SU751332A3 - Способ получени антибиотического комплекса а-35512 - Google Patents

Способ получени антибиотического комплекса а-35512 Download PDF

Info

Publication number
SU751332A3
SU751332A3 SU772485600A SU2485600A SU751332A3 SU 751332 A3 SU751332 A3 SU 751332A3 SU 772485600 A SU772485600 A SU 772485600A SU 2485600 A SU2485600 A SU 2485600A SU 751332 A3 SU751332 A3 SU 751332A3
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
component
methanol
hydrochloride
fractions
weak
Prior art date
Application number
SU772485600A
Other languages
English (en)
Inventor
Хайнц Михель Карл
Юджин Хичченс Кэльвин
Original Assignee
Эли Лилли Энд Компани (Фирма)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Эли Лилли Энд Компани (Фирма) filed Critical Эли Лилли Энд Компани (Фирма)
Application granted granted Critical
Publication of SU751332A3 publication Critical patent/SU751332A3/ru

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G03PHOTOGRAPHY; CINEMATOGRAPHY; ANALOGOUS TECHNIQUES USING WAVES OTHER THAN OPTICAL WAVES; ELECTROGRAPHY; HOLOGRAPHY
    • G03GELECTROGRAPHY; ELECTROPHOTOGRAPHY; MAGNETOGRAPHY
    • G03G15/00Apparatus for electrographic processes using a charge pattern
    • G03G15/65Apparatus which relate to the handling of copy material
    • G03G15/6532Removing a copy sheet form a xerographic drum, band or plate
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S271/00Sheet feeding or delivering
    • Y10S271/90Stripper

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Electrostatic Charge, Transfer And Separation In Electrography (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

