TARIFNAME BITKISEL EKSOZOM IÇEREN BIR ÜRÜN Teknik Alan Bu bulus, kanser tedavisinde ve yara iyilestirmesinde kullanilabilen bitkisel eksozom Önceki Teknik Çok hücreli organizmalarda hücreden salgilanan proteinlerin, diger bir hücrenin yüzeyinde bulunan reseptörlere baglanmasi sonucunda gerçeklestirilen iletisim, hücreler arasi iletisimin temel prensibidir. Hakkinda çok fazla bilgiye sahip olunmasa da günümüzde oldukça talep gören, iletisim moleküllerinin basinda cksozomlar gelmektedir (1-3). Ilk kesfedildiginde hücre tarafindan istenmeyen materyal, hücre atigi olarak adlandirilmasina ragmen yapilan arastirmalar sonucunda eksozomlarin bagisiklik sisteminde büyük bir rolü oldugu kanitlanmistir (4). Ekzosomlar 20-130 nm boyutlari arasinda bulunan (nano boyutta), tüm hücreler tarafindan plasma içerisinde üretilip, hücre disina salgilanan veziküllerdir (5). Yakin zamanda kesfedildigi üzere bu veziküller lokal veya uzaksal konak hücrelere otokrin ve parakrin sinyallerini saglamak için endokrin sistemde rol oynar. Bu cksozomlar ayni zamanda protein, yag, nükleik asit materyalleri (tüm RNA çesitleri) tasimakla ve bunlari alici hücrelere transfer etmekle yükümlüdürler. Bu sayede hücre disina tasinacak olan mesajlar diger komsu hücrelere tasinmis olur (3). Tetraspanin familyasi eksozom yüzeyinde en sik görülen protein grubudur. Bu familyanin içinde CD9, BCD63, CD81, CD82, CD83 proteinleri bulunmaktadir. Tetraspanin familya proteinleri MHC ve integrin proteinleri ile etkilesime girebilme özelligine sahiptir (6). Ne kadar genellemeye çalisilsa da eksozom protein havuzu daha çok hücre spesifik oldugundan dolayi eksozomun salindigi hücreye baglidir. Bundan dolayi çesitli (heat- 25418.61 shock) proteinleri bu havuzun üyeleri arasindadir (hsp70). Ayni zamanda hücre iskeletinde bulunan proteinler, ß aktin, tübilin, miyozin, kofilin, temel doku- uygunlugu bileseni sinif I-II molekülleri ve gliser aldehit 3 fosfat dehidrojenez eksozom protein havuzunun baslica ortak proteinlerindendir. Eksozomun iletilecegi hücrenin içine alinabilmesi için diger hücrenin yüzey reseptörlerini uyarmasi gerekmektedir. Bu sebepten dolayi Wnt-ß- katenin sinyal proteinlerini, notchligang, delta-like 4 proteinleri ve interlökinlerin eksozom yüzeyinde bulunmasi gerekir. Aksi takdirde eksozomun mesaj iletecegi konak hücreyi uyarmasi mümkün olmaz (7,8,9). Yapilan çalismasinda, memeli hücrelerinden elde edilen eksozomlarin kanser tedavisinde kullanilabilecek potansiyele sahip oldugu kanitlanmistir(Raghu et al. 2016). Buna ek olarak, eksozomlarin meme kanseri hücresi üzerinde antikarsinojenik etkisi oldugu gösterilmistir(0hn0 et al. 2013). Benzer sekilde yürütülen bir diger çalismada, beyin epitelinden elde edilen eksozomlarin beyin kanseri üzerinde etkisi oldugu tespit edilmistir (Reriro et al. 2015). Bugday (Triticum Aestivum) bitkisel besinler klasmaninda, insan diyetinde önemli bir rol oynamaktadir. Yapilan epidemiyolojik çalismalar dogrultusunda kronik talesemi ve kanser hastalarinda koruyucu bir rol aldigi kanitlanmistir. Bugdayin birçok formu (bugday çimi veya tohumu) kanser tedavisinde kullanilmak üzere gelistirilmistir. Ayni sekilde zencefil ve sarimsak da antioksidan özelliktedir. Yapilan çalismalarinda hayvansal kaynakli eksozomlar farkli uygulamalar için kullanilmaktadir. Bunun yaninda bitki kaynakli eksozomlarin antioksidan oldugu tespit edilmekle birlikte çalisilmasi konusunda büyük bir açik oldugu gözlemlenmistir. Bitki eksozomlari, bilindigi kadariyla memeli eksozomlariyla benzer özellikler tasimaktadir. Cerrahi operasyon, radyoterapi ve kemoterapi gibi bölünen hücreleri hedetleyen tedavi metotlari pek çok kez kanserin tekrarlamasi yada çok sayida yan etkinin ortaya çikmasi ile sonuçlanmaktadir (Kubota, 2012). 