Claims (25)
1. ยีนโครงสร้างที่ประกอบด้วยรหัสดีเอ็นเอสำหรับโปรตีนเอโคทอกซิน ที่มีฤทธิ์เป็นพิษต่อแมลง โดยดีเอ็นเอดังกล่าวรวมถึงส่วนรหัสลำดับกรดอะมิโนที่ แสดงไฮโมโลยีอย่างมีนัยสำคัญกับ 116 ลำดับกรดอะมิโนที่ เริ่มที่ตำแหน่ง m - 1 และขยายต่อผ่านตำแหน่ง m - 1 ในตา ราง A โดยตำแหน่งเลขที่ใช้กับลำดับโฮโมโลกัสดังกล่าวเป็น อิสระ ขึ้นกับการตัดออกหรือการเพิ่มขึ้นในลำดับดังกล่าว ด้วย ในที่ซึ่ง มีการปรับสภาพดีเอ็นเอดังกล่าวมีรหัสกรดอะ มิโนต่อไปนี้หนึ่งกรดหรือมากกว่าสำหรับที่ตำแหน่งอะมิโน อ้างอิงดังที่ได้กำหนดไว้ a ) ที่ตำแหน่ง m - 5 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Asn b ) ที่ตำแหน่ง m - 6 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Gln c ) ที่ตำแหน่ง m - 12 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Gln d ) ที่ตำแหน่ง m - 16 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Asn e ) ที่ตำแหน่ง m - 27 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Gln f ) ที่ตำแหน่ง m - 30 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Ala g ) ที่ตำแหน่ง m - 33 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Thr h ) ที่ตำแหน่ง m - 34 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Asn i ) ที่ตำแหน่ง m - 36 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Ala j ) ที่ตำแหน่ง m - 41 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Met k ) ที่ตำแหน่ง m - 95 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Fhe l ) ที่ตำแหน่ง m - 98 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Ala m ) ที่ตำแหน่ง m - 99 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Thr n ) ที่ตำแหน่ง m - 105 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Asn และ o ) ที่ตำแหน่ง m - 112 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Gly1. A structural gene containing the DNA code for the insect-toxic protein acotoxin. This DNA includes an amino acid sequence segment that exhibits significant homologous codonation of 116 amino acids beginning at position m-1 and extending through position m-1 in Table A. The positional numbers associated with this homologous sequence are independent of deletions or additions to the sequence. Where this DNA is modified, it codes for one or more of the following amino acids at the amino position. As specified by the coordinates: a) at position m-5, any naturally occurring amino acid except Asn; b) at position m-6, any naturally occurring amino acid except Gln; c) at position m-12, any naturally occurring amino acid except Gln; d) at position m-16, any naturally occurring amino acid except Asn; e) at position m-27, any naturally occurring amino acid except Gln; f) at position m-30, any naturally occurring amino acid except Ala; g) at position m-33, any naturally occurring amino acid except Thr; h) at position m-34, any naturally occurring amino acid except Asn; i) at position m-36, any naturally occurring amino acid except Ala; j) at position m-41, any naturally occurring amino acid except Met; k) at position m-95, any naturally occurring amino acid except Fhe; l) at position m-98, any naturally occurring amino acid except Ala; m) at position m-99. Any naturally occurring amino acid except Thr (n) at position m-105; any naturally occurring amino acid except Asn and (o) at position m-112; any naturally occurring amino acid except Gly.
2. ยีนโครงสร้างดังในข้อถือสิทธิ 1 ในที่ซึ่งมีโฮโมโลยีดัง กล่าวระหว่างกรดอะมิโนที่กำหนดรหัส โดยส่วนของดีเอ็นเอดังกล่าวของยีนโครงสร้างดังกล่าวและ 116 กรดอะมิโนดังกล่าวที่เริ่มต้นที่ตำแหน่ง m - 1 และขยายต่อ ผ่านตำแหน่ง m - 116 ดังกล่าว อย่างน้อยที่สุดเป็น 70 %2. The structural gene as described in claim 1 has the aforementioned homology between the coding amino acids of the said structural gene and the 116 amino acids that begin at position m-1 and extend through position m-116 by at least 70%.