1
Изобретение относитс  к микробиологии и касаетс  получени  антибиотиков .
Предложенный антибиотический комплекс новый и способ его получе- НИН в патентной и научно-технической литературе не описан.
Целью -изобретени   вл етс  получение антибиотического комплекса А-35512.
Эта цель достигаетс  тем, что штамм Streptomyces candidus NRRL 8156 выращивают на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, в аэробных услови х с последующим выделением комплекса и/или разделением его на отдельные компоненты.
Штамм Streptomyces candidus NRRL 8156, который используют дл  получени  антибиотического комплекса, был извлечен из образцов почвы, собранной на атоле Эниветок и хранитс  в коллекции культур Северного Регионального исследовательского центра США под номером NRRL 8156.
Штамм имеет следующие культурально-морфологические признаки.
Спорофоры удлиненную волнистообразную форму. Споры образуют
цепочку из 10-50 спор, имеют цилиндрическую форму, размеры могут измен тьс  от 0,7 до 1,05/xj- 1,4 до , 3,5|u. На среде дл  выращивани  образуютс  сплошные и плотные структуры.
Солодово-дрожжевой агар. Интенсивный рост. Субстратный мицелий-измен ющийс  серовато-желтый цвет, обильный воздушный мицелий и образование
10 спор, белый. Пигмент нерастворимый.
Овс ный агар. Умеренный рост, субстратный мицелий - измен ющийс бледно-желто-зеленый , светлый воздушный мицелий и спорообразование.
15 Пигмент нерастворимый. Наблюдаетс  образование сплошных структур.
Агар Эмерсона. Рост хороший. Субстратный мицелий - измен ющийс  светло-оливковый воздушный мицелий от20 сутствует, пигмент растворимый, светло-коричневый , спорообразование отсутствует .
Агар Беннета. Рост интенсивный. Субстратный мицелий умеренно желтый,
25 обильный воздушный мицелий и спорообразование , белый, пигмент нерастворимый .
Агар Чапека. Рост хороший. Субстратный мицелий бледно-желто-зеленый
30 . хорошо развитый воздушный мицелий
и спорообразовагше, белый, пигмент . нерастворимый, образующийс  мицелий окружен ворсинками
Лгар из томатной пасты и овс ной муки. Интенсивный рост, субстратный глицелий серовато-желтый, обильный воздушный мицелий и спорообразование ,, белый, пигмент нераствори ф й.
Питательный агар. Рост умеренный, .субстратный мицелий - измен ющийс  бледно-желто-зеленый, хорошо развитый воздушный мицелий и спорообразование , белый, растворимый пигмент светло-коричневый,
Тирозиновый агар. Рост хороший, субстратный мицелий белый, хорошо развитый воздушный мицелий и спорообразование , белый, растворимый коричневый пигмент, наблюдаетс  образование сплошных структур.
Физиологические свойства.
Молоко коагулирует в течение 14 дней. Нитраты восстанавливает. Меланин не образует, йселатину разжижает . Хорошо растет и образует споры при 26-30°С. Усваивает глюкозу, инозитол, Д-маннитол, фруктозу, ксилозу . Не усваивает арабинозу, сахарозу , рамнозу, раффинозу.
Среда дл  выращивани  продуцента антибиотика может быть различной. В качестве источника углерода использу рт сахарозу, глюкозу, декстрин, фруктозу, маннитол, мальтозу, лактозу . В качестве источника азота испол зуют м сной пептон, муку соевых бобов , муку, изготовленнуюиз крови свиньи, аминокислоты, такие как глутаминова . В питательную среду можно вносить неорганические соли, такие как хлориды, карбонаты, сульфаты, нитраты цинка, натри , магни , кальци , аммони . В среду можно включать микроэлементы, необходимые дл  роста и развити  микроорганизмов,
В процессе ферментации при образовании большого количества пены можно добавить небольшое количество (например, 0,2 мл/л) агента, подавл ющего образование пены, такого как полипропиленгликоль,
Выращивание продуцента ведут в аэробных услови х. Вегетативный прививочный материал готов т при помощи прививки в небольшом объеме cpepf дл  выращивани  культуры споровой формы.- Вегетативный прививочный материал затем перенос т в резервуар ) -больших размеров.
Штамм, продуцирующий антибиотический комплекс, выращивают при 20-40°С, предпочтительно при 30-34с
При погруженном выращивании культуры в аэробных услови х через среду продувают стерильный воздух.Дл  эффективного роста культуры в резервуа дл  выращивани  подают воздух в предпочтительном варианте около 0,1 объема воздуха на 1 объем среды дл  выращивани  культуры в 1 мин. Дл  эффективного выращивани  культуры в резервуар подают воздух около 0,25 об/мин.
Процесс производства комплекса, 5 протекающий в течение процесса ферментации , сопровождаетс  отбором тестовых образцов среды или экстрактов частичек мицели  с целью проверки антибиотической активности
против организмов, о которых известно , что они чувствительны к антибиотикам . Одним изОрганизмов, который используют в тестах на антибиотики,  вл етс  BaciPPus subtiEls АТСС 6633. Биоанализ производ т, помеща  диск из бумаги,
на котором находитс  проба, на плоский агар, содержащий среду дл  выращивани  с ограниченным количеством питательных веществ.
0 Максимальное извлечение антибиотического комплекса А-35512 достигаетс  при помощи предварительной фильтрации, чтобы удалить массу мицели  . Отфильтрованную среду дл 
5 выращивани  культуры подвергают очистке известными способами, предпочтительно используют процесс адсорбции отфильтрованного бульона на полиамидной колонне и элюирование
Q колонны водой и смесью воды и спирта . Элюированные фракции, которые про вл ют антибиотическую активность , соедин ют, в результате получают антибиотический комплекс А-35512.
Дальнейша  очистка отдельных компонентов комплекса включает дополнительные процедуры адсорбции и экстрагировани . Дл  этого используют такие материалы, как окись алюмини , силикагель, ионообменные смолы.
Компоненты антибиоти ческого комплекса образуютс  в процессе ферментации в виде дигидрохлоридов. В результате полиамидного разделени 
5 образуетс  компонент В, а оставша с  часть содержит смесь в виде дигидрохлоридов . Каждый отдельный компонент можно превратить в его свободное основание (не содержащее
Q ионов хлора) известными способами, такими как хроматографи  над слабо основной ионо-обменной смолой.
Компонент В агликон готов т при помощи гидролиза компонента В в слабой кислоте. Компонент В наиболее легко доступен в виде дегидрохлорида . Можно также использовать компонент В или соль компонента В, образованную присоединением кислоты. Гидролиз в кислоте провод т обычным способом, предпочтительно использование сол ной кислоты, при этом компонент В агликон получают в форме соли сол ной кислоты, в предпочтительном варианте гидролиз провод т
