SE500404C2 - Ett förfarande för framställning, torkning och groning av somantiska barrträdsembryon - Google Patents
Ett förfarande för framställning, torkning och groning av somantiska barrträdsembryonInfo
- Publication number
- SE500404C2 SE500404C2 SE9200269A SE9200269A SE500404C2 SE 500404 C2 SE500404 C2 SE 500404C2 SE 9200269 A SE9200269 A SE 9200269A SE 9200269 A SE9200269 A SE 9200269A SE 500404 C2 SE500404 C2 SE 500404C2
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- embryos
- somatic
- germination
- aba
- mature
- Prior art date
Links
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 241000218631 Coniferophyta Species 0.000 title claims abstract description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 230000035784 germination Effects 0.000 title abstract description 51
- 238000001035 drying Methods 0.000 title description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims abstract description 128
- JLIDBLDQVAYHNE-YKALOCIXSA-N (+)-Abscisic acid Chemical compound OC(=O)/C=C(/C)\C=C\[C@@]1(O)C(C)=CC(=O)CC1(C)C JLIDBLDQVAYHNE-YKALOCIXSA-N 0.000 claims abstract description 118
- FCRACOPGPMPSHN-UHFFFAOYSA-N desoxyabscisic acid Natural products OC(=O)C=C(C)C=CC1C(C)=CC(=O)CC1(C)C FCRACOPGPMPSHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 59
- 241000218657 Picea Species 0.000 claims abstract description 21
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 20
- 230000000408 embryogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 241000218595 Picea sitchensis Species 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical class [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 2
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 abstract description 22
- 230000031787 nutrient reservoir activity Effects 0.000 abstract description 18
- 241000894007 species Species 0.000 abstract description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 43
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 13
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 11
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 10
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 10
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 10
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 10
- 238000011161 development Methods 0.000 description 9
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 8
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 8
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000008124 Picea excelsa Nutrition 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 3
- 239000012869 germination medium Substances 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 3
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 2
- JLIDBLDQVAYHNE-LXGGSRJLSA-N 2-cis-abscisic acid Chemical compound OC(=O)/C=C(/C)\C=C\C1(O)C(C)=CC(=O)CC1(C)C JLIDBLDQVAYHNE-LXGGSRJLSA-N 0.000 description 2
- 241000758794 Asarum Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 2
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 2
- 235000008127 Picea glauca Nutrition 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 2
- 230000002786 root growth Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 2,4-Dichlorophenoxyaceticacid Chemical compound OC(=O)C(Cl)OC1=CC=C(Cl)C=C1 HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZSXEZOLBIJVQK-UHFFFAOYSA-N 2-methylsulfonylbenzoic acid Chemical compound CS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O BZSXEZOLBIJVQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001156002 Anthonomus pomorum Species 0.000 description 1
- 241000269350 Anura Species 0.000 description 1
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 1
- 240000004585 Dactylis glomerata Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000218597 Picea engelmannii Species 0.000 description 1
- 244000193463 Picea excelsa Species 0.000 description 1
- 240000000020 Picea glauca Species 0.000 description 1
- 229920001328 Polyvinylidene chloride Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000000528 Ricinus communis Species 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000005059 dormancy Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000009618 hypocotyl growth Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000011890 leaf development Effects 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 239000005033 polyvinylidene chloride Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 230000021749 root development Effects 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 1
- 230000005562 seed maturation Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001550 time effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S47/00—Plant husbandry
- Y10S47/09—Physical and chemical treatment of seeds for planting
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
som 4o4 1o_ 15 20 25 30 35 Vkvaliteten (Becwar m.fl., 2 (Redenbaugh m.fl. 1986; Shoemaker m.fl, 1987), som var* närvarande i låga halter i somantiska embryon i jämförelse med deras zygotiska motsvarigheter, och dålig livskraft kan mycket väl förorsakas av dålig mognad hos somantiska embryon (Crouch, 1982).
I många slag av bevis antyder man att abskisinsyra (ABA) kan ha en viktig roll vid embryogenetiken. ABA- innehållet i majskärnor når en topp under de initiela perioderna av kornfyllnaden (Jones och Brenner, 1987), under det att en bifasisk förändring kan observeras vid utveckling av embryon av Arabadopsis (Karssen m.fl., 1983). Somantiska embryon av morötter innehåller små mängder av ABA under den tidiga utvecklingen och nivån når 'en topp och avtar därefter under mognaden (Kamada och Harada, 1982). Dessa förändringar antyder, att ABA kan ha en roll under tidiga till sena faser av mognaden. Exogen tillförsel av ABA till omognade zygotiska embryon antyder, att ABA på ett specifikt sätt hindrar för tidig groning, gynnar mognad och ackumlerandet av förrådsproteiner (Finklestein m.fl., 1985; Ackerson, 1984; Kuhlemeir m.f1., 1987). Nyligen har Michler and Lineberger (1987) funnit de lätta behandlingar, som gynnar mognaden (bildandet av cotyledone:), som även ökar mängderna av endogen ABA i somantiska morotsembryon. Dessutom undertrycker ABA .bildandet av abncrma embryostrukturer under den somantiska embryogenetiken (Ammirato, 1974; Kamada och Harada, 1982).
I Somantisk embryogenetik har nu uppnåtts för flera barrträdsarter och ABA har identifierats som en viktig materialkomponent för differentiering av somantiska embryon av norsk gran (Hakman m.fl., 1985; Hakman och von Arnold, 1988; Gupta och Durzan, 1987; Dunstan, 1988). om dessa författare har påvisat, att ABA gynnar differen- tieringen av somantiska embryon, har föga information lämnats om effekterna av ABA på mognaden eller embryo- l987; von Arnold och Hakman, Även 1988, Boulay mfl. 1988). lO 15 20 25 aø 35 3 I naturen är torkning ett tecken pà embryout- vecklingen och det har förmodats, att torkning har en viss _ betydelse vid övergången från mognad till groning. Det har omsorgsfullt dokumenterats, att för många arter torkning förbättrar frögrovbarheten. Exempelvis kräver zygotiska embryon av Ricinus communis torkning för uppnáende av en hög frekvens av grobarhet och normal radikal förlängning Förmågan att stoppa utvecklingen av somantiska embryon kan även vara av betydelse vid handhavandet av somantiska embryon under disseminationen. I VIKTIG LITTERATUR: Litteraturen av betydelse för torkning omfattar Nasnain m.fl., 1986, Tissue Culture in Forestry: Economic and Genetic Potential, The Forestry Chronicle (augusti): 219215 som diskuterar klonal fortplantning av barrträd.
Becwar, M.R., S.R; Wann, M.A. Johnson, S.A. Verhagen, R.P.
Feirer och R. Nagmani, 1988. Development and Characteri- zation of in Vitro Embryogenic Systems in Conifers. Iz, MQR. Ahuja [Ed.], Somatic Cell Genetics of Woody Plants, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, Holland, sidorna l-18.
Boulay, M.P., P.K. Gupta, P. Krogstrup, och D.J. Durzan, 1988. Development of Somatic Embryos from Cell Suspension Cultures of Norway Spruce (Pioes abies Karst). Plant Cell Reports (7): 134-137.
Carman, J.G. (1988) Improved Somatic Embryogenesis in Wheat by Partial Simulation of the In-Ovulo Oxygen, Growth-Regulator and Desiccation Environments. Plants (l75:4l7-424).
Durzan, D.J. and P.K. Gupta, 1987. Somatic Embryogenesis and Polyembryogenesis in Douglas-Fir Cell Suspenson cultures, Plant Science (52): 229-235. 500 404 10 15 *zo 25 30 35 4 Gray, D.J., B.V. Conger, och D.D. Songstad, (1987) Desiccated Quiescent Somatic Embreyos of Orchard Grass for Use as Synthetic Seeds. In Vitro Cellular and Developmental Biology. 23:29-33.
Gupta, P.K. and D.J. Durzan, 1987. Biotechnology of Somatic Polyembryogenesis and Plantlet Regeneration in Lobolly Pine. Bio/tech. 5;l47-151. v Hakman, I. and S. von Arnold, 1988. Somatic Embryogenesis and Plant Regeneration from Suspension Cultures of Pices Glauca (White Spruce). Physiol. Plant. 72:579-587.
