TR201810571T4 - Yığın malzeme partiküllerinin bir temsili ve tahribatsız numunesinin alınmasına yönelik cihaz ve bu cihazı kullanarak numune alma yöntemi. - Google Patents

Abstract

Bu tarif edilen cihaz, buluşa uygun cihaz ile, yığın malzeme partiküllerin bir numunesinin alınmasına yönelik cihaz ve de yığın malzeme partiküllerinin alınmasına yönelik bir yöntem ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME YIGIN MALZEMENIN PARTIKÜLLERININ BIR TEMSILI VE TAHRIBATSIZ NUMUNESININ ALINMAsiNA YÖNELIK CIHAZ VE BU CIHAZI KULLANARAK NUMUNE ALMA YÖNTEMI Mevcut bulus, en az bir mikotoksin kontaminasyonunun y[g]lEl malzemede tespit edilen bir yöntem ile ilgili olmaktadlEl ayrlîla y[glI malzeme partiküllerinin bir numunesinin aIlErnasEi'lçin bir yöntem ve bu tarif edilen cihaz vasitâislýla aIIi yöntemi ve cihaz. kullanIiIIZl açiEIanmaktadlE Mikotoksinler küf mantarIan olusan ikincil metabolizma ürünlerdir. Miktoksinler bile az miktarda zehirlidir. Bu noktada Mikotoksinler gIlarda ve yemlerde ciddi anlamda saglilZl riski teskil etmektedir. Mikotoksinin etkileri, memeli hayvanlarda çok farklEIoIabilmektedir.

BunlarlEJ, digerleri arasIa, memeli hayvanlarda kanserojen, nörotoksik ya da baglglKllgD baskilâylîlîlbir etki gelistirebildigi bilinmektedir. Bununla beraber Mikotoksinler üzerinde alerjik tepkimeler de tanIiIanmaktadlB Simdiye kadar farkllînantar türleri tarafIan üretilebilen çok fazla sayüla mikotoksinler bilinmektedir. Bilinen Mikotoksinler digerleri arasEtIa Aflatoksinler, ergo alkaloidleri, Okratoksin A (OTA), Deoksinivalenol (DON) gibi Fusarium toksini ve Zearalenon (ZEA) ve Sitrin gibi Penisilin toksinleridir Örnegin ZEA ve DON tahillhrda anamikotoksinleri olusturmaktadlEl flüdügbaskl bir sekilde Aflatoksin içerirken OTA, yesil kahve çekirdegindeki anamikotoksinlerdendir. Mikotoksinlerden çilZlan siddetli sagllEl tehlikesi nedeniyle, bu alanda analiz metotlarlîgelistirmek ve iyilestirmek ad. geçmis yimarda yogun çabalar geregince gösterildi. Genel olarak, kütle spektrometrik ya da floresans saptama ile hem sülîlkromatografik yöntemleri hem de Immunoanalizler olarak kullanilüiaktadE( gIIar da baska pis maddelerle veya yabancümaddelerle kirlenmis olabilmektedir. Ilgili örnekler; zehirli metaller veya arsenik, antimon veya çinko gibi metal bilesimleri, pestisitler, fungistler, insektisit veya herbisitler veya genetik olarak degistirilmis organizmalar gibi bitki koruma ürünleridir.

Bu unsura dayanarak, Mitoksinin diger pis maddelerin veya tehlikeli kallEtiIârlEl gIIarda ve yemlerde son derece heterojen yayllBwasüözellikle test edilen glElialardan bir numune alIiIII/e prosedür EC 401/2006 " Methods of sampling and analysis for the official control of the levels of mycotoxins in foodstuffs" gevsek yigIEi malzemenin hacim olarak adlandlElIân birçok kilogram. homojenizasyonu göz önünde tutulmaktadlrîl Birçok kalip] malzemeleri, analiz sürecini rahatsiîi ettiginden ve gerektiginde özellikle bir Mikotoksin miktar belirlemesini zorlastüligiian veyahut engellediginden, katEfaz-ekstraksiyon veya afinite kromatografisi gibi oldukça pahalElve kompleks saflastlEna prosedürlerine baglanmaktadE B Analyt anlamlîIa yüksek zaman ve is yogunluguyla ayiEli edilmektedir.

En basit numune alnüçin önceden birkaç mlîiak uçlarüapllfnaktadlîl EP 0 411 932 Bl de bir temsili tahiElie undan bölüm örnegi al“ yönelik numune sondasüiçilîianmaktadiîi EP 1 221 605 Bl'de, bir toz numunesinin örneklenmesi için bir taslElaibilir yedek-sekilli miîrak ucu açlEIanmaktadlE US 6,324,927 81 yabancünaddelerin örneklendirilmesi için, numunenin hava geçirmez bir bölme içinde gaz sensör taslýlîütitresimine maruz kaldigiü toz parçaclIZIarI serbest bßakilüiaslüröneten bir metot ve cihaz açikianmaktadlEI bir numune miîraglj yardIilýla yada DiscoveryCERT FQSTM numune sistemleriyle açllZIanmaktadlE Numunenin toz içerigi farkliîlfiltre malzemelerinde toplanlEl ve High Performance Liquid Chromatography( HPLC)- araciilgEa ve de Forurier- Transformations- IR- Spektroskopie (FTIR)- yöntemleriyle analize edilmektedir. Bununla birlikte, toz ve tüm numune kontaminasyonunun açilZlve kesin bir iliskisi belirlenememektedir.

