TH2101007770A - กรรมวิธีสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของแลคโต-n-นีโอเตตระโอส - Google Patents

Abstract

DEPCT65 03/03/2565 สิ่งที่ถูกเปิดเผยคือกรรมวิธีสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของ LNnT (แลคโต-N-นีโอเตตระโอส) จากอาหารเหลวเลี้ยงเชื้อการหมัก, กรรมวิธีประกอบรวมด้วยการนำ อาหารเหลวเลี้ยงเชื้อการหมักไปสู่ขั้นตอนแรกของการกรองด้วยเมมเบรน, ด้วยวิธีนี้จึงจัดเตรียม สารละลายที่กรองได้, สารละลายที่กรองได้ดังกล่าวคือการกำหนดเป้าหมายไปยังขั้นตอนที่สอง ของโครมาโตกราฟีของมูฟวิ่ง เบดที่กระตุ้น, ที่ได้รับสารละลายที่บริสุทธิ์ของสิ่งดังกล่าว, ต่อจากนั้นการกำหนดเป้าหมายสารละลายที่บริสุทธิ์นี้ไปสู่ขั้นตอนที่สามของการตกผลึก, ที่ได้รับ ผลึกที่มี LNnT ของสิ่งที่สนใจ, และการกำหนดเป้าหมายผลึกไปยังขั้นตอนที่สี่และสุดท้าย ของการทำให้แห้ง, ด้วยวิธีนี้จึงจัดเตรียมผงที่บริสุทธิ์สูงของ LNnT ----------------------------------------------------------- DEPCT65 การเปิดเผยเป็นกระบวนการสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของ LNnT (แลคโต-N-นีโอ เตตร้าโอส) จากน้ำซุปสำหรับการหมัก กระบวนการนี้ประกอบด้วยการนำน้ำซุปสำหรับการหมัก ไปสู่ขั้นตอนแรกของการกรองเมมเบรนด้วยเหตุนี้จึงจัดให้มีสารละลายที่กรองแล้ว สารละลาย ที่กรองนั้นจะต้องถูกกรองเป็นวินาที ขั้นตอนของโครมาโตกราฟีแบบเคลื่อนย้ายเบดจำลอง ได้ สารละลายบริสุทธิ์ของพวกมัน จากนั้นจึงนำสารละลายบริสุทธิ์นี้ไปยังขั้นตอนที่สามของการตกผลึก ได้ผลึกที่มี LNnT ที่น่าสนใจ และทำให้ผลึกอยู่ในขั้นตอนที่สี่และขั้นตอนสุดท้ายของการทำให้แห้ง ด้วยเหตุนี้จึงให้ค่า LNnT สูง ผงบริสุทธิ์ของ LNnT -----------------------------------------------------------

Claims (15)

DEPCT65 03/03/2565

1. กรรมวิธีสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของ LNnT (แลคโต-N-นีโอเตตระโอส) จาก อาหารเหลวเลี้ยงเชื้อการหมัก, กรรมวิธีประกอบรวมด้วย: - การจัดเตรียมอาหารเหลวเลี้ยงเชื้อการหมักซึ่งมี LNnT, ชีวมวล, ส่วนประกอบ อาหาร, สิ่งปนเปื้อนและคาร์โบไฮเดรทที่นอกเหนือจาก LNnT; - การกำหนดเป้าหมายอาหารเหลวเลี้ยงเชื้อการหมักต่ออย่างน้อยที่สุดหนึ่ง ขั้นตอนการกรองด้วยเมมเบรนโดยการใช้เมมเบรนการกรองที่ละเอียดสูงมาก, ด้วยวิธีนี้จึงจัดเตรียมสารละลายที่กรองได้ที่มี LNnT; - การกำหนดเป้าหมายสารละลายที่กรองได้ต่ออย่างน้อยที่สุดหนึ่งขั้นตอน โครมาโตกราฟีของมูฟวิ่ง เบดที่กระตุ้น, ด้วยวิธีนี้จึงจัดเตรียมสารละลาย ที่บริสุทธิ์ซึ่งมี LNnT; - การกำหนดเป้าหมายสารละลายที่บริสุทธิ์ต่ออย่างน้อยที่สุดหนึ่งขั้นตอน การตกผลึก, ด้วยวิธีนี้จึงจัดเตรียมมวลผลึก; และ - การกำหนดเป้าหมายมวลผลึกดังกล่าวต่ออย่างน้อยที่สุดหนึ่งขั้นตอนของ โฮโมจีไนเซชัน, ด้วยวิธีนี้จึงจัดเตรียมที่โฮโมจีไนซ์และที่แห้งบริสุทธิ์ของ LNnT; โดยที่การเตรียมที่บริสุทธิ์มี LNnT ที่มีความบริสุทธิ์ของ มากกว่าหรือเท่ากับ 90%

2. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1, โดยที่ขั้นตอนการกรองด้วยเมมเบรนคือการกรอง ที่ละเอียดสูงมาก, โดยการใช้เมมเบรนซึ่งมีการตัดออกน้ำหนักโมเลกุลของระหว่าง 0.2 และ 3.5 กิโลดาลตัน

3. กรรมวิธีตามข้อใดๆของข้อถือสิทธิก่อนหน้านี้, โดยที่เมมเบรนมีการตัดออก น้ำหนักโมเลกุลของระหว่าง 0 2 และ 2.0 กิโลดาลตัน

4. กรรมวิธีตามข้อใดๆของข้อถือสิทธิก่อนหน้านี้, โดยที่เมมเบรนมีการตัดออก น้ำหนักโมเลกุลของระหว่าง 0.2 และ 1.0 กิโลดาลตัน

5. กรรมวิธีตามข้อใด ๆของข้อถือสิทธิก่อนหน้านี้, โดยที่สารละลายที่กรองได้ ที่ได้รับจากขั้นตอนการกรองด้วยเมมเบรนมี LNnT ที่มีความบริสุทธิ์ของมากกว่า 60%, มากกว่า 65%, หรือมากกว่า 70%

6. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1, โดยที่ขั้นตอนโครมาโตกราฟีของมูฟวิ่ง เบด ที่กระตุ้นประกอบรวมด้วย i) อย่างน้อยที่สุด 4 คอลัมน์, ที่ให้ผลดีอย่างน้อยที่สุด 8 คอลัมน์, ที่ให้ผลดี มากกว่าอย่างน้อยที่สุด 12 คอลัมน์, โดยที่อย่างน้อยที่สุดหนึ่งคอลัมน์ประกอบ รวมด้วยเรซินแลกเปลี่ยนประจุบวกอ่อนหรือแรง, ที่ให้ผลดีเรซินแลกเปลี่ยนประจุ บวกใน รูปแบบ H+, รูปแบบ Na+, รูปแบบ K+ หรือรูปแบบ Ca2+; และ/หรือ ii) สี่โซน I, II, III และ IV ที่มีอัตราการไหลที่แตกต่างกัน; และ/หรือ iii) ตัวชะที่ประกอบรวมด้วยหรือที่ประกอบด้วยน้ำ, ที่ให้ผลดีเอทธานอลและน้ำ, ที่ให้ผลดีมากกว่า 5-15 % โดยปริมาตรเอทธานอลและ 85-95 % โดยปริมาตร น้ำ, ที่ให้ผลดีมากที่สุด 9- 11 % โดยปริมาตรเอทธานอลและ 89-91 % โดย ปริมาตรน้ำ, iv) อุณหภูมิการปฏิบัติการของ 15 ถึง 60 องศาเซลเซียส, ที่ให้ผลดี 20 ถึง 55 องศาเซลเซียส, ที่ให้ผลดีมากกว่า 25 ถึง 50 องศาเซลเซียส

7. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1 และ 6, โดยที่ขั้นตอนโครมาโตกราฟีของมูฟวิ่ง เบดที่กระตุ้นประกอบรวมด้วย i) สี่โซน I, II, III และ IV ที่มีอัตราการไหลที่แตกต่างกัน, โดยที่อัตราการไหล ที่ให้ผลดีคือ 22-32 มิลลิลิตร/นาทีในโซน 1, 17-23 มิลลิลิตร/นาทีในโซน II, 18-25 มิลลิลิตร/นาทีในโซน III และ/หรือ 14-20 มิลลิลิตร/นาทีในโซน IV; และ/หรือ ii) อัตราการใส่ของ 0.5-4 มิลลิลิตร/นาที, ที่ให้ผลดี 2 มิลลิลิตร/นาที; และ/หรือ iii) อัตราการไหลตัวชะของ 6-12 มิลลิลิตร/นาที, ที่ให้ผลดี 8 มิลลิลิตร/นาที; และ/หรือ iv) เวลาการเปลี่ยนของ 14-20 นาที, ที่ให้ผลดี 16-18 นาที, ที่ให้ผลดีมากกว่า 17 นาที ที่ให้ผลดี, อย่างน้อยที่สุดหนึ่งของคอลัมน์ประกอบรวมด้วย 0.1 ถึง 5000 กิโลกรัมของเรซินแลกเปลี่ยนประจุบวก, ที่ให้ผลดี 0.2 ถึง 500 กิโลกรัม ของเรซินแลกเปลี่ยนประจุบวก, ที่ให้ผลดีมากกว่า 0.5 ถึง 50 กิโลกรัมของ เรซินแลกเปลี่ยนประจุบวก, ที่ให้ผลดีมากที่สุด 1.0 ถึง 20 กิโลกรัมของเรซินแลก เปลี่ยนประจุบวก

8. กรรมวิธีตามข้อใด ๆของข้อถือสิทธิก่อนหน้านี้, โดยที่สารละลายที่บริสุทธิ์ ที่ได้รับจากโครมาโตกราฟีของมูฟวิ่ง เบดที่กระตุ้นมี LNnT ที่มีความบริสุทธิ์ของมากกว่า 75% หรือมากกว่า 80%

9. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1, 6 ถึง 8, โดยที่สารละลายที่บริสุทธิ์ที่ได้รับจาก อย่างน้อยที่สุดหนึ่งขั้นตอนโครมาโตกราฟีของมูฟวิ่ง เบดที่กระตุ้นสามารถถูกนำไปยังอย่างน้อย ที่สุดหนึ่งขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติมอื่น ๆ โดยการใช้โครมาโตกราฟีของมูฟวิ่ง เบด ที่กระตุ้น, โดยที่สารละลายที่บริสุทธิ์ที่ประกอบรวมด้วย LNnT ที่มีความบริสุทธิ์ของ >85 %, ที่ให้ผลดี >90%; ที่ให้ผลดีมากกว่า > 93% ถูกจัดเตรียม

10. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1, โดยที่ขั้นตอนการตกผลึกประกอบรวมด้วย - การได้รับส่วนผสมของอย่างน้อยที่สุดสองโอลิโกแซคคาไรด์, ที่มีอย่างน้อยที่สุด LNnt ในความเข้มข้นของอย่างน้อยที่สุดประมาณ 1% DSC, ที่ให้ผลดีอย่างน้อยที่สุด 10% DSC, ที่ให้ผลดีอย่างน้อยที่สุด 30% DSC, และที่ให้ผลดีมากกว่าอย่างน้อยที่สุดประมาณ 50% DSC และความบริสุทธิ์ LNnT ดังกล่าวของส่วนผสมนี้คือของอย่างน้อยที่สุด ประมาณ 15%, ที่ให้ผลดีอย่างน้อยที่สุดประมาณ 25%, ที่ให้ผลดีประมาณ 40% และ ที่ให้ผลดีมากกว่าอย่างน้อยที่สุดประมาณ 60% - การตกผลึกสารละลายที่บริสุทธิ์ที่ได้รับจากขั้นตอนโครมาโตกราฟีของมูฟวิ่ง เบด ที่กระตุ้นจากอุณหภูมิตั้งต้นของอย่างน้อยที่สุดประมาณ 20-30 องศาเซลเซียส, ที่ให้ผลดี อย่างน้อยที่สุดประมาณ 30-40 องศาเซลเซียส, ที่ให้ผลดีอย่างน้อยที่สุดประมาณ 40-50 องศาเซลเซียส, และที่ให้ผลดีมากกว่าอย่างน้อยที่สุดประมาณ 50-60 องศาเซลเซียส; - การทำให้เกิดมวลที่อิ่มตัวตกผลึกโดยการทำให้เย็นลงถึงอย่างน้อยที่สุด 40-50 องศาเซลเซียส, ที่ให้ผลดีอย่างน้อยที่สุดประมาณ 30-40 องศาเซลเซียส, ที่ให้ผลดี อย่างน้อยที่สุดประมาณ 20-30 องศาเซลเซียส, ที่ให้ผลดีอย่างน้อยที่สุดประมาณ 10-20 องศาเซลเซียส, และที่ให้ผลดีมากกว่าอย่างน้อยที่สุดประมาณ 0-10 องศาเซลเซียสเพื่อ ได้รับมวลผลึกที่เป็นเนื้อเดียวกัน, - การทรีทมวลผลึกด้วยส่วนผสมของแอลกอฮอล์, ตัวทำละลาย, หรือแอลกอฮอล์ที่ผสม น้ำได้หรือตัวทำละลายและน้ำ, โดยที่แอลกอฮอล์หรือปริมาณตัวทำละลายของสารละลาย อยู่ระหว่าง 10 และ 90 % โดยปริมาตร, ที่ให้ผลดีระหว่าง 30 และ 80 % โดยปริมาตร และที่ให้ผลดีมากกว่าระหว่าง 50 และ 70 % โดยปริมาตร, เพื่อได้รับส่วนผสมของ แอลกอฮอล์หรือสารละลายที่มีตัวทำละลายและมวลผลึก; และ - อย่างน้อยที่สุดหนึ่งการล้างของแอลกอฮอล์หรือลำดับส่วนที่มีตัวทำละลายหรือ ที่มีน้ำตาลของมวลผลึกเพื่อลดปริมาณของแซคคาไรด์ที่มีมวลโมกุลที่ต่ำกว่าจากมวลผลึก

11. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1 และ 10, โดยที่การล้างของแอลกอฮอล์หรือลำดับ ส่วนที่มีตัวทำละลายหรือที่มีน้ำตาลของผลึกสามารถถูกทำซ้ำอย่างน้อยที่สุดสองครั้งเพื่อลด ปริมาณของแซคคาไรด์ที่มีมวลโมกุลที่ต่ำกว่า

12. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1, 10 และ 11, โดยที่ปริมาณของแซคคาไรด์ ที่มีมวลโมกุลที่ต่ำกว่าน้อยกว่า 10%, ที่ให้ผลดีน้อยกว่า 5% และที่ให้ผลดีมากกว่าน้อยกว่า 3%

13. กรรมวิธีตามข้อใด ๆของข้อถือสิทธิก่อนหน้านี้, โดยที่ผลึกที่ได้รับจากขั้นตอนการ ตกผลึกมี LNnT ที่มีความบริสุทธิ์ของมากกว่า 85%, มากกว่า 90% และมากกว่า 95%

14. กรรมวิธีตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1, โดยที่ขั้นตอนโฮโมจีไนเซชันสามารถถูกเลือกจาก การทำแห้งเยือกแข็ง, การทำแห้งด้วยสเปรย์, การทำแห้งด้วยลูกกลิ้งหรือลูกกลิ้งทรงกระบอก และ/หรือการทำแห้งแบบสายพานหรือสายพานสูญญากาศ

15. กรรมวิธีตามข้อใด ๆของข้อถือสิทธิก่อนหน้านี้, โดยที่ความบริสุทธิ์ของ LNnT ในการเตรียมที่บริสุทธิ์คือของ มากกว่าหรือเท่ากับ 80%, ที่ให้ผลดีของ มากกว่าหรือเท่ากับ 85%, ที่ให้ผลดีมากกว่า มากกว่าหรือเท่ากับ 90%, ที่เกี่ยวกับของแห้งของการเตรียมที่บริสุทธิ์ ----------------------------------------------------------- DEPCT65

