفراريج الي ذبحت وفي فروجين من الذين‎ ٠١ ‏في ؟ من‎ ١ ‏أولاً في اليوم‎ tamer ‏في‎ post mortem Ws ‏ماتوا في ذلك الوقت. وتبين من فحص الفراريج الخمسة المريضة بعد‎

MD ‏فراريج من مرض‎ ١ ‏وقد مات‎ MD ‏من أورام‎ ales ‏واليوم 47 أنما كانت‎ YY ‏اليوم‎ ‏يوماً من التعرض ولم تظهر عليها أية أعراض‎ oF ‏طيور فقتلت بعد‎ A ‏اثناء التجربة. وبقيت‎ ‏بعد ذبجها أو موقا‎ VT ‏لمرض ماريك. ومن بين بجموع 47 فروج؛ ظهرت الأورام في‎

-و١-‏ بسبب مرض ماريك. ولم تظهر ‎A‏ أعراض ‎lesions‏ في العشرة فراريج الي ذبحت في اليوم ‎١‏ بعد التعرض حيث ذبحت ‎A‏ منها في اليوم ‎7١‏ و 8 في اليوم 57 بعد التعرض للفيروس الممرض. . كان انتشار مرض ماريك في المجموعة المحصّنة ‎ULE‏ منخفضاً جداً حيث أن ‎ab‏ ‎٠‏ واحداً فقط وجد به أورام مرض ماريك في الكبد عندما قتل في اليوم ‎oF‏ بعد التعرض للفيروس الممرض. وقد مات 4 كتاكيت ( فراخ ) من إجمالي 47 كتكوت لأسباب غير محددة» أحدها ربما مات بسبب التحلل الخلوي لمرض ماريك. لم توجد أضرار لمرض ماريك في ‎٠١‏ كتاكيت تم قتلها في اليوم ‎١١‏ بعد التعرض للفيروس الممرض» وتم قتل ‎١١‏ كتكوت عند اليوم ‎YY‏ بعد التعرض للفيروس الممرض» و ‎CSS‏ تم قتلها في اليوم 47 بعد ‎٠‏ التعرض للفيروس الممرض و ‎١7‏ كتكوت من ‎VE‏ كتكوت تم قتلها في اليوم ‎oF‏ بعد التعرض للفيروس الممرض. تبين النتائج أن الطعم المزدوج الخالي من الخلايا ‎SB-IHVT‏ يحدث درجة وقائية كبيرة ضد فعالية فيروس ‎RBIB‏ الشديدة عندما تتعرض فراريج الشواء الحاملة للأجسام المضادة ‎MDA‏ من النوعين المصليين الثاني والثالث» لذلك الفيروس. كما يحدث طعم ‎HVT‏ ‎vo‏ وقاية جوهرية ضد التعرض الشديد لذلك الفيروس» غير أن حوالي 797 من الفراريج قد ظهرت عليها بعض أعراض مرض ماريك.

ض ويجب ملاحظة أن أعراض مرض ماريك قد ظهرت بشدة على غالبية الفراريج غير المحصنة الي استمرت على قيد الحياة خلال 4 أسابيع من التعرض ولذلك تم قتلها جميعاً في اليوم ‎YY‏ بعد التعرض. وعند إتمام التجربة في اليوم 57 من التعرض لوحظ أن الفراريج الي

© طعمت بالطعم المزدوج كانت أثقل وزناً عن الي طعمت ب ‎HVT‏ وحده. وقد كان ذلك مدهشاً نظراً لأنه لم تظهر على أي واحد من الفراريج الثمانية المطعمة أية أعراض أو إصابات لمرض ماريك بعد ذبحه وفحصه. ‎Any‏

.ل مثال 6 مقارنة المناعة الناجمة عن طعم فيروس 88-1 الخالي من الخلايا وطعم 11771/83-1 في الفراريج الي لا تحمل أجساما مضادة لمرض ماريك. طعمت فراريج ‎SPF‏ عمر ‎٠١‏ يوماء — ‎pfu Yoo‏ من فيروس 88-1 المجغف بالتجميد والخالي من الخلاياء تحت ‎cdl‏ بعد حله ‎reconstituted‏ بمحلول ‎SPGA‏ بجرعة قدرها ١ر١‏ مل / فروج. حقنت بجموعة ثانية من الفراريج ب ‎٠٠0‏ نم من طعم 83-1 مع ‎٠‏ دم من طعم فيروس 1171. بعد أسبوع ‎lg‏ عرضت تلك الفراريج مع عشرين ا فروجاً أخرى غير محصنة ‎unvaccinated‏ ومن المزرعة ‎WEIS‏ والعمر ذاته» للفيروس الممرض بحقنها في العضل ( .8د ) بسلالة ‎RBIB‏ العنيفة. وعلى مدى فترة طولًا 6 أسابيع حسب عدد ‎٠‏ الفراريج الي ماتت بسبب مرض ماريك في كل مجموعة. جدول ‎Y‏ ‎ies‏ ضبط النتائج ‎٠ control‏ 53-1 7/1 ‎oo HVT/SB-1‏ صفر ‎Yo‏