Hasnain, S. and W. Cheliak, 1986. Tissue Culture in Forestry.: Economic and Genetic Potential. The Forestry Chronicle (August): 219-225.
Kermode A.R., and J.D. Bewley (1985), The Role of Drying in the Transition from Seed Development to Germination. J.
Exp. Bot. 36:l906-1915.
Owens, J.N. and M. Molder, 1984. The Reproductive Cycle of Interior Spruce. Published by Information Services Branch British Columbia Ministry of Forests) Victoria, B.C.V3w 357. ' Parrott, w.A., G. Dryden, S. Vogt¿ D.F. Hilderbrand, G.B. coliins, E.G. williams, (1988) optimization af somatic Embryogenesis and Embryo Germination in Soybean. In Vitro Cellular and Developmental Biology. 24:81?-820.
Redenbaugh, K., J. Fujii, D. Slade, P. Visa, and M.
Kossler (1986) Synthetic Seeds-Encapsulated Somatic Embryos. In Agronomy: Adjusting to a Global Economy.
American Society of Agronomy Crop, Science Society of V 78th Annual America, Soil Science Society of America; Meeting Program., 10 15 _ 20 25 30 35 .1s6, soc 404 5 Redenbaugh, K., B.D. Paasah, J.w. Nichol, M_E. Kossler, P.R. Viss, and K. Walker (1986) Somatic seeds: Encapsulation of Asexual Plant Embryos. Bio/Teehnology 4=797-781. ' V Beträffande mognad omfattar litteratur av intresse: Ackerson, R.C. (l984).Regu1ation of Soybean Embryogenesis by Abscisic Acid. Jour. of Exp. Bot. 35, 403-413.
Ammirato, P.V. (1974). The Effects of Abscisic Acid on the Development of Somatic Embryos from Cells of Caraway (Carum carvi L.). Bot. Gaz. 135, 328-337.
Barratt, D.H.P. (1986). Modulation by Abscisic Acid of.
Storage Protein Aocumulation in Vicia Faba L. Cotyledons Cultured In Vitro. Plant Sci. 46, 159-167.
Becwar, M.R., Noland, T.L. and Wann, S.R. (1987). A Method for Quantification of the Level of Somatic Embryogenesis among Norway Spruce Callus Lines. Plant Cell Rep. 6, 35-38.
Boulay, M.P., Gupta, P.K.. Krogstrup, P. and Durzan, D.J. (1988). Development of Somatic Embryos from Cell Suspension Cultures of Norway Spruce (Picea Abies Karst.).
Plant Cell Rep. 7, 134-137.
Carman, J.G. (1988). Improved Somatic Embryogenesis in Wheat by Partial Simulation of the In-Ovulo Oxygen, Growth Regulator and Desiccation Environments. Planta 175, 417- 424.
Crouch, M.L. (1982). Non-Zygotic Embryos of Brassica Napus L. Contain Embryo-Specific Storage Proteins. Planta 520-524. 500 404 10 15 20 425 30 35 6 Dunstan, D.I. (1988). Prospects and Progress in Conifer ,Biotechnology, Can. J. For. Res. 18, 1497-1506.
Durzan,D.J. and Gupta, P.K. (1987). Somatic Embryogenesis and Polyembryogenesis in Douglas-Fir Cell Suspension cultures. Plant sei. 52,229-235. ' Jones, R.J. and Brenner, M.L. (1987). Distribution of Abscisic Acid in Maize Kernel During Grain Filling. Plant Physiol. 83, 905-909.
Finkelstein, R.R., Tenoarge, K.M.; Shumway, J.E., and __ Crouch, M.L. (1985). Role of ABA in Maturation of Rapeseed Embryos. Plant Physiol. 78, 630-636.
Flinn, B.S. Roberts, D.R., Webb, D.T. and Sutton, B.C.S.
.Storage Protein Changes during Zygotic Embryogenesis in Interior Spruce. (Submitted to Plant Physiol.).
Ghosh, S., Gepstein, S., Heikkila and Dumbroff, EB. (1988). Use of a Scanning Densitometer or an ELISA Plate Reader for Measurement of Nanogram Amounts of Protein in Crude Extracts from Biological Tissues. Anal. Biochem. 169, 227-233.
Hakman, I. and von Arnold, S. (1985). Plantlet Regeneration Through Somatic Embryogenesis in Picea Abies (Norway Spruce), J. Plant Physiol. 121, 149-158.
Hakman, I., and von Arnold, S. (1988). Somatic Embryogenesis and Plant Regeneration From Suspension Cultures of Picea Glauca (White Spruce). Physiol. Plant. 72 579-587.
Karssen, C.M., Brinkhorst-van der Swan, D.L.C., Breekland, A.E. and Koornneef, M. (1983). Induction of Dormancy During Seed Development by Endogenous Abscisic Acid: 10 15 20 25 30 35 U: <3 CD Jx CD 4> _ 7 Studies on Abscisic Acid Deficient Genetypes of Arabidopsis Thaliana (L.) Heynh. Planta J57, 158-165.
Kuhlemeier, C., Green, PJ. and Chua, N. (1987). Regulation of Gene Expression in Higher Plants. Ann. Rev. Plant Physiol. 38, 221-57.
Kamada, H. and Harada, H. (l98l)._Changes in the Endogenous Level and Effects of Abscisic Acid During Somatic Embryogenesis of Daucus Carota L.
Laemmli, U.K. (1970). Cleavage of Structural Proteins During the Assembly of the Head of the Bacteriophage T.
Nature 227, 680-685.
Michler, C.H., and Lineberger, R.D. (1987). Effects of Light on Somatic Embryo Development and Abscisic Acid Levels in Carrot Suspension Cultures. Plant Cell, Tissue and Organ Culture ll, 189-207.
Redenbaugh, K., Paasch, B.D., Nichol, J.w., Viss, P.R. and Walker, K.A. (1986).
Encapsulation of Asexual Plant Embryos. Bio/tech. 4, 797- 781.
Somatic Seeds: Shoemaker, R.C., Christofferson, S.E. and Galbraith, D.w. (1987). Storage Protein Accumulation Patterns in Somatic Embryos of Cotton (Gossypium Hirsutum L.). Plant Cell Rep. 6, 12-15.
Stuart, D.A., Nelsen, J. and Nichol, J.W. (1988).
Expression of 7S and 118 Alfalfa Seed Storage Proteins in Somatic Embryos. J. Plant Physiol. 132, 134-139. von Arnold, S., and Hakman, I, (1988). Regulation of Somatic Embryo Development in Picea Abies by Abscisic Acid (ABA). J. Plant Physiol. 132, 164-169.
Kossler, M.E.,A SCIO m . lO 15 20 25* 30 35 4C)4 walton, D.C. (1980), Biochemistry and Physiology of Abscisic Acid. Ann. Rev. Plant Physiol. 31, 453-489.
Föreliggande uppfinning möjliggör en betydande ökning av grobarheten hos somantiska barrträdsembryon och bidrar i hög grad till att synkronisera grobarheten och kraftig rottiiiväxt.
Följaktligen avser föreliggande uppfinning enligt ett första kännetecken ett förfarande för framställning av mogna somantiska embryon av barrträd, som består i delvis torkning av embryot vid fuktigheter lägre än ca 99,9%.
Lämpligen utgöres barrträdet av gran. _ Lämpligen är fuktigheten i området av 85 - ca 992.
Enligt ett andra kännetecken på uppfinningen omfattar ett förfarande för differentiering av somantiska embryon av barrträd en kontakt av embryogenetiska kalli med ett medium, som innehåller abskisinsyra (ABA).
Abskisinsyran kan vara närvarande i en mängd av .ao pm - 40 pm.
Lämpligen utgöres materialet av indolbutyrsyra (IBA).
