SE463640B - Saett att analytiskt separera inositolfosfater med en kvartaer amin - Google Patents

Saett att analytiskt separera inositolfosfater med en kvartaer amin

Info

Publication number
SE463640B
SE463640B SE8902241A SE8902241A SE463640B SE 463640 B SE463640 B SE 463640B SE 8902241 A SE8902241 A SE 8902241A SE 8902241 A SE8902241 A SE 8902241A SE 463640 B SE463640 B SE 463640B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
derivatives
aqueous solution
column
inositol phosphates
inositol
Prior art date
Application number
SE8902241A
Other languages
English (en)
Other versions
SE8902241D0 (sv
SE8902241L (sv
Inventor
H Irth
Original Assignee
Perstorp Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Perstorp Ab filed Critical Perstorp Ab
Priority to SE8902241A priority Critical patent/SE8902241L/sv
Publication of SE8902241D0 publication Critical patent/SE8902241D0/sv
Priority to AU59366/90A priority patent/AU5936690A/en
Priority to EP90910163A priority patent/EP0479862B1/en
Priority to US07/778,067 priority patent/US5225349A/en
Priority to PCT/SE1990/000423 priority patent/WO1990015989A1/en
Priority to AT90910163T priority patent/ATE142786T1/de
Priority to JP2509473A priority patent/JPH04506258A/ja
Priority to DE69028531T priority patent/DE69028531T2/de
Publication of SE463640B publication Critical patent/SE463640B/sv
Publication of SE8902241L publication Critical patent/SE8902241L/sv

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
    • G01N2030/8822—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials involving blood
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/16—Phosphorus containing
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/16—Phosphorus containing
    • Y10T436/166666—Phosphorus containing of inorganic phosphorus compound in body fluid