в воде при температуре дефлегмировани  в течение 1-2 ч.
Антибиотический ког/тлекс А-35512 компоненты комплекса А,В,С,Е,Н, компонент В агликон подавл ют рост некоторых патогенных микроорганизмов, в частности грамположительных бактерий . Минимальную ингибируюсцую концентрацию , при которой компоненты комплекса подавл ют рост бактерий, определ ют известным способом.
Число и пропорции различных компонентов , содержащихс  в комплексе, могут измен тьс  в зависимости от условий ферментации. Компонент В  вл етс  основным в антибиотическом комплексе А-35512.
Компоненты образуютс  в комплексе А-35512, их извлекают отдельно из смеси в виде солей сол ной кислоты . Каждый компонент отдельно можно превратить в его свободное основание , не содержащее ионов хлора, например , при помощи хроматографии на слабощелочной ионо-обменной смоле
Компоненты комплекса растворимы в воде, частично раствор ютс  в спирте, таком как метанол и этанол, и не раствор ютс  в других органических растворител х, таких как бензол, хлороформ, ацетон.
Компонент А антибиотического комплекса.
Компонент А, белое аморфное щелочное соединение, имеет следующий элементарный состав,%: углерод 54,29, водород 5,19, азот 5,58, кислород 33,76, хлор 1,69.
Дигидрохлорид компонента А белое аморфное гигроскопичное соединение, имеет следующий элементарный состав, %: углерод 51,03, водород 5,10, азот 4,75, кислород 34,20, хлор 4,80.
Инфракрасный спектр поглощени  имеет максимум на следующих частотах (см-) , КВг: 3405 (интенсивный), 3300 (изгиб), 2950 (слабый), 1750 (слабый 1670 (интенсивный), 1625 (изгиб), 1602 (интенсивный), 1520 (интенсивный ), 1470 (слабый), 1440 (слабый), 1405 (слабый), 1345 (изгиб), 1312 (умеренный), 1225 (умеренный), 11801130 (слабый), 1080 (интенсивный) и 1020 (изгиб).
УФ-поглощение показывает в к слом и нейтральном метаноле максимум поглощени  282 им, а в щелочном метаноле 292 нм.
Дигидрохлорид компонента А имеет следующие специфические вращени  ( 1, H20),M5f-400°( 1, Hj,0). .
Молекул рный вес Дигидрохлорида компонента А составл ет примерно 2106. Растворим в воде, частично раствор етс  в спиртах, таких как метанол и этанол, и нерастворим в других органических растворител х, таких как бензол, хлороформ, ацетон и т.д. Стабилен в течение 72 ч в водных растворах, имеющих рН в пределах 3-10.
Согласно аминокислотному анализу содержит п ть аминокислотных остатков , одним из которых  вл етс  глицин .
Компонент В антибиотического комплекса А-35512.
Компонент В, белое аморфное основное соединение. Э.мпирическа  формула имеет вид С„.„Н„,.,„,Мв.,0,С Е и имеет следун йий процентный состав,%: углерод 53,98, водород 4,75, азот
.5,25, кислород 34,29, хлор 1,59.
УФ-спектр поглощени  показывает в кислотном и нейтральном метаноле максимум поглощени  282 нм, а в щелочном метаноле 292 н.
Компонент В. имеет следующие характерные вращени :М -123° ( 1, П,О), Д -44б( 1, Н,,0).
Молекул рный вес, определенный с помощью титровани , составл ет около 2143.
Дигидрохлорид компонента В, белое кристаллическое соединение, гигроскопичное и не имеет определенной точки плавлени . Имеет следующий элементарный состав,: углерод 52,57,
водород 4,80, азот 5,66, кислород 32,86, хлор 4,51.
УФ-спектр показывает в кислом и нейтральном метаноле максимум поглощени  282 нм, аз основном метаноле 292 нм.
Дигидрохлорид компонента В имеет следующие характерные вращени : М -128( 1, H20),W|| -475°(l, ). Молекул рный вес, определенный методом титровани , составл ет около 2027.
Аминокислотный анализ с помощью гидролиза в кислоте показывает наличие п ти аминокислотных остатков, одним из которых  вл етс  глицин.
Анализ продуктсгв гидролиза в кислоте показывает, что Дигидрохлорид компонента В содержит следующие сахара: глюкозу, фруктозу, маннозу, рамнозу и З-амино-2,3,6-тридеокси-3-С-метил-ксило-гексопиранозу . При гидролизе в слабой кислоте извлека-г етс  глюкоза, фруктоза, манноза- и рамноза-группы и получают агликоно-, вое производное соединение.
Дигидрохлорид компонента В имеет одну гидроксильную группу, способную участвовать в эфиризации.
Раствор етс  в воде, частично раствор етс  в спиртах, таких как , метанол и этанол, и нерастворим в других менее пол рных органических растворител х. Стаби51ен в течение 72 ч в водных растворах имеюсцих рН в пределах 3-10.
Компонент С антибиотического комплекса.
Компонент С, белое аморфное основное соединение, имеет следующий состав , %: углерод 53,93, водород 5,15, азот 5,80, кислород 32,35, хлор 1,0
Компонент С имеет молекул рный вес приблизительно 18б2,
Дигидрохлорид KoivinoHeHTa С, белое аморфное соединение, имеет следующий элементарный состав,%:углерод 51,76, водород 5,07, азот 5,61, кислород 30,29, хлор 4,88.
Эмпирическа  формула дл  дигидрохлорида компонента С находитс  в области Cg3.35Hgj.|o,Ng037.qCE3
ИК-спектр поглощени  дигидрохлорида компонента С в KB г наиболее значительные максимумы поглощени  имеет на следующих частотах, 3370 (интенсивный), 3280 (изгиб), 3040 (изгиб), 2980 (изгиб), 2920 (слабый) 1740 (слабый), 1658 (интенсивный), 1620 (слабый), 158-9 (умеренный), 1503 (интенсивный), 1460 (слабый), 1428 (умеренный), 1385 (слабый), 1330 (слабый), 1295 (умеренный), 1210 (интенсивный), 1162 (умеренный) 1120 (слабый), 1060 (интенсивный), 1005 (умеренный).
УФ-спектр поглощени  дигидрохло .рида компонента С показывает в кислотном и нейтральном метаноле максимум поглощени  282 нм, а в щелочном метаноле 292 нм, рассчитанные при использовании молекул рного веса 200
Дигидрохлорид компонента С имеет следующие характерные вращени : -16lM 1,05, Н.О), -614° ( 1,05, ).
Молекул рный вес дигидрохлорида компонента С, определенный при помощи титровани , равен 198,2,
Аминокислотный анализ дигидрохлорида компонента С указывает на то, что он содержит п ть аглинокислотных остатков, одним из которых  вл етс  глицин.
Дигидрохлорид компонента С раствор етс  в воде, диметилсульфоксиде и водном растворе диметилформамиде, плохо раствор етс  в спиртах, таких как метанол, этанол, и нерастворим в бензоле, хлороформе, ацетоне, ди этиловом эфире, этилацетате, толуоле Дигидрохлорид компонента С стабилен в водных растворах, имеющих рН от 3 до 10 в течение 146 ч.
Компонент Е.
Компонент Е, белое аморфное основное соединение, имеет следующий элементарный состав,%: углерод 54,84, водород 4,73, азот 5,26, кислород 32,67, хлор 1,72.
Гидрохлорид.компонента Е, белое аморфное соединение, имеет следующи элементарный состав,%: углерод 52,6 водород 4,59, азот 5,55, кислород 33,51, хлор 3,62.