EXPERIMENTELL DEL På ritningarna, till vilka hänvisas i denna del visar Fig. 1 effekten av abskisinsyra på morfologin hos färdiga embryotyper; Fig. 2 är SDS-SID-analysen av färdiga embryotyper; Fig. 3 visar proteinprofiler av för tidiga embryon, som differentierats med relativt små kvantiteter ABA§ Fig. 4 visar proteinprofiler av mogna embryon, som differentieras med relativt stora mängder av ABA; Pig. 5 jämför graden av grobarhet för olika behand- lingar; Fig. 6 har avseende pà rotemergensen och varak- tigheten av behandling med hög relativfuktighet; 10 15 20 25 30 35_ (fl CD CD JS.
CJ 4% 9 _ Fig. 7 visar embryomorfologin; och Fig. 8 visar förhållandet mellan embryolängden och tiden vid behandling med hög relativfuktighet.
Vävnadsodling Embryogeniska kalli initierades från omogna embryon av inhemsk gran (Picea Glauca/Picea Engelmannii), som tidigare beskrivits av webb m.fl. (1989). Kalli hölls i mörker på VE basmedia (Von Arnold S. och Erikson T. (1977) A Revised Medium for Growth of Pea Mesophyll Protoplasts; Phisol, Plant 39; 257-260; aminosyror tillsattes efter behandling i autoklav) som innehöll 5 pM 2,4-D, 2 pM BA, 1% sackaros (förökningsmedium) vid 27°C och subkulturellt varannan vecka. Före ytterligare hormonbehandling ' överfördes kalli (var och en vägande 100 mg) från inehöll 1% under en vecka i ljus (16 2 sek._l). förökningsmediet till VE-basal-media, som aktivt träkol och 3,4% sackaros, timmar fotoperiod vid 25-35 ueinstein M- embryon innehöll 3,4% Ytterligare differentiering av somantiska genomfördes i ljus på VE-basal-media, som sackaros och olika mängder av ABA och/eller IBA med underkulturbehandling varannan vecka. Differentierade strukturer avlägsnades från kalli, siktades, vägdes och förvarades vid -70°C för proteinanalys. För grobarhetsf studier avlägsnades individuella strukturer fràn kalli och placerades i 8 dram mantelflaskor (7 per flaska), som innhöll 10 ml av 1/4 VE basalmedia och 3,4% sackaros, som stelnat i en lutning med 0,54% Noble Agar. Räkningen av 'embryotyper och morfologiskt kännetecken genomföres under användning av ett dissekterande mikroskop.
Prcteinanalys Prover togs fràn -70°C förvaring och hölls vid 4°C under proteinextraktionen, Solubiliserande buffert (0,l25 M Tris-H01 pH 6,8, som innehöll 22,5% merkaptoetanol, 9% SD5 och 22,5% glycerol), tillsattes till embryoprover 500, 404 10 15 20 25 30 35 10 (30 pl/mg vävnad), homogeniserades i ett mikrofugrör under användning av en motordriven pistill och centrifugerades i 10 minuter vid 16 000 x g. Provprotein bestämdes genom ett modifieringsförfarande av Ghosh m.fl. (1988), vars genom- förande här ingår som referens. Prov (2 pl) pipetterades på whatman #1 filterpapper, fick torka och fläckades med koomassieblàtt. Filterpapperet avfläckades med l0-procen- tig ättiksyra/40% Me0H och fick lufttorka. Provfläckarna utskars och fläcken urlakades i 1 ml 1-procentig SDS och proteinhalten bestämdes genom absorption vid 590 och jämförelse med protein (BSA)-standard. Prover (15 pg protein/rad) fraktionerdes medelst SDS-PAGE på l2-procen- tig polyakryl-geler med en 5-procentig staplingsgel (Laemmli, 1970). Efter fixering fläckades gelerna med koomasssieblått.
Förgroning Förgroningsbehandlingar omfattade anbringandet av mogna embryon i Petri-skålar på vattenmättade kimpak (WSK), pà petriskálar vid rumsfuktighet (AD) eller i 6 brunnar av 12 brunns-Petri-skalar med de övriga sex brunnarna fylla till 3/4 fyllnad med sterilt vatten (ADM).
Dessa behandlingar genomfördes vid 27°C. För identifiering av optimal fuktighet vid delvis torkning inkuberades embryorna på samma sätt som vid ADM-behandlingen medf _ undantag för att de utsattes för en mättad saltlösning.
För uppnående av fuktigneter pà 95%, 90%, 81% och 75% utsattes atmosfärerna för mättade lösningar av natrium- fosfat-dibasiskt zinksulfat, ammoniumsulfat resp. natrium- klorat (Merck Index).
Embryon överfördes till jord efter ca fyra veckor pà groningsmedia. Små plantor av ADM-behandling och icke- behandlade kontroller (endast embryon med rötter användes) placerades på sterila mosspellets, som var mättade med 1/4 VE basalmedium (ingen sackaros) på insidan av sterilt GA7 magentakärl. Plantorna förblev i det slutna kärlet under 10 15 20 25 30 35 500 404 ll 16 timmars fotoperiod vid en ljusintensitet på 50 uE/m/sek (kraftigt och tilltagande ljus) i två veckor. Vid denna“ tidpunkt avlägsnades magenta-locket och ersattes med lpolyvinylidenkloridfilm och kärlets fuktighet minskades gradvis under två veckor genom ökning av antalet hål i locket. Plantor, som kunde betecknas som överlevande, var över 2 cm höga och växte kraftigt.
RESULTAT Mättnad/Differentiering Embryogena kalli av inhemsk gran förökar sig men differentierar inte förbi för embryostadiet på media, tom' innehåller 2,4 diklorfenoxiättiksyra (2,4-D) och bensyladenin (BA). Ringa eller ingen differentiering uppträder, när embryogena kalli överföres till media utan ABA (tabell 1). Under dessa betingelser blir kallus brun och nekrotisk och i vissa fall kan få strukturer A utvecklas. När mediahalterna av ABA ökas till 1 -10 pM blir många "sticklingsliknande" strukturer förhärskande i många kallusrader (fig. 1). Dessa sticklingar är abnorma och skiljer sig från embryon genom närvaron av en basal kallus, förlängda (sticklingliknande) hjärtblad och ringa hypokotyl utveckling. Bildandet av sticklings- liknande strukturer hindras vid högre halter av ABA och bipolär embryoutveckling (tabell 1). Dessa embryon har_ mycket väl organiserade hjärtblad och förlängda hypoko- tyler och är bipolära därigenom att de har en uppenbar rotspets pá den basala änden. I Förloppet av embryomognaden påverkas också dramatiskt av ABA. Somantiska embryon, som differentieras på 10-20 uM ABA gror för tidigt men när halten ABA ökas, hindras för' tidig groning och det bildas opaka hjärtbladsstrukturer, som är utmärkande för mogna zygotiska embryon (fig. 1 och tabell 1). Pig. 5 har avseende på groningen mätt çom procenthalten av rotförlängning mot tiden för olika 500 ~lO 15 20 25 30 35 404 12 mättnadsbehandlingar. Tabell l visar att sticklings- liknande strukturer (S) är förhärskande vid låga halter av .ABA (1 - 10 pM), under det att för tidiga embryon (PE) bildas på 10 - 20 pM ABA och mogna embryon (ME) bildas på halter av ABA vid 30 uM. När mogna embryon har bildats synes de gå in i ett stadium av vila, eftersom de icke utvecklas ytterligare vid detta stadium men de gror lätt, när de överföres till ett medium utan hormoner. De opti- mala halterna av ABA för alstrandet av mogna embryon för raden ll var 40 pM. Det förelåg en betydande variation i känsligheten hos olika rader i förhållande till ABA. Majo- riteten av somatiska embryon från raden 8977 grodde exem- pelvis för tidigt upp till 5O pM ABA (Tabell l). Våra resultat stöder tidigare observationer vid vilka ABA medförde differentiering av embryocallus (von Arnold och Hakman, 1988; Boulay m.fl., 1988). Det är emellertid inte klart, huruvida de halter av ABA, som användes vid dessa studier, var tillräckliga för att hindra för tidig gro- ning. Förmågan hos ABA att hindra för tidig groning hos zygotiska embryon har omsorgsfullt dokumenterats (Finklestein och Crouch, 1985; Walton; 1980). _ 10 -15 20 25 '-30 35 Ln CD CD fb CD Ja 13 TABELL 1 ABA effekter på differentiering hos somantiska embryon.' _______.______________________________~_____________-_____ Klon ll KClon 8977 ABA Antal per kallus Antal per kallus p s PE ME s PE W Ms 1o¿4b o ' o 0 o o 1 zois 311 o o o 2 o 10 3619 1715 5:2 <1 36i6 <1 20 17i6 5:3 lOi5 <1 5919 4:2 30 211 <1 l7i4 lil 92:18 2il~ .4O 1:1 <1 37i6 O 47:12 2514 so 1:1 o 25:? o 44:13, 32¿6 as = sticklingar; PE förtidiga embryon; ME = mogna embryon. b ean I SE för 9 kalli per behandling.
