Claims (11)
1. แบคทีเรียที่ผลิตแอล-ทรีโอนีนของตระกูล Escherichia, โดยที่แบคทีเรียได้ถูกดัดแปลงเพื่อ ให้การทำหน้าที่ของแอสพาร์เตท อะมิโนทรานสเฟอเรสเด่นขึ้น โดยที่ ยีนแอสพาร์เตท อะมิโนทรานส เฟอเรสมีแหล่งกำเนิดมาจากแบคทีเรียของตระกูล Escherichia เข้ารหัสโปรตีน (A) หรือ (B) ต่อไปนี้: (A) โปรตีน ที่ประกอบด้วยการเรียงตัวกรดอะมิโนที่แสดงไว้ในการเรียงตัวที่: 2 ในบัญชีการ เรียงตัว (B) โปรตีน ที่ประกอบด้วยการเรียงตัวกรดอะมิดนที่รวมถึง การหักออก, การแทนที่, การเติมใส่ หรือ การเพิ่มของกรดอะมิดนตัวหนึ่ง หรือ หลายตัวในการเรียงตัวกรดอะมิโนที่แสดงไว้ในการเรียงตัวที่: 2 ในบัญชีการเรียงตัว และ ที่ซึ่งมีการทำหน้าที่ของแอสพาร์เตท อะมิโนทรานสเฟอเรส1. L-threonine producing bacteria of the Escherichia genus, which have been modified to exhibit aspartate aminotransferase activity, where the aspartate aminotransferase gene of Escherichia genus encodes the following proteins (A) or (B): (A) a protein containing the amino acid sequence shown in sequence No. 2 in Sequence List; (B) a protein containing the amino acid sequence including the deletion, substitution, addition or addition of one or more amino acids in the amino acid sequence shown in sequence No. 2 in Sequence List, and where aspartate aminotransferase activity is present.
2. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ 1 การทำหน้าที่ของแอส พาร์เตท อะมิโนทรานสเฟอเรสถูกทำ ให้เด่นขึ้นโดยการเพิ่ม ปริมาณการแสดงออกยีนแอสพาร์เตท อะมิโนทรานสเฟอเรส2. In bacteria pursuant to claim 1, the function of aspartate aminotransferase is dominantized by increasing the expression level of the aspartate aminotransferase gene.
3. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ 1 โดยที่การทำหน้าที่ของแอส พาร์เตท อะมิโนทรานสเฟอเรส ถูกทำให้เพิ่มขึ้นโดยการเพิ่ม จำนวนชุดทำซ้ำของยีนแอสพาร์เตท อะมิโนทรานสเฟอเรส หรือ การ ดัด แปลงการเรียงตัวควบคุมการแสดงออกของยีนนั้นเพื่อให้การ แสดงออกของยีนจะถูกทำให้เด่นขึ้น3. Bacteria pursuant to claim 1, where the function of aspartate aminotransferase is enhanced by increasing the number of duplicate copies of the aspartate aminotransferase gene or by modifying the sequence of the gene's expression regulator so that its expression is dominant.
4. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ 3 โดยที่จำนวนชุดทำซ้ำถูกทำ ให้เพิ่มขึ้นโดยการแปลงพันธุ์ ของแบคทีเรียด้วยเวคเตอร์ชุด ทำซ้ำต่ำที่มียีนนั้นอยู่4. Bacteria pursuant to claim 3, where the number of repeats is increased by transforming the bacteria with a low repeat vector containing the gene.
5. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ 2 ถึง 4 ซึ่งยีนแอสพาร์เดท อะมิโนทรานสเฟอเรสมีแหล่ง กำเนิดมาจากแบคทีเรียของตระกูล Escherichia5. Bacteria pursuant to claims 2 through 4 in which the aspartate aminotransferase gene originates from bacteria of the Escherichia genus.
6. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ 5 โดยที่ยีนแอสพาร์เตท อะมิ โนทรานสเฟอเรสถอดรหัสโปรตีน (A) หรือ (B) ต่อไปนี้ ; (A) โปรตีน ที่ประกอบด้วยการเรียงตัวกรดอะมิโนที่แสดงไว้ใน การเรียงตัวที่ 2 ในบัญชีการ เรียงตัว (B) โปรตีน ที่ประกอบด้วยการเรียงตัวกรดอะมิโนที่รวมถึง การหักออก, การแทนที่, การเติม ใส่ หรือ การเพิ่มของกรดอะมิโน ตัวหนึ่ง หรือ หลายตัวในการเรียงตัวกรดอะมิโนที่แสดงไว้ใน การเรียง ตัวที่ 2 ในบัญชีการเรียงตัว และ ที่ซึ่งมีการทำ หน้าที่ของแอสพาร์เตท อะมิโนทรานสเฟอเรส6. Bacteria pursuant to claim 5 where the aspartate aminotransferase gene encodes the following proteins: (A) or (B); (A) a protein consisting of the amino acid sequence shown in sequence 2 of the sequence list; (B) a protein consisting of an amino acid sequence that includes the deletion, substitution, addition or addition of one or more amino acids in the amino acid sequence shown in sequence 2 of the sequence list and where the aspartate aminotransferase gene is activated.
7. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ 5 โดยที่ยีนแอสพาร์เตท อะมิ โนทรานสเฟอเรสประกอบด้วย DNA (a) หรือ (b) ต่อไปนี้ ; (a) DNA ที่ซึ่งประกอบด้วยการเรียงตัวนิวคลีโอไทด์ของนิว คลีโอไทด์ที่ 1 ถึง 1196 ในการเรียง ตัวที่ : 1 หรือ (b) DNA ที่ซึ่งสามารถจับคู่ผสมได้กับการเรียงตัวนิวคลีโอ ไทด์ของนิวคลีโอไทด์ที่ 1-1196 ใน การเรียงตัวที่ : 1 หรือ ตัวทดสอบที่ซึ่งสามารถถูกเตรียมจากการเรียงตัวนิวคลีโอไทด์ นั้นภายใต้สภาวะ เข้มงวด และ ถอดรหัสสำหรับโปรตีนที่มีการทำ หน้าที่ของแอสพาร์เตท อะมิโนทรานสเฟอเรส7. Bacteria pursuant to claim 5 where the aspartate aminotransferase gene contains the following DNA (a) or (b): (a) DNA containing the nucleotide sequences of nucleotides 1 through 1196 in sequence 1; or (b) DNA which is recombinant with the nucleotide sequences of nucleotides 1-1196 in sequence 1; or a test which can be prepared from that sequence under strict conditions and transcribed for an aspartate aminotransferase functional protein.
8. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ 7 โดยที่สภาวะเข้มงวดเป็น สภาวะที่ซึ่งการ ล้างถูกทำที่ 60 ํC, และ ความเข้มข้นเกลือตรงกับ 1 x SSC และ 0.1% SDS8. Bacterial infection as per claim 7, where the stringent conditions are that washing is performed at 60°C, and the salt concentration corresponds to 1 x SSC and 0.1% SDS.
9. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ 1 ถึง 8 โดยที่แบคทีเรียได้ ถูกดัดแปลงต่อไปเพื่อทำให้มีการ แสดงออกเด่นขึ้นของยีนตัว หนึ่ง หรือ มากกว่าที่ถูกเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย - ยีนthrA กลางพันธุ์ที่ซึ่งถอดรหัสสำหรับแอสพาร์โตไคเนส โฮโมเซอรีน ดีไฮโดรจิเนส ที่ทน ทานต่อการกลับมายับยั้งโดยท รีโอนีน, - ยีนthrB ที่ซึ่งถอดรหัสสำหรับโฮโมเซอรีน ไคเนส, - ยีนthrC ที่ซึ่งถอดรหัสสำหรับทรีโอนีน ซินเทส, - ยีนthtA ที่ซึ่งถอดรหัสสำหรับโปรตีนที่คาดว่าผ่านเยื่อ หุ้ม9. Bacteria pursuant to claims 1 through 8, whereby the bacteria have been further modified to express one or more genes selected from a group comprising: - a central thrA gene transcribing for aspartokine-resistant homoserine dehydrogenase, - a thrB gene transcribing for homoserine kinase, - a thrC gene transcribing for threonine synthase, - a thtA gene transcribing for a membrane-transmitting protein.
10. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ9 โดยที่แบคทีเรียนั้นได้ ถูกดัดแปลงเพื่อให้ปริมาณการแสดง ออกเพิ่มขึ้นของยีน thrA กลายพันธุ์, ยีนthrB, ยีนthrC และยีนrhtA10. Bacteria pursuant to claim clause 9, whereby the bacteria have been modified to increase the expression of the mutant thrA gene, thrB gene, thrC gene, and rhtA gene.
11. วิธีการสำหรับการผลิตแอล-ทรีโอนีน ที่ประกอบด้วยการ เพาะเลี้ยงแบคทีเรียตามข้อถือ สิทธิข้อ 1 ถึง 10 ในตัวกลาง เพาะเลี้ยงเพื่อผลิต และ สะสมแอล-ทรีโอนินในตัวกลางเพาะ เลี้ยงและ การเก็บรวบรวมแอล-ทรีโอนีนจากตัวกลางเพาะเลี้ยง นั้น11. The method for the production of L-threonine, which involves culturing the bacteria according to patents 1 through 10 in a culture medium for the production and accumulation of L-threonine in the culture medium and the collection of L-threonine from the culture medium.