ИК-спектр поглощени  гидрохлорида компонента С в KB г наиболее значительные максимумы поглощени  име-I .
3360
ет на следующих частотах, см
(интенсивный), 3220 (изгиб), 2900 (слабый), 1725 (слабый), 1650 (интесивный ), 1580 (умеренный), 1498 (интенсивный ), 1450 (слабый), 1419 (слбый ), 1295 (умеренный), 1205 (умеренный ), 1172 (умеренный), 1110 (слбый ), 1060 (интенсивный) и 1000 (слабый).
УФ-спектр поглощени  гидрохлорида компонента Е вы вл ет максимумы поглощени  в нейтральном метаноле 270 нм и 359 нм, в кислом метаноле 286 нм и 310 нм, в основном метанол 270 нм, 300 нм и 354 нм.
Гидрохлорид компонента Е имеет следующее характерное вращение: Ы -108,3(1, ).
Молекул рный вес гидрохлорида компонента Е, определенный при помощи титровани ,, равен примерно 201
Гидрохлорид компонента Е растворим в воде, частично растворим вспиртах , таких как метанол, этанол, и не растворим в бензоле, хлороформе , ацетоне, диэтиловом эфире, этилацетатах , толуоле и т.д. Компонент Н.
Компонент Н, белое аморфное основное соединение, имеет следующий состав,%: углерод 53,76, водород 5,32, азот 5,53, кислород 33,48, хлор 1,59.
Компонент Н имеет эмпирическую формулу в области юз-юЛ ОзвчоС Е. молекул рный вес приблизительно равен 1908.
Гидрохлорид компонента Н, белое аморфное гигроскопическое соединени Гидрохлорид компонента Н имеет следующий состав,%: углерод 53,10, водород 5,37, азот 5,35, кислород 30,12, хлор 3,78.
ИК-спектр поглощени  гидрохлорида компонента Н в КВг наиболее значительные максимумы поглощени  имею на следующих частотах, смЧ 3410 (интенсивный), 3240 (изгиб), 2940 (слабый), 1670 (интенсивный), 1630 (изгиб), 1505 (интенсивный), 1520 (интенсивный), 1470 (слабый), 1442 (слабый), 1400 (слабый), 1345 (изги 1310 (умеренный), 1225 (умеренный), 1180 (слабый), 1135 (слабый), 1080 (интенсивный) и 1020 (изгиб).
УФ-спектр, поглощени  гидрохлорида компонента Н про вл ет в кислом и нейтральном метаноле максимум поглощени  282 нм, а в основном метаноле максимум поглощени  292 нм.
Гидрохлорид компонента Н имеет следующее характерное вращение: И« -123, 5 (1, HgO).
Молекул рный вес гидрохлорида копонента Н, определенный при помощи титровани ,равен 1660.
Аминокислотный анализ гидрохлорида компонента Н указывает на то, что он содержит п ть аминокислотных остатков, одним из которых  вл етс  глицин.
Гидрохлорид компонента Н растворим в воде, частично растворим в метаноле , этаноле и не растворим в органических растворител х, таких как бензол, хлороформ, ацетон, диэтиловый эфир, этилацетат, толуол, гексан
Гидрохлорид компонента Н стабилен в течение 72 ч в водных растворах , имеет на- от 3 до 10.
Компоненты А,В,С,Е,Н, а также менее существенные компоненты F и G можно легко отделить при помощи бумажной хроматографии.
Компонент В агликон. Компонент В агликон гидрохлорид, белое аморфное соединение, имеющее следующий состав,%: углерод 54,29, водород 4,34, азот 7,40, хлор 5,02, кислород 28,95.
ИК-спектр поглощени  гидрохлорида компонента В агликона наиболее значительное поглощение имеет на следующих частотах, см: 3440 (кзгиб ), 3340 (изгиб), 3515 (интенсив .ный), 2950 (изгиб), 2910 (интенсивный ), 2840 (интенсивный), 2640 (изгиб ), 1735 (слабый), 1655 (интенсивный ), 1590 (умеренный), 1500 (интенсивный ), 1460 (интенсивный), 1378 (умеренный), 1365 (изгиб), 1298 (умеренный), 1215 (умеренный), 1155 (умеренный), 1120 (изгиб), 1105 (слабый), 1060 (слабый), 1040 (слабый ), 1008 (умеренный), 925 (слабый 875 (слабый), 765 (изгиб) и 718 (слабый).
Гидрохлорид компонента В агликон имеет молекул рный вес около 1282.
Гидрохлорид компонента В агликона имеет следующее характерное вращени СосГо , СНзОН) ,Mls-l 8° (5, СНзОН).
УФ-спектр поглощени  гидрохлорид компонента В агликона показывает в кислом, нейтральном метаноле максимум поглощени  в 282 им ( 102,62), в щелочном метаноле - в 302 нм ( 182,09)1.
Гидрохлорид компонента В агликон растворим в воде и метаноле, HQ не растворим в бензоле, хлороформе, ацтоне , дизтиловом эфире, этилацетате толуоле, гексане, ацетонитриле и диоксане.
Компоненты антибиотического комплекса А-35512  вл ютс  относительно не токсичны. Например, показатель LDjo дл  гидрохлорида компонента А составл ет 8000 мг/кг. Показатель LOjo дл  гидрохлорида компонента В у тиышей при внутрибрюшинном введени равен 1365 мг/кг, а при внутревенно введении равен ЮОО- 1250 мг/кг. Дигидрохлорид компонента С, как и
гидрохлорид компонента Е имеет сильную токсичность при внутрибрюшинном введении мышам, так LD превышает 300 мг/кг.
Антибиотический комплекс и его компоненты эффективны при применении с целью увеличени  выделени  пропионатов и тем самым увеличени  эффективности использовани  корма при применении жвачным.животным в дозах от 0,15 мг/кг до 10,0 мг/кг в день.
0 Препарат смешивают с кормом животного , но его можно использовать, например, в виде таблеток, шариков, капсул. Кажда  отдельна  единична  доза должна содержать количество анS тибиотического комплекса и его компонентов , близкое к ежедневной дозе дл  животных.
Способ по сн етс  следующими примерами .
Пример 1. Лиофилизированную
0 таблетку штамма Streptomyces candidus NRRL 8156 раствор ют в 1-2 мл стерилизованной воды и используют раствор ДД1Я прививки культуры на скошенном агаре, содержащем экстракт соло5 да дрожжей Бакто C1SP № 2.
Привитый агар в течение 7 дней выращивают при . Созревшую на агаре культуру покрывают водой (2 мл) и снимают при помощи стерильной пи0 петки с целью разрыхлени  спор. Порцию в 0,1 МП водной суспензии спор используют дл  прививки другого скошенного агара ISP № 2, выращивают в течение 7 дней при 30°С. Созревшую
5 культуру заливают 5 мл воды и снимают С помощью стерильной пипетки с целью разрыхлени  спор. Порцию полученной суспензии спор (2,5 мл) используют в качестве прививочного
0 материала дл  прививки 50 мл вегетативной среды, имеющей следующий состав: соевый бульон (Trypticase) 30 г, вода (деионизированна ) 1 л. Привитую среду дл  выращивани  культуры инкубируют при 30°С в течение
5 ;48 ч в 250 миллилитровой колбе Эрленмейера на вибраторе со скоростью вращени  250 об/мин.
Полученный вегетативный медиум 0,5 мл используют дл  прививки
0 50 мл среды дл  выращивани  культуры , имекацей следующий состав: декстрин тапиоки 25,0 (г/л), глюкоза 10,0, МНдМОз 2,5; КСЕ 1,5; MgS04 1,1; FeCl2-4H2 0 0,03, tnCl2 0,03, КНгР04
5 0,1; L - глютаминова  кислота 1,0, DL - цитрулин 0,1; CaCO-j 5,0; деионизированна  вода 1л.
