SE452371B - Elektroforetiskt forfarande - Google Patents

Elektroforetiskt forfarande

Info

Publication number
SE452371B
SE452371B SE8205386A SE8205386A SE452371B SE 452371 B SE452371 B SE 452371B SE 8205386 A SE8205386 A SE 8205386A SE 8205386 A SE8205386 A SE 8205386A SE 452371 B SE452371 B SE 452371B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
electrophoretic
acid
gel
group
polysaccharide
Prior art date
Application number
SE8205386A
Other languages
English (en)
Other versions
SE8205386D0 (sv
SE8205386L (sv
Inventor
W A Gurske
Original Assignee
Beckman Instruments Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beckman Instruments Inc filed Critical Beckman Instruments Inc
Publication of SE8205386D0 publication Critical patent/SE8205386D0/sv
Publication of SE8205386L publication Critical patent/SE8205386L/sv
Publication of SE452371B publication Critical patent/SE452371B/sv

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704—Details; Accessories
    • G01N27/44747—Composition of gel or of carrier mixture

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

452 371 2 Ett problem som föreligger i en tidigare känd baselektrofore- tisk metod för separering av LD-isoenzymer är att, såsom visas på figur l, symmetrin hos LDl-bandet icke motsvarar de andra fyra LD-banden genom att det finnes en skuldra eller puckel vid den ledande kanten av LDl-bandet.
Det skulle sålunda vara mycket önskvärt att ha en elektrofore- tisk metod för separering av LD-isoenzymer, vid vilken symmet- rin hos LDl-bandet är förbättrad till motsvarighet med de andra fyra LD-banden.
Sammanfattning av uppfinningen Föreliggande uppfinning avser ett förbättrat elektroforetiskt förfarande för analys av den relativa fördelningen av laktat- dehydrogenas-isoenzymer av den typ, varvid ett prov som skall analyseras tillföres till en elektroforetisk gel och den elektroforetiska gelen elektroforesbehandlas, och kännetecknas av att den elektroforetiska gelen innefattar a) en polysacka- rid, b) en buffert med basiskt pH samt c) en sur polysackarid och salter därav, varvid syragruppen hos den sura polysackari- den innefattar minst en karboxylgrupp. Vid denna elektrofore- tiska metod för separering av LD-isoenzymer är symmetrin hos LDl~bandet förbättrad, så att den motsvarar de andra fyra LD- -banden.
Ytterligare kännetecken och därav följande fördelar med före- liggande uppfinning framgår för fackmannen vid en genomläsning av följande detaljerade beskrivning av de föredragna utfö- ringsformerna.
Allmän beskrivning av ritningsfigurerna Figur l är en översikt av ett LD-isoenzymmönster, som visar en skuldra eller ett gupp vid den ledande kanten av LDl-bandet.
Figur 2 visar ett LD-isoenzymmönster, vilket uppvisar en kraf- tigt reducerad skuldra eller gupp vid den ledande kanten av 452 371 LD -bandet. 1 Beskrivning uv.de föredragna utföringsformerna Sura polysackarider, som kan användas enligt uppfinningen, innefattar, men är icke begränsade till, arabinsyra, traga- kantsyra, khayasyra, alginsyra, pektinsyra och linfrösyra.
Den föredragna sura polysackariden är arabinsyra.
Salter av sura polysackarider, som kan användas enligt uppfin- ningen, innefattar, men är icke begränsade till, natrium-, kalium-, kalcium- och magnesiumsalter därav. Exempel på sådana sura polysackaridsalter innefattar, men är icke begrän- sade till, gummi arabicumsyra, tragakantgummisyra, khayagummi- syra, algingummisyra, pektingummisyra och linfrögummisyra.
Polysackarider, som företrädesvis kan användas i de elektro- foretiska gelerna enligt uppfinningen, är agar och agaros.
Agarosen kan antingen vara låg-elektroendosmos-agaros, medium- -elektroendosmos-agaros eller hög-elektroendosmos-agaros. I synnerhet föredrages att polysackariden som användes i den elektroforetiska gelen enligt uppfinningen är hög-elektro- endosmos-agaros.
Företrädesvis har bufferten som användes enligt uppfinningen ett pH av ca 7 till ca 10. I synnerhet har bufferten ett pH av ca 8 till ca 9.
Den elektroforetiska gelen enligt uppfinningen kan eventuellt vidare innefatta ett konserveringsmedel. Typiska konserve- ringsmedel innefattar, men är icke begränsade till, antibio- tika, halogenerade organiska föreningar och oorganiska före- ningar. Ett lättillgängligt konserveringsmedel som kan använ- das enligt uppfinningen är natriumazid.
Den elektroforetiska gelen enligt uppfinningen kan även, om så önskas, innehålla en alkylpolyol med 2 till 6 kolatomer och 2 452 371 4 till 4 hydroxylgrupper. Lämpliga alkylpolyoler som kan använ- das enligt uppfinningen innefattar, men är icke begränsade till, etylenglykol, propandiol, butandiol, pentandiol och gly- cerol. Företrädesvis har alkylpolyolen 2 till 4 kolatomer.
