TARIFNAMESODYUM DEOKSIKOLAT ICEREN ENJEKSIYONLUK BILESIMILGILI BASVURUBu bulus basvurusu, 19 Mayis 2004 tarihinde ibraz edilen 60/572.879 sayili ABD Geçici Patent Basvurusuna dayanarak rüçhan hakki talepetmektedir.BULUSUN ALANIBu bulus, bölgesel yag birikintilerinin cerrahi olmayan yollarla alinmasi amacina yönelik kozmetik yöntemlerle ilgilidir. Daha somut ifade etmek gerekirse, bu yöntem, cerrahi müdahaleye gerek olmadan yag aldirinaya ihtiyaç duyan bir hastanin tedavi edilecek yerine dogrudan enjeksiyon için uygun farmakolojik açidan aktif sodyumdeoksikolat bilesimlerini kapsar.BULUS HAKKINDA ON BILGICümlelerin sonunda parantez içinde verilen rakamlar, bu patent spesifikasyonunun isteinlerden hemen önce sonuç bölümünde verilenspesifik referanslara atif yapmaktadir.Bölgesel yag birikintilerini tedavi etmek için fosfatidilkolin ve safra tuzlari içeren forinülasyonlar (fosfatidilkolin safra tuzu formülasyonlari, PBF) giderek daha fazla kullanilmaktadir (1-8). Birkaç açik etiketli klinik çalisma, alt gözkapagi yag dokusu fitiklasmasi ve "buffalo kamburu" lipodistrofisi de dahil bölgesel yag birikintilerinin tedavisi için PBF enjeksiyonlari kullanildiginda umutverici sonuçlar elde edildigini rapor etmistir (1-3).Fosfatidilkolin, hücre membranlarinin temel bileseni olan ve normal selüler membran bilesimi ve onarimi için önemli olan bir dogal fosfolipiddir. Fosfatidilkolin, ayrica, esansiyel besleyici kolinin ana tasiyici formudur. Kolin, digerlerinin yani sira fosfatidilkolin ve sfingomyelin de dahil nörotransniitter asetilkolin, metil donörü betain ve fosfolipidlerin sentezinde bir prekürsor islevini görür. Ayrica, fosfatidilkolin de çok düsük yogunluklu lipoproteinlerin hepatik ihracinda rol oynar. WO 2005/063205 numarali doküinandafosfatidilkolin içeren en jeksiyonluk bilesimler tarif edilmektedir.Fosfatidilkolinin ve yakin zamanda, amfoterisin B, Taxol® ve diazepam gibi ilaçlarin aköz çözünürlügünü arttirmak için safra tuzlari kullanilmistir (9-14). Yüksek düzeyde saflastirilmis fosfatidilkolin, sekonder safra tuzu sodyum deoksikolatla, bir anti-mikrobiyal ajanla, benzil alkolle ve suyla kombinasyona sokularak hizla sterilize edilebilen ve intravenöz uygulamada kullanilabilen bir stabil, karisik inisel preparati olusturulabilir (12). Essentiale® ve Lipostabil® olarak bilinen bu karisimin farmasötik preparatlari, baska ülkelerde, sirasiyla karaciger hastaligi ve hiperlipideini tedavisinde kullanilmak üzeresatilmaktadir (12,15).Subkutan yaga yapilan PBF enjeksiyonlarinin infraorbital yag fitiklasmasini azalttigini ilk olarak Rittes rapor etti (1). O zamandan beri, doktorlar, alt gözkapagi yag fitiklasmasini ve yani sira, uylukta, karinda, sirtin üst kisminda, çenede ve kollarda yag birikintilerini tedavi etmek için, bilesimlerinde PBF°1er bulunan farmasötik preparatlar ya da benzerlerini kullanmaktadirlar (2, 3, 5). Bu PBF"lerde, çogunlukla, Essentiale® ve Lipostabil® ürünlerinde degisen miktarlarda tespit edilen dl-alfa-tokoferol (E Vitamini), B-Vitaininlerive adenozin monofosfat bulunmaz (2, 16).Fosfatidilkolin formülasyonlari; bölgesel yanma hissi, eritem, geçici ürtiker ve degisen derecelerde prüritle iliskilendirilir ve bu advers olaylarin hepsi, genellikle birkaç gün içinde düzelir. Daha ciddi ülserasyon ve agri sekelleri de görülmüstür. Bir hastanin uylugunda, çoklu fosfatidilkolin enjeksiyonlarinin yapildigi yerde bir enfeksiyöz granüloinatöz reaksiyon rapor edilmistir (7). Enjeksiyon dozaji arttikça, fosfatidilkolin de, Lipostabil® oral ve intravenöz formülasyonlarinin yüksek dozlarinda görülen yan etkilere paralel yan etkiler göstermektedir ve bu yan etkiler arasinda bulanti, diyare,abdominal agri ve senkop sayilabilir.Fosfatidilkolin-içeren formülasyonun subkutan yag birikintilerini azaltma mekanizmasi bilinmemektedir, fakat bu konuda birkaç mekanizmanin söz konusu olabilecegi ileri sürülmüstür (4). Bu mekanizmalarin ilki, fosfatidilkolinin lipaz aktivitesini stimüle ederek lipositlerin boyutunu küçültebilmesidir. Alternatif olarak, PBF°lerinliposit hücre membranlarini emülsifiye eden bir deterjan islevinigördügü de ileri sürülmüstür. Deterjanlar, ilaçlarda, onlarca yildir, özellikle skleroterapide yaygin kullanilan skleroze edici ajanlar olarak kullanilagelmislerdir (Amerikan Toplardamar Hastaliklari Dernegi, 2003). Deterjanlar, çözünmeyen maddelerin arayüzeylerinde yüzey gerilimini azaltarak emülsifikasyonu kolaylastiran essiz polar ve non- polar kimyasal özelliklere sahiptirler (17). Esasinda, hücre membranlarinin lipid çift katmaniiii asmak için Triton® X-lOO ve Empigen® BB gibi laboratuvar deterjaiilari yaygin kullanilir (10, 18 - 21). PBF"lerin iki ana bileseni fosfatidilkolin ve sodyum deoksikolat, bu essiz kimyasal özelliklere sahiptirler ve bundan dolayi, birbirlerinden bagimsiz olarak deterjanlar ya da emülsifiye ediciajanlar olarak kullanilmislardir (9, 18, 20 - 25).Dis görünüsü güzellestirmek için uygulanan cerrahi prosedürlerin ve cerrahi olmayan prosedürlerin prevalansi, popülasyonun yasina ve kilo alinaya bagli olarak artmistir. Liposaksin, en popüler kozmetik cerrahi prosedürlerden biridir ve yag birikintilerinin emme yoluyla ve istege göre, yag alimina yardimci olacak çözeltiler yardimiyla cerrahi prosedürlerle alinmasindan olusur. Lipoplasti ya da einme yardimiyla lipektomi olarak da bilinen liposaksin, ciltte bulunan ve kanül sokulmus bir insizyondan yagi çeken bir cerrahi prosedürdür. Kanül, bir emme kaynagina baglanir ve istenmeyen yaglar, bu kanül içinden aspire edilir ve çikartilir. Liposaksin, alinacak yagin miktarina ve konumuna bagli olarak genel anestezi ya da lokal anestezi altindayapilir.Liposaksinin en yaygin kullanilan