Simdiye kadar bilinen yöntemlerin bir dezavantajD bu yöntemlerin, cam filtre filtreleri veya membranlar yoluyla örnek toplanmaslZlöngörüImüstür. Bununla birlikte, bu tip bir numune toplama, numunelerin sadece tek bir analiz seklinde degerlendirilmesine izin verir. Toplanan numunenin analizinin yeni bir tetkiki veya tekrarElbu yüzden mümkün degildir. Ayriîla, genel numuneye klibsla allEbn numunenin mikotoksinlerle veya diger kontaminantlara iliskin kazanllân numunelerin açik] bir iliskisi önceki teknige bakI[g]Eba kanifllanamamaktadiEl Bu baglamda, simdiye kadar mevcut olan yöntemlerle elde edilen bu numuneler temsili numuneleri betimlememektedir. Bundan dolaylZimikotoksinIer veya diger kontaminasyonun aç[lZi bir göstergesi olmayan bir numunenin geçerliligini önemli ölçüde azaltiEl AyrlEla, önceden bilinen yöntemlerin dezavantajlüilmasübunlarl bazen teknik olarak çok masrafllîblmas- Bu, hata kaynaklarIDberaberinde getirmektedir ve ayn üamanda bu tür cihazlarI edinimi ve hizmeti Önceki teknik yöntemlerinin yukarßh bahsedilen bu dezavantajlarEl göz önünde bulunduruldugunda, glâb ve yem ylglI-ar sözde kitle olarak adlandlElIân gelistirilmis ve temsili örneklemesi tarif edilmektedir. AyrlEla, ucuz ve daha az is yogunlugu olan, gerçeklestirilmesi kolay bir yöntem tarif edilmektedir. Mevcut bulus, bir mikotoksin kontaminasyonunu saptamak için güvenilir ve anlamIEbir yöntem saglama, teknik sorununa dayanmaktadlE Bu teknik sorun, istemlerde tan Ianan konu ile çözülür.

Bu bulusun bir birinci konusu, asagßhki asamalarEliçeren en az bir My-otokotoksin kontaminasyonunu toplu malzeme içinde tespit etmek için bir yöntem ile ilgilidir: (a) dökme malzemeden 0.1 mm ve 1.0 mm'lik bir parça büyüklügüne sahip olan parçac[lZIarI bir örnegini almak; (b) çllZlarHBiE parçaclKlarI analiz edilmesi; ve (c) mikotoksin kontaminasyonunun konsantrasyonunu belirleyerek bir mikotoksinontaminasyonun saptanmasi: ve (d) Adn (c)'de belirlenen konsantrasyonu, y[g]I malzemenin toplanan numunesi ile iliskilendirerek, ylgll malzemenin gerçek mikotoksin kontaminasyonunun sonuçlanmaslîl Bulusa göre, "Kontaminasyon", özellikle 9. maddelerinin kirletici oldugu anlam. gelir. Bu tür kirleticiler Arsen, Antimon veya Çinko, bitki koruma ürünleri gibi Mikotoksin, toksit metal veya metal bilesimlerini kapsar ve pestisit, fungisit, insektisit veya herbisitle veya genetik olarak degistirilmis organizmalardlEI Mikotoksinler özellikle Okratoksinleri, Aflatoksinleri, ergot alkaloidleri, özellikle Deoksinivalenol (DON) ve Zearalenone (ZEA), Alternaria toksinleri ve sitrinin gibi fusarium toksinlerini kapsamaktadlü Bulusa göre, en az bir mikotoksin konsantrasyonunun saptanmasEiçin mevcut bulusa ait yöntemdeki mikotoksinler, tercihen, özellikle Deoksinivalenol ve Zearalenone, alternaria toksinleri ve sitrinin gibi, Okratoksinler, Aflatoksinler, ergot alkaloidler, Fusarium toksinleri içeren gruptan seçilmektedir.

Bulusun tercih edilen bir düzenlemede alin numunelerin partikül boyutunun 0,1 mm ila 0,7 mm arallglIa, devamüiercih edilen 0,2 mm ila 0,5 mm arallglIa içerdigi on gorülmektedir.

En çok tercih edilen bir yapilândlElnada, High Performance Liquid Chromatography(HPLC) ile analiz-grahsi, UItra-High-Performance Chromatography (UPLC), Fourier-Transformations-IR- Spektroskopie (FTIR), Nükleer manyetik rezonans spektroskopisi( nuclear magnetic resonance, NMR), Direct Analysis in Real Time (DART) ya da Enzy-me-linked immunosorbent assay (ELISA) gerçeklestirilmektedir.

AyrEla, bir ayüna birimi (100) ile ve bir emme ünitesi (110), numuneyi ayüna ünitesinden emme ünitesine geçen bir hava aknljoiriminden almak için, tam anlamiyla bir kanal (20) yukarßklgti dogru hizalanmEIaglîlQS), bir süzgeç (35) ile düzenlenmis bir sonda (30) bir kanaldan(20) asaglîlaklgl ve dikey olan, kanal. (20) düzenlenen santrifüj ayEEEE(40) bir santrifüj ay_I (40) altlEla takliân kap (45) santrifüj ay_ (40) öncülük eden bir kanal (50), asagüklglyönünde bir filtreyi (55) geçtigi, asagüklgia dogru filtreden (55) temizlenen kanal (60), filtreden (55) emme ünitesine (110) kadar geçen, bir vana (65) ile ve bir kanaldan(60) kollara ayrüân bir kanal (70) bir kanal. (70) bitisinde düzenlenen manometre (75), emme ünitesinin (110) bir hava üfleyicisi oldugu, kanal (20) içinde hava aklSlElI hlZEl tercihen 30 ila 70m/s arallglIa gerçeklestigi partiküllere yönelik bir ylglI malzemeden alin bir numune aIIi cihazüiçiElanmaktadEl Mevcut bulus ile baglantllîlîlblarak “ylglI malzeme” ifadesi ile yl'glElanabilir bir biçimde olan bir karisimi tanecikli veya topak bir haldeki ürünü ifade edilmektedir. Bulusa göre, "y[g]I malzeme" ifadesi ile özellikle 9. ve yem ylgllEl malzemeleri, tahlElgrubundan hububat gibi, bugday gibi, örnegin bugday, mlîlB çavdar veya arpa, ya da un, tuz, seker, flTiUlEveya kahve gibi ürünler anlasllîhaktadß Uzamsal alanda emme ünitesi ve burada Üretilen hava aküzunluguna göre büyük bir mesafe içerdigi , “yukarlîlakEJ' ifadesi ile bir yönelim anlasllüiakta oldugu açiEJanmaktadIB "AsagEl aklSl' ifadesi ile, uzamsal iliski içindeki emme ünitesine ve buna göre üretilen hava aklSlElI kisa bir mesafeye göre içerdigi bir yönelim bilinmektedir. yönelim öngörüldügü anlasilEiaktadlEl Dikey bir yönlenmenin, bu tür bir yönlenme oldugu anlasllîhaktadlîl kanal. (20) santrifüj ay_ (40) olan iliskisine göre hizalandlgiühava aklglElI partiküllerle santrifüj ay_ (40) çarptlglÇlpartikülün tegetsel olarak yerlestirilmesi ve böylece santrifüj ay_ dairesel bir yola ulastlglîgöz önünde bulundurulmaktadlEl Bir "Kanal" ifadesi ile, özellikle boru türünde bir baglantEHJorusu, bir hortum veya bir iletken anlasllîhaktadlEl Kontaminasyonlar, mikotoksin gibi, genellikle çok homojen olmayan y[g]I malzemelerinde daglfllBwaktadE Kontaminasyon, özellikle mikotoksinler, ylglE malzemede dengesiz ve düzensiz bir sekilde dagllg'lîlanlam- gelmektedir. Bu nedenle, herhangi bir numuneyi alarak, Kontaminasyonun dogru bir sekilde tespit edilebilecegi , numunenin gerçek anlamda sadece az miktar yüklendiginden kontamine olma olaslllgllîyüksektir. Ancak, bu durum,tüm yigll malzemesinin tek bir numunede tespit edilenden önemli ölçüde daha fazla kirlendigi için belirli kosullar altlEUa gerçek durumu yansßmayabilir. Dolaylîlýla, kontaminasyonun, her biri farklElseviyelerde kontaminasyon gösteren bireysel numuneleri yanslßn homojen olmayan daglIJEJidan kaçIllBialegerekmektedir. Bununla birlikte, gerçek bir kontaminasyon tamamlîla ylglI halindeki malzemesinin sonuçlanabilmesi için, tek bir numunenin kendi baslEla anlamlü ve temsili olmad Iglülarsayllâbilir.

