TARIFNAME PREVOTELLA'DAN EN Az BIR BAKTERI SUSU KULLANARAK OBEZITE, METABOLIK SENDROM, TIP 2 DIYABET, KARDIYOVASKÜLER HASTALIKLAR, DEMANS, ALZHEIMER HASTALIGI VE ENFLAMATUVAR BAGIRSAK HASTALIGININ TEDAVISI BULUSUN ALANI Prevotellaceae türlerinden en az bir izole edilmis bakteri susunu içeren obezite, metabolik sendrom, tip 2 diyabet, kardiyovasküler hastaliklar, demans, alzheimer hastaligi ve enflamatuvar bagirsak hastaliginin tedavisinde kullanilan bir ürün olup, burada sus, Prevotella copri ve Prevotella ruminicola'dan olusan gruptan seçilir. Ürün bir gida ürünü olabilir. BULUSUN GEÇMISI Alandaki pek çok gida ve içerik sirketi, gida maddelerinin yaninda, kullanimi üzerine, temel besinleri saglamanin yani sira tüketiciye faydali saglik etkisi de saglayan, fonksiyonel gidalar denilen içerik` ve bunlarin yaninda gida ürünlerini tanimlamak için çabalarini arttirmislardir. Örnekler arasinda, bagirsak sagligina özel saglik yararlari gösteren ve gida ürününe dahil edilen probiyotikler olarak adlandirilan, örnegin fermente edilmis süt, yogurt gibi farkli süt ürünlerini ve farkli içecekleri içeren canli mikroorganizmalar bulunur. Saglik yararlarina sahip gida ürünlerinin diger örnekleri, diyet lifi (DF), prebiyotik karbonhidratlar, stannol, omega-3 yag asitleri, Vitaminler, polifenoller, düsük glisemik› etkili gidalar, ve benzerlerini içeren besinlerdir. Halk sagligi açisindan bakildiginda, glikoz metabolizmasini iyilestirmek ve obeziteyi ve ilgili bozukluklari azaltmak için hareket edebilecek yeni gida ürünlerinin gelistirilmesi için özel bir ihtiyaç bulunmaktadir. Glukoz metabolizmasinda bozulma da bozulmus bilissel islevsellik ile iliskilidir. Obezite ve tip 2 diyabet (T2D) gibi yasam tarziyla iliskili bozukluklarin yayginligi dünya çapinda artmaktadir ve dünya çapinda T2D'den halihazirdaki muzdarip insan sayisinin 366 milyondan 2030 yilina kadar 552 milyona ulasacagi ileri sürülmüstür. Önleyici stratejilere duyulan ihtiyaç bu nedenle acildir. Diyet temelli önleme, yasam tarziyla ilgili hastaliklarin Hücadelesinde en etkili strateji olarak. kabul edilmektedir' ve epidemiyolojik çalismalar, örnegin tam tahil gidalarinin ve baklagillerin yüksek aliminin diyabetin önlenmesi ve yönetiminde ve kilo kontrolü için faydali oldugunu desteklemektedir. Obezite, kardiyovasküler hastaliklara katkida bulunan önemli bir faktördür, ancak altta yatan mekanizmalar tam olarak bilinmemektedir. Bununla birlikte, önemli bir özellik "metabolik enflamasyon" ve dogustan gelen sistemin aktivasyonu gibi görünmektedir. Örnegin, yüksek GI'li gida ve enerji yogun gida gibi diyet kaliplari, gelecekte kardiyovasküler hastaliklarin gelecekteki riskini öngörebilen bir faktör olarak kabul edilmektedir. Günümüzde, kardiyometabolik bozukluklarla mücadelede saglikli bir bagirsak mikrobiyotasinin önemini destekleyecek büyüyen bir bilgi sistemi vardir ve bagirsak ekosistemi, konakçi metabolizmasi, istah ve kilo regülasyonunun modülatörü olarak kabul edilmektedir.Bagirsak mikrobiyotasi ve periferik dokular arasindaki metabolik "çapraz-konusma"nin, sindirilemeyen karbonhidratlar gibi sindirilmeyen diyet bilesenlerinin bagirsak fermentasyonu yoluyla düzenledigi ileri sürülmüstür. Fermente edilebilen bagirsak substratlarinin konakçi metabolizmasi üzerindeki rolüne iliskin kanitlarin çogu, inulin ile yapilan çalismalardan, hayvan deney' modellerinde glukoz metabolizmasi ve kilo regülasyonu üzerindeki faydalari göstermektedir. Son zamanlarda, bagirsak mikrobiyotalarinin önemi, yalin insan donörlerden metabolik sendrom (MetS) hastalarina yapilan fekal transplantasyona dayali çalismalarda belgelenmistir; MetS, T2D ve kardiyovasküler hastalik gelistirme riski yüksek olan kisileri belirleyen bir dizi risk faktörünü temsil eder. Fekal transplantasyon, fekal infüzyondan 6 hafta sonra T2D deneklerinde insülin duyarliliginin artmasina neden olmustur. Bu yeni bulgular heyecan vericidir ve saglikli bir mikrobiyotanin önemi ile ilgili bilgilere katkida bulunmaktadir. Bununla birlikte, fekal transplantasyonlar hem karmasik hem de riskli olabilir. Dolayisiyla, yararli bakterilerin sayisini arttirmak ve bagirsak mikrobiyal bilesiminin saglikli bir dengesini baska yollardan tesvik etmek için stratejilere ihtiyaç duyulmaktadir. Bugüne kadar diyet manipülasyonunu takiben yararli bakterilerin artisini gösteren çalismalarin çogu kesitseldir ve dolayisiyla nedensellik göstermemektedir. Bu, lavman yoluyla veya probiyotikler de dahil olmak üzere gida ürünleri araciligiyla ya da yeterli miktardaki kolonik substrat diyeti saglanmasiyla, örnegin normal diyetle spesifik prebiyotik substratlar veya pro- ve prebiyotiklerin kombine edilmesi yoluyla canli bakteriler saglanmasiyla gerçeklestirilebilir. Gida endüstrisindeki iyilestirilmis saglik özellikleri veya fonksiyonel gida ürünlerine sahip yeni gida ürünleri gelistirme çabalarina ragmen, obezite ve MetS veya T2D'li bireylerin artan sayisi hala büyük bir problem olusturmaktadir. Bu kosullar tipik olarak ilaçlarla tedavi edilir. Bununla birlikte, saglikli bireyler veya hastalik riski altinda olan kisilere, erken hastalik süreçlerine karsi koymak için özel olarak tasarlanmis gida ürünleri sunulabilirse, bu, bilissel islevsellikte bozulma da dahil olmak üzere obezite ve MetS'nin gelismesini engelleyecektir. Ayrica, bu tür gida ürünleri, MetS'e bagli ortaya çikan hastaligi olan hastalarda hastalik yönetimini de kolaylastirabilir. HAYASHI H. VE DIGERLERI: "PREVOTELLA COPRI SP AND PREVOTELLA STERCOREA SP NOV. ISOLATED FROM HUMAN FAECES", INTERNATIONAL JOURNAL OF SYSTEMATIC AND EVOLUTIONARY MICROBIOLOGY, Cilt 57, izolasyonunu açiklamaktadir. otoimmün durumlari tedavi etmek için oral ilaç veya diyet takviyesi olarak kullanim için Prevotella histicola preparatlarini açiklamaktadir. dahil olmak üzere bagirsak mikrobiyota popülasyonlarinin gelistirilmesi için bilesim ve yöntemlerle ilgilidir. bagirsak hastaligi gibi hastaliklarin tedavisinde yararli olan önceden seçilmis bir mikroorganizma kombinasyonunu içeren bilesimleri açiklar. obezite ve diyabet Tip II dahil olmak üzere hastaliklarin tedavisinde kullanilmak üzere Prevotella'dan bakteriler dahil olmak üzere anaerobik olarak kültürlenmis insan bagirsak mikrobiyotasini içeren bir bilesimi açiklar. BULUSUN ÖZETI Bulus, Prevotellaceae'ye ait türlerin konakçi sagligi üzerinde yararli etkilere sahip oldugu ile ilgili benzersiz bulguya iliskindir. Prevotellaceae'ye ait türler, tüketicinin sagligini gelistirmek üzere, bir kapsül içine eklenmis, bir lavman veya bir süpozituvar olarak herhangi bir gida ürününde veya bir gida ürününde bir bilesen olarak, ilave bir sindirilemeyen karbonhidrat içeren veya içermeyen bir probiyotik olarak kullanilabilir. Mevcut bulusun bir birinci görünümü, Prevotellaceae türlerinden en az bir izole edilmis bakteri susunu içeren obezite, metabolik sendrom, tip 2 diyabet, kardiyovasküler hastaliklar, demans, alzheimer hastaligi ve enflamatuvar bagirsak hastaliginin tedavisinde kullanilan bir ürün ile ilgili olup, sus, Prevotella copri ve Prevotella ruminicola'dan olusan gruptan seçilir. Bu tür bir ürün ile, glikoz metabolizmasini iyilestirmek ve metabolik sendromda risk faktörlerini azaltmak için yukarida belirtilen bir dizi hastaligin tedavisinde faydali olabilecek yeni saglikli gida bilesenlerinin yani sira gida ürünleri, kapsüller, lavmanlar veya süpozituvarlar saglamak ilk kez mümkündür.