SU545267A3 - Способ получени -1,6-глюкозидазы - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ а-1,6-ГЛЮКОЗИДАЗЫ

1

Изобретение относитс  к области ферментативного гидролиза крахмала, гликогена, декстрана и подобных веществ, а именно к способам получени  а-1,6-глюкозндазы, характеризующейс  относительно высокой активностью, про вл ющейс  нри температуре незначительно превышающей 45°С.

Известен способ получени  а-1,6-глюкозидазы путем культивированн  ее продуцентов, а нменно Pseudomonas amyloderamosa SB-15 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли 1.

С целью расширени  ассортимента иродуцентов а-1,6-глюкозидазы согласно предлагаемому способу в качестве последнпх используют щтамм Nocardia corallina IFO3338.

Этот штамм обладает способностью продуцировать а-1,6-глюкозидазу больше во внешней среде, окружающей клетку, чем в самнх клетках. Штамм выделен из ночвы, идентификацию его осун1,ествл л11 по справочнику Bergeys Manual of Determinative Bacteriology (седьмое издание).

Штамм Nocardia corallina IFO 3338 характеризуетс  следующими морфологическими и культуральными нризнаками.

Разветвл ющиес  палочки в основном загнуты , 1,0-1,5:3,0-10,0 мкм. После сравннтельно длительного процесса выращивани  (т. е. старые культуры) клетки имеют форму более коротких палочек и кокков.

Клетки неподвпжные, некислотоустойчивые, грам-положительные. Па желатине колонни круглые, выпуклые, гладкие, розовые, блест щие . Край колоний ннтевидный. После выращивани  в столбике желатины клетки имеют форму шл пкп гвозд , древовпдные . Разжижени  не наблюдаетс .

На агаре колонии круглые, выиуклые, имеют закругленный выступ, гладкие, розовые, блест щне нлн матовые, край более светлый, нптевпдный или с древов дными выступами. В раннпх стади х развити  колонии состо т из разветвл ющихс  нитевидных палочек. По мере роста колоний клетки разрываютс  внутри на короткне палочки, а снаружи остаютс  нитевпднымн.

Па скошенном агаре колонии нитчатые, выпуклые , гладкие, розовые, блест щие или матовые . Рост древовидный или с выступами. Па лакмусовом молоке реакци  щелочна ; красновата  пелликула. Па картофельном агаре с глицерином колонии нитчатые, сухие, морщииистые , от желтовато-коричневого до кораллового цвета.

На  ичной среде по Дорсету колонии нитчатые , сухие, морщинистые, оранжевого цвета.

На среде ио Лиффлеру рост колоний аналогичен росту на  ичной среде но Дорсеру, но розовый.

Сахарозу, мальтозу и лактозу не сбраживает .

Оптимальна  температура между 22 и 25°С. Оптнмальное значение рН между 6,8 и 8,0.

Пример 1. Получение а-1,6-глгокозидазы прн помощи щтамма Nocardia corallina IFO 3338.

Штамм Nocardia corallina IFO 3338 внос т в 100 мл культуральной среды, содержащей (%): пептон 1,0; дрожжевой экстракт 0,5; К2НРО4 0,1; NaCl 0,1; MgSOi-THsO 0,05; FeSO4-7H2O 0,001; разжиженный крахмал 1,4. Процесс осуществл ют 4 дн  при 30°С и неремещиванни.

Внеклеточна  энзнматическа  активность штамма 24,6, внутриклеточна  1,6, обща  26,2; рП среды 7,6.

П р и мер 2. В 1 л культуральной среды, аналогичной но составу среде в примере 1, внос т штамм Nocardia corallina IFO 3338 и осуществл ют нроцесс культивировани  3 дн  нрн 30°С, перемещивании и рН 7,4.

Внеклеточна  энзнматическа  активность щтамма 34, внутриклеточна  16, обща  50.

Сливают надосадочную жидкость, насыщают ее сульфатом аммонн  до получени  0,8 насыщенного раствора. Выпавшнй осадок отдел ют центрифугированием, раствор ют в воде , нерастворнвшнес  примеси удал ют, раствор насыщают сульфатом аммони  (до полученн  0,8 насыщенного раствора), высаливают и диализуют.

Получают раствор энзима. Оптимум рН раствора 6-7, оптимальна  температура 42- 46°С. При повышении темнературы до 50°С активность энзима падает. Энзим не гндролизует декстрин.

Claims (1)

1. Патент СССР № 290542, кл. С 12d 13/10, 1971.