formlarinda, ek olarak, sivienjeksiyon metodolojileri de uygulanir; bu sivi enjeksiyon metodolojilerinde, bir tuz karisimi, bir anestetik ve bir vazokonstriktör içeren bir ilaçli çözelti, yag dokusunun aspirasyonundan önce tedavi noktasina infüze edilir. Ilaçli çözelti, yagin daha kolay alinmasina yardiinci olur; kan kaybini azaltir ve hem ameliyat esnasinda hem deameliyattan sonra anestezi etkisi saglar.Liposaksin için ad juvan çözeltilerinin bir örnegi, Capella"nin 22 Nisan 1997"de yaptigi müracaat üzerine 6 Nisan 1999'da 5,891,083 ABD Patent Numarasiyla yayiinlanan bir Amerika Birlesik Devletleri Patentinde verilmektedir ve Capella, liposaksin yöntemini ve subkutan yagi almaya yönelik gelismis bir cerrahi prosedüre yönelik bir bilesik içeren bir tasiyici çözelti açiklamaktadir. Capella°nin patentinin bir yapisinda, atif yapilan bilesik bir enziin, özellikle de lipaz ya da kolipazdir. Bu enzim, örnegin salin çözeltisi gibi bir tasiyiciya ilave edilerek bir lipoliz çözeltisi elde edilir. Bu bulusun baska bir yapisinda, Capella, safra tuzlari gibi emülsifiye edici ajanlarin kombinasyon halinde ya da çözeltiye ilave edilen primer etkin bilesik olarak kullanilmasinin da faydali olabilecegini açiklamaktadir. Capella°nin bulusunun her yapisinda, lipoliz çözeltisi, liposaksindan önce belirli bir süre boyunca uygulanarak çözeltinin yag dokusunu infiltre etmesini saglar. Capellaüiin bulusunda hiçbir yerde, tek basina lipoliz çözeltisi kullaniini, vücuttan yag almak için bir cerrahi olmayan yol olarak açiklanmamistir. Capella°nin bulusunda açiklanan örnekler ve spesifik yapilarin hepsinde, yag alma için bir cerrahi prosedür olarak liposaksin kullanilir ve lipaz ve safra tuzlari,liposaksina bir ad juvan olarak sunulur.Bununla birlikte, liposaksin ve baska cerrahi yag alina yöntemleri,geçici morarma, sislik, uyusma, agri ve yanma hissi, enfeksiyon riski, pigmentasyon degisiklikleri, akcigerlere tasinabilecek ve ölüme neden olabilecek yag pihtilari ya da kan pihtilari olusumu, soka neden olabilecek asiri sivi kaybi ya da bosaltilmasi gereken sivi birikimi, friksiyon yaniklari ya da ciltte veya sinirlerde görülen baska hasarlar ya da Vital organlarda perforasyon yaralanmasi da dahil anlamli ve 'Önemli advers olaylarla iliskilendirilir. Ek olarak, liposaksinin iyilesmesi için bir ilâ iki haftalik bir süre gerekir ve bu süre zarfinda, hasta çalisamaz ya da belirli günlük aktivitelerini gerçeklestiremez. Dahasi, liposaksin gibi cerrahi prosedürler lokal ve zaman zaman da genel anestezi gerektirdiklerinden dolayi, anlainli ve önemli anestezi-baglantili riskler, cerrahi yag alma prosedürleriyle iliskilendirilir.Sonuç olarak, bölgesel yag birikintilerini almak ainaciyla uygulanan ve cerrahi müdahale ya da uzun iyilesme süresi gerektirmeyen ve su anda mevcut yöntemlere kiyasla daha az advers yan etkisi olan biryöntem bulunmasi istenmektedir.BULUSUN OZETIBu bulus, bölgesel yag birikintilerinin cerrahi olmayan prosedürlerle alininasi amaciyla kullanilan ve esas olarak, sodyum deoksikolat ve farmas'otik açidan kabul edilebilir bir veya daha fazla yardimci maddeden olusan bir bilesimi enjeksiyon yoluyla uygulama basamagindan olusan bir kozmetik yöntem sunmaktadir; burada, atif yapilan bilesim, fosfatidilkolin içermez. Bu bulus yapilmadan önce, bölgesel yag birikintilerini azaltmak amaciyla kullanilanfosfatidilkolin (PC) ve safra tuzlari içeren ve teknik bilginin bulustan önce ulastigi en son seviyede mevcut olan formülasyonlarin (bu dokümanda bundan böyle fosfatidilkolin safra tuzu formülasyonlari (PBFsler) olarak anilmaktadir) tek basina fosfatidilkolin aktivitesi yoluyla islev gösterdigi düsünülmekteydi. Safra tuzlari gibi deterjanlar, PC"yi disperse etmek ainaciyla yalnizca küçük miktarlarda ilave edildiler. Bu bulus, yalnizca ömegin sodyum deoksikolat gibi safra tuzlarinin bölgesel yag birikintilerini azaltmaktan sorumlu etkin bilesenler olduklarini ve kas ve bag dokular `uzerinde deterjan etkisiyaptiklarini beklenmedik bir biçimde göstermektedir.Bu bulus amaçlariyla, yag alina için kullanilan bir cerrahi-olmayan kozmetik yöntem, liposaksini, lipoplastiyi ya da emme yardimiylalipektomiyi kapsamaz.Bu bulusun ilave baska bir yapisinda, bilesim, ek olarak, dispersiyon ajanlari, penetrasyon arttiricilar ve koruyucu ajanlar arasindan seçilen bir veya daha fazla ilave bilesen de içerir. Bu bulusun bir ilave yapisinda, dispersiyon ajani hyaluronidaz ve kollajenaz arasindanseçilir.Bu bulusun bir yapisinda, hasta, bir insandir.Bu bulusun baska bir yapisinda, cerrahi olinayan yöntem, liposaksinikapsamaz.Bu bulusun yapilarinda, bilesim, subkutan enjeksiyon yoluyladogrudan dogruya yag dokusuna uygulanir. Bu bulusun bir yapisinda, bölgesel yag birikintisi; alt gözkapagi yag fitiklasmasi, bel veya kalçada yag birikintisi, ksantelazma, lipomlar, "buffalo kamburu" lipodistrofisi de dahil lipodistrofi ya da selülitleiliskili yag birikintileridir.Bu bulusun baska bir yapisinda, bölgesel yag birikintisi, alt gözkapagi yag fitiklasmasidir.SEKILLERIN KISA TANIMISEKIL l, (a) fosfatidilkolin, (b) sodyum deoksikolat ve (c) benzilalkolün moleküler yapisini göstermektedir.SEKIL 2, bu bulusta sunulan bilgilere göre, fosfatidilkolin safra formülasyonu (PC Formülü, PBF) ve tek basina sodyum deoksikolatin kültürlenmis hücre canliligi üzerindeki etkilerini göstermektedir: (a) PC Formülüne ve tek basina sodyum deoksikolata maruz birakilmis keratinositlerin canliligini ölçen MTS miktar tayini testi; (b) PC Formülüne ve tek basina sodyum deoksikolata maruz birakilmis hücrelerin LDH salimini ölçenlaktat dehidrojenaz (LDH) miktar tayini testi.SEKIL 3, bu bulusta sunulan bilgilere göre, PBF°nin ve tek basina sodyum