Ürün, bir veya daha fazla diyet lifi ve/veya dirençli nisasta ile birlikte saglanabilir. Mevcut bulus ile diger avantajlar ve amaçlar, ekli çizimlere referansla, daha detayli olarak açiklanacaktir. SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1. Sirasiyla arpa özü esasli ekmek (BB) ve beyaz bugday ekmegi (WB) tüketiminden 3 gün sonra standartlastirilmis kahvaltiya yönelik kan glukozu- ve serum insülin yanitlari (arttirimli degisimler (A)). BB tüketimi, referans WB'e kiyasla (n=39), daha düsük postprandial glukoz- ve insülin pik konsantrasyonlarina (P<0,0l, ve P<0,00l, sirasiyla) ve egrilerin altinda daha düsük glukoz- ve insülin alanlarina (0-150 dk P<0,0l ve P<0,00l, sirasiyla) neden olmustur. Sekil 2. Sirasiyla arpa özü esasli ekmek (BB) ve beyaz bugday ekmegi (WB) tüketiminden 3 gün sonra standartlastirilmis kahvaltiya yönelik kan glukozu- ve serum insülin yanitlari (arttirimli degisimler (A)). BB tüketimi, referans WB'e kiyasla (n=20), daha düsük postprandial glukoz- ve insülin pik konsantrasyonlarina (her ikisi için de P<0,05) ve egrilerin altinda daha düsük glukoz- ve insülin alanlarina (0-150 dk P<0,05 ve P<0,0l, sirasiyla) neden olmustur. Sekil 3. Standart hale getirilmis kahvaltida, sirasiyla 3 günlük arpa özü esasli ekmek (BB) ve beyaz bugday ekmegi (WB) tüketiminden sonra nefes H2'si atilimi. BB tüketimi, referans ögünü WB'e kiyasla (deney günü esnasinda ortalama konsantrasyon, P<0,0l (n=20) anlamli ölçüde artmis nefes H2'sine neden olmustur. Sekil 4. Standartlastirilmis kahvaltida, sirasiyla 3 günlük arpa özü esasli ekmek (BB) ve beyaz bugday ekmegi (WB) tüketiminden sonra plazma PYY konsantrasyonlari. BB tüketimi, üç günlük WB alimina kiyasla (deney günü esnasindaki ana etki, P<0,05 (n=20) anlamli ölçüde artmis PYY plazma konsantrasyonlarina (0-120 dakika) sebep olur. Sekil 5. Standartlastirilmis kahvaltidan sonra, arpa Özü esasli ekmek (BB) veya beyaz bugday ekmegi (WB) tüketiminden 3 gün sonra yanit verenlerde (n=lO) ve yanit vermeyenlerde (n=lO) kan glukozu yanitlari. Yanit verenler grubunda, üç gün BB tüketimi, üç günlük WB alimina kiyasla (alan altinda egri 0-150 dk P<0,000l) anlamli ölçüde daha düsük glukoz yanitlarina neden olur. Yanit vermeyenler grubunda BB'nin glukoz toleransinda (egri altinda kalan alan) hiçbir gelisme görülmemistir. Sekil 6. Standartlastirilmis kahvaltidan sonra, arpa özü esasli ekmek (BB) veya beyaz bugday ekmegi (WB) tüketiminden 3 gün sonra yanit verenlerde (n=lO) veya yanit vermeyenlerde (n=lO) serum insülin yanitlari. Yanit verenler grubunda, üç gün BB tüketimi, üç günlük WB alimina kiyasla (alan altinda egri O- l20 dk P<0,0l) anlamli ölçüde daha düsük insülin yanitlarina neden olur. Yanitlayici olmayan grupta BB ile ilgili bir gelisme görülmemistir. Sekil 7. Standartlastirilmis kahvaltidan sonra, arpa özü esasli ekmek (BB) ve beyaz bugday ekmegi (WB) tüketiminden 3 gün sonra yanit verenlerde (n=7) ve yanit vermeyenlerde (n=7) kan glukozu yanitlari. Yanit verenler grubunda, üç gün BB tüketimi, üç günlük WB alimina kiyasla (alan altinda egri 0-150 dk P<0,0001) anlamli ölçüde daha düsük glukoz yanitlarina neden olur. Yanit vermeyenler grubunda BB'nin glukoz toleransinda (egri altinda kalan alan) hiçbir gelisme görülmemistir. Sekil 8, ana bagirsak mikrobiyal türlerinin, arastirmaya katilan farkli gruplar arasinda taksonomik Çesitliligini göstermektedir, veriler, 454 pirosekanslama analizinden sonra üretilmistir. Alti çubuk, çalismada yer alan gruplari temsil eder: R- kontrol (yanit veren kontrol), R-WB (yanit verenler beyaz bugday ekmegi), R-BB (yanit verenler arpa özü esasli ekmek). NR=yanit vermeyenler. Kontrol, numunelerin test ekmekleri (BB veya WB) tüketmeden toplandigi anlamina gelir. Sekil 9, tetaiotaomikron (n:6) (P:0,0076) Bakteroitleri ile mono-kolonize fareler ile karsilastirildiginda, Prevotella copri (n = 6) ile iki hafta boyunca mono-kolonize olan fareler gelismis oral glukoz toleransi ve daha düsük serum insülin seviyeleri sergilemektedir. P. copri ve B. tetaiotaomikron (n=7) ile bi- kolonize edilen fareler ayrica mono B. tetaiotaomikron kolonize farelere (P=0,0426) kiyasla daha iyi oral glikoz toleransi gösterirler. BULUSUN AYRINTILI AÇIKLAMASI TANIMLAR Mevcut uygulama ve bulus baglaminda, asagidaki tanimlar geçerlidir: hipertansiyon ve glikoz intoleransi gibi risk faktörleri kümesi anlamina gelirken, tip 2 diyabet (T2D) ve kardiyovasküler hastalik gelistirme riski yüksek olan kisiler belirlenir."Probiyotik" terimi, bagirsakta kolonizasyon üzerine konakçida bir saglik yarari saglayan bakteriler gibi canli bir emilmeye direnç gösteren üç veya daha fazla monomer içeren ve bagirsak. bakterileri tarafindan kolonda tamamen veya kismen fermente edilen karbonhidratlar anlamina gelir. Bu basvuruda DF terimi, beta-glukanlar, arabinoksilatlar, selüloz, oligosakkaritler, fruktanlar, pektin, guar zamki gibi nisastadan türetilmis hazimsiz polisakkaritler ile ilgilidir. Bitkide sindirilemeyen polisakkaritler ile yakindan iliskili olan sindirilmeyen maddeler de DF'nin tanimina dahil edilir (örnegin, sindirilmeyen protein fraksiyonlari, fenolik bilesikler, lignin, mumlar, fitatlar, fitosteroller). nisastadan elde edilen DF'nin ince bagirsaginda sindirimden kaçan nisasta ve nisasta bozunum ürünlerini ifade eder. RS, çözünmeyen DF'nin bazi faydalarini ve çözünür DF'nin bazi faydalarini saglayabilir. RS, botanik olarak kapsüllenmis nisasta, jelatinlestirilmemis- veya geriletilmis nisastadan türetilebilmektedir. sonra nisasta moleküllerinin yeniden kristallesmesi anlamina gelir ve bu da ince bagirsakta sindirime ve emilmeye dirençli yapilara neden olur. içinde fiziksel olarak hapsedilen nisastayi veya ince bagirsakta sindirim enzimlerine erisemeyen botanik hücreleri ifade eder. veya pismemis tahillarda nisasta, veya islendikten sonra jelatinlesmeye direnç gösteren nisasta granülleri gibi, korunmus sindirilmeyen bozulmamis kristal yapiya neden olan, dogal formunda olusmus, islenmemis nisasta granülleri anlamina gelir. büyümesini ve/veya aktivitesini, saglik yararlariyla baglantili olarak uyaran, sindirilmeyen gida bilesenlerini, tercihen DF ve R8 gibi sindirilmeyen karbonhidratlari ifade eder. kombinasyonu anlamina gelir. SCFA terimi, sindirilemeyen karbonhidratlarin mikrobiyal bagirsak fermentasyonundan üretilen kisa Zincirli yagli asitleri anlamina gelir. oksijen ve asitlik) korunacak sekilde kapsüllenmis olabilecegi ve bu nedenle bozulmayacak ve gida ürünündeki ve bagirsaktan geçis sirasinda nitelik ve aktivitelerini koruyabilecegi anlamina gelir. Kapsülleme için kullanilan teknikler, örnegin alginat-, guar sakizi-, ksantan. sakizi-, keçiboynuzu zamki-, karragenan sakizi- veya diger diyet lifi, -kazein, prebiyotikler veya nisasta bazli yenilebilir filmler, toplayici emülsiyonlar ve benzerleri bazli olabilir. Farkli kapsülleme teknolojileri uygulanabilir, bunlarin bazilari R Vidhyalakshmi ve digerleri, 2009 [1]'de tarif edilmistir. tüketiminden sonra gelistirilmis glikoz uygulamasi alan insan denekleri anlamina gelir. tüketiminden sonra gelistirilmis glukoz regülasyonu kaniti göstermeyen insan denekler anlamina gelir. bagirsak mikrobiyal bilesimini faydali bir sekilde modüle etmek üzere, rektum boyunca bagirsaga prebiyotik substrat ile veya onsuz ilave edildigi bir prosedürü tarif etmek için kullanilir. Metabolik enflamasyon terimi, insülin direnci ve metabolik disfonksiyon ile iliskili asiri besin ve enerjiye yanit olarak metabolik hücreler tarafindan düzenlenen düsük dereceli, kronik enflamasyonu tarif etmek için kullanilmaktadir. Arpa çekirdegi ürünlerindeki içsel DF ve RS'nin, diger lif gruplari için de nmhtemelen ayni olan kardiyo-metabolik risk markörleri ve istah regülasyonu açisindan yararli etkilere sahip oldugu bulunmustur.Bu nedenle, saglikli bireylerde arpa özü aksam ögününden sonraki standartlastirilmis bir kahvaltiya kadar bir gecelik zaman zarfinda arpa özlü ürünlerin alinmasindan 11- 14 saat sonra, glikoz toleransi ve insülin ekonomisi gelismistir. Diger önemli bir bulgu da, GLP-l ve diger istah düzenleyici hormonlarin plazma konsantrasyonlarinda bir artis ve istemli enerji aliminda azalma, ayni zamanda algilanan açlikta bir azalma olmustur. Ayrica, arpa sindirilemeyen karbonhidratlari metabolik enflamasyon markörlerini azaltmistir. Artan bir metabolik enflamasyon durumu, Mets ve T2D'nin önlenmesinde umut verici olmasiyla, metabolik enflamasyonu