SE410357B - Elektroforesapparat - Google Patents

Description

, l5 20 25 30 35 '7712499-8 2 lösningar vid de aktuella temperaturerna, i motsats till metaller, har en med temperaturen ökande konduktans erhålles vid dålig kyl- 7 ning en positiv återkoppling, det vill säga då temperaturen vid elektro- foresmediets kanter stiger i förhållande till temperaturen vid mediets mitt på grund av den dåliga kylningen kommer lösningen vid kanterna att bli mer ledande. Ökningen av konduktiviteten förorsakar en högre ström- styrka i denna del av mediet och detta ger naturligtvis upphov till ytterligare temperaturstegring. Detta kan i extrema fall resultera i ett förhållande där praktiskt taget all effekt som påföres mediet ut- vecklas i två smala zoner nära kanten vilket resulterar i en extrem krökning av det elektriska fältet och motsvarande krökning av de subs- tansskikt man önskar separera vid elektroforesen. Denna effekt har ob- serverats vid isoelektrisk fokusering i akrylamid och sephadexgeler och i vattenlösningar, i kärl med varierande längd-bredd förhållanden och varierande tjocklekar. Fenomenet har även iaktagits vid akrylamidgel- elektrofores som utnyttjar konventionella buffertsystem. Temperatur- mätningar har bekräftat att man vid ett område några mm från kärlets kant kan erhålla temperaturer som överstiger temperaturen i elektrofores- mediets mitt med så_mycket som 70.

Avsikten med föreliggande uppfinning är därför att åstadkomma en elektro- foresapparat vid vilket det ovan nämnda kylproblemet elimineras. Upp- finningens kännetecken framgår därvid av de efter beskrivningen följande patentkraven.

Uppfinningen kommer nu närmare att förklaras under hänvisning till bi- fogad ritning på vilken: Fig l schematiskt visar en första utföringsform av en elektroforesappa- rat enligt uppfinningen: Fig 2 schematiskt visar en andra utföringsform av en elektroforesappa- rat enligt uppfinningen: Fig 3 - 6 schematiskt åskådliggör de effekter som kan erhållas med ut- nyttjande av anordningen enligt uppfinningen.

I fig l betecknas med l den kylda bottenplattan i ett elektroforeskärl.

Kylningen åstadkommes lämpligen genom att bottenplattan är försedd med ett hålrum genom vilket ett kylmedium exempelvis vatten pumpas. Elektro- foreskärlet är vidare försett med två sidoväggar 3 och 4 gjorda av ett elektriskt isolerande material, exempelvis glas eller plast. Enligt uppfinningen är därvid dessa sidoväggar utformade så att de har en kil- 10 15 20 25 30 35 7712499-8 x formad tvärsnittsyta. Elektrdforeskärlet innehåller ett elektrofores- medium 2 i vilket elektroforetiska separationen utföres därigenom att en spänning pålägges mediet från tvâ i figuren ej visade med elektrod- anordning. Elektroforesriktningen är därvid markerad med pilen 5.

I fig 2 visas en andra utföringsform av en elektroforesapparat enligt uppfinningen, varvid denna skiljer sig från den i fig 1 visade däri- genom att den även är försedd med en övre kyld yta 8 och de elektriskt isolerande sidoväggarna 6 och 7 har en tvärsnittsarea som är symmetriskt kilformad i förhållande till de bägge kylande ytorna.

Vid de i fig 1 och 2 visade anordningarna åstadkommes med hjälp av de kilformade sidoväggarna att det totala strömflödet vid sidoväggarna minskar varvid minskningen uppenbarligen är beroende av hur långt kilen tränger in i mediet. I praktiken har det visat sig att man vid anord- ningar enligt fig l lämpligen utnyttjar en toppvinkel, hos kilen på mellan 45 och 60 grader, företrädesvis ca 45 grader medan vida anordning- en vid fig 2 kilens toppvinkel bör ligga mellan 45 och 60 grader, före- trädesvis omkring 60 grader.

De i figurerna 1 och 2 visade anordningarna har testas genom protein- separation i 1 cm tjock akrylamidgel meddelst isoelektrisk fokusering.

I vissa fall har därvid kilen åstadkommit en så effektiv kylning vid kanten att proteinbanden avlänkas åt motsatt håll jämfört med vad som normalt är fallet. Detta kan emmellertid kompenseras genom en ökning av strömstyrkan. Pâ motsvarande sätt kan man om krökningen av banden ej helt elimineras med hjälp av de kilformade väggarna sänka ström- styrkan så att banden blir parallella med elektrodväggarna. Detta är emmellertid ej möjligt utan användande av kilformade väggar eftersom man i så fall tvingas sänka strömstyrkan så att separationen tar orimligt lång tid. Det sålunda beskrivna förloppet illustreras i fig 3 - 6 som visar hemoglobinbandet (Hgb) en proteinseparation, varvid fig 3 visar bandets utseende utan användande av kilformade sidoväggar, fig 4 visar bandets utseende med användande av väggar men med för låg strömstyrka, fig 5 visar samma separation med för hög strömstyrka och fig 6 visar separationen med rätt avvägd strömstyrka.

Föreliggande uppfinning avser således en förbättrad elektroforesapparat varvid apparaten är försedd med kilformade sidoväggar tillverkade av v 7712499-8 4 s ett icke ledande material varvid väggens tjocklek är minst intill den eller de kylda ytorna och störst vid den punkt som ligger längst från ytorna. Härigenom är det möjligt att eliminera de kräkningar av elektro- foresbandenrvid elektroforeskärlets kanter som annars alltid uppkommer.

Claims (4)

1. 0 15 7712499-8 Patentkrav l. Elektroforesapparat försedd med tvâ ändväggar, som uppbär varsin elektrodanordning, två sidoväggar samt en kyld bottenyta, varvid väggarna och botten bildar en kammare avsedd att innehålla ett ledande medium, k ä n n e t e c k n a d d ä r a v, att nämnda sidoväggar är kilformade och gjorda av ett elektriskt icke ledande material varvid väggens tjocklek är mins intill den kylda bottenytan och störst vid den punkt som ligger längst bort från ytan.

2. Elektroforesapparat enligt patentkrav l, k ä n n e t e c k n a d d ä r a v, att kilens toppvinkel är ungefär 45 grader.

3. Elektroforesapparat enligt patentkrav l, k ä n n e t e c k n a d d ä r a v, att apparaten även är försedd med en kyld ovanyta och sido- väggarnas maximala tjocklek föreligger mitt emellan ovanytan och botten- ytan.

4. Elektroforesapparat enligt patentkrav 3, k ä n n e t e c k n a d d ä r a V , att kilens toppvinkel är ungefär 60 grader. ANFÖRDA PUBLIKATIONER: