SU577229A1 - Способ получени гексокиназы - Google Patents
Способ получени гексокиназыInfo
- Publication number
- SU577229A1 SU577229A1 SU7602381622A SU2381622A SU577229A1 SU 577229 A1 SU577229 A1 SU 577229A1 SU 7602381622 A SU7602381622 A SU 7602381622A SU 2381622 A SU2381622 A SU 2381622A SU 577229 A1 SU577229 A1 SU 577229A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- yeast
- hexokinase
- biomass
- activity
- protein
- Prior art date
Links
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 title claims description 17
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 title claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 32
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 20
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 15
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 8
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 7
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 6
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims description 4
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims 1
- 241001397173 Kali <angiosperm> Species 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 4
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000004099 anaerobic respiration Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕКСОКИНАЗЫ
1
Изобрете5ше отнсюитс к микробиологической промышленности, а именно к способам получени фермента гексокиназы, примен емого в мопекуп рной биологии и медицине.
Известен способ получени ксркииазы § из хлебопекарных дрожжей, предусматривающий плазм олиз дрожжей толуолом и осаждение фермента сульфатом аммони TlJПри этом исходна активность гексоки назы а первоначальном экстракте исходной ю биомассы составл ет 4 ед/мг белка. Активность гексокиназы после осаждени супьфатом аммони равна 6 ед/мг белка.
Однако активность гексокиназы зависит от активности гексокиназы в биомассе дрож-и жей..
Цель изобретени - интенсификаци rjpoаесса биосинтеза гексокиназы и увеличение активности фермента.
Дл достижени поставленной цели перед плазмолизом дрожжи культивируют при аэрдции на питательной среде, содержащей фосфат кали и сернокислый магний в течение 1-3 ч, затем в питательную среду добавл ют индук-тор гексокиназы- глюкозу в количестве 10-,25
15% и продолжают процесс в течение 0,5-1
При этом фосфат кали ввод т враствор в количестве 2,7%, а сульфат магни -0,5 %
Дрожжи культивируют при. 30°С и рН 5-7 Пр предлагаем ому способу перед акстракций толуолом осуществл ют культивирование ис- ходной биомассы дрожжей в растворе фосфата кали с добавлением солей магни при 30®С, рР 5-7 и режиме аэрации 0,5-1 (воэдух , культуральна жидкость) в течение 1-3 ч, затем добавл ют индуктор гексокиназы-глюкозу в концентрации 10-15% и пр цесс продолжают в течение 0,5-1 ч.
При проведении .культивировани биомассы дрожжей с активностью 0,75 ед/мг белка получают биомассу дрожжей с активностью 6,2 белка.
Повышение активности .гекссжиназы npt исходит за счет культивировани исходной биомассы дрожжей. Культивирование исходной биомассы дрожжей провод т в две стадии . На первой стадии введением фосфата кали и солей магни происходит активаци ферментных систем клетки, в том числе ферментов цикла гликолиза. Это достигаетс
путем частичного и обратимого блокировани окислительных железоферментов дрожжей, в результате чего flbfxaiffle клетки частично тормозитс и поэтому активизируетс анаэробна фаза дыхани . На второй стадии бла годар добавлению глюкозы в качестве индуктора активности гаксокиназы в ферментационной среде осуществл етс следующа реакци :
Д-глюкоза + АТФ гексокинааа Д-глюкоао-бфсхфат + АДФ.
Таким образом по предлагаемому способ провод т еторичное культивирование исходного дрожжевого сырь . Биомассу дрожжей (500 г йрессованных дрожжей на 1 л среды) суспендируют, в растворе фосфата кали (2,7% KHgPO) и солей магни (О,5 Мй50 -7НдО) и при непрерывном перемешивании и аерации культивируют 2-6 ч. Температура культивировани от 25 до 32 рН среды 5,0-7,0, режим аэрации 0,5:1 (воздух: культуральна жидксх;ть). Затем к ферментационной среде добавл ют глюкозу в концентраци х 10-15%, Процесс культивировани продолжают еще ЗО-бО мин. Активность гексокиназы в биомассе дрожжей составл ет 8,2 ед/мг белка. Дрожжи плаз- молизируют толуолом и экстракт фракционируют сульфатом аммони .
Предлагаемый способ иллюстрируетс примерами его выполнени .
Пример.В качестве исходного CfiipbH используют биомассу хлебопекарных дрожжей Sci ОС ha thorny се5 cereviaia Е, Прессованные дрожжи в количестве 1 500 г с активностью гексокиназы 0,69 ед/мг белка подвергают вторичному культивированию в реакторе емкостью 10,0 л. В первой стадии культивировани примен етс следую . пшй состав питательной среды в г: 81.0 , 15,OMg50j7H20 1.5 воды.
Температура культивировани , В реакторе и распределитель подают
стерильный воздух в количестве 1,5 л/мин, Культуральную жидкость перемешивают со скоростью мешалки 600 об/мин.
После 2 ч начинают вторую стадию культивировани биомассы дрожжей и в реактор добавл ют 300 г глюкозы. (После этого процесс культивировани дрожжей при данном режиме продолжают 30 мин.
Полученную биомассу дрожжей отдел ют ог культуральной жидкости на вакуумном фильтре. Концентраци гексоциназы в биомассе составл ет 8,2 ед/мг белка. В сравнении с исходным сырьем активность гексо киназы повышаетс от 0,69 до 8,2 ед/мг белка.