Bu baglamda, tüm ylglI malzemenin kontaminasyonunu belirlemek için,partikül numunesine dayanan daha küçük bir numunenin allEhias- yönelik bir yönteme göre kosullar olusmaktadE SaslElllEEltutum ise bulusa göre algllâma yöntemi en az bir numune parçasIEIO,1 mm büyüklügünde 1,0'a kadar güvenilir ve anlamIIZI bir kan[lîl ile bir kontaminasyonu etkinlestirmektedir. Numune parçacfglII bir kontaminasyon içerdigi ve konsantrasyonu , genel numunenin kontaminasyonundan farklEl oldugu gösterilebilmektedir. Bu sartla konsantrasyon, numune parçaclglElI kontaminasyonu örnegi gibi anlamEbakIiIan genel numune düsüsünden daha büyük olabilmektedir. Alin numune partikülleri 0,1 mm ila 1,0 arallglIa temsili bir numune partikülü olusturmasüve bu kavrama genel numunenin kontaminasyon içerdigi açlKça gösterilebilir. Partikül numunesinin yabanclZl madde konsantrasyonu, kütle numunesi ile iliskilendirilerek, parçacllZl numunesinin gerçek kontaminasyon üzerine olan etkisi dogrulanabilmektedir.

Mevcut bulus “güvenilir kanlfî ya da “anlamllîlkanlfî ifadesi ile, göz önünde bulundurulan bir önemli kütlede belirlenen bir glîlia kontaminasyonu anlasüüiaktadü böylece statistik temellere göre güvenli sonuçlara ulasmaktadlü Burada bahsedilen belirli bir partikül büyüklügüne sahip numune cihazükazanilâbildigini, sasllîlliçimde, Kontaminasyona yönelik Mikotoksin üzerinden analizlere göre belirli bir Mikotoksinkonsantrasyon, yüksek bir kütlede toplam numune Mikotoksinkonsantrasyonun arastlEIIân ylgiI malzemesi ile birlikte iliskilendirilmektedir. Bu avantajlthemsili numune aIIil,`_l santrifüj aylElEEivasiEisEla, Siklon olarak da adlandßlilj numune kazanclîlile mümkün klüiîlnaktadE Bu baglamda sunulan bulus kapsamIa “temsili” numune sltâtlýla anlaslßiaktadlîi belirli numune karakteristigi, Mikotoksinler veya bitkisel veya mikrobiyal toksinler ile Kontaminasyonlar yans-[gIZtopIam numune ile belirli karakteristik bak“an yüksek bir kütleyle iliskilendirilmektedir. Santrifüj aylElEIZlemme ünitesi tarafIan üretilen hava aklglmîla bulunan parçaclKIarI çözülümünü gerçeklestirmektedir. Santrifüj ay-lEl, asagü bölgeden küçülten konik bir sekli içerdigi açilZlanmaktadB AyrIEh, santrifüj aylEEEiçinde teget geçen hava aklgllibartikül karElEJlDnonte edildigi açlKlanmaktadlEl Böylelikle hava akISIEUa bulunan partikül dairesel bir yolda yönlendirilmektedir. Konik sekilli merkezkaç toz ay-I küçültme ile hava aklgEI dönme hlîlîlartmaktadliîi böylelikle olusan santrifüj vasIsMa santrifüj ay_I konik duvarIEla kaydiElIB'iaktadlB Böylece, belirli bir partikül boyutuna sahip olan bu tip partikül numunelerin incelenecek olan ylgiI malzemeden aII[gil]içIElanmaktadE Santrifüj aylElEljle hava akli- ayarlanmasüistenen bir büyüklükteki partikülleri seçici olarak izole etmenin ve uzaklastlîilnanl belirli bir emme ile mümkün oldugu devam-a açlKlanmaktadlEl Burada yüksek mikotoksin yükü içeren açilZIanmlgbu cihaz vasitîlislîla belirli bir partikül boyutu ile izole edilebilecegi gösterilebilmektedir. Mikotoksinler, hususi ylgllara yerlesmektedirler. Daha küçük çaplEpartikülIer daha büyük çapIEpartiküIIere klýbsla daha büyük bir yüzey alanlEla/ hacim-orana sahiptir. Böylece, daha büyük bir hacim/ yüzey oranlEla sahip daha küçük bir boyuta sahip olan partiküller daha büyük boyuta nispeten daha küçük hacim/oranlEb sahip olan partiküller olarak Mikotoksinler ile daha yüksek bir derecede yüklenmektedirler. Burada açllZlanan cihaz vaslüslsîla ylgiI malzemelerde yüksek bir kütle olan kendi mikotoksin konsantrasyonunda toplam yükü Mikotoksinlerle temsil eden, bilhassa numuneler partikül boyutu alan-a kazanabilmektedir. DolayiQEa, burada tarif edilen cihaz, çok temsili numunelerin, belirli bir partikül boyuta ait numunelerin elde edilmesiyle izole edilebildigi avantajlEbir sekilde ulasllâbilir; bu sekilde, mikotoksinlerin, yigIE malzemelerde yükü, basit ve güvenilir bir sekilde tespit edilebilir.