3. ยีนโครงสร้างดังในข้อถือสิทธิ 1 หรือ 2 ในที่ซึ่งดีเอ็น เอดังกล่าวได้ถูกปรับสภาพที่ว่า ได้กำหนด เอากรดอะมิโนต่อไปนี้ หนึ่งกรดหรือมากกว่าสำหรับเป็น ตำแหน่งกรดอะมิโนอ้างอิงดังกำหนดไว้แล้ว a ) ที่ตำแหน่ง m - 5 , Lys b ) ที่ตำแหน่ง m - 6 , Lys c ) ที่ตำแหน่ง m - 12 , Lys d ) ที่ตำแหน่ง m - 16 , Tyr e ) ที่ตำแหน่ง m - 27 , Lys หรือ Arg f ) ที่ตำแหน่ง m - 30 , thr g ) ที่ตำแหน่ง m - 33 , Ile h ) ที่ตำแหน่ง m - 34 , Tyr i ) ที่ตำแหน่ง m - 36 , Val j ) ที่ตำแหน่ง m - 41 , Ile k ) ที่ตำแหน่ง m - 95 , Ile l ) ที่ตำแหน่ง m - 98 , Thr m ) ที่ตำแหน่ง m - 99 , Ser n ) ที่ตำแหน่ง m - 105 , Lys และ o ) ที่ตำแหน่ง m - 112 , Asp3. A structural gene as described in claim 1 or 2, where such DNA has been modified, specifies one or more of the following amino acids for use as: The reference amino acid positions are defined as follows: a) at position m-5, Lys; b) at position m-6, Lys; c) at position m-12, Lys; d) at position m-16, Tyr; e) at position m-27, Lys or Arg; f) at position m-30, Thr; g) at position m-33, Ile; h) at position m-34, Tyr; i) at position m-36, Val; j) at position m-41, Ile; k) at position m-95, Ile; l) at position m-98, Thr; m) at position m-99, Ser; n) at position m-105, Lys; and o) at position m-112, Asp.
4. ยีนโครงสร้างดังในข้อถือสิทธิที่ 3 ในที่ซึ่งดีเอ็นเอ ดังกล่าวได้ถูกปรับสภาพเพื่อรวมกับการเปลี่ยนแปลงที่หนึ่ง หรือ 2 จุดของตำแหน่งกรดอะมิโนในอ้างอิง m - 27 และ m - 304. A structural gene as described in claim 3, where the DNA has been modified to incorporate one or two alterations at the amino acid positions in reference m-27 and m-30.
5. ยีนโครงสร้างของข้อถือสิทธิ 1 - 4 ข้อใดข้อหนึ่งในที่ ซึ่งบริเวณตำแหน่งดีเอ็นเอ ดังกล่าวที่ปราศจากการปรับสภาพ ใด ๆ ที่ได้ระบุไว้แล้วในข้อถือสิทธิ 1 - 4 ได้ไฮบริไดซ์ ภายใต้สภาวะการไฮบริไดซ์ซึ่งที่เข้มงวดเป็น 348 นิวคลีโอ ไทด์โอลิโกเมอร์ที่มีลำดับนิวคลีโอไทด์ ที่แสดงไว้แล้ในตา ราง A ที่เริ่มต้นที่ตำแหน่ง n - 1 แล้วขยายต่อผ่านนิวคลี โอไทด์ ตำแหน่ง n - 3485. A structural gene of one of the claims 1-4 in which the aforementioned DNA region, unaffected by any modifications specified in claims 1-4, is hybridized under conditions of strict 348-nucleotide hybridization to an oligomer with the nucleotide sequence shown in Table A, starting at position n-1 and amplified through nucleotide position n-348.
6. ยีนโครงสร้างของข้อถือสิทธิ 5 ในที่ซึ่งบริเวณตำแหน่ง ดีเอ็นเอ ดังกล่าวก่อนที่จะมีการปรับสภาพใด ตามที่ระบุไว้ ในข้อถือสิทธิ 1 - 4 เป็นรหัสสำหรับ 116 ลำดับกรดอะมิโนของ ตาราง A ที่เริ่มต้นที่ตำแหน่ง m - 1 และขยายต่อผ่าน ตำแหน่ง m - 1166. The structural gene of claim 5 is in which the aforementioned DNA region, prior to any modifications as specified in claims 1–4, codes for the 116-amino acid sequence of Table A, beginning at position m–1 and extending through position m–116.
7. ยีนโครงสร้างของข้อถือสิทธิ 6 ในที่ซึ่งรหัสดีเอ็นเอดัง กล่าวสำหรับเอนโดทอกซิน ดังกล่าว ประกอบด้วยรหัสดีเอ็นเอ สำหรับลำดับกรดอะมิโนของตาราง A เริ่มต้นที่กรดอะมิโนตำแหน่งที่ 1 และขยายต่อผ่านกรดอะมิโน ตำแหน่ง 2057. The structural gene of claim 6, where the DNA code for the aforementioned endotoxin is located, contains the DNA code for the amino acid sequence of Table A, beginning at amino acid position 1 and extending through amino acid position 205.
