SU577975A3 - Способ получени полипептидов - Google Patents
Способ получени полипептидовInfo
- Publication number
- SU577975A3 SU577975A3 SU7502127597A SU2127597A SU577975A3 SU 577975 A3 SU577975 A3 SU 577975A3 SU 7502127597 A SU7502127597 A SU 7502127597A SU 2127597 A SU2127597 A SU 2127597A SU 577975 A3 SU577975 A3 SU 577975A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- phe
- residue
- solution
- added
- amino acid
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 48
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 14
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 187
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 122
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 67
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 52
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 45
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 37
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 37
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 37
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 16
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 9
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 8
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 8
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 8
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 5
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 claims description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 1
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 249
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 170
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 165
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 150
- 239000000047 product Substances 0.000 description 116
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 112
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 84
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 81
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 64
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 62
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 59
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 54
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 54
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 53
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 53
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 48
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 47
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 41
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 36
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 27
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 27
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 23
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 22
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 22
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 21
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 20
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 18
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 16
- ZUSSTQCWRDLYJA-UHFFFAOYSA-N n-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide Chemical compound C1=CC2CC1C1C2C(=O)N(O)C1=O ZUSSTQCWRDLYJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- -1 tert-amyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 15
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 12
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 12
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 12
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 11
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 11
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 11
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 11
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 11
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 10
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 9
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 8
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000010531 catalytic reduction reaction Methods 0.000 description 7
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 7
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 7
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 7
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 6
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 4
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- KJIFKLIQANRMOU-UHFFFAOYSA-N oxidanium;4-methylbenzenesulfonate Chemical compound O.CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 KJIFKLIQANRMOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- DMBKPDOAQVGTST-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)COCC1=CC=CC=C1 DMBKPDOAQVGTST-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- RRONHWAVOYADJL-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-phenyl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RRONHWAVOYADJL-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 125000001917 2,4-dinitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C(=C1*)[N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- BSPCSKHALVHRSR-UHFFFAOYSA-N 2-chlorobutane Chemical compound CCC(C)Cl BSPCSKHALVHRSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DZRUNSUYJCQUIG-UHFFFAOYSA-N 2-methylbutan-2-yl hydrogen carbonate Chemical compound CCC(C)(C)OC(O)=O DZRUNSUYJCQUIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ROFNJLCLYMMXCT-UHFFFAOYSA-N 4-aminohexanoic acid Chemical compound CCC(N)CCC(O)=O ROFNJLCLYMMXCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 4-ethylmorpholine Chemical compound CCN1CCOCC1 HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZFMOKQJFYMBGY-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-TEMPO Chemical compound CC1(C)CC(O)CC(C)(C)N1[O] UZFMOKQJFYMBGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 5-[(1r)-1-hydroxy-2-[4-[(2r)-2-hydroxy-2-(4-methyl-1-oxo-3h-2-benzofuran-5-yl)ethyl]piperazin-1-yl]ethyl]-4-methyl-3h-2-benzofuran-1-one Chemical compound C1=C2C(=O)OCC2=C(C)C([C@@H](O)CN2CCN(CC2)C[C@H](O)C2=CC=C3C(=O)OCC3=C2C)=C1 OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006847 BOC protecting group Chemical group 0.000 description 1
- KAKIEONGVIRLLB-UHFFFAOYSA-N CBOC Chemical compound CBOC KAKIEONGVIRLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100083253 Caenorhabditis elegans pho-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000219112 Cucumis Species 0.000 description 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 1
- XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N Dicyclohexylamine Chemical class C1CCCCC1NC1CCCCC1 XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000501667 Etroplus Species 0.000 description 1
- GYHNNYVSQQEPJS-UHFFFAOYSA-N Gallium Chemical compound [Ga] GYHNNYVSQQEPJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008694 Humulus lupulus Nutrition 0.000 description 1
- 241001026509 Kata Species 0.000 description 1
- 102100037644 Kelch-like protein 41 Human genes 0.000 description 1
- 108050003242 Kelch-like protein 41 Proteins 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001233242 Lontra Species 0.000 description 1
- FUKDBQGFSJUXGX-RWMBFGLXSA-N Lys-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O FUKDBQGFSJUXGX-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- 241000475481 Nebula Species 0.000 description 1
- 101000991869 Nostoc sp. (strain PCC 7120 / SAG 25.82 / UTEX 2576) NAD(P)H-quinone oxidoreductase chain 6 Proteins 0.000 description 1
- GKZIWHRNKRBEOH-HOTGVXAUSA-N Phe-Phe Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 GKZIWHRNKRBEOH-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- BUEIYHBJHCDAMI-UFYCRDLUSA-N Pro-Phe-Phe Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O BUEIYHBJHCDAMI-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 108700023707 TUG1 Proteins 0.000 description 1
- 101100323865 Xenopus laevis arg1 gene Proteins 0.000 description 1
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCFZBOCMNGFLQX-UHFFFAOYSA-N [Co]N Chemical compound [Co]N UCFZBOCMNGFLQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229940124277 aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N ammonia nh3 Chemical compound N.N XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- UOCJDOLVGGIYIQ-PBFPGSCMSA-N cefatrizine Chemical group S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)[C@H](N)C=2C=CC(O)=CC=2)CC=1CSC=1C=NNN=1 UOCJDOLVGGIYIQ-PBFPGSCMSA-N 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- FZFAMSAMCHXGEF-UHFFFAOYSA-N chloro formate Chemical compound ClOC=O FZFAMSAMCHXGEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- LBJNMUFDOHXDFG-UHFFFAOYSA-N copper;hydrate Chemical compound O.[Cu].[Cu] LBJNMUFDOHXDFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- RYPWQHONZWFXBN-UHFFFAOYSA-N dichloromethyl(methylidene)-$l^{3}-chlorane Chemical compound ClC(Cl)Cl=C RYPWQHONZWFXBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000006266 etherification reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052733 gallium Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000026760 granular corneal dystrophy type I Diseases 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004124 hock Anatomy 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229940124280 l-arginine Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001465 metallisation Methods 0.000 description 1
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- TXOUDPQJASQYBZ-UHFFFAOYSA-N n,n'-dihexylmethanediimine Chemical compound CCCCCCN=C=NCCCCCC TXOUDPQJASQYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- PTVIBIVJSXWMPT-FGSANIJTSA-N octadecaneuropeptide Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O)[C@@H](C)O)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O PTVIBIVJSXWMPT-FGSANIJTSA-N 0.000 description 1
- 229940099990 ogen Drugs 0.000 description 1
- NPKKRSHVJIQBKU-UHFFFAOYSA-N ornogenin Natural products CC(OC(=O)C=Cc1ccccc1)C2(O)CCC3(O)C4(O)CC=C5CC(O)CCC5(C)C4CC(OC(=O)C=Cc6ccccc6)C23C NPKKRSHVJIQBKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012254 powdered material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- JXHZRQHZVYDRGX-UHFFFAOYSA-M sodium;hydrogen sulfate;hydrate Chemical compound [OH-].[Na+].OS(O)(=O)=O JXHZRQHZVYDRGX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003797 solvolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N toluene Substances CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004916 vomit Anatomy 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ
Дл обозначени аминокислот, пептидов, активирующих и защитных группировок и реагентов, используемых дл активации и зашиты аминокислот и пептидов, пртиен ютс следующие сокращени :
d - АЬи -аминомасп на кислота;
ji - Abu - I -аминомасл на кислота;
- Асар- j -аминокапронова кислота; А а аланин; f - -аланин; гинин; О AvqE -аминовалерианова кислота; d. , Dab - « . у -диаминомасл на кислота; -глицин (глшсокол); А6 -гистидин; Leo -лейцин; Lys -лиаин; NEeчнорлейцин; Pile -фенилаланин; -про- лин; Sar-саркозин; Sef -серин; Thh -треонин; Тзг -тирозин; Уаб -валин:; Аос трет- амилоксикарбонильна группа; Bt6 -бенаиловый эфир; Вос: N, Н-дициклогексилкapбoдIJйl ид; НО MB - Н -окси-3- ор6орнен-2 ,3-дикарбоксимйд; OBzB -сложный бен- зиловый эфир; ODNP -2,4-дит1трофениловый эфир; OEt -этиловый эфир; ON В -эфтф на основе оксн-5-карборнен-2,3 дш{арбоксимида; ирср -пентахлорфениловый эф1ф; Оси- N -аксй:сукциш мидный эфир; OtBu -трет бутиловый эфир; То5 -тозильна группа; 2 бензилокс1гкарбонильна группа; ВОС -трет бутилоксккарбонилъна группа.
Когда R, представл ет атом водорода, группировка. R - обозначает следующую аргинильную группу
f
{сн.).-сн-со
23 ,
NH2
Термин аминокислотный остаток подразумевает группировку, способную образовывать пептидную св зь, например группу представл ющую собой аминокислоту, лишеннуюодного шт обоих атомов водорода от аминогруппы (иди аминогруппы в случае иминокарбоновых кислот) и от гидроксила карбоксильной группы.
Основные или нейтральные аминокислоты обозначенные R , содержат в предпочтительном варианте 2-10 атомов углерода. В качестве npmvtepa основных аминокислот, использованных дл получени предлагаемых полипептидов, можно привести такие аминокислоты, как ot , |i -диаминопропионова кислота, оС , fi -дкаминомасл на кислота, аргинин, лизин и гистпдин. В качестве примера нейтральных аминокислот, подразумеваемь х под R , можно указать такие аминокислоты, как глицин, а анин, серан, треонин, ct -амниэмасликую кислоту , пролин, лейцин, изолейцнн, нэрлейнин, ф ;нилал«нин и тирозин, а также л{).угие амннокислоть , такие, как -аланин, 7f «миноМасл на кислота, 8 - аминовалерианова кислота и g - аминокапронова кислота . Дл тех аминокислот, которые могут существовать в виде оптических изомеров , RJ обозначает любой из оптических изомеров соответствующих аминокислот или рацемические соединени . Среди аминокислот , соответствующих R , fl -аланин вл етс особенно предпочтительным дл целевого использовани .
Нейтральные аминокислоты, представленные R , содержат предпочтительно 2-10 атомов углерода. Примером таких
аминокислот вл етс глицин, аланин, р - -аланин, саркозин, серин, цропин, валин, лейНИИ ,изолейцин, фенилаланин и тирозин. Среди аминокислот, соответствующих Rj, глицин и пролин вл ютс наиболее предпочтительньгми дл использовани но указанному назначению . В случае, когда R- представл ет остаток пролина, целевое применение достигаетс даже в том случае, когда R, представл ет собой атом водорода.
Аминокислоты, которые могут входить
в состав тирозильных пептидов или их амидов , содержат предпочтительно 2-10 атомов углерода кажда . Примерами таких аминокислот вл ютс глицин, аланин, серин,
треонин, валин, пролин, лейцин, изолейцин, лизин, фенилаланин и тирозин. Эти аминокислоты св зываютс в любой последовательности с образованием тирозильных пептидов или их амидов, содержащих в своем
составе от 1 до 5 аминокислотных остатков . Такими тирозильными пептидами и их соответствующими амидами, которые иногда называютс амидами тирозильных пептидов вл ютс , например, следующие соединени :
Т)г-ЬЕм-ОН;
Ьг AEd-GEvj-OH,
Т:(Г Leu -AEa-G v-OH;
Leu- uE -Vae-AEa-OHj
Tvr- Thr-Pro -Leu-Phe-ОИ, Tvr-Thr- ro-Lvs - деа-ОН;
Tvr-Thr-Pro-Ls6 - Thr-OH;
Tvr -Ser -Pro-Arg-- Qev- OH;
T-jr -Pro- лее - OH)
Tvf - Leu -Leo- Leu-OHj
- G,e)-c,ev-G,ev-Gev-oH;
- Aea-Aea-Aea-Aeoi-oH;
Tvr -ThrPro- LV5 -,OH.
Среди аминокислот, тирозильных пептидов и их амидов ТУг NH вл етс наиболее предпочтительным дл целевого назначени (дл получени предлагаемьсх гюлипептидов ), в том числе и дл промышленного производства пэлипептидов.
В том числе, когда аминокислот,, представленные R или вход щие в состав i руппы R , могут сутцрютвовать в виде оптических изомеров, эти аминокислоты могут иметь любую оптическую конфигурацию (мо гут быть любым оптическим изомером) или тредставл ть собой рацемическое соединени Реакцию конденсации можно проводить, использу приемы и методы конденсации, известные дл образовани пептидной свйзи Перед проведением реакции конде сашш можно защитить карбоксильные и аминные группы, которые не должны принимать учас ти в рассматриваемой реакции, или, наобо рот, активировать карбоксильную и/или ами ную группы, которые должны участвовгть в этой реакции. Все операции по защите или активации функциональных групгг реагирующих веществ осуществл ютс известныкти методами. Карбокисльные группы в исходных веществах, которые не должны вовлекатьс в реакцию конденсации, могут быть защищены сопеобразованием, т.е. переводом в соответствующие металлические со и (например , натровые или калиевые соли) или этерифтпсацией, что св зано с получением соответствующих сложных эфироз (например , метилового, этилового, бензилового. -нитробензилового, трёт.-бутилового или трет .-амилового). В качестве защитных группировок дл аминогрупп исходных соединений могут быт использованы любые известные защитные группировки, которые гфимешпотс в пептидном синтезе, например бензилоксика| онипьна , трет.-ЙуганоЁСЕасарбонильна , трет -амилоксикарбоЩ ьна , иэоборнилоксикарбо1шльна и другие группы. Эти защитные грушгаровка могут йcпoJiьзoвaтъc щиты аминогруппы Пронина. Имидазольна функци гистидина может быть защшцена с помощью любой примен емой дл этой цепи защитной группы, наприм бензильной, тозильной, 2,4-динитрофенольной, трет.-бу- тилоксикарбонильной ипи бензилоксикарбонильной . Гидроксчльные группы серина, тре онина и тирозина могут быть защ1пцены лю бой обычно примен емой дл этой цели защитной Г1 уппой, например бензильной, трет -бутипьной или другой группой, способной образовьтать простой эфир. Гуанидинова группа аргинина может быть защшцена та- кими группами, как нитрогруппа, тозильна бензилоксикарбонильна , изоборнклоксикарбонильна или адамантилоксикарбонильна , В качестве примеров активированных карбо сильных групп в исходных соединени х мож но назвать соответствующие ангидриды, азиды, активированные эфиры (например, пентахлорфенилэвый, 2,4,5-трнхлэрфениловый , 2,4-динитрофениловый, ин.-.лметиловый h -т1тро)е 1иловый, N -оксисусиинимидный N -окри--5-норборнеи- 2,3-Дйкарбоксимидный , 1 ьксифтатгимндный клй N -оксибензотриазйльный ). Реакцию конденсашш мэжно гт|аоводи-ть в присутствии растворителей, ипфоко ис пользуемых в пептидном беавод-. ный или водный дШЛетилфор,, димет - сульфоксид, пиридин, хлороформ, диокса , метиленхлорид (дихлорметан), тетрагидро- фуран, а также различные смеси этих растворител|эй . Температуру дл проведени реакции коаденсадии выбирают в пределах днапазо а, относительно которого к.звестно, что он вл етс приемлемым дл проведени реакций , привод щих к образован го пептидных св зей. После проведени реакции конденсапии в том случае, когда полученный продукт содержит защитнь е грушнфовки, их ал кхг обычными методами, прии еп емьшси дл этих целей, Hanpro.iep, катапитнческим воо становлением в присутствии соответствующего катализатора, такого, как палйадиева чернь, палладий на угле, платина и т.д.; сольволизом с исполызоваЕшем фтористого водорода, трифторуксусной кислоты и так далее, а также восстановлением металлическим натрием в жидком а льшаке. Прим ер 1. Получение Arg-thro - „ phe - РЬе - Туг . Получение Z Аг§ (NO) -РгО {эке--Phe -Туг - NHslO , г t-Phe - РНе-Туг ЫНв раствор ют в 5О мл д1{метилформамида1ДМФ) и восстанавливают над ггалладиевой чернью. Через 1О ч катализатор отфнльтровывают, фильтрат охлаждают в лед ной бане и к охлажденному раствору прибавл ют 7,37 г Н-ArgCHOg)-Pro-ОН и 3,53 г HON В (N -окси-5 НОрборнен-2,3-дикарбоксамида ), туда же прибавл зот 4,06 г дишослогексилкарбодшолида (ДЦГКДИ), и реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч. Образовавшуюс днциклогексилмочввину (ДЦГМ) отфильтровывают, фильтрат упаривают при пониженном давлении. К остатку прибавл ют 2ОО мл этнлацетата и полученное при этом твердое порошкообразное вещество отдел ют фильтрованием. Осадок чист т перекристаллизацией из смеси ДМФ /метанол/вода. Выход 14,5 г (95,6% от теоретического); т.пл. 100« -103°С; 29,7°,(с О,55%, ДМФ). Найдено, %: С 59,51; Н 6,06; N14,90. C4b f40ioN.e 0 Вычислено, %: С 5-9,73; Н,1О; , N15,11 Б. Получение АР| -Pro -Phe - Phe- -Туг -NHa, loo мг E ) -Pro -Phe - -phe -Тут-NHe раствор ют в 30 мл уксусной кислоты, восстанавливают над пал лад евой чернью, используемой в качестве катализатора гидрировани , в течение 2О ч Катализатор от(| 1пьтровывают, фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении Полученный остаток раствор ют в 50 мл воды, фильтруют, фильтрат сушат лиофнлнзац ей . Лнофилизованный продукт раствор ю в б мл воды и раствор внос т в колонну (1,6 X 9 см), запопненнуто карбоксиметилсефадексом , провод т градиентную алюпню 0,1 М водным раствором ацетата аммони (40О мл) и 1 М водным раствором ацетата аммони {4ОО мл). Фракции от 250 по 370 мл, объедин ют и диофилизуют. Получают 25О мг (52,3% от теоретического) белого пушистого продукта; ctj i -41,9° (с 0,47%, вода). Аминокислотный анализ продукта (гидролиз провод т сол ной кислотой в стандартных услови х): Ar liOO; 1,О5 Tsf 0,91; Phe 1,96 (содержание пептид в продукте 86,5%). Найдено, %: С 56,76; Н 6,98; Nl4,2 .0б1 9Вынислено , %: С 57,06; Н 6,96 N 14,26 П р и М е р 2. Получение Qfy ргч - рКе-Phe--Туг -NHg. А. Получение 2 - - kr% - Pro - -Phe-Phe-Tyr NHg. 80мг (N02)--Pro--Phe - - Phe-TyrNH,раствор ют в SO м уксусной кислоты и гидрируют над паллади евой чернью в течение 8 ч. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворшот в 20 мл воды и лиофилизуют. Полученное в результате порошкообразное вещество раствор ют в 10 мл ДМФ, к раствору прибавл ют 147 мг моногидра та Л -толуолсульфокислоты. К полученной смеси прибавл ют 349 мг реакционную систему перемешивают в те чёние 1О ч. ДМФ отгон ют при пониженно давлении, к остатку прибавл ют 5О мл этиладетата. Полученное при этом порошк образное вещество отдел ют фильтрованием Выход продукта 858 мг (89,5% от теоре тического); т.пл. 119-1210С; , (с 0,96%: ДМФ). Найдено, %: С 59,45; Н 6,О8;К12,3 5 2,76 Ae feOQ o HgO.S Н,0 Вычислено, %; С 59,55; Н 6,18, N12,63 §2,89 Б. Получение Cty-А.- -Pro-Phe - -Phe-Tyr -NHa 5OO мг Z -Gfy-Apg-Pro-Phe - -Pbe -NHg n -толуоле ульфоната раствор ют в 30 мл уксусной кислоты, восстанавливают над палладиевой чернью в течение 5 ч. Катализатор отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток раствор ют в 20 мл воды, и полученный раствор подвергают ионообменной хроматографии на колонке с Амберлитом 3RA -410 в ацетатной форме ( Af berEite ЗКА -41О представл ет собой сильно основную анио- нообменную смолу). Элюат лиофилизгфуют и полученное в результате порошкообразное вещество раствор ют в 5 мл воды. Этот раствор нанос т иа колонку (2,6 х 23 см) с карбоксиметилцеллюлозной, Элюцию осуществл ют градиентньм методом с использованием двух воднь растворов ацетата аммони : О,ОО5 и О,2 М (по 7ОО мл каждого полученного в примере А раствора) с нарастанием концентрации элюента. Фракции в диапазоне от 840 до 97О мл объедин ют и лиофилизируют, В результате получают 27О мг (63,6% от теоретического) целевого продукта; с.,. -62,0° (с 0,46%, вода). Найдено, %: С 55,99;Н 6,92; N14,77 ..о Вычислено, %: С 56,15; Н 6,82; N14,89 Аминокислотный анализ: Afg0,94; 1,06; СгВ 1,00; 0,94; he 2.ОЗ (содержание пептида 83,2%). П р и М е р 3. Получение - -Arg-Pro-Phe-Phe-Туг -NHg. Процедуру, описанную в примере 2, повтор ют с той только разницей, что BNiecTO Z-GCv-ONB используют Z-у-A-bu-ONB. В результате получают 324 мг указанного соединени ; d -58,7° (с 0,45%;вода). Найдено, %: С 56,14; Н 7,36 N13.92 С42МубОт 10-2С2Н О,-ЗН,0 Вычислено, %:С 55,97; Н 7,15; N14,19 Аминокислотный анализ: Afgl,OO; PfO 1,О8; ТУГ- 0,97; Phe 2,13 (содержание пептида 80,8%). П р и М е р 4. Получение 8-Ас«р - - Apg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NHj, A. Получение 2 - -Acap-Arg PPO -Phe -Phe -Туг-NHg. В 10 мл ДМФ раствор ют 25О мг Z - 6 -Асар-ОН и к полученному раствору
9
при охлаждении на лед ной бане прибавл ю 186 мг HONB и 214 мг ДЦГКДИ.