De exakta koncentrationerna av de olika beståndsdelar, som användes i den elektroforetiska gelen enligt uppfinningen, är icke av kritisk betydelse. Enligt en utföringsform av uppfin- ningen innefattar emellertid den elektroforetíska gelen från ca 4 till ca l5 g/l hög-elektroendosmos-agaros; från ca 0,1 till ca 20 g/l arabinsyra; upp till 20 volymprocent etylengly- kol; upp till 5 g/l natriumazid; och en buffert med ett pH av från ca 7 till ca l0. Företrädesvis innefattar den elektro- foretiska gelen enligt denna utföringsform av uppfinningen från ca 7 till ca 12 g/l hög-elektroendosmos-agaros; från ca 5 till ca l0 g/l arabinsyra; från ca l till ca 10 volymprocent etylenoxid; från ca 0,5 till ca 1,5 g/l natriumazid; och en buffert med ett pH av från ca 8 till ca 9. Eventuellt inne- fattar den elektroforetiska gelen enligt denna utföringsform av uppfinningen ca 10 g/l hög-elektroendosmos-agaros; ca 7,5 g/l arabinsyra; ca S volymprocent etylenglykol; ca l g/l nat- riumazid; och en buffert med ett pH av ca 8,2 samt innefat- tande ca 3 g/l asparaginsyra; ca 4 g/l bicin; ca 3 g/l nat- riumbarbital; och 4 g/l 2-amino-2-metyl-l,3-propandiol.
De elektroforetiska gelerna enligt uppfinningen kan framstäl- las via godtyckliga metoder, som är välkända för fackmannen.
Se exempelvis Cawley, supra. I allmänhet framställes gellös- ningen genom sammanblandning av de olika beståndsdelar som ingår i denna under upphettning av blandningen till en tempe- ratur av ca 80 till ca l00°C. Den elektroforetiska gelen kan framställas med antingen formnings- eller gjutningsmetoder av standardtyp. Gelerna kan lagras vid godtycklig lämplig tempe- ratur, exempelvis från ca 2 till ca 40°C, företrädesvis från ca 15 till ca 26°C. Det är lämpligt att lagra de elektrofore- tiska gelerna i förslutna plasttråg tills de är färdiga för användning. 452 371 5 Prover kan pâföras på de elektroforetiska gelerna enligt upp- finningen med godtycklig metod, sosm användes enligt tidigare känd teknik, exempelvis via en mikroliter-injektionsspruta.
De elektroforetiska gelerna kan elektroforesbehandlas vid 100 volt 20 minuter. Gelerna inkuberas därefter vid en lämplig temperatur, exempelvis rumstemperatur till ca 50°C, under en lämplig tidrymd, exempelvis upp till ca två timmar, med något känt substrat som kan reagera med LD-enzymer som närvarar. Om så önskas kan gelerna sköljas i en ättiksyralösning (5 %).
Dessutom kan gelerna eventuellt torkas vid ca 80 till ca 90°C.
Följande exempel anges enbart för ytterligare åskådliggörande och är icke avsett att begränsa den beskrivna uppfinningen.
Exempel De elektroforetiska gelkompositioner, som anges i tabell I, användes var och en i följande protokollförda försök för att åskådliggöra den förbättrade elektroforetiska metoden enligt uppfinningen för separering av LD-isoenzymer och den förbätt- rade elektroforetiska gelen för användning därvid. Den enda skillnaden mellan de elektroforetiska gelerna som användes vid detta jämförelseförsök var att den elektroforetiska gelen enligt uppfinningen innehöll arabinsyra, dvs. en viss sur polysackarid, under det att den elektroforetiska gelen igke enligt uppfinningen saknade en sur polysackarid. 452 371 Försöksprotokoll Elektroforetisk metod l. Ett kontrollserum pâfördes på varje gel via en schablonmetod. 2. Geler elektroforesbehandlades vid 100 volt under 20 minuter. 3. Ett standardkolorimetriskt LD-substrat påfördes på gelerna och varje gel inkuberades vid 45°C under 30 minuter. 4. Geierna inaränkces i sæ-ig ättiksyra och 'wrkaaës vid 80-90°C. 5. Gelerna underkastades scanning i en densitometer vid 600 nm.
Resultaten som erhölls enligt ovanstående försöksprotokoll för varje gelkomposition i tabell I visas på figurerna l och 2. 452 371 ><><><><><>< w ><><><><>< H cwmcflccwwmms uwflficw Hmm xmflumuowønuxwam cmmcficcfiwmms uwflficw hm Hww H AAWNGH Hoflwcwmoumum.H|H>umE|N|ocfiEm|N v flmuflnumßäøflnums m cfløfln v muæmcfimmnmmmm m wfluøšßfiuvmc H mnæmcfinmum m~> monwmmnmm ca H\m .nmflowmwcmumwm cofluflmomëøm 452 371 8 Såsom visas på figur l ger en elektroforetisk metod för sepa- reríng av LD-isoenzymer med användning av en tidigare känd elektroforetisk gel, som saknar sur polysackarid (vari den sura delen innefattar minst en karboxylgrupp) ett LD-iso- enzymmönster med en signifikant skuldra eller gupp vid den ledande kanten av LDI-bandet. Till skillnad mot detta ger en elektroforetisk metod för separering av LD-isoenzymer med användning av den förbättrade elektroforetiska gelen enligt uppfinningen en kraftig minskning av denna skuldra eller detta gupp vid den ledande kanten av LDl-bandet.
Baserat på denna beskrivning är en mångfald andra modifikatio- ner och utföringsformer uppenbara för fackmannen. Dessa inne- fattas av uppfinningstanken.