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Description

4 \ 'v-J l »__....~ 6 C Utvecklingen hittills har resulterat i kromatografiska separationsmetoder som dock har haft allvarliga begräns- ningar då låga halter av ämnena ska separeras. Icke- -specifik absorption till glas, metallföremål och vissa kromatografikolonnmaterial medför att möjligheten att analytiskt separera substanserna har varit obefintlig.
Detektering av inositolfosfater eller derivat av dessa har också utgjort ett stort problem eftersom sådana föreningar ej kan detekteras med konventionella detek- torer, såsom UV- eller elektrokemiska detektorer.
En använd detektionsmetodik baseras på att radioaktivt märkta inositolfosfater bestämmes. Av naturliga skäl begränsas denna bestämningsmetodik till experiment som kan utföras i provrör och är givetvis inte möjlig att använda vid tester på människa.
Ovanstående problem har helt oväntat kunnat övervinnas enligt föreliggande uppfinning. Uppfinningen avser ett sätt att analytiskt separera inositolfosfater och/eller derivat av dessa. Därvid blandas en kvartär amin med en vattenlösning innehållande ett eller flera inositol- fosfater och/eller derivat därav. lgñ éflfl Den erhållna lösningen tillförs en analytisk kolonn som innehåller en fast fas av icke-polär natur, varvid en separation av de olika beståndsdelarna i den tillförda lösningen erhålles, genom att beståndsdelarna passerar med olika hastigheter genom kolonnen och sedan detekteras på lämpligt sätt.
Uppfinningen möjliggör separation av beståndsdelarna även då dessa förekommer i mycket låga halter eftersom det beskrivna sättet eliminerar tidigare kända problem med icke-specifik absorption.
Vid inblandningen av en kvartär amin enligt ovan erhålles positivt laddade joner som tillsammans med inositol- fosfater och/eller derivat därav bildar icke-polära jonpar.
Vattenlösningen kan utgöras av vatteninnehållande prover av biologiskt ursprung. Härvid kan nämnas blodplasma, blodserum, helblod, urin, faeces, vävnadsextrakt eller liknande. I förekommande fall måste de vatteninnehållande proverna förbehandlas eller renas för att interferens från proteiner, lipider, samt organiska och oorganiska substanser ska kunna minimeras. 46* 649 (Al Denna förbehandling kan inkludera ett utfällningssteg exempelvis genom tillsats av perklorsyra för att minska störningar från proteiner enligt kända tekniker. Jon- styrkan i vattenlösningen kan i vissa fall vara begrän- sande för att den analytiska separationen skall fungera optimalt.Härvídlag kan olika tekniker för att minska provets jonstyrka tillämpas. Om jonstyrkan orsakas av exempelvis perkloratjoner kan mängden av dessa minskas genom tillsats av kaliumhydroxid. Ett annat förfarande kan vara att låta vattenlösningen passera en kolonn av exempelvis jonbyteskaraktär. Om eluering sker på lämpligt sätt exempelvis med en eluent som är lättflyktig kan en efterföljande indunstning eliminera en alltför hög jonstyrka..
I förekommande fall kan en förkoncentration av vatten- lösningen innehållande inositolfosfaterna och/eller dess derivat utföras för att en mindre volymenhet innehållande en viss mängd av substanserna ska passera kolonnen. Detta förfarande minskar en bandbreddning som annars uppstår.
En dylik bandbreddning minskar känsligheten i det analy- tiska separationssystemet. l-r 463 640 Förkoncentrationstekniken kan bestå i att ett jonpar bildat mellan den kvartära aminen och inositolfosfaterna bringas att fastna på en liten, exempelvis 10mm x Zmm kiselbaserad kolonn av icke-polär natur innan eluering sker till den analytiska kolonnen för separation av ingående beståndsdelar.
Halterna av inositolfosfater och/eller derivat av dessa som analytiskt kan separeras enligt föreliggande upp- finning är mellan 0.01ppb- l00ppm, företrädesvis mellan O.1ppb -50ppm och allra helst 0.5ppb - 20ppm.
Då förkoncentrationssteg används ligger halterna av inositolfosfater och/eller derivat av dessa i den till den analytiska kolonnen tillförda lösningen mellan 0.05ppb - 500ppm, företrädesvis mellan 0,5ppb - 250ppm och allra helst mellan 2,5ppb och l00ppm.
Enligt föreliggande uppfinning kan en förbättring av den analytiska separationen erhållas genom att det eluerings- medel som åstadkommer att vattenlösningen förs genom kolonnen har ett pH mellan 5 och 9, företrädesvis mellan 6 och 8.