Смесь перемешивают в течение 16 ч, образовавшуюс ДЦГМ от мльтровьшают. Фильтрат прибавл ют к диметитгформамвдному раствору Н-Ai g-Pro-Phe - - РКе -Tyi -NHg и - олуолсульфоната который получен по методике, описанной в примере 2А, Смесь перемешивают в течение 12 ч, ДМФ отгон ют при пониженном давлении. К остатку прибавл$пот ЗО мл этилаиетата и образовавшеес при этом порошкообразное вещество отфильтровывают . Выход продукта 810 мг (79,1% от теоретического); тлл. 90-92 4 ; «А.
Т) -30,3 (с 1,07%: ДМФ). N11,8
Найдено, %: С 59,81; Н 6,75; S 3,ОО
,
Вычислено, %: С 59,88-Н 6,65; А/11,84; S 2,80
Б. Получение в- Асар - А г - Pro
-Phe -Phe-Tvr -NHg5OO мг Z -производного, полученного в примере А, обрабатьтают по примеру 2Б в результате чего получают 316 мг указаннргосоединени , -58,9°С { с 0,55%, вода).
Аминокислотный анализ: Ahg ,02; Pro 1,ОЗ; Тчг О,92; he 2,13; Е -Асар не определ ли; (сод эжание пептиде 81,5%
П р и м е р 5. Получение LVS - А.ГО - Pro -Phe -Phe - Туг -NH2
А, Получение ди 2Г-Lys - Arg - -Phe -Phe-Туг -NH
Процедуру из 4А повтор ют с тем исключением, что вместо Z - - -Асар-ОН используют 390 мг ди-Z - Цб-ОН , в результате, чего получают 932 мг указанного соединени , имекнцего т.пл. 103-105«С;IdL -28,5° (с 1,О4%, ДМФ).
Найдено, %; С 6О,64; Н 6,21; N11,7 5 2,82
6oH.iOi.N,V
Вычислено, %: С 6О,39; Н 6,43; N 11,56; Ь2,41 Б. Получение Lys - Arg - Pro - Phe -
-Phe -Tyr-NH
500 МГ ДИ- 2 -производного пептида, полученного в примере А обрабатывают по примеру 2Б, в результате чего пoлyчiJOт 336 мг указанного соединени г -52,60С (с 0,57%, вода).
Аминокислотный анализ: Lvs l,O2;AiPcr О,98; Pro l.OO; 0,94;Phe 2,04 (со/лвржание пептида 91%).
П р и м е р 6. Получение Ы,) -Ра6 - Аг Pro phe - Pha -Tvr -- NHa10
Аналогично примерам 4 и 5, нс исхплй из 535 мг ди- г - d - I-Boib -/ иптелпгексиламмонийноР соли, синтезирэв/чио укпзанное соединение с выходом 325 мг, .58, ( с О,5О%, вода).
Аминокислотный анализ: сА. , тр - Dab 1,00; Afg- 0,98; Pho 1,OO; 0,87; Phe 1,96 (содержание пептида P4,2%). П р и м е р 7. Получение yfl - Ate --Ar -Pfo--Phe-РЬе-Туг-Nilj ,А . Получение Z-/6 -А(л - Лга (hiOp) -Рго-оМе.
К 3,50 г Z-ApQ(M02)-Pro-OMe прибавл ют 35 мл 25%-ного раствора
HBf в лед ной уксусной кислоте, Реакпионную смесь встр хивают при комнатной температуре в течение 35 мин. К этой смеси прибавл ют 300 мл диэтилового эфира , образовавшийс при этом осадок отфильтровывают , промывают эфиром и сушат. Полученный порошок раствор ют в 20 мл ДМФ и при охлаждении на лед ной бане нейтрализуют раствором триэтиламиыа. Зат&л прибавл ют 2,9 г 2.- |Ъ Atoi-ONB и
перемешивают в течение 16 ч. ДЧФ отгон ют при пониженном давлении, остаток раствор ют в ЗОО мл этилапетата. Полученный раствор трижды промывают 4%-нь { водным раствором бикарбоната натри (порПИИ по 10О мл). После промывки водой раствор сушат над безводньп л сульфатом натри . Растворитель отгон ют при пониженном давлении и к остатку добавл ют этиловый эфир. Полученное при этом порпшкообразное вещество отдел ют от маточного раствора фильтрованием. Выход продукта 3,О5 г (74,3% от теоретического), т.пл. 62-65оС; Л 1 -34,1° (с 1,04%, ). Найдено, %: С 50,98; Н 6,36; N 17,72
..О
Вычислено, о: С 50,73, Н 0,21-,
N 18,01
Б. Получение г-ув-ЛЬг-Аг(ЯОд)-Pro-ОНВ ЗО мл ацетона раствор ют 2,82 г Z-y3-A(a ApgCKOg)Po-OMe , к полученному раствору, охлажденному на лед ной бане, прибавл ют 10,7 мл 1 н. водного раствора гидроокиси натри . Реакци- оиную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем смесь нейтрализуют 11 мл 1 н. сол ной кислоты,
раствор упаривают при пошгженном давлении .
к полученному масл нисток(у остатку прибавл ют ЗО мл холодной воды и водный слой отдел ют дека1ггацией. Остаток гфомывают один раз холодной водой и cyuiaT., после чего этот продукт хроматэгр-афНУ
на колонке с силикагелем (ЬК) i), и.и- льзу в качестве элюента систему этилацетат/пиридин/уксусна киспота/вода (60: :20:6:11). Фракции, обогаще1гаые ожидаемым соединением, объедин ют и упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток промывают этиловым эфиром и отфильтровывают . Выход продукта, 2,62 г; т.пл. e5-67°C;td3|i -27,5 (с 1,О7%; ДМФ Найдено, %: С 5O,4i; Н 8,19; N 18,58 , Вьгшслено, %; С 50,66, Н 5,99, N 18,80. С. Получение Z- - Ata - Afg (MOgV -.Pro- Phe -Phe - Tyr -NHg 1.50 г Z-Phe -Phe-Typ-NHg раствор ют в 15 мл ДМФ, гидрируют над палладиевой чернью в течение 4 ч. Катализатор отф пьтровьшают, фильтрат охлаждают на бане со льдом и к охлажденному раствору прибавл ют при перемешивании 1.21 г г-/ АГа Аг§Ш02)-Рго-ОН, 0,53 г НОН В и 0,61 г ДЦГКДИ. Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч. обрадовавшуюс ДЦГМ отфильтровывают и фильтрат упаривают при понижен ном давлении. К остатку прибавл ют 5Омл воды, фиш труют, осадок собирают, сушат Переосаждают из ДМФ этилацетатом. Выход продукта 1,99 г (8О,9% от теоретического ); Т.ПЛ. 135-1380С, -33,1° (с 0,9, ДМФ). Найдено, %: С 58,93; Н 6,18; N 15,0 t4.vO..VH20 Вычислено, %: С 59,08; Н 6,17; N15,47 1.Z-p-A1a-Ap(N02)-Ppo Z- -Ala-Afi-iJJOg) -РРО p- Ma ppo - Phe 2 .Zr-p-Ala Ap#0 02)--Pio Z-p-Alo-Arg-lNOg) -Pf« ;p -Ala-Aff-PiHj -Phe 3.Z-p -Alu - -t-HPr HCl Z -p - Ala P -Ala Д. Получение уй- Ala - A(g - Рро - phe - Phe - Tyf-NHg В 40 мл лед ной уксусной кислоты раствор ют 1,50 г г-/- Д а-Aг§fN02)- РРО РЬе - Phe -Туг -NHj, отщепл ют Z -защитную группу гидрогенолнэом (над палладиевой чернью в течение 8 ч), Катализатор отфильтровывают и 4 льтрат упаривают прп пониженном давлении. OcTaToji раствор ют в 50 мл воды, отфильтровывают небольшое количество нерастворившегос ветцества и ({мльтрат лиофилизуют . Лио(} 1лизованный продукт раствор ют в 2О мл воды, полученный раствор нанос т на колонку (3,OxS8 см) с карбоксиметнлпеллюлозой . Элюцию осуществл ют гр адиентным методом с использованием О,005 и О,2 М водных растворов ацетата аммони {по 1,5 л каждого раствора). Фракции от 149О до 184О мл элюата объедин ют и лиофилизуют. Выход продукта 98О мг ( 65,7% от теоретического); сА. i. -59,1 (с 0,52%, вода). Л Найдено, %: С 54,34, Н 6,98; N13,98 С4-,уЛ о-2ЧН,0, Вычислено, %: С 54,53; Н 7,12; N14,13 Аминокислотный анализ: Atgr ,ОО; 1,11;Т)Г 1,ОО; Phe 2,11; fi-AEa О,94 (содержание пептида в образце 75,7%). Аналогично примерам С и Д то же целевое соединение можно получить в соответствии со следующей реакционной схемой -Phe-T -Mlg JHONB/DCC -Phe -Tyi- -TSflia I H2/Pd ил HF Tyf phe-OH -t-H-Tyt I HONB/БСС Phe -Tyr -MIg I Hs/Fd. или HF -Тур -NHa e -Phe -Tyf -NHg I HONB/DCC -Ргн)-Р11в-РЬе-Тур-ТМНг I H2/Pd - Pro -Phe -Ptie -T r-NHg Получение - Aia - П р и м е р - Arg - Pro - Ptie Phe - MHg. Аналогично примеру 7, но с заменой Н- РЬе - Phe - Туг NHjна Phe - NHj; получают 1,24 г указанного соединени в виде белого пушистого продукта-, dlj- -48,6° (с 0,42% вода). Аминокислотный анализ: 1, 1.ОО; Phe 1,98; p-APoiO,97 (сод жание пептида 82,6%). П р и м е р 9. Получение & - Ма - Afg -ЛЬ - Рйе - РЬе - 1 -NHg . А. Получение Л - б - Afoi - РЬе - -Phe -Туг -NHj. 2,00 г Z- Phe - Phe - Туг - NHj раствор ют в 4О мл ДМФ и гидрирукп над палладиевой чернью в течение 5 ч. Катализатор отфильтровывают и к фильтрату пр бавл ют 1,39 г Z-p«-ACa-ONB , Реак ционную смесь перемешивают в течение 9 ч и ДМФ отгон ют при пониженном давлении. К остатку прибавл ют 50 мл воды, получившийс при этом порошок отдел ют фильтрованием и сушат. Полученный продууст i, чист т перекристаллизацией из смеси ДМФ /этилацетат. Выход продукта 2,О2 г (88,0 от теоретического)-; т.пл. 232°С; A. ,(с 0,94%: ДМФ). Найдено,%: С 65,18; Н 6,20. N 10,32 .т Вычислено ,%: С 65,41; Н 6,21, N1O,O Б. Получение Z ArgCNOa) в - Phe - Phe - Tyi- - NHg В 30мл ДМФ раствор ют 1,0 г 2-ув - -Ala-Phe -Phe-Туг-K II и, использу палладиевую чернь в качестве катализатора гидрируют в течение 6 ч. Катализатсф сугфильтровьтают и к фильтрату прибавлшот раствор 2-Arg CNOj)-OT)NPв тетра гидрофуране (указанный динитрофениповьй эфир получен из 0,52 г Z-Afg-CNOj)-ON и 0,ЗО г 2.4-диш1трофенола в 10 мл тетр гидрофурана дишжлогексилкарбодиимидным методом). Реакционную смесь перемешивают в течение 13 ч,,растворитель отгон ют в вакууме. К остатку прибавл ют 50 мл воды, полученное порошкообразное веществ отфильтровывают и сушат. Выход продукта: 1,01 г (74,9% от теоретического); тлл. 192-194оС;1л -11.1° (с 1,О2%( П л ,N Ч N15,61 Найдено,%: G 57,63; Н 5,93; C44 20ioV2H20 Вычислено, С 57,63; Н 6.16; N15,28 Z-y6-AJo-Arg(NOa)С ,. П олучение Phe -Txjr-NHg, -/-Ala - Phe 57 5 К 700 мг 2- - - Аг§ (NOg) -/-Ala -Phe-Phe -Туг NHg, прибавл ют 0,2 мл анизола и вспод за эткм 7 мл 25%HBf в лед ной %т сус ой кислоте. Смесь встр хивают при комнатной температуре в течение 40 мин, после чего к ней прибавл ют 1ОО мл этилового эфира, выпавший при этом (х;адок отфильтровывают и промьтают на фильтре этилов1 гк-1 э4Иром . Осадок тщательно высупгквают. раствор ют в 10 мл ДМФ и при охлажленгаи льдом нейтрализуют раствор тризтнпа п ном. Вслед за этнм в реакционную cHcreNiy ввод т 336 мг Z-p -AEa-ON5.и раствор п емешивают в течение 18 ч. В ллльнрйшем отгон ют ДМФ при понггкеннэь д /Влении и к остатку после ртариваии реакционного раствора прибавл ют ПО мл волы. Образовавшийс при этом осадок отдел ют фильтрованием, суишт и пересажппкгг из ДМФ и этилацетата. Выхол прод к:та 56О мг (73% от теоретического); т.пл. 2ОО-202°С (разложение); -7,3 (с О,9Т%; ). Найдено,%: С 58,Об; Н 6,41; N 15 .v.o Вьгчислено,%: С 58.19; Н 6,13; N 15,89 Д. Получение - -Arg - & - - Phe - Phe Tvr - NHa В ЗО мл лед ной уксусной кислоты растьоршот 400 мг защюцешюго пептида 2. - Ata - Ajg(NOa)-/-AlQ-Pha -РЬе Р-НН ,и, использу в качестве ката;;кзатора палладиевую чернь, гидр5фуют в течение 8 ч. Катализатор удал ют фильтрованием , растворитель отгон ют при пониженном давлении. Остаток растворзпот в 5 мл и полученный раствор нанос т на колонку (2, 6 X 22см) с карбоксиметилцеллюлозой. Градиентную элюцию провод т с использованием О,ОО5 и О,2 М водных растворов ацетата аммони (по 7ОО мп каждого раствора). Фракции элюата от 72О до 87О мл объедин ют HI дигх шлизуют. Полу чают 27О ыг (69,1% от теоретического), белого пушистого продукта; ел.™ -17,2°, (с 0,53%, вода). Найдено,%: С 54,52; Н 6,96; N15,00 39W 2S o2CгH40,-ЗH,Q Вычислено.%: С 54,53; Н 7,03; N14,79 Аминокислотный анализ: AVg 1,ОО. Таг 1,ОО; he 2,03; р-АЕа 2,14 (содержание пептида 79,О%). Пример 1О. Получение Ага-Arg;3-Afa - Phe - Phe - Tvf -МНг. Аналогично примеру 9С, но с заменой I-ji-AEa-ONBна 34О ZvAKa-ONB,
15
получают 297 мг указанного соединени в виде белого пуишстого порошка; АЗ -18,9 ( с 0,62%, вода). .
Аминокислотный анализ: 1,02; АЙа 1,04; 0,97. Phe 2,0: j%-Деа 6,97 (содержание пет-ида 81,0%),
ПрнмврЦ. Получение : й Мл - --Аг§-$аГ-РНе -Phe - TVr-NHa.
А. Получение 2- Sap - Phe - Phe -Ttfp-HHg.
В SO мл ДМФ раствор ют 2,02 г Z -Phe-THe-T-s .p-NHg а, нспользун в качестве катализатора палдадиевую чериь, гидрир ) в течение 5 ч. Катализатор отфильтровьдаают и фильтрат охлаждают. Отдельао pacTBOpssiyf 810 мг Z 5«г - ОИ в 10 МП тетрагадрофурана и к раствору добавл ют 0,71 г HONB. Смесь озшаждают до О в прибавл ют к ней 0,82 гДЦГКДИ Полученную реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч. Образовавшуюс ДЦГМ отфйльчроаьюают, фильтрат прибавл ют к охлажденному днметнпформамндному раствору . Смесь перемешивают в течение 2О ч, после чего растворитель отгон ют при поаиженном давлении н к остатку прибавл ют 5О мл воды. Полученное при этом порошкообразное вещество отдел ют фильтрованной и переосаждают из смеси ДМФ/этиладетат. Выход продукта 1,90 г (83,8% от теоретн ческого), тлл. 246-248°С (разложение); Ир -9,7 (с 1,07%; ДМФ),
Наадеио,%: С 66,32, Н 6,39; N 1О,52 ,W -1i2H,0
Вычислено,%; С-66,26Г Н 6Д5; N10,17 Б. Получение Z - АгоСКОг) - Sar - РЬе-РЬе - Туг-NRg.
В 1О мл ДМФ раствор ют 1,О г Е-Sar- Phe - Phe -Туг -NHg и, использу в качестве каташгзатора палпадневую чергоз, гидрируют в течение 7 ч. Катализатор отфильтровывают и фильтрат охлаждают. Перед этим в отдельной реакпионнойсистеме раствор ют О,52 г Z-Arg-CNOjVOH в 10 мл тетрагвдрофурана н при охлаждении льдом прибавл ют к раствору 0,3 г 2,4-ди нитрофенола и 0,33 г ДЦГКДИ. Реакцион ную смесь перемешивают в течение 3 ч, образовавшийс осадок ДЦГМ отфильтровывают и фильтрат прибавл ют к диметилформамидному раствору. Смесь перемешивают в .течение 2О ч н упаривают при пониженном давлении, К остатку прибавл ют 5О мл воды и образовавшийс при этом осадок отфильтровывают . После высушивани полученное порошкообразное вещество иерееюаждают из смеси ДМФ/этилацетат/этиловый эфир. Выход продукта 1,04 г (77,2% от теоретического): т.пл. 96-980С, 1 7,3° (с 1,06%; ДМФ).
16
Найдено,%: С 57,60-; Н 6,1О; N15,01 .о 10-2Н,0
Вычислено,%: С 57,63, Н 6,16, N15,26 С. Получение Z- jS Ма - Аг§ (N0) - - Sap -- Phe - Phe - Туг - NH.
В 7 мл 25%-ного в лед ной уксусной кислоте раствор ют 7ОО мг Z. -
-ArgOl02)-Sar-Pie- h TjPi-NH2 н 0,2 мл анизола и раствор встр хивают при комнатной температуре в течение 4О мин. К реакционной смеси прибавл ют 100 мл этилового эфира, и полученный осадок отфильтровьгоают , промьшают на фильтре эфгром н сушат над гранулированной гидроокисью натри в течение 2ч.