Claims (9)

    452 371 PATBNTKRAV
  1. l. Elektroforetiskt förfarande för analys av den relativa fördelningen av laktatdehydrogenas-isoenzymer av den typ, var- vid ett prov som skall analyseras tillföres till en elektro- foretisk gel och den elektroforetiska gelen elektrofores- behandlas, k ä n n e t e c k n a t av att den elektrofore- tiska gelen innefattar a) en polysackarid, b) en buffert med basiskt pH samt c) en sur polysackarid och salter därav, var- vid syragruppen hos den sura polysackariden innefattar minst en karboxylgrupp.
  2. 2. Elektroforetiskt förfarande enligt patentkrav 1, k ä n n e t e c k n a t därav, att den sura polysackariden väljes från en grupp bestående av arabinsyra, tragakantsyra, khayasyra, alginsyra, pektinsyra och linfrösyra.
  3. 3. Elektroforetiskt förfarande enligt patentkrav 1 eller 2, k ä n n e t e c k n a t därav, att salterna väljes från en grupp bestående av salter av natrium, kalium, kalcium och magnesium.
  4. 4. Elektroforetiskt förfarande enligt något av patent- kraven 1-3, k ä n n e t e c k n a t därav, att den elektro- foretiska gelen dessutom innefattar ett konserveringsmedel, företrädesvis natriumazid.
  5. 5. Elektroforetiskt förfarande enligt något av patent- kraven 1-4, k ä n n e t e c k n a t därav, att den elektro- foretiska gelen vidare innefattar en alkylpolyol med 2 till 6 kolatomer och 2 till 4 hydroxylgrupper, företrädesvis etylen- glykol.
  6. 6. Elektroforetiskt förfarande enligt något av patent- kraven 1-5, k ä n n e t e c k n a t därav, att polysacka- riden väljes från en grupp bestående av agar och agaros.
  7. 7. Elektroforetiskt förfarande enligt något av patent- 452 371 10 kraven 1-6, k ä n n e t e c k n a t därav, att bufferten har ett pH av ca 7 till ca l0, företrädesvis från ca 8 till ca 9.
  8. 8. Elektrofcretiskt förfarande enligt något av föregående patentkrav, k ä n n e t e c k n a t därav, att man använder en elektroforetisk gel innefattande: (a) från ca 4 till ca 15, företrädesvis från ca 7 till ca 12, speciellt lO g/l hög-elektroendosmos-agaros, (b) från ca 1 till ca 20, företrädesvis från ca 5 till ca 10, speciellt ca 7,5 g/l arabinsyra, (c) upp till 5, företrädesvis från ca 0,5 till ca 1,5: speciellt 1 g/l natriumazid, (d) upp till 20, företrädesvis från ca l till ca 10, speciellt ca 5 volymprocent etylenglykol och '(e) en buffert med ett pH av från ca 7 till ca 10, företrädesvis från ca 8 till ca 9, speciellt ca 8,4.
  9. 9. Elektroforetiskt förfarande enligt något av föregående patentkrav, k ä n n e t e c k n a t därav, att man använder en gel innefattande ca 3 g/l asparaginsyra, ca 4 g/l bicin, ca 3 g/l natriumbarbitol och ca 4 g/l 2-amino-2-metyl-l,3-pro- pandiol.
SE8205386A 1981-01-19 1982-09-20 Elektroforetiskt forfarande SE452371B (sv)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/226,571 US4321121A (en) 1981-01-19 1981-01-19 Electrophoretic technique for separating lactate dehydrogenase isoenzymes and improved electrophoretic gel for use therein

