SU1160311A1 - Способ определени активности ингибиторов протеаз - Google Patents
Способ определени активности ингибиторов протеаз Download PDFInfo
- Publication number
- SU1160311A1 SU1160311A1 SU833667345A SU3667345A SU1160311A1 SU 1160311 A1 SU1160311 A1 SU 1160311A1 SU 833667345 A SU833667345 A SU 833667345A SU 3667345 A SU3667345 A SU 3667345A SU 1160311 A1 SU1160311 A1 SU 1160311A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- activity
- protease
- incubation
- difference
- inhibitor
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 title 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 8
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 7
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 claims abstract description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 claims description 7
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 claims description 7
- 101000702699 Streptomyces pristinaespiralis NADH:riboflavin 5'-phosphate oxidoreductase Proteins 0.000 claims 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 abstract description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 abstract description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 abstract 2
- 241000208465 Proteaceae Species 0.000 abstract 1
- 230000002633 protecting effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 6
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- 108010079099 gordox Proteins 0.000 description 4
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 3
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- UHUFTBALEZWWIH-UHFFFAOYSA-N tetradecanal Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC=O UHUFTBALEZWWIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000607568 Photobacterium Species 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- FVTCRASFADXXNN-SCRDCRAPSA-N flavin mononucleotide Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O FVTCRASFADXXNN-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
СПОСОБ ОПРЩЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕАЗ путем определени разности активности протеазы при инкубации в присутствии и отсутствии ингибитора , отли а ющийс тем, что, с целью сокращени времени определени , инкубацию провод т в течение 1-2 мин при 27-33° С, а об активности ингабитора протеазы суд т по разности скорости падени свечени при добавлении инкубациоиной смеси в раствор, содержащий люшферазу, НАДН:ФМН-ок(Я1доредуктазу и субстраты этих ферментов.
Description
О)
о
00 1.1 Изобретение относитс к биохимии и может быть использовано в технической микробиологии и медицинской диагностике. Целью изобретени вл етс сокращение времени определени . Пример. Использовали в качестве ингибитора протеазы контрикал (производ ство ГДР) и гордок (производство Венгрии ). В качестве протеазы использовали трип(йЩ:|8егУэ, ФРГ) с удельной активноетью 40 ед на 1 мг препарата и в качестве г люциферазы - частично очищенный препарат .из Photobacterium leiognothi. К 100 мкл растеора трипсина {JOO мгк/мл ; добавл ют 20 мкл раствора контрикала ( 100 АЕ/мл) или 20 мкл раствора гордокса (100 КИЕ/МЛ) и инкубируют в течение 2 ми при , а затем берут аликвоту объемом 120 мкл и добавл ют в реакшганную смесь, содержащую 20 мкл ферментного препарата (0,3 мг/мл людаферазы и НАДН:ФМН-оксиЙоредуктазы ), 50 мкл 0,005%- ного раствора миристинового альдегида, 50 мкл 6,6-10 М ФМН, 360 мкл 0,1 фосфатного буферарН 7,0 и 300 мкл 2,68-10 М НАДЬ Благодар избытку протеазы в инкубационной смеси наблюдаетс падение свечени , обусловленное инактивацией люциферазы под действием остаточной активности протеазы. Сигнал из кюветы прибора, дл измерени свечени подают на ФЭУ, а с последнего - на самопищущий потешдиометр с известной скоростью прот жки масщтабной ленты. Остаточную протеазную активность определ ют по константе инактивации люциферазы, котора вычисл етс по формуле
Ингибитор протеазы Раствор гордокса ({00 КИЕ/мл), О . Ш мкл на пробу К люциферазы, мин 2,4 },96 Раствор контрикала (100 АЕ/ми)
Концентраци ингибитора протеазы. н-н где / и /2 биолюминесценции в момен t соответственно. ты времени t и Измерение падени биолюминесценции провод т в течение 1 мин. Активность ингибитора протеазы определ етс разностью между константами инактивации люциферазы в присутствии и отсутствии ингибитора протеазы. Константа инактивации люциферазы обратно пропорциональна количеству добавленного ингибитора протеазы (таблица). Измерение биолюминесценции провод т в термостатируемой кювете при 30° С в течение I мин. В контроле к 100 мкл раствор трипсина добавл ют 20 мкл 0,1 М фосфатного буфера. Константа инактивации в контроле равна .2,4 мин, в опыте с контрикалом 1,60 мин и в опыте с гордоксом 1,66 мин. Расчет: в инкубационной смеси находилось 10 мкг трипсина. На определение вз то 20 мкл (0,02 мл) раствора гордокса 100 КИЕ/мл (1:50). Разность в контроле и опыте равна 0,74 (2,4-1,66), что соответствует инактивации около 3 мкг трипсина. Следовательно , Г мл гордокса св зывает 002 7500 (мкг) трипсина. Таким образом, в предлагаемом способе активность ингибитора протеазы выражаетс в мг протеазы, св зываемых (инактивируемых) 1 мл исследуемого препарат; антипротеазы. Предлагаемый способ сокращает врем определени доЗ мин, т. е. более, чем в 20 раз в сравнении с известным способом. 20405065 1,660,950,52О