Вьюушекный осадок раствор ют в 10 мл ДМФ, раствор охлаждают на лед ной бане и нейтрализуют триэтиламином. Затем прибйвл ют 336 мг 2-p -Aecj-ONB и раствор перемешивают в течение 2О ч. После этого растворитель (ДМФ) отгон ют при пониженном давлении и к остатку прибавл ют 50 мл воды. Полученный при этом порошкообразный осадок отфильтровывают и после высушивани переосаждавэт из смеси ДМФ/этилацетат. Выход продукта 59Ом ( 76,5% от теоретического) г т,пл. 1351380С; 3| -15,50 (с 0,99%, ДМФ).
Найдено,%: С 58,18; Н 6,40; N 15,6О
. iV
HjO
Вычислено,%: С 58,19; Н 6,13; N15,89 Д. Получение j$ - Ala - Arg - Sar - - Phe - Phe Tyr - NH.
В 30 мл уксусной кислоты раствор ют 45О мг защищенного пептидного производного Z-/-Afa-A -Sa --Phe-Pbe-Tyr-NHj, и в присутствии палладиевой черни гидрируют в течение 8 ч. Катализатор от- фильтровьтают и фильтрат коннентрируют в вакууме досуха. Остаток раствор ют в 5 мл воды ихроматографируют на колонке (2,6 х X 22 см), заполненной карбоксимбшлнеллюлозой . Градиентную элюцию провод т с использованием О,ОО5 и О,2М водных растворов адетата аммони (700 мл каждого раствора), причем целевое соединение выходило из колонки во фракци х от 770 до 880 мл. Эти фракции объедин ют и лиофи изуют . Получено ЗО9 мг (7О,4% от теоретического) белого пушистого продукта, ,5°(с 0,46%; вода). Найдено,%: С 54,99; Н 6,76: N14,58 C,.H,,,,2.C,H,0,-3H,0
Вычислено,%: С 54.53; Н7,03; N 14,79
Амииокислотный анализ: ,OO;Tsr 0.88; Phe 2,О2; |ЬтАЕа 0,98) Soi(« не определ лс (содержание пептида 78,7%),
Прим ер 12. Получение J,eu - Ar§ - -Pro -Phe - рКе - Tvr - NH,, 17 А. Получение Н - Leu - fgCNOg) - -Pro -РЬс - Phe - Туг- MHg. В 20 мл раствор ют 7ОО мг Z P)ie Phe-Т г-NHp и нал пал-. ладиевой чернью в течение 6 ч. Каталкз тор отфильтровывают и фильтрат охлажда от К этому фильтрату прибавл ют 648 мг карбсжснль ого компонента 2-Leu-A g(fIO Pro-OH, а затем 247 мг НО11 В и 285м Д11ГКДИ. Смесь йеремешива от в течение 2О ч, образовавогийс осапок дишгк-ЛО екснпмочевйны отфильтровывают н отгон ют при ионижешзом аав ени . К остатку прибавл ют 5О мл во ы и полученное псфошкообразное вйаество перенос т на льтр. Продукт сушат и переосажлают из салеси ДМФ/этиладетат/эфир| глп. 110lll t; d -38Д° (с 1,0%; ЯМФ). Выход продукта 1,О5 г (80,5% от теоретического ) , Найдено,%: С 59,24; Н 6,50; Н 14,62 ..-2H20 Вьп1ислено.%:С59ДЗ; Н 6,59; N 14,59 Б. Получение Lea - Кг§- Pro - Phis --РЬе- TVP- NHg. В 2О мл уксусной кислоты раствор ют 5 мг защищенного пептида Z-Leti-irg( -FVo - Phe -РЬе - TV и восста- нав ивают в присутх:твт5 палладиезой черни в течение 10 ч. Катализатор отфж ьт- ровывают и фильтрат кониентрирутот досуха при пониженном давлений. Остаток раствэ-- р ют в 5 мл воды а хромат ограф5ср {: -т на колонке (2,6x2Oe fK заполненной кар-6оЕ- силметилцеллюлозой.Градиеитаую snsssissj провод т с использованием О.ООб и О,2М воднь х растворов ацетата аммони (пэ ТОО мл каждого раствора). Целевой продукт выходит из КОЛОНКИ во фракци х от 7ОО до 790 мл. Фракции объедин ют н пиоф лиэируют. В итоге поззучавэт ЗОО мг (63,6% от теоретического) белого пушистого продукта; 1 -58,3° (с 0,59%; вода). Найдено,%: С 57,72, Н 7,24; N14,25 Ч4.о07 10-2СА3,-2Н,0 Вычислено,%: С 57,81; Н 7,28; N 14,05 Аминокислотный анализ: Дгр1,07;Рю 1,03; T)r 0,87; Phe 2,07M€u 1,00 (содержание пептида 83,9%). Пример 13. Получение -Ata -Аг§ -РЬе - Phe - Phe - MHg. Л. Получение Н- - SLP§(NOg) phe-Pbe-Phe-Туг(В2Г)-смолы. В реактор твердофазного пептидного сил тезатора загружают 4,33 г ВрС-ТУг(Ы1 -смолы (содержание Т1фоаина 2,18 ксмоль дают ей набухнуть в дихлэрметане, од т в указанном пор дке БОС- Ph -ОН, ВОС .„Phe «ОН. ВОС- Рг;е-О ;, ВОС-A yЧKCiJ,v OH 2-j:.-AeO:-Gli , : CM4t-:: :-::.- I..:;.;.-. ппгваггке попгнлнзй аеп;: ,:----;:.v.-:tf K:::::;.:iocДИИМИдКЫ ; CHDCODOvi в С05Т;М ТС аП;; Г МО-ТОПгТ ОЙ , paspacDTfilil-IOil Л1€- ;:--5Ь ЛМ, К -;-по SeBGDHJOfillfT BCS7 П; й ГТ ; i :.П ii - вают л хпорметакзт-;. Ц:-1 -; г;.:±;), л;-ПЯНОЙ уксусной кИСЛСгТОЙ П .П Т,Г ОГОТ., сушат В П&ЗУЛУТЗТЗ i O rv ; Tf-r О,on Г «1епП5дса 8ржо1Еои , Б, noHT sGiiHo Z-- и --nfa -- А,ч; . ;.:. i -Phs -РЬе -Phe -TvrCE: ;. --:-;1;-,-: р.гешпЕЗют прк ломнвткэ . :- -кчен15е iS ч. C.-unv о- чЬнль-у; : ;-:-:,.:-: /-::- ;;.трат упарнзак т дгсухс пр:; nL:-;iiiv; -;r,..j-- n-iivггеш{н К остйлт;;, гшкбь -пкг: т ;;;; ::П 4;;г, осадэк огфтйпг трозлваот ;; гу ;;;v. :- -i«r: продукта S, на г , С. Пэлуче; и-э д , -- Ьf -Phe --- Phe -IvV ,, В ЗО мл едпп:: :г ч-тсуЬко-;; ..-acvv rvac-Tмере Б и вссста авлиБс чернью в течсн.гс 10ч фзшьтроаьхйэют . :; фпльт ха пру г оигжонном дап БСр ют в о Mil в:;дг- р понку (2,8 л 24; 5: 5 оа;; С15мета;1; е юл;-лэ}, Гтт;-; upSBDu T с :С-;ОПЬЗС-П::;Н; 8ОО лШ ка-сдсг: -jso-: ЗЕругот« Выход целевого .. la :-j ; ;.i С 64% от теоретичажэгэ); d ;, ЗЭ , 19° (с 0,46%; аода). . Найдено С 5S.44; Н 6, N 12,86 С,,0.,; Г. )ч,0 Вычислено,%t С 58,44; li 6,81; N 12,52 Аминокислотный аналиа: ,ОО; Isif 0,81; Fbs 3,20; р-ДЕе о,9 содержа Ш5е пеатил 84,8%), Пример 14 Г1олуче:;й - -Arg -Leu - phe- Phe - TVi -Sty - KHn. A. Получение Z / - Aia - Sip (Tos) - -Leu -Pbe -Phe . В реактор твердофазного пеггтггд ого синтезатора ( SifT7Cii32U APS--SOO) помещают 4,0 г BOC-GPv - ::--и пы (содержащей 1,7 кмэль глицина), дают ей ка бухнутъ Б метнлеюслэртше в течеине 2О ч, В реактэр ввад т Е ytcaaaKKONi пор дке BOC-Phe -ОН. ВОС- , РОС« Uu-ОН , Аос -Arg- (ToS))H и 7--р-АСа ОН, использу Б качестве кокденсирующегп агента , ДИГКДИ, а в качестве агента дл отшеплеаи ВОС-защитной группы - смесь трифторуксусной киспЬты с метиленхлорндом е соотношении 1:1. После завершешш всех стадий твердофазного синтеза смолу npoMbiBaiOT метиленхлорвдом, ДМФ, метанол , лед ной уксусной кислотой, снова метаколоь и сушат .до посто нного веса. Выход пептндсодержадей смолы 5,09 г, Б, Получение Z- - ASa-А -(Tos)-Leu Phe Phe-T rCBHf) -МНаВ 5О МП раствора аммиака в метаноле суспендируют 4,4г пептидсс дер жащей смолы, полученной в примере А, сус пензшо помещают в ампулу, герметично ее залаивают. В таком виде суспензг-по перемешивают при комнатной температуре в те чение 48 ч. Смолу отфильтровывают и про мывают ДМФ, Фильтраты объедин ют и коп центрирувэтдосуха , при понннсенном давлении . К олучевному в остатке маслу прибавл ют этиловый эфир, порошкообразный проду1ст отделают фильтрованием. Выход 95О мг. С. Получение -At« Arg-Leu- We - Phe - Туг - - NHg. Смесъ из 500 мг сьфого ааппацеш{ого пептид-амида, полученного в примере Б, 0,5 мл анизола прибавл ют ,к 1О мл фто .ристого водорода. Смесь перемешивают при осе в тече-1-ще 60 мин, фтористый водород отгон ют в вакууме. Остаток раствор ют в 50 мл воды. Раствор промьшают дважды 20 мл этилового эфира, затем .пропускают через колонку (1 х 10 см) с Амберлит .JRA-410 в ацетатной форме и лиофи нэуют . Лиофилизованный продукт растворают в 20 мл и раствор ввод т в колонку (2,6 X 25 см), заполненную карбоксим€ гил целлюлозой. Элюдию осуществл ют градиен тным методом с использованием 0,О05 и 0,2 Л4 водных растворов ацетата аммони (по 800 мл каждого раствора). Фракции элюата от 12ОО до 153О .мл объедин ют и лиофилиз тот. Получают 167 мг белого пушистого продукта; di} -28,93° (с 0,6%; вода). . Найдено,%: С 54,64; Н 7,58; Н 14,37 Л.ОеЫ,,-2С,Н402-ЗМ20 Вычислено„%:С54,64; Н 7,26; N 14,60 Аминокислотный анализ;- Afg1,О6; GEv 1,00; Ьеи 1Д1; ТУГ 0,87; he 2,09 p -ABai,l4 (содержание пептида 82,О%) Пример 15. Получение АРа -Arg-Sei-Phe - Phe -Туг -NHgA . Получение Z -/ -Arg (ToS)-S (, BZO Phe-Phe -Туг (BZ) - -смолы, В реактор твердофазного пептидного си тезатора загружают 4,02 г ВОС- лы (содержащей 2,17 ммолъ глицина) и 6ВОДЯТ Б указанной последовательности следующие карбоксизтьные компоненты: ВОС Ti;r ( В211)оп, ВОС- Phe -ОН, всю-PheuDH , ВОС- Ser-(BZl)-OH, Аос- Ar-g (То&)Н и Г-{Ь -Деа-ОН , осуществл наращивание пептидной цепи по методу Мери (})ильда. После завершени всех стадий твердофазного синтеза смолу промывают метиленхлоридом, метанолом, ДМФ, ед - ной уксусной кислотой, снова метанолом и сушаТо Выход пептидсодержашей смолы 6,4 г, Б, Получение - Arg (T6S)- -gerCBie -Pte-Phe-Tvs-CBZO-Gtv-NHa. В 50 мл раствора аммиака в метаноле суспендируют 5,9 г пептидеодержащей смолы, полученной..в-примере А, и суспензию перемешивают, при комнатной температуре в течение 48 ч. Смолу отфильтровывают и промывают ДМФ. Промывные воды объедин ют с фильтратом и полученный объединенный раствор упаривают досуха при пониженном давлении. К остатку прибавл ют этиловый эфир, а осадок отфильтровывают . Выход продукта 2,О2 г. С, Получение jB Alo. - Arg - Ser - -РЬе Phe Туг - - NHg. В 10 мл безводного фтористого водорода раствор ют . 1,0 г сырого (неочищенного), защищенного пептид-амида, полученного в примере Б, прибавл ют к раствору 1 мл анизола, смесь перемешивают при в течение 6О мин. Фтористый водород отгоHfflOT при понгокенном давлении, а остаток раствор ют в 2О мл воды. Полученный раствор дважды промьгоают 10 мл порци ми диэтилового эфира и пропускают через колонку с Амберлитом ,JRA 410, элюат лио- филизируют. Лиофилизованный продукт раствор ют в 10 мл воды и раствор ввод т в хроматографическую колонку (2,5 х 25 см), заполненную карбоксиметилцеллюлозой. Злюнию осуществл ют градиентным методом с использованием 0,005 и 0,2 М водных растворов ацетата аммони (по 800 мл калвдого раствора). Фракции элюата от 80О до 950 мл объедин ют и лиофилизуют . После этого продукт пропускают через колонку (2 X 10 см) с Амберлитом ХАД-2 в водном растворе и лиофилизуют. Получают 55 мг палевого соединени в виде белого пушистого порошка; oL j. -30,11 (с 0,47;Бода. Аминокислотный анализ; ,04; &ег 0,96: Q.y 1,00; Туг 0,88; The 2,10; pj-AEa Ъ,98 (содержание пептида 83,0%), Прим ер 16. Получение -Ata - -Af g - Pro -Phe -Phe -Тур -Thr -Pro - Lys - APa -OH. В 30 мл метанола раствор ют 1,16 г 2-phe -Phe -Тур -Thr -Pro - LV& (ВОО)-Afa -OtBu и восстанавливают в присут21
ствии палладиевой черни в течение 4 ч. Катализатор отфильтровывают, а фильтрат концентрируют дсюуха при пониженном давлении . Остаток раствор ют в 15 мл ДМФ. К раствору прибавл ют 492 мг 2-|S-AEa-Ahg-tNOjVPfo-OHHaOO мг НОМВ, охлажцают и в реакционную массу ввод т 25О мг ДЦГКДИ. Полу1енную смесь перемешивают в в течение 18 час. Нерастворившиес примеси отфильтровывают и ДМФ отгон ют при пониженном давлении. К остатку прибавл ют этилацетат, осадок отфильтровьшают и сушат до посто нного веса. Сухой продукт раствор ют в 10 мл трифторуксусной кислоты . Раствор оставл ют сто ть на 4О мин затем трифторуксусную кислоту отго1шют при пониженном давлении, остаток раствор ют в ЗО мл лед ной уксусной кислоты. Восстанавливают в присутствии палладиевой черни в течение 16ч. Катализатор отфитштровьгоают , фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 10 МП воды и раствор пропускают через колонку с Амберлитом ТКЛ-41О. Раствор фильтруют, фильтрат ввод т в хроматографическую колонку (2,2 х 30 см), заполненную карбоксиметилаелпюлозой. Градиентрую элюцию провод т с использованием 0,ОО5 и 0,2 М водных растворов ацетата аммони (по 80О мл каждого раствора), фракцииот 82О до 1180 мл объедин ют и лиофилизуют. Получают 670 мг целевого продукта в виде белого пушистого порошка. Аминокислотный анализ: LvS 1,О2; Afg 0,98; Thf 0,96; PJO 2,О4; ACq 1,OO; Tsi 0,87; Phe 2,02; p -Aeot i,05 (содержание пептида в образце 74%).
n р и м е р17. Получение - Ala -
- Afg - G у - Phe -Ph е - Ту г - Leu - ОН.
А. Синтез I-Ptie-Phe -Tyn-OEt. .
3,43 г Z-РНе-Таг - OEt раствор ю в 5О мл этанола и гидрируют в присутствии палладиевой черни в течение 3ч. Катализатор отфильтровьшают, раствор упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 15 мл ДМФ и к раствору прибавл ют 2,77 г i.-Phe-Osi/ Реакционную смесь перемешивают в течение 10ч. добавл ют 8О мл воды, образовавшийс при этом кристаллический продукт отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси этанол/этилацетат/этиловый эфир. Получают 3,72 г (83,4% от теоретического) указанного пептидного производного в виде игольчатых кристаллов с т.пл. 185-18бС; Я 15-18;1° (с 1,09%; ДМФ).
Найдено.%: С 69,64; Н 6,14; N 6,54.
.0,N, Вычислено,%: С 69,68; Н 6,16; N 6,59
22
Б. Синтез Z-/ --Ala--Ar§CN02) -ety РНе - Phe -Туг .
В 5О мл этанола суспендпруют 2,0 г Z-Phe-Phe-Tsr-OEt и в течение 1,5 ч провод т его каталитическое восстановление в присутствии палладиевой черни. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме с целью отгонки растворител . Остаток раствор ют в 20 мл ДМФ. К полученному раствору, охлажденн; му нл лед ной бане, прибавл ют 1,56 г Z р -Aeo)-A g-CNO)-Q,-OH, о,7 г HONB и 0,8 г ДЦГКДИ и смесь перемешивают в течение 12ч. Образовавшуюс ДЦГМ отфильтровывают , раствор упаривают при пониженном давлении и к остатку прибавл ют 6О мл воды. Полученное при этом порошкообразное вещество отфильтровывают, сушат и пересаждают из смеси ДЛ Ф/этилацетат. Выход продукта 2,58 г (82% от теоретического ), Т.ПЛ. 83-85°С; d -lO.O (с 1,1%; ДМФ).
Найдено,%: С 57,41; Н 6,О5; N 14,49
Вычислено,%:С 57,43;Н6,23; Н 13,П
С. Синтез Z-/-А а - AJ-§ (NOg) - Gty РЬе -Phe -Tvr -ОН.
К охлажденной льдом суспензии 2,0(J г защргщенного пептида Ж - J - Afa - Arg (KO-€llV-Pbc .-PhG-Tvr-OEt в ЗО мл аиотоиа прибавл$пот 6,3 мл 1 М водный раствор гидроокиси натри , смесь перетч ешивают при комнатной температуре в тепенке 1 ч. После добавлени 3 мл 1 н. сол ной кислоты ацетон отгон ют при пониженного /UIBлении . Незначительное количество не{)астворршшегос вещества отфильтровьшают и к фильтрату прибавл ют 3,8 мл 1 н. солииой кислоты. Выпавший при этом осадок отфильтровывают, тщательно промьгеают холодной водой и сушат. Выход продукте 1,96 г 198% от теоретического); та:л. продукта 70-73°С; -8,7° (с 0,97 ДМФ).
Найдено,%: С 58,13; Н 5,89; N14,51
. Н,0
Вычислено,%:С57,77: Н 6,90; Ы14,64 Д. Синтез г-/- Ata-AfgCNOg) -Gb}- Phe - Phe - Tyi- - Leu - OBz.
