SU1472500A1 - Штамм бактериофага РSеUDомоNаS aeRUGINoSa, используемый дл идентификации и индикации микробов РSеUDомоNаS aeRUGINoSa - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к бактериологической диагностике микробов PSEUDOMONAS AERUGINOSA с помощью специфических бактериофагов, и касаетс  нового пиоцианеус бактериофага. Поливалентный пиоцианеус бактериофаг МТ-2 депонирован под номером Ф-129 в коллекции Тбилисского НИИ вакцин и сывороток и характеризуетс  свойствами, присущими дл  диагностических бактериофагов: специфичностью и стабильностью литического спектра, высокой активностью и т.д. Эффективность диагностики PS. AERUGINOSA посредством нового пиоцианеус бактериофага МТ-2 подтверждена на клиническом материале (41 проба).

Description

1

Изоб рете ние относитс  к медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к бактериологической диагностике микробов Pseudomonas aeruginosa с помощью специфических бактериофагов .

Пиоцианеус бактериофаг МГ-2- вьще- лен из канализационных сточных вод и представл ет собой смесь специфических клонов бактериофагов Ps. aeruginosa . Пиоцианеус бактериофаг МТ-2 депонирован под N0-129 в коллекции Тбилисского НИИ вакцин и сьшороток.

Фаг МТ-2 характеризуетс  следующими свойствами.

При посеве двухслойным методом на агаре Мартена (рН 7,2-7,4) фаг МТ-2 по морфологии стериальных п тен полиморфен. Диаметр негативных колоний (н.к.) 1-5 мм.

Специфичность фага МТ-2 изучалась в опытах перекрестного лизиса с ге- терологичньми ввдами микроорганизмов: эшерихи ми (199 штаммов),, шигел- лами (197 шт.), салмонеллами (224шт.) протеем (61 шт.), Gersinia enteroco- litica (94 шт.).

Диапазон литической активности нового бактериофага МТ-2 определ ют на коллекции музейных культур: Ps,aeruginosa -25; Ps.fluorescens - 5; Ps, maltophilia - 5; Ps,testosteroni - 5; Ps,putida-5j PsoStutzeri - 5; и на 1170 свежевыделенных штаммах различ-- ньщ видов и серологических типов микроорганизмов семейства Enterobac- teriaceceo

Бактериофаг МТ-2 обладает строгой специфичесностью и широким диапазоном действи  в отношении штаммов .

ю ел

PS.aeruginosa (лизирует 93,4% свежевыделенных штаммов).

Фаг МТ-2 про вл ет высокую стабилность специфического действи „ После многократного пассировани .на гомологичных и гетерологичных штаммах, на их смеси и на устойчивых клонах гомологичных бактерий, фаг МТ-2 остаетс  строго специфичным, лизиру  только , один вид - PS.aeruginosaо

Таким образом, фаг МТ-2 удовлетвор ет требовани м, предъ вл емым к диагностическим фагам как по специфичности , так и по стабильности ли- тического спектра.

В результате изучени  фаз взаимодействи  фага МТ-2 с клеткой (эталонна  культура PS.aeruginosa 1038) установлено , что бактериофаг обладает высокой адсорбционной способностью (максимальное врем  адсорбции 10 мин и урожайностью (110 частиц ни 1 инфицированную клетку), коротким скрытым периодом (60 мин)„

Высокий показатель эффективной множественности  вл етс  одним из важнейших качеств индикаторного фага исключающий возможность передози- ровки фага в РНФ (реакци  нейтрализации фага), следствием чего может наступить лизис без размножени . В этих случа х РНФ будет отрицательной при нахождении в среде бактерий. Установлено, что специфический бактериофаг МТ-2 обладает достаточно высоким показателем эффективной множественности . Интенсивное размножение фаза наблюдаетс  при множественности 1 и ниже.

Пиоцианеус бактериофаг МТ-2 характеризуетс  довольно высокой термоустойчивостью - нижн   граница термоинактивации равн етс  - 55°, верхн   - 85°С.

0

5

0

5

0

5

0

Дл  апробации эффективности РНФ в диагностике Ps.aeruginosa в частности , эффек:тивности бактериофага МТ-2 как индикаторного фага, проведен р д опытов на клиническом материале. Всего исследовано 41 проба (20 проб крови , полученных из инфекционной больницы от больных с заболевани ми невы сненной этиологии; 10 проб гно  из ожогового центра; 11 проб мочи из разных инфекционных больниц). П р и м е РО К исследуемому материалу добавл ют м со-пептонный бульон (МПБ) в соответствии 1:10 и 1 мл индикаторного фага МТ-2, вз тьй .в рабочем разведении 10 фаговых частиц в 1 мл. Параллельно став т контроль на присутствие в исследуемом материале свободного фага. По истечении времени инкубации содержимое каждой пробирки развод т в 100 раз МПБ. Конечные разведени  прогревают при 56-58 С в течение 30 мин. По 1 мл Ьодержимого каждой пробирки исследуют по методу Грациа на , лонной культуре Ps.aeruginosa 1038. Результаты исследований считают положительными , начина  с трехкратного нарастани  титра фага.

Таким образом, бактериофаг МТ-2 по своим биологическим свойствам : удовлетвор ет требовани м, предъ вл емым к индикаторным фагам. К тому же литическа  активность бактериофага МТ-2 весьма высока, а негативные колонии хорошо просматриваютс  на поверхности агара.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Штамм бактериофага Pseudomonas aeruginosa. ТбНИКВС NФ-129, используемый дл  идентификации и индикации микробов Pseudomonas aeruginosa.