8. ยีนโครงสร้างที่ประกอบด้วยรหัสดีเอ็นเอ สำหรับโปรตีนเอน โคทอกซินที่มีฤทธิ์เป็นพิษต่อแมลง โดยดีเอ็นเอ ดังกล่าวมีตำแหน่งกำหนดรหัสลำดับกรดอะมิโน ที่ แสดงโฮโมโลยี อย่างมีนัยสำคัญของกรมดอะมิ-โนกับ 205 ในตา ราง A ดังกล่าวในที่ซึ่งกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง 1 และขยายต่อ ผ่านกรดอะมิโน ตำแหน่ง 205 ในตาราง A ดังกล่าวในที่ซึ่ง กรดอะมิโนที่ตำแหน่ง 4 ดังกล่าว คือกรดอะมิโนใด ๆ ยกเว้น Asn8. A structural gene containing the DNA code for the insect-toxic endotoxin protein. This DNA contains an amino acid sequence that exhibits significant homology to amino acid position 205 in Table A, where the amino acid at position 1 extends through amino acid position 205 in Table A, where the amino acid at position 4 is any amino acid except Asn.
9. ยีนโครงสร้างดังในข้อถือสิทธิ 8 ในที่ซึ่งกรดอะมิโนที่ ตำแหน่ง 14 ดังกล่าวคือ Tyr9. The structural gene is as stated in claim 8, where the amino acid at position 14 is Tyr.
10. เอ็กซ์เพรสชั่นเวคเตอร์ที่ประกอบด้วยยีนโครงสร้างของ ข้อถือสิทธิ 1 - 9 ข้อใดข้อหนึ่งภายใต้การ ควบคุมของ ดีเอ็นเอเปอเรตีพที่ทำให้เกิดการเอ็กซ์เพรสชั่น ของยีนโครงสร้างดังกล่าวในแบคทีเรียเจ้าบ้าน10. An expression vector containing the structural gene of any one of the tenets 1-9 under the control of a perfective DNA that results in the expression of that structural gene in the host bacterium.
11. เอ็กซ์เพรสชั่นเวคเตอร์ของข้อถือสิทธิ 10 ในที่ซึ่งยีน ดังกล่าวอยู่ภายใต้การควบคุมของดีเอ็นเอโอ เปอเรตีฟที่ทำให้เกิดการเอ็กซ์เพรสชั่นของยีนดังกล่าวใน อี.โคไล.11. The expression vector of claim 10 where the gene is under the control of a DNA operator that causes the expression of the gene in E. coli.
12. เอ็กซ์เพรสชั่นเวคเตอร์ของข้อถือสิทธิ 10 ในที่ซึ่งยีน ดังกล่าวอยู่ภายใต้การควบคุมของ ดีเอ็นเอโอ เปอเรตีฟ ที่ทำให้เกิดการเอ็กซ์เพรสชั่นของยีนดังกล่าวใน บี.ที.12. The expression vector of claim 10 where the gene is under the control of a DNA-operative gene that results in the expression of the gene in Bt.
