SU604870A1 - Способ получени лизирующих ферментов - Google Patents
Способ получени лизирующих ферментовInfo
- Publication number
- SU604870A1 SU604870A1 SU762349422A SU2349422A SU604870A1 SU 604870 A1 SU604870 A1 SU 604870A1 SU 762349422 A SU762349422 A SU 762349422A SU 2349422 A SU2349422 A SU 2349422A SU 604870 A1 SU604870 A1 SU 604870A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- actinomyces
- enzymes
- lysing
- genus
- obtaining
- Prior art date
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 3
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 title description 4
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 claims description 18
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 3
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical class N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical class [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910052500 inorganic mineral Chemical class 0.000 claims 1
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 claims 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 241001505901 Streptococcus sp. 'group A' Species 0.000 description 2
- 241000946889 Streptomyces levoris Species 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000009428 plumbing Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 2-(4-fluorophenyl)-1,3-dioxoisoindole-5-carboxylic acid Chemical compound O=C1C2=CC(C(=O)O)=CC=C2C(=O)N1C1=CC=C(F)C=C1 JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920001425 Diethylaminoethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 229940124840 Streptococcal vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000000935 anti-streptococcal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИЗИРУЮЩИХ ФЕРМЕНТОВ
Фосфорнокислый калий
двузамещенный0,1-0,5
II. Кукурузна мука0,5-5,0
Соева мука1,0-8,0
Фосфорнокислый калий
двузамещенный0,1-1,0
Хлористый натрий0,1-0,7
Цинк сернокислый0,0001-0,001
Выделение ферментов, лизирующих стрептококк группы А, осуществл ют препаративным электрофокуспрованием в градиенте рН от 2 до 10 с последующим освобождением от амфолинов гсльфильтрацией на Сефадексе G-25.
Пример 1. Конические колбы емкостью 750 мл заполн ют 100 мл жидкой питательной среды следующего состава, %:
Казеиновый гидролизат0,40
Хлористый натрий0,50
Глюкоза0,30
Калий фосфорнокислый
двузамещенный0,15
Вода водопроводна До 100
рН среды 7,2. Колбы инокулируют водной суспензией спор Actinomyces levoris 692, выращенного в течение 14-ти суток при 28°С на агаризованной питательной среде с кукурузным экстрактом.
После освобождени культуральной жидкости от мицели центрифугированием (10000 g, 10 мин) ферменты осаждают в течение ночи при сульфатом аммони (70% насыщени ). Образовавшийс осадок центрнфугирутю на рефрижераторной центрифуге (10 000 g, 10 мин, ). Г1олученный осадок белков раствор ют в 1-2 мл холодного 0,02 М бикарбонатного буфера и провод т обессоливание гельфильтрацией на Сефадексе G-25. Осадок раствор ют в 1 мл 0,02 М бикарбонатного буфера и хроматографируют па диэтнламиноэтилцеллюлозе (хроматографическа колонка 2,5X30). Получают активную фракцию, содержащую ферменты, которую лиофильно высущивают и определ ют литическую активность. Литическа активпость Actinomyces levoris 692 составл ет 85% при экспозицип 1 ч и 91% при экспозиции 4 ч.
Пример 2. Конические колбы емкостью 750 мл заполн ют 100 мл жидкой питательной среды следующего состава, %:
Кукурузна мука1,000
Соева мука2,000
Калий фосфорнокислый
двузамещенный0,200
Натрий хлористый0,500
Цинк сернокислый0,001
Вода водопроводна До 100
Колбы инокулируют 5% по объему двухсуточного вегетативного мицели Actinomyces ievoris 67, выращенного на кукурузной среде в колбах на круговых качалках при скорости 220-250 об/мин п температуре .
После освобождени культуральной жидкости от мицели центрифугированием (10 000 g, 10 мин) ферменты осалсдают в течение ночи при 4°С сульфатом аммони при насыщении 70%. Осадок центрифугируют на рефрижераторной центрифуге (10 000 g, 10 мин, 4°С).
Осадок белков раствор ют в -2 мл 0,02 М. бикарбонатного буфера. Дл окончательной очистки ферментов провод т препаративное электрофокусирование в градиенте рН от 2 до 10. Полученную фракцию, содержащую фермент (рП 9,3), освобождают от амфолинов гельфильтрацией на Сефадексе G-25. Активную фракцию, содержащую ферменты , лиофильно высушивают и определ ют литическую активность Actinomyces levoris 67,
котора при экспозиции 1 ч составл ет 82%.
Дл определени лизирующей.. активности
используют суспензию клеток стрептококка
группы А, тип 29 (штамм Д-23/11, №62/59 -
Пражска коллекци ). Реакционна смесь дл
определени активности лизирующих ферментов содержит 1,0 мл суспендированных клеток стрептококка в 0,075 М (рН 7,6) фосфатном буфере и 2 мл раствора фермента в том же буфере (100-150 мкг).
Об активности ферментов суд т по изменению оптической плотности реакциопной среды при 650 нм (температура 37°С, экспозици 1 и 4 ч), которую выражают в процентах. Исходную оптическую плотность реакционной смеси
(0,5-0,7 о. е.) принимают за нулевую точку. В таблице приведены данные по лизирующей активности ферментов, выделенных из культур актиномицетов. Все указанные в таблице культуры депонированы в коллекции
культур ВНИИА под соответствующими регистрационными номерами.