M En jämförelse av de olika embryotyperna (dvs. "sticklingar", förtidiga groddar och mogna embryon) medelst SDS-PAGE avslöjar att blott mogna embryon acku- mulerar proteiner av 41, 33, 24 och 22 kD (fig. 2). I fig. 2 drevs total protein (15 pg/rad) i raderna 1 - 4 tillsam- mans med molekylviktsstandard (MW). Protein extraherades from isolerade proteinkroppar hos mogna fröembryon av inhemsk gran (rad 1), mogna embryon (rad 2), förtidiga embryon (rad 3) och sticklingar (rad 4). Proven átskildes på ett 12% gel, fixerades och färgades därefter med koomassieblàtt. Vandringsavstándet frán de prominenta för- rådsproteinerna har angivits med pilarna. Dessa proteiner motsvarar förràdsproteiner, som ateíinnes i protein- kroppar, vilka isolerats från mogna fröembryon i inhemsk 500 404 10 15 20 25 30 35 14 gran (fig. 2: Flinn m.fl. opublicerade resultat). Förti- V diga frögroddar, vilka bildats med samma halter av ABA som stimulerar ackumulerandet av förràdsproteiner i mogna embryon, innehåller ej mätbara halter av förràdsproteiner - fig. 2 och 4. Fig. 3 visar proteinprofiler hos förtidiga embryon, som differentierades 0 uM ABA (rad 1) och 20 uM ABA (rad 2) och molekulära viktmarkörer och fig. 4 visar proteinprofiler hos mogna embryon, som differentierades på 50 pM ABA (rad 1), 40 uM ABA (rad 2), 30 pM ABA (rad 3), 20 pM ABA (rad 4), lOpM ABA (rad 5) och molekylvikts- markörer (MW). Vandringsavståndet av de prominenta förrådsproteinerna anges medelst pilarna. Sålunda synes ackumuleringen av förrådsproteiner vara ett resultat av_ ABA, som hindrade förtidig grodd och som sträcker sig över mognadsperioden i stället för de absoluta halterna av ABA.
Dessa biomarkörer användes för att definiera det rätta mognadsprotokollet för somatiska embryon. Även om mogna embryon bildades pà mediat, som innehöll så lite som 10 uM ABA, innehöll de lägre nivåer av förràdsproteiner än mogna embryon, som produceras med högre halter av ABA (fig. 3 och 4). Sålunda synes ABA styra mognader och likaledes den grad, vid vilken förrådsproteiner ackumuleras.
De föreliggande resultaten ger en antydan om att inkluderandet av ABA i dessa kulturer ökar förrádspro- teinets ackumulering. Hakman och von Arnold (1988) A rapporterar somantiska embryon av vit gran, differentierad i närvaro av ABA och innehåller lipid- och proteinkroppar.
Becwar m.fl. lQ87 rapporterade, att ekvimolära koncentrationer av ABA och indol-3-butyrsyra (IBA) gynnade differentieringen av norsk grans embryogenetiska kallus.
Emellertid var inkluderandet IBA skadligt för differentie- ringen av norsk gran i jämförelse med effekterna av blott ABA (von Arnold och Hakman, 1988). Föreliggande uppfinning visar effekterna av IBA på mognaden av somantiska embryon.
Införandet av små mängder (0,1 - 10 uM) av IBA i differentieringsmediat förbättrade produkten av mogna embryon (Tabell 2). :_ v, i W. _ _, .,,_,,“.,,. ,, www, __! i Q w 15 TABELL 2 IBA-effekter på produktionen av mogna embryon 5 ABA/IBA % FÖR KQNTROLL (nM) 10 40/0 100 i 12a 40/0,1 125 1-11 40/1 134 i 12 40/10 138 i 17 V 40/20 114 3 18 15 40/40 59 i 5 aMean i SE för 9 kalli per behandling. 20 25 30 _35 sood4o4 10 15 20 25 30 35 16 Dessutom förbättrades hjärtbladsutveckling och generell embryomorfologi under dessa betingelser. Vid högre halter av IBA utvecklade emellertid-embryorna en förstorad hypokotyl. Carman (1988) fann, att en kombi- nation av auxin och ABA förbättrade utvecklingen av somantiska embryon. Det förelåg ej någon effekt av IBA pà ackumulerandet av förrådsproteiner i mogna embryon eller på deras kapacitet för rotförlängning.
Redenbaugh m.fl. (1984) fann ett förhållande mellan graden av mognad hos somantiska embryon och livskraften hos de resulterande plantorna. Plantorna, som erhållits från somantiska embryon, vilka innehöll högre halter av förràdsproteiner, var mera livfulla och man förmodade, att förrådsproteiner kunde användas som markörer för embryo- kvalitet. Föreliggande uppfinning visar, att förloppet av embryomognaden har en effekt på den efterföljande kvali- teten hos plantan. Omvandlingen av somantiska embryon av gran begränsas genom möjligheten att erhålla rotförläng- ning (Boulay m.fl.; 1988; von Arnold och Hakman, 1988).
Därför användes frekvensen hos rotförlängningen som ett kriterium för utvärdering av embryokvaliteten- Rotför- längningen var rutinmässigt högre från mogna embryon jämfört med förtidiga groddar och någon rotförlängning kunde inte obserberas hos sticklingar (Tabell 3). 10 15 20 25 30 35 büü 494 17 TÄBELL 3 ABA ROTFÖRLÄNGNING % (pm) s PE ME 10 ø 15 i sh za i 4 20 O 7 i 7 21 1 4 30 O - 30 i 13 40 O - 26 i 9 50 O - 12 i 7 - skott; PE = förtidiga embryøn; ME = mogna embryøn a _ S bMean i SE för 60 strukturer per behandling. 500 404 10 15 20 25 30 35 18 Det är sålunda uppenbart, att när embryomognaden förbättras, förbättrades även embryokvaliteten. Emellertid var frekvensen av rotbildningen inom mogna embryon inte direkt relaterad till olika halter av förràdsproteiner.
Den ökade upsamlingen av förràdsproteiner i enbryon i rad ll, som var relaterad till differentieringen vid högre halter av ABA, stod inte i förhållande till skillnader i deras förmåga till rotbildning. A Förràdsproteiner kan användas för identifiering av mogna embryon och representerar därför biomarkörer för bestämning av embryokvaliteten.
Effekter av förgroningsbehandlingar på embryogroningen.
