TH77083A - สายพันธุ์รูเมนแบคทีเรียชนิดใหม่ และกระบวนการสำหรับเตรียมกรดซัคซินิคที่ใช้สิ่งนี้ - Google Patents

Abstract

DC60 (01/07/48) การประดิษฐ์ที่นำเสนอนี้เกี่ยวข้องกับเชื้อรูเมนแบคทีเรียสายพันธุ์ใหม่ที่เป็นผลจากการทำลายยีน แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (ldhA) และไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pfl) (ซึ่งเกี่ยวข้องในการผลิตกรดแลคติก, ฟอร์มิค และอะซีติก) จากรูเมนแบคทีเรีย; แบคทีเรียกลายพันธุ์สายพันธุ์ใหม่ (Mannheimia succinicproducens LPK7) ที่มีการทำลายยีนแลคเทตดีไฮโดรจีเนส (ldhA), ยีนไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pfl), ยีนฟอสเฟตทรานอะเซทิเลส (pta) และยีนอะซีเทตคิเนส (ackA); แบคทีเรียกลายพันธุ์สายพันธุ์ ใหม่ (Mannheimia succinicproducens LPK4) ที่มีการทำลายยีนแลคเทตดีไฮโดรจีเนส (ldhA), ยีนไพ รูเวตฟอร์เมตไลเอส (pfl) และยีนฟอสฟออีนอลไพรูเวตคาร์บอกซิเลส (ppc) ที่เกี่ยวข้องในการตรึง คาร์บอนไดออกไซด์ในเส้นทางเมแทบอลิซึมของการผลิตกรดซัคซินิค; และวิธีการสำหรับผลิตกรดซัคซินิค ซึ่งมีลักษณะที่ว่ามีการใช้เชื้อของสายพันธุ์กลายพันธุ์ข้างต้นในภาวะที่ไม่มีออกซิเจน สายพันธุ์แบคทีเรีย กลายพันธุ์ของการประดิษฐ์นี้มีคุณสมบัติที่สามารถผลิตกรดซัคซินิคที่มีความเข้มข้นสูง ในขณะที่ผลิตกรด อินทรีย์ชนิดอื่นในปริมาณน้อยหรือไม่ผลิตเลย เมื่อเทียบกับเชื้อสายพันธุ์ทั่วไปก่อนหน้าที่ใช้ในการผลิต กรดอินทรีย์ชนิดต่าง ๆ ดังนั้นสายพันธุ์แบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ประดิษฐ์ขึ้นมาจึงมีประโยชน์ที่ใช้เป็นเชื้อ สำหรับการผลิตกรดซัคซินิคในระดับอุตสาหกรรม

Claims (9)

ข้อถือสิทธฺ์ (ทั้งหมด) ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา :------03/08/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 3 หน้าข้อลือสิทธิ .

1. แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (lactate dehydrogenase-encoding:gene-/dhA) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pyruvate formate-lyase-encoding gene - pfl) ถูก!ทำลาย และมีคุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิค (succinic acid) ในสภาวะที,ไม่มีออกซิเจน โดยที\'แบคทีเรียรูเมน ดังกล่าวเลือกมาจากกลุ่มทีประกอบด้วยจนัส Mannheimia, จีนัส Actinobacillus และจีนัส Anaerobiospirillum

2. แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (lactate dehydrogenase-encodinggene - IdhA) ยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pyruvate formate-lyase-encoding gene - pfl) ยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟทรานอะเซทีเลส (phosphotransacetylase-encoding gene -pta) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์อะซีเทตไคเนส (acetate kinase-encoding gene - ackA) ถูกทำลาย และมีคุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิคในสภาวะที่ไม่มี ออกซิเจน โดยที่แบคทีเรียรูเมนดังกล่าวเลือกมาจากกลุ่มที่ประกอบด้วยจีนัส Mannheimia, จีนัส Actinobacillusและจีนัส Anaerobiospirillum

3. แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (lactate dehydrogenase-encodinggene - IdhA) ยีนเขารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pyruvate formate-lyase-encoding gene-pfl) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟอีนอลไพรูเวต (phosphoenolpyruvate-encoding gene -ppc) ถูกทำลาย และมีคุณสมบัติใน การผลิตกรดซัคซินิคในสภาวะที่ไม่มีออกซิเจน โดยที่แบคทีเรียรูเมนดังกล่าวเลือกมาจากกลุ่มที่ประกอบด้วยจีนัสMannheimia, จีบัส Actinobacillus และจีบัส Anaerobiospirillum

4. แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอลือสิทธิในข้อขอลือสิทธิข้อ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง โดยที่แบคทีเรียรูเมนดังกล่าวเป็นแบคทีเรียที่ให้ผลิตภัณฑ์หลักเพียงอย่างเดียวในการหมัก (homofermentative bacteria)

5. แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอลือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 1 โดยที่แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุดังกล่าวคือ สายพันธุ Mannheimia s p. LPK แบคทีเรียรูเมนทั้ง 3 สายพันธุ

6. แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอลือสิทธิในข้อขอลือสิทธิข้อ 1 โดยที่แบคทีเรียสายพันธุ Mannheimia s p.LPK ดังกล่าวคือ KCTC 10558BP

7. แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอลือสิทธิในข้อขอลือสิทธิข้อ 2 โดยที่แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุดังกล่าวคือสายพันธุ Mannheimia s p. LPK7 แบคทีเรียรูเมนทั้ง 3 สายพันธุ

8. แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอลือสิทธิในข้อขอลือสิทธิข้อ 7 โดยที่แบคทีเรียสายพันธุ Mannheimia s p.LPK7 ดังกล่าวคือ KCTC 10626BP

9. แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอลือสิทธิในข้อขอลือสิทธิข้อ 3 โดยที่แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุดังกล่าวคือสายพันธุ Mannheimia s p. LPK4 แบคทีเรียรูเมนทั้ง 3 สายพันธุ1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่มีคุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิคในสภาวะที่ไม่มีออกซิเจน วิธีการดังกล่าวประกอบด้วยการทำลายยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส {IdhA) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูหน้า 2 ของจำนวน 3 หน้าเวตฟอร์เมตไลเอส {pfl) จากแบคทีเรียรูเมนที่เลือกมาจากกลุ่มที่ประกอบด้วย จีนัส Mannheimia, จีนัสActinobacillus และจีนัส Anaerobiospirillum1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่มีคุณสมบัติ\'ในการผลิตกรด1ขัคซินิค\'ในสภาวะที่\'โม,มีออกซิเจวิธีการดังกล่าวประกอบด้วยการทำลายยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟทรานอะเซทิเลส (pta) และอะซีเฑตไคเนส iackA) เพิ่มเติม จากแบคทีเรียรูเมนที่เลือกมาจากกลุ่มที่ประกอบด้วย จีนัส Mannheimia, จีนัส Actinobacillus และ\'จีบัสAnaerobiospirillum ที่ยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส {IdhA) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pfl) ถูกทำลาย1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่มีคุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิคในสภาวะที่ไม่มีออกซิเจนวิธีการด้งกล่าวประกอบด้วยการทำลายยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟอีนอลไพรูเวต ippc) จากแบคทีเรียรูเมนที่เลือกมา จากกลุ่มทีประกอบด้วย จีนัส Mannheimia, จีนัส Actinobacillus และจีนัส Anaerobiospirillum ทียีนเขารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส {IdhA) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส {pfl) ถูกทำลาย1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 11 หรือ 12 โดยที่แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส {IdhA) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส {pfl) ถูกทำลายคือแบคทีเรียสายพันธุ Mannheimia s p. LPK KCTC 10558BP 1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 10 โดยที่การทำลายยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส {IdhA) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส {pfl) กระทำด้วยวิธีการรวมตัวแบบคลายคลึง (homologous recombination)1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 14 โดยที่วิธีการรวมตัวแบบคล้ายคลึงนั้นกระทำโดยใข้เวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส {IdhA) ที่ ถูกทำลาย และเวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีน\'ที่\'ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส {pfl) ที่ถูกทำลาย1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 15 โดยที่เวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส {IdhA) ที่ถูกทำลายนั้นคือ pMLKO-sacB ด้งที่ได้บรรยายไว้ในรูปที่ 1 และเวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส {pfl) ที่ถูกทำลายนั้นคือ pMPKO-sacB ด้งที่ได้บรรยายไว้ในรูปที่ 2 1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 11 โดยที่การทำลายยีนเข้ารหัสเอนไซม์พ่อสโฟทราบอะเซทีเลส {pta) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์อะซีเทตไคเนส iackA) กระทำด้วยวิธีการรวมตัวแบบคล้ายคลึง1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 17 โดยที่วิธีการรวมตัวแบบคล้ายคลึงนั้นกระทำโดยใข้เวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโพ่ทรานอะเซทีเลส {pta) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์อะซีเทต\'ไคเนส iackA) ที่ถูกทำลายหน้า 3 ของจำนวน 3 หน้า1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 18 โดยที่เวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟทรานอะเซทิเลส (pta) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์อะซีเทตไคเนส (ackA) ที่ถูกทำลายนั้นคือ pPTA-sacB ดังที่ได้บรรยายไว้ในรูปที่ 62วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 12 โดยที่การทำลายยีนเข้ารหัส เอนไซม์ฟอสโฟอีนอลไพรูเวต (ppc) กระทำด้วยวิธีการรวมตัวแบบคล้ายคลึง2วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิใบข้อขอถือสิทธิข้อ 20 โดยที่วิธีการรวมตัวแบบคล้ายคลึงนั้นกระทำโดยใข้เวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟอีนอลไพรูเวต {ppc) ที่ถูกทำลาย2วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที,ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 21 โดยที่เ,วกเตอร์แลกเปลี่ยนยีน ที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟอีนอลไพรูเวต (ppc) ที่ถูกทำลาย ที่ถูกทำลายนั้นคือ pPPC-sacBกระบวนการหรือวิธีการผลิตแบคทีเรียกลายพันธุ2วิธีการสำหรับผลิตกรดซัคซินิค โดยวิธีการดังกล่าวประกอบด้วยขั้นตอนของ การเพาะเชื้อแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง และการแยกเอากรดซัคซินิคออกจากอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของเหลว 2วิธีการสำหรับผลิตกรดซัคซินิคที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 23 โดยที่ขั้นตอนการเพาะเชื้อเป็นการหมักที่ให้ผลิตภัณฑ์หลักเพียงซนิดเดียว (homofermentation)2วิธีการสำหรับผลิตกรดซัคซินิคที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 23 โดยที่แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุคือสายพันธุ Mannheimia s p. LPKKCTC 10558BP, LPK7 KCTC 10626BP หรือ วิธีการที่ทำให้แบคทีเรียกลายพันธุLPK4 มีลักษณะเฉพาะ และแบคทีเรียกลายเป็นพันธุ LPK4 ที่ได้จากกระบวนการดังกล่าวถูกนำมาเพาะเลี้ยง เพื่อใช้ ใบการผลิตกรดซัคซินิค ------------ ------26/01/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 3 หน้า ข้อถือสิทธิแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (lactate dehydrogenase? encoding gene - IdhA) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pyruvate formate-lyase? encoding gene - pjโ) ถูกทำลาย และมีคุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิค (succinic acid) ในสภาวะที่ไม่มี ออกซิเจน โดยที่แบคทีเรียรูเมนดังกล่าวเลือกมาจากกลุ่มที่ประกอบด้วยจีนัส Mannheimia, จีนส Actinobacillus และจีนัส Anaerobiospirillumแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (lactate dehydrogenase? encoding gene - IdhA) ยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pyruvate formate-lyase-encoding gene - pfl) ยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟทรานอะเซทีเลส (phosphotransacetylase-encoding gene - pta) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์อะซีเทตไคเนส (acetate kinase-encoding gene - ackA) ถูกทำลาย และมี คุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิคในสภาวะที่ไม่มีออกซิเจน