Claims (1)
- СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕАЗ путем определения разности активности протеазы при инкубации в присутствии и отсутствии ингибитора, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени определеняя, инкубацию проводят в течение 1—2 мин при 27—33° С, а об активности ингибитора протеазы судят по разности скорости падения свечения при добавлении инкубационной смеси в раствор, содержащий люциферазу, НАДН:ФМН-оксидорёдуктазу и субстраты этих ферментов.>
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU833667345A SU1160311A1 (ru) | 1983-10-21 | 1983-10-21 | Способ определени активности ингибиторов протеаз |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU833667345A SU1160311A1 (ru) | 1983-10-21 | 1983-10-21 | Способ определени активности ингибиторов протеаз |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1160311A1 true SU1160311A1 (ru) | 1985-06-07 |
Family
ID=21090894
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU833667345A SU1160311A1 (ru) | 1983-10-21 | 1983-10-21 | Способ определени активности ингибиторов протеаз |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1160311A1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996032499A1 (de) * | 1995-04-13 | 1996-10-17 | Mischke, Hans-Rudolf | Verfahren zur quantitativen bestimmung von reversibel wirkenden inhibitoren der oxidoreduktasen |
| US5856117A (en) * | 1996-06-21 | 1999-01-05 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Method for measuring the concentration of protease inhibitors, kit for use in such a method and method for dissolving a substrate |
| US6130055A (en) * | 1997-08-29 | 2000-10-10 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Method for measuring the concentration or the activity of protease inhibitor |
-
1983
- 1983-10-21 SU SU833667345A patent/SU1160311A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Веремеенко К. Н. Кининова система.Киев, Наукова думка, 1977, с. 161-162. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996032499A1 (de) * | 1995-04-13 | 1996-10-17 | Mischke, Hans-Rudolf | Verfahren zur quantitativen bestimmung von reversibel wirkenden inhibitoren der oxidoreduktasen |
| US5856117A (en) * | 1996-06-21 | 1999-01-05 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Method for measuring the concentration of protease inhibitors, kit for use in such a method and method for dissolving a substrate |
| US6130055A (en) * | 1997-08-29 | 2000-10-10 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Method for measuring the concentration or the activity of protease inhibitor |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ovádi et al. | Kinetic evidence for interaction between aldolase and D‐glyceraldehyde‐3‐phosphate dehydrogenase | |
| Bekker et al. | Biochemical characterization of an electrogenic vacuolar proton pump in purified chicken osteoclast plasma membrane vesicles | |
| CA2345721C (en) | High salt concentration to prolong light signal in luciferase reactions for atp measurement | |
| ZA832892B (en) | Ascorbate-resistant broad range glucose test compositions,test device and method | |
| SE428379B (sv) | Bioluminiscens bestemning av atp och reagens herfor | |
| CA1246443A (en) | Assay of peroxidase enzyme activity | |
| JPS585678B2 (ja) | クレアチンキナ−ゼを測定する方法 | |
| JPH0346119B2 (ru) | ||
| SU1160311A1 (ru) | Способ определени активности ингибиторов протеаз | |
| JPS5818080B2 (ja) | コレステリンの測定法及び測定試薬 | |
| US4161425A (en) | Enzymatic reagent system for total cholesterol assay using oxygen-rate method | |
| Ng et al. | Non-radioactive method to measure CD45 protein tyrosine phosphatase activity isolated directly from cells | |
| US4022667A (en) | Substrate solution for carboxylic ester hydrolase determination | |
| US4212939A (en) | Substrate solution for carboxylic ester hydrolase determination | |
| Guilbault et al. | Fluorometric determination of hyaluronidase and of Cu (II), Fe (II), and cyanide ion inhibitors | |
| Kourteva et al. | Assay for enzyme inhibition: detection of natural inhibitors of trypsin and chymotrypsin | |
| US4206280A (en) | Determination of acid phosphatase | |
| US5246830A (en) | Enzymatic process for the determination of β-lactam antibiotics | |
| AU618004B2 (en) | Method for determination of nagase and reagent therefor | |
| SU1027615A1 (ru) | Способ определени активности протеаз | |
| Kitagishi et al. | Static and kinetic studies on the binding between pepsin and streptomyces pepsin inhibitor with a fluorescent probe | |
| Ruby et al. | Proteolytic sensitivity of the α subunit in luciferases of Photobacterium species | |
| SU1636773A1 (ru) | Способ определени пироксидазной активности биологических объектов | |
| Wilson | Spectrophotometric enzyme-amplified immunoassay for thyroid stimulating hormone | |
| SU1067441A1 (ru) | Способ определени активности протеаз |