1. กระบวนการทำให้บริสุทธิ์ของ LNnT (lacto-N-neotetraose) จากน้ำซุปหมัก กระบวนการ ประกอบด้วย: - จัดหาน้ำซุปสำหรับการหมักซึ่งประกอบด้วย LNnT สารชีวมวล ส่วนประกอบขนาดกลาง สารปนเปื้อน และคาร์โบไฮเดรตอื่นที่ไม่ใช่ LNnT - นำน้ำซุปสำหรับการหมักไปอย่างน้อยหนึ่งขั้นตอนการกรองแบบเมมเบรนโดยให้เยื่อกรอง นาโน ด้วยเหตุนี้จึงจัดให้มีสารละลายที่กรองแล้วที่มี LNnT - นำสารละลายที่กรองแล้วไปยังขั้นตอนโครมาโตกราฟีแบบเคลื่อนที่ที่จำลองขึ้นอย่างน้อย หนึ่งขั้นตอน ด้วยเหตุนี้จึงจัดให้มีสารละลายบริสุทธิ์ซึ่งมี LNnT - นำสารละลายบริสุทธิ์ไปตกผลึกอย่างน้อยหนึ่งขั้นตอนการตกผลึก ซึ่งจะทำให้ได้มวลผลึก และ - นำมวลผลึกดังกล่าวไปสู่การทำให้เป็นเนื้อเดียวกันอย่างน้อยหนึ่งขั้นตอน โดยวิธีนี้จัดให้มี LNnT ที่ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันและทำให้บริสุทธิ์ ที่ซึ่งยาเตรียมบริสุทธิ์ประกอบด้วย LNnT ที่มีความบริสุทธิ์ มากกว่าหรือเท่ากับ 90%

2. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งขั้นตอนการกรองแบบเมมเบรนคือนาโนฟิลเทรชัน โดยใช้เมมเบรนที่มีการตัดน้ำหนักโมเลกุลระหว่าง 0.2 ถึง 3.5 kDa

3. กระบวนการตามข้อถือสิทธิข้อใดๆก่อนหน้านี้ ที่ซึ่งเมมเบรนมีจุดตัดน้ำหนักโมเลกุล ระหว่าง 0 2 ถึง 2.0 kDa

4. กระบวนการตามข้อถือสิทธิข้อใดๆ ก่อนหน้านี้ ที่ซึ่งเมมเบรนมีน้ำหนักโมเลกุลตัดตอน ระหว่าง 0.2 ถึง 1.0 kDa

5. กระบวนการตามข้อถือสิทธิข้อใดๆก่อนหน้านี้ ที่ซึ่งสารละลายที่กรองที่ได้รับจากขั้นตอน การกรองแบบเมมเบรนประกอบด้วย LNnT ที่มีความบริสุทธิ์มากกว่า 60%, มากกว่า 65% หรือ มากกว่า 70%

6. กระบวนการตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1 ที่ซึ่งขั้นตอนโครมาโตกราฟีแบบเคลื่อนย้ายได้จำลอง ประกอบด้วย i) อย่างน้อย 4 คอลัมน์, อย่างพึงประสงค์อย่างน้อย 8 คอลัมน์, อย่างพึงประสงค์มากกว่า อย่างน้อย 12 คอลัมน์, ที่ซึ่งอย่างน้อยหนึ่งคอลัมน์ประกอบรวมด้วยเรซินแลกเปลี่ยนไอออนบวก ที่อ่อนหรือแรง, อย่างพึงประสงค์ เรซินแลกเปลี่ยนไอออนบวกในรูปแบบ H+, รูปแบบ Na+, แบบฟอร์ม K+-form หรือ Ca2+-; และ/หรือ ii) สี่โซน I, II, III และ IV ที่มีอัตราการไหลต่างกัน และ/หรือ iii) สารชะที่ประกอบรวมด้วยหรือประกอบด้วยน้ำ, อย่างพึงประสงค์เอทานอลและน้ำ, อย่างพึงประสงค์มากกว่า 5-15 vol.% เอทานอลและ 85-95 vol.% น้ำ, อย่างพึงประสงค์มากที่สุด 9-11 vol.% เอทานอลและ 89-91 vol.% น้ำ , iv) อุณหภูมิในการทำงาน 15 ถึง 60องศาเซลเซียส อย่างพึงประสงค์ 20 ถึง 55องศาเซลเซียส อย่างพึงประสงค์ มากกว่า 25 ถึง 50องศาเซลเซียส

7. กระบวนการตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1 และ 6 ที่ซึ่งขั้นตอนโครมาโตกราฟีแบบเคลื่อนย้ายได้ จำลองประกอบด้วย i) สี่โซน I, II III และ IV ที่มีอัตราการไหลต่างกัน โดยที่อัตราการไหลควรเป็น 22-32 มล./นาที ในโซน 1, 17-23 มล./นาที ในโซน II, 18-25 มล./นาที ในโซน III และ/หรือ 14-20 มล./นาที ในโซน IV; และ/หรือ ii) อัตราการป้อน 0.5-4 มล./นาที, อย่างพึงประสงค์ 2 มล./นาที; และ/หรือ iii) อัตราการไหลของสารชะ 6-12 มล./นาที, อย่างพึงประสงค์ 8 มล./นาที; และ/หรือ iv) เวลาในการเปลี่ยน 14-20 นาที, อย่างพึงประสงค์ 16-18 นาที, อย่างพึงประสงค์มากกว่า 17นาที อย่างพึงประสงค์, อย่างน้อยหนึ่งคอลัมน์ประกอบด้วยเรซินแลกเปลี่ยนไอออนบวก 0.1 ถึง 5000 กก., อย่างพึงประสงค์ 0.2 ถึง 500 กก. ของเรซินแลกเปลี่ยนประจุบวก, อย่างพึงประสงค์ มากกว่า 0.5 ถึง 50 กก. ของเรซินแลกเปลี่ยนไอออนบวก, อย่างพึงประสงค์มากที่สุด 1.0 ถึง 20 กก. ของเรซินแลกเปลี่ยนไอออนบวก

8. กระบวนการตามข้อถือสิทธิข้อใดๆก่อนหน้านี้ที่ซึ่งสารละลายบริสุทธิ์ที่ได้รับจาก โครมาโตกราฟีแบบเคลื่อนที่จำลองมี LNnT ที่มีความบริสุทธิ์มากกว่า 75% หรือมากกว่า 80%

9. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 1, 6 ถึง 8 ที่ ซึ่งสารละลายบริสุทธิ์ที่ได้รับจากขั้นตอน โครมาโตกราฟีแบบเคลื่อนที่ที่จำลองขึ้นอย่างน้อยหนึ่งขั้นตอนสามารถอยู่ภายใต้ขั้นตอนการทำให้ บริสุทธิ์เพิ่มเติมอีกอย่างน้อยหนึ่งขั้นตอนโดยใช้การจำลองแบบโครมาโตกราฟีแบบเคลื่อนที่ ที่ซึ่ง สารละลายบริสุทธิ์ที่ประกอบรวมด้วย LNnT ด้วยความบริสุทธิ์ >85% อย่างพึงประสงค์ >90%; ที่พึง ประสงค์มากกว่า > 93% จัดให้

10. กระบวนการตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1 ที่ซึ่งขั้นตอนการตกผลึกประกอบด้วย - ได้ของผสมของโอลิโกแซ็กคาไรด์อย่างน้อยสองชนิด ที่มีอย่างน้อย LNnt ในความเข้มข้น อย่างน้อยประมาณ 1% DSC พึงประสงค์อย่างน้อย 10% DSC อย่างพึงประสงค์ อย่างน้อย 30% DSC และอย่างพึงประสงค์มากกว่า อย่างน้อยประมาณ 50% DSC และดังกล่าว ความบริสุทธิ์ LNnT ของของผสมนี้มีอย่างน้อยประมาณ 15%, อย่างพึงประสงค์อย่างน้อยประมาณ 25%, อย่างพึง ประสงค์ประมาณ 40% และอย่างพึงประสงค์มากกว่า อย่างน้อยประมาณ 60% - การตกผลึกของสารละลายที่ทำให้บริสุทธิ์ที่ได้มาจากขั้นตอนโครมาโตกราฟีแบบเคลื่อนที่ ที่จำลองขึ้นจากอุณหภูมิเริ่มต้นที่ประมาณ 20-30องศาเซลเซียส เป็นอย่างน้อย, อย่างพึงประสงค์ อย่างน้อย ประมาณ 30-40องศาเซลเซียส, อย่างพึงประสงค์ อย่างน้อยประมาณ 40-50 องศาเซลเซียส และอย่างพึงประสงค์มากกว่า อย่างน้อยประมาณ 50-60 องศาเซลเซียส; - ปล่อยให้มวลอิ่มตัวตกผลึกโดยการทำให้เย็นลงเป็นอย่างน้อย 40-50 องศาเซลเซียส อย่างพึงประสงค์ อย่างน้อยประมาณ 30-40องศาเซลเซียส อย่างพึงประสงค์ อย่างน้อยประมาณ 20-30องศาเซลเซียส อย่างพึง ประสงค์ อย่างน้อยประมาณ 10-20 องศาเซลเซียสและอื่นๆ อย่างพึงประสงค์ อย่างน้อยประมาณ 0-10 องศาเซลเซียสเพื่อให้ได้มวลผลึกที่เป็นเนื้อเดียวกัน - การบำบัดมวลผลึกด้วยส่วนผสมของแอลกอฮอล์ ตัวทำละลาย หรือแอลกอฮอล์หรือตัวทำ ละลายและน้ำที่ผสมเมเทอร์ที่ซึ่งปริมาณแอลกอฮอล์หรือตัวทำละลายของสารละลายอยู่ระหว่าง 10 และ 90 ปริมาตร% อย่างพึงประสงค์ระหว่าง 30 และ 80 ปริมาตร% และอย่างพึงประสงค์มากกว่า ระหว่าง 50 และ 70 โดยปริมาตร% เพื่อให้ได้ของผสมของแอลกอฮอล์หรือสารละลายที่ประกอบด้วย ตัวทำละลายและมวลผลึก และ - การล้างแอลกอฮอล์หรือเศษส่วนที่ประกอบด้วยตัวทำละลายหรือน้ำตาลของมวลผลึกอย่าง น้อยหนึ่งครั้ง เพื่อลดปริมาณแซ็กคาไรด์ที่ต่ำกว่าจากมวลผลึก

11. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 1 และ 10 ซึ่งการล้างแอลกอฮอล์หรือเศษส่วน ที่ประกอบด้วยตัวทำละลายหรือน้ำตาลของผลึกสามารถทำซ้ำได้อย่างน้อยสองครั้งเพื่อลดเนื้อหาของ แซ็กคาไรด์ที่ต่ำกว่า

12. กระบวนการตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1, 10 และ 11 โดยที่เนื้อหาของแซคคาไรด์ที่ต่ำกว่านั้น น้อยกว่า 10% อย่างพึงประสงค์น้อยกว่า 5% และโดยเฉพาะอย่างยิ่งน้อยกว่า 3%

13. กระบวนการตามข้อถือสิทธิข้อใดๆก่อนหน้านี้ ที่ซึ่งคริสตัลที่ได้จากขั้นตอนการตกผลึก มี LNnT ที่มีความบริสุทธิ์มากกว่า 85% มากกว่า 90% และมากกว่า 95%

14. กระบวนการตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1 ที่ซึ่งขั้นตอนการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันสามารถเลือก ได้จากการทำให้แห้งเยือกแข็ง การทำแห้งแบบพ่นฝอย การทำแห้งด้วยลูกกลิ้งหรือดรัม และ/หรือ การทำแถบหรือแถบสุญญากาศ

15. กระบวนการตามข้อถือสิทธิข้อใดๆก่อนหน้านี้ ที่ซึ่งความบริสุทธิ์ของ LNnT ในการ เตรียมการที่ทำให้บริสุทธิ์คือ มากกว่าหรือเท่ากับ 80% อย่างพึงประสงค์ของ มากกว่าหรือเท่ากับ 85% อย่างพึงประสงค์มากกว่า มากกว่าหรือเท่ากับ 90% ในส่วนที่เกี่ยวกับวัตถุแห้งของ การเตรียมการทำให้บริสุทธิ์ -----------------------------------------------------------