В 5 мл ДМФ раствор ют 275 мг Н- 1еи-OBz6 П -толуолсульфоната, раствор нейтрализуют 0,9 мл 1О%-ного раствора N -этилморфолина в ДМФ. В реакционную смесь, охпажденную до , последовательно ввод т 670 мг Z-jЪ-A ot-Afg-CNO )-Gf ;-Phe-Phe-T r- 251 мг FiONB и 289 мг ДНГКДМ, перемешивают в точение 12 ч, образовавшуюс ДИГМ отфильтровывают и ДМФ из фильтрата от23 гон ют при пониженном давлении К остатку прибавл ют 30 мл воды, юлу енный осадок отфильтровывают, промывают гор чим метанолом и сушат. Выход продукта 703 мг (87,9% от теоретического); т.пл, 178-1810С; ,0° (с 1,02%; ДМФ). НайденоД: С 61.88, Н 6,78; N 13,15 ,.. Вычиспено,%:С 61,98;Н6.35; N13,49 Е. nonj jeHHe - Аг§ - Qty - - Phe - Phe - Туг - Leu - ОН. В 30 мл уксусной кислоты раствор ют 5ОО мг E-/-A «i-Arg(M02)- St-s-Phe P{ie ,etJ-UB2 и в гфисутствии паплад иевой черни гидрируют в течение 8 ч. Катализатор отфильтровывают и растворитель отгон ют при пошокенном давлении. Остаток раствор ют в 5 мл воды и полученный раствор ввод т в колонку (2,6х X 18 см),I еаполнеш1ую карбоксиметипцеллголоэой . Эпгоцию осуществл ют линейноградиентным методом с использованием О,ОО5 М водного раствора ацетата аммони {70О мл) и 0,2 М-водного раствора ацетата аммони (70О мп). Целевое соединение собирают во фракш1 х от 37О до 72О мл. Эти фракции объедин ют и лио фипизуют. Выход продукта 277 мг (64,2% от теоретического); Го(.3 -32.5° (с 0.5196; вода), Найдено,%: С 55.8О; Н 7,20; N 14,17 « Ло о-СгН ОгЭН.О Вычислено,%:С55,97;Н7Д5; Ы 14Д9 Аминокислотный анализ: .OO; QEv 1.О4; Uu 1.О8; Phe 2,16; 0,88; () - AEoi 1,04 (содержание пептвда 85,9 Пример 18. Полу11:ение - f sl-Gty-Phe-Phe-TYr - Л а-NHg. Методш у, описанную в примере 17 вос производ т с тем отличием, что вместо H Leu OBzC-n -толуолсульфоната нспол зуют Н NHj-гидрохлорид. В итоге получают целевой гепрапептид р-Аеа-Ah G. Phe-Pfie-Tyr-ACa-WH -диацетата с выходом 216 мг. Аминокислотный анализ: 1,01, ( 1,00; AEoi 1,02: Phe 2,00,-TNC 0,8 |-Ь - Аба 1,12 (содержание пептида в образце 82,4%). . Пример 19. Получение Ma -Afg- Gfy-Phe- РЬе-Tvr-Thr-Pro- ОН Л. Синтез Z-P)1e-Phe-Tilr-Thr-P o Oigu - 1,80 г Z-Thr-Pro - OtBu раствор ют в 30 мл метанола, падрируют в течение 5 час в присутствии палладиевой черни. Катализатор отфильтровьшают, а
24 астворитель отгон ют при пониженном давлейии . Остаток раствор ют в 20 мл , раствор охлаждают до и при перемешивании и охлаждении последовательно прибавл ют 2,70 г Z-Phe-Phe-Т г - ОН, 1,59 г НО MB и 1,37 г ДЦГКДИ. Реакционную смесь перемешивают в течение 18ч образовавшуюс Д1ДГМ отфильтровывают в к фильтрату добавл ют lOO мл воды. Осадок отдел ют фильтрованием, промывают. и раствор ют в 1ОО мл этилацетата. Полученный раствор дважды промывают 50 мл воды и сушат над безводным сульфатом натри . Растворитель отгон ют в ва .кууме, а к остатку прибавл ют этилацетат. ббразовавшийёй ;при этом порошкообразный продукт перенос т на фильтр и сушат. Выход продукта 2,51 г 189,8% от теоретического ); т.пл. 137-139°С; ,l° (с 1.08%; ДМФ). Найдено,%: С 65,49; Н 6,82; М 7,91 .o.- Вычислено,%:С 65,36lH 6,74; N 7,94 Б. Синтез .-Ac§CNa2)Qfy- -Phe-Phe -Тур -Thr-Pro - OtBu. В 2O мл метанола раствор ют 1,5О г Z- he-Phe-7:y -P o- OtBu, пшрируют в течение 4 ч над палладиевой чернью. После этого катализатор отфильтровывают , фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 10 мл ДМФ, раствор охлаждают в лед ной бане и прибавл ют при перемешивании 0,87 г 2-|Ь- Ahg-(N02:)-Gev-OH, 0,47 г HONB и О.54 г ДЦГКДИ, Реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч, образовавшуюс ДЦГМ отфильтровывают , к фильтрату добавл ют 5О мл воды. Образовавшийс гелеобразный; осадок отфильтровьшают , высушивают и переосаждают вначале из смеси ДМФ/этилацетат, затем из этанола. Выход продукта 1,40 г {67,4% от теоретического), т.пл. 153156°С; оС У -32,3° (с 0,97%, ДМФ). Найдено,%: С 58,24; Н 6,54; N13,87 C,9.0ir.2 Вычислено,%:С 58,50 Н 6,57; N 13,88 С. Получение -Afg - Gfy - Phe - Phe - Tyj Th - Pro - OH . К 900 мг Z- -Afa Ai«§ (WOй)-Gry-Phe-Phё -Tyf-Thr-Pfo-OtBu прибавл ют 0.9 мл анизола, 10 мл безводного ({ггористого водорода, реакционную смесь перемешивают при температуре -4С в течение ЗО мин, фтористый водород отгон ют при пониженном давлении и к остатку прибавл ют ЗО мл воды. Раствэр экстрагируют ЗО мл диэтилового эфира и водный слой ввод т в колонну (1,0 X 1О,О см) заполненную Амберлитом JRA-4JO в ацетатной форме, которую промывают водой. Промывные воды объедин ют с элюатом н объединенный раствор пиофилизнруют, Лнофилизированный продукт раствор ют в 10 м воды, раствор пропускают через колонку (2,2 x21cMj c карбокснметнлпеллюлозой. Э юцню осушествл ют градиентным метопом с нспользованн 0,ОО5 М водного раствора ацетата аммони ( 7ОО мл) в О,3 М водного раствора ацетата аммони . Желаемое соединение выходит рз колонки во фракци х от 235 до 385 мл. Эти фрактат объедин ют и тгаофилизнруют. Выход продукта 476 мг (57,О% от теоретического ); t/lji -38,8° (с 0,25%; вода). Найдено,%: С 53,2 Т, Н 7,О4; N 13,82 ,,,. С. Вычислвйо,%:С 53,1О, Н 7,ОО; N 13,91 Амннокисйо ый анализ: 1,05, Th 1,ОО; ГО 1,02-. GrSv 0,95; TV г 0,95 Phe 2,02; р- Ata 0,93 {сод шание пептнда 85,5%). Пример 2О. Получение ft-Асор - -Arg-Gfjf -Pfce -Phe -Tjr-Thr - Pro -OH. A. Синтез Z -Acap-APS(NOe)-Qfy-OE К 2,41r Z-Af-g-CNOp-Qiv-OEt прибавл ют 12 мл 25%-«ого раствора HBt в лед ной уксусной кислоте, смесь встр хивают пр комнатной темп атуре в течение 4О мин. К полученному раствору прибавл ют дввти ловый эфир, вьшавший осадок отфильтровы вают и сушат в вакууме над гвдроокнсыо натри . Перед этим в другой реакционной системе раствор ют 1,33 г Асар-ОН и О,99 г HONB в 5 мл тетрагидрофурана н при охлаждении на лед ной бане прибавл ют 1,14 г ДЦГКДИ. Реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч и о азовавшуюс ДЦГМ отфильтровывают. Подготовленный аминокомпонент раствор ют а 10 мл ДМФ и нейтрализации раствора трнэтилами ном прибавл ют к нему полученный раствор активированного эфира. Реакционную смесь перемешивают в течение ночи, растворитель отгон ют в вакууме, остаток раствор ют в 5О мл этилацетата. Раствор промывают водои , затем насыщенным водным раствором бикарбоната натри (2 раза по 50 мл). По ле заключительной промывки водой органический слой сушат над безводным сульфатом натри . Далее растворитель отгон ют при пониженном давлении и к остатку прибавл ют петролейный эфир. Полученное при этом кристаллическое вещество перекрнс- гал; изовывают из смеси вода/этанол/зтил- ацетат. Выход продукта 2,1 г (76% от тео ретического), т.пл. 85-87 С; dl J -11,9° (с 1,0%; ДМФ). Найдено,%: С 52,43; Н 6,64; М 17,76 Вычйслено,%: С 52,26; Н 6,76; N 17,78 В. Синтез - e-Acop-ApjCNOal-eiv-OH 1.8 г Z- -Асар - APJJ СНОд) - Gty - ОЕ t раствор ют в 10мл ацетона, раствор охлаждают на лед ной бане, к нему прибавл ют 2,9 мл 2 н. водного раствора г дроокиси натри . Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем к смеси прибавл ют 2,5 мл 1 н. сол ной кислоты, ацетон отгон ют при пониженном давлении. Остаток разбавл ют 10 мл воды, полученный раствор подкисл ют 1 н, сол ной кислотой. Вы павигее в осадок кристаллическое вещество от тльтровьгвают и cyiiiai. Выход продукта 1,59 г (93% от теоретического ); т.пл. 97,5-99°С;.сА. 1 -1О,7 (с 1,0%; ДМФ). Найдено,%: С 48,5О; Н 6,28; N 1 8,23 Ч2. Вычислено,%:С 48,79,Н 6,52; N 18,К С. Получение - G{y -Phe-Pbe -T r-Thp-Pro-OH. Аналогично примеру 19 Б, но вместо ZJ fOf-Ahg-CNUjVC t OH используют Z - f - Асмр-A (NO)-GEv-OH и в дальнейшем по методике примера 19 Б и С получают 428 мг указанного соединени , dlj 7,9° (с 0,25% вода). Аминокислотный анализ: 1,02 Thp 1,02- Pro 1,00; stv 1,01;Phe 2,04; 0,92; -Acap не определ ли (содержание пептида 84,9%). Пример 21. Получение .Lye -Arg - - aty-Pht -Ph -Туг-Т г-Pro -ОН. A. Синтез ди- Z - Lys - Arg (NOg) - -G y-OEt. Указанное соединение получакуг в виде гел по методике примера 20 А, исход из 2,07 г дн- Z Lv&-OH , Гелеобраэный продукт переосаждают из смеси вода, /этанол/этилацетат. Выход продукта 2,57г (73% от теоретического) т.пл. 161-162°Ci d.,9° (с 1,0%; ДМФ). Найдено,%: С 54,45, Н 6,О5, N15,99 Вычислено,%: С 54,85; Н 6,33; Н 15.99 Б. Синтез ДИ-. Я-Ьуа - AгgCЫ.02 - -alt-OH. В 10 мл ацетона раствор ют 2,0 г ди- Z-L S-Apg-CNOj -Ge -Ottи при охлаждении на лед ной бане к раствору прибавл ют 2,1 мл 2 н. раствора пшроокиси натри . Реакционную смесь перемеши27 пают при комнатной температуре в течение 2 ч, прибавл ют 1,4 мл 1 и. сол ной кислоты , ацетон оп он ют при пониженном давлонии , к остатку добавл ют 10 мл воды. Мррастворившиес примеси отфильтровывают н фильтрат подкисл ют 1 н. сол ной кислотой . ВьтавшиЛ гелеобразный осадок отдел ют фильтрованием. Выход продукта 1,78 г (93% от теоретического); тлш. 131132 ,50C;t l. -10.50 (с 1,0%,ДМФ) Найдено,%: С 51,43; Н 5.92; Н16.23 Вычислёно.%: С 51,491 Н 6,20; N 16,О2 С. Получение Lys-Ar -О --РЬе - - РЬе -Thr - Pro - ОН Методику примера 19 Б повтор ют с тем отличием, что вместо 2 {i АВс -Afg (N0j GrEvOH используют ди- Z-bb- Arg (.NOj)-Otv-OH-B результате получают 452 мг указанного соединени ; Л -34,8° (с 0,4%; вода). Аминокислотный анализ:. 1.08, At-cr 1,01.-Thr 0,92; Pto l.OO; (J€ l.OOj Phe 2.,O8; Tur 0,39 (содержание пептида 85.2%). Пример 22. Получение -Ata-Ar« (у- Phe-Phe-TV - - ТЬг - Pro-Lys-Ma-OR А. Синтез Z-Lv&(bOG)-Ae«-Otbu. 1,4 г I-AEoi-OtBu, растворенные в ЗОО мл метанола, гидрируют над палладиевой чернью в течение 2 ч. Катализатсф отфильтровывают, а метанол упаривают в вакууме. Остаток раствор ют в 5О мл тетрагидрофурана. Отдельно от этого суспендируют 28.1 г Z-LvsCBUCV ОН дициклогексиламмонкйной соли в ЗОО мл этнладетата промывают суспензию в делительной воронке 20О мл 0,5 н. серной кислоты (трем порци ми), затем отмьтают водой, и органический раствор сушат над безводным сульфатом натри . Этилаиетат частично упаривают (приблизительно до объ ема 150 мл). Оставшийс раствор прибавл ют к раствору аминокомпонента в тетра- гидрофуране и смесь охлаждают на лед ной бане. К охлажденной смеси прибавл ют при перемешивании и охлаждении льдом 11,3 г ДЦГКДИ и продолжают перемешивание в те че ие 16 ч. Образовавшийс осадок ДЦГМ отфильтровывают, а фильтрат упаривают в вакууме досуха. Остаток раствор ют в 50 м этилацетата, раствор промывают 0,5 н. сер ной кислотой и 4%-кым водным раствором бикарбоната натри . Отмытый этилацетатный слой сушат над безводным сульфатом натри , затем упаривают досуха при пониженном давлении и к остатку добавл ют петролейный эфир. Образовавшиес кристаллы отлол ют фильт юванием, 11ерек)1исталлизо28 вывают из смеси этилапетат/петролейный эфир. Выход продукта 21,9 г (87% от теоретического ), Т.ПЛ. 55-57°C; ot3 -30,170, Найдено,%: С 61,61; Н 8,1О; N 8,18 . Вычислено,%: С 61,52; Н 8,14; N 8,28 Б. Синтез 2-Pfo-bft(BOt)-AEoi-OtBu В 4О мл метанола раствор ют 2,5 г 2-Ly«,.CBOC)-AE0-OtBu и. использу палладиевую чернь в качестве катализатора, провод т в течение 2 ч каталитическое восстановление . Катализатор отфильтровывают а фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 2О мл этилацетата. К этому рмствору прибавл ют 2,45 г ONb и смесь переме-; шивакэт при комнатной температуре в течение 18 ч. Полученный раствор разбавл ют 20р мл этилацетата и промывают вначале 0.5 н. серной кислотой, затем 4%-Hbnv водным раствором бикарбоната натри . После трехкратной промывки водой органический раствор сушат над безводным сульфатом натри и упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток обрабатьтают петролейным эфиром, осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси этилацетат/петролейный эфир. Выход продукта 2,53 г (85% от теоретического)j Т.ПЛ. 127-129°С;Ы т, -64,52«1с 1,04. метанол). Найдено,%: С 61.81; Н 8,31, N 9,37 В.в°«% Вычислено,%: С 61,57;1Н 8,ООг N 9,27 С. Синтез 2-ThP-LvsCBOC)-Aea-OtBu. 2,12 г 2 Pro-UbCBQC Aea-OtBu в 40 мл метанола гидрируют в течение 34 над палладневой чернью. Катализатор отфильтровьтают, а растворитель отгон ют при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 2О мл диоксана. Параллельно 977мг Z-Tlnr-OHи 806 мг НО N В раствор ют в 1О мл смеси этилацетат/диоксан (1:1) и при охлаждении на лед ной бане прибавл ют 800 г ДЦГКДИ. Реакционную смесь перемешивают в течение 6 ч, образовавшуюс ДЦГМ отфильтровьюают и фильтрат прибавл ют к приготовленному по описанной методике диоксановому раствору .аминокомпонента. Реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч растворитель отгон ют при пониженном давлении и остаток раствор ют в 150мл этилацетата. Раствор промывают 0,5 н. серной кислотой, 4%-ным водным раствором бикарбоната натри и, наконец, водой, органический слой сушат над безводным сульфатом натри , растворитель отгон ют при пониженном давлении. Остаток обрабатьтают петролейныгуГ эфиром, выпавший осадок отфипьтровьгеают. Выход продукта 2,3 г (93% от теоретического), т.пл. 64-б7 С; , -75,58 (с 0,995%; метанол). Найдено,%: С 59,25;Н 7,99; К 9,65 «..ю. Вычислено,%: С 59,55; Н 7,85, N 9,92 Д. Синтез Z- ph« - Phe - Туг - Thr - -Pro-Lvs (BOG) -Afa -CtBtt. 1,41 г Z-Thr-Pro-L(bCbOC)-AEcii- (HBu, растворенные в 7O мл метанола, гидрируют над палладиевой чернью в течение 2 ч. Катализатор отфильтровывают, растворитель упаривают при поннженном да лении. Остаток раствор ют в 1О мл ДМФ и к раствору прибавл ют 1,1 г 2 PVie-Ph -ТУГ-ОН и 72О MrHONB. Затем при охлаждении на лед ной бане к раствору пр бавл ют 618 мг ДЦГКДИ и реакционную смесь перемешивают в течение 20 ч. После этого растворитель отгон ют при пониженном давлении, остаток обрабатывают смесью этил/ацетат/эфир (1:1). Образовавшеес при этом порошкообразное водест во отфильтровьгоают и перекристаллизовывают из этанола. Выход продукта 2,1 г (10О% от теоретического), т.пл. 16О 163 , -63,73° (с 1.О5%, ме танол). Найдено,%: С 62,О2; Н 7,14 Ы 9,64 «VOibNe Вычислено,%: С 62.09 Н 7,23; N 9,34 ЕГ Синтез Z - Дг§ CHOg) - Gty - Phe -РЬе - Туг -Thr- ft-o - LVS (BOO)- Ata-OtBu 2,32 г Z-Phe-Phe-T5 r-Thr-T ro-lv$ CBOO-ACa-Otbu, растворенные в Л 30 мл метанола, гидрируют над палладневой черные в течение 3 ч. Катализатор отфильтровывают и упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 5 мл ДМФ и к полученному раствору прибавл ют 1,26 г (НОг V C E-s-ON. Реакционную смесь перемешивают при ком- натной температуре в течение 2О ч, псхзле чего ДМФ отгон ют при пониженном давлении и остаток обрабатывают 5О мл воды . Выпавший осадок отфильтровьтают, дважды переосаждают из смеси ДМФ/вода. Выход продукта 2,5 г 188% от теоретического ); т.пл. 138-141- С (разложение), ,4 (с 0,99%; ДМФ). Найдено,%: С 58,82,Н 6,8О, N13,66 Вычислено,%: С 59,14; Н 6,81; N 13,8О Ж. Получение -Ala - Arg -QLy-РЬеРле-Typ-Thf -Pfo-Lys-А.