โดยที่แบคทีเรียรูเมนดังกล่าวเลือกมาจากกลุ่มที่ ประกอบด้วยจีนัส Mannheimia, จี\'นส Actinobacillus และจีนัส Anaerobiospirillumแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (lactate dehydrogenase? encoding gene - IdhA) ยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pyruvate formate-lyase-encoding gene -pfl) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอส\'โฟอี,นอลไ\'พรูเวต (phosphoenolpyruvate-encoding gene - ppc) ถูกทำลาย และมีคุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิคในสภาวะที่ไม่มีออกซิเจน โดยที่แบคทีเรียรูเมนดังกล่าว เลือกมาจากกลุ่มทีประกอบด้วยจีนัส Mannheimia, จีนัส Aetinobacillus และจีนัส Anaerobiospirillumแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง โดยที่แบคทีเรียรู เมนดังกล่าวเป็นแบคทีเรียที่ใหัผลิตภัณฑ์หลักเพียงอย่างเดียวในการหมัก (homofermentative bacteria)แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 1 โดยที่แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุดัง กล่าวคือสายพันธุ Mannheimia s p. LPK ตามรูปที่ 3แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอลือสิทธิในข้อขอลือสิทธิข้อ 1 โดยที่แบคทีเรียสายพันธุ Mannheimia s p. LPK ดังกล่าวคือ KCTC 10558BPแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 2 โดยที่แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุดัง กล่าวคือสายพันธุ Mannheimia s p. LPK7 ตามรูปที่ 8แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 7 โดยที่แบคทีเรียสายพันธุ Mannheimia s p. LPK7 ดังกล่าวคือ KCTC 10626BPแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 3 โดยที่แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุดัง กล่าวคือสายพันธุ Mannheimia s p. LPK4 ตามรูปที่ 9 1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่มีคุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิคในสภาวะที่ไม่มี ออกซิเจน วิธีการดังกล่าวประกอบด้วยการทำลายยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (IdhA) และยีน หน้า 2 ของจำนวน 3 หน้า เข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอรีเมตไสเอส (pfl) จากแบคทีเรียรูเมนที่เลือกมาจากกลุ่มที่ประกอบด้วย จีนัส Mannheimia, จีนัส Actinobacilliis และจีบัส Anaerobiospirillum 1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่มีคุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิคในสภาวะที่ไม่มี ออกซิเจน วิธีการดังกล่าวประกอบด้วยการทำลายยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟทรานอะเซทิเลส ipta) และอะซี เทตไคเนส (ackA) เพิ่มเติม จากแบคทีเรียรูเมนที่เลือกมาจากกลุ่มที่ประกอบด้วย จีบัส Mannheimia, จีบัส Actinobacillus และจีบัส Anaerobiospirillum ทียีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (IdhA) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pfl) ถูกทำลาย 1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่มีคุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิคในสภาวะที่ไม่มี ออกซิเจน วิธีการดังกล่าวประกอบด้วยการทำลายยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟอีนอลไพรูเวต (ppc) จาก แบคทีเรียรูเมนที่เลือกมาจากกลุ่มที่ประกอบด้วย จีบัส Mannheimia, จีบัส Actinobacillus และจีบัส Anaerobiospirillum ที่ยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (IdhA) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวต ฟอร์เมตไลเอส (pfl) ถูกทำลาย 1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 11 หรือ 12 โดยที่ แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (IdhA) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวต ฟอร์เมตไลเอส (pfl) ถูกทำลายคือแบคทีเรียสายพันธุ Mannheimia s p. LPK KCTC 10558BP 1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 10 โดยที่การทำลายยีน เข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (IdhA) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอรีเมตไลเอส (pfl) กระทำ ด้วยวิธีการรวมตัวแบบคล้ายคลึง (homologous recombination) 1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 14 โดยที่วิธีการรวมตัว แบบคล้ายคลึงนั้นกระทำโดยใข้เวกเตอรีแลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดร จีเนส (IdhA) ที่ถูกทำลาย และเวกเตอรีแลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอรีเมตไล เอส (pfl) ที่ถูกทำลาย 1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 15 โดยที่เวกเตอรี แลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (IdhA) ที่ถูกทำลายนั้นคือ pMLKO- SacB ดังที่ได้บรรยายไว้ในรูปที่ 1 และเวกเตอรีแลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอรี เมตไลเอส (pfl) ที่ถูกทำลายนั้นคือ pMPKO-sacB ดังที่ได้บรรยายไว้ในรูปที่ 2 1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 11 โดยที่การทำลายยีน เข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟทรานอะเซทีเลส (pta) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์อะซีเทตไคเนส (ackA) กระทำด้วย วิธีการรวมตัวแบบคล้ายคลึง 1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 17 โดยที่วิธีการรวมตัว แบบคล้ายคลึงนั้นกระทำโดยใข้เวกเตอรีแลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟทรานอะเ6ชที เลส (pta) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์อะซีเทตไคเนส (ackA) ที่ถูกทำลาย หน้า 3 ของจำนวน 3 หน้า 1วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 18 โดยที่เวกเตอร์ แลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟทรานอะเซฑิเลส (pta) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์อะซี เทตไคเนส (ackA) ที่ถูกทำลายนั้นคือ pPTA-sacB ดังที่ได้บรรยายไว้ในรูปที่ 6 2วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 12 โดยที่การทำลายยีน เข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟอีนอลไพรูเวต (ppc) กระทำด้วยวิธีการรวมตัวแบบคล้ายคลึง 2วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 20 โดยที่วิธีการรวมตัว แบบคล้ายคลึงนั้นกระทำโดยใข้เวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟอีนอลไพรูเวต (ppc) ที่ถูกทำลาย 2วิธีการผลิตแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ฃอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 21 โดยที่เวกเตอรี แลกเปลี่ยนยีนที่ประกอบด้วยยีนเข้ารหัสเอนไซม์ฟอสโฟอีนอลไพรูเวต (ppc) ที่ถูกทำลาย ที่ถูกทำลายนั้นคือ pPPC-sacB ตังที่ได้บรรยายไว้ในรูปที่ 7 2วิธีการสำหรับผลิตกรดซัคซินิค โดยวิธีการตังกล่าวประกอบด้วยขั้นตอนของ การเพาะเซื้อ แบคทีเรียรูเมนกลายพันธุที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 1-3 ข้อใดข้อหนึ่ง และการแยกเอากรดซัคซินิคอ อกจากอาหารเลี้ยงเซื้อที่เนินของเหลว 2วิธีการสำหรับผลิตกรดซัคซินิคที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 23 โดยที่ขั้นตอนการเพาะเขื้อ เนินการหมักที่ให้ผลิตภัณฑ์หลักเพียงซนิดเดียว (homofermentation) 2วิธีการสำหรับผลิตกรดซัคซินิคที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิขข้อ 23 โดยที่แบคทีเรียรูเมนกลาย พันธุคือสายพันธุ Mamheimia s p. LPK KCTC 10558BP, LPK7 KCTC 10626BP หรือ LPK4 ตังที่แสดงในรูปที่ 9 ------------ แก้ไข 11 ส.ค. 2560 สิ่งที่ขอถือสิทธิคือแบคทีเรียรูเมนกลายพันธุ์ที่ยีนเข้ารหัสเอนไซม์แลคเทตดีไฮโดรจีเนส (lactate dehydrogenase-encoding gene - IdhA) และยีนเข้ารหัสเอนไซม์ไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pyruvate formate-1yase-encoding gene - pf1) ถูกทำลาย และมีคุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิค (succinic acid) ในสภาวะที่ไม่มีออกซิเจน โดยที่แบคทีเรียรูเมนดังกล่าวเลือกมาจากกลุ่มที่ประกอบด้วยจีนัส Mannheimia, จีนัส Actinobacillus และจีนัส Anaerobiospirillum ----------------------------------------------------------------------------------------------------รูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ซึ่งยีนเข้ารหัสแลคเทตดีไฮโดรจีเนส (lactate dehydrogenase- encoding gene-ldhA) และยีนเข้ารหัสไพรูเวตเฟอร์เมตไลเอส (pyruvate formate-lyse encoding gene-pfl) ถูกทำลาย และแบคทีเรียดังกล่าวมีคุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิค (succinic acid) ที่มี ความเข้มข้นสูง ในขณะที่ผลิตกรดอินทรีย์ชนิดอื่นในปริมาณน้อยหรือไม่ผลิตเลย ในภาวะที่ไม่มีออกซิเจนรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ซึ่งยีนเข้ารหัสแลคเทตดีไฮโดรจีเนส (lactate dehydrogenase- encoding gene-ldhA), ยีนเข้ารหัสไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pyruvate formate-lyse encoding gene- pfl), ยีนเข้ารหัสฟอสเฟตทรานอะเซทิเลส (phosphatetransactylase-encoding gene-pta) และยีนเข้า รหัสอะซีเทตคิเนส (acetate kinase-encoding gene - ackA) ถูกทำลาย และแบคทีเรียดังกล่าวมีคุณ สมบัติในการผลิตกรดซัลซินิค (succinic acid) ที่มีความเข้มข้นสูง ในขณะที่ผลิตกรดอินทรีย์ชนิดอื่นใน ปริมาณน้อยหรือไม่ผลิตเลย ในภาวะที่ไม่มีออกซิเจนรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ซึ่งยีนเข้ารหัสแลคเทตดีโฮโดรจีเนส (lactate dehydrogenase- encoding gene - ldhA)}, ยีนเข้ารหัสไพรูเวตเฟอร์เมตไลเอส (pyruvate formate-lyse encoding gene -pfl) และยีนเข้ารหัสฟอสฟออีนอลไพรูเวตคาร์บอกซิเลส (phosphoenolpyruvate carboxylase- encoding gene - ppc) ถูกทำลาย และแบคทีเรียดังกล่าวมีคุณสมบัติในการผลิตกรดซัคซินิค (succinic acid) ที่มีความเข้มข้นสูง ในขณะที่ผลิตกรดอินทรีย์ชนิดอื่นในปริมาณน้อยหรือไม่ผลิตเลย ในภาวะที่ไม่มี ออกซิเจนรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิข้อ 1 ถึงข้อ 3 ข้อใดข้อหนึ่งก่อนหน้า โดยที่รูเมนแบคทีเรียดังกล่าวถูกเลือกมาจากกลุ่มของ จีนัส Manheimia, จีนัส Actinobacillus และจีนัส Anaerobiospirillumรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 1 ถึงข้อ 3 ข้อใดข้อหนึ่งก่อนหน้า โดยที่รูเมนแบคทีเรียดังกล่าวเป็นแบคทีเรียชนิดโฮโมเฟอร์เมนเททีฟ (homo-fermentative) ที่ผลิตเพียง แค่กรดซัคซินิค ในขณะที่ผลิตกรดอินทรีย์ชนิดอื่นในปริมาณน้อยหรือไม่ผลิตเลยรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 1 โดยที่รูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ คือ Mannheimia succincproducens LPKรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 6 โดยที่ Mannheimia succincproducens LPK คือ KCTC 10558BPรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 2 โดยที่รูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ คือ Mannheimia succinicproducens LPK7รูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 6 โดยที่ Mannheimia succincproducens LPK7 คือ KCTC 10626BP 1รูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 3 โดยที่รูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ คือ Mannheimia succinicproducens LPK4 1วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ โดยที่แบคทีเรียดังกล่าวมีคุณสมบัติในการผลิต กรดซัคซินิคที่มีความเข้มข้นสูง ในขณะที่ผลิตกรดอินทรีย์ชนิดอื่นในปริมาณน้อยหรือไม่ผลิตเลย ในภาวะ ที่ไม่มีออกซิเจน โดยวิธีการดังกล่าวประกอบด้วยขั้นตอนของการทำลายีนเข้ารหัสแลคเทตดีไฮโดรจีเนส (ldhA) และยีนเข้ารหัสไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pfl) จากรูเมนแบคทีเรียที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย จี นัส Manheimia, จีนัส Actinobacillus และจีนัส Anaerobiospirillum 1วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ โดยที่แบคทีเรียดังกล่าวมีคุณสมบัติในการผลิต กรดซัคซินิคที่มีความเข้มข้นสูง ในขณะที่ผลิตกรดอินทรีย์ชนิดอื่นในปริมาณน้อยหรือไม่ผลิตเลย ในภาวะ ที่ไม่มีออกซิเจน โดยวิธีการดังกล่าวประกอบด้วยขั้นตอนของการทำลายยีนเข้ารหัสฟอสเฟตทรานอะเซทิ เลส (pta) และยีนเข้ารหัสอะซีเทตคิเนส (ackA) จากรูเมนแบคทีเรียที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย จีนัส Manheimia, จีนัส Actinobacillus และจีนัส Anaerobiospirillum และยีนเข้ารหัสแลคเทตดีไฮโดรจี