25418.61 kullanilmak üzere saglikli hücrelerden izole edilen eksozom hücrelerinden bahsedilmektedir. Bulus ile, bitkisel eksozom içeren ürün ile saglikli hücrelere zarar vermeden kanserli hücrelerin ölümüne yol açmak alternatif bir tedavi metodu olarak gelistirilmistir. Bunun yani sira, eksozomlarin hücresiz (cellfree) ürünler olmasi, hücresel terapinin dogurabilecegi sorunlarin da önüne geçmesi durumunu ortaya çikarmistir. Eksozomlar, kullanima hazir terapötiklerdir. Toksik kriyo prezervatif ajan ve ultra- dondurucu kullanilmasina gerek olmadan düsük isida saklanabilir ve hastalara güvenle ulastinlabilir. Bu bilgilerden yola çikilarak alternatif tipta kullanilan bugday çimi, sarimsak ve zencefilin kanser tedavisinde ve yara iyilestirici olarak kullanilmasi hedeflenmektedir. Bulusun Kisa Açiklamasi Bulusun amaci, kanser tedavisinde kullanilabilen bitkisel eksozom kaynakli bir ürün elde etmektir. Bulusun diger amaci, insan vücudunda toksik etki yaratmayan bir ürün elde etmektir. Bulusun bir diger amaci; yara iyilesmesi, hasarli doku onariminda etkili bir ürün saglamaktir. Bulusun bir diger amaci; kemoterapi tedavisinde meydana gelen yan etkilerin yasanmadigi bir ürün elde etmektir. Bulusun bir diger amaci; kanser tedavisi sürecinde saglikli hücrelerde tahribata yol açmayan bir ürün elde etmektir. 25418.61 Bulusun bir diger amaci; radyoterapi veya ameliyat gibi herhangi bir islem gerektirmediginden enfeksiyon riski yaratmayan bir ürün elde etmektir. Bulusun bir diger amaci; maliyeti düsük olan bir ürün elde etmektir. Bulusun bir diger amaci; vücutta sentetik ilaçlardan kaynaklanan kimyasal kirlenmenin yasanmadigi dogal bir ürün elde etmektir. Bulusun bir diger amaci; tedavide kullanilacak bitkilerin kolaylikla büyüdügü ve kisa sürede büyük ölçekte eksozom elde edildigi için pratik ve kolay ulasilabilir bir ürün saglamaktir. Bulusun Ayrintili Açiklamasi Bulusun amacina ulasmak için gelistirilmis "Bitkisel Eksozom Içerikli Bir Ürün" ile ilgili sekiller ekte gösterilmis olup; Sekil l-A: A498 böbrek kanseri hücrelerinin kontrol grubu akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil l-B: A498 böbrek kanseri hücrelerinin kontrol grubu Annexin V boyasi ile akis degerleri sitometrisi görünümüdür. 25418.61 Sekil l-C: A498 böbrek kanseri hücrelerinin kontrol grubu PI boyasi ile akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil l-D: A498 böbrek kanseri hücrelerinin 15 mg/ml bugday eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil l-E: A498 böbrek kanseri hücrelerinin 15 mg/ml zencefil eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil l-F: A498 böbrek kanseri hücrelerinin 15 mg/ml sarimsak eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 2-A: HEK 293 Böbrek epitel hücrelerinin kontrol grubu akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 2-B: HEK 293 Böbrek epitel hücrelerinin kontrol grubu Pl boyasi ile akis sitometrisi degerleri gön'jnümüdür. Sekil 2-C2HEK 293 Böbrek epitel hücrelerinin kontrol grubu Annexin V boyasi ile akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 2-D: HEK 293 Böbrek epitel hücrelerinin 15 mg/ml bugday eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 2-E: HEK 293 Böbrek epitel hücrelerinin 15 mg/ml zencefil eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 2-F: HEK 293 Böbrek epitel hücrelerinin 15 mg/ml sarimsak eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 3-A: 22RV1 prostat kanseri hücrelerinin kontrol grubu akis sitometrisi degerleri görünümüdür. 