SU891775A1 - Способ получени пектолитического ферментного препарата из @ - Google Patents
Способ получени пектолитического ферментного препарата из @ Download PDFInfo
- Publication number
- SU891775A1 SU891775A1 SU792881439A SU2881439A SU891775A1 SU 891775 A1 SU891775 A1 SU 891775A1 SU 792881439 A SU792881439 A SU 792881439A SU 2881439 A SU2881439 A SU 2881439A SU 891775 A1 SU891775 A1 SU 891775A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- activity
- enzyme
- extract
- pectolytic
- aspergillus
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 230000002351 pectolytic effect Effects 0.000 title claims description 8
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 title claims 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 30
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 30
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Natural products CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 6
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N n-propyl alcohol Natural products CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 241000892910 Aspergillus foetidus Species 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 2
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 2
- 230000002879 macerating effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000007738 vacuum evaporation Methods 0.000 description 2
- UPSVYNDQEVZTMB-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1,3,5-trinitrobenzene;1,3,5,7-tetranitro-1,3,5,7-tetrazocane Chemical compound CC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O.[O-][N+](=O)N1CN([N+]([O-])=O)CN([N+]([O-])=O)CN([N+]([O-])=O)C1 UPSVYNDQEVZTMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000010410 Nogo Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010077641 Nogo Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- ZCDOYSPFYFSLEW-UHFFFAOYSA-N chromate(2-) Chemical compound [O-][Cr]([O-])(=O)=O ZCDOYSPFYFSLEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- XTLNYNMNUCLWEZ-UHFFFAOYSA-N ethanol;propan-2-one Chemical compound CCO.CC(C)=O XTLNYNMNUCLWEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- -1 isopropyl alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000002803 maceration Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕКТОЛИТИЧЕСКОГО
ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА ИЗ ASPERGILLUS FOETIDUS
Изобретение относитс к биотехнологии , в частности к Ферментной м робиологической промышленности, и может быть использовано в производстве высокоактивных ферментных препаратов мацерирующего действи из технических или частично очищенных ферментных препаратов или из их раст воров, получаемых выращиванием гриба Aspergillus foetidus. Данное изобретение решает задачу получени высокоактивных ферментов, например, из Пектофоетидина ПЮх, обладающих свойствами биохимического реактива или медицинского терапевтического средства, примен емых дл мацерировани растительных тканей. Известен способ пектоли тического ферментного препарата из AspergПlus feet i dus , заключающийс в приготовлении экстракта фермента, его концентрировании (обычно путем ультрафильтрации), внесении стабилизатора (Alg ( количестве 1-3%) в ферментсодержащий раствор и последующей его сушке распылением. Ферментный экстракт получают по .обычной методике, т.е. экстрагированием водой из поверхностной культуры гриба. , Пeктoлит iчecкa активность в экстракте составл ет 6 ед/мл, в конечном продукте 170-199 ед/мл (при влажности препарата 12-13%) ц1J и 12. Недостатком известного способа вл етс невозможность получени высокоактивного пектолитического ферментного препарата (обладающего мацерирующим действием). Цель изобр.етени - повышение активности получаемого из Aspergillus foetidus пектолитического ферментного препарата. Указанна цель достигаетс способом получени пектолитического ферментного препарата из Aspergillus foetidus, заключающимс в приготовле
НИИ экстракта фермента, его хромате графической очистке (при активности 20-50 ед/мл исходного экстракта), концентрировании с последующим выделением целевого продукта осаждением 3-3,5 объемами органического раство;рител .
Приготовление экстракта фермента заключаетс в растворении в воде Пектофоетидина П10х с активностью 100-200 ед/г в количестве 2025 весЛ в течение 12-18 ч при 3-8Рс В качестве органического растворител дл осаждени используют этиловый , пропиловый или изопропиловый спирт либо ацетон.
Хроматографическ то очистку ферментпого экстракта провод т по из- веетной методике.