azaltan gida konseptlerini olusturan taninmis bir kardiyometabolik risk faktörüdür. Arpa hazimsiz karbonhidrat alimindan sonra artan bagirsak fermantasyon aktivitesinin göstergesi olan nefes hidrojeni (bagirsak fermentasyonu markörü) ve SCFA üretiminin arttigi görülmüstür. Bagirsak fermantasyonunun isaretçileri ile glukoz regülasyonunun iyilestirilmesi arasinda önemli iliskiler bulunmus olup, bu, arpa çekirdegi bazli ürünlerin metabolik risk markörleri üzerindeki prebiyotik aracili etkilerini göstermektedir, yani, görülen faydali etkiler sindirilemeyen karbonhidratlarin bagirsak bakterisi fermentasyonundan türetilen mekanizmalarla ilgilidir. Bagirsak mikrobiyota fermantasyonu sirasinda üretilen SCFA, kolonik enterositlere enerji saglar ve ayrica SCFA'lar da sinyalleme molekülleri olarak islev görür. Sonuç olarak, bakteriyel fermentasyon ile üretilen SCFA'nin, L-hücreleri üzerindeki SCFA reseptörleri üzerinde hareket ederek sinyalleme kaskadlarini tetikleyebildigi ve GLP-l ve PYY (in vitro model) gibi bagirsak peptitlerinin daha fazla salinmasina neden oldugu gösterilmistir. Elde edilen sonuçlar, arpa çekirdek ürünleri gibi tahil ürünlerinde DF ve RS'nin prebiyotik potansiyelini açikça göstermektedir. Sasirtici bir sekilde, saglikli bireylerde, arpa çekirdegi ürünlerinden (ekmek) kardiyo-metabolik risk markörleri ve istah regülasyonu ile ilgili olarak gözlemlenen faydalarin, bagirsak mikrobiyomunun spesifik bir degisimi ile iliskili olabilecegi bulunmustur ve Prevotella türlerinde bir artis tespit etmis bulunuyoruz. Ayrica, spesifik Prevotella susunun (Prevotella copri) mikropsuz farelere aktarilmasi hayvanlarda glikoz toleransini gelistirmistir. Sonuçlar, tanimlanan bakteriyel susun glukoz metabolizmasi üzerindeki faydalari ile probiyotik etkisini ortaya koymustur. Prevotella suslarinin seçimi için kriterlerden biri, kompleks sekerlerin parçalanmasi için gerekli olan glikozit hidrolazlarin olusmasi olmustur. Seçilen tüm suslar glikozit hidrolazlarina sahiptir ve çok çesitli kompleks sekerleri bozundurabilir. Ilave bir kriter, kompleks sekerlerdeki bozunmadan ana ürün olarak süksinat üretmek için seçilmis suslardir. Sus örnekleri arasinda, Prevotella copri, Prevotella sterçekirdek/oza, Prevotella .histikola, Prevotella ruminikola, Prevotella .Bryantii 25A ve Prevotella distasonis bulunmaktadir. 2, 3, 4, 5 veya 6 farkli sus gibi, farkli suslarin bir veya daha fazlasinin karisimlari da mümkün olabilir. Bu sus, miktarlarda mevcut olabilir. Ayrica, ilk kez elde edilen sonuçlar, Prevotella spp. susu ile birlikte, arastirilan prebiyotik substratlarinin, diger bir deyisle, arpa çekirdegi ürünlerindeki DF ve RS'nin, bu bagirsak substratlari Prevotella'da bir artis sagladigindan, sinbiyotik bir yaklasimda özellikle degerli olabilecegini ortaya koymaktadir. Sonuçlar, orta yasli/yasli saglikli bireylerde açlik ve 3 gün sonra standart bir kahvaltidan sonra arpa çekirdegi bazli ürün (100 gr mevcut karbonhidrat/gün) ile elde edilmistir. Arpa çekirdek ürünü, bir çapraz-kaplamali tasarim kullanilarak beyaz bugday ekmegi referans ürünü ile karsilastirilmistir. Bagirsak mikro-biyota bilesimini etkileyerek ve Prevotella spp oranini artirarak, arpa çekirdegi bazli ürün, artan bagirsak fermantasyon aktivitesi (bir test markörü olarak nefes hidrojeni (H2)) (P<0,00l), artan SCFA konsantrasyonlari (P<0,05), gelismis glikoz regülasyonu (azaltilmis glukoz ve insülin konsantrasyonlari (P<0,05), artan PYY konsantrasyonlari (bagirsakta salinan doygunluk hormonu) (P<0,05), artan lipid konsantrasyonlari GLP-l (anti-obezite ve anti-diyabetik bagirsak hormonu), artan algilanan açlik toklugu ve azalmis açlik hissi ile sonuçlanmistir. Gut-mikrobiyota bilesimini degistirerek ve Prevotella spp degerini arttirarak, arpa DF ve R8 bakimindan zengin arpa özü bazli gidalarin alimi, hem insanlarda hem de farelerde bagirsak fermentasyonu metaboliti süksinati arttirmistir. Sonuçlar ayrica, test denekleri arasinda bazi kisilerin (yaklasik %15) arpa özü bazli test ürününün alimini takiben gelismis glikoz regülasyonuna ulasmadiklarini ortaya koymustur (arpa ile 3 günlük müdahele sonrasinda standart bir ögüne glikoz ve/veya insülin yaniti ile belirlenir). Ilginç bir sekilde, bu bagirsak Prevotella konsantrasyonlari elde etmemistir. Bu, gelismis glisemik regülasyon ve artan Prevotella spp bollugu arasindaki nedensel iliskiyi vurgulamakta olup, kamusal alanda tamamen yeni bilgidir. Ayrica, bu sonuçlar, bazi kisilerin bagirsak mikrobiyota bilesimlerini kolaylikla degistirmediklerini ve özellikle önerilen arpa prebiyotikleri (DF + RS) ve Prevotella spp'nin agizdan alimi; ya da sadece Prevotella spp sindiriminden fayda görmüs olabileceklerini ilk10 kez olarak göstermektedir. Örnegin, DF ve R8 veya DF veya RS açisindan zengin bir arpa Çekirdegi gida ürünü kullanilarak, kan glukoz kontrolü, metabolik enflamasyon markörleri ve istah regülasyonu yararlari saglanmistir. Metabolik faydalar, bagirsak fermentasyonu, yani bir prebiyotik mekanizmasini belirten nefes hidrojeni, plazma SCFA markörleri ile iliskili olmustur. Yukarida belirtilen arpa çekirdegi ürününü sindiren saglikli insanlardan alinan diski örneklerinin bagirsak mikrobiyal haritalamasi, metabolik risk belirleyicileri ve istah uygulamasi üzerindeki yararlarin, bagirsakta bulunan ndkroorganizmalarin bilesiminin spesifik bir degisikligine bagli oldugunu ortaya çikarmistir.Yukarida belirtilen arpa çekirdegi gida ürününü sindiren denekler, bagirsak mikrobiyotasinda Prevotella türlerinde bir artis ve arpa Çekirdek gida ürününü almayan kisilere kiyasla gelismis kardiyometabolik risk markörleri göstermistir (asagidaki Örneklere bakiniz). Ayrica, bir Prevotella spp. susu ile mikrop içermeyen farelerin mono kolonizasyonunun, hayvanlarda glikoz metabolizmasini iyilestirdigi gösterilmistir- Dolayisiyla, yukaridaki sonuçlardan elde edilen sonuç, Prevotella ile ilgili türlerin, örnegin antidiyabetik özellikler ve agirlik uygulama potansiyeli ile bir prebiyotik olarak kullanilmaya uygundur. Glukoz nßtabolizmasinin bozulmasi ve bozulmus bilissel islev arasindaki siki iliski, Mets ile iliskili bilissel gerilemenin önlenmesi için Prevotella türlerinin de kullanimini artirmaktadir. Diger hastaliklar veya bozukluklar yukarida belirtilmistir. Yukaridaki deneylerden ve sonuçtan, bulusun, Prevotellaceae'den en az bir insan izole edilmis bakteriyel susu içeren bir gida ürünü veya gida muhteviyati veya bir lavman olarak kullanilacak formülasyon gibi bir ürünle iliskili oldugu tespit edilmistir. Bakteriyel, süksinat üretmek için modifiye10 edilmis gibi genetik olarak modifiye edilebilir. Örnekler arasinda, Prevotella copri, Prevotella stercorea, Prevotella histicola, Prevotella ruminicola, Prevotella .Bryantii 25A ve Probiyotik gida ürünü, tek basina veya DF ve RS veya DF veya RS gibi en az bir diyet lifleri türü gibi diger bilesenler ile kombinasyon halinde kullanilabilir ve bazi örneklerde de glukoz metabolizmasini regüle etmek ve insanlarda oldugu gibi bir memelideki metabolik sendromdaki faktör riskini azaltmak için süksinik asit kullanilabilir. Tedavi edilecek hastaliklar veya bozukluk örnekleri arasinda obezite, metabolik sendrom, tip 2 diyabet, kardiyovasküler hastaliklar, demans, alzheimer hastaligi ve obezite, metabolik sendrom ve tip 2 diyabet gibi enflamatuvar bagirsak hastaliginin tedavisi yer alir. Probiyotik gida ürünü ayrica en az bir DF ve/veya bir RS, dogal veya sentetik, saflastirilmis, karisimlari veya bunlarin varyantlarini içerebilir. DF ve RS örnekleri arasinda, arpa, çavdar, bugday, yulaf, baklagil tohumlari, beta-glukanlar, guar sakizi, lignin, lignanlar gibi Viskoz ve Viskoz olmayan DF gibi tahillar veya baklagillerden elde edilen DF ve R8 ve galakto- oligosakkaritler ve frukto-oligosakkaritler gibi oligosakkaritler, botanik olarak kapsüllenmis RS, geriletilmis RS, kimyasal olarak modifiye edilmis nisasta veya jelatinlestirilmemis RS bulunur. Ürün, en az bir tür dirençli nisasta (RS), bunlarin dogal, sentetik, saflastirilmis bir karisim veya varyantlarini içerebilir. RS örnekleri arasinda, örnegin geriletilmis nisasta, botanik olarak kapsüllenmis nisasta, jelatinlestirilmemis nisasta ve siklodekstrinler veya kimyasal olarak modifiye edilmis nisasta gibi sebze nisastasi bulunur. Lifler, örnegin arpa çekirdekleri olabilir. RS/DF orani örnegin, olabilir. DF; arpa, bugday, çavdar, yulaf veya özütlenmis beta-glukanlar, guar zamki, lignin, lignanlar ve galakto-oligosakkaritler ve frukto- oligosakkaritler gibi oligosakkaritlerden diyet lifi, botanik olarak kapsüllenmis RS, geriletilmis RS, kimyasal olarak modifiye edilmis nisasta veya jelatinlestirilmemis RS olabilir.