SU1138410A1 - Способ выделени термостабильной плацентарной щелочной фосфатазы - Google Patents
Способ выделени термостабильной плацентарной щелочной фосфатазы Download PDFInfo
- Publication number
- SU1138410A1 SU1138410A1 SU823491319A SU3491319A SU1138410A1 SU 1138410 A1 SU1138410 A1 SU 1138410A1 SU 823491319 A SU823491319 A SU 823491319A SU 3491319 A SU3491319 A SU 3491319A SU 1138410 A1 SU1138410 A1 SU 1138410A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- alkaline phosphatase
- thermostable
- minutes
- dialysis
- heating
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 title description 5
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 title description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 10
- QCUOBSQYDGUHHT-UHFFFAOYSA-L cadmium sulfate Chemical compound [Cd+2].[O-]S([O-])(=O)=O QCUOBSQYDGUHHT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 10
- 229910000331 cadmium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 8
- 102100024321 Alkaline phosphatase, placental type Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108010031345 placental alkaline phosphatase Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000006149 azo coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 description 1
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ТЕРМОСТАБИЛЬНОЙ ПЛАЦЕНТАРНОЙ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ , предусма;тривак ций экстрагирование ткани раствором хлористого натри , прогревание экстракта, диализ и электрофорез в полиакриламидном геле, отличающийс тем, что, с целью увеличени выхода . целевого продукта и упрощени способа , перед диализом провод т повторное прогревание в присутствии 0,14-0,18%-ного сернокислого кадми iпри 62-65 С в течение 1-5 мин. (О
Description
00
эо 4 Изобретение относитс к медицине а именно в биохимии, и может быть использовано дл выделени термостабильной плацентарной щелочной фосфатазы .. Известен способ вьщелени щелочно фосфатазы, включающий обработку гомо гената ткани бутанолом, фракционирование ацетоном и сульфатом аммони , гельфильтращт и ионообменную хро- . матографию С Недостатками данного способа вл ютс его сложность, длительность И. низкий вь;ход целевого продукта. Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту вл етс способ вьщеле ни термостабильной плацентарной щелочной фосфатазы, предусматривающий экстрагирование ткани 3 М раствором хлористого натри , прогревание экстракта в течение 10 мин при фракционирование хлористым цетилпи ридинием и сульфатом аммони , диализ-. и очистку целевого продукта электрофорезом в полиакриламидном геле t Недостатками известного способа вл ютс невысокий выход целевого продукта (72%), а также его сложност заключающа с в наличии двух стадий фракционировани . Цель изобретени - увеличение выходацелевого продукта и упрощение способа. Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу выделени термостабильной плацентарной щелочной фосфатазы, предусматривающему экстрагирование ткани раствором хлористого натри , прогревание экстракта , диализ и электрофорез в полиакри ламидном геле, перед диализом провод т повторное прогревание в присутствии О,14-0,18%-ного сернокислого кадми при 62-65 С в течение 1-5 мин. Эффективность очистки при варьировании в предлагаемых интервалах концентраций сернокислого кадми , температуры и времени практически не измен етс . За пределами этих интервалов или не достигаетс очистки фермента, например прогревание при 45°С, или происходит его инактиваци (табл. 1). Прогревание без добавлени сернокислого каДми приводит к 4,3-кратному увеличению удельной активности целевого продукта. Добавление сернокислого кадми в концентрации 0,14-0,18% не приводит к значительному увеличению удельной активности: в этом случае выпадает в осадок около 30% балластных белков и удельна активность фермента возрастает в 13,5 раз. Однако одновременное проведение двух обработок сернокислым кадмием и нагреванием, приводит к 15-кратной очистке с очень высоким выходом более 90%. П р им ер 1.1 этап. Приготовление плацентарного тканевого экстракта: гомогенизаци при 8000 об./мин в течение 5 мин отмытой от крови плаценты в 3 М растворе хлористого кали (вес-объемное соотнощение 1:3-4); перемешивание на магнитной мешалке при в течение 12 ч; центрифугирование при 6000 об./мин в течение 30 мин. Дальнейшее иссле- дование провод т с надосадочной жид-: костью после диализа против дистиллированной воды (2 смены по 60 .