25418.61 Sekil 3-B: 22RV1 prostat kanseri hücrelerinin kontrol grubu Annexin V boyasi ile akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 3-Cs22RV1 prostat kanseri hücrelerinin kontrol grubu PI boyasi ile akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 3-D: 22RV1 prostat kanseri hücrelerinin 15 mg/ml bugday eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 3-E: 22RV1 prostat kanseri hücrelerinin 15 mg/ml zencefil eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 3-F: 22RV1 prostat kanseri hücrelerinin 15 mg/ml sarimsak eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 4-A: PNTlA prostat epitel hücrelerinin kontrol grubu akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 4-B: PNTlA prostat epitel hücrelerinin kontrol grubu PI boyasi ile akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 4-CiPNT1A prostat epitel hücrelerinin kontrol grubu Annexin V boyasi ile akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 4-D: PNTlA prostat epitel hücrelerinin 15 mg/ml bugday eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 4-E: PNTlA prostat epitel hücrelerinin 15 mg/ml zencefil eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 4-F: PNTlA prostat epitel hücrelerinin 15 mg/ml sarimsak eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. 25418.61 Sekil 5-A: MCF 7 meme kanser hücrelerinin kontrol grubu akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 5-B: MCF 7 meme kanser hücrelerinin kontrol grubu Annexin V boyasi ile akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 5-C2MCF 7 meme kanser hücrelerinin kontrol grubu Pl boyasi ile akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 5-D: MCF 7 meme kanser hücrelerinin 15 mg/ml bugday eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 5-E: MCF 7 meme kanser hücrelerinin 15 mg/ml zencefil eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 5-F: MCF 7 meme kanser hücrelerinin 15 mg/ml sarimsak eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 6-A: MCF 10A meme epitel hücrelerinin kontrol grubu akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 6-B: MCF lOA meme epitel hücrelerinin kontrol grubu PI boyasi ile akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 6-C:MCF lOA meme epitel hücrelerinin kontrol grubu Annexin V boyasi ile akis sitometrisi degerleri görünümüdür. Sekil 6-D: MCF 10A meme epitel hücrelerinin 15 mg/ml bugday eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 6-E: MCF lOA meme epitel hücrelerinin 15 mg/ml zencefil eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. 25418.61 Sekil 6-F: MCF lOA meme epitel hücrelerinin 15 mg/ml sarimsak eksozomu uygulanmis akis sitometrisi ölüm degerleri görünümüdür. Sekil 7- Bugday bitkisinden elde edilen bitki eksozomunun varliginin tespit edildigi Elektron Mikroskopu görünümüdür. Sekil 8- Bugday bitkisinden elde edilen bitki eksozomunun varliginin HSP 70 yüzey markörü ile tespit edildigi akis sitometrisi görünümüdür. Bu sonuçlar dogrultusunda bitki eksozomunun sadece kanser hücrelerini apoptoza götürerek hücre ölümüne sebep oldugu fakat saglikli hücrelerde herhangi bir hücre ölümüne yol açmadigi gösterilmistir. Deneysel Çalisma Bitkisel Kaynakli Eksozomun Hazirlanmasi Bulus konusu bitkisel eksozom içerikli üründe bitki