Ürün, en az bir tür dirençli nisasta (RS), bunlarin dogal, sentetik, saflastirilmis bir karisim veya varyantlarini içerebilir. RS örnekleri arasinda, örnegin geriletilmis nisasta, botanik olarak kapsüllenmis nisasta, jelatinlestirilmemis nisasta ve siklodekstrinler veya kimyasal olarak modifiye edilmis nisasta gibi sebze nisastasi bulunur. Lifler, örnegin arpa çekirdekleri olabilir. Ürün, beklenen sonuçlari elde etmek için örnegin RS ve/Veya DS ile birlikte bir veya daha fazla bakteri susu içerebilir. Baska bir uygulamada, bulus konusu ürün ilave bir bakteri susunu içerir, burada söz konusu sus, süksinat üretebilir. Yararli olan bu tür suslarin örnekleri arasinda, örnegin Lactobacillus, örnegin Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Roseburia ve Bifidobacteria, örnegin Bifidobacterium longum, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium animalis ve Bifidobacterium bifidum bulunur. Ilave bakteri susu da süksinat üretmek için genetik olarak modifiye edilebilir. Ürün ayrica serbest formda süksinat içerebilir veya bir süksinat üreten bakteri susu ilave edilebilir. Süksinati dogal olarak üreten bir sus veya süksinat üretmek için genetik olarak modifiye edilmis bir sus. Buna göre, ürün teknikte uzman bir kisi tarafindan iyi bilinen kapsüllenebilir veya liyofilize edilebilir. Bir baska uygulamada bakteriyel sus Prevotellaseae, susu oksijenden korumak için herhangi bir formda kapsüllenebilir. Kapsülleme teknikleri örnekleri arasinda, yenilebilir filmler, stabil bariyer malzemesi olarak nisasta granüllerini kullanan sabit Pickering emülsiyonlari, polisakkaritlere dayanan kapsülleme, örnegin beta-glukanlar, guar sakizi, ksantan sakizi, keçiboynuzu zamki, karrageenan sakizi, prebiyotikler, aljinat, süt proteini ve benzerleri bulunur. Diger teknikler süper kritik karbon dioksit içinde polimer arasi kompleks olusumunu içerir. Bazilari R Vidhyalakshmi ve digerleri, 2009 tarafindan açiklanan farkli kapsülleme teknolojileri uygulanabilir. Baska bir uygulamada, Prevotellaceae'den elde edilen bakteriyel sus/suslar, tek basina lavman yoluyla veya DF ve/veya RS gibi prebiyotik substratlarla birlikte bir bilesimde saglanabilir. Ürün örnegin uygun herhangi bir gida ürünü olabilir ve isil islem görmemis veya hafif isil islem görmüs herhangi bir gida ürünü içerebilir veya burada Prevotella isil islemden sonra, Prevotella veya Prevotella ve prebiyotik kombine içeren veya bunlarla takviye edilmis içecekleri içeren, shotlar (örnegin meyve veya süt bazli), smoothie'ler, içecekler, meyve sulari, sofra suyu, soguk çorbalar/Çorba karisimlari, yag ürünleri, serpmeler, soslar, sos/sos karisimlarii, salsa, süt ürünleri, dondurma ve tahil bazli içecekler ile alinabilir.Prevotella ayrica kapsüllenebilir ve yukarida tarif edilen gidalara dahil edilebilir, böylece çevre ve isleme kosullarina karsi direnci Gida ürünü ayni zamanda yumusak ekmek, gevrek ekmek, yassi ekmek, tortilla, yulaf lapasi, kahvaltilik gevrekler, tahil barlari veya diger atistirmaliklar, patates tozu veya Prevotella ile birlikte veya onsuz tüketilmek üzere örnegin arpadan prebiyotigi içeren diger hizli gida ürünleri, hazir gida ürünleri olabilir. Yukarida listelenen ürünlerle tüketilmek veya Prevotella'nin saglanmasi için tüketilmek üzere Prevotella spp. içeren kapsüller. Kapsüller ayrica prebiyotik karbonhidratlardan, örnegin arpadan da yapilabilir. Prevotella ayrica, örnegin, kararli emülsiyon teknikleriyle kapsüllenebilir ve gidalara dahil edilebilir. Prevotella spp. ayrica, kuru toz olarak sunulabilir ve gidalara, örnegin kahvaltilik tahillara eklenebilecek atilabilir kaplar halinde paketlenebilir. Gida ürünü, örnegin, odalardan birinde prebiyotik veya prebiyotik olmadan Prevotella ile, digeri yukarida oldugu gibi gida. ürünü olmak. üzere, tüketim üzerine karisacak olan iki odali pakette saglanan bir içecek, bir çorba, yogurt, soguk tahil pudingi veya shot olabilir. Prevotella'li hazne, pakete dahil olan veya ayri olarak dagitilan bir pipeti de içerebilir. Prevotella ardindan, pipet içerisinden içilerek tüketilecektir. Ürün, prebiyotikli veya prebiyotik olmayan Prevotella'nin emülsiyon damlaciklari halinde kapsüllenmis oldugu stabil bir emülsiyon olabilir. Bu ürünler örnegin bir shot halinde verilebilir. Prevotella'nin kapsüllere dahil edilmesi durumunda, kapsüller tercihen bir entero kapsül seklinde olmalidir. Prevotella ayrica entero tabletler, depo tabletleri, depo (uzun süreli salim) kapsülleri veya uzatilmis salimli granüller içine dahil edilebilir. Ürün ayrica bir gida ürününe eklenecek bir gida bileseni de olabilir. Bulus ayrica asagida belirtilenler de dahil olmak üzere bir dizi hastalik veya bozuklugun tedavisinde kullanilabilecek bir ürün tanimlar. Obezitenin tedavisi ve tip 2 diyabet gibi bozuk kan sekeri regülasyonu ile iliskili bozukluklarin yani sira, subklinik enflamasyon ve kardiyo-vasküler hastalik gibi iliskili hastaliga karsi koruma için kullanilabilir. Ayrica korunan kavramlar demans patogenezinin özelliklerini de ortadan kaldirir. Ayrica, kan glikozunun düzensizligi, enflamasyon ve endotelyal hasar ile iliskilidir, dolayisiyla halen korunan konsept ile kardiyovasküler hastaliklarin önlenmesi arasinda bir baglanti saglar. Sonuç olarak, normal araliktaki glikoz regülasyonunun hafif düzeyde bozulmasi bile, bilissel testlerde önemli ölçüde daha düsük performans ile iliskilidir ve halihazirda tarif edilen konsept, demansa yardimci olan glukoz regülasyonunu gelistirmektedir. Ayrica, halihazirda açiklanan korunmus konsept, GLP-l gibi inkretin hormonlarini uyarir. GLP-l nöroprotektif ve anti-apoptotik etkiler gösterir, beta-amiloid (Aß) plak birikimini azaltir, uzun süreli potansiasyonu ve sinaptik plastisiteyi modüle eder ve nöronal progenitör hücrelerin farklilasmasini tesvik eder, dolayisiyla bunama ve Alzheimer hastaligina karsi önlem alir. GLP-l'in nöroprotektif etkileri: duygudurum bozukluklari olan bireylerde bilissel eksiklikler için olasi tedaviler. Ayrica, korunan konsept ile gözlenen GLP-2'nin uyarilmasi, enflamatuvar bagirsak hastaliklarina karsi korur ve eksojen GLP-Z'nin, siçanlarda kemoterapiyle indüklenen mukozitlerden mukozayi koruyabilecegi bilinmektedir. Mevcut bulus, ayni zamanda, bir gida ürünü veya gida muhteviyati gibi tanimlanmis ürün ve bu ürünün, glukoz metabolizmasini iyilestirmek, daha düsük metabolik enflamasyonu saglamak ve istah regülasyonunu kolaylastirmak ve ayni zamanda metabolik sendromdaki risk faktörlerini azaltmak için kullanilmasi ile de ilgilidir. Bu, MetS ile ilgili bozuklugun önlenmesi ve düzenlenmesinde, obezite, glukoz intoleransi, diyabet veya kardiyovasküler hastaliklarin yani sira MetS ile ilgili bilissel islev bozuklugundan muzdarip kisilerde de yararli olabilir. Bulusa ait probiyotik, ayni zamanda, prebiyotik substratlar içeren veya içermeyen lavman formülasyonlari veya süpozituvarlarinda da kullanilabilir. Mevcut bulus ayrica, metabolik sendromdaki risk faktörlerini azaltmak, glukoz metabolizmasini gelistirmek, kilo regülasyonunu kolaylastirmak ve MetS ile ilgili bilissel gerileme riskini azaltmak için yukarida tanimlanan ürün kullanimina