Bir aylElna cihazEQIOO) olan temel olarak bir santrifüj aylElEIIQ40), bir kap (45), bir kanal (50) bir filtre (55) bir vana (65) bir kanal (70) ve bir manometreyi (75) içeren bir cihaz burada aç[lZIanmaktadlEl Ayrlîla, sondan. (30) bir mobilizasyon ünitesinde (130) bir agEl(135) yerlestirildigi ve y[giI malzeme numunesinin elde edildigi açManmaktadlE Burada, mobilizasyon ünitesinin (130) bir tambur karEllElEElîbldugu, tercihen bir devir saylgEIO ila aralglEUa , devamlItercih edilen 15 ila 50 rpm aralfglîilja, devamEtercih edilen 15 ila 30 rpm arallgIEba, özellikle tercihen 28 rpm içerdigi açllglanmaktadlEl Bu tür devir saylIârI tahribatslZ bir sekilde numunenin ylgil malzemeden allEmasElaçiKlanmlgtIB "TahribatslîJ' ifadesi ile bozulmamlglve eksiksiz durumda olan bir numunenin özelligi anlasüfhaktadß Mobilizasyon ünitesinin (130) bir Vibratör ve titresimli tasßZlEB/a da bir fandan olusturulan hava akliüçilîlanmaktadß Mobilizasyon ünitesi (130), bir motorlu demir veya çelikten olusmaktadlE AyrlEla, Metal, metal alasIilarBleya plastikler, polimerler açlKlanmlgtlEl özellikle 50 cm bir çap içermektedir.

SondanI (30) 2cm ila 25 cm arallglIa, devamlEUa 4 cm ila 10 cm arallglEba, özellikle 7 cm bir çap içerdigi açÜZlanmaktadB Sonda çap_ artlEllmasIîLla partikül mesafesinin artEIEla yetistigi aç[ElanmaktadlE Bununla birlikte büyük çapllîbir sondan. kullanIiElçin ,emilecek partiküllere baska bir mesafenin dahi durdurulabildigi gerçeklestirilmistir. Bununla birlikte, hiç bir gereklilik olmakslZE, incelenecek olan y[g]I malzemeye yakI bir yere yerlestirmek için uzamsal bir esnek mesafe ile bir partikül numunesi aIIbilmektedir. Sonda (30), polietilenden (PE) olusmaktadlü Alternatif olarak devamüilan sentetik madde malzemeleri, polimerik, cam veya metal açlEIanmaktadE Süzgecin (35) sonda (30) içinde bir metal süzgeç oldugu açlKlanmaktadlEl Devam-a, bu yapay madde süzgecin (35) veya ince bir zar oldugu açllZlanmaktadE Bu süzgecin (35) 1mm ila 10 mm arallglia , devamElZ mm ila 5 mm kadar bir ag ve özellikle 3mm içerdigi açllZlanmaktadlEl Tercih edilen düzenlemede bu bulus, toplanan numunelerin partikel boyut franksiyonu tercihen 0,1mm ila 1,0 mm arallglIa, devamlîtercihen 0,1 mm ila 0,7 mm arallglia, özellikle tercihen 0,2 mm ila 0,5 mm içerdigi öngörmektedir. Bulusa göre toplanlEln numune edilmektedir. cm aral[glda, özellikle tercihen 40 cm içermesi gerektigi açmanmaktadü Emme ünitesinin (110) bir hava fanmildugu, kanalda (20) bulunan hava akEEIii-tercihen 40 ila 60 m/s arallglEda, özellikle 58 m/s üretildigi açlKlanmaktadlEl Ayrüa Emme ünitesinin (110) dlgl ölçüsü 10 cm ila 100 aral[glElda, devamlZQO cm ila 60 cm aral[g]Ia, özellikle 40 cm içerdigi açlElanmaktadlB Belirli bir partikül fraksiyonunun, belirli bir emme ünitesine sahip olan bir hava aklglEllZI ayarlayarak santrifüj ay_ elde edildigi açlKlanmaktadlEl Bu ayarlar küçültme vanasElIe elde edilmektedir. Emme aklglül ayarlanmaslîn'nanometre taraflöhan gerçeklestirilmektedir.

Belirlenen baslik; ile uygun bir hava aklglîl belirli bir emme ünitesi vaslüslýla ayarlanabilmektedir.

Bu kanal. (20) sentetik maddeden olustugu açlElanmlgtE Diger maddeler polimeren, cam ya da metal alasIilarIlEl Bu kanalI(20) bir çap olarak 1 cm ila 5 cm aral[glia, devam [tercihen 1,5 ila 3,5 cm arallglEUa, özellikle tercihen 2,5 cm içerdigi açlKlanmaktadlEl AyrlEia kanal. (20) 0,1 m ila 5 m arallglüda, devamlZD,1 m ila 3 m arallglia, özellikle 0,1 m ila 2m arallglEUa uzunluk içerdigi açllZlanmaktadlEl Bu kanal. (20) asagllklgla yönlendirilen bitis klîlnüpartikül- /hava akIiIEkarlglmESantrifüj aylElEE(40) içinde dairesel bir yol üzerinde tegetsel bir fan olacak sekilde tasarland [glljçllîlanmaktadlü Bu santrifüj ay-I (40) polietilenden olustugu açlEIanmaktadE Ayrü, santrifüj (40) aylEEEl diger sentetik maddelerden ya da polimeren, cam, metal veya metal alaslilaran olustugu açllZIanmaktadlE Açiklanan bu santrifüj (40) aylElEIJçapEl cm ila 25 cm, devamES cm ila 10 cm arallgiIa, özellikle 8 cm oldugunu içermektedir. Devam eden örnek, santrifüj aylElEE(40), 1 cm ila 50 cm arallgllEtla, devamlîll cm ila 30 cm arallglIa, özellikle 20 cm bir yükseklik içermektedir.