Привитый медиум выращивают при в течение 8-10 дней в колбе Эрленмейера объемом 250 мл на вибра0 торе .
Дл  обеспечени  большого объема прививочного материала готов т 20 мл . привитого вегетативного медиума и используют его дл  прививки 400 мл
5
среды дл  выращивани  второй стадии вегетативного роста, имеющей тот же состав, что и вегетативный медиум. Выращивание ведут в 2-литровой колбе в течение 24 ч при 32°С на вибраторе . 800 мл полученного вегетативного материала используют дл  прививки 100 л стерильного медиума. Привитый таким образом медиум используют в процессе ферментации в резервуаре объемом 165 л в течение 8-10 дней при З2с. В процессе ферментации подают стерильный воздух со скоростью 0,25 л/о/мин при посто нном перемешивании со скоростью 200 об/мин.
Пример 2. Выращенный вегетативный медиум, согласно примеру 1, можно хранить дл  дальнейшего использовани  в паровой фазе жидкого азота Дл  этого в небольшую трубку с завиичивающей крышкой помещают 2 мл среды следующего состава, %:
Глицерин 20 Лактоза 10 Вода деионизи70 рованна 
К этой среде добавл ют 2 мл вегетативного медиума, приготовленного по примеру 1, и выращивают в течение 48 ч. Полученную суспензию охлаждают , и содержат в газовой фазе в резервуаре с жидким азотом.
Перед кспользованием дл  ферментации медиум растопл ют. Дл  этого помещают во флакон, который подвергают вод ной бане с температурой 43 С. Порцию растопившегос  раствора (1 мл из флакона используют дл  прививки вегетативного медиума, объемом 50 мл имеющего тот же состав, что и медиум из примера 1. Привитый вегетативный медиум используют дл  ферментации в колбе, которую периодически взбалтывают, или. используют в качестве прививочного материала, который затем используют в процессе ферментации .
Пример 3. Ферментацию веду согласно примеру 1 с использованием среды следующего состава, г/л:
75 40
тапиоки
ый м сной
15,0 0,5 2,0 Остальное
Пример 4. 950 л культуральной жидкости с продуктами ферментации , полученной по примеру 1, фильтруют с использованием диатомой земли при рН 6,8-7,2. Полученный прозрачный фильтрат пропускают через колонку ,- содержащую 10 мл полимерного адсорбента на 100 мл фильтрата, со скоростью 150 мл/мин. Полученные
фракции исследуют на биологическую активность в отношении Sarcina lutea Биологически неактивные фракции выбрасывают . Затем колонку промывают и неактивную промывочную воду отбрасывают . -Затем колонку элюируют 50%ным водным раствором метанола (600 л) со скоростью 200 мл/мин. Элюат, содержащий антибиотический комплекс, концентрируют под вакуумом до объема 15 л, в котором содержитс  около 200 г антибиотического комплекса на 1 л.
Пример 5. Антибиотический комплекс (около 3000 г растворенного в 15 л метанола), полученный по примеру 4, подвергают хроматографии на полиамидной колонке. Затем колонку элюируют деионизированной водой со скоростью около 80-120 мл/мин.
Фракции исследуют с помощью целлюлозной тонкослойной хроматографии или бумажной хроматографии, а в качестве растворител  используют смесь н-бутаНОЛ:пиридин:уксусна  кислота: вода (15:10:3:12) и осуществл ют дополнительно биосамозапись. Sarcina Lutea.
Первые 100 л элюата отбрасывают, затем скорость потока измен ют до 1б2 мл/мин при этом отбирают фракции объемом 12 л. Этим способом отбирают двадцать 12-литровых объемов. При этом мен ют процентный состав элюирующего растворител .
На основе результатов биосамозаписи полученные объемы соедин ют и выпаривают до сухости под вакуумом. В результате получают дигидрохлорид компонента В и следующую обогащенную смесь компонентов (см. таблицу).
Пример 6. Частично очищенный дигидрохлорид компонента В (400 г), полученный в соответствии с примером 5, раствор ют в 1,2 л 50%-ого водного раствора метанола и производ т хроматографию на колонке, содержащей окись алюмини , которую приготавливают следующим образом. Кислотообразующий окисел алюМини  (10 кг) перемешивают в 50%-ном водном растворе метанола. После того, как смесь отстоитс , образующийс  сверху раствор сливают и удал ют. Окись алюмини  снова перемешивают с 50%-ным водным раствором метанола, а затем помещают в колонну. Затем колонну, содержащую окись алюмини , промывают 50%-ным водным раствором метанола до тех по пока не по витс  прозрачный элюат. Колонну элюируют 50%-ным водным рас вором метанола со скоростью 810 мл/мин. При этом отбирают фракции объемом 240-300 мл. Фракции следуют согласно примеру 5. На основании пол ченных данных, фракции объедин ют. При этом выход очищенного дигидрохло рида компонента В в зависимости от номера фракции распредел ют следующим образом: фракции 17-21 - 9,6 г, 32-20 - 72 г, 30-37 - 117 г. Каждую из этих фракций кристаллизуют из концентрированного 50%-ого водного раствора метанола при 4°С. Очищенный таким образом гидрохлорид компонента В содержит около 4,6% хлора. Раствор дигидрохлорида компонента В в 60%ном водном растворе диметилформамида имеет рН около 6,5. Пример 7. 1г очищенного дигидрохлорида компонента В по примеру 6 раствор ют в 40 мл воды и про пускают через ионообменную колонку размером 2,5- 18 см со скоростью 0,5 мл/мин. Затем элюируют колонку деионизированной водой, 5 мл началь ного элюата отбрасывают. Последующие 50 мл элюата выпаривают до сухости под вакуумом и получают 0,76 г компонента В, не имеющего ионов хлора в виде белого порошка . Содержание хлора 1,59%, Раствор этого компонента в 66%-ном растворе диметилформамида имеет рН 9,13. Пример 8, 1г частично очищенного дигидрохлорида компонента А полученного по примеру 5 (фракции 1-10) , раствор ют в 5 мл 50%-ого вод ного раствора метанола. Затем производ т хроматографию на колонке разме ром 3 16 см, содержащей кислотообразующую -окись алюмини . Колонку элюируют 50%-ным водным раствором ме танола со скоростью потока 0,5 мл/ми Собирают фракции, имеющие объем 5 мл, и анализируют согласно примеру 5. На основе этих тестов фракции 7-15 смешивают, концентрируют при пониженном давлении до небольшого объема, лиофилизируют и получают 0,3 г дигидрохлорида компонента А с содержанием хлора 4,71%, Пример 9, 200 мл дигидрохлорида компонента А, полученного по примеру 8, раствор ют в 10 мл воды. Этот раствор пропускают через ионообменную колонку размером 1,5- 10 см со скоростью 0,5 мл/мин, затем колонку элюируют деионизирован ной водой, 10 мл первоначального элюата отбрасывают, последующие 20 мл элюата концентрируют до неболь шого объема при пониженном давлении , лиофилизируют