iliskindir. Son olarak, bulus, glukoz metabolizmasini gelistirmek, kilo regülasyonunu kolaylastirmak ve metabolik sendromdaki risk faktörlerini azaltmak için süksinat veya süksinat üreten bir bakteri susu kullanimi ile ilgilidir. Ürün insanlar, atlar, köpekler ve kediler için kullanilabilir. Asagidaki örneklerin, açik ya da dolayli olarak herhangi bir tarzda, sekilde ya da herhangi bir biçimde mevcut bulusu sinirlandirmamasi amaçlanmistir. ÖRNEKLER ARPA ÖZÜ ESASLI ÜRÜNLERDE PREBIYOTIK KARBOHIDRATLARIN, METABOLIK RISK MARKÖRLERINI, ISTAH DÜZENLEYICI HORMANLARI, VE SAGLIKLI BIREYLERDE ALGILANAN'DOYGUNLUGU YARARLI SEKILDE ETKILER ÇALISMA YOGUNLUGU VE ÇALISMA TASARIMININ ÖZETI Çalismanin amaci, arpa çekirdegi bazli ürünlerde bulunan içilebilir sindirilemeyen karbonhidratlar, DF ve RS'nin MetS ile ilgili risk markörleri üzerindeki etkilerini degerlendirmek olmustur. Normal vücut kütle endeksine sahip (ortalama ± SS = yasli bireye, sunulan bir arpa özü esasli ekmek veya bir beyaz bugday ekmegi (WB, referans ürün) bir çapraz tasarimda art arda üç gün boyunca verilmistir. Ertesi gün (dördüncü gün) standart bir kahvalti sunulmus ve postprandiyal dönemde (0-180 dakika) açlik ve tekrar tekrar fizyolojik test markörleri belirlenmistir. Çalisma, üç alt çalismaya bölünmüstür (ÇALISMALAR. A-C). ÇALISMA .A'daki fizyolojik, test markörleri arasinda, kan glukozu, serum insülini, nefes hidrojeni (Hz atiliminin belirlenmesi (kolonik fermentasyon markörü), ve bir kisinin istah hislerinin kaydedilmesi bulunur. Kohortun bir alt grubunda daha ileri degerlendirmeler için ven kani tekrar tekrar toplanmistir (asagiya bakiniz). Ayrica, fekal örnekler çalisma10 baslangicindan önce ve bagirsak mikrobiyotalarinin karakterizasyonu için her bir müdahale periyodundan sonra toplanmistir (ÇALISMA A). Yukarida açiklanan kohorttan ilave fizyolojik test markörleri, rastgele seçilen 20 denekten belirlenmistir (64,1 ± . Kan glukozu, serum insülinir ve nefes Hz'sinin› yaninda, ayricar istahr düzenleyici hormonlar (PYY, GLP-l), ve plazma kisa Zincirli yag asitleri (SCFA) ölçülmüstür. C ÇALISMASI'nda, ÇALISMA A'daki kohorttan 20 kisi önceki aksam arpa özü bazli ürün (BB) yenmesinden sonra bir gecelik zaman zarfinda standart bir kahvaltida glukoz regülasyonundaki gelismelerin derecesine göre seçilmistir. En belirgin etkilere sahip 10 kisi ve BB'nin glukoz regülasyonu üzerine en az belirgin etkileri olan 10 birey dahil edilmistir. C ÇALISMASI, asagida ayri sekilde bildirilmistir. MALZEMELER VE YÖNTEMLER TEST DENEKLERI Çalismaya alinma kriterleri, 50-70 yas arasi, BKI normalden biraz fazla kilolu (BKI 18-28 kg/m2), açlik plazma glukoz degeri 56,1 mmol/L, sigara içmeyen, genel saglikli ve bilinen herhangi bir metabolik bozukluk veya yiyecege alerjisi olmayanlar olmustur. Anti-hipertansif ilaçlar ve antienflamatuvar etkiye sahip olmayan reçetesiz agri kesiciler kabul edilmistir. Çalismalar Lund, Isveç Bölgesel Etik Inceleme Kurulu tarafindan onaylanmistir (Referans 2010/457). A ÇALISMASI: 6 erkek ve 33 kadin, 64,5 ± 5,6 yas ve normal beden kitle endekslerine sahip (ortalama ± SS : 23,6 ± 2,3 kg/m% saglikli gönüllüler çalismaya katilmistir. B ÇALISMASI: Normal beden kitle endekslerine sahip, 3 erkek yirmi saglikli gönüllü, A ÇALISMASI'Sindaki kohorttan rastgele seçilmistir. TEST YEMEKLERI Test ögünleri arpa çekirdegi esasli ekmek (BB) ve beyaz bugday ekmegi (WB; referans yemek) olmustur. Her test ürünü iki hafta boyunca birbirini izleyen üç gün boyunca tüketilmistir. Sirasiyla, test ve referans ürün miktari, günde 100 g potansiyel olarak temin edilebilir nisasta verecek sekilde hesaplanmis, Holm ve digerlerine göre analiz edilmistir [2] (Tablo 1). Ilk tüketilecek üç esit parça boyutuna bölünmüstür. Üçüncü günde, günlük alimin yarisi (50 gr mevcut nisasta) esit olarak 0800 ve 1400 ögünü arasinda, diger yarisi 2100'de tüketilmistir. Tablo 1. A-C ÇALISMALARI'nda, arpa özü ekmegi (BB) ve beyaz bugday ekmegi referansinin (WB) terkibi. Toplam Mevcut Çözünmez Çözünebili Teplam Ürünler nisast RS .nisastal DF r DF LE? RS+DF 1 Fark ile hesaplanmistir; Toplam nisasta daha az RS (3-5). 2 Bu basvuruda adi geçen DF, fiziksel olarak erisilemeyen veya sindirilmeyen nisastayi, yani RS'yi içermez. STANDARDLASTIRILMIS KAHVALTI Standartlastirilmis bir kahvalti, sirasiyla BB veya WB ile 3 günlük bir müdahalenin ardindan tüketilmis ve 50 g mevcut10 karbonhidratlara ve 2,5 dl musluk suyuna karsilik gelen 122,9 9 WB'den olusmustur. TEST ÜRÜNLERININ TARIFI VE HAZIRLANMASI. Beyaz Bugday ekmegi (WB, referans yemek ve standartlastirilmis kahvalti); Bir ev pisirme makinesinde standart bir prosedür uyarinca bir WB pisirilmistir (Tefal ev ekmegi model no. 573102; Menü seçimi, program 2 [beyaz ekmek, 1000 g, hizli (süre 2:32)]). Ekmek 540 g beyaz bugday unu (Kungsörnen Ab, Jarna, Isveç), 360g su, 4,8 g kuru maya, 4,8g NaCl (Iyotsuz) yapilmistir. Sogutulduktan sonra ekmek dilimlenmis ve porsiyon boyutlarinda alüminyum folyoya sarilmistir, plastik torbalara koyulmus ve bir dondurucuda (-20 °C) saklanmistir. Tüketmeden önceki gün, test kisilerine, alüminyum folyoya ve plastik torbaya sarili olan ekmegi çevre sicakliginda çözmeleri talimati verilmistir. Arpa özü esasli ekmek (BB); Toplam 595 g arpa özü, 12 dakika boyunca 520 9 su içinde kaynatilmis ve daha sonra oda sicakliginda 30 dakika sogutulmustur. Pisirildiginde bütün su taneler tarafindan emilmistir. Tanelere 105 gr bugday unu, 6 gr kuru maya, 5 gr tuz ve 300 gr su eklenmistir. Hamur, 4 dakika dakika süreyle ilave mayalanmis, ardindan bir firin teknesinde bir baska mayalanmaya (35 dakika) tabi tutulmustur. Pisirme tepsisi alüminyum folyo ile kaplanmis ve 225 °C'de bir ev firinda pisirilerek, mevcut sicakligin 96 °C'ye ulasmasi saglanana kadar buharin varligini en üst seviyeye çikarmak için bir su kabi birakilmistir. Pisirdikten sonra ekmek, firin tepsisi olmaksizin çevre oda sicakliginda islak havlu içerisinde sogutulmustur. Soguduktan sonra ekmek plastik bir torbaya konulmus ve gece boyunca oda sicakliginda birakilmistir. Ekmekler kesildikten sonraki gün porsiyon boyutlarinda alüminyum folyoya sarilarak plastik posetlere konulmus ve bir dondurucuda (-20 °C) saklanmistir. TEST ÜRÜNLERINDEKI TOPLAM NISASTA, RS VE DF'NIN ANALIZI10 Test ürünleri toplam nisasta [3], RS [4] ve DF [5]'ye göre analiz edilmistir. Toplam nisasta ve DF analizinden önce, ekmekler hava ile kurutulmus ve ögütülmüstür. Test ürünlerindeki RS, yenen ürünlerde analiz edilmistir. Mevcut nisasta, RS'nin toplam nisastadan çikarilmasiyla hesaplanmistir (Tablo 1). DENEY PROSEDÜRÜ. Çalisma, randomize (test ürünlerinin sirasi) çaprazlama çalismasi olmustur, yani her bir konu yaklasik 2 hafta arayla ayrilmis olan BB veya WB tüketen iki üç günlük müdahaleye katilmistir. Denekler, alisildik beslenmelerini ve yemek modellerini standartlastirmaya ve test veya referans ürünlerin tüketim günlerinde alkol, asiri fiziksel egzersiz veya DF bakimindan zengin gidalardan kaçinmalari konularinda tesvik edilmistir. Ayrica, önceki 2 hafta boyunca ve çalisma boyunca antibiyotik veya probiyotik tüketmemis olmalari gerekir. Ardindan sirasiyla, arpa çekirdegi ekmegi veya WB içeren son test aksam yemeginden sonra, sabahlari standart bir kahvalti servis edilene kadar denekler yemek yememistir. Denekler, 0730'da deney bölümüne ulasmislar ve kan örneklemesi için kullanilacak bir antekübital damar içine intravenöz kanül (BD Venflon, Becton Dickinson) yerlestirilmistir. Açlik kan testleri toplanmis, kahvaltidan önce doygunluk ve nefes Hz'si kaydedilmistir. Kahvalti, NO8OO'de ve 13 dakika içerisinde tüketilmistir. Ayrica, kahvalti öncesi ve sonrasi istahin ölçümleri kullanilarak elde edilmistir. 