KabI (45) numunelerin de içinde toplanan bir depo oldugu, yani bir numune toplaylîlîlzlepo olarak açlEanmaktadlEI Bir örnekte, kabI (45) bir vida disi üzerinden santrifüj aylElEDle baglandlgüaçllglanmlgîlEl Diger baglantllârlEl bir bileme SES-a santrifüj ay_ (40) veya kaba (45) aynen bir klgkaç oldugu ayrlîla açlElanmlgtlEl Kati. (45) polietilenden (PE) olustugu açllZlanmaktadE Ayrlîb, bu kap (45) sentetik maddeden polimer veya camdan olustugu açlElanmaktadlE Bu kabI (45), 5ml ila 500 ml aral@Ia, devamIIIIOO ml ila 400 ml arallglia, özellikle 200 ml bir hacim içerdigi ayrlEia açllZlanmaktadlÜ Diger bir örnekte kap (45) içinde bir ekstre maddesi teblig ettigi açlElanmaktadlEl Muhtemel ekstre maddeleri, asetonitril, metanol, veya su olmaktadlE AyrlEia iki veya üç çesit ekstre maddelerinin karlglîniüçllzlanmaktadlü Bir diger örnekte iki veya üç çesit ekstre maddenin karlglm içinde birbiriyle çesitli oranlarda mevcut olabilecegi tarif edilmektedir.

Bir örnekte asetonitriI/su ekstre maddesi olarak kullanIlZl Bir örnek listesinde, karElEii oranü hacim cinsinden asetonitril/su 80/20, veya hacim cinsinden asetonitriI/su 60/40 veya hacim cinsinden asetonitriI/su 50/50, veya hacim cinsinden asetonitriI/su 40/60, ya da hacim cinsinden asetonitril/su 20/80'dir ve geri kalanßaf sudur.

Diger bir örnekte ekstre maddesinin asetonitriI/metanoI/su oldugu açllîlanmaktadE AyrlEia asetonitril/metanoI/suyun hacim cinsinden 40/40/20 oran .a mevcut oldugu açllZlanmaktadB Bu ekstrakte edilmis maddenin, tespit edilecek olan toksin ya da malzemeye göre adapte edilebilecegi açlEJanmlStB Bir diger örnekte, dogrudan kaba (45) bir analiz cihazlîlbaglad [glljçllîlanmlgtlîl Ayrlîla, bulusa göre tercihen, analiz cihazII kromatografik, spektroskopik veya immünolojik yöntemlerin uygulanmasübin uygun oldugunu öngörmektedir.

Bulusa göre tercihen, analiz cihazlýla Yüksek PerformanslESlîEKromatografisi (HPLC), Ultra- Yüksek PerformansIEKromatografi (UPLC), Fourier- Dönüsümleri -IT-Spektroskopisi (FI'IR), Nükleer manyetik rezonans spektroskopisi (nuclear magnetic resonance, NMR), Gerçek zamanda dogrudan analiz (DART) ya da Enzime bagllîlimmünosorbent deneyi (ELISA) uygulanmasi. uygun oldugu öngörülmektedir.

Bir diger örnekte, Kanal. (50) yukarElakElEl sonunda bulundugu santrifüj aylEElýla (40), daIdIElna borusu seklinde, dikey, eslik ettigi açllZlanmaktadE Kanal. (50) sentetik maddeden olustugu açlElanmaktadlE Ayrlîla kanallEJ (50) 1 cm ila 5 cm arallglia, devamEZ cm ila 4 cm aralgia, özellikle 2,5 cm içeren bir çap oldugu açllZlanmaktadB Bir diger örnekte filtrenin (55) cam elyaf filtresi oldugu aç[ElanmaktadlEl Filtrenin (55) bir filtre tasmaöh paslanmaz bir filtre üzerinde yer ald[gll]aç[lîlanmaktadEl Filtrenin (55) emme ünitesinin (110) kirlenmesini önledigi açllZIanmaktadB Bir örnekte filtre taslîlEIîIElI 1 cm ila cm arallgia, devamIa 1 cm ila 15 cm aral[glEUa, özellikle 8 cm bir çap içerdigi aç[lZIanmaktad|E Ayrlîla filtrenin (55) 1 cm ila 20 cm aral[g]Ia, devamIa 1 cm ila 15 cm araliglla, özellikle 8 cm bir yükseklik içerdigi açllZlanmaktadlB Bir örnekte kanal. (70) sentetik maddeden olustugu belirtilmektedir. AyrlEa, kanal& (70) 1 cm ila 5 cm arallglIa, devamEIZ cm ila 4 cm arallgllübla, özellikle 2,5 cm arallgllda bir çap içerdigi açlklanmaktadlE Bir örnekte Kanal. (60) bir hortum oldugu aç[ElanmaktadIEI Bir örnekte kanal (60) bir lastik hortumdur.

Bir diger örnekte vananI (65) indirgenen vana oldugu açllZIanmaktadlEI Emme ünitesinden (110) ç[lZlan hava aklgElI vana (65) üzerinden düzenlendigi açlElanmlStlEl (75), asag Eakß yöneltilen kanal. (20) bitis klîlnü yanlis& yukarüaklgh yöneltilen kanal. (60) bitis klEInElbir bölmeye (10) düzenlendigi, yukarllklgla yöneltilen bir aglZ(15) ve asaglZl aklgti yöneltilen bir aglîl(16) içeren, asagüklgla yöneltilen kanal. (20) bitis klgin aglîl(15) vaslüslsîla ve yukarEI aklgla yöneltilen kanal. (60) aglîl (16) vasltiislîla uygulandlglEl açlKIanmaktadlEl Bölmenin (10) bir Iletme özelligi ve cihaz. stabilitesinin gerçeklestigi açlElanmaktadlEl Ayrlîla ylgllEl malzeme partiküllerinin bir numunesinin allEmasIEla yönelik bir yöntemde yukarüh belirtilmek üzere olan cihaz ile bir mikotoksin kontaminasyon kanlflßçüîlanmaktadlü tam olarak adIiIarl3u sekildedir: (a) yiglI malzemelerinin partikülleriyle sondanI (30) temasßaglanlEl (b) emme ünitesinden ( üzerine bir hava aklglîblusturarak partiküllerin emilmesi, ve (c) santrifüj ay-I (40) alt. monte edilen kapta (45) partiküllerin toplanmasEh/e çilZlarllînasEliburada toplanan numunenin parçacilZl boyutu fraksiyonu tercihen 0.1 mm ila 1.0 Numunelerin 0,1 mm ila 0,7 araligilda ve devamia tercihen 0,2 mm ila 0,5 araliglia bir boyut içerdigi açilZlanmaktadlE Bu partiküllerin (a) adIiIa y[g]lEl partiküllerin hareketiyle dönmekte oldugu açiElanmaktadlB Tarif edilen cihaz ve yöntemin yanIZIsIB yigiI malzemenin içine dogrudan temas- gerçeklesmemesini sagladigEl açiElanmaktadlEl Daha dogrusu temasI sadece y[g]I malzemelerin partikülleri ile gerçeklestirilmesi öngörülmüstür. Bu nedenle bulusa ait cihaz ve bulus niteligindeki yöntemlerle yigil malzemelerin bir yükleme veya desarj isleminde partiküllerin alßl'na seçenegi vardIEI SondanlEl, partiküller ile temasIIEJ, bir fan taraflEtlan üretilen bir tamburlu mikser, Vibratör, titresimli kaylg veya hava akEEgibi bir mobilizasyon birimi üzerinden dönme yoluyla elde edildigi açiEIanmaktadlÜ Y[glI malzemelerin temsili bir numunesinin aIlEi'nalela yönelik cihazI kullanIiElen az bir mikotoksin kontaminasyon kanitIIolmasüpartikül boyut fraksiyonun toplanan numuneleri tercihen 0,1 mm ila 1,0 mm arallgiIa olmasüçllîlanmaktaduîl DevamEbartikül boyut fraksiyonun toplanan numune boyutu 0,1 m ila 0,7 mm araIIgIIa, özellikle tercihen, 0,2 mm ila 0,5 mm aral[g]EUa olmasEiiercih edilmektedir.

Bu kullanII mikotoksinlerin kari- yönelik kullanIi sagladigDçüZlanmaktadB Tercihen mikotoksinler, okratoksinler, aflatoksinler, ergot alkaloidler, özellikle tercihen deoksinivalenol ve zearalenon, alternaria toksinleri ve sitrinin gibi Fusarium toksinlerinden olusan gruptan seçilir.

Bu bulus takip edilen örneklerle ve buna dahil olan sekillerle daha yakIan açlKlanmaktadE Sekil 1 cihazlElsematik bir yapllândlünasllîgiösterir.

Sekil 2 bugdayda cihaz ve kontrol numuneleri ile elde edilen partikül numunelerinin deoksinivalenol (DON) konsantrasyonunun [ug/kg] korelasyonunu gösterir.

Sekil 3 bugdayda cihaz ve kontrol numuneleri ile elde edilen partikül numunelerinin zearalenon (ZON) konsantrasyonunun [ug/kg] korelasyonunu gösterir.

Sekil 4 mEIEIa cihaz ve kontrol numuneleri ile elde edilen partikül numunelerinin deoksinivalon (DON) konsantrasyonunun [ug/kg] korelasyonunu gösterir.

Sekil 5 mlîlîtlla cihaz ve kontrol numuneleri ile elde edilen partikül numunelerinin zearalenon (ZON) konsantrasyonunun [ug/kg] korelasyonunu gösterir.

Sekil 6 kahvede cihaz ve kontrol numuneleri ile elde edilen partikül numunelerinin oktaroksin A (OTA) konsantrasyonunun [pg/kg] korelasyonunu gösterir. Örnek 1 : Bir cihaza qöre vlg]_I malzeme partiküllerinin bir temsili ve tahribatslZnumunelerin allErnasEl YaklasElZl 5 kg'lllZl gevsek glEb ürünlerinden olusan tahllÇl yesil kahve veya flEtlIlZlar tamburlu miksere yerlestirilir. Tamburlu mikser 28 rpm devriyle çallSIlElHEl YIgEI malzeme partikülleri bu sayede çözünür ve ortam havas. bürünür. CihazI sondasD(30), sekil 1 de gösterilen, mobilizasyon birimine (130) agü (135) klîlnl yerlestirilmektedir. Hava üfleyiciden (110) baslayarak, sonda (30) asagßklglyönünde geçen boruda (20) 58.2 m / s'lik bir hlîlüreten, bir hava aklglîüretilir. Partiküller, santrifüj ay_ (40) altIa düzenlenmis numune toplama kab- (45) santrifüj aylEEEZMO) vaslüslîcla boru (20) vasüâslýla sondadan (30) emilir ve yönlendirilir. Cihaz spesifik tasariüözellikle santrifüj aylElEIîEa40) sayesinde, özellikle 0,2 mm ila 0,5 mm aral[g]EUa bir boyutu olan partiküllerin toplanmasßaglanmlgtlîl Örnek 2: G. kavnakllînhikotoksinler icin analiz yöntemleri 2.1 Bulusa qöre partikül numunesinin elde edilmesi Yaklasilüs kg'lllgglîzlh kaynakllîqbugday, malt, mEE] yesil kahve, flüdllgveya buna benzer y[giI ürünleri) partiküller, cihaz ile Örnek 1'de tarif edilen yönteme göre elde edilir. 2.2 Bulusa göre toplanllân partikül numunelerinin mikotoksin konsantrasyonuna yönelik numune hazlEllglj eklenmektedir. Dâhili standartlar olarak 200 ul bir zearalenon- çözünürü c = 5 ug/ml konsantrasyonu ile ve de 200 ul bir fusarenonX- çözünürü c = 20 ug/ml konsantrasyonu ile doping edilir. Bu ekstrakte edilmis madde ultrasonik banyoda en yüksek güç katIa 5 dakika ve de 20 dakika mekanik çalkalay- çalkalanmaktadlEl Bu ekstrakt, cam elyaf bir filtre içerisinden filtrelenmektedir. EkstraktI bir alikotu azot akIilEUa 60°C buharlastlElIBilStlElve HPLC-Eluentten tekrar geri allEtnIStlElve 1:5 HPLC-Eluent ile seyreltilmistir. 2.3 Kontrol numunelerin homoienizasvonunun geleneksel analizi 2.3.1 Kuru ööütülmüs numuneler (örnegin bugday, tahlmar gibi) Geriye kalan yaklasüas kg oranlîidaki y[g]I glBia ürünü, 2.1'de bulusa göre tarif edilen partikül numunelerinin elde edilmesinden sonra, tamburlu karISt-n alIIElve dogrudan ince toz olarak ögütülür. (tane boyutu < 1 mm ).