Den kvartära aminen som används enligt uppfinningen kan exempelvis utgöras av tetrabutylammoniumjon, tetrapentyl- ammoniumjon eller tetrahexylammoniumjon. Dessutom kan eventuellt andra positivt laddade joner såsom benzal- koniumjon eller liknande användas. Halten av den kvartära aminen är lämpligen 0.1 mM till 20 mM, företrädesvis 0.5 mM till 10 mM. Åbå Öwb Enligt en utföringsform av uppfinningen tillförs den använda vattenlösningen en annan lösning innehållande en eller flera lågmolekylära anjoner före passagen genom den analytiska kolonnen. Anjonerna har en molekylvikt mindre än 200 g/mol och kan utgöras av sulfat, fosfat, pyro- fosfat eller liknande. Denna tillsats förbättrar den analytiska separationsförmågan hos den fasta fasen varvid en effektivare separation av beståndsdelarna åstadkommes.
Enligt föreliggande uppfinning detekteras beståndsdelarna efter passage genom kolonnen på lämpligt sätt. Detek- teringen kan lämpligen ske med brytningsindexmätning, genom att bestämma beståndsdelarna med ljusspridnings- teknik, genom att utföra mätningar i det ultravioletta området efter tillsats av komplexbildande metalljoner såsom kopparjoner eller genom fluorescensteknik. Den fluorescensteknik som härvid åsyftas bygger på följande princip: Efter analytisk separation av beståndsdelarna genom passage genom den analytiska kolonnen tillförs den ur kolonnen avgående lösningen kontinuerligt en reagens- lösning (s.k post-column reaktion) innehållande ett metalljonkomplex bestående förutom av en metalljon också av en substans som när den förekommer obunden till metalljoner har fluorescerande egenskaper. Då substansen är bunden till metalljoner har komplexet inga fluore- scerande egenskaper. o» 463 640 Metalljonkomplexet väljes så att när det kommer i kontakt med inositolfosfater och/eller derivat av dessa överförs metalljonerna till ett metalljoninositolfosfatkomplex varvid den fluorescerande substansen frigörs. Stök- iometrin och jämvikten i reaktionen väljes så att en bestämd mängd ínositolfosfat eller dess derivat result- erar i motsvarande mängd substans med fluorescerande egenskaper.
Vid ett föredraget sätt att enligt uppfinningen ana- lytiskt separera inositolfosfater och/eller dess derivat utförs detekteringen med fluorescensteknik.
Föreliggande uppfinning avser också ett medel för analy- tisk detektering av inositolfosfater och/eller derivat av dessa. Medlet består av ett metalljonkomplex vilket i sig inte har fluorescerande egenskaper men som vid kontakt med en lösning av inositolfosfater eller derivat av dessa ger upphov till en bindning mellan metalljoner och inositolfosfaterna och/eller dess derivat.Den substans som ursprungligen bildade komplex med metalljonerna frigörs därvid och har då i fri form, d.v.s ej som metalljonkomplex fluorescerande egenskaper.
Detekteringen tillgår företrädesvis så att medlet enligt uppfinningen kontinuerligt tillförs den vätskeström som har passerat den analytiska kolonn som möjliggör separa- tion av beståndsdelarna.
UCJ\ (D (_14 Û. u f.
J a .k. post-column reaktion måste uppfylla vissa m Ä-*fl nn principiella krav för att fungera för detektering av inositolfosfater och/eller derivat av dessa. Medlet måste ha en sådan reaktivitet att fullständig reaktion åstad- kommes inom en mycket kort tidsperiod. Alla ingående komponenter i medlet måste vara kompatibla med de kompo- nenter som ska separeras vid passage genom kolonnen. Det metalljonkomplex som ingår i medlet måste bestå av komponenter som binds ganska kraftigt till varandra för att undvika att en bakgrundsfluorescens uppkommer vilket minskar känsligheten i metoden. Ett generellt önskemål är att komplexkonstanten för komplexet ska uppgå till minst 108.
Medlet måste också väljas så att ett betydligt starkare metalljoninositolfosfatkomplex och/eller komplex till derivat av inositolfosfatet bildas jämfört med det ursprungliga metalljonkomplexet för att ett snabbt och fullständigt utbyte av den komponent som binds till metalljonerna skall erhållas.
Metalljoner som binder starkt till inositolfosfat och/ eller dess derivat återfinnes i den grupp av metalljoner som har en laddning som är lika med eller större än tre. Även en del divalenta metalljoner binder så starkt till inositolfosfater och/eller dess derivat att dessa är applicerbara enligt uppfinningen. Således är Fe(III), Cr(III), A1(III), Pb(II) samt Ni(II) exempel på metall- joner som uppvisar egenskaper som uppfyller ovanstående krav. 463 6/10 Valet av s.k. funktionella grupper som ingår i de s.k. ligandrar som företrädesvis bildar den andra delen i det ingående metalljonkomplexet inriktar sig i huvudsak till karboxylsyragrupper och hydroxylgrupper. Även andra metalljonbindande funktionella grupper kan dock ingå.