เนส (ldhA) และยีนเข้ารหัสไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pfl) ถูกทำลาย 1วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ โดยที่แบคทีเรียดังกล่าวมีคุณสมบัติในการผลิต กรดซัคซินิคที่มีความเข้มข้นสูง ในขณะที่ผลิตกรดอินทรีย์ชนิดอื่นในปริมาณน้อยหรือไม่ผลิตเลย ในภาวะ ที่ไม่มีออกซิเจน โดยวิธีการดังกล่าวประกอบด้วยขั้นตอนเพิ่มเติมของการทำลายยีนเข้ารหัสฟอสฟออีนอล ไพรูเวตคาร์บอกซิเลส (ppc) จากรูเมนแบคทีเรียที่เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย จีนัส Manheimia,จีนัส Actinobacillus และจีนัส Anaerobiospirillum และยีนเข้ารหัสแลคเทตดีไฮโดรจีเนส (ldhA) และยีน เข้ารหัสไพรูเวตฟอร์เมตไลเอส (pfl) ถูกทำลาย 1วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 12 หรือ 13 โดย ที่รูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่มีการทำลายยีนเข้ารหัสแลคเทตดีไฮโดรจีเนส (ldhA) และยีนเข้ารหัสไพรู เวตฟอร์เมตไลเอส (pfl) คือ Mannheimia succincproducens LPK (KCTC 10558BP) 1วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 11 โดยที่การ ทำลายยีน ldhA และ pfl ทำโดยใช้วิธีการโฮโมโลกันรีคอมบิเนชัน (homologous recombination) 1วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 15 โดยที่วิธีการ โฮโมโลกันรีคอมบิเนชันกระทำโดยใช้เวคเตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่มี ldhA ที่ถูกทำลาย และเวกเตอร์แลก เปลี่ยนยีนที่มี pfl ที่ถูกทำลาย 1วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 16 โดยที่เวค เตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่มี ldhA ที่ถูกทำลายคือ pMLKO-sacB และเวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่มี pfl ที่ถูก ทำลายคือ pMPKO-sacB 1วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 12 โดยที่การ ทำลายยีน ptA และ ackA ทำโดยใช้วิธีการโฮโมโลกันรีคอมบิเนชัน (homologous recombination) 1วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 18 โดยที่วิธีการ โฮโมโลกันรีคอมบิเนชันกระทำโดยใช้เวคเตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่มี ptA และ ackA ที่ถูกทำลาย 2วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 19 โดยที่เวค เตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่มี ptA และ ackA ที่ถูกทำลายคือ pPTA-sacB 2วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 13 โดยที่การ ทำลายยีน ppc ทำโดยใช้วิธีการโฮโมโลกันรีคอมบิเนชัน 2วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 21 โดยที่วิธีการ โฮโมโลกันรีคอมบิเนชันกระทำโดยใช้เวคเตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่มี ppc ที่ถูกทำลาย 2วิธีการสำหรับผลิตรูเมนแบคทีเรียกลายพันธุ์ที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 22 โดยที่เวค เตอร์แลกเปลี่ยนยีนที่มี ppc ที่ถูกทำลายคือ pPPC-sacB 2เวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีน pMLKO-sacB ที่มี ldhA ที่ถูกทำลาย 2เวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีน pMLKO-sacB ที่มี pfl ที่ถูกทำลาย 2เวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีน pPTA-sacB ที่มี pta และ ackA ที่ถูกทำลาย 2เวกเตอร์แลกเปลี่ยนยีน pPPc-sacB ที่มี ppc ที่ถูกทำลาย 2วิธีการสำหรับผลิตกรดซัคซินิค วิธีการดังกล่าวประกอบด้วยขั้นตอนของการเพราะเชื้อรูเมน แบคทีเรียกลายพันธุ์ชนิดใดชนิดหนึ่งที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 1 ถึงข้อ 3 ข้อใดข้อหนึ่ง ในภาวะที่ไม่ มีออกซิเจน และการแยกกรดซัคซินิคจากน้ำเลี้ยงเชื้อ 2วิธีการสำหรับผลิตกรดซัคซินิคที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 28 โดยที่ขั้นตอนการเลี้ยงเชื้อ เป็นแบบโฮโมเฟอร์เมนเตชัน (homo-fermentation) ซึ่งผลิตกรดซัคซินิคที่มีความเข้มข้นสูง ในขณะที่ ผลิตกรดอินทรีย์ชนิดอื่นในริมาณน้อยหรือไม่ผลิตเลย 3วิธีการสำหรับผลิตกรดซัคซินิคที่ขอถือสิทธิในข้อขอถือสิทธิข้อ 28 โดยที่เชื้อรูเมนแบคทีเรีย กลายพันธุ์คือ Mannheimia succinicproducens LPK, LPK7 หรือ LPK4