deoksikolatin primer domuz yag dokusu üzerindeki etkilerini göstermektedir: (a) negatif kontrol (- Kontrol) olarak PBS tamponuyla ve ayrica, tek basina sodyum deoksikolatla (DC) ve PBF"yle (PC) ve pozitif kontrol olarak (+Kontrol) Triton® deterjanla tedavi edilen yag örneklerinde canlihücrelere isaret eden mor pigment olusumunun MTS iniktar tayini testi; (b) Farkli tedaviler arasinda yag hücresi canliliginin bir karsilastirmasi.SEKIL 4, bu bulusta sunulan bilgilere göre, pozitif kontrol (+ Kontrol) olarak tek basina sodyuin deoksikolatla (DC) ve ayrica, PBF°yle (PC) ve Triton® deterjanla ve negatif kontrol (- Kontrol) olarak PBS tamponuyla tedavi edilen yag örneklerinde kalseinfloresansini göstermektedir.SEKIL 5, bu bulusta sunulan bilgilere göre hazirlanan bilesimlerle tedaviden sonra domuz deri biyopsisinin isik mikroskopisini göstermektedir; bu isik mikroskopisi, (a) kontrol lipositleri ve (b) PBF enjeksiyonundan sonra lipositler (H&E, orijinal büyütme orani, X20); (0) kontrol lipositleri ve (d) tek basina sodyum deoksikolat enjeksiyonundan sonra lipositler (H&E, orijinal büyütme orani, X10); (e) kontrol kasi ve (f) tek basina fosfatidilkolin enjeksiyonundan sonra kas (H&E, orijinal büyütme orani, x10); (g) Empigen® deterjaiila enjeksiyondan sonra yag (H&E, orijinal büyütme orani, x20) parametreleriniortaya çikarmaktadir.SEKIL 6, bu bulusta sunulan bilgilere göre deoksikolatla enjeksiyondan iki gün sonra bir hastadan alinan bir lipomu göstermektedir: (a) gros patoloji ve (b) histolo ji (H&E, orijinalbüyütme orani, XZO).BULUSUN DETAYLI TANIMI Bu bulus, farinasötik açidan kabul edilebilir formülasyonlar içinde yag-çözündürücü konsantrasyonlarda deterjanlar uygulamak suretiyle yag birikintilerini alma amacina yönelik bir cerrahi olmayan yöntemsunarak hastalarda bölgesel yag birikintisi problemini çözer.Infraorbital yag fitiklasmasini ve bölgesel yag birikintileri bulunan baska alanlari tedavi etinek için, saflastirilmis fosfatidilkolin (PC) ve sodyum deoksikolati (fosfotilipidi çözündürmek için kullanilan bir safra tuzu) birlestiren ve teknik bilginin bulustan önce ulastigi en son seviyede mevcut olan formülasyonlarin (fosfatidilkolin safra formülasyonu, PBF) enjeksiyonlari kullanilmistir (1 - 8). Fosfatidilkolinin safrada bir emülsifiye edici olarak üstlendigi rol ve hiperlipidemi tedavisinde kullanildigi dikkate alinarak, PBF"lerde etkin bilesen olarak fosfatidilkoliii kullanilmasi düsünülmüstür (1, 2, 21, 25-27). Teknik bilginin bulustan önce ulastigi en son seviyede mevcut bilesimler içinde safra tuzlari gibi deterjanlar, yalnizca varsayilan etkin bileseni (PC) dISperse etmek ya da çözündürmek amaciyla ilave edildi. Bununla birlikte, bu zainana kadar, bu teoriyi destekleyen yayimlanmis herhangi bir rapor mevcut degildir. Bu bulusun sahipleri, safra tuzunun aslinda bölgesel yag einülsifikasyonu için etkin bilesen oldugunu bekleninedik bir biçimde göstermis vekanitlainislardir.Deterjanlar arasinda özellikle safra tuzlari, lipid çift katmani membranlarinin kuvvetli çözündürücüleridirler (9, 20, 21, 23, 28). Biyolojik hücre membranlarinin hepsi, ayni bilipid yapisindan olusur ve bundan dolayi, deterjanlar tarafindan çözündürmeye tâbidirler (10,19, 34). Hücre meinbranlarinin bir deterjan tarafindan çözündürülmesi prosesi, deterjani lipid çift katinanlari arasinda dagitina, çift katmani destabilize etme, parçalama ve ardindan karisik miseller (deterjan ve hücre membrani lipidinden olusur) olusturma basamaklarini kapsar (10, 19, 21). Safra tuzlari ve baska deterjanlar, karismaz malzemeler sinirinda yüzey gerilimini azaltir ve büyük agregalarin parçalanarak daha küçük partiküllere dönüsmesine olanak saglar. Dokuda, bu ajanlar, hücre membranlarini çözündürür ve hücre lizizine neden olur. Vücudun deterjanin çözündürdügü malzemeyi atmasina yol açan birinflamatuar cevap olusur.Bu sebeple, bu bulusun sahipleri, hücre canliligini Ölçen basit bir miktar tayini yöntemi kullanarak sodyum deoksikolati tam PBF"y1e kiyaslamislardir (SEKIL Za). Saf fosfatidilkolini izole ve test etmek inümkün degildir, çünkü safra tuzlari gibi maddelerle birlestirilmedigi sürece, aköz çözeltiler içinde çözünmez (12). Fosfatidilkolin; etanol, metanol, kloroform ve baska organik çözücüler içinde yüksek düzeyde çözünür, fakat bu ajanlar, lipid çift katmanlarina zarar verebilir (29- 31). On deneylerde, saf, izole edilmis PC ve onu çözündürmek için kullanilaii etaiiol arasinda hücre lizizi ve histoloji açisindan herhangi bir fark yoktu. PC formülü bilesenlerinden biri olan beiizil alkolün hücre meinbranlarinin akiskanligini etkiledigi gösterilmis olmasina ragmen, bu madde bir deterjan degildir ve bundan dolayi, formülde bulunan sinirli miktari, hücre membranlari üzerinde ihmal edilebilirlitik etkiler yapar (32, 33).Intakt dokulara penetrasyon muhtemelen kisitlayici bir faktör olabileceginden dolayi, hücreleri etkilemek için gereken reaktifseyreltilerini (PBF ve deoksikolat) tayin etmek gayesiyle hücre kültürleri kullanildi. Deoksikolat, tam PBF°ye yaklasik olarak esit düzeyde kültürleninis hücre canliligini belirgin düzeyde azaltti (SEKIL Za). Bu bulgu, domuz yagi PBF ve deoksikolata maruz birakilarak dokuda da tekrarlandi (SEKIL 3). Bu sonuçlar, sodyum deoksikolatin PBF°de bir temel aktif rol oynadigi yönündekibeklenmedik gözlemi destekleyici niteliktedir.Bu bulusun sahiplerinin baglayici-olmayan bir hipotezi, deoksikolatin ve PBF°nin deterjan etkisiyle hücre membranlarini parçalayarak hücre canliligini etkiledigiydi. Bir laktat dehidrojenaz (LDH) miktar tayini yöntemi uygulayarak ve intakt hücre membranlari bulunan hücrelerde kalan bir floresan marker olan kalsein kullaninak suretiyle, doku içinde, kültürlenmis hücrelerdeki membran lizizi ölçüldü. LDH miktar tayini yöntemi, hücreler lize edildiginden salinan sitosolik enzim olan LDH°nin aktivitesini ölçer. Hem PBF°yle tedavi edilen hücre kültürleri hem de deoksikolatla tedavi edilen kültür hücreleri, hücre lizizinde konsantrasyona bagli bir artis gösterdiler (SEKIL 2b). Ek olarak, bu ajanlarla tedavi edilmis kültürlenmis hücrelerde gözlemlenen dogrudan litik etkiler, aktivitenin endojen lipazdan bagimsiz olduguna isaret etmektedir. PBF, deoksikolat ve Triton® X- 100"e (bilinen bir laboratuvar deterjani) maruz birakilan yag örneklerinde kalsein kayboldu (SEKIL 4). Bu bulgu, hem PBFsye hem de deoksikolata maruz birakilan taze dokuda hücre membranlarininparçalandigini teyit etti.Hücre kültüründe PBF etkilerinin deoksikolat etkileriyle karsilastirilmasi, deoksikolatin benzer düzeyde hücre canliligi kaybinaneden oldugu, fakat daha az hücre lizizi etkisine yol açtigi yönündesasirtici sonuçlar elde edilmesini sagladi. Bu farklar konsantrasyona bagli olabilir ya da formülde fosfatidilkolin ile deoksikolat arasinda sinerjik etkiler olabilir. Bununla birlikte, veriler, klinik uygulamada kullanilanlara benzer konsantrasyonlarda, deoksikolat ve PBF"nin doku histolojisi ve hücre canliligi üzerinde benzer etkiler yaptiklarini göstermektedir. Hepsi birden düsünüldügünde, bu veriler, deoksikolatiii teknik bilginin bulustan önce ulastigi en son seviyede mevcut PBF"de etkin bilesen islevini gördügünü beklenmedik birbiçimde göstermekte ve kaiiitlamaktadir.Deterjanlarin doku histolojisi üzerindeki etkisini göstermek için, taze domuz derisine PBF, deoksikolat ve iyi-karakterize edilmis laboratuvar deterjanlari enjekte edildi (SEKIL 5). Reaktiflerin hepsi, PBS en jeksiyonuna (kontrol) kiyasla liposit organizasyonunun anlamli ve önemli düzeyde bozulmasina neden oldur. Bu sonuçlar, benzer sekilde kas ve bag doku içinde de gözlemlendi. Test maddelerinin hücre sinirlarini hizla çözündürmesi ve bunlarin etkilerinin iyi karakterize edilmis deterjanlara benzerligi, PBF ve deoksikolatin deterjan olarak islev gördügü bulgusunu dogrulamaktadir. Bu deney modelinin kisitlayici özelligi, canli dokuya enjeksiyondan sonra meydana gelen gercek sekeli yansitmamasidir. Enjeksiyondan sonra, eritem ve ödem olarak belirgin bir canli inflamatuar cevabin meydana geldigi klinik raporlardan açik ve net görülmektedir (1-3). Tekrarlayan inflamasyonun özellikle çoklu enjeksiyonlardan sonra fibrozise neden olma potansiyeli bulunabilir. PBF uygulamasindan sonra enjeksiyon yerlerinde (birkaç ayda tamamen iyilesen) sert nodüller olusan birkachastada fibrozis rapor edilmistir (35).Histolojik bulgular, enjekte edilebilir PBF ve tek basina deoksikolatiii yag ve kasta yapisal bozukluklara neden oldugunu, fakat epiderinis, dermis ya da adneks üzerinde açik ve belirgin herhangi bir etki yapmadigini ortaya çikarmistir (SEKIL 5). Bununla birlikte, kuvvetli bir laboratuvar deterjani olan Empigen® BB, dermal kollajen üzerinde belirgin histolojik etkiler yapti. Alternatif olarak, yag ve kas, test edilen konsantrasyonlarda (klinik uygulamada kullanilan benzer koiisantrasyonlarda), bu diger yapilara kiyasla deterjan tedavisinedaha hassas olabilir.Taze doku Örnekleri ve hücre kültürleri kullanilan bir dizi laboratuvar deneyinde, bu bulusun sahipleri, esas olarak hücre ineinbranlarinin spesifik olmayan lizizine neden olmalarindan dolayi, yag çözündürme amacina yönelik subkutan enjeksiyonlarda, genelde, teknik bilginin bu bulustan önce ulastigi en son seviyede inevcut PBF°nin kullanildigini göstermislerdir. Hücre membranlari, tüin doku tiplerinin bilesenidir; daha soinut ifade etinek gerekirse, bu bulusun sahipleri, bu deterjanlarin yag, kas ve bag doku çözünmesiiie neden oldugunu göstermislerdir. Bundan dolayi, bu bulusun sahipleri, formülün safra tuzu bileseni olan ve fosfatidilkolini çözündürmek amaciyla kullanilan sodyum deoksikolatin teknik bilginin bu bulustan önce ulastigi en son seviyede mevcut formülasyonlarm ana etkin bileseni oldugu sonucuna varmislardir. Bu sonuç, safra tuzlarinin hücre membranlariniii kuvvetli çözündürücüleri oldugu bulgusuyla da desteklenmektedir. Ek olarak, yag çözündürmede PBF ve sodyum deoksikolatin mekanizmasi,muhtemelen deterjan etkilerine dayanmaktadir.Bu bulusun bir yapisinda, bilesim, bir aköz vehikül içinde sodyumdeoksikolat ve farmasötik açidan kabul edilebilir yardimci maddeleriçerir.Bu bulusun ögretilerine göre kullanma amacina yönelik uygun sodyum deoksikolat konsantrasyonlari yaklasik %0,001 ile yaklasik %50,000 araligindadir. Nihai konsantrasyonun, sadece bunlarla sinirli kalmaksizin tedavi yerinin konumu ve büyüklügü de dahil, sektörde bilgi ve beceri sahibi kisilerin bildikleri birçok faktöre bagli olduguanlasilmaktadir.Bu bulusa göre üretilen bilesimler, dispersiyon ajanlari, penetrasyon arttiricilar ve koruyucu ajanlar arasindan seçilen ilave bilesenleriçerebilir.Bu bulusa konu olan bilesimler için uygun farmakolojik açidan kabul edilebilir aköz vehiküller arasinda, örnegin, sodyum deoksikolati çözündürebilen ve formülasyonun uygulandigi kisiye toksik olmayan herhangi bir akici çözelti sayilabilir. Farmasötik açidan kabul edilebilir aköz vehiküllere örnek olarak, bunlarla sinirli kalmaksizin, salin, su ve asetik asit gösterilebilir. Normalde, farmasötik açidankabul edilebilir aköz vehiküller sterildir.Bu bulusun yapilarinda kullanilabilecek farmakolojik açidan aktif deterjan bilesimleri, bölgesel yag birikintilerinin cerrahi olmayan prosedürlerle alinmasi için kullanilabilecek sekilde formüle edilir. Bu bulus kapsaminda kullanilan "cerrahi olmayan prosedür" ibaresi, bir insizyon gerektirmeyen tibbi prosedürlere atif