En kritisk parameter i en lösning där ingående komponent- er ska bestämmas med fluoroscens är pH.För optimala reaktionsbetingelser och för att kunna uppnå en maximal mätsignal bör pH ligga mellan 4 och 9, företrädesvis 5 och 8.
Avseende bindningar till exempelvis Fe (III) är således monohydroxisubstanser oftast inte relevanta eftersom dess pKa-värden oftast överstiger 8. Å andra sidan är många dihydroxisubstanser och acetatinnehållande substanser såsom iminodiacetatsubstanser inte användbara eftersom dessa bildar komplex som binder Fe(III) starkare än inositolfosfater och/eller dess derivat.
Enligt uppfinningen har det helt oväntat visat sig att N-alkyliminoacetat-innehållande substanser visar sig uppfylla de ovan beskrivna egenskaperna. N-alkylimino- föreningar som innehåller andra karboxylsyra- funktioner än acetat är också användbara enligt uppfinningen. Även sulfosalicylsyra eller kromotropsyra eller derivat av dessa är applicerbara enligt uppfinningen.
C.ï\ (_14 10 6 4 r, Av N-alkyliminoacetat-innehållande substanser föredrages N-metyliminoacetat-innehållande substanser såsom metyl- kalcein och metylkalceinblått.
I ett föredraget utförande av uppfinningen består medlet för analytisk detektion av inositolfosfater och/eller dess derivat av Fe(III) och metylkalceinblått (MCB).
För att optimala reaktionsbetingelser ska uppnås före- drages att temperaturen överstiger 40°C samt att pH överstiger 5. Metalljonkomplexet tillförs ofta i en lösning vari ingår vatten och organiska lösningsmedel såsom tetrahydrofuran, metanol, etanol eller acetonitril.
Koncentration av metalljonkomplexet samt förhållandet mellan metalljon och den andra komponenten i komplexet kan variera.Då metalljonkomplexet utgörs av Fe (III)/MCB kan koncentrationen av MCB ligga mellan 0,5 uM och l0mM, företrädesvis 1 uM till 1 mM och allra helst 2 uM till 0,5 mM. Halten av Fe (III) kan variera från en tiondel av MCB-halten till 10 gånger MBC-halten räknat på molär bas.
Medlet enligt uppfinningen användes för analytisk detek- tion av inositolfosfater eller dess derivat där halterna av dessa substanser uppgår till 0.01 ppb - 100ppm, företrädesvis 0.1 ppb till 50 ppm och allra helst 0.5 ppb till 20 ppm. :f (9 f) 463 san Uppfinningen illustras ytterligare av nedanstående utför- ingsexempel, men dessa exempel utgör i sig inte någon begränsning av uppfinningen.
I exempel 1 åskådliggörs en analytisk separation av inositolfosfater med ett jonparssystem medan exempel 2 illustrerar detektion av analytiska mängder inositol- fosfater.
Exempel 1: En ml av en vattenlösning som innehöll 5ug av en bland- ning av inositolfosfater injicerades i ett kromato- grafiskt system där den analytiska kolonn som användes var en Nucleosil RPl8-kolonn (200 x 4 mm) och eluenten som passerade kolonnen bestod av metanol/tetrahydrofuran / 5mM trishydroxymetylaminometan-lösning justerad till pH 7.0 med saltsyra ( Tris-buffert) samt 3mM tetrapentyl- bromidlösning: 50/5/45 volymprocent En post-column reaktion genomfördes för att åstadkomma ett detektionssystem baserat på fluorescensteknik. En lösning av metanol/Tris-buffert: 95/5 volymprocent samt 10 uM metylkalceinblått och 5 uM järn (III) nitrat tillfördes kontinuerligt till eluenten som passerade kolonnen. Efter reaktionen fick lösningen passera en fluorescensdetektor för bestämning av de inositolfosfater som hade bringats att separera i analyskolonnen. /2. 5- JE, Ch (r i “I VE. (_ Den analytiska separationen av inositoltrisfosfat (IP3), inositoltetrafosfat (IP4), inositolpentafosfat (IP5) samt inositolhexafosfat (IP6) som åstadkoms åskådliggörs i figur 1.
Exempel 2 Av två vattenlösningar som innehöll inositoltrisfosfat (IP3), 180 ng/ml respektive 36 ng/ml, injicerades 0,5 ml i ett analyssystem där den analytiska kolonnen som användes var en Hypersil ODS-kolonn (200 x 4,6mm) och där eluenten bestod av metanol/tetrahydrofuran/ 5mM trishyd- roxymetylaminometanlösning justerad till pH 6.8 med saltsyra (Tris-buffert) och 20 mM tetrabutylammonium- bromid: 30/3/67 volymprocent.
Efter kromatografikolonnen tillfördes en lösning som möjliggjorde detektion med fluorescenstekník. Denna lösning bestod av metanol/Tris-buffert: 95/5 volyms- procent samt 10 uM metylkalceinblått och 5 uM järn (III) nitrat.
Post-columnreaktionen utfördes vid 60°C. Exitationsvåg- längden som användes i fluorescensdetektorn var 318 nm medan emissionsvåglängden var 440 nm.
Detekteringen av dessa låga halter IP3 åskådliggörs i ett kromatogram i figur 2.