мин) и 0,1 моль раствора хлористого натри (2 сме.ны по 60 мин) . 2этап. Полученньй плацентарный экстракт прогревают при 65С в течение 10 мин и центрифугируют при 8000 об./мин в.течение 20-30 мин. 3этап. К надосадочной жидкости добавл ют сульфат кадми из расчета 0,14%-ной концентрации в итоговом растворе и проводитс повторное прогревание при 65с в течение 3 мин. Осадок отдел ют путем центрифугировани при 8000 об./мин в течение 2030 мин. 4этап. Надосадочную жидкость диализуют в течение 10-12 ч против ацетатного буфера (рН 4,5). 5этап. Дрочищение препарата проводитс методом препаративного диск-электрофореза в 7%-ном полиак-г риламидном геле с последующим извлечением из гел термостабильной щелочной фосфатазы электрофоретически. Гель, содержащий фермент, вырез-ают под визуальным контролем после окрашивани методом азосочетани (субстрат - нафтол - As - BS - фосфат, краситель - прочный синий соль В). Количество очищенной термостабильной щелочной фосфатазы определ ют меГодом Лоури. Результаты очистки термостабильной щелочной фосфатазы плаценты даны в табл. 2. 3 Пример 2. Выделение провод аналогично примеру 1, но используют 0,18%-ный раствор сульфата кадми . Выход на этой стадии составл ет 93% против 93,1% ПОпримеру 1. Зависимость активности щелочной фосфатаэы от условий выделени (тем пературы ц концентрации сульфата кадми ) дана в табл. 1. Прогревание при в течение 1 или 5 мин привод т к тем же результатам (табл. 1). При введении вместо сульфата кадми 0,28%-ного сульфата натри 04 при последующем прогревании не наблюдаетс увеличение выпадани в осадок балластных белков по сравнению с контрольным опытом, в котором не добавл ют никаких солей. Таким образом, использование предлагаемого способа позвол ет значительно увеличить выход целевого продукта с 72% до 92,9%, а также значительно упростить выделение фермента за счет замены стадий фракционировани хлористым цетилпиридинием и сульфатом аммони простейшей стадией термообработки. Таблица 1
Прогревание при
Прогревание при
Добавление сульфа кадми при прогревании
: 0,14% 0,18%
: 0,14% 0,18
80С : 0,14 0,18
0,26%
6850
2,3
100,0 9,8
15-20 93,8
. Экстракт после обрабохки хлористым
Таблица 2
Claims (1)
- СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ТЕРМОСТАБИЛЬНОЙ ПЛАЦЕНТАРНОЙ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ, предусматривающий экстрагирование ткани раствором хлористого натрия, прогревание экстракта, диализ и электрофорез в полиакриламидном геле, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода . целевого продукта и упрощения способа, перед диализом проводят повторное прогревание в присутствии Ό,14-0,18%-ного сернокислого кадмия /при 62-654С в течение 1-5 мин.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU823491319A SU1138410A1 (ru) | 1982-09-10 | 1982-09-10 | Способ выделени термостабильной плацентарной щелочной фосфатазы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU823491319A SU1138410A1 (ru) | 1982-09-10 | 1982-09-10 | Способ выделени термостабильной плацентарной щелочной фосфатазы |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1138410A1 true SU1138410A1 (ru) | 1985-02-07 |
Family
ID=21029101
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU823491319A SU1138410A1 (ru) | 1982-09-10 | 1982-09-10 | Способ выделени термостабильной плацентарной щелочной фосфатазы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1138410A1 (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7011965B2 (en) * | 2001-03-09 | 2006-03-14 | Regents Of The University Of Minnesota | Compositions and methods for stimulating wound healing and fibroblast proliferation |