Полученные ферменты обладают высокой активностью, специфичностью и стабильностью . Они использованы дл выделени и изу65 чени нативных антигенов стрептококка группы А. Антигены, полученные при помощи этих ферментов в соответствии с насто щим изобретением , имеют следующие преимущества: сохран ют нативную структуру и обладают специфическими иммуногенными свойствами; дают возможность получать специфические антисыворотки; открывают перспективу создани антистрептококковой вакцины.
Claims (1)
- Формула изобретениСпособ получени лизирующих ферментов путем культивировани микроорганизмов рода Actinomyces на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, и последующего выделени ферментов, отличающийс тем, что, с целью получени ферментов, лизирующих стрептококк группы А без разрушени стрептококковых антигенов , из микроорганизмов рода Actinomyces используют:Actinomyces levoris692Actinomyces levoris67Actinomyces levoris64Actinomyces levoris95Actinomyces levoris109Actinomyces griseolus88Actinomyces alboflavus194Actinomyces griseochromogenes275Actinomyces odorifer406Actinomyces streptomycini83Actinomyces citreus187Actinomyces albus454Actinomyces species492Actinomyces species161Источники информации, прин тые :во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР №528340, кл. С 13К 1/00, 1975.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU762349422A SU604870A1 (ru) | 1976-04-21 | 1976-04-21 | Способ получени лизирующих ферментов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU762349422A SU604870A1 (ru) | 1976-04-21 | 1976-04-21 | Способ получени лизирующих ферментов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU604870A1 true SU604870A1 (ru) | 1978-04-30 |
Family
ID=20657560
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU762349422A SU604870A1 (ru) | 1976-04-21 | 1976-04-21 | Способ получени лизирующих ферментов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU604870A1 (ru) |
-
1976
- 1976-04-21 SU SU762349422A patent/SU604870A1/ru active
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3912588A (en) | Creatine amidohydrolase in the conversion of creatinine to creatine | |
| Winshell et al. | Kinetics of induction and purification of chloramphenicol acetyltransferase from chloramphenicol-resistant Staphylococcus aureus | |
| ES405471A1 (es) | Un procedimiento para la preparacion de un enzima. | |
| Collins | The effect of the growth rate on the composition of S. enteritidis cell walls | |
| Paul | Establishment of permanent cell strains from human adult peripheral blood | |
| Paretsky et al. | Studies on the Physiology of Rickettsiae: I. Some Enzyme Systems of Coxiella burnetii | |
| SU604870A1 (ru) | Способ получени лизирующих ферментов | |
| Weinberger et al. | The properties of L forms isolated from Salmonella and the isolation of L forms from Shigella | |
| US3625833A (en) | Process for producing antiviral substance from staphylococcus organisms | |
| US4062731A (en) | Production of uricase from micrococcus luteus | |
| Horsfall Jr | STUDIES ON NON-HEMOLYTIC STREPTOCOCCI ISOLATED FROM THE RESPIRATORY TRACT OF MAN: THE ANTIGENIC BASIS FOR TYPE SPECIFIC REACTIONS WITH STREPTOCOCCUS SALIVARIUS AND NON-LEVAN-FORMING STREPTOCOCCI | |
| Dienes et al. | Serological reactions of L type cultures isolated from proteus. | |
| Marchin et al. | Purification of β-Glucosidase from Saccharomyces lactis Strains Y-14 and Y-1057A | |
| SU1412306A1 (ru) | Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR Серовара OGaWa КМ 1446/рС0107-2, используемый дл получени холерного экзотоксина | |
| SU1659480A1 (ru) | Штамм бактерий КLевSIеLLа рNеUмоNIае-продуцент рестриктазы Кр @ 378 1 | |
| SU1456468A1 (ru) | Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае сноLеRае серовара Огава-продуцент холерного токсина | |
| SU644833A1 (ru) | Штамм 85-продуцент -аспарагиновой кислоты | |
| Guntermann et al. | Induction of alpha-glucosidase and synthesis during the cell cycle of Myxobacter AL-1 | |
| Das-Gupta et al. | STUDIES IN THE ENZYME MAKE-UP OF ALTERNARIA: I. Qualitative Demonstration of Enzymes | |
| RU2257412C1 (ru) | Штамм haemophilus influenzae b mech №1 - продуцент капсульного полисахарида - полирибозилрибитолфосфата | |
| SU1268172A1 (ru) | Способ получени сухой агглютинирующей сыворотки дл диагностики вибриоза лососевых рыб | |
| SU1486512A1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИИ ЗТАРНУЬОСОССиЗ 8АРКОРНУТ1Си5 ПРОДУЦЕНТ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ 5зг1 | |
| SU767197A1 (ru) | Способ получени бактериальной эндонуклеазы 1 | |
| SU1645293A1 (ru) | Штамм бактерий SтRертососсUS FaecaLIS - продуцент рестриктазы SFa N @ | |
| SU889003A1 (ru) | Способ получени диагностической псевдотуберкулезной сыворотки |