Claims (14)

PATENTKRAV 4 6 5 6 4 Û
1. Sätt att analytiskt separera inositolfosfater och/eller derivat därav, k ä n n e t e c k n a t därav, att en kvartär amin blandas med en vattenlösning innehållande ett eller flera inositolfosfater och/eller derivat därav, att den erhållna lösningen tillförs en analytisk kolonn innehållande en fast fas av icke polär natur, varvid en separation av de olika beståndsdelarna i den tillförda lösningen erhålles genom att beståndsdelarna passerar med olika hastighet genom kolonnen samt att beståndsdelarna detekteras på lämpligt sätt.
2. Sätt enligt krav l, k ä n n e t e c k n a t därav, att vattenlösningen innehållande ett eller flera inositolfosfater och/eller derivat därav före blandningen med den kvartära aminen renas från eventuella föroreningar.
3. Sätt enligt krav l eller 2, k ä n n e t e c k n a t därav, att halten av inositolfosfat och/eller derivat därav i den ursprungliga vattenlösningen uppgår till 0,1 ppb - 50 ppm, företrädesvis 0,5 ppb - 20 ppm.
4. Sätt enligt något av kraven 1-3, k ä n n e t e c k n a t därav, att halten av inositolfosfat och/eller derivat därav i den vattenlösning som tillförs den analytiska kolonnen uppgår till 0,5 ppb - 250 ppm, företrädesvis 2,5 ppb - 100 ppm.
5. Sätt enligt något av kraven l-4, k ä n n e t e c k n a t därav, att det använda elueringsmedlet har ett pH av 5-9, företrädesvis 6-8.
6. Sätt enligt något av kraven l-5, k ä n n e t e c k n a t därav, att den kvartära aminen utgörs av tetrabutylammoniumjon tetrapentylammoniumjon eller tetrahexylammoniumjon.
7. Sätt enligt något av kraven 1-6, k ä n n e t e c k n a t därav, att separationen av de olika beståndsdelarna förbättras i kolonnen genom att den fasta fasen behandlas med en C13 CN ('J\ .ÅÄ- C23 vattenlösning innehållande en eller flera olika anjoner med en molekylvikt mindre än 200.
8. Sätt enligt något av kraven 1-7, k ä n n e t e c k n a t därav, att vattenlösningen innehåller blodplasma, serum, blod, urin, faeces eller vävnadsextrakt.
9. Sätt enligt något av kraven 1-8, k ä n n e t e c k n a t därav, att lösningen efter passagen ut ur kolonnen tillförs ett reagens som möjliggör detektering med fluorescensteknik.
10. Sätt enligt något av patentkraven 1-9, k ä n n e - t e c k n a t därav, att detekteringen utförs med hjälp av ett metaljonkomplex, vilket i sig inte har fluorescerande egenskaper, men att vid kontakt med inositolfosfater och/eller derivat därav, metalljonerna binds till dessa, varvid en fluorescerande substans frigörs.
11. Sätt enligt patentkrav 10, k ä n n e t e c k n a t därav, att metalljonerna i medlet består av järn, krom(III) eller aluminium.
12. Sätt enligt patentkrav 10 eller 11, k ä n n e t e c k - n a t därav, att den andra delen av metalljonkomplexet utgörs av sulfosalicylsyra, kromotropsyra eller N-metyliminoacetatinnehållande substanser eller derivat därav.
13. Sätt enligt något av patentkraven 10-12, k ä n n e - t e c k n a t därav, att ett komplex av Fe(III) och metylkalceinblått används.
14. Sätt enligt något av patentkraven 10-13, k ä n n e - t e c k n a t därav, att det möjliggör detektering av inositolfosfat och/eller derivat därav ned till en halt av 0,1 ppb. ll u'
SE8902241A 1989-06-21 1989-06-21 Saett att analytiskt separera inositolfosfater med en kvartaer amin SE8902241L (sv)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8902241A SE8902241L (sv) 1989-06-21 1989-06-21 Saett att analytiskt separera inositolfosfater med en kvartaer amin
AU59366/90A AU5936690A (en) 1989-06-21 1990-06-15 Method for analytical separation of inositol phosphates
EP90910163A EP0479862B1 (en) 1989-06-21 1990-06-15 Method for analytical separation of inositol phosphates
US07/778,067 US5225349A (en) 1989-06-21 1990-06-15 Method for analytical separation of inositol phosphates with quaternary amine and metal ion complex
PCT/SE1990/000423 WO1990015989A1 (en) 1989-06-21 1990-06-15 Method for analytical separation of inositol phosphates
AT90910163T ATE142786T1 (de) 1989-06-21 1990-06-15 Verfahren zur analytischen trennung von inosotolphosphaten
JP2509473A JPH04506258A (ja) 1989-06-21 1990-06-15 イノシット燐酸塩および／またはその誘導体の分析的分離法
DE69028531T DE69028531T2 (de) 1989-06-21 1990-06-15 Verfahren zur analytischen trennung von inosotolphosphaten