| US7374754B2 (en) | 2003-09-02 | 2008-05-20 | Essential Skincare, Llc | Use of placental alkaline phosphatase to promote skin cell proliferation |
| US8460654B2 (en) | 2005-12-28 | 2013-06-11 | Zoltan Laboratories Llc | Use of alkaline phosphatase to maintain healthy tissue mass in mammals |
| US8603464B2 (en) | 2002-12-12 | 2013-12-10 | Zoltan Laboratories Llc | Alkaline phosphatase to reduce weight gain or induce weight loss |
| RU2584328C2 (ru) * | 2014-06-04 | 2016-05-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО АГМА Минздрава России) | Способ выделения щелочной фосфатазы плацентарного типа |
-
1982
- 1982-09-10 SU SU823491319A patent/SU1138410A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Lehman P.G., Lehman D. Reganisoenzym: Isolierung der alkalishen Prosphatase des menshlicher Placenta und Entwicklung einer emphf indlichen Hethode fur die Fxmrordiagnostick.-Wern. Heutsch. Ger. .iMed. 80 Konpr. Wiesbaden, 1974, p. 1658-1661. 2. Авторское свидетельство СССР 8 1082811, кл. С 12 N 9/14, 1984. * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7011965B2 (en) * | 2001-03-09 | 2006-03-14 | Regents Of The University Of Minnesota | Compositions and methods for stimulating wound healing and fibroblast proliferation |
| US8603464B2 (en) | 2002-12-12 | 2013-12-10 | Zoltan Laboratories Llc | Alkaline phosphatase to reduce weight gain or induce weight loss |
| US7374754B2 (en) | 2003-09-02 | 2008-05-20 | Essential Skincare, Llc | Use of placental alkaline phosphatase to promote skin cell proliferation |
| US8460654B2 (en) | 2005-12-28 | 2013-06-11 | Zoltan Laboratories Llc | Use of alkaline phosphatase to maintain healthy tissue mass in mammals |
| RU2584328C2 (ru) * | 2014-06-04 | 2016-05-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО АГМА Минздрава России) | Способ выделения щелочной фосфатазы плацентарного типа |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wells | Evidence that the phospholipases A2 of Crotalus adamanteus venom are dimers | |
| US6893639B2 (en) | Method for high yield purification of immune globulins from blood plasma and blood plasma intermediates | |
| GB1487169A (en) | Production of egg white substitute from whey | |
| Hayashi et al. | Isolation of alkaline proteinase from Aspergillus sojae in homogeneous form | |
| Alais et al. | Isolation, purification, and analysis of two κ-casein-like fractions from sheep casein | |
| NO163959B (no) | Fremgangsm te for utvinning og rensing av et polype | |
| EP0226254B1 (en) | Process for obtaining non informational substantially pure polydesoxyribonucleotides having biologic activities, and respective product | |
| US4128637A (en) | Process for producing thymosin | |
| DK166393B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af vandige organekstrakter med et heparinindhold paa mindst 120 ie/ml | |
| US2433879A (en) | Manufacture of amino acid preparations intended for intravenous supply of nutrients | |
| RU2051969C1 (ru) | Способ получения бактериальных липополисахаридов | |
| US3677901A (en) | Process for the production of glycerokinase | |
| IKEZAWA et al. | Gel-filtration of Clostridium perfringens α-Toxin (Phospholipase C) | |
| RU92013657A (ru) | Способ получения сычужного фермента | |
| US4489066A (en) | Arterial polysaccharide complex, a method for its preparation and composition comprising same | |
| SU1108102A1 (ru) | Способ получени пероксидазы | |
| BG47199A3 (en) | Method for manufacture of gelatine | |
| DK146630B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af gelatine ved forbehandling af collagenholdigt materiale med proteolytiske enzymer | |
| US2587924A (en) | Methods of producing heparin | |
| RU2115662C1 (ru) | Способ получения гиалуроновой кислоты | |
| KR100682646B1 (ko) | 크로마토그래피법을 이용한 순수 포피란의 분리 및정제방법 | |
| JPS61275224A (ja) | コラゲナ−ゼ阻害剤 | |
| SU377159A1 (ru) | Способ получения ингибитора протеаз | |
| JPS6248358A (ja) | 卵白分解物の製法 | |
| SU733685A1 (ru) | Способ получени глюкуронидазы |