yapmaktadir. Bu cerrahiolmayan prosedürlere örnek olarak enjeksiyonlar gösterilebilir. Liposaksin, bir cerrahi prosedürdür.Bu bulusun bir yapisinda, bilesim, bolus enjeksiyon yoluyla uygulanir. Etkili olmasi için, bilesiinin yag dokusuyla dogrudan teinas etmesi gerekir. Formülasyonlar, subkutan yoldan enjekte edilebilirler. Enjeksiyoiiluk formülasyonlar, ilave edilmis bir koruyucuyla birlikte birim dozaj formunda, örnegin ampuller ya da çoklu-doz kaplari içinde sunulabilirler. Bilesiinler, yagli ya da aköz vehiki'iller içinde süspansiyonlar, çözeltiler ya da emülsiyonlar gibi formlarda olabilirler ve örnegin, süspanse, stabilize ve/Veya disperse edici ajanlar gibiforini'ilasyon ajaiilari içerebilirler."Farmasötik açidan kabul edilebilir yardimci madde" ibaresi, genellikle emniyetli olan, toksik olinayan ve ne biyolojik açidan ne de baska açilardan istenmeyen nitelikte olan bir farmasötik bilesim hazirlama prosesinde kullanilabilecek bir bilesik anlainina gelir ve veterinerlik kullanimi ya da beseri farmasötik kullanim için kabul edilebilir yardimci maddeleri kapsar. Bu patent spesifikasyonunda ve istemlerinde kullanilan farmasötik açidan kabul edilebilir bir yardimci madde, bir ve birden fazla yardinici maddeyi kapsar. Uygun yardimci maddelere örnek olarak laktoz, dekstroz, sukroz, sorbitol, mannitol, nisastalar, akasya sakizi, kalsiyum fosfat, al jinatlar, tragakant, jelatin, kalsiyum silikat, mikrokristalin selüloz, polivinilpirrolidon, fosfatidilkolin, selüloz, steril su, surup ve metil selüloz gösterilebilir. Formülasyonlar ek olarak asagida sayilan bilesenleri de içerebilirler: örnegin talk, magnezyum stearat ve inadeni yag gibi kayganlastirici ajanlar; islatma ajanlari; emülsifiye ve süspanse edici ajanlar veörnegin, metil- ve propilhidroksi-benzoatlar ve benzil alkol gibi koruyucu ajanlar. Bu bulusa konu olan bilesimler, sektörde bilinen prosedürler kullanilarak, hastaya uygulandiktan sonra etkin bilesenin çabuk, sürekli ya da geciktirilinis salimina olanak saglayacak sekilde formüle edilebilirler.Bu bulusa konu olan bilesimlerle formülasyon için uygun ilave yardiiiici maddeler arasiiida penetrasyon arttiricilar ve dispersiyon ajanlari sayilabilir. Ilaçlarin doku içinde dispersiyonuna olanak saglayan dISpersiyon ajaiilarina 'Örnek olarak, bunlarla sinirli kalmaksizin, hyaluronidaz ve kollajenaz gösterilebilir. Hyaluronidaz, diger ilaçlarin doku geçirgenligini ve yayilmasini ya da dispersiyonunu arttirma islevini görür. Kollajenaz ise, adipositleri subkutan yagdan izole etmek ainaciyla kullanilmistir ve adipositlerin kendisi üzerinde litik etkiler yapmaz. Ek olarak, hyaluroiiidaz ve kollajenaz, bu bulusa konu olan deterjan formülasyonlariyla tedavinin ardindaii iiekrotik dokularin vücuttan alimini hizlandirarak iyilesineyikolaylastirabilir.Bu bulusa konu olan farinakolojik açidan aktif deterjan bilesimleri, bunlarla sinirli kaliiiaksizin alt gözkapagi yag fitiklasmasi, belde, kalçada ve baska kozmetik alaiilarda yag birikintileri, ksantelazma, lipomlar ve buffalo kamburu lipodistrofisi de dahil lipodistrofi de dahil bölgesel yag birikintilerini tedavi etmek için kullanilabilir (3). Bu bulusun baska bir yapisinda, bu bulusa konu olan deterjan bilesimleri, selülitle iliskilendirilen yag birikintilerini tedavi etmekiçin kullanilabilir.Asagida verilen 'Örnekler, bu bulusa konu olan bilesiinleri veyöntemleri daha açik ve net tanimlamak ve saglamak için sunulmustur. Bu bulusun kullanilmasina iliskin baska birçok yapinin ve yöntemin mevcut oldugu ve sektörde olagan bilgi ve beceri sahibi kisilerin bu patent spesifikasyonuiiu ve örnekleri okuduktan ve anladiktan sonra bu yapilari açikça anlayacaklari anlasilmaktadir. Asagida verilen örnekler, bulusun bir veya daha fazla yapisini açiklama ve ömeklendirme amacina yöneliktir ve bulusu asagidaaçiklananlarla sinirlandirmak hedeflenmemektedir.ÖRNEKLEROrnek 1Sodyum Deoksikolat ve Fosfatidilkolin FormûlasvonlariFosfatidilkolin safra tuzu formûlasyonu (PBF) (steril su içinde %5,0 yüksek düzeyde saf soya türevi PC, %4,75 sodyum deoksikolat ve %0,9 benzil alkol; Tablo 1), HOpewell Pharmacy, HOpewell, NJ firmasindan temin edildi. Sodyum deoksikolat ve Triton® X-lOO deterjan (Triton®, alkilaril polieter alkol), Sigma-Aldrich Corp. (St. Louis, MO) firmasindan temin edildi. Empigen® BB deterjan (Empigen®, laurildimetilbetain), Calbiochem, Biosciences, Inc., La J olla, CA firmasindan temin edildi. Stok reaktifler (%5 seyreltiler) ise PBS tamponu içinde hazirlandi.(a) Fosfatidilkolin, (b) sodyum deoksikolat ve (c) benzil alkolünmoleküler yapisi Sekil 1°de gösterilmektedir.Tablo 1. Enjeksiyonluk PBF Fosfatidilkolin %5,00 (agirlik/hacim) Sodyum deoksikolat %4,75Benzil alkol %0,90Su 100 mL Ornek 2Kültürlenmis Hücreler Içinde Sodyum Deoksikolat veFosfatidilkolin Cözeltilerinin EtkileriDeterjan tedavisinden sonra hücre canliligini ölçmek için, HaCaT insan keratinosit hücreleri, %10 fetal buzagi serumu, penisilin ve streptomisin ilave edilmis DMEM (Dulbecco"nun modifiye Eagle vasati) içinde kültürlendi. HaCaT hücreleri, 6 kuyucuklu plakalar içinde kültürlendi ve metabolik açidan aktif hücreler tarafindan biyo- indirgendiginde bir renk degisikligi yapan tetrazolyum bilesiginin kullanildigi MTS miktar tayini yöntemi (CellTiter 96® AQueous Non- Radyoaktif Hücre Proliferasyonu Miktar Tayini Testi, Promega, Corp. Madison, WI) kullanilarak hücre canliligi tayininden Önce 37°C sicaklikta 30 dakika süreyle %0, %0,005, %0,050 ya da %0,500 PBF (PC Formülü) ya da sodyum deoksikolatla inkübe edildi. Hücre canliligi, miktar tayini malzemesiyle 37°C sicaklikta 4 saat süreyle inkübasyonun ardindan bir absorbans spektrofotometresiyle (490 nm"de) belirlendi. Taze dokuda hücre canliligini tayin etmek için, yag örnekleri, 24 kuyucuklu plakalarda 4 saat süreyle stok reaktifler ve MTS miktar tayini malzemesiyle inkübe edildi. Daha sonra, doku örneklerinde renk degisikligi izlendi ve bunlarin süpernatanlarinda MTS miktari absorbansla (490 nm"de) ölçüldü. Çalismalarin hepsi üç defa tekrarlandi. 