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8902241A SE8902241L (sv) 1989-06-21 1989-06-21 Saett att analytiskt separera inositolfosfater med en kvartaer amin

Publications (3)

Publication Number Publication Date
SE8902241D0 SE8902241D0 (sv) 1989-06-21
SE463640B true SE463640B (sv) 1990-12-17
SE8902241L SE8902241L (sv) 1990-12-22

Family

ID=20376346

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8902241A SE8902241L (sv) 1989-06-21 1989-06-21 Saett att analytiskt separera inositolfosfater med en kvartaer amin

Country Status (8)

Country Link
US (1) US5225349A (sv)
EP (1) EP0479862B1 (sv)
JP (1) JPH04506258A (sv)
AT (1) ATE142786T1 (sv)
AU (1) AU5936690A (sv)
DE (1) DE69028531T2 (sv)
SE (1) SE8902241L (sv)
WO (1) WO1990015989A1 (sv)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE9200547L (sv) * 1992-02-25 1993-06-14 Perstorp Ab En farmaceutisk komposition med foerbaettrad biotillgaenglighet avseende inositolfosfat
DE60329618D1 (de) * 2002-10-21 2009-11-19 Discoverx Inc Ip3-protein-bindungstest
AU2003287144A1 (en) * 2002-12-18 2004-07-09 Astrazeneca Ab Inositol phosphate detection assays

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58109849A (ja) * 1981-12-24 1983-06-30 Asahi Chem Ind Co Ltd イノシト−ル類の新規な分離分析方法