kaynagi olarak bugday çimi, zencefil ve sarimsak tek basina veya kombinasyonlar halinde kullanilabilmektedir. Deneysel çalismalarda tercihen seçilen bugday çimi, Türkiye, Adana Ceyhan 69 tohumlarindan elde edilmistir. Yapilan ön numune hazirlama çalismalarinda tohumlarin 1,5 haftalik sürede büyümesinin yeterli oldugu tespit edilmistir. Toplanan çimler %lalik PBS (Fosfat tamponlu tuz) içinde öncelikle ögütülmüs olup, sonrasinda süzme islemi gerçeklestirilmistir. Elde edilen süzüntü bugday çimi 10 kültürü (cellculture) eksozom izolasyon kiti kullanilarak izole edilmistir. Izole edilen eksozomlar %O,9"luk izotonik serum içinde çözülmüstür. 25418.61 Izole edilmis ve serum formunda olan bulus konusu ürün eksozomlar, taramali elektron mikroskobu kullanilarak gözlenmistir (Sekil 7). Sonrasinda HSP 70 markörü ile inkübe edilerek akis sitometrisinde eksozomlarin varliginin gözlenmesi yapilmistir. Tedavinin Gelistirilmesi Hücre Toksisitesinin Belirlenmesi Hazirlanan bulus konusu ürünün toksik etkisi literatürde yer alan MTS metodu kullanilarak belirlenmistir (Yalvaç ve ark, 2009). Kimyasal moleküller belirtilen konsantrasyonlardabesiyeri içinde hazirlanip 96 kuyucuklu kültür kaplarina sayilarak (5000 hücre/kuyucuk) ekimi yapilmis olan HEK (Insan böbrek epitel hücresi), MCF 10A (insan meme epitel hücresi), PNTlA(insan prostat epitel hücresi) hücre hatlari üzerine uygulanmistir. Kimyasallara karsi olusan hücrelerdeki toksisite cevabi,4 gün süre ile hücre canliliginin ölçülmesi seklinde tespit edilmistir. Hücre canliligi analizi MTS metoduna göre yapilmistir. MTS, mitokondriyal enzim aktivetisini ölçmek için kullanilan kolorimetrik bir metottur. Daha Önceden kuyucuklara ekilmis olan hücrelere farkli dozlarda uygulanarak, belirlenen zaman araligi içerisinde uygulanan maddenin canliliga olan etkisi incelenmistir. Medya ile karistirilarak verilen MTS ajani, canli hücre sayisinin artmasi ile koyu bir renk alir. Olusan renk degisimi ELISA okuyucusu kullanilarak absorbans öçümünü seklinde degerlendirilmistir. Bulus, kapsaminda gelistirilmis olan ürün, saglikli hücrelerde 5ng/ml, 10 ng/ml, 15 ng/ml konsantrasyonlarinda 24,48,72 ve 96. saatlerde sonuç alacak sekilde hazirlanmistir. 25418.61 Kanser Hücresi Ölüm Analizi Bulus konusu ürünün, kanser üzerindeki etkisini incelemek için, intihar mekanizmasi olan apoptoz yolaginin en belirgin proteinlerinden biri olan Annexin V proteinin varligina bakilmistir. Pl (Propidium lodide) boyasi ile de nekrozun varligina bakilmistir. 22RVl (prostat kanser hücresi), MCF 7 (meme kanseri hücresi), A498 (böbrek kanseri hücresi) hücreleri 6 kuyucuklu kültür tabaklarina 300.000 hücre/kuyucuk olacak sekilde ekilmistir. 22RVl hücre hatti için RPMI, MCF 7 ve A498 hücre hatti içinse DMEM yüksek glikoz medyalarina %10 PES (FetalBovine Serum) ve %1 PSA (Penicillin Streptomycin Amphotericin) eklenerek hücrelerin büyümesi saglanmistir. Belirtilen konsantrasyonlarda tedavi uygulanan hücrelerin ölüm oranlari 24 saat sonra incelenmistir. Annexin V antikoruna baglanan hücrenin apoptoza ugradigini veya ugramak üzere oldugunu, Pl antikoruna baglanan hücrenin nekroza gittigi veya gitmek üzere oldugunu göstermektedir. Bu antikorlarin varligina bakarak uygulanan tedavinin hücreyi öldürdügü tespit edilmistir. Ayni deney protokolü saglikli hücre hatlari olan MCFlO-A, PNTl-A ve HEK hücre hatlarina da uygulanmistir. Yara iyilesmesinin incelenmesi Bulus konusu ürünün, kanser tedavisinde kullanilmasinin yani sira, yara iyilesmesinde kullanimi da incelenmistir. Bunun için yapilan deneysel çalismada, saglikli hücre hatti HEK hücreleri 6 kuyucuklu kültür tabaklarina ekilmistir. Kuyucuklarin tam ortasindan geçecek sekilde bir çizik atilarak yara modeli olusturulmustur. Yara modeli olusturulan hücrelere eksozom içerikli ürün uygulanmistir. Hücreler, içinde %2 lik FBS olan DMEM medya ile 15 ng/ml konsantrasyonlu ürün içerisinde 48 saat inkübe edilmistir. Mikroskopta her gün fotografi çekilerek yara iyilesmesi süreci asama asama gözlenmistir. 