Предлагаемый способ позвол ет получать пектолитический ферментный препарат с активностью до 7501200 ед/г (выход по активности 60-75% ).
Получаемые препараты, обладают мацерирующей активностью,, сопоетави ,мой (а в некоторых случа х превывтющей ) с активностью импортных препаратов , например Macerozyme R-1 Q и могут быть использованы взамен дорогосто щих импортных препаратов.
Способ осуществл етс следу ощим образом.
В качестве исходного материала используют фермент Пектофо„етидш1 П1 Ох или осадок (невысушенный) , полученный спиртовым осаждением концентрата-выт жки Пектофоетидина Их. приготовлени экстракта из Пектофоетидина П10х берут концентрацию препарата в пределах 15-30%, предпочтительно 20-25%, настаивают с водой 12-18 ч при охлалодении до 3-8 С
Готовый экстракт с пектиназной активностью 22-50 ед/мл пропускают через хроматографическую колонку, наполненную гелем Акрилекс Р-2, Р-6 собранный из колонки элзоат концентрируют , например, вакуум-выпаркой или ультрафильтрацией в 3-9 раз, предпочтительно в 4-6 раз. Из полученного концентрата раствора очищенного фермента выдел ют препарат осг1ждением 3-3,5 объемами органического растворител , например этанола изопропанола или ацетона.
Дп получени высокоактивных препаратов фермента используют культуру гриба AspergiHus foetidus или
917/5 . 4
полученные из нее препараты, iiaiii.nмер Пектофоетидин ПЮх, Нормальна работа хроматографической обеспечиваетс при условии, что фер5 ментньй HjienapaT Пектофоетидин П10х обладает активностью 100-200 ед/г и полученный из него экстракт активностью предпочтительно 40-50 ед/мл. - При этом получают препарат с активностью до 1000 ед/г и вьппе. Если концентраци Пектофоетидина ПЮх в экстракте выще 30%, то получают плохо фильтруемые и трудно центрифугируемые экстракты, непригодные дл
15 .хроматографии. При очень низких концентраци х ферментного препарата хроматографическа колонка работает неэффективно.
Хроматографию осуществл ют использу одновременное нагнетание раствора снизу и отсасьшание сверху колонки , производ т вымьшание высокомолекул рного вещества - фермента - элю ирузощим раствором, вз тым в количестве 40-;50% от полного объема колонки , со скоростью подачи его в два раза превышающей скорость подачи раствора высокомолекул рного вещества. На данной стадии очистки фермента достигаетс отделегше от низкомолекул рных примесей (солей, аминокислот, углеводов и др.). В качестве наполнител колонки используют полиакриламидные гели типа Акрилекс. Из них Акрилекс Р-2 обеспечивает наибольшую скорость процесса, быстроту регенерации и более многократное использование , С Акрилексом Р-6 получают более качественное отделение пигментов, но скорость хроматографии на этом геле в 2-3 раза ниже, чем на Акрилексе Р-2. В качестве элюирующего раствора используют воду с небольшими добавками солей или без них.
Полученный из колонки элюат, раствор очищенного фермента, по част м или целиком подвергают концентрированию . Концентрирование осуществл ют в 3-9 раз известным способом (вакуум-выпарка или ультрафильтраци ).