Дрожжи плазмолиаируют толуолом и экс-ртракт фракционируют сульфатом аммони . Получают ферментативную активность гексо киназы 14,2 ед/мг белка.
Пример 2, В качестве исходногосырь используют биомассу спиртных арож «eEiSaccha omyces cei evisiaHj Пре 5сованные дрожжи в количеств 5ОО г с активностью гексокиназы 0,75 ед/ мг белка подвергают культивированию в реакторе емкостью 10 л. В первой стадии культивировани I примен етс следующий состав питательной среды -в г: 81,0 KHjPO , 15,0 , 1,5 л вода,
Температура культивировани 30 С. В растворе через распределитель подают стерильный воздух в количестве 1,5 л/мин. Культуральную жидкость перемешивают со скоростью мешалки 1 2ОО об/мин. После 3 ч начинают вторую стадию культивировани биомассы дрожжей и в реактор добавл ют 450 г глюкозы. После чего процесс культивировани дрожжей продолжают 1ч.
Полученную биомассу дрожжей отдел ют от культуральной жидкости на вакуумном фильтре. Концентраци гексокивазы в биомасс составл ет 7,9 ед/мг белка. Гексоки азу из биомассы дрожжей выдел ют как в примере 1.
Предложенный способ обеспечивает повышение активности гексокиназы в биомассе дрожжей до 7,9- В,2 ед/мг белка. В сравнении с исходным сырьем активность повышаетс от 0,69 ед/мг белка до 8,2 ед/м белка и от 0,75 ед/мг белка до 7,9 ед/мг белка.
Claims (3)
- Формула изобретени1,Способ получени гексокиназы из био массы дрожжей,- предусматривающий плазмопиа дрожжей толуолом и осаждение фермен та сульфатом аммони , отличающийс тем, что, с целью интенсификации процесса биосинтеза гексокиназы и увеличени активности фермента, перед плазмолизом дрожжи культивируют при аэрации на питательной среде, содержащей фосфат калии сернокислый магний в течение 1-3 ч, затем в питательную среду добавл ют индуктор гексокиназы - глюкозув количестве 10-15% и продолжают п зоцесс в течение 0,5-1 ч.
- 2.Способ по п. 1, отличающийс тем, что фосфат кали ввод т в раст577229 5вор в (количестве. 2,7%, а сульфат магни -Источники информации прин тые во внима0 ,5%.ние при экспертизе:
- 3. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и йс тем , что дрожжи культивируют при1. AHnaJs N.J. Acdda игу of Sieitces,ВО°С и рН 5-7.5 1068, 151. 1, 307.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU7602381622A SU577229A1 (ru) | 1976-07-05 | 1976-07-05 | Способ получени гексокиназы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU7602381622A SU577229A1 (ru) | 1976-07-05 | 1976-07-05 | Способ получени гексокиназы |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU577229A1 true SU577229A1 (ru) | 1977-10-25 |
Family
ID=20668985
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU7602381622A SU577229A1 (ru) | 1976-07-05 | 1976-07-05 | Способ получени гексокиназы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU577229A1 (ru) |
-
1976
- 1976-07-05 SU SU7602381622A patent/SU577229A1/ru active
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Häggström et al. | Calcium alginate immobilized cells of Clostridium acetobutylicum for solvent production | |
| WO1995017505A1 (en) | Strain of rhodococcus rhodochrous producing nitrile hydratase | |
| SU577229A1 (ru) | Способ получени гексокиназы | |
| SU747436A3 (ru) | Способ получени фруктозы | |
| US2544273A (en) | Fermentation activation | |
| SU671738A3 (ru) | Способ получени биомассы микроорганизмов | |
| RU2145351C1 (ru) | Способ активации дрожжей | |
| US4659661A (en) | Process for the preparation of fermentation broth for coenzyme B12 and other corrinoid production | |
| US4752584A (en) | Process for the production of inoculum for anaerobic fermentation of coenzyme B12 | |
| SU943279A1 (ru) | Способ получени ферментного комплекса | |
| SU614128A1 (ru) | Способ получени лимонной кислоты | |
| RU1549227C (ru) | Способ получения комплекса литических ферментов | |
| SU553283A1 (ru) | Способ получени алкогольдегидрогеназы | |
| SU800185A1 (ru) | Способ получени глюкоамилазы | |
| SU971877A1 (ru) | Среда дл получени протеолитических ферментов | |
| SU753895A1 (ru) | Питательна среда дл выращивани продуцента молокосвертывающего фермента | |
| JPS6147194A (ja) | Ｎ−カルバモイル−ｄ−バリンまたはｄ−バリンの製造法 | |
| SU789581A1 (ru) | Способ получени диоксиацетона | |
| SU1395671A1 (ru) | Способ получени холестеролэстеразы | |
| SU1479513A1 (ru) | Способ получени формиатдегидрогеназы | |
| US3069329A (en) | Production of griseofulvin | |
| SU1124027A1 (ru) | Питательна среда дл выращивани продуцента @ - @ -амино- @ -капролактамгидролазы | |
| US3121668A (en) | Method for the production of 1-glutamic acid | |
| RU1804479C (ru) | Способ получени культуральной жидкости SеRRатIа маRсеSсеNS, обладающей хитиназной активностью | |
| SU675980A1 (ru) | Способ получени -лизина |