(а-ОН. В 30 мл смеси метанола и лед ной уксусной кислоты (2:1) раствор ют 71О мг Г- Ahg-CNOjV G,Es-Ptie- he-Tvr-Thh-Pro- U-ss свое VAEbi-OtBu и в присутствии палладиевой черни восстанавливают в течение 8 ч. Катализатор отфильтровьюают, фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 10 мл воды и раствор irpo- пускают через хроматографическую колонку (объем 13О мл), заполненную карбоксиметилцеллюлозой . Элюцию осуществл ют градиентным методом с использованием О,О05 М водного раствора апетата aNJMO- ни (800 мл) и 0,2 М водного раствора ацетата аммони (8ОО мп). Фракпни от 913 и до 119О мл объедин ют и лиоф лнзуют . Получают 35О мг белого пушистого продукта, который раствор ют в 8 мл ДМФ, к раствору прибавл ют 41 г моногидрата П- -толуолсульфокислоты, затем туда же 82 мг БОС- (5 - АВс -ONB, и реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч. ДМФ отгон ют при пониженном давлении и к остатку прибавл ют 3 мл трифторуксусной кислоты. Смесь перемешивают в течение ЗО мин, трифторуксусную кислоту отгон ют в вакууме. Остаток раствсхр ют в Ю мл воды, полученный раствор пропускают через колонку (1,Ох хЮсм) с Амберлитом JHA-41О (в ацетатной форме). При прохождении через колонку с этим анионнтом вещество превращаетс в ацетат. Элюат лиофилизуют и ввод т в колонку (2,2 х 17 см), заполненную карбоксиметилцеллюлозой. Элйшпо осуществл ют градиентным методом с использованием О,ОО5 М водного раствора ацетата аммони (5ОО мл) и 0,2 М водного раствора ацетата аммони (5О мл). Фракции от 430 до 5ОО мл объедин ют и лнофнлизуют . В результате получают 250 мг белого пушистого видества с р1 ,8 (с 0,5%, воде). Аминокислотный анализ: Ь-ь/б 1,00; Afg 1,04; Thr 1,00; -рго 1,04; GC 1,О4; АЕа 1.04; 0,89; Phe 2,00; Й-АЕо 0,93 (содержание пептида 72%). П р и М е р 23. Получение Qe- -Arg- Ge i-Piie- 7e-T)r-Thr-pro-LNe.- Aed-OHВ1х;произведена методика приме ш 22, но вместо ВОС- |b-AEa-ONB используют ВОС- tjtv - ONB и получают 214 г упом нутого соединени в виде белого пушистого продукта; W -5.9,2 (с О,4%; вода). Аминокислотный анализ: Iys 1,02; Afg 1,00; Thr 1,00, i.oi; &ev 2,00; Ata 1,03; T;Jf O,87; fhe 2,04 (содержание пептида 78%). пример 24. Получение Lea - АР -Qty -Phe Phe -Tjp- aiy -NHg. A. Приготовление 2 - len - Arg (ToSJ - Pb« - Pht - Tyr (ВлО - fy - смсмы. В реахтор твердофазного пептидного с н тзА ( efwor ttlAPS ОО) псмещают 4,О4 г ВОС- 6tv -смолы (содержащей 1,75 ммоль QCy ) оставл ют набухать ее & хлористом метилене в тече в 20 ч. Затем по методу Меррвфидоа ввод т вос Tjir-lBtex. ОН, вех:-. Phe-он, ВОС- The -ои, вое- &ev -он, Але -Al-irCroDUDH Z - Leu JOH в ужеза ом nopswKe. В качестве хощ1евсирук шегр агента примен ют ДЦГКДИ, Каждую амн оккслоту берут в четырв фат ом; избытке , ВОС-гру1шы удал ют с помощью тр фгоруксусной кислоты в двхлсфметане (1:1). Смолу навлекают из реактора, промывают дюЕЛОрметаном ДМф, метанолом и уксусвой вжслотой, сушат. Получают 5,07г смолы, Б. Првготовленве Z-ten - Arg (toS) 3fy-Phe-Phe-туг (ftzO-aiy - KHjj. В 50 мл 17%-ного раствс аммнака в метаноов помещают 4,41 г смолы, получевной по примеру А, сусЛевзЕПО :пфемешнваю в закрытом сосудСпри.аоктайтной температ е в течение. 48 ч,. Смолу отфильтро вывают н хорошо промывают ДМФ. Фильтрат в промывные воды объедин ют н упарнвают при пониженном давлен. К масл нистому остатку, добавл ют этиловый эфир вьшавший осадок отфильтровывают и промывают эфиром. Выход 950 мг. В. Приготовление Leu- A gfQ v-Phe-Phe-Tyr -UE:s- NN2Б lO мл безводного фтористого водорода растворшот 5ОО мг сырого защищенного пептид-амида, полученного по примеру Б, в 0,5 мл аниаола, раствор охлаждают до ОЧи и перемешивают в течение 60 мин Фтористый водород отгон ют, остаток раствор ют в 50 мл воды. Раствор дважды экстрагируют 20 мл этилового эфира, водный слой пропускают через колонку(2x10 с Амберлитом JRA -41О (в ацетатной форме) и лиофилнзуют. Продукт помещают в колонку (2,3 X 17 см), заполненную кар оксиметилцеллюлозой, н вымывают путем градиентного элюировани 0,005 М водным ацетатом аммони (40О мл), затем 0,2 М водным ацетатом аммони (400 мл Фракции 49О до 550 мл объедин ют и лиофнлизируют. Получают 167 мг указанного сЪедннёни в виде белого пушистого продукта. Аминокислотный анализ: , 57 5 2,00; Leu 1,03; 0,89; Phe 2,06 (содержание пептида 84%). jB Afo- П p и м e p 25. Получение -Arg-aty-Phe-Pbe-Tyr-Ala-Gfy-KH A.Приготовление Z- -Ala -Arg(ToS) Qfy-Pbe-Phe-Tyr(Bzt)-Afa-Gty -смолы. В реактор синтеза (Simadto APS-SOO) помещают 3,03 г ВОС- 6 -смолы (содержание 8V( 1,32 мм), и оставл ют набухать в хлористом метилене. Затем с помсицыо симметричного ангидридного процесса ввод т ВОС- Ас01 ОН, BOC-T-iJp ЬтЮ-он, ВОС- РЬе -ОН, ВОС- Ph -он. ВОС- (Jfy -он, Аос .-Ai g-{ToS)-OH и во -ОН в указанном пор дке На каждой стадии ВОС-вопиту удал ют с помошью 5О%-вой смеси трйфтс уксусна кислота/д хлормётан. Кроме того, на каждой стадии негрореагировавшие аминогруппы адетишфуют ангидридом уксусной кислоты. После введени в реакцию всех аминокислот смолу промьгоают этанолом, ДМФ, дихлорметаном, уксусной Кислотой и метанолом, сушат при пониженном давлении. Получают 3,7О г пептидной смолы. Б. Приготовление Z-/ -ЛЬ-Arg (ТЪЗ) Gfy-Phe -Ph€-TVpCBzO-Ato- Gfy -NH. В 3,28 г пептидной смолы, полученной по методу А, суспендируют в 5О мл 17%ного аммиака в метаноле, в плотно закрытой скл нке, суспензию перемешивают при комнатной температуре в течаше 4О ч. Смолу отфильтровывгиот и промывают 5О мл ДМФ. Фильтрат и промывные воды объедин ют и упаривают досуха при пониженном давлении. К остатку добавл ют эфир, выпавший осадок отфильтровывают, сушат, получают 433 мг сырого защищенного пептид-амида . B.Приготовление |i-ACc3i7 Argr-Ge -Phe-Phe-T r-Atq-G-ev-NHj . Б смеси из 8 мл безводного фтористого водорода и 0,3 мл анизола .раствор ют; 310 мг сырого защищенного пептнд-агкгида, полученного по методу Б, раствор перемешивают при 0°С в течение 60 мин.. Фтористый водород отгон ют при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 50 мл воды. Раствор дважды экстрагируют 10МП эфира. Водный слой отдел ют и нанос т на КОЛОНК.У (1 X 10 см) с Амберлитом JRA-410 (в ацетатной форме), которую затем промывают водой. Вытекающий поток и промывные воды объедин ют и лиофилизи уют, сухой продукт раствор ют в 1О мл воды и нанос т ва колонку (2,3 X 17 см) с карбоксиметилиел юлозой . Градиентное элюирование выполн ют 0,005 и 0,2 М водными растворами а етата aMMoujfsr MOO мл каждый) ,ФракНИН от 495 до 54О мл объедин ют и лиофипизируют . Получают 134 мг у1сазаннаго продукта; {ck.} -19,62 (с 0,53%, вода). Аминокислотн й анапиз: Alfg 1,О5; 5 1,95; АЕа i,oo; о,86, РЬе 1,98-, |Ъ - АСс 1,02 (пептидное содержание 84%). Найдено,%:С 52,4О; Н 6,55; N 15,65 Вычислено, %:С 52,31; Н 6,91, Н 15,5 Пример 26„ Получе {ие ct v -Dafe - - АР§ -( -РЬе -Phe -Ala -GFv - NHg. Воспроизведена методика 25 за исключением того, что вместо 2 | Atoi-OH введена ди- I - d.., г Attu-ОН -аминокислота . Получено указанное соединение в виде белого пушистого продукта; oL . -2О,3% (с 0,2%; вода). Аминокислотный анализ: ,00, GEv 1,89; ABoi 1,02; Jyf- 0,88, Phe 2,ОО; :i,y-Abu 1,04 (содержание пептида 81,5%) Пример27. Получение G|Es-Alg -de -Phe-Phe-NH , А. Приготовление Z - (aty-Ai-g-CNO -Cigv - he-Phe- NH. К о,во г Г-Аъ -СМО - -СчЕ-а-РЬе-РЬеНН 2 добавл ют 8 мл 25%-ной Htib-уксусной кислоты, смесь хорошо взбалты- вают при комнатной температуре в течешге 45 мин. В реакционную смесь добавл ют 1ОО мл эфира, полученный порошок отфильт ровывают высушивают в течение 2-х дней над гранулами гидроокиси натри в эксикаторе при пониженном давлении. Высушенный продукт раствор ют в Ю мл ДМФ, раствор нейтрализуют триэтиламином. В раствор добавл ют 0,43 г Z- СзС)- ONB, смесь перемешивают в течение 1О ч, затем добавл ют 7 мл воды и отдел ют масло. После удалени супернатанта декантацией добавл ют 50 мл воды. Выпавидий осадок отфильтровывают , высушивают и чист т переосаждением из смеси /3 Ф/этилацетат. Выход продукта 0,66 г (77% от теоретического); т.пл. 119-122°С; о1 -24,6°. (с 1,О1%;ДМ Найдено,%: С 55,95; К 5,90; N 17,73 Вычислено,%: С 55,51; Н 5,95; N 17,99 Б. Приготовление - A g -GfK -Phe-Phe-NW ,. 5OO мг Z-Ge -Ar gCN02)-йe -Phe--Phe-НН 2 Раствор ют в 30 мл ук- сусной кислоты и восстанавливают над палладиевой чернью в течение 7 ч. Катализатор отфильтровывают, уксусную кислоту отгон ют при пoню«eннJ . Остаток раствор ют в 1О мл вэды и раствор пропус 5 5 кают через колонку (1,8x10 см) с карбоксигметилцеллюлозой . Элюирование выполн ют методом лкнейкого градиента, использу 0,1 М водный раствор ацетата аммони (7ОО мл) и 1 М : Водный раствор ацетата акгмони (7ОО мл). Фракции от 41О до 515 мл объедин ют и ЛИОФИЛИ31ФУЮТ. Получают ЗО7мг (65%) белого пушистого продукта. oL,, 17,7° (с 0,48%, вода). Аминокислотный анализ (гидролиз сНСВУ Pg-lД5; GZ-4 2,00;Phe 2,00 (содержание пептида 84,0%). Найдено,%:С 52,05; 11 6,85; N 17,22 С,Нз,,.2С,,-2Н,0 Вычислено,%: С 52,О9;Н 6,97. N 17,О9 Пример 28. Пэлучонпе 15-АЕа-Arg-G ,6-j-Phe -Phe-NH.,. А. Приготовление Z-D-ACoi-Аг (NDjlQe -Phe -Phe-HHj. В 8 мл 25%-ной HBv -уксусной кислоты раствор ют 0,8О г ( МО -СтР РЬе-РЬе-NH , , раствор поромоипшпют при комнатной температуре в течокте ГО мин. Продукт осаждают, добавиг к г , HlOMn этилового эф1фа, осадок отфильтрэвьгвают, промьщают эфиром и . Сухой продукт раствор ют в 10 мл ДМФ, раствор нейтрализуют триэтнламинэм, после чегэ бавл ют 0,51 г Z-D-Aec(- ONB- Смос.ь перемешивают в течение 8 ч. отгон ют при пониженном дав/юнн1, к гютатку добавл ют 50 мл воды. Выпавший осадок отфильтровывают, После высушивани , порэшэк промт.шают гор чим этилацетатом н переэсажлают из смеси ДМФ/этилацетат. Выход продукта 0,799 г (92% от теоретического); т.пл. 223-225 0; oL -22,3° (с 0,98%, ДМФ). N 17,98 Найдено,%: С 56,38, Н 6,07, Вычислено%: С 56,69; Н 6,04; N 17,87 В. Приготовление D-Ata - A gr-ue -ptie-Phe-HH5 . 6OO мгс Z-D-Aea-ArgrtNOjVC,ei-Phe-Phe-HH , раствор ют в 30 мл уксусной кислоты и восстанавливают в присутствии палладиевой черни в течение 7 ч. Ката1шзатор отфильтровывают, растворитель отгон ют при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 1О мл воды и раствор пропускают через колонку (1,8x11 см) с арбоксиметилсефадексом. Линейно-градиентное элюирование выполн ют 0,1 М водным раствором ацетата аммони (700 мл) и 1 М водным раствором ацетата аммони (700 мл). Указанное соединение выходит во фракци х от 35()
35 до 450 мл. Эти фракции объедин ют и лиофилиэйруют . Выход 400 мг (73%) белого пушистого продукта; -22,2 1с 0,51%: вода). Аминокислотный анализ: Агр1,01 QBv 1,ОЗ; АЕо 1,ОО; Phe 1,99 (содержание пептида 82,3%). Наййево.%: С 52,66; Н 6,92; |4 16,82 аЛ10 -2 г«Л-2НаО Вычислено,%: С 52,72;Н7,11; N16,77 П р м е р 29, Получение Phe- A g--S ,es -Phe-Phe-NH,j. А. Приготовление Z-Phe-At gг(NO,-Qey . Phe-PVie-NHaВ 1О мл 25%-ной HBf -уксусной кислоты раствор ют 8ОО мг Z AVg()- (qES-Phe-Phe-HHjpacTBOp перемешивают в течение 50 мин, К раствору добавл ют 80 мл эфира, выпавший осадок отфильтровьшают , сушат и раствор ют в 10 мл ДМФ Раствор нейтрализуют триэтиламином, затем добавл ют 7ОО мг1 2 - Phe -ОРСР (дентахлорфениповый эфнр). Смесь перемеш вают в течение 10 ч, добавл ют 50 мл 1 М водного аммиака. Масл нистый слой отдел ют декантацией и туда добавл ют воду . Полученный порошок отфильтровывают i сушат. Смешивают продукт с 5О мл этил- адетата, смесь подогревают, порошок отдел ют фильтрованием в.гор чем состо нии и чист т переосаждением из смеси ДМФ/этил адетат. Выход продукта {8О5 мг (92% от теоретического); -29,0 tc 1,0%, ДМФ). : Найдено,%:С 6О,32; Н 6,О2: N 16,1О C4.o09V42H,0 Вычислено,%: С 60,Об; Н 5,98, N 16,2 В, Приготовлешш Phe-A№-Gey Phe- he-NH2 , в 6 мл безводного фтористого водорода раствор ют 500 мг Z Phe-ArgCNO )-GC -Phfi-Phe-NHgH раствор перемешивают при «Ю и течение 40 мин. Фтористый водород отгон ют, а остаток раствор ют в 1О мл воды. Раствор пропускают через ко лонку (0,9 X 15 см) с AM6epnHTOMjRA-41 ( в ацетатной форме), который предваритель но промыт водой. Вытекающий поток (эф люент) объедин ют с промывными водами смешанный раствор лиофнлизнруют. Получают Ю2 мг указанного соединени . Аминокислотный анализ: Afgf 1,01; G6 0,98; PVie 2,94, (содержание пептида 86,2%). Пример 30, Получение Leu- Argp -b-ev-Phe-Phe-lyr-NHj .
36 A,Приготовление Z-Arg-(NO )Сче: - Ье-РНё-Туг-NH . В 1ОО мл ДМФ раствор ют 12,2 г Z-Phe-Phe-Tsf- NM,.гидрируют присутствии палладиевой черни в течение 5 ч, Кататгазатор отфильтровывают и добавл ют 8,6 г -Ahp-(.NO2)-(3E)-OH Н 1,3г HONB. Реакционную массу охлаждают льдом и добавл ют 4,95 г ДЦГКДИ. Смесь перемешивают в течение 12 ч. Образовавшуюс ДЦГМ отфильтровывают, в фильтрат добавл ют 1 л воды. Полученный гелеобразный осадок отфильтровывают и переосаждают из метанола и воды. Выход продукта 16,25 г (91,8% от теоретического ); т,пл, 181-1840C;tdl L -16,00 (с l,0t%; ДМФ). Найдено,%: С 58,02;Н 5,98,- N 15,66 С4Ло°1с 1с-«2 Вычислено,%: С 58,35; Н 5,92; N 15,83 Б. Приготовление Ahcr-gCj-phe-Phe-TVh-NH ,. 600 мг Z-AY-g-CNOp-sey-Phe-Phe Tvr- NHj pacTBOpJODT в 30 мл уксусной кислоты, гидрируют Б присутствии палладиевой черни в течение 9 ч. Катализатор отфильтровьгоают, растворитель схггон ют при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 15 мл воды и чист т, пропуска че (эез колонку (1,3 х 11 см) с карбоксиметилсефадоксом . Линейно-градиентное алюированне вьшолн ют 6,1 М вoдньпvt раствором адетата аммони (50О мл) и 1 М водным раствором ацетата аммони (5ОО мл). Фракции от 25О до 42О мл объедин ют и лиофилизирутат . Выход продукта 416 мг ( 72,5% от теоретического); -7,6° (с 0,4%, вода). Найдено,%: С 55,81; Н 6,83; N 14,78 Вычислен1),%: С 55,37; Н 7,03) N 14,90 Аминокислотный анализ: ,02; G-E:# 1,00; ТУИ O,9i; Phe 2,02 (содержание пептида 82,5%), B.Приготовление 2-Leu - Аг N О)-CiE-x-Phe-Phe -r-if- NH К 700 мг. I-Arg-(NO.jVG,ev-Phe-Phe-Tyi NH 2 добавл ют 0,2 мл анизола, 7 мл 25%-ной НВ -уксусной кислоты. Смесь встр хивают при комнатной температуре в течение 4О мин, затем добавл ют 10О мл этилового эфира. Выпавший осадок отфильтровывают, сушат и раствор ют в 1О мл ДМФ. Раствор нейтрализуют триэтнламином и добавл ют к нему 344 мг .2 - -Leu - OSu. ( N -оксисукцинимидный эфир). Смесь перемешивают в течение 12 ч, ДМФ
37
отгон ют при пониженном давлении, к остатку добавл ют 50 мл воды. Выпавший осадок отфильтровывают, чист т переосаж- дением иэ метанола и воды. Вьгход продукта 56О мг (70,9% от теоретического); Т.ПП. 193-1950С, ,90 (с 1,13%, ДМФ).
Найдено,%: С 58,72; Н 6,22, N 15,36
с49Мм0.п ,;н,о
Вычислено : С 58,96; Н 6,36; N 15,44
Г. Приготовление LfiU - A gr-Q-fiv - Phe-Phe-Tyr-NH ,,.
В 30 мл уксусной кислоты pacTBOpssTOT 4ОО мг Z-Leu-Ar-g-CNO VGEv-Phe-PheTiJi НЯ ,восстанавливают в присутствии палладиевой черни в течение 1О ч. Катализатор отфильтровывают, растворитель отгон ют при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 5 мл воды и чист т, пропуска раствор через колонку (2,6 х 22 см) с карбоксиметнлцеллвзлоаой ,
Градиентное элюирование вьшолн ют 0,005 М водным раствором ацетата аммони (ТОО мл) и 0,2 М водным раствором ацетата аммони (70О мл). Фракции от 83О до 91О мл объедин ют и лиофилизируют . Выход продукта 217 мг ( 55,5% от теоретического); -14,9° (с 0,47%, вода).
Найдено,%:С 55,.71,Н 7,12, Н 14.81
. Вычислено,%: С 55,43; Н 7.24; N 14,37 Аминокислотный анализ: Afg 1,03;йЕу
1,оо; Leu 1,00; Phe 2,00; о,85
(содержание пептида 78,О%),
ПримерЗ. Получение cL AbuA EГ -(JE-a- Не PhS T r-NHjВоспроизведена методика примера ЗО, за исключением того, что вместо 2 Leu используют и получают указанное соединение, о- т) -13,6° (с 0,32%; вода).
Аминокислотный анализ: Argl,O2; QP
о,9«; oC-Abui,O4; Phe 2,00; Туг о,92
(содержание пептида 81%).
П р и М е р 32. Получение Nle-Afg--Qev -Phe-Phe-Tyr-NH ,.
Повторена методика примера 30 за исключением того, что вместо Z используют Z NE6 и получают указанное соединение; Г° -14,3° (с О,4%;вода)
Аминокислотный анализ: Argrl.OO; Q6j/ 0,97; 1,04; Phe 2,ОЗГ ТугП,91 (содержание пептида 849о).
Пример 33. Получение Vag-Afg--G ,6v-Phe-T Vie-Tvr-NH,.