Bu numuneler cihazdan elde edilen partikül numunelerinin kontrolünü temsil etmektedir. 2.3.2 Islak olarak ööütülmüs numuneler (örnegin yesil kahve çekirdekleri, yemis veya benzeri; ancak bugdaylar kullanllEiamlgtlEçünkü içlerinde bulunan glüten nedeniyle Elak ögütme için uygun degillerdir, aksi halde bunlardan büyük hamur topaklarüilusacaktlî).

Geriye kalan yaklasllZ] 5 kg oranIdaki ytglI g. ürünleri, 2.1'de aç[Elanan bulusun partikül numuneleri tamburlu karlgt-n allömlgtlîlve Resmi Arastlîilriaya Prosedürü g 64 LFBG L 00.00-111/1, mod. Gida incelemesi - Resmi numunenin Hükümleri geregi numune hazlEllama prosedürü, Gldh içindeki mikotoksin düzeyinin belirlenmesi için çapraz kontrol ve test örnegine göre Bölüm 1: - Islak homojenizasyon sürecinin homojenlestirilmesi'ne göre homojenlestirilmistir. Bu örnekler, cihaz tarafian elde edilen partikül örneklerine yönelik kontrolleri temsil eder. 2.4 Mikotoksin konsantrasyonunun belirlenmesi için kontrol numunenin hazlîlianmasü karlglEiiElmacim cinsinden 80:20) ile karlgtlîllüilgtlîl ve 30 dakika 175 rpm'de çalkalanlEl Ekstrakt cam elyaf bir filtre içerisinden filtrelenir. 1 ml'lik filtrelenen ekstrakt 2ml su ile seyreltilmistir, el ile çalkalanmlStlElve HPLC-MS / MS ile ölçülmüstür. 2.5 Bulusa qöre alin partikül numunelerin ekstrakt ölcümü ve kontrol numunesi EkstraktlarI ölçümü, üçlü-dörtlü kütle spektrometresine baglanmakta olan HPLC araclIJglEla yapilîhaktadEI Sabit fazda bir RP-18-fazElçermektedir. Elüent A ve B ile ikili bir gradyan kullanllöîaktadlîl AklgloranElDB mI/dakika'yEbulmaktadlB Gradyan Programü Eluent A: Su/Metanol (hacim cinsinden 95+), amonyumkarbonat: 1 mmol/L, formik asit 0,0025% Eluent B: Metanol Zaman(dk) Eluent A % Eluent B % 6,9 20 80 7,0 20 80 8,0 0 100 ,0 0 100 ,1 80 20 14,0 80 20 Bu bulus, HPLC-MS'nin özel bir biçimi olarak üçlü-dörtlü kütle spektrometresi aracillgllýla hem pozitif (okratoksin A, aflatoksin B1, T-2, HT-2) hem de negatif (Deoxynivalenol, zearalenon) modda gerçeklestirilmektedir. Örnek 3: Buödavda mikotoksin deoksinivalenol (DON) ve zearalenon (ZON) analizi Bulusa göre partikül numunelerin elde edilmesi Örnek 1'e göre gerçeklesmektedir. Bulusa göre olan partikül numunelerinde ve geleneksel olarak elde edilen kontrol numunelerinde DON veya ZON konsantrasyonunun ölçümü ve belirlenmesi, gerçeklestirilmektedir. Örnek Z'ye göre Bulusa göre olan partikül numunelerinde ve kontrol numunelerinde DON veya ZON konsantrasyonunun mikotoksin olarak belirlenen sonuçlar asaglEIhki Tablo 1'de gösterilmektedir: Deoxynivalenol (DON) Zea ralenon (ZON) Nu mune-No. Partikül Kontrol Partikül Kontrol Bugday Konsantrasyon belirleme sonuçlarlÇISekil 2 ve 3'te gösterilmektedir. SasIlElIbir sekilde, kasifler, cihaz tarafIan elde edilen partikül numunelerinde mikotoksinlerin tespitinin, materyallerden elde edilen kontrol numunelerinin sonuçlarEile büyük oranda iliskili oldugunu beyan etmektedirler. Sekil 2, bulusa göre olan partikül numunelerinde ve kontrol numunelerinde DON konsantrasyonunun R2 = 0.9525 bir korelasyonu oldugunu göstermektedir. Eksiksiz bir korelasyonun R2 = 1 degerinde oldugu varsayIiglIdan, R2 = 0.9525 degeri çok yüksek bir korelasyonu temsil eder. Bu baglamda, bulusa uygun partikül numunesi, toplam numunede DON konsantrasyonunun mikotoksin olarak güvenilir bir ölçüde çogalmasIElsaglayan çok temsili bir numuneyi temsil etmektedir. Sekil 3'de, bulusa uygun olan partikül numunelerinin bugday içinde ZON konsantrasyonunun korelasyonunu, kontrol numuneleri R2 = 0.9194 ile göstermektedir. Bu nedenle, bulusa uygun elde edilen numune, kontrol numunesindeki mikotoksin ZON'un ölçülen konsantrasyonu aç-an yüksek oranda önemlidir. Örnek 4: MEIEHa mikotoksin deoksinivalenol (DON) ve zearalenon (ZON) analizi Bulusa uygun partikül numunelerinin elde edilmesi, Örnek 1'e göre gerçeklestirilmektedir.