2,5 saat tekrarlanan kan örnegi sirasinda, deneklere, sabit ve düsük derecede fiziksel aktivite sürdürmeleri söylenmistir. SONRAKI HAVA FIZYOLOJIK DEGISKENLERI VE SOLUNUM HIDROJENLERININ ÖRNEKLENMESI VE ANALIZI. Kan glukozunun belirlenmesi için parmak kilcal kan örnekleri alinmistir (HemoCue®B-glukoz, HemoCue AB, Änjelholm, Isveç). Serum(lar) (s-insülin) ve plazmada (p) fizyolojik test10 markörlerini belirlemek için venöz kan örnekleri alinmistir (p- SCFA, p-GLP-l ve p-PYY). Serum ve plazma santrifüjleme ile ayrilmis ve analiz edilene kadar hemen bir dondurucuda (-40 °C) saklanmistir. Plazma GLP-l ve PYY'nin analizine yönelik kan toplama tüpleri, kan örneklemesinden önce DPPIV (loul/ml kan) (Millipore, St Charles, USA) ve Trasylol® 10 000 KIE/ml Aprotinin'den (50 ul/ml kan) (Bayer Healthcare AG, Leverkusen, Germany) olusan bir inhibisyon kokteyli ile hazirlanmistir. Inhibisyon kokteyli içeren tüpler, kullanima kadar, ancak en fazla 6 gün boyunca buz üzerinde tutulmustur. Enzim baglantili immünosorban testlerine dayanan Ticari Kitler, S-insülin (Mercodia, Uppsala, Isveç), PYY (3-36 ve 1-36), ve GLP-l'in (aktif belirlenmesi için kullanilmistir. SCFA (asetat, propiyonat, butirat) bir GC- yöntemi [6] kullanilarak belirlenmistir. Verilen nefes havasindaki nefes hidrojeni (H2), bir Gastro+ (Bedfont EC6O Gastrolyzer, Rochester, Ingiltere) kullanilarak kolonik fermantasyon aktivitesinin bir göstergesi olarak ölçülmüstür. Fekal örnekler diyet müdahalesinden önce toplanmis ve dördüncü günde, sirasiyla üç günlük test ve referans ürün tüketimi yapilmistir. Deneklere dördüncü günde meydana gelen ilk defekasyondan feçes toplanmasi talimati verilmis ve numune derhal dondurulmus ve analize kadar - 80 °C'de sürekli depolama için 24 saat içinde deney birimine teslim edilmistir. Fizyolojik parametrelerin belirlenmesi için bir zaman çizelgesi Tablo 2'de sunulmustur. Tablo 2. Test markörlerinin belirlenmesi için zaman çizelgesi. Süre (kahvalti sonra dakika) Glikoz X X X X X X X X S-insülin X X X X X X X Istah hisleri X X X X X x x X HESAPLAMALAR VE ISTATISTIKSEL YÖNTEMLER. Grafik çizimleri için GraphPad Prism (sürüm 5, GraphPad Yazilimi, San Diego, CA, USA) kullanilmistir. Egriler altindaki artmis kan sekeri ve serum insülin alanlari (iAUC, (zamanin bir fonksiyonu olarak konsantrasyonlar), trapezoid modeli kullanilarak her bir denek ve test unu için hesaplanmistir. Artan pik (iPeak) konsantrasyonlari glukOZ ve insülin için referans hattindan bireysel maksimum postprandiyal artis olarak belirlenmistir. Farkli test ögelerinden sonra test degiskenlerinde önemli farkliliklar, ANOVA (general lineer modeli) ile, MINITAB Istatistiksel Yaziliminda (sürüm 16; Minitab, Minitab Inc, State College, PA) degerlendirilmistir. Düzensiz dagilmis artiklarda (Anderson-Darling ile test edilmis ve P<0,05 oldugunda esit dagilmadigi kabul edilmis), ANOVA'dan önceki verilere Box Cox dönüsümü yapilmistir. Parametreler arasindaki korelasyonlar MINITAB Istatistiksel Yaziliminda Pearson korelasyonu kullanilarak yapilmistir (sürüm 14; Minitab, Minitab Inc, State College, PA). P<0,05 degerleri anlamli kabul edilmistir. Veriler ortalama. ± SEM olarak ifade edilmistir, degerler P<0,05'te anlamli kabul edilmistir. Örnek 1: ÇALISMA A: SONUÇLAR ÇALISMA A (n=39) KAN GLUKOZU VE SERUM INSÜLINI BB'nin üç günlük tüketimi, referans WB'ye kiyasla postprandiyal pik konsantrasyonlari (iPeak, P<0,0l) ve iAUC 0- 150 dk (P <0,0l) cinsinden standartlastirilmis kahvaltiya kan glikoz yanitini Önemli Ölçüde artirmistir (Tablo 3). Ayrica, BB, anlamli ölçüde indirgenmis insülin iAUC (0-150 dk P<0,00l) ve insülin iPeak (P<0,00l, Sekil 1, Tablo 3) sonucunu vermistir. Tablo 3. Sirasiyla arpa özü esasli ekmek (BB) veya beyaz bugday ekmegi (WB) tüketiminden 3 gün sonra standartlastirilmis kahvaltiya yönelik kan glukozu- ve serum insülin yanitlari. Glukoz (n=39) Insülin (n=39) *; P<0,05, **; P<0,0l, ***; P<0,00l (WB ve BB arasindaki NEFES H2 ATILIMI BB tüketimi, BB sonrasi artmis bagirsak fermantasyon aktivitesinin göstergesi olan referans WB'ye kiyasla nefes Hg'sini belirgin sekilde arttirmistir (P<0,00l, Tablo 4). Tablo 4. Standartlastirilmiskahvaltidan sonra, sirasiyla 3 günlük arpa özü esasli ekmek (BB) veya beyaz bugday ekmegi (WB) tüketiminden sonra nefes H2'si atilimi ve açlik istah hisleri. H2 Tokluk Açlik Açlik OrtalamaO-lSO Açlik Açlik Degeri Degeri dk Degeri N=38 N=39 N=39 N=39 BB 43,67±4,52 * 9:** *7%* * ISTAH HISLERI BB'nin üç günlük tüketimi, üç günlük WB tüketimi ile karsilastirildiginda, ertesi gün doygunluk ve azalan açlik ile sonuçlanmistir (P<0,05, Tablo 4). A ÇALISMASI: ÖZET VE SONUÇLAR: Bir arpa çekirdegi esasli ürün alimi, son kismin yutulmasindan 11-14 saat sonra iyilestirilmis tokluk glukoz regülasyonu ile sonuçlanmistir. Ayrica arpa çekirdegi esasli ürün, ayni zaman perspektifinde artan tokluk ve azalan açlik hissini arttirmistir. Paralel olarak, artmis kolonik fermentasyon aktivitesinin bir göstergesi olan nefes hidrojen atilimi artmistir. Sonuçlar, arpa çekirdegi bazli üründen sonra elde edilen faydali etkilerin, arpa çekirdegi bazli ürünler içinde bulunan, içsel DF ve RS'nin spesifik bagirsak fermentasyonu ve spesifik mikrobiyota aktivasyonunun aracilik ettigini göstermektedir. ÇALISMA. B (ÇALISMA. A'daki kohorttan rastgele seçilen n = KAN GLUKOZ VE SERUM INSÜLIN YANITI BB'nin üç günlük tüketimi, daha düsük iPeak (P<0,05) ve iAUC 0-150 dk (P<0,05) açisindan standartlastirilmis kahvaltidan sonra WB'nin üç günlük tüketimi ile karsilastirildiginda, kandaki glukoz yanitini olumlu etkilemistir. Ayrica, s-insülin iAUC (0-150 dk) ve insülin iPeak, anlamli Ölçüde daha düsük (P<0,01 ve P<0,05, sirasiyla) (Sekil 2) olmustur. BAGIRSAK FERMENTASYON MARKÖRLERI: NEFES Hz VE SCFA'SI Üç gün BB tüketimi, referans ögünü WB'e kiyasla (P<0,01, Sekil 3, Tablo 5) anlamli ölçüde artmis nefes Hz'sine neden olmustur. Ayrica, BB alimi, s-asetat konsantrasyonlarini ve toplam SCFA konsantrasyonunu önemli Ölçüde artirmistir (P <0,05, Tablo 5). dolasimdaki s-bütiratin anlamli olmayan bir artisi gözlenmistir. Sonuçlar, BB'den sonra artan bagirsak fermantasyon aktivitesini göstermektedir. Tablo 5. 3 gün sirasiyla, arpa çekirdegi esasli ekmek (BB) veya beyaz bugday ekmegi (WB) tüketimini takiben, açlikta plazmadaki SCFA konsantrasyonlari. Asetat Propiyonat Butirat Açlik Toplam SCFA Açlik Açlik degeri degeri N=18 Açlik degeri degeri N=19 N = 19 pmol/L umol/L umol/L pmol/L BAGIRSAK ILE ILISKILI HORMONLAR GLP-l: bagirsaktaki L hücreleri tarafindan üretilen ve insülin salgisini pankreastan arttiran ve hem alfa hücrelerinde hem de beta hücrelerinde insülin duyarliligini glikoz bagimli bir sekilde arttiran bir hormondur. GLP-l ayrica beta hücresi kütlesini arttirir, asit sekresyonunu ve midede gastrik bosalmayi engeller ve beyindeki toklugu arttirarak besin alimini azaltir. BB testi ögün tüketimi, BB (l,6± 0,5 pmol/L) tüketiminden sonra WB'den (1,0 ± 0,4 pmol/L) (P<0,01) sonrasi ile karsilastirildiginda, p-GLP-l konsantrasyonlarinin önemli ölçüde artmasina neden olmustur. p-GLP-Z konsantrasyonlari, BB tüketiminden (ortalama 0-150 ± 0,4 ng/ml, P<0,05) sonrasi ile karsilastirildiginda deney günü esnasinda anlamli ölçüde artmistir. PYY: Ayrica L hücreleri tarafindan üretilir ve mide motilitesini inhibe eder ve istahi azalttigi gösterilmistir. Üç gün BB tüketiminden sonra, üç günlük WB alimina kiyasla (P<0,05, Sekil 4), PYY plazma konsantrasyonlarinin artisini (0- 120 dk) ortaya çikaran test yemeklerinin önemli bir ana etkisi gözlenmistir. BAGIRSAGA BAGIMLI HORMONLAR VE SCFA ARASINDAKI ILISKILER Üç günlük. WB veya BB tüketiminden sonra, PYY'nin plazma konsantrasyonlari, sirasiyla toplam SCFA'nin plazma konsantrasyonlari ile korelasyon göstermistir (r : 0,51, P<0,05 B ÇALISMASI: ÖZET VE SONUÇLAR: Genis arastirmalar, ÇALISMA A'da sunulan sonuçlara ek olarak, arpa özü bazli ürünün istah ve glukoz regülasyonunu tüketimden sonra ll-l4 saatlik bir zaman zarfindaki istah ve glukoz regülasyonu için önemli olan bagirsak hormonlarinin plazma konsantrasyonlarini artirdigini göstermektedir. Artmis bagirsak fermantasyon aktivitesi, artan nefes