В KD мл ДМФ раствор ют 4ОО мг Ar -&6 - rie-Phe-Tyr- HHj, диацетата. полученного по примеру 30 Б, добавл ют
38
ЗОО мг Z-V6)C.-ONB . Раствор иейтра шзуют триэтиламином а перемешивают в течение 10 ч, затем к неглу добавл ют 50 мл эфира и выпавший осадок отдел ют фильтрованием, промывают зтг-илацетатом и сушат. Этот- продукт раствор ют в 30 мл смеси уксусна кислота/вода (1:1) и восстанав ивают в присутствий палладневой черни в течение 4 ч. Катализатор отфильт- роБывают и фйпьтрат концентрпру1К т досуха. Остаток раствор ют в 10 мл воды и чист т с помощью хроматогоаЛши так же, как, в примере 30 В. Выход продукта 360 мгг ,7° (с 0,5%; вода). Аминокислотный анализ; ,02, GrCv 1,00; 0,97; Phe 2,04;. 0.97 (пептидное содержание 86,2%) ,
Пример 34, Получеш1е - Q -Qe -Phe-TPhe-NHj .А . Получение Z-A g-CNOj -Q-tv-OEt. . 70,7 г Z-Arg- NO,)-QH раствор ют в 2ОО мл тетрагидрофурана и, охлажда на бане со льдом, добавл ют 4О,5г 2,4-динитрофенола и 45,4 г ДСС. Смесь
перемешивают 4 ч. Параллельно с STIIM
30.7г 0(6: -OEtHCEсуспендируют в 2ОО мл тетрагидрофурана и, охлажда на бане со льдом, суслеыэню нейтрапизуют
30.8мл триэтиламина. Образовавшуюс ДЦГМ отфильтровывают, к фз льтрату д бавл ют раствор активированного , полученного по описанной методике, смесь перемешивают в течение ночи. Раствор концентрируют и остаток раствор ют в 500 мл
этилацетата. Раствор промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натри (2ОО млхЗ), 1 Н, сол ной кислотой (200 мл X 3) и насыщенныл{ водным раствором хлористого натри (2ОО мл х 3),
(хосле чего сушат над сульфатом натри . Раствор концентрируют н кристаллизуют из системы этилапетат/петролей- ный эфир. Кристаллы отфильтровывают, перекристаллизовьшают из системы этнлацетат/петролейный эфир. Выход продукта 7О,О г (79,8% от теоретического); т.пл. ЮЭ-ИО С; -3,4° (с 1%; ДМФ). Найдено,%: С 49,26; Н 5,79; N 18,55
С,аНгеО,М,.
Вычислено,%: С 49,31; Н 5,98f N 19,17 Б. Получение 2-Arg- NQp-GEy-OH20 ,0 г Z-ArgrCNOp.-qev-OEt суспендируют в 1ОО мл ацетона н, охлажда на бане со льдом, добавл ют 64 мл 1 н. водного раствора гидроокиси натри . Смесь перемешивают 2 ч. при комнатной температуре .
После нейтрализации избытка щелочи сол ной кислотой раствор упаривают 1фи riOHU- жвтюг шшет-нгй н ж остатку доёавл гот 100 м воды, Нерастворетошпйс осадсж отфн ыровьшают Фнльграт подкислйют сола ой кт;пото1 и выпадающие кристаллы от деетзот г|: .Нэтроза1шем, Выход продукта 18, {93,7% от теоретического), т,п , 105°С; dli ,9С (с 0,9%; ДМФ). НайдекоДг С 44,48; Н 5,35, N 19,53 Л. ВычксленоД: С 44,86J Н 5,65; N 19,6 С. Получеете (NOд)-Ges- h€-Phe-NH ,, 3,91 г Х-РЬе-РНе-NH растворшот а 60, мл ДМФ и 40 мл метаиола н восстанавливают э присутствии палларлевой черш в течение 14ч. .Каташгзатор отфильтровывают, а растворитель упа ривают при пониженном.давлений. Остаток растворшот в ЗО мл ДМФ, Параллельно с зт-им 6,80 г Z-Arg-CNOp-Ggu-OH ввод т в SO мл тетрагндрофурана и, охлагкда смесь на бане со льдом, добавл ют 3,23 HONB и 3,71 г ДЦГКДИ. Полученную сме перемешившот в течение 5 ч. Обраэовавшутйзсй ДЦГМ отфшгьтровьтагот и к фильтрату добавл ют получешгый аминокомпонент (H-Phe-Phe-NHj ). Смесь оставл1гют на пйчь при посто нном перемешиваши. После упариваин раствс-р телз при пошзжегшом давлении к остатку добавл ют iOO мл воды, н образующеес при этом твердое r OpoitiKoo6pa3JiDS вещества отдел ют фильтроваккеМо Порошок, собранный на фильтре, высушивают , промывают зтндацетатом и пере- кристалгчгюовьюают из смеси этанол/этил/ /апегат. Выход продукта 8,34 г (72,7% от теоретического), т,пл. 112-113 С; Ы1|.21,60 (с 1%-, ДМФ). Найдеао,%; С 56,75,Н 5,72: N 1Т,4О -5AiW«20 Вы«аслеио,%;.:С 56,58: Н 6,01, N 17,4 Д. Получение - 2 - /Ъ - - . 3,35 г Z p A-eq-OH а 3,23 г HONB {заствор гот В 4О 1Л тетрагадро фурана н иоеде охдаждениа смеси на бане со льдом добавн ют 3,71 г ДЦГКДИ. Смес остав 1« г аа ночь кфп постокшсем аереме шнэаннн н образовавшуюс ДЦГМ отфипь TpOBbmajOT, Растворите1гь упаривают прн пошскенном давлении и к остатку добав Л51ЮТ пиробензол. Образовавшиес кристаллы , отфипьтровьшают и перекристал/шзовывают на апетошггрила. Выход продукта 3,83 г (66,4% от теоретического); тлл. 125-1260с, Найдеыо,%: С 62,52; Н 5,18t N 7,29 6 Вьппгслено,%: С 62,49: Н 5,24; N 7,29 Е. Получение Z-f% АЕа - Afgi (NOjV Qe Phe-Phe-NHj. К 1,06 г Z-Afpr(NO,l-Gev-PReРhe-NH добавл ют 1О мл раст ора HBt в уксусной кислоте, смесь встр ивают при комнатной темп эатуре в течеие 4О мин, после чего добавл5пот диэтновый эфир, Вьшадавигай осадок отдел ют эшьтрованием, высушивают при пониженном авлении в эксикаторе над гидроокисью иа ри и раствор ют в 10 мл ДМФ. После хлаждени раствор нейтрализуют 0,84 мл рнэтиламина н добавл ют 0,69 г t- Afa-ONB . Смесь оставл ют на ночь ри посто нном перемешивании, затем растсфитель упарнвают при пониженном давлении и к остатку добавл ют 5О мл воды. Осадок отфильтровывают, сушат, промывают этнлацетатом и переосаждают из смеси вода/диэксан/этилацетат . Выход продукта 0,98 г (83,3% от теоретического)t т.ш1. 161-163°С; Ы -20,90 (с 0,9%Г ДМФ). Найдено,%: С 56,84; Н 5,88; Ы 17,5О 1/2Н20 Вычислено,%: С 56,69; Н 6,О4; N 17,89 Ж, Получение - Argr-GC:y - Phe-Phe-NH . 8OO мг I-p.-AEa-Ar CNO VGCS-Phe-Phe-NH раствор ют в уксусной кислоты и восстанавливают над палладием в течение 14 ч, после чего катализатор отфильтровывают, а растворитель упаривают при пэниженном давлении. Остаток внос т в колонку (2,5 х 9 см), заполненную карбоксимотилсефадоксимом, и хро- матографируют, использу линейно-градиент- ную элюцию вэдньгчи растворами ацетата аммони : О,О1 и 1,0 н. (по 700 мл каждого раствора). Фракции от 780 до 990 мл объедин ют а лиэ(|шлйз рук т. Выход продукта 5ОО мг ( 66% эт теоретического): ot -13,9° (с 0.5%: вода). Найдеио,%: С 53,75; Н 7,07, N 17,15 2С,, ,,«4 0 Вычисленэ ,%: С 54,ОО Н 7,01, N 17,18, Аминокислотный анализ: Atg 1,ОО (1), &ev 1,00 (1); Phe2,O (2) (величины в скобках соответствуют теоретическим значени м ). Содержание пептида 76%. Пример 35. Получение у - Abu-Ar -Q -Phe - Phe-NHj. А. Получение Z - J - АЪи-ONU4 ,75 г Z-Jf-Atu-OH и 3,94 г HONB раствор ют в 4О мл тетрагидрофурана и пэсле охлаждени на бане со льдом добавл ют 4,54 г ДСС. Смесь перемешивают в течение 6 ч, образовавшуюс ДЦГМ отфипьтровьдаают . После этого растворитель упаривают при пониженном давлении, а к остатку добавл ют 30 мл диэтилового эфира и затем небольшое количество воды. Выпадавшие кристаллы отдел ют фильтрованием. Вы ход продукта 6,0 г (75,3% от теоретичес кого); т.пл. 66-69°С. Найдена,%: С 63,39, Н 5,42, N 7,О6 Вычислено,%: С 63,31 Н 5,57; «7,03 Б. Получение 1 - I -АЪи-Arg-( - Phe-Phe-NHj,0 ,53 г Z-At gtNOij-Gie-j-Phe-Phe-NHj обрабатьшаиуг раствором в уксусной кислоте аналогично гфимеру 34Е и раствор ют в 15 мл ДМФ. После нейтрапизацЕИ раствора триэтиламином добавл ют 0,44 г г-З -АЪи-ОМВ. Смесь оставл ют на ночь при посто нном перемешивании . Растворитель упаривают при пониженном давлении и добавл ют воду. Образук цеес твердое порошкообразное веществ отфильтровывают и высушивают. Затем про мывакуг этилацетатом и переосаждают иа смеси этанол/вода. Выход продукта 0,38г (65% от теоретического); т.пл. 167 17О°С с1 -21,2° (с 1,0%; ДМФ). Найдено,%:С 57,14; Н бДО; N17.56 Зв 48°П1о- 2Н.,0 Вычнслено,%: С 57,2О; Н 6,191 N17,56 С. Получение J-Abu Arg--G|E-s--Phe-Phe-NHj . ЗОО мг Z- -Abu-Ap ifiO ) ( -Phe-NHj раствор ют в ЗО мл уксусной кислоты и в течение 6 ч гидрируют над над палладеим. Катализатор отфильтровывают, растворитель упаривают при пониженном давлении и остаток хромат01 афируют на карбоксимв гилсефадексе на колонке (1,8 х 10 см). Хро матографию провод т, использу линейноградиентную элюцию водными растворами ацетата аммони : О,О05 и 1,О н. (по 35О мл каждого раствора). Фракшш от 25О до 34О мл объедин51ют и лио(лиа руют . Выход продукта 18О мг (63% от теоретического ) t el3 -15,0° (с 0,5%; вода). Найдено,%: С 53,93; Н 7,29Г N 16,34 ..-iyZH O Вычислено,%: С 53,95 Н 7,19, N 16,66 Аминокислотный анализ: Afffl,OO(l)l Gty 1,00(1); Phe 1,94 (2); содеркание пептида 76%. П р и м е р 36. Получение (f- AvaP-Afgr- -Phe- he-MHj. A, Получение - AVQ Е-Afg-( (0,)-Qe1 -Phё-Phe- NH,. 0,80 г )-G,e-s- he-Phet 2 обрабатывают раствором HBf 3 уксусной кислоте аналогично примеру 34 Ё, и раствор ют в 10 мл ДМФ. Раствор нейтрализуют триэтиламином. Параллельно с этим О,ЗО г I-d-Avqf-OHH 0,24 г HONB раствор ют в 5 мл тетрагидрофурана . 0,27 г ДЦГКДИ добавл ют в реакционную смесь, охлаждаемую на бане со льдом, смесь перемешивают в теченне 3 ч ДиГМ отфильтровывают и фильтрат добавл ют к аминококтоненту ( Н- -AvoC A p-{N0 . )&,Phe-Phe-NH,, подучен-, ному по описанной методике. Смесь схггавл ют на ночь при посто нном перемешивании . Растворитель упаривают при понкженном давлении и к остатку добавл ют воду. Вьшавшее порошкоо азное вешеютво отдел ют фильтрованием и высушивают. 3,чек его промывают этилацетвтом и переосаждают иэ смеси ДМФ/этилацетат. родукта 0,62 г (70% от теоретического); Л1Л. 154-157°С; dL i-13,00 (с 1,О. МФ). Найдено,%:С 57,84ГН 6.42; N16,80 С,,о09.о )Н2° Вычислено,%: С 57,69; Н 6,33; N 17,25 Б. Получение 5 - AwoiE - Arg--Qev-Phe -Phe-NHj.. 500мг z-Avafi-Ar-g-CNOj -GEif-Phe-Phe-NH раствор ют . в 30 мл уксусной кислоты и гидрируют над палладием в течение 5 ч. Катализатор отфильтровывают а растворитель упаривают при пониженном давлении. Остаток хроматогра(|мруют : на карбоксиметчлсефадексе (колонка 1,8 х 9 см) элюоией в линейном градиенте водными растворами ацетата аммони ОД и 1,О н. (по 50О мл каждого раствора). Фракшш от 29О до 37О мл объедин ют и иофилизуют. Выход продукта 29О мг (61% от теоретического ), ,60 (с 0,5%, вода). Найдено,%:С 54.34; Н 7,35; N 16.2О с,Л оЛ-2е,о.-з/2н,о Вычислено,%: С 54,53, Н 7,32Г 16,36 Аминокислотный анализ: Ar-g 1,11 (l) GCy 1,00 (1); Phe 2,04 (2); содерканйе пептида 81,4%. Пример 37. Получение - Acoip-APg--tie Phe-Phe-NH . . . А. Получение Z-г-Ac p-AfgrCNOp X (bPhe-| he-NH, 0,80 г - NH 2 об1 абатывают раствором HBif в уксусной кислоте по методика примера 34 tJ
43 и раствор ют в 10 мл ДМФ. Гаствор нейтрализуют триэтиламином Параллельно с этим О,32 г Z - 6 -Лсар-ОН и 0,24 г НО MB раствор ют в 5 мл тетрагидрофурач и добавл ют 6,27 г ДСС при одновременном охлаждении смеси на бане со льдом. Смесь перемешивают в течение 3 ч. Образовавшуюс ДИГМ отфильтровьтают, фильт рат добавл ют к аминокомпоненту { HAhg (NOj)-GCv-Phe-Phe- i,- полученном по описанной методике, и смесь сх:тавл ют на ночь при посто нном перемешивании. Ра воритель отгоншот при пониженном давлени к остатку добавл ют воду. Образузошеес твердое порошкообразное ветцество отдел ю фильтрованием н тщательно высушивают. Затем его промывают этилацетатом и перекристаллизовывают из смеси ДМФ/этилацетат . Выход продукта 0,49 г (55% от2 теоретического); т.пл. 102-104 43; cij-r, «20,0° (с 1,0%; ДМФ), Найдено,%: С 57,86; Н 6,40; N 16,76 а,.оО,М. ВычисленоД: С 57,697 Н б.ЗЗ: N 17.25 Б. Получение -Acdp-Arg--QCy - Phe Phe-NHj . 40O МГ Z- -Acap-At g CNO.-qevfPhe Phe-NHj pacTBOpsnoT в 30 мл уксусной кислоты и в течение 7 ч гидрируют по палладием. Катализатор отфильтровьгаают, а руастворитель упаривают при пониженном давлении. Остаток нанос т на колонку (1,8 X 10 см), заполненную карбоксиметил сефадексом, и хроматографируют линейноградие1ггной злюцией водными растворами ацетата аммони : О,1 и 1,0 н. (по 500м каждого раствора). Фракции от 250 до 330 мл объедин ют и лиофилизируют. Выход продукта 2ОО мг (51% от теоретичес кого); LoL -9,9° (с 0,6%; вода). Найдено,%: С 54,24; Н 7,26; N15,76 С,,2Н,0 Вычислено,%: С 54,46; Н 7,49, Kl5,8 Аминокислотный анализ: Ahg-l,OO (1)Г GtEv 0,98 (); Phe 2,00 (2); i -Асар ( не огфедел лиУ, содержание пептида 79%. Пример 38, Получение Lv6- Af g -QN-Phe-Phe-HH . , . A, Получение ди- 2-L.a-Afp ( NO )-QCv-Phe-Phe-NHj , 0,8O г 2-Ar-g-CNOp-QE -Phe-PheNV j обрабатывают раствором HBf в уксусной кислоте по методике, примера34С а затем раствор ют в 1О мл ДJЧФ. Раствор нейтрализуют триэтиламином. Параллельно с этим 0,54 г ди-2-Lvb-O л 0,26 г HON В раствор ют в 5 мл тетрагидрофурана и добавл ют O,v3O гДЦГКДИ,
44 охлажда смесь в бане со льдом. Смесь перемешивают в течение 4 ч, образовавшийс осадок ДЦГМ отфильтровывают, а фильтрат добавл ют к аминокампоненту (Н-Arg-(N02)- QEv-Phe-Phfi - NH), полученному по описа1-шой методике. Смесь оставл ют на ночь при посто нном перемешивании . Растворитель упаривают при пониженном давлении, а к остатку добавл ют воду. Образовавшеес твердое порошкообразное вещество отдел ют фильтрованием и тщательно высушивают. Затем вешеетво промывают этилацетатом и переосаткдают из смеси ДМФ/этилацетат. Выход продукта 0,82 г (77% от теоретического); т.пл. 2ОО-2О40С (разложение); ,5° (с 1,1%, ДМФ), Найдено,%: С 59,04,-Н 6,13; N15,78 .. Вычислено,%: С 59,О6; Н 6,20; N 15,79 В. Получение L s-Arg -GEv-Р Ье-Plie-NN26ОО мг ди-j:-Ljs-Arg-()-Ge -Phe-Phe-NW2 раствор ют в ЗО мл уксусной кислоты и в течение 6 ч провод т каталитическое восстановление над палладием. Катализатор отфильтровьгеают, а растворитель упаривают при поннже{шом давлении. Остаток внос т в колонку (1,5 х 11 .см, заполненную карбоксиметилсефадексом, и хроматографируют, использу лкнейноч радиентную элюцию водными растворами ацетата аммони : 0,1 и 1,0 н, (по 7ОО мл каждого раствора). Фракции от 65О до 76О мл объедин ют и лиофилизируют. Выход продукта 28О мг (52% от теоретического ); d,p -4,3 (с 0,5%; вода). Найдено,%: С 52,64; Н 7,38; N16,42 32 вО М1оЗ гН4°г-2Н,0 Вычислено,%: С 52,52; Н 7,42; N 16,12 Аминокислотный анализ: ,O6, 11); Ly 1,09 (1); es 1,00 (i); PTte 1,97 (2)т содержание пептида 73%. Приме р 39, Получение сА.,у--ро1 tj -Arg--Qev-T)he-phe-NH.j. , А. Получение ди- г-БаЪ (NO2) -G (ey-phe-Phe t4H О,8О г Z:-Ar-|r(NO2)-G,e-a-Phe-Phe-NH2 обрабатьтают раствором НВГ в уксусной кислоте по методике, описанной в примере 34 Е, и раствор ют в Ю мл ДМФ, после чего раствор нейтрализуют триэтиламином . Параллельно с этим 0,50 г ди- Z ct,y -Вс(Ъ-ОН и 0,26 г HONB раствор ют в 5 мл тетрагидрофурана и добавл ют 0,ЗО г ДЦГКДИ при одновременном охлаждении смеси в бане со льдом. Смесь перемешивают в течение 4 ч, и образовавшуюс ДЦГМ удал5пот фильтрованием.