Publications (3)

Publication Number Publication Date
SE8205386D0 SE8205386D0 (sv) 1982-09-20
SE8205386L SE8205386L (sv) 1982-09-20
SE452371B true SE452371B (sv) 1987-11-23

Family

ID=22849448

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8205386A SE452371B (sv) 1981-01-19 1982-09-20 Elektroforetiskt forfarande

Country Status (6)

Country Link
US (1) US4321121A (sv)
JP (1) JPH0221745B2 (sv)
DE (1) DE3231628C2 (sv)
IT (1) IT1149706B (sv)
SE (1) SE452371B (sv)
WO (1) WO1982002600A1 (sv)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1985004251A1 (en) * 1984-03-12 1985-09-26 Beckman Instruments, Inc. Electrophoretic technique for separating hemoglobin variants and improved electrophoretic gel for use therein
JPS6266153A (ja) * 1985-09-18 1987-03-25 Fuji Photo Film Co Ltd 電気泳動用媒体
US4997537A (en) * 1986-10-21 1991-03-05 Northeastern University High performance microcapillary gel electrophoresis
US5665216A (en) * 1986-10-21 1997-09-09 Northeastern University Capillary column for high performance electrophoretic separation and detection of SDS proteins and system and using the same
US4857163A (en) * 1987-07-17 1989-08-15 Beckman Instruments, Inc. High resolution electrophoretic gel and method for separating serum proteins
US5230832A (en) * 1991-01-24 1993-07-27 Brandeis University Galactomannan-agarose binary gel for nucleic acid electrophoresis
US5211574A (en) * 1992-03-13 1993-05-18 Molex Incorporated High density electrical connector assembly with improved alignment/guide means
US5371208A (en) * 1992-12-30 1994-12-06 Guest Elchrom Scientific Ltd. Preparation of cross-linked linear polysaccharide polymers as gels for electrophoresis
WO1997007395A1 (en) * 1995-08-21 1997-02-27 Trevigen, Inc. Separation medium for capillary electrophoresis
US9289306B2 (en) * 2013-03-15 2016-03-22 Catalyst Orthopaedics Llc Humeral arthroplasty
DE102013105131A1 (de) 2013-05-17 2014-11-20 Dbk David + Baader Gmbh Blowby-Einrichtung
JP2021028605A (ja) * 2019-08-09 2021-02-25 国立大学法人広島大学 電気泳動用ゲルおよびその利用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3527712A (en) * 1967-03-07 1970-09-08 Marine Colloids Inc Dried agarose gel,method of preparation thereof,and production of aqueous agarose gel
US3959251A (en) * 1970-06-25 1976-05-25 Exploaterings Aktiebolaget T.B.F. Stabilized agar product and method for its stabilization
US3956273A (en) * 1971-06-07 1976-05-11 Marine Colloids, Inc. Modified agarose and agar and method of making same
GB1435508A (en) * 1972-05-01 1976-05-12 Rech Et Dapplications Scient S Process for the preparation of crosslinked polysaccharide gels
US3947352A (en) * 1974-05-31 1976-03-30 Pedro Cuatrecasas Polysaccharide matrices for use as adsorbents in affinity chromatography techniques
SE7908454L (sv) * 1979-10-11 1981-04-12 Pharmacia Fine Chemicals Ab Medium for isoelektrisk fokusering
US4305798A (en) * 1980-04-11 1981-12-15 Bryce Allen Cunningham Method of preparative, Kohlrausch-regulated electrophoresis using polyethylene glycol derivatized trailing ions