13. โปรดตีนเอนโคทอกซินที่มีฤทธิ์เป็นพิษต่อแมลงโดยโปรตีน ดังกล่าวประกอบด้วยบริเวณลำดับกรดอามิโนที่มีไฮโมโลยี่ อย่างมีนัยสำคัญ กับ 116 ลำดับ กรดอะมิโมที่เริ่มต้นที่ ตำแหน่ง m - 1 และขยายต่อไปผ่านตำแหน่ง m - 116 ในตาราง A ดังกล่าว โดยเลขตำแหน่งดังกล่าวทำให้ลำดับ โฮโมโลกัสดัง กล่าวเป็นอิสระต่อการตัดหรือการเพิ่มเข้าไปในที่ซึ่งมี กรดอะมิโน ต่อไปนี้หนึ่งกรดหรือมากกว่าอยู่ในตำแหน่งกรดอะ มิโนอ้างอิงที่กำหนดไว้แล้ว a ) ที่ตำแหน่ง m - 5 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Asn b ) ที่ตำแหน่ง m - 6 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Gln c ) ที่ตำแหน่ง m - 12 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Glu d ) ที่ตำแหน่ง m - 16 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Asn e ) ที่ตำแหน่ง m - 27 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Glu f ) ที่ตำแหน่ง m - 30 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Ala g ) ที่ตำแหน่ง m - 33 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Thr h ) ที่ตำแหน่ง m - 34 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Asn i ) ที่ตำแหน่ง m - 36 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Ala j ) ที่ตำแหน่ง m - 41 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Met k ) ที่ตำแหน่ง m - 95 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น phe l ) ที่ตำแหน่ง m - 98 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Ala m ) ที่ตำแหน่ง m - 99 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Thr n ) ที่ตำแหน่ง m - 105 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Asn และ o ) ที่ตำแหน่ง m - 112 กรดอะมิโนใด ๆ ตามธรรมชาติยกเว้น Gly13. The entomotoxin protein, which exhibits insecticidal activity, contains a significantly homologous amino acid sequence region with 116 amino acid sequences starting at position m-1 and extending through position m-116 in Table A. These position numbers make the homologous sequence independent of cleavage or addition where one or more of the following amino acids are present. The following are the defined amino acid references: a) at position m-5, any naturally occurring amino acid except Asn; b) at position m-6, any naturally occurring amino acid except Gln; c) at position m-12, any naturally occurring amino acid except Glu; d) at position m-16, any naturally occurring amino acid except Asn; e) at position m-27, any naturally occurring amino acid except Glu; f) at position m-30, any naturally occurring amino acid except Ala; g) at position m-33, any naturally occurring amino acid except Thr; h) at position m-34, any naturally occurring amino acid except Asn; i) at position m-36, any naturally occurring amino acid except Ala; j) at position m-41, any naturally occurring amino acid except Met; k) at position m-95, any naturally occurring amino acid except Phe; l) at position m-98, any naturally occurring amino acid except Ala; m) at position m-99, any naturally occurring amino acid except Asn. Any naturally occurring amino acid except Thr (n) at position m-105; any naturally occurring amino acid except Asn (and o) at position m-112; any naturally occurring amino acid except Gly (
14. โปรตีนเอนโคทอกซิน ดังในข้อถือสิทธิ 13 ในที่ซึ่ง โฮโมโลยี่ ดังกล่าวระหว่างบริเวณลำดับกรดอะมิโนดังกล่าว และ 116 ลำดับกรดอามิโนที่เริ่มต้นที่ตำแหน่ง m - 1 และ ขยายต่อไปผ่านตำแหน่ง m - 116 ในตาราง A ดังกล่าวเป็นอย่าง น้อยที่สุด 70 %14. Encotoxin protein, as in claim 13, where the homology between the aforementioned amino acid sequence region and the 116 amino acid sequences beginning at position m-1 and extending through position m-116 in Table A is at least 70%.
15. โปรตีนเอนโคทอกซินดังในข้อถือสิทธิ 13 หรือ 14 ในที่ ซึ่งได้กำหนดรหัสให้กรดอะมิโน ต่อไปนี้หนึ่งกรดหรือมากกว่าเป็นตำแหน่งกรดอะมิโนอ้างอิง ดังกำหนดไว้แล้ว a ) ที่ตำแหน่ง m - 5 , Lys b ) ที่ตำแหน่ง m - 6 Lys c ) ที่ตำแหน่ง m - 12 Lys d ) ที่ตำแหน่ง m - 16 Tyr e ) ที่ตำแหน่ง m - 27 Lys หรือ Arg f ) ที่ตำแหน่ง m - 30 thr g ) ที่ตำแหน่ง m - 33 Ile h ) ที่ตำแหน่ง m - 34 Tyr i ) ที่ตำแหน่ง m - 36 Val j ) ที่ตำแหน่ง m - 41 Ile k ) ที่ตำแหน่ง m - 95 Ile l ) ที่ตำแหน่ง m - 98 Thr m ) ที่ตำแหน่ง m - 99 Ser n ) ที่ตำแหน่ง m - 105 Lys และ o ) ที่ตำแหน่ง m - 112 Asp15. Encotoxin proteins as described in claim 13 or 14, where one or more of the following amino acids are assigned as reference amino acid positions as defined: a) at position m-5, Lys; b) at position m-6, Lys; c) at position m-12, Lys; d) at position m-16, Tyr; e) at position m-27, Lys or Arg; f) at position m-30, Thr; g) at position m-33, Ile; h) at position m-34, Tyr; i) at position m-36, Val; j) at position m-41, Ile; k) at position m-95, Ile; l) at position m-98, Thr; m) at position m-99, Ser; n) at position m-105, Lys; and o) at position m-112, Asp.