490 nm"de absorbans (0D 490), kültürdeki canlihücre sayisiyla orantilidir. Kontrol malzemesinde ve her iki bilesigin%0,005 seyreltilerinde karsilastirilabilir ve denk OD 490 elde edildi (SEKIL 221); bu sonuç, bu maddelerin bu konsantrasyonda hücre canliligi üzerinde çok küçük etkiler yaptigina isaret etmektedir. Her iki çözeltinin %0,05 ve %0,5 konsantrasyonlarinda hücre canliligikademeli olarak azaldi.Belirtilen hücre seyreltisi oranlarinda reaktiflerle 37°C sicaklikta 30 dakika süreyle inkübe edilmis HaCaT hücrelerinde, deterjan tedavisine cevap olarak hücre lizizi tayin edildi. Uretici talimatlarina göre LDH miktar tayini malzemesiyle (CytoTox 96® Non-Radyoaktif Sitotoksisite Miktar Tayini, Promega) 1 saat süreyle inkübasyonun ardindan absorbansla (490 nm"de) laktat dehidrojenaz salimi ölçüldü. Çalismalarin hepsi üç defa tekrarlandi. LDH salimi, 490 nm"de absorbansla (CD 490) dogru orantilidir. Kontrol hücrelerinden ve her iki bilesigin %0,005 seyreltileriyle inkübe edilmis olanlardan miniinum LDH salimi gözlemlendi (SEKIL Zb). %0,05 ve %0,5 PBF ve deoksikolat konsantrasyonlarinda giderek daha fazla LDH saliinigörüldü.Ornek 3Domuz Dokusu Içinde Sodvum Deoksikolat ve FosfatidilkolinCüzeltilerinin Etkileri Domuz kurban edildikten hemen sonra dokusu alindi; tiraslandi ve kullanmadan önce maksimum dört saat süreyle buz üzerine konuldu. Punch biyopsiiiin epidermis ve dermisi bir bisturiyle çikartilarak yag'Örnekleri alindi ve test için hazirlandi. Yag örnekleri, 37°C sicaklikta 1 saat süreyle Kalsein-AM ile (Sigma) inkübe edilerek bunlara kalsein boyasi yüklendi. Yag numunelerine stok reaktifler ilave edildi ve bir yandan hafif hafif karistirarak 37°C sicaklikta 30 dakika süreyle inkübe edildi. Mor (411 nm) isik kullanarak doku floresansi yöntemiyle ve emisyon filtreleri kullanarak yayilan yesil (500 nm) isigi görsel olarak gözlemlemek suretiyle kalsein alikonmasi tayinedildi.Tam kalinlikta domuz derisinin çesitli farkli kademelerine (epidermis, dermis ve subkutan doku), 1,0 mL siringalar ve 30-gauge, 0,5 inç ignelerle stok reaktif çözeltileri (0,5 mL) enjekte edilerek histoloji çalismalari yapildi. Hedef dokuyu doygunluga ulastirmak amaciyla, domuz dokusunun marjini boyunca igne derinligi gözlendi. 37°C sicaklikta PBS"yle inkübasyondan bir saat sonra, enjeksiyon yapilan yerlerden çoklu 5,0 mm biyopsi örnekleri alindi ve her biri üç defa tekrarlandi. Doku, formaldehite sabitlendi; içerisine parafin gömüldü ve hematoksilin-eozinle boyandi. Ornekler, tedavi protokolüne körolan bir yeterlik sertifikali dermatopatolog tarafindan degerlendirildi.Bu deterjan maddelerinin kültürlenmis hücreler üzerindeki etkilerinin dokuda benzer olup olmadigini tayin etmek için taze domuz derisi kullanildi. SEKIL 321, MTS miktar tayini yöntemi kullanilarak PBS tamponuyla (negatif kontrol) tedavi edilen yag dokusunda koyu mor pigment üretimini (canli hücrelere isaret eder) göstermektedir. PBF ve %5 deoksikolat çözeltileri ve Triton® deterjan (pozitif kontrol), tedavi edilen yag örneklerinde karsilastirilabilir ve denk düzeyde mor boya kaybi (hücre ölçüme isaret eder) gösterdiler. Çözeltiler arasinda yaghücresi canliligi açisindan fark, tedavi edilen yag örneklerindentoplanan süparnatanlarin absorbansi (490 seviyesinde) ölçülerek tayin edildi (SEKIL 3b). Reaktiflerin hepsinin taze dokunun yag hücresi canliligi üzerinde anlamli ve önemli etkileri vardi.Bir kalsein boya salimi miktar tayini yöntemi kullanilarak hücre lizizi teyit edildi. Hidrolizden sonra kalsein floresan olinaya baslar ve intakt hücre membranlari olan hücrelerde alikonur. Olü hücreleri etiketlemediginden ve hücre lizizine neden olan kosullar altinda kayboldugundan dolayi, kalsein boyasi yüklenmis yag dokusu örneklerinde yesil floresans kaybi, hücre lizizine isaret eder (SEKIL 4). Deoksikolat, PBF ve Triton® deterjanla (pozitif kontrol) tedaviedilen örnekler, benzer düzeyde floresans kaybi gösterdiler.PBF, deoksikolat ve Empigen® enjeksiyonundan kaynaklanan histolojik degisiklikler, SEKIL 5,de gösterilmektedir. Fosfatidilkolin safra tuzu formülasyonu (SEKIL 5b) ve deoksikolat (SEKIL 5d), iyi- karakterize edilmis iki laboratuvar deterjani olan Empigen® (SEKIL Sg) ve Triton® (gösterilmemistir) deterjanlarin etkilerine benzer histolojik etkiler ürettiler. Hein yagda hem de kasta bu degisiklikler açik ve net görüldü. Hem PBF (SEKIL 5b) hem de deoksikolat (SEKIL 5d) enjeksiyonundan sonra, normal lobüler yapisinin bozulinasiyla adiposit hücre membranlarinda belirgin bulanina ve çözünme görüldü. Sekil 51`, PBF enjeksiyonundan sonra kas fiber düzensizligini ve atrofisini göstermektedir. Deoksikolat ve Triton® ve Empigen® deterjanlarla tedavi edilen örneklerde, kas dokusunda benzer degisiklikler görüldü. Fibroblast nükleer boya kaybina ve dermal kollajen hyalinizasyonuna neden olan Empigen® hariç, reaktiflerin en jeksiyonundan sonra, epidermis, dermis ya da adneksalyapilarda herhangi bir degisiklik olmadi. Ornek4Sodyum Deoksikolat Bilesimlerivle Yapilan Klinik Denev Lipomlari (benign, izole adipoz doku toplanmalari) olan hastalara, dogrudan dogruya lipoma fosfatidilkolin içermeyen sodyum deoksikolat (DC) çözeltileri enjekte edildi. Bu çalismanin sonuçlari, hayvan dokularinda yag üzerinde görülen deoksikolat deterjan etkilerinin insanlarda klinik olarak tekrarlandigini göstermektedir. Degisen