и получают 115 мг, компонента А, не содержащего ионов хлора. Пример 10. Частично очищенный дигидрохлорид компонента С (15 г), полученный по примеру 5 (фракции 25-31), раствор ют в 40 мл деионизированной воды, пропускают через полиамидную колонку размером 4 115 см . Перед использованием колонку в течение 15 ч промывают водой, затем колонку элюируют деионизированной водой со скоростью 3 мл/мин. 250 мл первоначального элюата отбрасывают, затем собирают фракции объемом 24 мл. Полученные фракции исследуют с помощью тонкослойной хроматографии биосамозаписью. При этом используют целлюлозные пластинки дл  тонкослойной хроматографии и растворитель - вторичный бутанол:пиридин: уксусна  кислота:вода в соотношении 10:10:3:8 и бактерии штамма BaciP us subt i Ei s, Ha основе полученных результатов , смешивают фракции 1-33, концентрируют под вакуумом до объема 150 мл и лиофилизируют. Две дополнительные серии частично очищенного дигидрохлорида компонента С исследуют с помощью хроматографии при тех же услови х . При этом каждый раз фракции 1-33 смешивают, концентрируют под вакуумом до объема 150 мл и лиофилизируют. Три лиофилизированных образца, полученных на трех колонках смешивают и получают 12,3 г частично очищенного дигидрохлорида компонента С. Далее его очищают с помощью хроматографии на другой полиамидной колонке, но отбор фракций осуществл ют объемом 15 мл, при этом скорость потока 1 мл/мин. Полученные фракции вновь исследуют, как описано выше. Фракции 36-58 смешивают, концентрируют под вакуумом до объема 150 мл и лиофилизируют , получают 5,3 г дигидрохлорида компонента С дополнительно очищенного . Окончательную очистку целевого продукта осуществл ют с помощью хроматографии на колонке размером 5 41 см, содержащей кислотообразующую окись алюмини . Подготовленную колонку промывают 50%-ным водным раствором метанола. После промывки через колонку пропускают раствор, содержащий 5,3 г компонента С в 30 мл 50%-дго водного раствора метанола. Затем кйлонку элюируют 50%-ным водным раствором метанола со скоростью 1 мл/мин и отбирают фракции объемом 12 мл, которые затем исследуют, как описано выше. Фракции 22-74 смешива-. ют, концентрируют под вакуумом до объема 250 мл,лиофи 1изируют и получают 3,86 г дигидрохлорида компонента С.
Пример 11. 200 мг дигидрохлорида компонента С,-полученного по примеру 10, обрабатывают с помо ью хроматографии на слабо основной ионообменной смоле, согласно примеру 9. Получают 156 мг компонента С, не содержащего ионов хлора {содержание хлора 1,9%).
Пример 12. 8,1 г частично очищенного компонента Е, полученного по примеру 5 (фракции 32-44), раствор ют и 40 мл деиониэированной воды. Полученный раствор пропускают через полиамидную колонку размером 5-НО см, подготовленную согласно примеру 10. Затем колонку промывают в течение 16 ч водой, После прохождени  через колонку раствора, содержащего компонент Е, колонку элюируют деионизированной водой со скоростью 20 мл/мин и производ т отбор фракций, имеющих объем 20 мл. Во врем  отбора 118 фракции элюирующий раствор мен ют на 50%-ный водный раствор метанола и полученные фракции исследуют согласно примеру 10.
Фракции 148-195, содержащие компонент Е, смешивают, концентрируют при пониженном давлении до объема 150 мл, лиофилизируют и получают 2 ,7 г гидрохлорида компонента Е.
615 мг частично очищенного препарата раствор ют в 50%-ном водном растворе метанола (5 мл) и пропускают через колонку размером 1,5-50 см содержащую кислотообразующую окись алюмини , и промывают 50%-ным вод- , ным раствором метанола до получени  прозрачного элюата. Затем колонку элюируют 50%-ным водным раствором метанола со скоростью 1 мл/мин и производ т отбор фракций объемом 10 мл.
Фракции исследуют, как описано ВЕзПие, смешивают фракции 5-8, концентрируют при пониженном давлении до объема 10 мл, затем добавл ют 50 мл деионизированной воды и полученный раствор лиефилизируют. Получают 480 мг гидрохлорида компонента Е.
Пример 13. Гидрохлорид компонента Е (200 мг, полученный в соответствии с примером 12, подвергают хроматографии над слабоосновной ионообменной смолой, согласно примеру 9. Получают 170 мг компонента Е, не содержащего ионов хлора ( содержание ионов хлора 1,72%).
Пример 14. Частично очищенный гидрохлорид компонента Н (30 г), полученный в соответствии с примером 5 (фракции 1-10} , раствор ют в ivwнимальном количестве раствора метанол:вода (7:3). Полученный раствор адсорбируют на колонке размером 3 ёО см, содержа аий кислотообразугощую окись алюмини , колонку наполн ют метанолом и элюируют до тех
пор, пока элюат не станет прозрачным . Далее колонку элюируют метанолом со скоростью 4 }лл/мнн и отбирают фракции объемом 24 мл. При отборе 59 фракций элюирующий растворитель измен ют на раствор метанолвода (1:1). Далее фракции подвергают тонкослойной хроматографии с использованием растворител  хлороформ метанол:гидроокись аммони  (2:3:1) и исследуют в отношении BaciPJus subtiEis с помощью биозаписи при щелочных услови х. Фракции 51-118 смешивают и выпаривают под вакуумом получают 6,4 г очищенного гидрохлорида компонента Н.
Пример 15. 200 мг гидрохлорида компонента Н, полученного по примеру 14, хроматографируют на слабо основной ионообменной смоле по примеру 9. Получают 143 мг компонента Н, не содержащего ионов хлора (концентраци  хлора 1,59%).
Пример 16. 5 дигидрохлорида компонента в, полученного по примеру 6, раствор ют в 200 мл воды . Полученный раствор подкисл ют 14 мл 4Н раствора НСЕ и подвергают его дефлегмированию в течение 2 ч. Затем раствор охлаждают, выпаривают под вакуумом до 3/4 первоначального объема. Затем полученный раствор покапельно добавл ют в бН сол ную кислоту до тех пор, пока не закончитс  образование осадка. Полученный осадок отдел ют и сушат. Получают 3,56 г неочищенного гидрохлорида А-35512 агиклона В. Фильтрат концентрируют и анализируют. Он содержит глюкозу, фруктозу, маннозу и рамнозу.
Неочищенный агликон дополнительно очищают с помощью хроматографии на окиси алюмини , промытый кислото с использованием в качестве растворител  раствора вода:метанол (1:9). Элюированные фракции, содержащие агликон, смешивают и выпаривают под вакуумом, получают 398 мг частично очищенного препарата. 100 мг частично очищенного препарата подвергают хроматографии на полиамиде и элюируют водой. После проведени  анализа Элюированные фракции смешивают и лиофилизируют. Получают 64 мг очищенного гидрохлорида агликона общий выход 5,08% от исходного компонента В.