Also Published As

Publication number Publication date
AU5936690A (en) 1991-01-08
US5225349A (en) 1993-07-06
DE69028531T2 (de) 1997-02-20
WO1990015989A1 (en) 1990-12-27
EP0479862A1 (en) 1992-04-15
ATE142786T1 (de) 1996-09-15
SE8902241D0 (sv) 1989-06-21
EP0479862B1 (en) 1996-09-11
JPH04506258A (ja) 1992-10-29
DE69028531D1 (de) 1996-10-17
SE8902241L (sv) 1990-12-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Shen et al. Screening, determination and confirmation of chloramphenicol in seafood, meat and honey using ELISA, HPLC–UVD, GC–ECD, GC–MS–EI–SIM and GCMS–NCI–SIM methods
Zhu et al. Simultaneous determination of 13 aminoglycoside residues in foods of animal origin by liquid chromatography–electrospray ionization tandem mass spectrometry with two consecutive solid-phase extraction steps
CA2649633C (en) Differential hemolysis of a whole blood sample
Mahugo-Santana et al. Analytical methodologies for the determination of nitroimidazole residues in biological and environmental liquid samples: a review
Hermo et al. Improved determination of quinolones in milk at their MRL levels using LC–UV, LC–FD, LC–MS and LC–MS/MS and validation in line with regulation 2002/657/EC
Devasurendra et al. Solid-phase extraction, quantification, and selective determination of microcystins in water with a gold-polypyrrole nanocomposite sorbent material
JP5449202B2 (ja) サンプル中のビタミンｄ類似体の存在および量の決定のための方法およびキット
WO2007140962A2 (en) Improved measurement of vitamin d
Myung et al. Determination of homocysteine and its related compounds by solid-phase microextraction–gas chromatography–mass spectrometry
Gruessner et al. Comparison of an enzyme immunoassay and gas chromatography/mass spectrometry for the detection of atrazine in surface waters
EP2156182B1 (en) Detection of an analyte in a sample of hemolyzed whole blood
Infante et al. Inductively coupled plasma time-of-flight mass spectrometry coupled to high-performance liquid chromatography for multi-elemental speciation analysis of metalloproteins in carp cytosols
Zhang et al. Evaluation of the oxidative deoxyribonucleic acid damage biomarker 8-hydroxy-2′-deoxyguanosine in the urine of leukemic children by micellar electrokinetic capillary chromatography
SE463640B (sv) Saett att analytiskt separera inositolfosfater med en kvartaer amin
Xu et al. Determination of phenolic compounds in estuary water and sediment by solid-phase isotope dansylation coupled with liquid chromatography-high resolution mass spectrometry
Quilliam Liquid chromatography-mass spectrometry: a universal method for analysis of toxins
Czaplicka et al. Determination of selected organoarsenic compounds by SPME/GC-MS in aquatic samples
Alvarez-Llamas et al. Large volume sample stacking capillary electrophoresis for metallothioneins analysis in eel liver
Tölgyesi et al. Determination of thyreostats in urine using supported liquid extraction and mixed-mode cation-exchange solid-phase extraction: screening and confirmatory methods
Brenner-Weiß et al. Approaches to bioresponse-linked instrumental analysis in water analysis
Tamošiūnas et al. Thiocyanate determination by ion pair chromatography
Jambrosic et al. Advancing analytical methodologies for the determination of lifestyle and dietary biomarkers in municipal wastewater
Weller et al. Novel concepts for the immunological detection of bound residues
Shintani Pretreatment, Analysis, Identifica-tion and Preparation of Toxic Compounds Eluted into Body Fluids from Medical and Dental Devices
ISHIDA et al. High-performance liquid chromatographic determination of human serum albumin in plasma and urine by post-column fluorescence enhancement detection using 8-Anilino-1-naphthalenesulfonic acid

Legal Events

Date Code Title Description
NAL Patent in force

Ref document number: 8902241-2

Format of ref document f/p: F

NUG Patent has lapsed

Ref document number: 8902241-2

Format of ref document f/p: F