45 Фильтрат добавл ют к полученному амии компоненту Н- Arg-( C|E Р tie- РЬе - и смесь оставл ют на ночь при п ста ниом перемешивании. Р астворитель yita ривают при пониженном давлении, а к остатку добавл ют воду. Выпавший осадок от филыровывают н тщательно высушивают. З тем его промывают этилацетатом и переосаждакуг на смеси ДА Ф/этилацетат. Выхо пгродукта 0,82 г (78% от теоретического) Т.ПЛ. 184-1880С; -19,5° (с 1,1%; ДМФ). Найдено,%: С 57,95-, Н 5,9Г, Н 16,19 4U JfOilNfi 2 Вычислено,%:С 57,79, Н 6,О1; N 16,21 Б. Получение , I - Dab - Atg--Qgv-Phe- Phe- NH, 6OO МГ «и- I-oL.r-Bcsb-AfgrCMO)GEv-Phe-Pbe-NH раствор ют в ЗО мл уксусной кислоты и в течение 6 ч прово- д т каталитическое восстановление над палладием . Катализатор отфильтровывают, а растворитель упаривают при пониженном дае лении. Остаток нанос т на колонку {1,5 х 13 см заполненную карбоксиметилсефадексом, и хроматографируют, использу линейно-гра- диентну(р элюцию водными растворами ацетата аммони , О,1 и 1,О н. (по 70О мл каждого раствора). Фракции от 610 до 680 мл объедин ют и лиофилизируют. Выход продукта 255 мг (46% от теоретического ) . -12,5 (с 0,8%; вода). Найдено,%: С 50,59, Н 7,61; N16,93 Вычислено,%; С 5О,34;Н 7,28; Н Л,31 Аминокислотный анализ: AVP1,00 (l), Ge-j 1,00(1): РНе i,98 (2Г, oi,f -Т5о4Ъ 1,О2 (1), содержание пе тида 72% Пример 4О. Получение Argr-Qe -Phe--phe-NH .j. А. Получение Z-Ahg lNO I - A gгCN02V -G,e -Plie -Pha - NM. O,8O г Z-At-g-CNO -GC -Pbe-pheобрабатывают раствором НВТ в уксусной кислоте по методике примера 34 Е, и осадок раствор ют в 1О мл ДМФ. Раствор нейтрализуют триэтиламином. Параллельно с этим 0,39 г Z-Afgr( и 0,22 г 2,4-динитрофенола раствор ют в 5 мл тетрагидрофурана и добавл ют 0,25 г ДСС при одновременном охлаждении смеси на бане со льдом. Смесь перемешивают в течение 2 ч и отфильтровывают образовавшуюс ДЦГМ. Фильтрат добавл ют к полу- ченному аминокомпоненту N0) Gft -Phe-Phe-NVUH оставл ют смесь на ночь при посто нном перемешивании. Растворитель упаривают при пониженном давлении, а к остатку добавл ют вопу. Мислообраз40 ный пр;1дукт тщательно пpo ывaкyг водой и переосаждают из смеси ДААФ/зтилацетат. Выход продукта 0,90 г (80% - теоретического )-, Т.ПЛ. 89-92°С; , (с 1 ,О%,- ДМФ). Найпено,%: С52,2О,Н 6,10-. Н2П,Г)1 .14Вычислено ,%: С 52,О5; Н 5,ПО; К 21,25 Б. Получение Arg-- he -Phe-NH,, 700 мг Z-Arg-CNQjT-A g-t NO VBC -Phe-Phe- NH раствор ют в 4O мл уксусной кислоты и в течение 9 ч провод т каталитическое всхгстаиовленне над палладием . Катализатор о-тфильтровывают, растворитель упаривают при пэтгжснном . Остаток внос т в колонку (3 х 18 см), заполненную карбокс1тметилиеллюлэзой, и хроматографируют элюентами: О,ОО5 н, водным раствором ацетата аммони (1,(1л) и О,3 н. водным раствором ацетата аммони ( 1,О л). Фракпип от 8РО до 141Омл объедин ют и лиофилизируют. продукта 38О мг (45% от теоретического); d.y -2,4° (с 0,5%: 5%-на уксус га кислота). НаЯдено,%: С 51,25; Н 7,29, N J 9 ,п8 заИ4в°5 г- С,,.з/2Н,о Вычисле о,%:С 51,40-, Н 7,15; N 18,93 Аминокислотный анализ: Afg2,02 (2); QSs 1,00 (1); Ptie 2,02 (2); содержание пептида 73%. Пример 41. Получение (Ь-Аба-Аго -G,e -P he-Ptie-T r-NHj А. Получение l-Pi-AEa-Arp-CNO)-C ,E -Ott К 26,3 г Z-Arg-(NO.j)-Qgv-OEt добавл ют 13О мл 25%-ного раствора HBJf в уксусной кислоте н после встр хивани в течение 1 ч при комнатной температуре к смеси добавл ют днэтиловый эфир. Выпавший осадок отфильтровывают и сушат над гидроокисью натрии. Высушенный осадок раствор ют в 150 мл ДМФ и после охлаждени раствора на бане со льдом его нейтрализуют триэтиламином. Затем добавл ют 23,1 г Z--р г AEa-ONB и смесь оставлшот на ночь при посто нном перемешивании . Растворитель отгон ют при пониженном давлении, остаток раствор ют в ЗОО мл этилацетата, содержащего небольшое количество н-бутанола. Раствор промывают водой, насьпденным водньп раствором бикарбоната натри . (10О мл х 3) и насыщенным воднь.м раствором хлористого натри (1ОО мл X 3), псх:ле чего его сушат над безводным сульфатом натри . Растворш- тель о-, гон ют при пониженном давлении и добавл ют диэтнловый эфир. Выпавитй сх:адок отфильтровывают и перекр сталлизовывают из смеси танол/этвлацетат,. Выход продукта 22,9 г (73% от тес етического); тлл. 97-B9 ;rd3 -11.2° (с 0,9%; ДМФ). Найдено,%:С 49,51,- Н 6,06, .N 18,93 4.H,0,N, Вычислшо,%:С 49,50,-Н 6,13; N19,25 В. Получение Z-fb-Aeol- Apgr (NOj) G«y-OH . 12,1 г Z-J%-ACa-A g-C JOд)-( раствор ют в смеси 50 мл адетона и 25 мл воды н при охтшжденки раствора на бане со смесью льда с хлористым натрием к нему по капл м в течение 30 мин добавл ют 27,8 мл 1,О . водного раствора гидрооквсв натри . Полученную смесь в тех же услови х перкч ешнвают в течение 1 ч, затем еще 2 ч перемешивают при ком натной температуре н после добавлени 3,8 мл 1,0 н, сол ной кислоты адетон упаривают при пониженном давлении. К остатку добавл ют 5О мл воды и смесь подкисл ют 6,О н, сол ной кислотой до образовани ма лообразного вещества, которое вскоре затв девает . Полученный твердый продукт отдел ют фильтрованием. Выход продукта 1О,3 г (86,0% от теоретического) у т.пл. lOl-lOa t; ,2° (с 1,0%;ДМФ Найдено,%: С 46,28; Н 5,41; N20,01 Ск,Н„0,М,;-1/2Н,0 Вычкслено,%: С 46,53; Н 5,75; N19,99 Г. Получение Z-Phe-Т р-ОМе 5,10 г Т Г-ОМе-нес суспендируют в 10О мл тетрагидрофурана и после охлаждени суспензии на бане со льдом ее нейтрализуют 3,08 мл триэтиламина. К смеси добавл ют 5,99 г Z-Plie-OH , 3,94 г HONB и 4,54 г ДИГКДИ. Реакционную массу оставл ют на ночь при посто нном деремешивашга. Образовавшуюс ДЦГМ отфильтровывают , а растворитель упаривают при пониженном давлении. Остаток раствор ют в 20О мл этилацетата. Раствор промьшают насыщенным водным раствором бикар боната натри (100 мл хЗ); 1 н. сол ной кислотой (1ОО мл X 3) и водой, затем сушат над безводным сульфатом натри Этилацетат упаривают при пониженном давлении , добавл ют петролейный эфир и образовавшийс студенистый остаток отдел ют фильтрованием и переосаждают из смеси этилацетат/петролейный эфир. Выход прод -кта 6,ОО г (63% от теоретического); Т.ПЛ. 132-133 ; Idli. -9,90(.0%; ДМФ). Найдено,%: С 68,О7; Н 5,92, N5,95 гуЧав б. Вычислено,%: С 68,О5-; Н 5,02; N5,88 Д. Получение I Ptie - - NH. 3,0 г Z- P1te-TVP - ОМе раствор ют в 4О мл метанола, насьваеггаого аммиаком , и раствор в запа нной ампуле хран т иеделю до образовани игольчатых кр)исталлов . Растворитель упаривают при пониженном давлении, диэтиловым эфиром осаждают продукт, выпавшие кристалл ы отф льт- ровьшают и перекристаллизовывают из смеси этанол/вода. Выход продукта 2,61 г (9О% от теоретического); т.пл. 217-218°С .2&,e° (с 1,0%; ДМФ). Найдено,%: С 67,45; Н 5,88; N 9,05 Вьгчислено,%: С 67,66; Н 5.9О; N9,11. Е. Получение Z-Ptie-Т г-- NH-j. К 1,15 г Z-Ptie-T p-NH ;, добавл ют небольшое количество анизола в затем 11 мл раствора НВ} в уксусной кислоте. После встр хивани смеси в течение 4О мин при комнатной температуре к ней добавл ют диэтиловый эфир. Образовавшийс осадок отфильтровывают и высушивают над гидроокисью натри . Парал лельно с этим 0,67 г Z Phe-OH и 0,45 г раствор ют в 5 мл тетрагидрофурана и добавл ют 0,52 г ДЦГКДИ при охлаждении смеси на бане со льдом. Смесь перемешивают в течение 4 ч и образовавшуюс ДЦГМ отфильтровывают. Фильтрат добавл ют к раствору полученного по описанной методике амкнокомпонента (H-Pt7€-T r-NH-| ,) в 10 мл ЦМФ, нейтрализованномув (гриэтиламином, н смесь оставл ют на ночь при посто нном перемешивании. Растворитель упаривают при пониженном давлении и к остатку добавл ют воду. Образс вавшиес кристаллы отдел ют фильтрованием , промывают этилацетатом и перекрнсталлизовывают из смеси ДМФ/этилацетат. Выход продукта 1,01 г (74% от теоретического ); Т.ПЛ. 218-221°С (разложение); ,70 (с 1,0%: ДМФ). Найдено,%: С 69,О1; Н 6,О2,- N 9,23 C3fH,,0,N Вычислено,%: С 69,06; Н 5,96, N 9,21 Ж. Получение ( (О)--G ,ev-Plre-P-he-Tvt-NH2, 0,91 г ZPTie - Ptie-Txr-NH суспендируют в смеси 30 мл метанола и 2О мл ДМФ и в течение 7 ч провод т каталитическое восстановление. Затем метанол упаривают при поыокеннэм давлении. Параллельно с этим 0,72 г Z-fb- ACa-AhgrCNOp -« ev-ОНи 0,32 г HONB раствор ют в 5 мл ДМФ и, охлажда .раствор на бане со льдом, добавл ют 0,37 г ДЦГКДИ. Смесь
49
перемеигавагот в течение 6 ч и образовавшуюс ДЦГЛ отфильтровывают.Фильтрат добавл ют к полученному по описанной методике аминокомпоненту (H Phe-Phe-TiJf 2. ) после чего смесь оставл ют на ночь при посто нном перемешивании. Растворитель упаривают при пониженном давлении и твердый остаток растирают в порошок с водой. Получившиеес порошкообразное вещество отдел ют (фильтрованием и пересаждают из смеси ДМФ/эти апетат. Выход продукта 0,88 г {62% от теоретического ); тлл. 174-177 ; dk..0 (с 1,0%; ДМФ).
Найдено,%: С 57.54; Н 6.18; N16.21 ,,
Вычислено,%: С 57.79; Н 6,О1; N 16.12
3. Получение р - АСа- Atg-Gey-Plte-Ptie -Tsf- HHj.
74O МГ Z- p -ABct- At-gCNO VQE -Pbe-Plie-T-iJr-HHjpafCTBc raBOfT в 3O мн уксусной кислоты и в течение 7 ч провод)гт каталитическое восстановление над палладвем. Затем катализатор отфильтровывают н { cnNворитель упаривают при поннхениом давлении . Остаток наноент на колонку (1,6 х 15 с заполненную ка| оксимет псефадексом, н провод т хроматогра4вао, использу но-градиентную э к гаю водными pacrreqp ми анетата аммон : О,ОО5 и 1,О н. (но 7ОО мл каждого раствсфа). Фракшв от 58О до 79О мл объедишвэт в л офштэ руют . Выход продукта 54О мг (75% от тесчэетического); tj .О (с О.5%; вода).
Наадено,%: С 54.2О; Н 6,5О; N14.99
,o2CjH O Вычислено,%: С 54.О6-, Н 6,91; N 15,О1, Аминокислотный анализ: Др0О,95 (1),
«ie 1.05 (1); i.oo (1); Ptie2,oo (2); содержание непт да 74%.
И. Получение дшштрата ft-ABq-Arcr-Gie -Phe-Phe-T h-NHj .
Ацетат, тригидрат днацетата В- Аба-Аг -QeiJ-Phe- tTe-Tv.« HHj (9,33 г) растворшот в 2О мл воды н к л&лу добавл ют 2,2 г моногидрата лимонной Kocnotbi при перемешивании. О азов«шага) кристаллический осадок отдел ют фильтрован ем в промывают небольшим копичествотд холодной воды. Получают 1О,4 г соответствую щего дидитрата; -19,6° (с 1,0; вода).
Найдено,%: С 52,28; Н 5,87,- N12,46
e fo Nto-ZC.H.O Вычислено,%: С 52,54; Н 5,82; N 12,25 Пример 42. Получение y-Alju-Apg-- ev- tie- tTe-T:jp-NH .
«
50
A.Получение Z Т /Abu- (NO,)-Gev-oEt ,
к 4,38 г z-A g-fNOg-j- qev-oEt
добавл5пот 4O мл 25%-ного раствора HBl в уксусной кислоте и после встр хивани смеси при комнатной температуре в течение ЗО мин добавл ют днэтиловый эф1ф« ВьтадавшиЙ осадок отфильтровывают н сушат над гидроокисью натри .
Затем его раствор ют в ЗО мп ДМФ и носле охлаждет1Я на бане со льдом рвет, вор нейтрализуют триэтиламином, К раство- ру добавл5гют 4.16 г 7.-р АЪи- ONB и смесь сютавл ют на ночь при посто нном перемешивании. Растворитель упаривают при пониженном давлении и к остатку добавл ют воду, которую зате. отдел ют декантацией. К остатку добавл ют диэтиловый эфир, выпавший в осадок продукт отфильтровывают н п реосаждают из ацетонитрила. Выход продукта 2,5 г (48% от теоретического). Т.Ш1. 60-62 0 dL -11,1° (с 1,0%; ОМФ).
Найдено,%:С 5О,12;Н 6,51 N18,73
C,,H,,OgM,
Вычж;лено,%: С 50,47; Н 6,35; N18,73 Б. Получение 2.--j-- Alju-Ang (N0)-c ,e-i«- он
2,0 г Z- -Abu-Apg-CNOp-qe -OEt (раствор ют в 2O мл ацетона, и охлажда на бане со льдом, добавл ют 5,7 мп 1 н. водного раствора гидроокиси натри . Смесь пе5 га лешивают в течение 2 ч при комнат- ЗОЙ температуре. Затем добавл ют 6 мл 1 н. сол ной кислоты и упаривают ацетон при пониженном давлении. Выпадавшие кристаллы отфильтровывают н перекристаллизо- вывают из смеси этанол/вода. Выход продукта 1.86 г (98% от теоретического), т.пл. 113-1150С,- ,00 (с 1,1%;ДМФ
B.Получение Z - У АЪи-Apgf(NO-,VG|e-PЬe-Plie-T-ir-NH .
К 1,34 г Z-Phe-Plne-T ir-NHj, добавл ют небольшое количество анизола и после этого 13 мл 25%-ного раствора НВ в уксусной кислоте.