Also Published As

Publication number Publication date
IT8219191A0 (it) 1982-01-19
JPS57502097A (sv) 1982-11-25
DE3231628C2 (de) 1987-06-04
US4321121A (en) 1982-03-23
WO1982002600A1 (en) 1982-08-05
JPH0221745B2 (sv) 1990-05-16
IT1149706B (it) 1986-12-10
DE3231628T1 (de) 1983-09-22
SE8205386D0 (sv) 1982-09-20
SE8205386L (sv) 1982-09-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4292154A (en) Buffer composition and method for the electrophoretic separation of proteins
DE69908795D1 (de) Verfahren zur isolierung von nukleinsäure und vorrichtung hierfür
DK153585A (da) Middel, testmateriale og fremgangsmaade til bestemmelse af tilstedevaerelsen af leukocyter, esterase eller protease
SE452197B (sv) Elektroforetisk gel samt anvendning av densamma
US4321121A (en) Electrophoretic technique for separating lactate dehydrogenase isoenzymes and improved electrophoretic gel for use therein
ATE315635T1 (de) Zellkonservierungsflüssigkeit und verfahren zur zellkonservierung mit dieser flüssigkeit
ATE11152T1 (de) Verfahren zur stabilisierung von peroxidase in einem fluessigen medium und so stabilisiertes medium.
CA2199835A1 (en) Method for preparing nucleic acids for analysis and kits useful therefor
Rodwell et al. Association of protein and lipid in Mycoplasma laidlawii membranes disaggregated by detergents
DE3784528D1 (de) Zusammensetzung und verfahren zur stabilisierung von dinukleotiden.
Thomson et al. On the binding of copper by hemocyanin
Ayala et al. Use of Rotofor preparative isoelectrofocusing cell in protein purification procedure
US4808288A (en) Electrophoretic gel for separating hemoglobin variants
EP0183711A1 (en) Electrophoretic technique for separating hemoglobin variants and improved electrophoretic gel for use therein
EP0189422B1 (en) Electrophoretic technique for separating hemoglobin variants and electrophoretic gel for use therein
US4696958A (en) Electrophoretic technique for separation of lipoproteins and electrophoretic gel for use therein
WO2000028314A9 (en) Methods and formulations for the separation of biological macromolecules
US4276376A (en) Creatine kinase control serum
US4321119A (en) Buffer composition and method for the electrophoretic separation of proteins
Bergweiler et al. The development and ageing of membranes from etioplasts of Avena sativa
Gallagher et al. Phenol-acetic acid-urea polyacrylamide gel electrophoresis of membrane proteins
US4292162A (en) Buffer composition and method for the electrophoretic separation of proteins
US6833060B2 (en) Electrophoresis gel support
Noordegraaf Electrophoresis of glucosaminoglycans on cellulose acetate membranes with cation electrolytes: an electrofocusing phenomenon
Kudo et al. Ion-transfer polarographic study on the sodium-ion selectivity of bis (12-crown-4) at a water/nitrobenzene solution interface

Legal Events

Date Code Title Description
NAL Patent in force

Ref document number: 8205386-9

Format of ref document f/p: F