Claims (1)

1. ‎YY -‏ - عناصر الحماية ‎-١ ١‏ لقاح ‎a vaccine‏ لوقاية الدواجن من مرض "ماريك" ‎Marek’s Disease‏ ¢ ‎Y‏ يتميز باحتوائه على فيروسات مرض ماريك من النوع المصلي الثاني حالية من ؤ الخلايا ‎«cell — free Marek’s Disease serotype 2 viruses‏ مع مادة ‎AL‏ مقبولة ¢ من الناحية الصيدلانية ‎.a pharmaceutically acceptable carrier‏ ‎Y \‏ -اللقاح ‎a vaccine‏ وفقا لعنصر الحماية ‎any)‏ باحتوائه على فيروسات ‎SB -1 Y‏ الخالية من الخلايا ‎.cell — free 83-1 viruses‏ ‎١‏ - اللقاح ‎a vaccine‏ وفقا لعنصر الحماية ‎١‏ ويتميز ‎a Sel‏ على 7 فيروسات 3-4 الخالية من ‎.cell — free SB-1 viruses LM‏ ‎١‏ - اللقاح ‎a vaccine‏ وفقا لعنصر الحماية ‎»١‏ ويتميز باحتوائه على ؟,؟ "ا لوغاريتم ‎logs pfu‏ لكل جرعة ‎per dose‏ على الأقل. ‎١‏ 0 - اللقاح ‎a vaccine‏ وفقا لعنصر الحماية ؛» ويتميز ‎adel‏ على ‎Y‏ ا, "لوغاريتم ‎logs pfu‏ لكل > ‎per dose is‏ على الأقل : 1 - اللقاح ‎a vaccine‏ وفقا لعنصر الحماية ‎co‏ ويتميز باحتوائه على ‎¥,V‏ ‏لوغاريتم ‎logs pfu‏ لكل جرعة ‎dose‏ توم على الأقل. ‎-Y ١‏ اللقاح ‎a vaccine‏ وفقا لعنصر الحماية ‎l=)‏ ويتميز أيضا باحتواثه 7 على ‎HVT‏ خالية من الخلايا ‎cell — free HVT‏

   — yy — ‎A ١‏ - اللقاح ‎a vaccine‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎١‏ - 7؛ ويتميز بكونه يحففاً ‎Y‏ بطريقة التجميد ‎lyophilized‏ ‎١‏ 4 - طريقة لتحضير لقاح ‎a vaccine‏ لوقاية الدواجن من مرض " ماريك " ‎Marek’s Disease Y‏ + وتشتمل على الخطوات الآتية : ‎(Fy |‏ إنماء فيروسات مرض " ماريك " من النوع المصلي الثاني ‎aserotype2‏ ‎Marek’s Disease virus 3‏ في وسط خلوي ‎cell culture‏ والذي يمكن الحصول ‎٠‏ ‏هه منه على كميات كافية من الفيروسات الخالية من الخلايا ‎cell-free viruses‏ 1 لتحضير جرعات مناعية فعالة ‎.effective immunizing dosage‏ ل ب ) تزيق الخلايا ‎disrupting the cells‏ ‎z A‏ ) ومن ثم جمع الفيروسات الخالية من الخلايا ‎cell -free viruses‏ 9 د ) يتم معابخة المادة اللتحصل عليها 3 الخطوة " ‎z‏ بإحدى الطرق الآتية ‎٠‏ على الأقل:

   ‎.١ ١١‏ تنقية ‎clarifying‏ بواسطة الطرد المركزي ‎centrifugation‏ أو الترشضيح ‎filtration VY‏ ‎VY‏ ". إضافة مادة منظمة ‎buffer‏ ‏¢\ ؟". إضافة مادة مثبتة ‎.stabilizing agent‏ ‎ot yo‏ وضع المادة في قنيئة ‎vial‏ ‎Lo 1‏ التجفيف بطريقة التجميد ‎freeze-drying‏ ‎٠ ١‏ - استخدام فيروسات مرض ماريك من النوع المصلي الثاني الخالية من 1 الخلايا ‎cell - free Marek’s Disease serotype 2 viruses‏ لتحضير طعم ‎v‏ لواقية الدواجن من مرض " ماريك " ‎Marek’s Disease‏ ‎hy