Claims (1)

  1. пример 17. 9,0мг гидрохлорида компонента В агликона, полученного по примеру 16, раствор ют в 30 мл смеси метанол:вода (1:1). Полченный раствор нейтрализуют при помощи ионообменной смолы. Полученный раствор перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем смолу удал ют фильтрацией. Фильтрат кс: ттентрируют под вакуумом при температуре по крайней мере до объема, составл ющего по-. ловину исходного, затем лиофилизируют , получают 68 мг компонента В агликона в форме свободного основани . Предлагаемый способ позвол ет по лучить антибиотический комплекс, использование которого позволит повысить эффективность усвоени  пищи у жвачных животных и домашних птиц 18 Формула изобретени  Способ получени  антибиотического комплекса, отличающийс  тем, что штамм Streptomyces candidus NRRL 8156 выращивсоот на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, в аэробных услови х с последующим выделением комплекса и/или разделением его на отдельные компоненты.
SU772485600A 1976-05-24 1977-05-23 Способ получени антибиотического комплекса а-35512 SU751332A3 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US05/689,277 US4058306A (en) 1976-05-24 1976-05-24 Detack and stripping system

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU751332A3 true SU751332A3 (ru) 1980-07-23

Family

ID=24767750

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU772485600A SU751332A3 (ru) 1976-05-24 1977-05-23 Способ получени антибиотического комплекса а-35512

