SU1165714A1 - Способ выделени моноаминоксидазы - Google Patents
Способ выделени моноаминоксидазы Download PDFInfo
- Publication number
- SU1165714A1 SU1165714A1 SU833599395A SU3599395A SU1165714A1 SU 1165714 A1 SU1165714 A1 SU 1165714A1 SU 833599395 A SU833599395 A SU 833599395A SU 3599395 A SU3599395 A SU 3599395A SU 1165714 A1 SU1165714 A1 SU 1165714A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- phosphate buffer
- centrifuged
- monoaminoxidase
- volume
- triton
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims abstract 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims abstract 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 4
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 2
- 102000010909 Monoamine Oxidase Human genes 0.000 description 2
- 108010062431 Monoamine oxidase Proteins 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000007707 calorimetry Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
СНОСОВ ВЫДЕЛЕНИЯ МОНОАМИНОКСИДАЗЫ из мозга путем солюбилиэахщи митохондрий неиЬиным детергентом и аффинной хроматографии, о тличающийс тем, что, с целью упрощени процесса и увеличени выхода целевого продукта, солю- билизацию провод т в 0,01-0,05 М фосфатном буфере рН 7,2-7,6 с последующей биоспецифической хроматографией в объеме.
Description
Изобретение относитс к биохимии и медицине, а именно к способам выделени высокоочищенных ферментных препаратов, конкретно к способам вьщелени фермента моноаминоксидазы (МАО) из объектов животного происхождени , и может быть использовано в научных цел х, примен тьс в лабораторной и медицинской практике
Цепь изобретени - упрощение про цесса и увеличение выхода целевого продукта.
Пример 1. 500 г мозга быка промывают 0,9% КС1 и гомогенизируют в течение 1 мин при SOOO об/мин (гомогенизатор РТ-1) с 4500 мл 0,25 М сахарозы, к которой добавл ю 90 мл Ш KjHPO до рН 7,2. Полученн гомогенат центрифугируют при 1500 g в течение 10 мин на центрифуге ЦПР. Надосадочную жидкость (3350 мл) ценрифугируют в течение 10 мин при 1300 g на центрифуге ЦЛР дл осаждени митохондрий. Осадок, полученный после центрифугировани при 1500 g втечение 10 мин, промьгоают 2250 мл 0,25 М сахарозы, рН 7,2, и npohe raHbie воды центрифугируют при 13000 g в течение 10 мин. Полученны осадки митохондрий объедин ют, суспендируют в 450 мл бидистиллированной воды и центрифугируют в течение 40 мин при 26000 g на центрифуге ЦВР-1. Полученный осадок, содержащи мембраны митохондрий, промывают два раза 0,01 М фосфатным буфером, рН 7,2, дл удалени белков митохондриального матрикса и суспендируют в бIHимaльнoм объеме того же буфера В полученной суспензии определ ют содержание белка при помощи калори метрического метода Лоури.
Суспензию, содержавшую 18,4 мг/мл белка в объеме 210 мл, центрифугируют 30 мин при 34000 g на центрифу ге ЦБР-1. Полученную надосадочную жидкость отбрасывают, а к 130 мл осадка добавл ют 257 мл 0,01 М фос:фатного буфера рН 7,2, содержавшего 18,8 МП водного раствора детергента тритон х-100. При перемешивании на холоду (0°) полученную смесь выдерживают 30 мин, а затем центрифугируют при 40000 g в течение 1 ч. Полученную надосадочную жидкость концентрируют методом ультрафильтрации через фильтр Амикок РМ-ЗО до 34 мл. Всего получено 456 г солюбизированного материала , который на воронке со стекл нными фильтрами диаметром 9,6 см обрабатывают 188 мл адсорбента АН-Сефарозы, уравновешенного 0,01 М фосфатным буфером, рН 7,2, Адсорбент промывают 600 мл этого же буфера , а препарат МАО-1 элюируют 0,1 М фосфатным буфером рН 7,2, собира фракции по 30 мл. Те фракции , которые содержат белок (общий объем 175 мл), концентрируют в течение 18 ч при помощи Сефадекса Г-200 (сверхтонкий), а затем путем ультрафикадии через фильтр Амикон РМ-30 до объема 30 мл. Препараты МАО-Па элюируют как описано 0,1 М фосфатным буфером, содержавшим 0,09% тритон х-100; МАО-Пб - указанным буфером , содержавшим 0,25% тритон х-100 Регенерацию АН-Сефарозы осуществл ют промывкой 0,4 М фосфатным буфером , содержавшим 1% тритон Х-100 и 0,6 М NaCl, а затем 0,01 М фосфатным буфером, рН 7,2.
Пример 2. 500 г мозга быка промывают 0,9% КС1 и гомогенизируют в течение t мин при 8000 об./мин (гомогенизатор РТ-1) с 4500 мл О,25 М сахарозы, к которой добавл ют 90 мл 1М KjHPO до рН 7,6. Полученный гомогенат центрифугируют при 1500 g в течение 10 мин на центрифуге ЦПР. НадосадочнуюЖИДКОСТЬ (3350 мл) центрифугируют в течение 10 мин при 1300 g на центрифуге ЦПР дл осаждений митохондрий. Осадок,, полученный после центрифугировани при 1500 g в течение 10 мин, промывают 2250 мл 0,25 М сахарозы, рН 7,6 промывные воды центрифугируют при 13000 g в течение 10 мин. Полученные осадки митохондрий о ъедин ют, суспензируют в 450 мл бидистиллированной воды и центрифугируют, в течение 40 мин при 26000 g на центрифуге ЦВР-1. Полученный осадок, содержащий мембраны митохондрий, промывают два раза 0,01 М фосфатным буфером, рН 7,6, дл удалени белков митохондриального матрикса и суспензируют в минимальном объеме того же буфера. В полученной суспензии определ ют содержание белка прИ помощи калориметрического метода Лоури.