25418.61 Deneysel Sonuçlar Gelistirilen izolasyon yöntemiyle tercihen bugday çimi kullanilarak eksozom elde edilmistir. Bu ürün karakterizasyon deneylerine tabi tutularak kanser ve yara iyilestirici özelliklerinin etkinligi sonuçlarla ispatlanmistir. Elektron mikroskop görüntüsünde elde edilen veriler görünen veziküllerin literatürde bulunan eksozom elektron mikroskop görüntüleriyle benzerlik gösterdigi bulunmustur. (Sekil 7) Akis sitometrisinde çikan sonuçlar eksozomlarin %84,16 oraninda, yüzey markörünü ifade ettigini göstermektedir. Buda elde ettigimiz molekülün eksozom oldugunun kanitlarindan biridir (Sekil 8). Saglikli hücreler bitki eksozom serumuna maruz birakildigi zaman hücrelerde proliferasyona sebep oldugu MTS sonucu ile kanitlanmistir. Negatif kontrole göre artmis olan absorbans miktari, canliligin arttigini göstermektedir. Bu dogrultuda yapilan analizler, bugday eksozomunun saglikli hücrelerinde bölünme hizini arttirdigini kanitlamistir (Sekil 3). 22RV1 hücreleri, Sug/ml, 10 tig/ml, 15 tig/m1 konsantrasyonda serumla muamele edildikten 24 saat sonra hücre Ölümünü gözlemlemek amaci ile Annexin V metodu akis sitometrisi kullanilarak uygulanmistir. Bu sonuçlar dogrultusunda nekroz ve apoptoz oranlari hesaplandiginda belirtilen konsantrasyon sirasiyla % 26.02 , %40.08 ve %34.36 oranlarinda hücre ölümü oldugu gözlenmistir (Sekil-3). PNTIA hücrelerinin Sag/ml, 10 ug [ml, 15 pg /ml konsantrasyonda serumla muamele edildikten 24 saat sonra hücre ölümünü gözlemlemek amaci ile Annexin V metodu akis sitometrisi kullanilarak uygulanmistir. Bu sonuçlar dogrultusunda nekroz ve apoptoz oranlari hesaplandiginda sirasiyla %l,81 , %326 ve %3,22 oranlarinda hücre ölümü oldugu gözlenmistir (Sekil-4). 25418.61 MCF-7 hücrelerinin Sug/ml, 10 tig/ml, 15 tig/ml konsantrasyonda serumla muamele edildikten 24 saat sonra hücre ölümünü gözlemlemek amaci ile Annexin V metodu akis sitometrisi kullanilarak uygulanmistir Bu sonuçlar dogrultusunda nekroz ve hücre ölümü oldugu gözlenmistir (Sekil-5). MCF-lOA hücrelerinin Sug/ml, 10 tig/ml, 15 tig/m1 konsantrasyonda serumla muamele edildikten 24 saat sonra hücre ölümünü gözlemlemek amaci ile Annexin V metodu akis sitometrisi kullanilarak uygulanmistir Bu sonuçlar dogrultusunda nekroz ve apoptoz oranlari incelendiginde sirasiyla %1.57 , %125 ve %274 oranlarinda hücre ölümü oldugu gözlenmistir (Sekil-6). A498 hücrelerinin Sug/ml, 10 ug /ml, 15 ug /ml konsantrasyonda serumla muamele edildikten 24 saat sonra hücre ölümünü gözlemlemek amaci ile Annexin V metodu akis sitometrisi kullanilarak uygulanmistir. Bu sonuçlar dogrultusunda nekroz ve hücre ölümü oldugu gözlenmistir (Sekil-l). HEK 293 hücrelerinin Sag/ml, 10 tig /ml, 15 tig /ml konsantrasyonda serumla muamele edildikten 24 saat sonra hücre ölümünü gözlemlemek amaci ile Annexin V metodu akis sitometrisi kullanilarak uygulanmistir. Bu sonuçlar dogrultusunda nekroz ve apoptoz oranlari incelendiginde sirasiyla % 1.79 , %163 ve %3.16 oranlarinda hücre ölümü oldugu gözlenmistir (Sekil-2). Yapilan deneysel sonuçlar sonucunda; bulus konusu ürünün vücutta hücrelerin intihar mekanizmasini tetikleyerek, kanser hücrelerinde ölüme yol açtigi kanitlanmistir. Bu ürün ile uygulanan tedavinin kemoterapi tedavilerinde sikça rastlanan kanserli hücreyi öldürürken ayni zamanda saglikli hücrelere de zarar verme dezavantajini ortadan kaldirdigi görülmüstür. 