50 Эта стади необходима дл сниже1ш
объема жидкости, увеличени концентрации фермента и уменьшени расхода органического растворител . После концентрировани в 3-9 раз фермент
.55 может быть полиостью и без инактивации осажден ,5 объемами органического растворител , например этанола , изопропанола, ацетона. . 5 Пример 1. Дл пршотоБлени 25%-ного экстракта 0,25 кг Пектофоетидина ПЮх с активностью 120 ед/г, полученного с Рарсказовского биохимического завода, смешивают с 0,75 л воды и оставл ют в холодильнике (3-8 с) сто ть в течение 16 ч. Центрифугированием отдел ют нерастворившуюс часть и получают 0,75 л экстрак та. Весова концентраци экстракта 0,5 л фракции упаривают на роторном испарителе при температуре 40 С и получают 0,078 л концентрата с активностью 265 ед/мл, выход количественный . Степень концентрировани 6,4 раза, К 0,078 л концентрированного элюа та при 0-5 С добавл ют 0,23 л (3 объ ема) этанола, предварительно охлажденного до 0-5 С, перемешивают 15 мин, осадок отдел ют центрифугированием при 2500 об/мин (10 мин). Осадок высушивают в вакууме. Выход 11,2 г, активность 1200 ед/г, выход по активности на стадии концентрировани спиртового осаждени и высушивани 75%. Общий выход пектиназы в расчете на исходный Пектофоетидин П10х составл ет 60%. Пример 2. Дл приготовлени 20%-ного экстракта 0,2 кг пектофоетидина ПЮх с активностью 204 ед/г полученного с Рассказовского биохимического завода, смешивают с 0,8 л воды и оставл ют на 17 ч при 5 С, центрифугируют в течение 45 мин при 2500 об/мин,получают экстракт объем 0,65 л с активностью около 50 ед/мл Весь экстракт ввод т в колонку (6,3x1 м) с гелем Акрилекс Р-2 и собирают две фракции объемом: I 1 ,0 л, 1-0,2 л. Фракцию 11 лиофилизируют и получают 7 г препарата с 5 по отношению к исходному ферментному препарату составл ет 25%, активность в экстракте равна 36 ед/мл, общий выход на стадии составл ет 90%. 0,68 л экстракта пропускают через колонку с гелем Акрилекс Р-2 (диаметр колонки 10 см, высота около 100 см) в соответствии с известным способом. Собирают три фракции. Результаты показаны в табл.1. Таблица 1 активностью-более 2000 ед/г. Фракцию 1 концентрируют упариванием в 4,4 раза до объема 0,23 л. Концентрат дел т на три части по 0,076 л кажда и из каждой части выдел ют препараты, добавл этиловый, пропиловый и изопропиловый спирты к каждой части соответственно. Осаждение фермента спиртами осуществл ют следующим образом. К охлажденному до 5°С концентрату (0,076 л) добавл ют при перемешивании 0,18 л (3,5 объема J спирта, охлажденного до температуры (-5) (-15)с. Смесь перемешивают и через 10-15 мин центрифугируют. Все три препарата имеют вес около 2,7 г каждый и их активность в пределах 750-850 ед/г. Наиболее светлый осадок получаетс с этиловым спиртом. Пример 3. Приготовление экстракта и хроматографию на колонке с Акрилексом Р-2 осуществл ют так же, как в примере 1. Далее 0,95 л элюата с активностью 10160 ед/л раздел ют на две части 0,18 и 0,77 л соответственно. Первую часть подвергают ультрафильтрации через мембрану М-20 (Амикон) под давлением 6,7 атм до объема 0,036 л в концентрате (кратность концентрировани 5) , из которого фермент осаждают добавлением трех объемов
Claims (2)
1. Авторское свидетельство СССР №659613, кл. С 12 0 13/10, 1976 (прототип) .
1. Способ получения пектолитичес25 кого ферментного препарата из Aspergillus foet i dus, предусматривающий приготовление экстракта фермента и его концентрирование, отличающийся тем, что, с целью повыше-
30 ния активности целевого продукта, экстракт фермента с активностью 2050 ед/мл перед концентрированием подвергают хроматографической очистке, а целевой продукт выделяют из 35 ферментного концентрата путем осаждения 3-3,5 объемами органического растворителя.
2. Способ по п.1,отличаю40 щ и й с я тем, что экстракт фермента готовят растворением в воде Пектофоетидина ПЮх с активностью 100200 ед/г в количестве 20-25 вес.% в течение 12-18 ч при 3-8°С.
43 3. Способ поп.1,отличающ и й с я тем, что в качестве органического растворителя используют этиловый, пропиловый или изопропиловый спирт или ацетон.
р Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
. 2. Авторское свидетельство СССР №679588, кл. С 07 G 7/02, 1977. Тираж 531 , Подписное
Филиал ППП Патент, г.Ужгород, ул.Проектная,4
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU792881439A SU891775A1 (ru) | 1979-12-29 | 1979-12-29 | Способ получени пектолитического ферментного препарата из @ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU792881439A SU891775A1 (ru) | 1979-12-29 | 1979-12-29 | Способ получени пектолитического ферментного препарата из @ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU891775A1 true SU891775A1 (ru) | 1981-12-23 |
Family
ID=20877281
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU792881439A SU891775A1 (ru) | 1979-12-29 | 1979-12-29 | Способ получени пектолитического ферментного препарата из @ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU891775A1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2195492C2 (ru) * | 2000-09-04 | 2002-12-27 | Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения РАН | Способ получения пектолитического ферментного препарата |
| RU2253676C2 (ru) * | 2003-07-09 | 2005-06-10 | Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук | Способ получения полигалактуроназного ферментного препарата |
-
1979
- 1979-12-29 SU SU792881439A patent/SU891775A1/ru active
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2195492C2 (ru) * | 2000-09-04 | 2002-12-27 | Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения РАН | Способ получения пектолитического ферментного препарата |
| RU2253676C2 (ru) * | 2003-07-09 | 2005-06-10 | Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук | Способ получения полигалактуроназного ферментного препарата |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103159864B (zh) | 一种黑果枸杞多糖的分离纯化方法及分离得到的五种多糖 | |
| WO2015103974A1 (zh) | 麦角硫因的提取及纯化方法 | |
| CN103910809B (zh) | 山药多糖的分离纯化方法 | |
| US4140578A (en) | Method of producing polysaccharides | |
| CN114105747A (zh) | 一种提高姜黄素提取率和纯化效果的方法 | |
| CN112725398A (zh) | 一种具有辅助降血糖功能的豌豆肽及其制备方法 | |
| CN116240256B (zh) | 一种人参糖肽及其制备工艺 | |
| CN106866834A (zh) | 一种制备高效定制分子量的褐藻糖胶的方法及其应用 | |
| CN113106138A (zh) | 一种从香菇中提取分离抗肿瘤活性蛋白的制备方法 | |
| CN108265092A (zh) | 一种具有优良抗氧化活性的香菇寡糖及制备方法 | |
| SU891775A1 (ru) | Способ получени пектолитического ферментного препарата из @ | |
| JP3806693B2 (ja) | 大豆加工副産物からピニトールを高収率で回収する方法 | |
| CN112457377A (zh) | 美洲大蠊多肽及其应用 | |
| CN106923350A (zh) | 一种用玉米须制备水溶性膳食纤维的方法 | |
| CN111718428A (zh) | 一种利用铁皮石斛发酵液制备水溶性多糖的方法 | |
| Thuy et al. | Deproteinization in purification of exopolysaccharide from Ophiocordyceps sinensis olive oil-stimulated culture. | |
| CN114671960B (zh) | 玉米须多糖的制备方法和在降血糖产品中的应用 | |
| CN103694367A (zh) | 一种具有抗氧化活性文蛤多糖的提取及应用方法 | |
| KR100753982B1 (ko) | 캐롭시럽으로부터 피니톨을 고수율로 회수하는 방법 | |
| CN118186037B (zh) | 一种小分子透明质酸及其制备方法与应用 | |
| CN117904242B (zh) | 一种湖羊体内羊胎素多肽及其在免疫功能调节中的用途 | |
| CN114276468B (zh) | 一种天然成分和在美白并增加皮肤弹性中的应用 | |
| RU2186848C1 (ru) | Способ выделения супероксиддисмутазы | |
| LU504280B1 (en) | Extraction process for rutin hydrolase from fresh s. japonicum bud | |
| CN118979034B (zh) | 一种高纯度小分子鱼精DNA-Na原料及制备方法 |