konsantrasyonlarda deoksikolatla en az bir tedavinin ardindan, enjeksiyon yapilan lipomlarin hepsinin boyutu küçüldü (Tablo 2). %1 DC enjekte edilmis bir hastadan alinan bir lipom, tedaviden sonra eksize edildi ve patolojik ve histolojik analiz yapildi. Eksize edilen lipom içinde, nekroz gözle görülebilir düzeyde büyüktür (SEKIL 621) ve rengi daha açik olan normal lipom yagiyla kontrast olusturan lipom yaginin ortasina dogru uzanan lateral uç üzerinde hemoraj ve nekroz alani çok belirgin ve açikça görülmektedir. Histolojik analiz (SEKIL 6b), tam ve iyi belirlenmis bir hemoraj ve nekrotik yag alanini ve ek olarak, bitisik normal yuvarlak seffaf yag hücrelerine kontrast olusturan önemli inflamatuar reaksiyonugöstermektedir.Tablo 2. DC tedavisinden sonra lipomlarin boyutunda azalma Lipom Tedavi öncesi boyut (cm) Tedavi sonrasi boyut (cm) Toplam tedavi(enjekte edilen DC %,si) 2,00 x 1,00 1,25 X 0,50 2 (%2,5) 2,00 1,50 x 0,50 3 (%5 ve %2,5) 2,00 x 2,50 2,00 X 1,00 3 (%5 ve %2,5) 400 x 3,50 2,50 x 2,00 2 (%1)Lipom Tedavi 'Öncesi boyut (cm) Tedavi sonrasi boyut (cm) Toplam tedavi(enjekte edilen DC %'si)2,00 x 1,75 1,25 2 (%1) 2,80 0,50 1 (%5) 1,00 Görülemez. 1 (%1) Aksi belirtilmedikçe, bu patent spesifikasyonunda ve istemlerinde, bilesenlerin miktarlarini ve 'Örnegin molekül agirligi, reaksiyon kosullari ve benzeri özellikleri gösteren rakamlarin hepsinin kosullara göre degisiklik gösterebilecekleri, metinde kullanilan "yaklasik" kelimesiyle gösterilmistir. Buna uygun olarak, aksi belirtilmedikçe, asagida verilen patent spesifikasyonunda ve ekli istemlerde sunulan sayisal parametreler, bu bulusla elde edilmek istenen özelliklere bagli olarak degisebilecek yaklasik degerlerdir. Esdegerler doktrininin bu bulus istemleri kapsamina uygulanmasini sinirlandirmamak sartiyla ve en azindan, burada verilen sayisal parametrelerin her biri, rapor edilen anlamli basamaklarin sayisi isiginda ve normal yuvarlama teknikleri uygulanarak yorumlanmalidir. Bu bulusun genel kapsaminda belirtilen sayisal araliklar ve paranietreler sadece yaklasik degerleri gösterirler; oysa spesifik örneklerde verilen sayisal degerler mümkün oldugu kadar dogru ve kesin verilerdir. Buna ragmen, her sayisal degerin ve rakamin ilgili test ölçümlerinde bulunan standart sapmadan mutlakakaynaklanan belirli hatalar içeririeleri dogalari geregidir.Bu bulusu açiklamak amaciyla (özellikle de, asagida verilen istemler baglaminda) kullanilan "bir", "0", "bu" ve benzeri gibi belgisizlik ve belgililik içeren göndergeler, bu dokümanda aksi belirtilmedikçe ya da baglamla açikça çelismedikçe, ilgili kelimelerin hem tekil hem deçogu] hallerini kapsayacak sekilde yorumlanmalidirlar. Budokümanda deger araliklariiiin verilmesinin tek amaci, bu aralik dahilinde yer alan her bir ayri degere tek tek atif yapmanin kisa bir yolu olmasidir. Bu dokümanda aksi belirtilmedikçe, her münferit deger, burada tek tek belirtilmis gibi spesifikasyona dahil edilir. Burada açiklanan yöntemlerin hepsi, bu dokümanda aksi belirtilmedikçe ya da baglamla açikça çelismedikçe, uygun herhangi bir sirayla gerçeklestirilebilir. Bu dokümanda sunulan örneklerin ya da örneklendirme sözcüklerinin (mesela "örnegin, gibi") herhangi birisinin ve hepsinin kullanilinasinin tek amaci, bulusu daha iyi açiklamaktir ve aksi belirtilmedikçe, bu bulusun kapsamini sinirlandirmazlar. Patent spesifikasyonunda kullanilan hiçbir dil, bulusun uygulamasi için gerekli olan, fakat istemlerde talep edilmeyenbir unsura isaret ettigi seklinde yorumlanmamalidir.Bu dokümanda açiklanan bulusun alternatif unsurlarinin ya da yapilarinin gruplandirilmasi, sinirlama olarak yorumlanmamalidir. Her bir grup üyesine tek tek atif yapilabilecegi ve her bir grup üyesi tek tek talep edilebilecegi gibi, burada bulunan baska grup üyeleriyle ya da baska unsurlarla kombinasyon halinde de olabilirler. Kolaylik olmasi amaciyla ve/Veya patent alabilmek gayesiyle, bir grubun bir veya daha fazla üyesinin bir gruba dahil edilebilecegi ya da o gruptan silinebilecegi öngörülmektedir. Herhangi bir dahil etme ya da silme söz konusu oldugunda, spesifikasyonun modifiye edilmis gruplari içerdigi ve böylece, ekte sunulan istemlerde kullanilan tüm Markushgruplarin yazili açiklamasina uygun oldugu varsayilir.Bulusu gerçeklestirmek için bulus sahiplerinin bildikleri en iyi yol dadahil, bu bulusuii tercih edilen yapilari bu dokümanda açiklanmaktadir. Sektörde bilgi ve beceri sahibi bir kisi, yukarida verilen tanimi okudugumda, tercih edilen bu yapilarda ne gibi degisiklikler yapilabilecegini elbette açik ve net bilir ve anlar. Bulus sahipleri, uygun olmasi halinde, sektörde bilgi ve beceri sahibi kisilerin bu degisiklikleri yapinasini beklerler ve bu bulusun bu dokümanda spesifik olarak açiklanandan baska sekillerde de uygulanabilmesini hedeflerler. Bu dogrultuda, bu bulus, yürürlükte kanunlarin izin verdigi ölçüde, bu dokümana ekli isteinlerde atif yapilan konunun tüm modifikasyonlarini ve esdegerlerini kapsar. Ek olarak, yukarida açiklanan unsurlarin olasi tüm varyasyonlarindaki tüm kombinasyonlar, burada aksi belirtilmedikçe ya da baglain açikçaaksini söylemedikçe, bu bulusun kapsamina girmektedir.Ek olarak, bu patent spesifikasyonu boyunca birçok pateiite ve basiliyayina atif yapilmistir.Sonuçta, burada açiklanan bulus yapilarinin mevcut bulusun prensiplerini açikladigi anlasilmalidir. Yapilabilecek baska modifikasyonlar da bu bulusun kapsami dahilindedir. Dolayisiyla, `Örnegin, sadece bunlarla sinirli kalmaksizin, bu bulusun alternatif konfigürasyonlari da bu bulusun ögretilerine göre kullanilabilir. Bu dogrultuda, bu bulus, sadece burada açikça gösterilenler ve tarifedilenlerle sinirli degildir.TARIFNAME IÇERISINDE