hidrojen atilimi ve artmis plazma SCFA konsantrasyonlari ile belirlenmistir. Buna ek olarak, arpa çekirdegi ürünü, bagirsak duvari geçirgenligini örnegin endotoksinlere indirgeyerek bagirsak bariyeri islevlerinde önemli olan bir bagirsak hormonu olan GLP-2'nin plazma konsantrasyonlarini arttirmistir. Çalisma, arpa Özü bazli ürünlerde bulunan içsel sindirilemeyen karbonhidratlarin bagirsak fermentasyonunun, obezitenin ve iliskili metabolik bozukluklarin önlenmesi ve/veya tedavisini amaçlayan umut veren bir yaklasim için bir mekanizma olusturabilecegini göstermektedir. C ÇALISMASI (n:20, standartlastirilmis kahvaltida münferit glukoz regülasyonunda düzelme derecesine dayali bir çalismada kohorttan seçilmistir. ÇALISMA A'daki (n = 39, Örnek 1) kohorttan, yas (ortalama ± SS) 64,9 ± 5,l yas ve beden kitle indeksleri (ortalama ± 88) arastirma için dahil edilmistir. Denekler, WB'ye kiyasla, bireysel glukoz regülasyonunu gelistirmek için arpa çekirdegi ürününün verimliligine göre seçilmistir. BB'nin glukoz regülasyonu üzerindeki faydalari ile ilgili en belirgin etkileriyle ÇALISMA A'daki 10 kisi (8 kadin ve 2 erkek, 64,0 ± dahil edilmis ve "yanit verenler" olarak kaydedilmis, ve BB'nin glikoz regülasyonunda en az kg/mZ) dahil edilmis ve "yanit vermeyenler" olarak kaydedilmistir. Yanit veren ve yanit vermeyenleri tanimlamak için kullanilan kriterler asagida açiklanmistir.Yanit verenler grubunda, üç gün BB tüketimi, anlamli ölçüde gelismis glukoz toleransi (iAUC O-lSO dk: 156±20 ve 25l±26 mmol*dk/L, sirasiyla BB ve WB'den sonra, P<0,000l, Sekil 5) ve standartlastirilmis kahvaltidan sonra azalmis insülin yanitina (iAUC 0-120 dk: lO,3±l,5 ve 15,3:l:2,l nmol*dk/L, sirasiyla BB ve WB'den sonra, P<0,0l, Sekil 6) neden olmustur. Tersine yanit vermeyenler grubunda, glukoz toleransi üstünde (iAUC 0-150 dk l73±23 ve l9l±24 mmol*dk/L, sirasiyla BB ve WB'den sonra, P=O,ll) veya sirasiyla BB ve WB'den sonra, P=O,51) herhangi anlamli gelisme görülmemistir. Çalismadan Önce ve sirasiyla. BB ve WB tüketiminden sonra toplanan fekal örnekler, bagirsak mikrobiyotalarina göre karakterize edilmistir (Örnek Z'ye bakiniz). Yanit verenler, arpa çekirdek ürününün en belirgin yararli etkisini glikoz regülasyonu üzerine elde eden ÇALISMA A (n : 39)'daki kohortun lO denegi olarak tanimlanmistir. Yanit verenlerde arpa özü ürünü, aralikli kan glukozunda alaninda (iAUC, standartlastirilmis kahvaltidan 0-90 dk sonra) minimum ayni zaman zarfinda, daha düsük toplam AUC'ye ve standartlastirilmis kahvaltidan sonra en az %15 (-15-(- 69)%, ortalama=-%33) oraninda azalan insülin iAUC'ye neden olmustur. Geriye kalan 29 denekte, ya indirilmis bir glukoz yaniti ya da indirilmis bir insülin yaniti bulunmustur. Bununla birlikte, glukoz ve/veya insülin yanitlarinda en az iyilesme gösteren 10 denek "yanit vermeyen" olarak belirtilmistir. Yanit vermeyenler grubunda (n=lO), dört kisi herhangi bir glukoz- düsmesi elde edememis ve arpadan sonra insülin yanitlari alamamis, üç kisi az daha düsük glukoz yanitlari elde etmis, ama herhangi bir insülin yaniti alamamis ve üç kisiler BB'den sonra az daha düsük insülin yaniti elde etmis, ama glukoz yanitlarinda herhangi bir gelisme elde edememistir. C ÇALISMASI: ÖZET VE SONUÇLAR: Sonuçlar, ll-l4 saatlik bir perspektifte, glukoz regülasyonu üzerindeki arpa çekirdeklerinin yararli etkinligi ile ilgili münferit farkliliklari göstermektedir. Münferit uyusmazliklarin sebebinin, bagirsak mikroflorasinin bilesimindeki farkliliklar ile iliskili oldugu ileri sürülmektedir. C ÇALI SMAS INA YÖNELIK BIR I ZLEME'. ÇALI SMAS I gerçeklestirilmistir. Amaç, daha Önce BB'nin WB'ye karsi tüketimini takiben glukoz regülasyonu ve bagirsak mikroflorasi üzerinde elde edilen sonuçlari dogrulamak› olmustur. Çalisma tasarimi daha Önce tarif edilen tasarima benzer olmustur. C Çalismasindaki tüni bireylere (10 yanit verenler* ve 10 yanit vermeyenler) çalismanin tekrar ettirilmesine istekli olup olmadiklari sorulmustur. Yedi yanitlayici (6 kadin ve 1 erkek, kadin, 64,7 ±6,l yas, bmi 21,7 ±l,2 kg/HP) sonuçlari kabul etmistir. Izleme çalismasinda elde edilen sonuçlar daha önce elde edilen sonuçlarla tutarli olmustur. Sonuç olarak, yanit verenler grubunda (n=7), BB, standartlastirilmis kahvaltiya (iAUC 0-150 P<0,000l, Sekil 7) glukoz toleransini anlamli ölçüde gelistirirken, BB'nin yanit vermeyenler grubundaki (sirasiyla BB =O,8l) glukoz toleransi üzerinde herhangi bir gelismesi gÖrülmemistir. IZLEME ÇALISMASINA YÖNELIK ÖZET VE SONUÇLAR: Izleme çalismasinda elde edilen sonuçlar böylece, DF ve RS'nin BB'deki glukoz regülasyonu üzerine faydali etkileri ile ilgili olarak yukarida açiklanan Önceki çalismalarda (A-C çalismalari) elde edilen sonuçlari dogrular ve metabolik yanitin münferit. bir bilesenini gösterir. INSANLARDA WB VEYA BB ÜRÜNLERININ IZLENMESI ILE INSAN BAGIRSAGI MIKROBIYOTA KARAKTERIZASYONU; NEDENSEL ILISKILERIN DOGRULUGU IÇIN EARE VE INOKÜLASYON DENEYLERI FEKAL DNA EKSTRAKSIYONU, AMPLIFIKASYONU, PIROSEKANSLAMA VE VERI ANALIZI. Genomik DNA, daha önce Salonen ve digerleri [7] tarafindan daha önce tarif edilen tekrarli tane dövmesi (RBB) yöntemi kullanilarak, birey basina 100-150 mg diskidan izole edilmistir, Fekal DNA, bir NanoDrop ND-1000 spektrofotometresi (Nano-Drop Technologies) kullanilarak ölçülmüs ve genomik DNA kalitesi, %1 Agaroz-GelRed jeli kullanilarak jel elektroforezi ile degerlendirilmistir. Genomik DNA'nin bir bölüntüsü, PCR için kullanilmadan önce 1 ul içinde 10 ng'ye seyreltilmistir. 16 rRNA geninin 'V1-V2 degisken. bölgesinin amplifikasyonu, fekal mikrobiyota çesitliligini degerlendirmek için 454 Titanyum siralama adaptörleri ile kaynasmis 27F ve 338R primerleri kullanilarak gerçeklestirilmistir. 338R primerleri, tek bir sekanslamada analiz edilmek üzere çoklu numunelerin analiz edilmesine imkan taniyan benzersiz hata düzeltici 12-tabanli barkodlari içermistir. Her bir örnek, 1,5 U FastStart Taq DNA Polymerase (Roche), her bir primerden ektrakte edilmis genomik DNA içeren 25 pL'lik. bir tepkime hacminde üç kopya halinde amplifiye edilmistir. PCR su sartlar altinda gerçeklestirilmistir: 3 dakika süreyle 95 °C'de baslangiç denatürasyonu, daha sonra 20 sn süreyle 95 °C'de 25 döngü denatürasyon, 30 sn süreyle 52 °C'de tavlama ve 60 sn süreyle 72 °C'de elongasyon, ve 10 dakika süreyle 72 °C'de bir nihai elongasyon adimi. PCR'den sonra üç kopya birlestirilmis ve ortaya çikan ürün, boyut ve saflik açisindan %O,8 Agarose-GelRed jeli üzerinde kontrol edilmistir. Daha sonra örnekler, NucleoSpin Gel ve PCR Clean-up kit (Macherey- Nagel, Almanya) ile saflastirilmis ve Quant-iT PicoGreen dsDNA kit (Invitrogen, Carlsbad, CA) kullanilarak kantifiye edilmistir. Saflastirilmis PCR ürünleri, 1 ül'de 20 ng'lik bir konsantrasyona seyreltilmis Ve esit miktarlarda toplanmistir. Toplanan örnekler daha sonra kisa amplifikasyon parçalarini çikarmak için Ampure Kanyetik saflastirma tanecikleri (Agencourt, Danvers, MA) ile saflastirilmistir. Toplanan ürünler, National Genomics kullanilarak dizilmistir. Ham veriler, 200 nükleotidden daha kisa, 1.000 nükleotidden daha uzun olan, primer uyumsuzluklari, belirsiz bazlar, düzeltilemeyen barkodlar içeren veya homopolimer çalismalari alti bazdan fazla olan sekanslarin çikarilmasi için kalite filtrelenmistir. Kalite filtrelenmis okumalarin 454 adaptörleri ve barkod sekanslari trimlenmis ve yazilim paketi Quantitative edilmistir. Kalite filtresini kabul eden okumalarin sayisi verilerine, QIIME'den temin edilebilen bir sarici olan denoise_wrapper.py ile gürültü giderme uygulanmistir. Sekanslar, UCLUST kullanarak, çiftli bir kimlik esigi %97 olan operasyonel taksonomik birimler (OTU'lar) atanmistir. En bol sekans, her OTU için temsilci olarak, seçilmis ve Ribozomal Veritabani Projesi (RDP) Siniflandirici kullanilarak taksonomik olarak atanmistir. Temsili OTU'lar, Pynast kullanilarak hizalanmis ve örneklerin ß-çesitliligini (agirlikli UniFrac) hesaplamak için kullanilan FastTree ile filogenetik bir agaç insa etmek için kullanilmistir. KISA ZINCIRLI YAGLI ASITLERIN EKSTRAKSIYONU VE SAYISALLASTIRMASI 120 - 190 mg donmus feçes, çevirmeli kapakli bir cam tüpe (16X125 mm) aktarilmis ve 100 ül'lik dahili standart ([1- 13C]asetat ve [4%]propiyonat 1J4 konsantrasyonda, [1%h]butirat 0,5M konsantrasyonda, [1- 13C1]izobutirat ve [1-"C]izovalerat10 O,1M konsantrasyonda, [1,2-"C21heksanoat, [BC]1aktat ve çözeltisi ilave edilmistir. Ekstraksiyondan önce, örnekler 3 saat boyunca -50 °C'de dondurularak kurutulmustur (verim 28-78 mg/kuru agirlik). 