För utvärdering av effekterna av delvis torkning pà. grobildningen avlägsnades mogna somantiska embryon från mognadsmediet och fick antingen gro direkt på hormonfritt medium eller förbehandlades de i två veckor före mog- ningen. Förbehandlingarna utgjordes av lufttorkning vid rumsfuktighet (AD) torkning vid hög fuktighet (ADM) eller en vattenbehandling (anbringande av embryon på en vatten- mättad Kimpac (WSK)= Groningen av mogna embryon som var anbragta direkt på groningsmediet, kännetecknades av 2 - 3 veckor av hypokotyl/hjärtbladsförlängning, som átföljdes av en låg frekvens av rotförlängning, fig. 4. Fig. l visar att halten av embryon, som uppvisar radikal förlängning, kunde upptecknas vid specifierade tidpunkter efter an- bringandet på groningsunderlaget. Behandlingarna genomför- des under 16 dagar och omfattade: Beskurna fröembryon; MSE, mogna somantiska embryon; vatten-MSE, somantiska embryon anbragta på vattendränkt Kimpaks; ADM-MSE, somantiska embryon torkade vid hög fuktighet; AD-MSE, somantiska embryon torkade vid rumsfuktighet. Försöket upprepades tvà gånger med samma resultat. Delvis torkning av embryon vid rumsfuktighet (AD) resulterade i 100% mortalitet. Förbehandling av embryon pà WSK ledde till förbättrad frekvens hos rotförlängningen (ca 70%) men skottförlängningen föregick fortfarande förlängningen av 10 15 20 25 30 35 19 rötterna med 2 - 3 veckor. V Torkning av embryon vid hög fuktighet (ADM) resul- terade i snabb groning, som nådde 80% efter 7 dagar. Denna senare behandling gav en groningsfrekvens och en grad, som var jämförbar med den hos zygotiska embryon. Embryon, som var inkuberade under ADM-betingelser i 16 dagar, hade förlorat ett genomsnitt pà 10% av utsprungsvikten. Denna behandling har liknande effekt pà graden ooh frekvensen hos groningen hos embryon, som erhålles från andra rader av embryogenisk kallus (tabell 4). Fuktighetsgraden, som kan användas för partiell torkning av somantiska embryon O utan dödlig effekt, uppgår till ca 85 - 99,9 6. 500 404 . 20 TABELL 4 Effekterna av delvis torkning pà groning hos olika embryo- genotyper. 5 Rotförlängning (%) Genotyp Behandling 7 dagar 14 dagar 21 dagar 2 Mogna embryon 0 29_ 29 Delvis torkade 91 91 91 10 5 Mogna embryon_ 0 0 3 Delvis torkade 38 »76 76 41 Mogna embryon 0 '20, 20 Delvis torkade 82 90 90 44' Mogna embryon O 24 24 15 Delvis torkade 82 82 82 20 25 30 35 10 l5 20 25 30 35 500 404 21 Effekter av modifierad mognads- och groningsmedia pà embryoegenskaperna.
Somantiska embryon differentierades på 40 pM ABA i kombination med olika koncentrationer av IBA. Dessa utsattes för ADM-behandling och fick gro pà en rad material. Groningsmaterialet varierades med avseende på koncentration av basalt VE-medium och sackaroskon- A centration. Embryon grodde på alla provade media, men de som differentierades med låga halter (O - 0,1 pM) av IBA gav de högsta groningsfrekvenserna (Tabell 2). De allmänna trenderna hos dessa resultat antydde, att den högsta groningen erhölls med halv styrka VEHF med 2% sackaros med embryon, som differentierades i närvaro av 0,1 pM IBA.
Effekterna av dessa behandlingar på rot- och skott- förlängning bestämdes två veckor efter det att embryona hade placerats på groningsmediet. Ringa rotförlängning erhölls pà medier, som innehöll 0,5 och 1% sackaros ( mm) och förlängningsdata bestämdes inte. Betydande skillnader i graden av förlängning mellan mognadsbe-. handling och groningsmedia kunde observeras (Tabell 5).
Låga halter av IBA (O - 1 pM) gynnade rot- och skottför- längning. Embryon, som hade mognat i närvaro av högre 'halter av IBA uppträdde bättre på högre (1/2 till fullo) mediastyrkor. Det bästa mediet för rotförlängning var halv styrka VEHF. Sackaroskoncentrationer på 2 eller 3,4% gav god skottförlängning men rotförlängningen var större på -3,4% sackaros. De kombinerade effekterna av förbättrade mognadsbehandlingar och groningsmedia resulterade i rotförlängning på över 2,5 cm på två veckor. 500 4-04 Effekterna av groningsmediçm pà rot- 22 TABELL 5 ROTFÖRLÄNGNING (Cm) och skottförlängning. s MVH uzva IVB 2* 3-4* 2% f 3.4: za 3.40 3:01 0.70¿.12 0457936 o.72¿.12 2.09¿.1s 1.003.161 1.39;.20 401; 052143 1.a2¿.26 1.22;.1a¿ 2.s2¿.12 1.s7¿.22 1.s4¿.23 0.743.3 1.87:.3$ 1.023.24 2.0;.43 V 0;97¿.02 1.17:.19 40/10 <.s <.s 1.0s¿.1s 1.a1¿.2a- 0.sa¿.1s o.ss;.zsv 40/20 <.s <.s <.s _2.03¿.12 0.a4¿.14 0.903.17- 40/40 <.s <.s <.s <.s <__=, <_5 m _ 20 sxoTTPöRLÄNGNIxG (om) 1/4v: 1/2vs 1vs za ma za 3.40 20 3.410 40/0 0.30¿.03 “o.27¿.04 0.393.105 0.sa;.'os '0.ss¿.0s 0.s2;.0s 401.1 0.a2¿.0s 0.3a;.0s 0.443.041 0.3's;.04 0.s1¿.0s 0.533.011. 40/1 0.42¿.04 0.211.113 0.ss¿.01 0.ss¿.22 eo.sz;.o4 -0.40¿.04 401410 <.3 <.3 0.33;.04 033504 0.4s¿.0s 0.sv¿.0s 40/20 <.3 <.3 <.3 <.3 0.57¿.o7 o.47;.oa 40/40 <.3 <.3 <.3 0 <.3 <.3 <.3 35 - Mätningarna gjordes groning. tvà veckor efter initierad 10 ' 15. 20 25 30 A 35 Mv-gymzw» gqñ.t.__y,.h,wv. _.= . (y w..\,f.,wsæšt.íåï_,i¿..fl .,,_,,_,__,_ . ,,,=,\,,__¿Éä_h__3 WN ä 404 23 Effekt av-ADM-behandling pá plantöverlevnad efter överförande till kalljord.
Plantor, som erhölls från obehandlade kontroller, visade sig ge spetsiga knoppar och början på ett uppenbart vilotillstànd strax efter groningen, under det att de från ADM-embryon blott sällan visade denna oönskade karak- teristika (Tabell 6). ADM-behandling resulterade i en allmän ökning av livskraften, som var uppenbar i den realtivt högre överlevnadsgraden hos dessa plantor under överförande till kalljord och rumsfuktighet. 500 404 24 - TABELL 5 Effekterna av ADM-behandlingen pà hög fuktighet vid överförande av plantorna till kalljord. 5 Behandling V Överlevad (%) Mogna embryon _ 3,1 Delvis torkade embryon l 47 10 15 20 25 30 35 10 15 20 25 30 _35 500 4ø4 25 Under naturlig frömognad och när samlandet av förrådsreserver har avslutats, börjar fröna att förlora .fukt och embryot går in i en period med torkning (Owens and Moulder, 1984; Bewley and Black). Somantiska embryon som var differentierade medelst de metoder, som användes i detta arbete, ackumulerade förrádsproteiner och gick in i en period av vila. Simulering av sistnämnda tillstånd hos embryonutvecklingen genom delvis torkning vid hög fuktig- het förbättrade groningen från 25 - 80%, medförde synkron groning och resulterade i mera livlig rottillväkt. Dessa resultat liknar dem som erhålles från somantiska soya- embryn (Parrott m.fl. 1988), där blott sporadisk groning kunde uppnås i frånvaro av en förbehandling och efter torkning var groningen mycket genotypberoende. Vi har också varit i stånd att erhålla groningsfrekvenser på 80 - 100% med tre genotyper. Vidare kunde överförande till livskraftiga plantor erhållas för alla observerade groddar.
Detta står i motsats till somantiska embryon av fruktträdgàrdsgräs, på vilka man har rapporterat en total omvandlingsfrekvens på ca öß. Mycket lägre frekvenser har rapporterats för somantiska veteembryon efter torkning (Carman 1988).
Det har antagits, att torkning omkopplar gener, som avges i embryot från de som erfordras för mognad till de för groning. Dessa resultat står i överensstämmelse med denna hypotes däri, att delvis torkning även gynnar syn- kroniserad groning, så att rotförlängningen sammanfaller med förlängning av hypokotyl/hjärtblad. Detta mönster för groning är mera parallellt med mönstret för zygotiska embryon. Synkroniserad groning uppträder inte utan en delvis torkande förbehandling av embryona. Två kännetecken på tidig planttillväxt skilde som erhållits från icke förbehandlade och delvis torkade embryon. Bildandet av spetsiga knoppar var vanligt hos de icke behandlade. plantorna, varvid överförandet till kalljord (mest troligt en indikation på plantlivskraft) förbättrades. Uppen- barligen påverkas den biologiska klockan, som bestämmer irr:;¶I 500 404 10 15 20* 25 30 35 26 när plantan skall börja växa, av den delvisa torknings- behandlingen.