После встр хивани смеси в течение 45 мин при комнатной температуре к ней добавл ют диэтнловый эфир и выпадающий осадок отдел ют фильтрованием и высуишвают над гидроокисью натри . Параллельно с этим 0,99 г 2-7 -AЬu-Arg-CNOг)-Qev- ОН и О,43 г HCJNB pacTBOpsooT в 5 мл ДМФ и, охлажда смесь, на бане со льдом, добавл ют 0,50 г ДЦГКДИ. Смесь перемеЕшвают в течение 6 ч и отфильтровывают выпавшую в осадок ДЦГМ. Полученный по описанной методике амннокомпонент ( H- 1ie-РЪе-Та -ННЛраствор ют в 1О мл ДМФ и йейтрализугот раствор тр этила ганом. К эт му раствору добавл ют раствор полученног активированного эф1фа и смесь оставл гот на иочь при посто нном перемешивании. Растворитель упаривакэт при пониженном д лешш и к остатку добавл5пот воду. Вьшавшее порошкообразное вещество ,. отдел ют 4л1льтрованием, промьюают этиладетатом н переосаждают из смеси ДМФ/этилацетат. Йыход продукта 1,12 г {58% от теорети ческого Т.ПЛ. 139.5 141°С; Л ,2 ( с 1.4%; ДМФ), Е{айдено,%: С 57,76;{Н 6,43; N 15,91 47.rOi..Вычислено ,%: С 58,19; Н 6,13; N 15,89 Г. Получение т - Abo-Arg--tVEt-Phe-Phe-br-NHj . 8OO мг Z- --Abu-Ar(WO)-Gгv-Ptre -Phe-T p- |H2pacтвopйют в ЗО мл уисуСйой кислоты и в течение 14 ч провод т каталитическое восстановление, с пользу палладий в качестве катализатора. Катализатор отфильтровьгоают и растворитель удал ют упариванииу тфп пониженном аавлени . Остаток внос т в колонку (1,5 X 1О см), заполненну карбоксиметилсефадексом , и хроматографируют, использу линейно-градиентную элюишо водными раствсфами ацетата аммони : ОД и 1,О н. (по 7ОО мл каждого раствора). Фракции от 41О до 60О мл объедишпот и лиоф лизвруют . Выход продукта 412 мг (52% от теоретЕческого); .-18,l° (с О,5%; вода), Наадено,%: С 54,О8- Н 7,О7; Н 14,6О Сз,,М,.С 8ычнспеао ,%: С 54.О2: Н 7ДО; Ы 14,52 Амннокисиотньай анализ: AfP 0,96 (1); QSs 1.00 CD: Phe 2ДО (2); содержание пептида 84%. Пример 43. Получение f Асар-Arg--ere -phe-Ph$- T f-WHa . А, Получение 2-6-Асс р - Агог(МО,)-r ,ev-oEt. 2,42 г (N02VG(gi/-OEt встр хивают с 12 мл раствора НВР в уксусной кислоте при комнатной температуре в течение 4О мин, добав 5Ш)т ДИЭТШ10ВЫЙ эфир. Вьшадавший осадок отдел ют фильтрованием и высушивают над гидроокисью натри . Параллельно с этим 1,33 г Z- g-Acap-ОН и 0,99 г НО N В раствор ют, в 5 мл тетрагидрофурана и, охлажда смесь на бане со льдом, добавл ют 1Д4 г ДСС. Смесь перемешивают в течение 4 ч и отфильтровывают образовавшуюс ДИГМ. Полученный аминркомпонент раствор ют в 10 мл ДМФ и после нейтрализации раствоа -фиэт ламином к нему добавл ют полуенный раствор активированного эфира. месь оставл гот на ночь при посто ннот п эемеишвании и отгон ют растворитель при пониженном давлении. Остаток раство ют в 5О мл этилапетат а, промьпвануг раствор водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натри (50 мл х 2), и вновь водой, после чего сушат над безводным карбонатом натри . Растворитель отгон ют при поииженном давлении и добавл ют к остатку петролейный эфир. Выпавшие кристаллы от4нсльтровывают и перекристаллизовывают из смеси вода/этанол/этилацетат. Выход продукта 2,1 г (76% от теоретического ); Т.ПЛ. 85-87°С; -11,9° (с - 1,0%: ДМФ). Найдено,%:С 52,43-, Н 6,64; Н 17.76 .зтOв Вычислено,%:С 52,2 6; Н 6,76; N 17,78 Б. Получение Z- - Асар- Apg ( N0 -qeu-oH 1 ,8 г Z-e-Agoip-Ahg-(NO,j-)-qey-Ott раствор ют в 10 мл ацетона и, охлажда раствор на бане со льдом, к нему добавл ют 2,9 мл 2 н. водного раствора гидроокиси натри . Смесь переметиивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем добавл ют 2,5 мл 1 н. сол ной кислоты, упаривают апетон при пониженном давлении и к остатку добавл5пот 1О мл воды, нераствсирившийс осадок отфильтровьтают. Фильтрат подкислзпот 1 н. сол ной кислотой и вьшавшие кристаллы отфильтровьтаюа. продукта 1.59 г (93% от теоретического ); Т.ПЛ. 97,5-99°С; Ы -10,7 ( с 1,0%: ДМФ). НаЯиено,%: С 48,50, Н 6,28; Ч 18,23 Саг«,зО 7ВычисленО ,%: с 48,79; Н 6,52; , N18,10. В. Получение 2-б-Дсар-Ar-g (NO)-GFe i -Ptie-Plre-Typ- NHj, К 1,22 г Z-Phe-Phe-Typ-NH добавл ют небольшое количество анизола, затем 10 мл 25%-ного раствора НВ| в уксусной кислоте. Смесь встр хивают при комнатной температуре в течение 40 мин и продукт осаждают диэтиловым э4иром. Осадок отфильтровывают и сушат над гидроокисью натри . Параллельно с этим 1,05 г (р-Arg-CNO)-GrEv-OH и 0,36 г HONB; раствор ют в 10 мл ДМФ и, охлажда смесь на бане с водой, добавл ют 0,42 г ДЦГКДИ. Смесь перемешиваюв течение 6 ч и отх{)ильтровывают образовавшуюс ДЦГМ. Описанный аминокомпоиент раствор ют в 1О мл ДМФ и нейтрализуют .раствор триэтиламином. К этому раствору добавл ют полученны раствор активированного эфира и смесь ос тавл ют на ночь при посто нном перемеши BaimH. Растворитель упаривают при пониж ном давлении и к остатку добавл ют воду выпавший осадок отфильтровывают, промью ют этилацетатом и переосаждают из смес ДМФ/этилацетат. Выход продукта 1,О1 г (57% от теоретического); т,пл, 149-151° Tf -12,9° (с 1,1%; ДМФ). Найдено,%: С 59,63; Н 6,43; N15,03 .,Q Вычислено,%: С 59,5О; Н 6,32; N 15,5 Г. Получение 6- Atotp - Агсг - l; Erf-P11e-pЬe - Ttjr-МН. 7ОО мг Z - е-Асар - Arg(NO.VQty Pl1e-Phe-Tv -NH2 pacTBOpsnoT в 40 мл уксусной кислоты и в течение 14 ч провод т каталитическое восстановление , использу палладий в качестве ката пизатора. Катализатор отфильтровьтают, растворитель отгон ют при пониженном дав лении. Остаток внос т в колонку (1,8 х 12 заполненную карбоксимеггилсефадексом. и хроматографируют, использу линейно-градиентную ЭЛЮШ1Ю вод ными растворами ацетата аммони : О,1 и 1,0 и. (по 7ООмл каждого раствЪра). Фракции от 43О до 550 мл объедин ют и лиофилизируют. Выход продукта 43О мг (62% от теоретического ); -13,2° (с 0,5%; вода). Найдено,%: С 55,48; Н 7,39: N14,47 Вычислено,%: С 55,43( Н 7,24, N14,3 Аминокислотный анализ: Ahgrl.OO (l) 1,00(1); Lvs 0,94 (1); ТУГ 1,OO (1); Plie 2,о7 (2).; содержание пеп тида 84%. Пример 44. Получение Lds-Afg-Ci& -Ptie-Plie-Т: г-NH . . А. Получение ди- Z- U s Avg- CNOj,) Qfcy-OEtЦелевой продукт получают по методик 43 А, использу 2,О7 г ди- Z - LVS -ОН в виде гел , который переосаж- дают из смеси вода/этанол/этилацетат ,, Выход продукта 2,57 г (73% от теоретического ) Т.ПЛ. 161-162ОСГ -11,9 ( с 1,О%; ДМФ). Найдено,%: С 54,45; Н 6,05, .Н 15,99 Вычислено,%: С 54,85; Н 6,33; N15,9 Б. Получение ди- Z- Uvs - Atg(НО)- (еа-он Раствор 2,0 г ди- Z- ЬУ .,)-G|6v-OEtв Ю мл ацетата охлг ждают на бане со льдом и добавл ют 2,1 м 2 Н. водного раствора гидроокиси натри , Смесь пероме 1ивают при комнатной Tovtпературе в течение 2 ч. Затем добавл ют 1,4 мл 1 Н. сол ной кислоты и отгон ют ацетон при пониженном давлении. Остаток разбавл ют 10 мл воды и отфилтугровывают нерастйорившийс осадок. Раствор подкигл ют 1 Н. сол ной кислотой и выпавший студенистый осадок отдел ют фильтропапиэм . Выход продукта 1,78 г (93% от т з:1оетического ); т.пл. 131-132,.. -10,5 (с 1,0%; аЧФ). Найдено,% С 51,431 Н 5,92; N 16,23 ,,0 Вычислено,%: С 51,49; Н 6,2О; N 1 G,(U В. Получение ди- - Ar-g-( N0 V -QEv- Ptie-Ptre-Tyr- NH Использу 1,21 г ди-Z-b-ib- (NO.,Y-QCvOH воспроизвод т методику примера 43 В. Получают 1,21 г (58% от тпретического ) соедитени в виде гел , т.пл, 199-2030С; , -13,3° (с 1,О; ДМФ). Найдено,%:С 58,70гН 6,2в: N14,7:. C.A«°l,Nz2H,0 Вычислено,%: С 58,75; Н (1,23; N Ы, .. Г. Получение ЬУ$ - Afg--Q-Es - Ptie-PlTf NH, В ЗО мл уксусной кислоть: раствор ют 1,ОО г ди- Z - Uvs-Afg-CNO -QE - P iePtie-T-sfr - NHj и в присутствии п ллациевой черни как катализатора провод т в течение 2О ч каталитическое восстанов/юние . Катализатор отфильтровывают и растворитель отгон ют при пониженном давлении .. Остаток хроматографируют на колонке (1,8 X 10 см) с карбоксиметилосфадексом. Элюцию осуществл ют методом линейного градиента, использу водные растворы ацетата аммони от 0,1 (500 мл) до 1 н. (5ОО мм). Фракции от 65О до 89О мл объедин ют и лиофилизируют. Выход прод укта 468 мг (БО% от теоретического); dJ -10,6° (с 0,5%; вода). Найдено,%: С 52,7О; Н 7,31-, N14,72 C4iH5AN.,-4H,0 Вьгчислено,%: С 52,84; Н 7,27; N14,43 Аминокислотный анализ: Afg 1,00 (1), 0,94 (1); еу 1,00 (1); 1 1,00 ( 1); PTie 2,Об (2), содержание 82%. П р и м е р 45. Получение Л,)аЬ -Ap§--QEv- p-he-p-he -Т:#г- NH. А. Синтез ди- Z.-ot,-БаЬ - ArgC N0)-G ,ev-OEt. В 4О мл диэтилового эфира суспендируют 2,84 г ди- Z - dL,)П-Д1и Л (ДЦГА - дициклогексиламин) и -полученную суспензию встр хив. о 0,5 и. coy)55 ной кислотой, эфирный слой отдел тот, промывают водой и сушат нал безводньтм суль ф том натри . Растворитель отгон ют в ва кууме и дальнейшие манипул ции с остатком производ т в точном соответствии методикой примера 43 А. В результате по лучают соединение в виде гел . Продукт пёреосаждают из смеси в ода/этан о л/этилацетат . Выход продукта 2,36 г (70% от теоретн еского); т.пл. 153-15б°С; сА. -9.40 (с 1,0%; ДМФ). Найдено.%: С 53,26; Н 5.84; N16,24 .о.Л Вычислено,%: С 53,56; Н 5,99; N116,6 Б. Синтез ди 2 cC.-Dab-Argr(ND -G,Ev-OH. В 10 мл ацетона раствор ют 2,0 г ди- Z - oC,J-Do(t)(N02) и к получен ному раствору при охлаждении на лед ной бане прикапывают 2,97 мл 2 н. водного раствора гидроокиси натри . Смесь перемешивают в указанных услови х в течение 1 ч, после чего прибавл ют 3 мл 1 н, сол ной кислоты. Ацетон отгон ют при пониженном давлении и к- оставшемус раствору прибавл ют 10 мл воды. Нерастворившиес npmviecH отфильтровывают и фильт рат подкисл ют сол ной кислотой. Образовавшийс при этом желатиноподобный осадок отдел ют от маточной жидкости фильтрованием . Выход продукта 1,67 г {9О% от теоретического); т,пл. продукта 112- изос; Л -8.3 (с 1,1%; дмФ). Найдено,%:С 50,53; N5,59, N17,19 С Н О N -НО ге 36 1о 8 2. Вычислено,%:С 5О,55; Н 5,76; N16,8 В, Получение ди- 2 d., f - Ddb Afgf (NO)-QEvPhe-P ie-T r-NHj. Испольау 1,12 г ди- Z , - 1йаЪ -ApgrCNOj,) ОН , воспроизвод т методику примера43 В. В результате получают 1,О2 г (51% от теоретического) соедшени в виде гел ; т.лл. 191-1950С ,0° (с 0,9%;ДМФ). Найдено,%: С 59,13: Н 6,14, N15,46 ..N.R.O ВычисленоД: С 59,О2;Н 5,95; N 15,О2 Г. Получение ci-,-у-БаЪ - ,ev - Pti -p1ie-Tbit--NH2- . В ЗО мл уксусной кислоты раствор ют 600 мг ди- (.,. -Це p-he-P-he-Tyr- NH и. .исполь зу палладиевую чернь в качестве катализатора , провод т в течение 12 ч каталитическое восстановление. Катализатор отфильтровывают и растворитель упаривают при пониженном давлении. Остаток хрок;атрографируют на колонке (1,8 х 10 см) с к
Claims (1)
- 56 боксиметилсефадексом. Элюцию осуществл ют методом линейного градиента от О,1 н. водного раствора ацетата аммони ( 5ОО мл) к 1 н. водному раствору ацетата аммони (5ОО мл). Фракции от 49О до 62О мл объедин ют и лиофилизируют. Вьгход продукта 241 мг (43% от теоретического): с,.. -17, (с 0,6%; вода). Найдено,%: С 52,12; Н 6,99; N 15,31 Сз,.зОг.С,,.4Н,0 Вычислено,%: С 51;96, Н 7,08; N 14,82 Аминокислотный анализ: 1;ОО (1); Dab 1,О4 (1); (З-Су 1,09 (1); Tvr 1,02 (1); Phe 2,13 (2); содержание пептида 79%. Формула изобретени Способ получени полипептидов эбШсй формулы Т - Ahgr- Rj-Phe - Phe- , где R - атом водорода или остаток основной или нейтральной аминокислоты, нейтральный аминокислотный остаток, R - NH,, Tvr - NHj , остаток тирозильного пептида, содержащего в своем составе от 1 до 5 аминокислотных остатков, или остаток амида тирозильного пептида, при условии, что, когда R.- атом водорода, R соответствует Pro , отличающийс тем, что аминокислоту , соответствующую R или аргинин , в том числе, когда R/ представл ет собой атом водорода или пептидный фрагмент полипептида указанной формулы, содержащий аминокислотный остаток R или аргинильную группу в том случае, когда I. представл ет собой атом водорода, в качестве N -концевой аминокислоты, конденсируют с недостающим фрагментом полипептида , причем каждое из исходных соединений может быть защищено по своим амино- и карбоксильным группам, которые не должны принш ать участие в конденсации , и может быть активировано по тем амино- или карбоксильным группам, которые непосредственно участвуют в указанной реак1ши конденсации, с последующим удалением защитных групп из полученного полипептидного продукта. Приоритет по признакам: 26.03.74при.К. - остаток основной аминокислоты или остаток нейтральной аминокислоты Отличной от еЛ, -аминокислоты; R - глицинГ Kg - NH,, - NH, 24.01.75при R - основной или нейтральный аминокислотнь Ё остаток, R - нейтральный аминокислотный . ;- чаток,П758R -- ( , TV - NVi,j, остаток тирозиль-л ет собой Gtv и Rj прюдгтпвл ет соногоцпитида , содсржаии ч) в своем составебой МНд или Tvh-NH , R означаетот 1 ло 5 ампнакислотн(,1х остатков или егоci--аминокислотный остаток; когпа R ггропамнл , при условии, что, когда R., п едстав-ставл ет собой пролин, R, - ато( т/юрода.577075
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3416174A JPS5724777B2 (ru) | 1974-03-26 | 1974-03-26 | |
| JP50010878A JPS5850212B2 (ja) | 1975-01-24 | 1975-01-24 | ポリペプチドノセイゾウホウ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU577975A3 true SU577975A3 (ru) | 1977-10-25 |
Family
ID=26346233
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU7502127597A SU577975A3 (ru) | 1974-03-26 | 1975-03-26 | Способ получени полипептидов |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4001199A (ru) |
| AT (1) | AT348153B (ru) |
| CA (1) | CA1059993A (ru) |
| CH (1) | CH618959A5 (ru) |
| CS (1) | CS189694B2 (ru) |
| DE (1) | DE2513057A1 (ru) |
| DK (1) | DK126275A (ru) |
| ES (1) | ES435990A1 (ru) |
| FI (1) | FI750925A7 (ru) |
| FR (1) | FR2274604A1 (ru) |
| GB (1) | GB1499764A (ru) |
| HU (1) | HU175306B (ru) |
| IE (1) | IE40877B1 (ru) |
| NL (1) | NL7503519A (ru) |
| NO (1) | NO751044L (ru) |
| SE (1) | SE7503471L (ru) |
| SU (1) | SU577975A3 (ru) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4073890A (en) * | 1974-03-26 | 1978-02-14 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Novel polypeptides |
| US4089821A (en) * | 1976-03-31 | 1978-05-16 | Armour Pharmaceutical Company | Synthesis of peptide amides |
| DE3146598A1 (de) * | 1981-11-25 | 1983-07-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | "neue peptide und verfahren zu ihrer herstellung" |
| US5447995A (en) | 1994-05-27 | 1995-09-05 | Shell Oil Company | Method for producing asymmetric radial polymers |
| AU4394201A (en) * | 2000-03-31 | 2001-10-08 | Metabolic Pharm Ltd | Insulin potentiating peptides |
| AUPQ661800A0 (en) * | 2000-03-31 | 2000-05-04 | Metabolic Pharmaceuticals Limited | Insulin-potentiating compounds |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3778426A (en) * | 1970-12-16 | 1973-12-11 | Research Corp | Therapeutically useful polypeptides |
| US3891616A (en) * | 1974-04-17 | 1975-06-24 | Squibb & Sons Inc | Hypotensive {62 -homoaminoacid nonapeptides |
-
1975
- 1975-03-19 US US05/560,092 patent/US4001199A/en not_active Expired - Lifetime
- 1975-03-22 CS CS751971A patent/CS189694B2/cs unknown
- 1975-03-24 FR FR7509114A patent/FR2274604A1/fr active Granted
- 1975-03-24 NL NL7503519A patent/NL7503519A/xx not_active Application Discontinuation
- 1975-03-24 IE IE651/75A patent/IE40877B1/xx unknown
- 1975-03-24 AT AT223975A patent/AT348153B/de not_active IP Right Cessation
- 1975-03-25 CA CA223,059A patent/CA1059993A/en not_active Expired
- 1975-03-25 SE SE7503471A patent/SE7503471L/xx unknown
- 1975-03-25 DE DE19752513057 patent/DE2513057A1/de not_active Withdrawn
- 1975-03-25 NO NO751044A patent/NO751044L/no unknown
- 1975-03-25 GB GB12365/75A patent/GB1499764A/en not_active Expired
- 1975-03-25 ES ES435990A patent/ES435990A1/es not_active Expired
- 1975-03-25 DK DK126275A patent/DK126275A/da unknown
- 1975-03-26 CH CH389775A patent/CH618959A5/de not_active IP Right Cessation
- 1975-03-26 HU HU75TA1351A patent/HU175306B/hu unknown
- 1975-03-26 FI FI750925A patent/FI750925A7/fi not_active Application Discontinuation
- 1975-03-26 SU SU7502127597A patent/SU577975A3/ru active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK126275A (ru) | 1975-09-27 |
| CH618959A5 (ru) | 1980-08-29 |
| NO751044L (ru) | 1975-09-29 |
| CA1059993A (en) | 1979-08-07 |
| AT348153B (de) | 1979-02-12 |
| FI750925A7 (ru) | 1975-09-27 |
| US4001199A (en) | 1977-01-04 |
| CS189694B2 (en) | 1979-04-30 |
| ATA223975A (de) | 1978-06-15 |
| SE7503471L (ru) | 1975-09-29 |
| NL7503519A (nl) | 1975-09-30 |
| FR2274604B1 (ru) | 1979-09-28 |
| GB1499764A (en) | 1978-02-01 |
| IE40877B1 (en) | 1979-08-29 |
| FR2274604A1 (fr) | 1976-01-09 |
| DE2513057A1 (de) | 1975-10-09 |
| AU7904675A (en) | 1976-09-16 |
| HU175306B (hu) | 1980-06-28 |
| IE40877L (en) | 1975-09-26 |
| ES435990A1 (es) | 1976-12-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3853837A (en) | Novel nonapeptide amide analogs of luteinizing hormone releasing factor | |
| Bodanszky et al. | Synthesis of secretin. I. The protected tetradecapeptide corresponding to sequence 14-27 | |
| US3875207A (en) | Process for the temporary protection of amino groups in peptide syntheses | |
| Walter et al. | Syntheses and pharmacological properties of selenium isologs of oxytocin and deaminooxytocin | |
| IE832332L (en) | Peptides | |
| JPS6317839B2 (ru) | ||
| Tritsch et al. | The Synthesis of L-Leucyl-L-valyl-L-cysteinylglycyl-L-glutamyl-L-arginine, an Insulin Fragment with Strepogenin Activity1 | |
| US3870694A (en) | Peptide synthesis with n-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide | |
| CN107936090B (zh) | 一种低成本合成ARK-Cu的方法 | |
| US5965770A (en) | N-aryloxycarbonyl amino acids and peptides and their derivatives | |
| Otsuka et al. | The syntheses of peptides related to the N-terminal structure of corticotropin. VII. The synthesis of peptide derivatives corresponding to positions 11 to 18 in the corticotropin molecule | |
| CZ1021084A3 (en) | Gonadoliberin derivatives and process for preparing thereof | |
| US3796697A (en) | Pentapeptide | |
| US3780014A (en) | Octapeptide intermediate to gonadotropin releasing hormone | |
| SU493064A3 (ru) | Способ получени полипептидов | |
| CS256897B1 (en) | Series thymic factor's analogue-type peptides | |
| Hofmann et al. | Studies with the S-peptide-S-protein system: The role of glutamic acid-2, lysine-7, and methionine-13 in S-peptide1–14 for binding to and activation of S-protein | |
| Kinoshita et al. | A new peptide synthesis using 2-fluoro-1, 3, 5-trinitrobenzene. Syntheses of thyrotropin releasing hormone and leucine-enkephalin. | |
| US3784535A (en) | Nonapeptide intermediate to gonadotropin releasing hormone | |
| US3944590A (en) | Process for the temporary protection of amino groups in peptide syntheses | |
| US3790554A (en) | Heptapeptide intermediate to gonadotropin-releasing hormone | |
| US3790555A (en) | Octapeptide derivative of gonadotropinreleasing hormone | |
| Van Nispen et al. | Synthesis and charge‐transfer properties of two ACTH analogues containing pentamethylphenylalanine in position 9 | |
| Inouye | Syntheses of Peptides Related to the N-Terminal Structure of Corticotropin. V. Synthesis of the Peptide Fragments, His-Phe-Arg-Try, His-Phe-Arg-Try-Gly and Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly | |
| Suzuki et al. | Synthesis of 4-L-leucine-6-O-acetyl-L-serine, 4-L-leucine, 6-O-acetyl-L-serine bradykinin, and bradykinin |