Country Status (8)

Country Link
US (1) US4058306A (ru)
JP (1) JPS52145226A (ru)
CA (1) CA1104195A (ru)
DE (1) DE2723426C2 (ru)
FR (1) FR2353086A1 (ru)
GB (1) GB1579893A (ru)
NL (1) NL7705611A (ru)
SU (1) SU751332A3 (ru)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6124992Y2 (ru) * 1978-04-18 1986-07-28
JPS5568151U (ru) * 1978-10-31 1980-05-10
US4561756A (en) * 1984-12-13 1985-12-31 Xerox Corporation Short paper path copy sheet transport system
US4905052A (en) * 1989-03-06 1990-02-27 Xerox Corporation Sheet transport velocity mismatch compensation apparatus
US5515151A (en) * 1994-08-29 1996-05-07 Xerox Corporation Apparatus for controlling image disturbing effects of a sheet motion opposing force
US5608511A (en) * 1996-01-11 1997-03-04 Xerox Corporation Vacuum transport apparatus
DE102004054044B4 (de) * 2004-11-05 2016-06-16 Manroland Web Systems Gmbh Verfahren und Vorrichtung zum Transport von flächigen Produkten

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3506259A (en) * 1967-10-12 1970-04-14 Xerox Corp Electrostatic sheet detacking apparatus
US3578859A (en) * 1969-07-03 1971-05-18 Xerox Corp Mechanical stripping apparatus
DE2045547A1 (de) * 1970-09-15 1972-03-16 Agfa Gevaert Ag Elektrofotografisches Kopiergerät
BE788869A (fr) * 1971-09-16 1973-03-15 Xerox Corp Appareils d'enlevement de feuilles par depression
JPS4931335A (ru) * 1972-07-19 1974-03-20
BR7308266D0 (pt) * 1972-10-30 1974-07-25 Xerox Corp Aparelho aperfeicoado para remover folhas de copia contendo imagens eletrostaticas reveladas
US3804401A (en) * 1972-10-30 1974-04-16 Xerox Corp Pneumatic stripping apparatus
NL7401233A (ru) * 1973-02-26 1974-04-25
US3885785A (en) * 1973-12-20 1975-05-27 Xerox Corp Vacuum transport

Also Published As

Publication number Publication date
JPS6252299B2 (ru) 1987-11-04
GB1579893A (en) 1980-11-26
FR2353086A1 (fr) 1977-12-23
FR2353086B1 (ru) 1983-06-17
DE2723426C2 (de) 1985-10-24
US4058306A (en) 1977-11-15
NL7705611A (nl) 1977-11-28
JPS52145226A (en) 1977-12-03
CA1104195A (en) 1981-06-30
DE2723426A1 (de) 1977-12-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0182315A2 (en) Novel antibiotic NK84-0218 pharmaceutical compositions containing it and process for the production of the same
CZ390592A3 (en) Process for preparing 4,5-dihydrogendanamycin and hydroquinone thereof and the use of such compounds
JPH0452280B2 (ru)
GB2147582A (en) Bbm-2478 antibotic complex
SU751332A3 (ru) Способ получени антибиотического комплекса а-35512
FI58791B (fi) Foerfarande foer framstaellning av en deoxinarasinantibiotikumblandning vilken aer antibakteriell och cocci motarbetande och bidrar till tillgodogoerande av foder hos idisslare
US4229535A (en) Method for preparing multhiomycin
US3674866A (en) Moenomycin and process for producing same
US4670260A (en) Antibiotic for animal feeds
SU833166A3 (ru) "Способ получени агликона антибиотческого а-35512 фактора в4
US4393056A (en) Antibiotics tetronolide compounds and process for production thereof
FR2547594A1 (fr) Nouveaux complexes antitumoraux antibiotiques et leur procede de production par culture d'une souche d'actinomadura verrucosospora
SU1296009A3 (ru) Штамм @ @ 15118-продуцент антибиотического комплекса и способ получени антибиотического комплекса
US4301248A (en) Fermentation process for making rachelmycin
SU741804A3 (ru) Способ получени антибиотика
GB2028806A (en) Streptomycin antibiotics
CS207693B2 (en) Method of making the antibiotic a 40104
US5064855A (en) Acid polycyclic ether antibiotic
US4296101A (en) Antibiotic kristenin
DE68903507T2 (de) Antitumor-antibiotika.
US2806024A (en) Erythromycin b and process for production thereof
EP0025713B1 (en) An anthracycline antibiotic and a pharmaceutical composition containing the same
JPS6317834B2 (ru)
SU440847A1 (ru) Способ получения антибиотика
DK142061B (da) Fremgangsmåde til fremstilling af antibiotikum A-28086-kompleks, dets komponenter faktor A, faktor B og faktor D eller salte eller estere deraf.