Förhållandet mellan tiden för behandling med relativt hög fuktighet (ADM) och embryogroning, tidig utveckling och acklimatiseringöverlevnad studerades. Dessa studier genomfördes på somantiska embryon av Sitka-barrträd även om liknande resultat erhölls för inhemsk gran.
Det fanns ett positivt förhållande mellan den tids- längd, som embryona förblev under betingelser med hög relativ fuktighet (ADM) och frekvensen av rotemergens (fig. 6). Somantiska embryon av Sitka~granar som över- fördes direkt från mognadskulturen till groningsbe- tingelser utan ADM-behandling producerar inte lätt rötter) med blott 10% uppvisande rotemergens under de första 21 dagarna. Redan en dag efter ADM-behandlingen uppstod en _ökning i frekvensen av rotemergens. Rotemergensen fort- 'satte att förbättras och nådde 60 - 80%, när behandlings- perioden ökades till mellan 7 och 21 dagar. Efter 35 dagar med ADM-behandling uppvisade 90 - 100% av embryona rot- emergens inom 14 dagar efter att ha placerats under gro- ~ningsbetingelser. Följaktligen påverkas såväl frekvensen hos rotemergensen som kinetiken hos rotemergensen avevärt under tiden för ADM-behandlingen med längre exponering, som förorsakade snabbare groning (fig. 6).
Tillväxt och utveckling av somantiska embryon under' groningen påverkades även av exponeringstiden för ADM- behandlingen (fig. 7 och 8). Den totala längden (rot och hypokotyl), som groddar hade nått på dag 21 ökades gradvis, när embryona behandlades under längre perioder (fig. 7). Embryon som behandlats i 35 dagar, ökade med 5 gånger längden av de som icke hade erhållit någon förbättrad rotemergens och dessutom ökade rot- och hypokotylväxten (fig. 7).
Såsom visas i fig. 7 påverkades grodddmorfologin av ADM-behandling och groddar klassades enligt deras kvalitet (Tabell 1). Antalet embryon som utvecklades till groddar av högre kvalitet (de som uppvisade rotemergens en förlängd, icke vitrifierad hypokotyl) ökades allt eftersom 'w u-.~rf-~~~-= ~ 1 »av www-luv .w 10 15 20 25 30 35 äÛÜ 404 27 perioden för behandlingen med hög relativfuktighetV' utsträcktes.
Groddkvaliteten hade en kraftig effekt på förmågan .hos groddarna att överleva acklimatisering till kalljord och ex vicro-betingelser (tabell 8)- croadar med hög kvalitet överlevde acklimatisering med en frekvens pá 92% jämfört med 43% för groddar, vilka hade klassats av làg kvlaitet. Acklimatiseringen av somantiska embryon har visat sig vara svår och är synnerligen känslig fö- miljö- förändringar under överförandet till kalljord (Becwear m.fl. 1989). De föreliggande resultat, som visar att ADM- behandlingen kan förbättra acklimatiseringsöverlevnad hos Sitka-granars somantiska embryon genom förbättring av groddkvaliteten. 500 404 28 TABELL 7. Produktion av groddar med hög kvalitet efter olika perioder av behandling med hög relativ fuktighet samt deras överlevnad under acklima- 5 tisering Ex Vitro.
TID FÖR GROUDAR Av BEHANDLING Höc KVALITET man RELATIVT 10 HÖG FUKTIGHET (%) ÖVERLEVNAD Av GRODDÅR MED HÖG KVALITET (%) (DAGAR) 0 (0/40) 0 0 15 1 (2/40) 5 (2/2) _ 100 3 (4/40) 10 (3/3) 100' 7 (15/40) 87,5 (13/15) 85,7 14 (15/40) 37,5 (13/14) 92,9 21 (29/40) 72,5 (21/23) 91,3 20 28 (27/40) 57,5 (18/20) 90 35 (35/40) 87,5 (31/35) 88,5 TOTALT (127/320) 39,7 (101/112) 90,2 2§ öä§, Ackíimâtíeêríngäövefievnad Be§fämde§ efter tre veckor på kall jord- 30 35 V 10 15 20 25 30 35 29 Tabell 8. Acklimatiseringsöverlevnad hos olika grodd- typer efter överförande till betingelser Ex Vitro.
GRODDTYP ÖVERLEVNAD ( % ) ACKLIMATISERING PLANTSKOLA enonn av hög kvalitet V 91 83,9 GRODD av låg kvalitet 41,2 24,7 a) Normal hypokotyl w/o rotutveckling 33,3 33,3 b) Vitrifierad hypokotyl w/o rotut- i veckling 44 , 6 30., 4 c) Vitrifierad hypokotyl w/o rotut- _ ~29,6 7,4 veckling OBS: Acklimatiseringsöverlevnaden bestämdes efter tre veckor i tillväxtrummet och plantskoleöverlevnad bestämdes efter fyra veckor i växthus. 500 404 10 15 20 25 30 35 A undertryckte ABA onormal utveckling, 30 Sammanfattningsvis kan sägas att tidseffekterna pà behandling med relativt hög fuktighet avslöjade, att när längden av denna behandling ökades, det uppkom en ökning i embryogroningen, förbättring i tillväxt och utveckling och att dessa förändringar resulterade i en härdigare grodd, som är i stånd till högre acklimatiseringsöverlevnad.
Eftersom detta arbete genomfördes med somantiska embryon av Sitka-granar (liknande resultat har erhållits från demonstrerar dessutom dessa resultat, att inhemsk gran), behandling med den relativt höga fuktigheten av (ADM) kan gynna groning på samma sätt för olika arter av gran.
Referens Becwar, M.R., T.L. Noland och J.b. Wyckoff. (1989) Maturation, Germination and Conversion of Norway Spruce (Picea Abies L.) Somantic Embryos to Plants. In vitro Cell and nav 5101 26(6)=57s-5so)._ _ Sammanfattningsvis förbättras groningen och tidig tillväxt av somantiska embryon genom exponering för delvis' torkningsbehandling. De resultat som erhölls med granar, är jämställbara med de resultat, som har rapporterats från somantiska alfalfa embryonsystem, som lämpar sig för ett artificiellt odlingssystem. Eftersom de producerade embryona är av hög kvalitet och kan uthärda delvis tork- ning blir utsikterna för ett artificiellt odlingssystem för gran mycket lovande. Beträffande differentiering hindrade förtidig groning och gynnade mognad av somantisk embryon av inhemsk gran. Mogna embryon uppvisade större kapacitet för rotför- längning, vilket är en kritisk process, som begränsar deras omvandling till plantor.
Claims (7)
1. Förfarande för fortplantning av somatiska barrträdsembryon, vilket omfattar stegen av differen- tiering av somatiska embryon i kontakt med ett växtmedium, avskiljning av somatiska embryon från detta medium, som samt groning av de somatiska att innehåller abskisinsyra, embryona, k ä n n e t e c k n a t embryona får mogna på nämnda medium och delvis torkas före d ä r a v, 'odlingen genom att mogna embryon som är avskilda från nämnda medium, under åtminstone en dag utsättes för en atmosfär med en fuktighet från >85% till 99,9%.
2. Förfarande enligt patentkravet 1, k ä n n e- t e c k n a t d ä r a v, att fuktigheten i atmosfären åstadkommes i ett slutet omrâde i närvaro av en vätska som väljs ur den grupp som består av: vatten: och en vattenlösning av ett salt, som ger en fuktighet på 90% till mindre än ca 99,9%, varjämte embryona ej står i direkt kontakt.med nämnda vätska, när de är i det slutna området. _
3. Förfarande enligt patentkravet 2, k ä n n e- t e c k n a t som omfattar: som ger en fuktighet på ca väljes ur den grupp, mättat natriumdifosfat, '95% och mättat zinksulfat som ger en fuktighet på ca 90%.