ATIF YAPILAN REFERANSLARBasvuru sahibi tarafindan atif yapilan referanslara iliskin bu liste, yalnizca okuyucunun yardimi içindir ve Avrupa Patent Belgesinin bir kismini olusturmaz. Her ne kadar referanslarin derlenmesine büyükönem verilmis olsa da, hatalar veya eksiklikler engellenememektedirve EPO bu baglamda hiçbir sorumluluk kabul etmemektedir.Tarifname içerisinde atifta bulunulan patent dökümanlari:. US 57287904 P [0001] - wo 2005063205 A [0005]- US 5891083 A, Capella and Capella id="p-12" [0012]Tarifnamede belirtilen patentlestirilmemis literatür:° RITTES PG. The use of phosphatidylcholine for correctionof lower lid bulging due to prominent fat padsDermatol Surg, 2001, vol. 27, 391-2 [0060]- ABLON G; ROTUNDA AM. Treatment of lower eyelid fat pads using phosphatidylcholine: clinical trial and review. Derm Surgery, 2004, vol. , 422-7 [0060]° SERRA M. Subcutaneous infiltration With phosphatidylcholinesolution for treatment of buffalo hump and fatty pads. Antiviral Therapy, 2001, vol. 6, 75-6 [0060]o Lipoplasty (liposuction) without surgery?, ASAPS. American Society for Aesthetic Plastic Surgery, October 2002 [0060]° BAUMAN LS. Phosphatidylcholine. Skin and Allergy News, 2003, 34 [0060] o BATES B. Fat dissolving' substance in jects CCS of controversy. Skin and Allergy News, 2003, 34 [0060]0 BELLMAN B. Phosphatidylcholine reaction. Skin and Allergy News, 2003, vol. 34 [0060]° VICTOR S. Phosphatidylcholineo HAMMAD MA ; MULLER BW. Increasing drug solubility by means of bile salt-phosphatidylcholine-based mixed inicelles. Eur J Pharm Biopharm, 1998, vol. 46, 361-7 [0060] - Phospholipids and liposomes - safety for cosmetical and pharmaceutical use. PARNHAM MJ ; WENDELA. Nattermann Phospholipid. GMBH Scientific Publication, 1995 [0060]° LIPOSTABIL. Product insert: Aventis Pharma, 2003[0060]° GOLDMAN L ; BENNET JC ; CECIL RL. Cecil Textbook of Medicine. W.B.. Saunders Co, 2001 id="p-60" [0060]o WOMACK MD ; KENDALL DA ; MACDONALD RC.Detergent effects on enzyme activity and solubilization of lipid bilayer membranes. Biochim Biophys Acta, 1983, vol. 733, 210-5 [0060]° LICHTENBERG D. Characterization of the solubilization of lipid bilayers by surfactants. Biochiin Biophys Acta, 1985, vol. 821, 470-8 id="p-60" [0060] works. Skin and Allergy News, 2003, 34 id="p-60" [0060]o LICHTENBERG D ; ZILBERMAN Y ; GREENZAID P ; ZAMIR S. Structural and kinetic studies on the solubilization of lecithin by sodium deoxycholate. Biochemistry, 1979, vol. 18, 3517-25 [0060]° LICHTENBERG D ; ROBSON RJ ; DENNIS EA. Solubilization of phospholipids by detergents. Structural and kinetic aspects. Biochim Biophys Acta, 1983, vol. 737, 285-304 [0060]o TEELMANN K ; SCHLAPPI B ; SCHUPBACH M ; KISTLER A. Preclinical safety evaluation of intravenously administered inixed micelles. Arzneimittelforschung,1984, vol. 34, 1517-23 [0060]- DURR M ; I-IAGER J ; LOHR JP. Investigation on mixed micelle and liposome preparations for parentaluse on soya phosphatidylcholine. Eur J Pharin Bi0pharin, 1994, vol. 40, 147- 56 [0060]- ALKAN-ONYUKSEL H ; RAMAKRISHNAN S ;CHAI HB; PEZZUTO JM. A mixed micellar formulation suitable for the parenteral administration of taxol. Pharm Res, 1994, vol. 11, 206-12 id="p-60" [0060]0 FELDMAN M ; SCHARSCHMIDT BF ; SLEISENGERMH ; FORDTRAN JS ; ZORAB R. Sleisenger & Fordtraifs Gastrointestinal and Liver Disease. Saunders, 2002 [0060]° Lipostabil. Rhone-Polenc Rorer. Cologne. Natterinan International GMBH, 1990 [0060]° JONES MN. Surfactants in membrane solubilisation. IntJ Pharm, 1999, vol. 177, 137-59 [0060]° GUSTAFSON C ; TAGESSON C. Influence of organic solvent mixtures on biological membranes. Br J Ind Med, 1985, vol. 42, 591-5 [0060]29o BANERJEE P ; .100 .13 ; BUSE JT ; DAWSON G.Differential solubilization of lipids along with membrane proteins by different classes of detergents. Chem Phys Lipids, 1995, vol. 77, 65-78 id="p-60" [0060]- ALMGREN M. Mixed micelles and other structures in the solubilization of bilayer lipid membranes by surfactants. Biochim Biophys Acta, 2000, vol. 1508, 146-63 [0060]° SCHUCK S ; HONSHO M ; EKROOS K ;SHEVCHENKO A ; SIMONS K. Resistance of cell membranes to different detergents. Proc Natl Acad Sci, 2003, vol. 100, 5795-800 [0060]- HEERKLOTZ H ; SEELIG J. Correlation of membrane/water partition coefficients of detergents with the critical micelle concentration. Biophys J, 2000,vol. 78, 2435-40 [0060]o Learn about lecithins. Ainerican Lecithin Company, 2003 [0060]. Lecithin and choline: research update on health and nutrition. CANTY D ; ZEISEL S ; JOLITZ A. FortWayne. Central Soya Company, Inc, 1996 [0060]- EBIHARA L ; HALL JE ; MACDONALD RC ; MCINTOSH TJ ; SIMON SA. Effect of benzyl alcohol on lipid bilayers. A comparisons of bilayer systems. Biophys J, 1979, vol. 28, 185-96 [0060] ° GORDON LM ; SAUERHEBER RD ; ESGATE JA ; DIPPLE I ; MARCHMONT RJ ; HOUSLAY MD. The increase in bilayer fluidity of rat liver plasma membranesachieved by the local anesthetic benzyl alcohol affects the activity of intrinsic membrane enzymes. .l Biol Chem, 1980, vol. 255, 4519-27 [0060]o SINGER SJ; NICOLSON GL. The fluid mosaic model of the structure of - LESTER DS ; BAUMANN D. cell membranes. Science, 1972,Action of organic solvents on protein vol. 175, 720-31 [0060]kinase C. Eur J Pharmacol, 1991, o RITTES PG. The use ofvol. 206, 301-8 [0060] phosphatidylcholine for correctiono ENGELKE M ; JESSEL R ; of localized fat deposits. Aesthetic Plast WIECHMANN A ; DIEHL Surg,2003, vol. 27, 315-8 [0060]HA. Effect of inhalation anaesthetics on the phase behaviour, permeability and order of phosphatidylcholine bilayers. Biophys Chem, 1997, vol. 67, 127-323 [0060] TR TR TR TR TR TR TR TR TR