Bulusa uygun olan partikül numunelerinde ve geleneksel olarak elde edilen kontrol numunelerinde DON veya ZON konsantrasyonunun ölçülmesi ve belirlenmesi, Örnek 2'ye göre gerçeklestirilmektedir. Bulusa göre olan partikül numunelerinde ve geleneksel olarak elde edilen kontrol numunelerinde DON veya ZON konsantrasyonlar- ölçüm sonuçlarü asagIki Tablo 2'de gösterilmektedir: Parametre DON ZON Parti kül- Partikül Kontrol Partikül Kontrol Y[gIE glElh maddeleri olarak mlîlüla DON veya ZON konsantrasyonlarü bulusa uygun elde edilen partikül numuneleri ile mlglB-ylgll malzemesinden dogrudan yer kontrol numunesinde elde edilenler arasIEUa yüksek bir korelasyon bulundugunu saslEiilEDsekilde mucitler gösterebilmektedir. Sekil 4, bulusa göre olan partikül numunelerinde ve kontrol numunelerinde DON konsantrasyonunun R2 = 0.9525 olan bir korelasyonunu göstermektedir.

Böylece, cihaz tarafIan elde edilen numune, mikotoksin DON ile migüiçindeki bu tür yükü güvenilir bir sekilde ve kolayca tespit etmek son derece anlamIEil'e dolaylEMa temsilidir. AyniZl sekilde, ZON ile konsantrasyonun ölçümü için de geçerli olmaktadE Sekil 5, R2 = 0.8264'ten daha fazla olan bir korelasyonunu göstermektedir. Bu nedenle, bu diger mikotoksin ZON'un, cihaz tarafIan güvenilir ve temsili bir numunenin elde edilebilecegi tespit edilmektedir.

Y[glE malzemenin tam homojenizasyonla elde edilmesi gerektigi zaman aIlEDve teknik problemli numunelerle karsllâstlîllüwasüböylece bulusa uygun elde edilen hacimli malzeme partiküllerinden elde edilen numuneler, güvenli ve teknik olarak uygulanmasükolay bir alternatif olmaktadlElve bu da önemli bir zaman ve maliyet tasarrufu saglar ve aynüamanda mikotoksin konsantrasyonu aç-an benzer sonuçlar elde edilmektedir.. Örnek 5: Kahvede mikotoksin oraktotoksin A (OTA) analizi Bulusa uygun partikül numunelerinin elde edilmesi, Örnek 1'e göre gerçeklestirilmektedir.

Bulusa uygun partikül numunelerinde ve geleneksel olarak elde edilen kontrol numunelerinde okratoksin A (OTA) konsantrasyonunun ölçümü ve belirlenmesi, Örnek Z'ye göre gerçeklestirilmektedir. Bulusa uygun olan partikül numunelerinde ve geleneksel olarak elde edilen kontrol numunelerinde okratoksin A (OTA) konsantrasyonlarII ölçüm sonuçlarlZl asag-ki Tablo 3'te gösterilmektedir: Okratoksin Okratoksin A Numune-No. Partikül Kontrol numunesi numunesi kahve_Lab 26,1 0,0 Tablo 3'teki ölçülen degerler, kontrol numuneleri ile bulusa uygun partikül numunelerindeki okratoksin A (OTA) aralebla bir korelasyonu göstermektedir. Bu korelasyon sekil 6'da gösterilmektedir. Bu korelasyon R2 = 0,5082 bulundurmaktadß Bu deger nispeten düsük olarak sIlfIlandlEllBiaktadlEl Bunun nedeni incelenen kahve yigIEl malzemesinin daha düsük toplam yükü olmasIan kaynaklanmaktadlrîl Bununla birlikte, verilere dayanarak, < 50 ug/kg olan bulusa uygun partikül numunesinin bir OTA yükünün, < 5 ug/kg'IHZI OTA'IEltoplam numunenin toplam yükünü ifade ettigi sonucuna varllâbilir.

Claims (6)

ISTEMLER

1. YiglE malzemedeki en az bir mikotoksin kontaminasyonunun tespitine yönelik bir yöntem olup, asag-ki ad lardan içermektedir: (a) yigiI malzemeden 0.1 mm ila 1.0 mm arasIa bir partikül boyutuna sahip partiküllerden bir numunenin allErnasEI (b) alin numunelerin analiz edilmesi; (c) mikotoksin kontaminasyonunun konsantrasyonunu belirleyerek en az bir mikotoksin kontaminasyonunun tespit edilmesi, ve (d) adn (c)'de belirlenen numunedeki konsantrasyonunun, y[glI malzemenin toplam numunesinin konsantrasyonu ile iliskilendirilmesiyle, y[giI malzemenin gerçek mikotoksin kontaminasyonunun sonuçlandlEllB1aslZl

2. Ekstrakte edilen numunelerin partikül boyutu 0,1 mm ila 0,7 mm aral[g]Ia, ilave olarak tercihen 0,2 mm ila 0,5 mm aral[g]Ia bir boyuta sahip oldugu, Istem 1'e göre yöntem.

3. Analizin, kromatografik, spektroskopik veya immünolojik yöntemlerin iletilmesine yönelik bir analiz cihazEIIe gerçeklestirildigi, Istem 1 veya Z'ye göre yöntem.

4. Analizin, Yüksek PerformanslESEEKromatograFisi (HPLC), Ultra-Yüksek Performansllîl Kromatografi (UPLC), Fourier-Dönüsümleri-IT-Spektroskopisi (FTIR), Nükleer manyetik rezonans spektroskopisi (nükleer manyetik rezonans, NMR), Gerçek zamanllîiilogrudan analiz (DART) ya da Enzime baglEimmünosorbent deneyi (ELISA) ile gerçeklestirildigi, Istem 1 ila 3'ten herhangi birine göre yöntem.

5. Mikotoksinlerin, okratoksinler, aflatoksinler, ergot alkaloidler, fusarium toksinler, özellikle de tercihen deoksinivalenol ve zearalenon, alternaria toksinleri ve sitrin grubundan seçildigi, Istemler 1 ila 4'ten herhangi birine göre yöntem.

6. Ylglü malzemedeki mikotoksin kontaminasyonunun, partikül numunesinde belirlenmis olan konsantrasyondan kontrol verileri sayesinde korelasyon yapllârak tespit edildigi, Istemler 1 ila 5'e göre yöntem.