4. Förfarande enligt något av patentkraven 1 - 3, k ä n noe t e c k n a t d ä r a v, att de mogna somatiska embryona erhålles från embryogenisk kalli, som initierades från omogna embryon och differentierades i kontakt med ett medium, som innehåller såväl abskisinsyra som indolbutyrsyra.
5. Förfarande enligt något av patentkraven 1 - 4, k ä n n e t e c k>n a t d ä r a v, att de mogna, soma- tiska embryona utsättes för atmosfären under åtminstone sju dagar. d ävr a v, att vattenlösningen av ett salt soo 4o4 32
6. Förfarande enligt något av patentkraven 1 - 5, k ä n n e t e c k n a t d ä r a v, att barrträdsembryona utgöres av granembryon.
7. Förfarande enligt något av patentkraven 1 - 5, 5 k ä n n e t e c k n a t d ä r a v, att barrträdet utgöres av Sitka-gran eller inhemsk gran. 10 lä 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/388,598 US5183757A (en) | 1989-08-01 | 1989-08-01 | Process for the production, desiccation and germination of conifer somatic embryos |
| PCT/CA1990/000241 WO1991001629A1 (en) | 1989-08-01 | 1990-07-27 | A process for the production, drying and germination of conifer somatic embryos |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE9200269D0 SE9200269D0 (sv) | 1992-01-31 |
| SE9200269L SE9200269L (sv) | 1992-03-27 |
| SE500404C2 true SE500404C2 (sv) | 1994-06-20 |
Family
ID=23534763
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE9200269A SE500404C2 (sv) | 1989-08-01 | 1992-01-31 | Ett förfarande för framställning, torkning och groning av somantiska barrträdsembryon |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5183757A (sv) |
| AU (1) | AU6073290A (sv) |
| CA (1) | CA2064697C (sv) |
| GB (1) | GB2250674B (sv) |
| SE (1) | SE500404C2 (sv) |
| WO (1) | WO1991001629A1 (sv) |
Families Citing this family (58)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69231890T2 (de) | 1991-12-19 | 2002-03-28 | Univ Saskatchewan Saskatchewan | Desikkation von gymnosperm somatischen embryonen |
| US6340594B1 (en) | 1991-12-19 | 2002-01-22 | Cellfor, Inc. | Production of desiccation-tolerant gymnosperm embryos |
| US5413930A (en) * | 1993-10-21 | 1995-05-09 | Westvaco Corporation | Method for regeneration of coniferous plants by somatic embryogenesis |
| US5506136A (en) * | 1993-10-21 | 1996-04-09 | Westvaco Corporation | Method for regeneration of coniferous plants by somatic embryogenesis |
| US5491090A (en) * | 1994-02-09 | 1996-02-13 | Westvaco Corporation | Embryogenic coniferous liquid suspension cultures |
| NZ272210A (en) | 1995-05-25 | 1997-10-24 | Carter Holt Harvey Ltd | Treatment of somatic embryos to provide viable embryos after storage periods |
| US5677185A (en) * | 1996-05-14 | 1997-10-14 | Westvaco Corporation | Method for regeneration of coniferous plants by somatic embryogenesis in culture media containing abscisic acid |
| US5731203A (en) * | 1996-06-14 | 1998-03-24 | Westvaco Corporation | Method for regeneration of coniferous plants by somatic embryogenesis |
| US5731191A (en) * | 1996-12-20 | 1998-03-24 | Westvaco Corporation | Method for regeneration of coniferous plants by somatic embryogenesis employing polyethylene glycol |
| US5731204A (en) * | 1996-12-20 | 1998-03-24 | Westvaco Corporation | Method for regeneration of coniferous plants by somatic embryogenesis employing polyethylene glycol |
| AU778880B2 (en) * | 1997-04-21 | 2004-12-23 | Weyerhaeuser Company | Method for inducing and determining maturity in conifer somatic embryos |
| AU739097B2 (en) * | 1997-04-21 | 2001-10-04 | Weyerhaeuser Company | Method for inducing and determining maturity in conifer somatic embryos |
| US6143563A (en) * | 1997-05-20 | 2000-11-07 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Cryopreservation of embryogenic callus |
| US6134830A (en) * | 1997-11-20 | 2000-10-24 | Weyerhaeuser Company | Method for storing and improving the survival rate of conifer somatic embryo germinants |
| NZ507085A (en) | 1998-03-17 | 2003-11-28 | Silvagen Inc | Maturation of somatic embryos in a medium comprising a gelling agent and a porous support which reduces the availability of water in the growth environment |
| US20040072143A1 (en) * | 1998-06-01 | 2004-04-15 | Weyerhaeuser Company | Methods for classification of somatic embryos |
| AU746616B2 (en) * | 1998-06-01 | 2002-05-02 | Weyerhaeuser Company | Methods for classification of somatic embryos |
| CA2240135A1 (en) | 1998-06-05 | 1999-12-05 | University Of Saskatchewan Technologies Inc. | Increasing concentration of growth regulator during development of somatic embryos |
| US6946295B2 (en) * | 1998-06-12 | 2005-09-20 | Cellfor, Inc. | Process for ex vitro sowing and germination of plant somatic embryos |
| DE69903734T2 (de) | 1998-06-12 | 2003-07-17 | Silvagen Inc., Vancouver | Verfahren zur herstellung und anschliessender (ex vitro) aussaat und vermehrung von vorgekeimten pflanzlichen somatischen embryos |
| NZ514743A (en) | 1999-04-15 | 2003-10-31 | Cellfor Inc | Enhancing germination of plant somatic embryos by priming with a solution containing a dissolved nutrient |
| US6689609B1 (en) | 1999-04-15 | 2004-02-10 | Cellfor Inc. | Enhancing germination of plant somatic embryos by priming |
| US6682931B2 (en) | 1999-05-25 | 2004-01-27 | Meadwestvaco Corporation | Recovering cryopreserved conifer embryogenic cultures |
| US7598073B2 (en) | 2002-04-09 | 2009-10-06 | Weyerhaeuser Nr Company | Methods for producing high yields of zygotic-like cotyledonary pine embryos utilizing media that include a disaccharide and glucose |
| US7381562B2 (en) * | 2002-05-30 | 2008-06-03 | Weyerhaeuser Company | Methods for producing cotyledonary pine embryos utilizing a gibberellin |
| CA2435337C (en) * | 2002-11-14 | 2010-03-23 | Weyerhaeuser Company | Methods for producing conifer somatic embryos |
| US7521237B2 (en) * | 2003-06-23 | 2009-04-21 | Weyerhaeuser Nr Company | Methods for promoting maturation of conifer somatic embryos |
| US7881502B2 (en) * | 2003-06-30 | 2011-02-01 | Weyerhaeuser Nr Company | Method and system for three-dimensionally imaging an apical dome of a plant embryo |
| US20040266002A1 (en) * | 2003-06-30 | 2004-12-30 | Weyerhaeuser Company | Use of abscisic acid in somatic embryogenesis of pine trees |
| US7530197B2 (en) | 2003-06-30 | 2009-05-12 | Weyerhaeuser Co. | Automated system and method for harvesting and multi-stage screening of plant embryos |
| US7732205B2 (en) * | 2003-07-30 | 2010-06-08 | Weyerhaeuser Nr Company | Development and stratification of pine somatic embryos using a liquid system |
| US7228658B2 (en) * | 2003-08-27 | 2007-06-12 | Weyerhaeuser Company | Method of attaching an end seal to manufactured seeds |
| US8691575B2 (en) * | 2003-09-30 | 2014-04-08 | Weyerhaeuser Nr Company | General method of classifying plant embryos using a generalized Lorenz-Bayes classifier |
| US7555865B2 (en) * | 2003-11-25 | 2009-07-07 | Weyerhaeuser Nr Company | Method and system of manufacturing artificial seed coats |
| US20050108929A1 (en) * | 2003-11-25 | 2005-05-26 | Edwin Hirahara | Method and system for creating manufactured seeds |
| CA2484533C (en) * | 2003-11-25 | 2008-12-02 | Weyerhaeuser Company | Systems and method of embryo delivery for manufactured seeds |