25418.61 MTS sonucundan yola çikilarak olusturulan yara modelinin sonucunda ise, bulus konusu ürün ile muamele edilen hücrelerdeki yara modelinin, muamele görmeyen kontrol hücrelere oranla çok daha hizli iyilesme gösterdigi kanitlanmistir. Bu da elde edilen özellikle bugday eksozomu kaynakli ürünün yara iyilesmesi ve doku onarimi modellerinde süreci olumlu yönde etkileyip hizlandirdigini göstermistir. Bulusun Uygulanmasi Söz konusu bulus, basta prostat kanseri, meme kanseri, böbrek kanserinde uygulanmakta olup ayrica pankreas, karaciger, kemik, cilt, beyin, akciger, akciger zari, rahim, yumurtalik, mide, bagirsak, mesane, kan, lenf, tiroid kanser türlerin de de etkindir. Bulus konusu ürün basta sivi halde serum formunda olmak üzere, kati veya hidrojel olarak ta üretilebilmektedir. Bunlar serum, surup, tablet, ilaç, jel, krem formunda da olabilmektedir. Ayni zamanda nano tasiyici molekül olarak kullanilarak, hücre içine etken baska bir maddenin (ilaç, kimyasal gibi) tasinmasi saglanabilir. Bu tasima metodu da yukarida belirtildigi gibi degisik form ve formülasyonlarda kullanilabilir. 25418.61 Referanslar . Johnstone,RM, Adam, M, Hammond,JR,Orr L andTurbide , C(1987). Vesicle formation during reticulocyte maturation. Association of plasma mebrane . Valadi, H, Ekström, K, Bossios, A, Sjöstrand, M, Lee JJ andLçtvall JO (2007). Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic Exchange between cells. Nat Cell Bi0I92654-659 . Théry, C, Ostrowski, M andSegura, E (2009). Membrane vesicles as conveyors of immuneresponses. NatRevlmmunol 9: 581-593 . Gogolak P, Rethi B, Hajas G, Rajnavolgyi E.(2003) Targeting dendritic cells . An,Q, Hücvkelhoven, R,K0gel,KHandvan Bel, Aj(2006). Multi vesicular bodies participate in a cell wall-associated defence response in barley leaves attacked by the pathogenic powdery mildew fungus. Cell Microbia18:1009- . Escola, J.M., MJ. Kleijmeer, W. Stoorvogel, J.M. Griffth, O. Yoshie, and H.J. Geuze. (1998). Selective enrichment ot` tetraspan proteins on the internal vesicles of multivesicular endosomesand 011 exosomes secreted by human B- . Buschow, S.I., B.W. vanBalkom, M. Aalbcrts, A.J. Heck, M. Wauben, and W. Stoorvogel. (2010). MHC class II-associatedproteins in B-cell exosomes and 25418.61 potential functional implications for exosome biogenesis. Immunol. Cell Biol. 88:851-856 Simpson RJ, Lim JW, Moritz RL, Mathivanan S. (2009) Exosomes: proteomic insights and diagnostic potential. Expert.Rev.Pr0te0mics.; 6:267- Gogolak P, Rethi B, Hajas G, Rajnavolgyi (2003) E. Targeting dendritic cells Vermeulen, P.B.,Verh0even, D., Hubens, G., Van Marck, E., Goovaerts, G., Huyghe, M., De Bruijn, E.A., Van Oosterom, A.T. ve Dirix, L.Y. (1995). Microvessel density, endothelial cell proliferation and tumour cell proliferation in human colorectal adenocarcinomas. Annals of oncology, 6(1), 59-64. Yalvac, M.E.,Ramazan0glu, M., Gumru, O.Z., Sahin, F., Palotâs, A. ve Rizvanov, A.A. (2009). Comparison and optimisation of transfection of human dental folliclecells, a novel source of stem cells, with different Chemical methods und electro-poration. Neuro Chemical research, 34(7), TR