Суспензию, содержавшую 20,5 мг/мл белка в объеме 188 мл,центрифугируют 30 мин при 34000 g на центрифуre ЦВР-i. Полученную надосадочную жидкость отбрасьюают, а к 130 мл осадка добавл ли 257 мл 0,01 М фосфатного буфера рН 7,6, содержавшего 18,8 МП 25%-нЬго водного раствора детергента тритон х-100. При помешивании на холоду (0°) полученную смес вьщерживают 30 мин, а затем центрифугировали при 40000 g в течение 1 ч. Полученную надосадочную жидкость кон центрируют методом ультафильтрации через фильтр Амикон РМ-30 до 34 мл. Всего получено 464 мг солюбизированиого материала, который на воронке со стекл нным фильтром диаметром 9,6 см обрабатывают 191 мл адсорбента АН-Сефарозы, уравновешенного 0,01 М фосфатным буфером, рН 7,6. Адсорбент промьтают 600 мл этого же буфера, а препарат МАО-1 элюируют
0,1 М фосфатным буфером рН 7,6, собира фракции по 30 мл. Те фракции, которые содержат белок (общий объем 170 мл), концентрируют в течение 18 ч при помощи Сефадекса Г-200 (сверхтонкий), а затем путем аультрафильтрации через фильтр Амикон РМ-30 до объема 30 мл. Препараты МАО-Па элюируют таким же образом 0,1 М фосфатным буфером, содержавшим 0,09% тритон х-100; МАО-Пб тем же буфером, содержавшим О,14% тритон х-100, а MAO-III - 0,4 М фосфатным буфером, содержавшим 0,25% тритон х-100. Регенерацию АН-Ч ефарозы осуществл ют промывкой 0,4 М фосфатным буфером, содержавшим 1% тритон х-100 и 0,6 М аС1, а затем 0,01 М фосфатным буфером, рН 7,6.
Claims (1)
- СНОСОВ ВЫДЕЛЕНИЯ МОНОАМИНОКСИДАЗЫ из мозга быда путем солюбилизации митохондрий неионным детергентом и аффинной хроматографии, о тличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и увеличения выхода целевого продукта, солюбилизацию проводят в 0,01-0,05 М фосфатном буфере pH 7,2-7,6 с последующей биоспецифической хроматографией в объеме.’(П)1 1165714 . 2
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU833599395A SU1165714A1 (ru) | 1983-06-03 | 1983-06-03 | Способ выделени моноаминоксидазы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU833599395A SU1165714A1 (ru) | 1983-06-03 | 1983-06-03 | Способ выделени моноаминоксидазы |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1165714A1 true SU1165714A1 (ru) | 1985-07-07 |
Family
ID=21066316
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU833599395A SU1165714A1 (ru) | 1983-06-03 | 1983-06-03 | Способ выделени моноаминоксидазы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1165714A1 (ru) |
-
1983
- 1983-06-03 SU SU833599395A patent/SU1165714A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ргераг. Biochem,, 1979, v. 9, 2, p. 171-196. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4217339A (en) | Glycoprotein and process for isolating it | |
| Geffen et al. | Immunohistochemical localization of protein components of catecholamine storage vesicles | |
| US4948874A (en) | Purified protein G from streptococcal bacteria | |
| SU1431691A3 (ru) | Способ получени гликопротеина | |
| US4075193A (en) | Process for producing intravenous immune globulin | |
| US4269825A (en) | New glycoprotein and process for isolating it | |
| EP0011032B1 (en) | Method for isolation of hbsag | |
| US4301064A (en) | Ubiquitary tissue protein PP8 | |
| EP0003916B1 (en) | Purification of pertussis haemagglutinins | |
| JPH0132840B2 (ru) | ||
| US4368148A (en) | Protein PP9, process for its enrichment and its isolation and its use | |
| SU1165714A1 (ru) | Способ выделени моноаминоксидазы | |
| Ceriani et al. | Characterization of differentiation antigens of the mouse mammary epithelial cell (MME antigens) carried on the mouse milk fat globule | |
| Langer et al. | New, rapid methods for purifying alpha-actinin from chicken gizzard and chicken pectoral muscle. | |
| GB2146027A (en) | Process for producing human interferon and method for assaying the interferon productivity of blood | |
| US4558011A (en) | Method for preparation of pure hepatitis B surface antigen from human plasma | |
| Hulea et al. | Intracellular distribution of ribonuclease activity during erythroid cell development | |
| JPS58404B2 (ja) | ステロイド結合性グロブリンの製造方法 | |
| Pogell et al. | [32] Specific elution with substrate | |
| US4588685A (en) | Process for the preparation of a new-type active substance selectively inhibiting food intake | |
| WO1991018104A1 (en) | Indh enzyme compositions and their methods of use | |
| RU2763552C1 (ru) | Способ выделения лактоферрина верблюда | |
| GB2024228A (en) | Process and adsorbent for the isolation in purer form of enzyme(s) from a crude enzyme solution | |
| FUNATSU et al. | Structure and Toxic Function of Ricin I Purification Procedures of Ricin D | |
| Brackenridge et al. | THE EXTRACTION AND SOME PROPERTIES OF MEMBRANE‐BOUND PROTEINS FROM OX CEREBRAL CORTEX MICROSOMES |