| CA2486289C (en) * | 2003-11-25 | 2008-01-08 | Weyerhaeuser Company | Combination end seal and restraint |
| US7520089B2 (en) * | 2003-11-25 | 2009-04-21 | Weyerhaeuser Nr Company | Method to improve manufactured seed germination |
| US20050108935A1 (en) * | 2003-11-25 | 2005-05-26 | Edwin Hirahara | Method and system of manufacturing artificial seed coats |
| CA2486311C (en) | 2003-11-26 | 2008-08-12 | Weyerhaeuser Company | Vacuum pick-up device with mechanically assisted release |
| US7795029B2 (en) * | 2003-12-04 | 2010-09-14 | Cellfor Inc. | Method of ex vitro sowing, germination, growth and conversion of plant somatic embryos or germinants |
| US7356965B2 (en) * | 2003-12-11 | 2008-04-15 | Weyerhaeuser Co. | Multi-embryo manufactured seed |
| US7591287B2 (en) * | 2003-12-18 | 2009-09-22 | Weyerhaeuser Nr Company | System and method for filling a seedcoat with a liquid to a selected level |
| CA2495650C (en) * | 2004-02-25 | 2011-05-24 | Weyerhaeuser Company | Continuous culture of conifer embryogenic tissue |
| US7452722B2 (en) * | 2004-03-02 | 2008-11-18 | Weyerhaeuser Company | Methods for developing conifer somatic embryos |
| US7568309B2 (en) * | 2004-06-30 | 2009-08-04 | Weyerhaeuser Nr Company | Method and system for producing manufactured seeds |
| CA2518279A1 (en) * | 2004-09-27 | 2006-03-27 | Weyerhaeuser Company | Manufactured seed having a live end seal coating |
| US7547488B2 (en) * | 2004-12-15 | 2009-06-16 | Weyerhaeuser Nr Company | Oriented strand board panel having improved strand alignment and a method for making the same |
| WO2006094400A1 (en) * | 2005-03-10 | 2006-09-14 | Cellfor Inc. | Aerated liquid priming of conifer somatic germinants |
| WO2006118962A2 (en) * | 2005-04-29 | 2006-11-09 | Arborgen, Llc | Improved somatic embryogenesis and embryo harvesting and method and apparatus for preparing plant embryos for plant production |
| US7654037B2 (en) * | 2005-06-30 | 2010-02-02 | Weyerhaeuser Nr Company | Method to improve plant somatic embryo germination from manufactured seed |
| US20070087438A1 (en) * | 2005-10-17 | 2007-04-19 | Grob James A | Methods for conditioning plant somatic embryos |
| US7719099B2 (en) * | 2005-10-21 | 2010-05-18 | Advanced Optoelectronic Technology Inc. | Package structure for solid-state lighting devices and method of fabricating the same |
| CA2568476C (en) * | 2005-12-22 | 2015-03-17 | Weyerhaeuser Company | Methods for storing conifer somatic embryo germinants |
| US8744775B2 (en) * | 2007-12-28 | 2014-06-03 | Weyerhaeuser Nr Company | Methods for classification of somatic embryos comprising hyperspectral line imaging |
| US9055721B2 (en) | 2010-08-19 | 2015-06-16 | The Institute For Advanced Learning And Research | Methods and media formulations for large-scale and efficient micropropagation of bio-energy grasses |
| CN102771393B (zh) * | 2012-08-02 | 2013-10-16 | 中国林业科学研究院林业研究所 | 川西云杉体细胞胚胎发生与植株再生方法 |
| CN113575418A (zh) * | 2021-08-17 | 2021-11-02 | 青岛农业大学 | 用于樟子松离体胚干化处理的装置和培养方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4777762A (en) * | 1986-01-07 | 1988-10-18 | Plant Genetics, Inc. | Desiccated analogs of botanic seed |
| GB8717099D0 (en) * | 1987-07-20 | 1987-08-26 | Univ Guelph | Induce desiccation tolerance in somatic embryos |
| WO1989005575A1 (en) * | 1987-12-18 | 1989-06-29 | University Of Florida | Quiescent plant somatic embryos and method for their production |
| AU3842589A (en) * | 1988-06-14 | 1990-01-23 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | Method for maturing somatic embryos for planting in natural environments |
| US4957866A (en) * | 1989-03-09 | 1990-09-18 | Weyerhaeuser Company | Method for reproducing coniferous plants by somatic embryogenesis |
-
1989
- 1989-08-01 US US07/388,598 patent/US5183757A/en not_active Expired - Fee Related
-
1990
- 1990-07-27 AU AU60732/90A patent/AU6073290A/en not_active Abandoned
- 1990-07-27 WO PCT/CA1990/000241 patent/WO1991001629A1/en not_active Ceased
- 1990-07-27 CA CA002064697A patent/CA2064697C/en not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-01-30 GB GB9201986A patent/GB2250674B/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-01-31 SE SE9200269A patent/SE500404C2/sv not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1991001629A1 (en) | 1991-02-21 |
| AU6073290A (en) | 1991-03-11 |
| GB9201986D0 (en) | 1992-03-18 |
| GB2250674B (en) | 1994-03-02 |
| US5183757A (en) | 1993-02-02 |
| GB2250674A (en) | 1992-06-17 |
| SE9200269L (sv) | 1992-03-27 |
| SE9200269D0 (sv) | 1992-01-31 |
| CA2064697A1 (en) | 1991-02-02 |
| CA2064697C (en) | 1996-04-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2064697C (en) | A process for the production, drying and germination of conifer somatic embryos | |
| Vasil et al. | The ontogeny of somatic embryos of Pennisetum americanum (L.) K. Schum. I. In cultured immature embryos | |
| Khawar et al. | Effect of thidiazuron on shoot regeneration from different explants of lentil (Lens culinaris Medik.) via organogenesis | |
| Hussey et al. | Plant production in pea (Pisum sativum L. cvs. Puget and Upton) from long-term callus with superficial meristems | |
| Zheng et al. | Rapid and repetitive plant regeneration in sweetpotato via somatic embryogenesis | |
| Steinitz et al. | Pepper (Capsicum annuum L.) regenerants obtained by direct somatic embryogenesis fail to develop a shoot | |
| Gray | Somatic embryogenesis in grape | |
| Ritchie et al. | In vitro shoot regeneration from callus, leaf axils and petioles of sugar beet (Beta vulgaris L.) | |
| Gladfelter et al. | De novo shoot organogenesis of Pinus eldarica Medw. in vitro: I. Reproducible regeneration from long-term callus cultures | |
| US6117678A (en) | Method for determining maturity of conifer somatic embryos | |
| Deb et al. | In vitro plant regeneration of wild eggplant (Solanum sisymbriifolium) to produce large number of rootstocks for tomato grafting | |
| Sathish et al. | Rice anther culture: callus initiation and androclonal variation in progenies of regenerated plants | |
| Ozaslan et al. | Effect of explant source on in vitro propagation of Paulownia tomentosa Steud. | |
| Franklin et al. | Factors affecting regeneration of pigeonpea (Cajanus cajan L. Millsp) from mature embryonal axes | |
| Dunstan et al. | Shoot production from the flower head of Allium cepa L. | |
| Zhang et al. | Sunflower (Helianthus annuus L.) organogenesis from primary leaves of young seedlings preconditioned by cytokinin | |
| Gupta et al. | Somatic embryogenesis in Douglas-fir (Pseudotsuga menziesii) | |
| Desamero et al. | Picolinic acid-induced direct somatic embryogenesis in sweet potato | |
| Fuentes et al. | Embryogenic response of Mexican alfalfa (Medicago sativa) varieties | |
| Welander | Micropropagation of birch | |
| Mallikarjuna et al. | Somatic embryogenesis in pigeonpea Cajanus cajan L. | |
| Shan et al. | High efficiency in vitro plant regeneration from epicotyl explants of Chinese peanut cultivars | |
| Sahijram et al. | Somatic embryogenesis | |
| Bermejo et al. | In vitro plant regeneration from cotyledonary nodes of recombinant inbred lines of lentil | |
| Leng et al. | Fruit set and embryo rescue in crosses using parthenocarpic ‘Mopanshi’persimmon |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NUG | Patent has lapsed |