16. โปรตีนเอนโคทอกซินดังในข้อถือสิทธิ 15 ในที่ซึ่งหนึ่ง หรือทั้งสองกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง m - 27 และ m - 30 ดังกล่าวไว้ถูกเปลี่ยนไป16. The endotoxin protein as stated in claim 15 in which one or both amino acids at positions m-27 and m-30 are altered.
17. โปรตีนเอนโดทอกซินที่ผลิตจากยีนดังในข้อถือสิทธิ 8 หรือ 917. Endotoxin proteins produced by the genes mentioned in claim 8 or 9.
18. ขบวนการผลิตโปรตีนเอนโดทอกซินซึ่งประกอบด้วยการท รานส์ฟอร์มิ่งหรือทรานส์เฟคติ้งเซล ด้วย เอ็กซ์เพรสชั่นเวคเตอร์ดังในข้อถือสิทธิ 8 - 11 ข้อใด ข้อหนึ่งและเพาะเซลที่ได้เพื่อผลิตเอนโดทอกซิน ดังกล่าว18. The process of producing endotoxin proteins involves the transformation or transfection of cells with one of the expression vectors described in claims 8-11, and the cultivation of the resulting cells to produce such endotoxin.
19. ขบวนการดังในข้อถือสิทธิ 18 ในที่ซึ่งเซลที่ถูกท รานส์ฟอร์ม หรือทรานส์เฟคดังกล่าว คือเซลจากพืช19. The process described in claim 18 in which the transformed or transfected cells are plant cells.
20. ขบวนการดังในข้อถือสิทธิ 18 ในที่ซึ่งเซลที่ถูกท รานส์ฟอร์ม หรือทรานส์เฟคดังกล่าว คือเซลแบคทีเรีย20. The process described in claim 18 in which the transformed or transformed cell is a bacterial cell.
21. พืชที่ประกอบด้วยเซลที่มียีนโครงสร้างดังในข้อถือสิทธิ 1 - 9 ข้อใดข้อหนึ่ง21. A plant composed of cells containing genes with structures as described in claims 1-9.
22. เซลแบคทีเรียที่ประกอบด้วยเอ็กซ์เพรสชั่นเวคเตอร์ดังใน ข้อถือสิทธิ 10 - 12 ข้อใดข้อหนึ่ง22. A bacterial cell containing one of the expression vectors described in claims 10-12.
23. ลำดับ ดีเอ็นเอ ที่ประกอบด้วย ดีเอ็นเอ ที่มีลำดับจาก ตำแหน่งนิวคลีโอไทด์ n - 1 ขยายต่อไป ผ่านตำแหน่ง นิวคลีโอไทด์ n - 348 ในตาราง A ดังกล่าวหรือ การเปลี่ยนแปลงเชิงผ่าเหล่าของลำดับดังกล่าว และมีหนึ่ง ช่องว่างหรือมากกว่า แยกจากบริเวณจำกัดที่ได้เลือกจากหมู่ ที่ประกอบด้วย Hind III , Mat tt , Eel I และ Mlu I ซึ่ง เป็นบริเวณที่ไม่เปลี่ยนลำดับกรดอามิโนดังกล่าว สำหรับรหัส ดีเอ็นเอ ดังกล่าว23. A DNA sequence consisting of DNA sequences beginning at nucleotide position n-1, amplified through nucleotide position n-348 in Table A, or a mutation of such sequence, and containing one or more gaps separating it from a restricted region selected from the groups Hind III, Mat tt, Eel I, and Mlu I, which are regions that do not alter the amino acid sequence for the said DNA codon.
24. องค์ประกอบสารกำจัดแมลงที่ประกอบด้วยปริมาณที่มีผลใน การฆ่าแมลงของโปรตีนที่ผลิตจากอีเอ็นเอดังในข้อถือสิทธิ 1 - 9 ข้อใดข้อหนึ่ง โดยร่วมกับพาหะที่ยอมรับกันในทางเกษตร กรรม24. An insecticide compound containing a quantity of an effective insecticidal agent produced by DNA proteins as described in claims 1-9, in combination with an agriculturally accepted vector.
25. องค์ประกอบสารกำจัดแมลงที่ประกอบดวยปริมาณที่มีผลในการ ฆ่าแมลงของโปรตีนดังในข้อถือสิทธิ 13 - 17 ข้อใดข้อหนึ่ง โดยร่วมกับพาหะที่ยอมรับกันในทางเกษตรกรรม (ข้อถือสิทธิ 25 ข้อ, หน้า, รูป)25. An insecticide compound containing the insecticidal quantities of any one of the proteins described in claims 13-17, in combination with an agriculturally accepted vector. (Clause 25, page, figure)