50 ul %37'lik HCl ile asitlestirildikten sonra organik asitler ekstrakte edilmistir (2 ml dietil eter/ekstraksiyon; 2 sefer). SOO-ul'lik ekstrakte edilmis örnek bölüntüsü, 50 ul'lik N-tert-butildimetilsilil-N- metiltriflorasetamit (MTBSTFA; Sigma) ile oda sicakliginda karistirilmistir. Elde edilen türetilmis materyalin bir bölüntüsü (1 ul), bir kütle spektrometresi detektörüne (Agilent Technologies 5975 C) bagli bir gaz kromatografisine (Agilent Technologies 7890 A) enjekte edilmistir. Bir dogrusal sicaklik gradyani kullanilmistir. Baslangiç sicakligi 65°C 6 dakika süreyle muhafaza edilmis, ve ayrica 280 °C'ye dakika süreyle yükseltilmistir. Enjektör ve transfer hatti sicakliklari 250°C olmustur. Miktar tayini, etiketli iç standartlara göre seçilmis iyon izleme kazanim modunda tamamlanmistir (valerat [l- 13C]izova1erat ile karsilastirilmistir, heptanoat ve oktanoat [1,2-1Xb]heksanoat ile karsilastirilmistir ve fumarat [BC4]süksinik asit ile karsilastirilmistir). Izlenen iyonlarin m/z oranlari asagidaki gibi olmustur: 117 (asetik asit), 131 (propiyonik asit), 145 (butirik asit), 146 (izovalerik asit), 159 (izovalerik asit ve valerik asit, 173 (heksanoik asit), 187 (heptanoik asit), 201 (oktanoik asit)), 261 (laktik asit), 287 (fumarik asit), 289 (süksinik asit), 121 ([%h]- ve [1-"C]asetat), 136 ([BC]laktat) ve 293 ([ÜC4]süksinik asit). INSANLARDA FEKAL MIKROBIYAL ÖRÜNTÜ ILE ILGILI SONUÇLAR 165 rRNA geninin barkodlu amplikonlarinin pirosekanslamasi, her tedaviden sonra yanit verenlerde (R) ve yanit vermeyenlerde (NR) üretilen benzer miktardaki sekanslarla, örnek basina kaliteli sekans ile sonuçlanmistir. Her bir çalisma grubunda en fazla Firmicutes (~%70) bulunmus, ardindan Bacteroidetes (~%20) gelmistir. Bununla birlikte, yanit verenler veya yanit vermeyenler arasinda veya herhangi bir tedavi ile göreceli olarak Firmicutes ve Bacteroidetes bollugu arasinda anlamli bir farklilik gözlenmemistir. Bacteroidtetes bollugundaki önemli olmayan bir artis; bununla birlikte, arpa özü ekmegi (Sekil 8A) ile desteklenmis diyet üzerinde Yanit veren grubuna kaydedilmistir. Prevotella ve Bakteroidetes tarafindan Bacteroidetes dali olusturulmus ve ilginç sekilde Prevotella yanit veren gruplarinda anlamli ölçüde daha yüksek göreli bolluk, bulmus bulunmaktayiz (Sekil 8B, Iki yönlü ANOVA, P< 0,01). Ayrica yanit vermeyenlerde gözlenmeyen yanit veren grubunda arpa çekirdegi ekmegi tüketiminden sonra Prevotella seviyeleri artmistir. Ayrica arpa çekirdegi ekmegi ile beslenen diyette cevap veren grupta diskida süksinat düzeylerinde anlamli artis tespit edilmistir (Tablo 6). Süksinatin Prevotella türlerinin fermentatif aktivitelerinden baslica metabolit oldugu bilinmektedir. Tablo 6. Fekal organik asit konsantrasyonu. Metabolit Yanit umol/g veren Yanit Yanit Yanit Yanit Yanit kuru Kontr veren veren vermeyen vermeyen vermeyen Propiyona FARELERDE INOKÜLASYON DENEYLERI On-on iki haftalik mikrop içermeyen Swiss Webster erkek fareleri, tekli 108 CFU Bakteroitetes tetaiotaomikron susu VPI- veya Prevotela copri susu DSM gavaji ile ya tek basina veya birlikte asilanmistir. Her iki sus, insan feçesinden izole edilmistir. Her ikisi de 15 mm'lik Hungate tüplerinde fare sistemlerine kültürlenmis ve nakledilmistir. Mono ve bi- kolonize fareler 14 gün boyunca izo-kafes sisteminde barindirilmistir. Sakrifiye öncesinde, farelere agizdan glukoz tolerans testi (OGTT) yapilmistir. Bütün fareler OGTT'den 4 saat önce aç birakilmistir. Kolonizasyon yogunlugu, türe özgü primerler kullanilan qPCR deneyleri kullanilarak dogrulanmistir. Yaslari eslesen, gnotobiyotik erkek Swiss Webster farelerinin bir kontrol grubu da ayni otoklavlanmis gidalarla ad libitum sekilde beslenmistir. Fareler 4 saat aç birakilmis ve daha sonra oral gavaj %60 D- glukoz (3 g/kg Vücut agirligi) verilmistir. Kuyruk damarindan O, , 60, 90 ve lZO'nci dakikada kan alinmis ve kan sekeri seviyeleri, bir HemoCue® glukometre kullanilarak ölçülmüstür. Insülin ELISA. testi (Crystal Chem, Inc.) kullanilarak serum insülin düzeylerinin analizi için kuyruk damarindan 0, 15 ve 30 dakika sonra ekstra kan alinmistir. SONUÇLAR Prevotella'nin glukoz toleransindaki gelismelere etkisinin olup olmadigini arastirmak için, insan diskisi türevli Prevotella susu ile mono kolonize gnotobiyotik fareler - Prevotella copri ve bu farelerin glikoz toleransini B. tetaiotaomikron ile kolonize edilmis ve her iki sus ile bi- kolonize edilmis fareler ile karsilastirmis bulunmaktayiz. B. thetaiotamicron ile kolonizasyon, P. copri ile kolonize edilen farelere kiyasla glukoz toleransinin bozulmasina neden olmustur (Sekil 9A-B). Ek olarak, P. copri ile kolonize edilen farelerde serum insülin seviyeleri, B. tetaiotaomikron ile kolonize edilen farelere kiyasla glikozun oral gavajindan sonra 15 ve 30 dakikalarinda daha düsük olmustur (Sekil 9C). Önemli olarak, B. tetaiotaomikron ile kolonilestirilmis fareler, P. copri ile birlikte kolonilestirildiklerinde gelismis glikoz toleransi sergilemistir. Bu veriler, B. tetaiotaomikronunun glukoz toleransini bozarken ve P. copri'nin bu bozulmayi önleyebilecegini önermektedir. ÜRÜN ÖRNEKLERI A) Bir` porsiyon yogurt içeren bir kapta, hermetik olarak kapaga kapatilmis ve bir membran ile ayrilmis arpa DF'si ve/veya RS'si ve Prevotella (. B) Bir porsiyon ayran içeren bir sisede, hermetik olarak bir pipete kapatilmis arpa DF'si, RS'si ve Prevotella (lO9 CFU). C) Tek dozluk paketlerde hermetik olarak kapali bir arpa DF, RS ve Prevotella porsiyonu. D) Bir meyve içecegi porsiyonunu içeren bir sise ile birlikte, bir içme pipetinde hermetik olarak kapatilmis arpa DF'i ve/veya RS'si ve Prevotella (. E) Bir meyve içecegi porsiyonunu içeren bir sise ile birlikte, bir kapaga hermetik olarak kapatilmis ve bir zar ile ayrilmis, arpa DF'i ve RS'si ve Prevotella (. F) Prebiyotik. karbonhidrat bileseni olan veya olmayan bir matris içinde kapsüllenmis Prevotella içeren bir emülsiyon haline getirilmis gida ürünü. A-F) Bir porsiyon arpa DF'si ve RS'si ve Prevotella (7 g çözünmez arpa DF'si, 3,3 g çözünür arpa DF'si, 8,5 g RS ve 109 CFU Prevotella). RE FE RANS LAR Vidhyalakshmi, R., R. Bhakyaraj, ve R.S. Subhasree, Encapsulation "The Future of Probiotics"-A Review. Advances Holm, J., ve digerleri, A rapid method for the analysis of Bjorck, I-M.E. ve M.A- Siljestrom, In-vivo and in-vitro digestability of starch in autoclaved pea and potatoe products. Journal of the Science of Food and Agriculture, Akerberg, A.K., ve digerleri, An in vitro method, based on chewing, to predict resistant starch content in foods allows parallel determination of potentially available starch and Asp, N.-G., ve digerleri, Rapid enzymatic assay of insoluble and soluble dietary fiber. Journal of Agricultural and Food Brighenti, F., Summary of the conclusion of the working group on Profibre interlaboratory study on determination of short chain fatty acids in blood, in Functional properties of non- digestible carbohydrates, F. Gullion, ve digerleri, Editörler. 1998, European Comission, DG XII, Science, Research and Development: Brussels, Belgium, sf. 150-153. Salonen, A., ve digerleri, Comparative analysis of fecal DNA extraction methods with phylogenetic microarray: effective recovery of bacterial and archaeal DNA using mechanical cell TR TR TR